CN1923241B - 包括淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种新的药物组合物及其制备方法和应用，包括淫羊藿提取物、钩藤提取物与葛根素，其重量份数比为20～500份∶3～80份∶40～1000份。以淫羊藿提取物、钩藤提取物和葛根素直接投料，制备工艺简便，可制成各种临床上或药学上可接受的剂型，优选为注射剂、片、胶囊、软胶囊、滴丸、口服液、颗粒。三种药物协同作用，共同发挥改善血管顺应性和血流动力学，治疗高血压、头痛、神经衰弱，以及抗心脑血管疾病、调节免疫等作用，药效增强，疗效确切，不良反应减少。本发明还提供了制备淫羊藿提取物、钩藤提取物的优选工艺，方法简便，有效成分含量高，制剂稳定性好。

Description

包括淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素的药物组合物及其制备方法和应用

1、技术领域

本发明涉及一种由淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素组成的药物组合物及其制备方法和应用，属于医药技术领域。

2、背景技术

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxin.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatumMaxin.)、柔毛淫羊藿(Epimediumpubescens Maxin.)、巫山淫羊藿(Epimedium wushanense T.S.Ying)或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai.)的干燥地上部分。淫羊藿入药始于《神农本草经》，《本草纲目》称其有“益精气，坚筋骨，被腰膝，强心力”之功效。现代药理学研究表明，淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有抗衰老、抗肿瘤等作用。

淫羊藿提取物为淫羊藿经提取加工制成的提取物，其主要有效成分为淫羊藿总黄酮，主要含有淫羊藿苷和淫羊藿次苷等。药理研究发现，淫羊藿总黄酮是淫羊藿促进免疫功能，参与骨代谢，抗肿瘤，增强心血管活动等功能的有效成分。淫羊藿苷具有增加冠脉血流量、增加脑血流量、调节免疫、促进DNA合成以及雄性激素样作用；可用于冠心病、更年期高血压，胸闷气短及风湿症等。

钩藤为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchOphylla(Miq.)Jacks.、大叶钩藤Uncaria macrophylla Wall.、毛钩藤Uncaria hirsute Havil.、华钩藤Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.或无柄果钩藤Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。钩藤性甘、微寒，归肝、心包经；具有清热平肝、熄风定惊、活血通经的功效；用于头晕目眩、惊痫抽搐、肢体麻木等心脑血管和神经***疾病。我国应用钩藤入药从宋明朝至今有着悠久的历史。现代医学已证实钩藤具有止痉、镇静、利尿和扩张血管、降低血压的作用。

钩藤提取物为钩藤经提取加工制成的提取物，其主要有效成分为钩藤总碱，含有钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱等。钩藤总碱具有降压、减慢心率、抗心律失常、脑缺血保护，以及镇静、解痉等作用。

天麻素(Gastrodin)为4-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷半水合物，结构式如下图所示：

药理试验表明，天麻素具有多种药理作用，但以对中枢神经***作用最为突出，可恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调，产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用，能扩张血管、改善心肌微循环，增加心肌营养性血流量提高供氧能力；还具有降压作用。临床主要用于神经衰弱、神经衰弱综合征、脑外伤性综合征、三叉神经痛、坐骨神经痛、血管神经性头痛、偏头痛、眩晕症、椎基底动脉供血不足及高血脂症等。

利用淫羊藿或其提取物、钩藤或其提取物、天麻素三药的相互作用，配伍组方，制备改善血管顺应性和血流动力学，治疗高血压、头痛、神经衰弱，以及调节免疫、抗心脑血管疾病等的药物，尚未见报道。

3、发明内容

为了满足临床需要，更好的治疗心脑血管疾病等，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法和应用，其特征在于它包括淫羊藿或其提取物、钩藤或其提取物、天麻素。

上述药物组合物中，淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素按照重量组分计算为淫羊藿提取物20～500份、钩藤提取物3～80份、天麻素40～1000份，优选为淫羊藿提取物50～200份、钩藤提取物8～32份、天麻素100～400份，最佳优选为淫羊藿提取物100份、钩藤提取物16份、天麻素200份。

以上药物组合物的组成，若以克为单位，可以制成500～1000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成1000支，每次用量1～5支。如作为片剂，可制成1000片，每次服用1～5片。

以上药物组合物的组成是按重量份数作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。

以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。

上述药物组合物，可用于制备改善血管顺应性和血流动力学，治疗高血压、头痛、神经衰弱，以及抗心脑血管疾病、调节免疫等方面的药物。药理药效研究表明，上述药物组合物可以显著降低大鼠血压、显著改善犬血流动力学、明显增强免疫抑制小鼠的细胞免疫和体液免疫功能，在抗高血压、抗心脑血管疾病、调节免疫等方面将有良好的疗效。

上述药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。口服给药时，可制成口服常释剂型(如片、肠溶片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、胶囊、软胶囊、肠溶胶囊等)、缓释控释剂型(如缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊等)、口服液体剂(如口服溶液、糖浆等)、滴丸、颗粒剂等；肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、注射用水或油悬浮剂、吸入剂等，如水针、粉针、输液、喷雾剂等。优选剂型为注射剂和常用口服制剂，如粉针、水针、输液、片、胶囊、软胶囊、滴丸、口服液、颗粒。

上述药物组合物的制剂，可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体，包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

上述药物组合物中，淫羊藿提取物含淫羊藿总黄酮不低于20％、淫羊藿苷不低于4％，钩藤提取物含钩藤总碱不低于30％。制成注射剂时，淫羊藿提取物含淫羊藿总黄酮不低于50％、淫羊藿苷不低于10％，钩藤提取物含钩藤总碱不低于50％。

由于注射剂对原料质量要求较高，本发明提供了优选的淫羊藿提取物和钩藤总碱制备工艺，进行精制，去除杂质等，使其有关物质等符合注射用要求。

上述药物组合物，淫羊藿提取物、钩藤提取物中有效成分明确、含量确切，天麻素结构明确、疗效确切；以淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素直接投料，制备工艺简便，制剂质量稳定，杂质含量少。亦可直接以淫羊藿、钩藤、天麻素投料，但是工艺相对比较麻烦。药理药效试验表明，淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素三种药物具有协同增效作用，在降低血压、改善血流动力学、免疫调节等方面有很好的功效：在治疗高血压、头痛、神经衰弱以及抗血尿效果疾病、调节免疫等方面将有良好的疗效。12个月长期试验结果表明，上述药物组合物制成的注射剂的各项指标均比较稳定，可以用于放大生产。

下面通过试验例进一步说明本发明。试验例中用YGT代替，淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素组合物。

试验例1淫羊藿提取物工艺筛选试验

加水量、提取时间、提取次数对提取结果的影响较大，因此以淫羊藿苷和总黄酮含量为指标，用正交试验法考察四种因素对提取结果的影响。因素及水平设计见表1。

表1淫羊藿水提工艺考察因素水平表

试验方法称取淫羊藿100g，共9份，按表2各列号的要求提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩并定容至1000ml，备用。

总黄酮的含量测定

测定法精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加70％乙醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照分光光度法检测，在270nm波长处测定吸光度，计算，即得。结果见表2。

淫羊藿苷的含量测定

照高效液相色谱法检测。

色谱条件与***适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙晴-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于1500。

对照品溶液得制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取各样品液2ml，置25ml量瓶中，加70％稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。

表2淫羊藿提取工艺考察正交试验表

表3淫羊藿总黄酮方差分析表

表4淫羊藿苷方差分析表

由表2、表3、表4的结果可以看出，对淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷提取效果影响由大到小的因素依次为B＞C＞A，结合工业生产的实际情况，确定淫羊藿提取工艺为A₃B₂C₂，即：取淫羊藿，加水煎煮两次，每次1.5小时，每次加水10倍量。

试验例2淫羊藿提取物鉴别试验

取淫羊藿提取物0.1g，加乙醇10ml，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙脂-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)作为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙红色荧光斑点。

试验例3淫羊藿提取物含量测定试验

(1)淫羊藿总黄酮的含量测定

测定法精密称取淫羊藿提取物0.01g，置50ml量瓶中，加甲醇25ml超声处理30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照分光光度法，在270nm波长处测定吸光度，计算，即得。

(2)淫羊藿苷的含量测定

照高效液相色谱法检测。

色谱条件与***适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于1500。

对照品溶液得制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取各样品液2ml，置25ml量瓶中，加70％稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

试验例4淫羊藿提取物优选制备工艺

(1)根据试验例1筛选得到的提取条件提取，进一步精制，为本发明中淫羊藿提取物的优选制备工艺。

取淫羊藿，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小时，每次加水为10倍量，合并煎液，冷藏放置过夜，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08～1.10的浓缩液，加于已处理好的聚酰胺树脂柱上，先用3～4倍柱体积的水冲洗，再用2～3倍柱体积的20％乙醇冲洗，弃去洗涤液，再用4～5倍柱体积的95％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥，即得。

通过上述工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于80％，淫羊藿苷含量不低于15％。

(2)淫羊藿提取物还可以通过下列工艺制备，但不应将此理解为本发明药物组合物中淫羊藿提取物仅限于下列制备工艺。

工艺一：取淫羊藿，加水煎煮2次，每次1.5小时，每次加水10倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.08～1.10的浓缩液，加石油醚振摇提取至石油醚层无色，水层上D101大孔树脂柱，依次用水、20％乙醇、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于60％，淫羊藿苷含量不低于15％。

工艺二：取淫羊藿，切成小片，加水煎煮3次，每次1.5小时，加水量分别为10、8、8倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08～1.10的浓缩液，喷雾干燥，粉碎，过筛，分装，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于40％，淫羊藿苷含量不低于8％。

工艺三：取淫羊藿，切成小片，加水煎煮3次，每次1小时，每次加水10倍量，合并提取液，浓缩至相对密度1.00～1.05，加乙醇至醇含量达到70％，充分搅拌，静置48小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，粉碎，过筛，分装，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于30％，淫羊藿苷含量不低于6％。

工艺四：取淫羊藿，切成小片，加70％乙醇煎煮2次，每次1小时，每次加醇10倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加石油醚振摇提取至石油醚层无色，水层加乙酸乙酯振摇提取至乙酸乙酯层无色，乙酸乙脂层加无水硫酸钠脱水，减压浓缩，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于50％，淫羊藿苷含量不低于10％。

工艺五：取淫羊藿，切成小片，加70％乙醇煎煮3次，每次30分钟，每次加醇10倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加乙酸乙酯振摇提取至乙酸乙酯层无色，无水硫酸钠脱水，减压浓缩，喷雾干燥，粉碎，过筛，分装，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于45％，淫羊藿苷含量不低于8％。

工艺六：取淫羊藿，切成小片，加80％乙醇煎煮3次，每次1小时，每次加醇8倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，喷雾干燥，粉碎，过筛，分装，即得。通过本工艺制备的淫羊藿提取物，淫羊藿总黄酮含量不低于20％，淫羊藿苷含量不低于5％。

试验例5钩藤提取物工艺筛选试验

加醇量、提取时间和提取次数对提取结果的影响较大，因此以总生物碱含量为指标，用正交试验法考察三种因素对提取结果的影响。因素及水平设计见表5。

试验方法称取钩藤100g，共9份，按表2各列号的要求提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩并定容至500ml，备用。

表5钩藤醇提工艺考察因素水平表

钩藤总碱的含量测定

柱层析-紫外分光光度法

标准曲线的绘制精密称取于105℃干燥至恒重的钩藤总碱对照品约10mg，置25ml量瓶中，加3％硫酸溶解定容，即得。精密吸取此溶液2ml于10ml量瓶中，以3％硫酸稀释至刻度。将此溶液在245nm波长测定吸收度。随行空白。用体积x与吸收值y作图得一直线。通过直线计算回归方程。

测定法精密吸取样品液0.6ml于硅胶柱(10×0.8cm)上，同时加入用95％乙醇配成的3％硫酸溶液0.2ml，以苯-乙酸乙酯(1∶1)20ml洗脱，继用乙醇-氨水(15∶2)17ml洗脱，收集此部分洗脱液，水浴蒸去溶媒，残渣用3％硫酸溶液溶解，转移至10ml量瓶中定容，于245nm波长处测定吸光度，随行空白。由回归方程计算以总碱对照品计的总生物碱含量。结果见表6。

表6钩藤提取工艺考察正交试验表

由表6结果可以看出，乙醇浓度、加醇量、提取次数是影响钩藤提取的主要因素，结合工业生产参考浸膏得率，确定钩藤提取工艺为A₂B₂C₂D₂，即：取钩藤，加70％乙醇提取2次，每次2小时，每次加醇10倍量。

试验例6钩藤提取物鉴别试验

取钩藤提取物0.5g，研细，加浓氨试液使湿润，加三氯甲烷30ml，振摇提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加盐酸溶液(1→100)5ml使溶解，滤过，滤液分置三支试管中，一管中加碘化铋钾试液1～2滴，即生成黄色沉淀；一管中加碘化汞钾试液1～2滴，即生成白色沉淀；另一管中加硅钨酸试液1～2滴，即生成白色沉淀。

试验例7钩藤提取物含量测定试验

钩藤总碱的含量测定

标准曲线的绘制精密称取于105℃干燥至恒重的钩藤总碱对照品约10mg，置25ml量瓶中，加3％硫酸溶解定容，即得。精密吸取此溶液2ml于10ml量瓶中，以3％硫酸稀释至刻度。将此溶液在245nm波长测定吸收度。随行空白。用体积x与吸收值y作图得一直线。通过直线计算回归方程。

测定法精密称取钩藤提取物200mg，研细，加入1ml氨水，放入纸筒，置于沙氏提取器内，以50ml苯回流提取4h，提取液回收溶媒至干，残渣用苯-乙酸乙酯(2∶1)溶解，置10ml量瓶中定容。精密量取样品液0.6ml于硅胶柱(10×0.8cm)上，同时加入用95％乙醇配成的3％硫酸溶液0.2ml，以苯-乙酸乙酯(1∶1)20ml洗脱，继用乙醇-氨水(15∶2)17ml洗脱，收集此部分洗脱液，水浴蒸去溶媒，残渣用3％硫酸溶液溶解，转移至10ml量瓶中定容，于245nm波长处测定吸光度，随行空白。由回归方程计算以总碱对照品计的总生物碱含量。

试验例8钩藤提取物优选制备工艺

(1)根据试验例5筛选得到的提取条件提取，进一步精制，为本发明中钩藤提取物的优选制备工艺。

取钩藤，粉碎成粗粉，加入70％乙醇回流提取2次，每次2小时，每次加醇10倍量，合并提取液，滤过，回收乙醇至无醇味，加水至适量(每1ml相当于原药材2g)，搅匀，加浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放置4小时，滤过，滤液加石油醚振摇提取1次，弃去石油醚液，酸水液加10％氢氧化钠调pH值至9～10，冷藏放置过夜，滤取沉淀，再加1mol/l的稀盐酸使溶解，冷藏放置4小时，滤过，滤液再加10％氢氧化钠调pH值至9～10，冷藏放置过夜，滤取沉淀，真空干燥，即得。

通过本工艺制备的钩藤提取物，钩藤总碱含量不低于80％。

(2)钩藤提取物还可以通过下列工艺制备，但不应将此理解为本发明药物组合物中钩藤提取物仅限于下列制备工艺。

工艺一：取钩藤，70％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，每次加醇10倍量，合并提取液，回收乙醇至无醇味，用水稀释至每1ml相当于原药材2g，冷藏放置24小时，滤过，滤液减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的钩藤提取物，钩藤总碱含量不低于50％。

工艺二：取钩藤，粉碎成粗粉，浸泡24小时，用20倍量70％乙醇渗漉，渗漉液回收乙醇至无醇味，减压浓缩至相对密度为1.20～1.24(50℃)，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的钩藤提取物，钩藤总碱含量不低于40％。

工艺三：取钩藤，70％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，每次加醇10倍量，合并提取液，回收乙醇至无醇味，用水稀释至每1ml相当于原药材2g，减压浓缩至相对密度为1.20～1.24(50℃)，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的钩藤提取物，钩藤总碱含量不低于35％。

工艺四：取钩藤，加水煎煮2次，每次2小时，加水量分别为10、8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.19～1.24(50℃)，用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为65％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇至无醇味，用水稀释至每1ml相当于原药材2g，冷藏放置24小时，滤过，滤液减压浓缩、真空干燥，即得。通过本工艺制备的钩藤提取物，钩藤总碱含量不低于30％。

试验例9淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素合并用药药效研究试验——对大鼠血压的影响

受试动物健康雄性大鼠，310只，体重200～230g，随机分为31组，每组10只。

供试品淫羊藿提取物：自制，含淫羊藿总黄酮81.24％、淫羊藿苷17.23％

钩藤提取物：自制，含钩藤总碱82.21％

天麻素：市购，北京太洋药业有限公司

淫羊藿提取物+钩藤提取物+天麻素各个配比的注射液：自制，见表7

淫羊藿提取物注射液：自制，1ml:10mg

钩藤提取物注射液：自制，1ml:10mg

天麻素注射液：市购，1ml:100mg，北京双鹤药业股份有限公司

氯化钠注射液：市购，山东长富洁晶药业有限公司

表7淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素合并用药对大鼠血压的影响(平均值±标准偏差，n＝10)

^*：p＜0.05，^**p＜0.01

供试液的配制临用前均用氯化钠注射液配制成1mg/ml的溶液

给药剂量10mg/kg(10ml/kg滴注1h)

试验方法各组大鼠均以2％戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射麻醉。分离气管，***气管套管；分离右颈总动脉，插管后经压力换能器连接GY-40四道生理记录仪记录收缩压(SAP)、舒张压(DAP)及平均动脉压(MAP)；同时记录肢体II导联心电图。不同的药物通过WZ-50G微量注射泵以每小时10ml/kg注入股静脉，观察给药0.5h、1.0h和停药1h的外周血压变化。

试验结果及结论试验结果见表7。结果表明，淫羊藿提取物+钩藤提取物+天麻素给药组与对照组相比较，收缩压、舒张压、平均动脉压均显著降低(p＜0.01)；淫羊藿提取物注射液给药组、钩藤提取物注射液给药组、天麻素注射液给药组与对照组相比较，收缩压、舒张压、平均动脉压均明显降低(p＜0.05)。并且，淫羊藿提取物、钩藤提取物与天麻素各个配比给药组的作用均强于淫羊藿提取物注射液、钩藤提取物注射液或葛根素注射液单独给药组的效果，提示三药有协同增效作用；以100∶16∶200的配比效果最好，提示100∶16∶200可能为最佳配比。

试验例10淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素合并用药对犬血流动力学的影响

受试动物杂种犬，54只，雌雄兼用，体重10.0～12.0kg，随机分为9组，每组6只。

供试品YGT注射液1：自制，5ml:316mg，含淫羊藿提取物100mg、钩藤提取物16mg、天麻素200mg

YGT注射液2：自制，5ml:282mg，含淫羊藿提取物50mg、钩藤提取物32mg、天麻素200mg

YGT注射液3：自制，5ml:408mg，含淫羊藿提取物200mg、钩藤提取物8mg、天麻素200mg

YGT注射液4：自制，5ml:458mg，含淫羊藿提取物50mg、钩藤提取物8mg、天麻素400mg

YGT注射液5：自制，5ml:332mg，含淫羊藿提取物200mg、钩藤提取物32mg、天麻素100mg

淫羊藿提取物注射液：1ml:10mg，自制

钩藤提取物注射液：1ml:10mg，自制

天麻素注射液：市购，2ml:100mg，烟台鲁银药业有限公司

氯化钠注射液：山东长富洁晶药业有限公司

给药剂量10mg/kg

试验方法犬用3％戊巴比妥钠1ml/kg前肢静脉注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和右后肢内侧的毛。75％乙醇消毒剪毛区。分离气管，并***气管插管，备人工呼吸用；分离颈外静脉，并从颈外静脉插管经上腔静脉进入右心房并达到心房窦处，用于抽取冠状静脉的血液；分离股静脉，***静脉插管，整个实验过程中缓慢恒速注入10％葡萄糖。分离股动脉，***动脉插管(管内充满25U/ml的肝素钠生理盐水)，接通TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录血压(收缩压SAP，舒张压DAP，平均动脉压MAP)。人工呼吸下，于第4肋间开胸，剪开心包膜，分离升主动脉根部和左冠状动脉前降支，分别放置适宜内径的电磁血流量计探头(13，2mm)测量心输出量(CO)和冠状动脉血流量(CBF)。将左心室插管(管内充满25U/ml的肝素生理盐水)经左心室心尖部***左心室内，通过TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录左室内压(LVP)，通过AD-601G型放大器记录左室舒张末期压(LVEDP)：将针状电极***犬四肢皮下，描记标准II导联心电图(ECG)。上述测量信号均输入RM-6000型八道生理记录仪记录，描记。同时将心输出量、心电、血压及心室内压的电信号输入微机的生物医学生理信号处理***进行处理，并由微机读出心室内压峰值(LVSP)、舒张末期压(LVEDP)、心室收缩参数(+dp/dt_max)、心室舒张参数(-dp/dt_max)。最后，计算心指数(CI)、每搏输出量(SV)、心搏指数(SI)、每搏功指数(SWI)、血管总外周阻力等参数(TPVR)。手术完成后稳定20min，将药物溶于100ml生理盐水中，15min内经股静脉恒速滴人。

在给药前、给药后1h、2h分别抽取左心室及冠状静脉血，肝素抗凝，注射于i-STAT G3+Cartridges(i-STAT公司G3+型测试片)中，通过血气分析仪测量动、静脉血氧分压。心肌耗氧量由Kanter公式计算而来，其公式是：MVO₂＝3.25×10×CF(PaO₂-PvO₂)/Wt。MVO₂是指每100g左室心肌的耗氧量，CF为冠脉流量，PaO₂、PvO₂分别表示动、静脉血氧分压，Wt是左心室肌重。

所有数据均以平均值±标准偏差表示，根据用药前后各组中各个指标的变化，采用配对t-检验来判断用药前后各种指标改变的统计学意义。

试验结果(1)对麻醉犬总外周血管阻力的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显降低麻醉犬总外周血管阻力(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组、天麻素组能明显降低麻醉犬总外周血管阻力(p＜0.05)。

(2)对麻醉犬左室舒张末期压的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显降低麻醉犬左室舒张末期压(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组、天麻素注射液组能明显降低麻醉犬左室舒张末期压(p＜0.05)。

(3)对麻醉犬冠状动脉血流量的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显增加麻醉犬冠状动脉血流量(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组、天麻素注射液组能明显增加麻醉犬冠状动脉血流量(p＜0.05)。

(4)对麻醉犬心室收缩参数的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显增加麻醉犬心室收缩参数(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组、天麻素注射液组能明显增加麻醉犬心室收缩参数(p＜0.05)。

(5)对麻醉犬心室舒张参数的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显增加麻醉犬心室舒张参数(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组、天麻素注射液组能明显增加麻醉犬心室舒张参数(p＜0.05)。

(6)对麻醉犬心输出量、每搏输出量、心指数以及心搏指数的影响：与对照组比较，各配比YGT注射液组均能明显增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(p＜0.01)，淫羊藿提取物组、钩藤提取物组能明显增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(p＜0.05)，天麻素注射液组能对麻醉犬的心输出量不明显(p＞0.05)。

结论淫羊藿提取物、钩藤提取物组、天麻素合并用药可增加冠状动脉血流量、降低左室舒张末期压、显著改善心脏的泵血功能、显著改善心脏的收缩和舒张功能，对血流动力学有。淫羊藿提取物、钩藤提取物组、天麻素合并用药的效果优于淫羊藿提取物、钩藤提取物组或天麻素单独用药的效果，提示三种药物有协同增效作用。

试验例11淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素合并用药对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

受试动物小鼠，50只，雌雄兼用，体重25～28g，随机分为5组，每组10只。

供试品YGT注射液1：自制，5ml:316mg，含淫羊藿提取物100mg、钩藤提取物16mg、天麻素200mg

YGT注射液6：自制，5ml:232mg，含淫羊藿提取物100mg、钩藤提取物32mg、天麻素100mg

YGT注射液7：自制，5ml:416mg，含淫羊藿提取物200mg、钩藤提取物16mg、天麻素200mg

氯化钠注射液：山东长富洁晶药业有限公司

给药剂量30mg/kg

试验方法小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、照射对照组、照射后YGT注射液1、6、7给药组。用5Gy的γ射线照射处理4组照射组小鼠。照射当天开始以腹腔注射方式给药，给药浓度为30mg/kg，以灭菌生理盐水为对照，连续给药10天，其中第6天用2％sRBC按0.5ml/只对所有小鼠行腹腔注射免疫，第10天眼球后取血，脱臼处死，取脾获得脾细胞，配成1×10⁶个/ml备用。测定血清凝集素、溶血空斑形成细胞(PFC)和E玫瑰花结形成率。

表8淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素合并用药对免疫抑制小鼠免疫功能的影响(平均值±标准偏差，n＝10)

与氯化钠注射液对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01；与照射对照组相比较：p＜0.05，p＜0.01

试验结果及结论结果见表8。与氯化钠注射液对照组血清凝集素水平相比较，照射组抗体水平显著降低(p＜0.01)，照射后YGT注射液给药组抗体水平稍微降低，但无显著差异。照射后YGT注射液给药组与照射对照组相比较，给药组抗体水平明显升高(p＜0.05)，不同给药组之间无显著差异。与氯化钠注射液对照组的溶血空斑形成细胞数相比较，照射组水平显著降低(p＜0.01)，照射后YGT注射液给药组水平稍微降低，但无显著差异。照射后YGT注射液给药组与照射对照组PFC相比较，给药组水平均明显升高(p＜0.05)，不同给药组之间无显著差异。与氯化钠注射液对照组的E玫瑰花结形成率相比较，照射对照组明显降低(p＜0.05)，照射后YGT注射液给药组均显著升高(p＜0.01)，不同给药组之间无显著差异。上述结果表明，淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素合并用药能显著提高免疫抑制小鼠的细胞免疫和体液免疫功能。

试验例11YGT注射液长期稳定性试验

供试品YGT注射液1，自制，5ml:316mg，含淫羊藿提取物100mg、钩藤提取物16mg、天麻素200mg

考察项目性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量，并在长期试验期末增加无菌和热原检查

试验方法置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在12个月末增加无菌和热原检查。

试验结果温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，各项指标均无明显变化，长期试验12个月末，热原、无菌检查均符合规定。

试验结论由上述考察结果得出结论，长期试验中，YGT注射液1稳定。

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型制备工艺中的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例中用YGT代替淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素组合物。

实施例1淫羊藿提取物的制备以及鉴别和含量测定

取淫羊藿药材，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小时，每次加水为10倍量。合并煎液，冷藏放置过夜，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08～1.10的浓缩液，加于已处理好的聚酰胺树脂柱上，先用3～4倍柱体积的水冲洗，再用2～3倍柱体积的20％乙醇冲洗，弃去洗涤液，再用4～5倍柱体积的95％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥，即得。

分别制取三批，并按照试验例2和试验例3项下的方法进行鉴别和含量测定，结果见表9。

表9淫羊藿提取物的含量测定结果和得率

实施例2钩藤提取物的制备以及鉴别和含量测定

取钩藤1000g，粉碎成粗粉，加入70％乙醇回流提取2次，每次2小时，每次加醇为10L，合并提取液，滤过，回收乙醇至无醇味，加水至适量(每1ml相当于原药材2g)。搅匀，加浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放置4小时，滤过，滤液加石油醚振摇提取1次，弃去石油醚液，酸水液加10％氢氧化钠调pH值至9～10，冷藏放置过夜，滤取沉淀，再加1mol/l的稀盐酸使溶解，冷藏放置4小时，滤过，滤液再加10％氢氧化钠调pH值至9～10，冷藏放置过夜，滤取沉淀，真空干燥，即得。

分别制取三批，并按照试验例6和试验例7项下的方法进行鉴别和含量测定，结果见表10。

表10钩藤提取物的含量测定结果和得率

试验例3YGT注射液的制备工艺

1、处方：

处方1

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      16g

天麻素          200g

注射用水        加至5000ml

共制备          1000支

处方2

淫羊藿提取物   50g

钩藤提取物     16g

天麻素         100g

注射用水       加至5000ml

共制备         1000支

处方3

淫羊藿提取物   200g

钩藤提取物     16g

天麻素         200g

注射用水       加至5000ml

共制备         1000支

处方4

淫羊藿提取物  100g

钩藤提取物    8g

天麻素        40g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方5

淫羊藿提取物  200g

钩藤提取物    8g

天麻素        100g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方6

淫羊藿提取物  100g

钩藤提取物    32g

天麻素        200g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方7

淫羊藿提取物  50g

钩藤提取物    32g

天麻素        400g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方8

淫羊藿提取物  200g

钩藤提取物    32g

天麻素        400g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方9

淫羊藿提取物  50g

钩藤提取物    32g

天麻素        400g

注射用水      加至5000ml

共制备        1000支

处方10

淫羊藿提取物   100g

钩藤提取物     16g

天麻素         100g

注射用水       加至5000ml

共制备         1000支

2、具体步骤：

(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；

(2)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素加入配液量80％的注射用水中加热搅拌溶解完全；

(3)补加注射用水至全量；

(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；

(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的PH值；

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤；

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；

(8)将溶液熔封于玻璃安瓿中；

(9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟；

(10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏；

(11)灯检；成品全检，包装入库。

实施例2注射用YGT的制备工艺

1、处方：

处方1

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      16g

天麻素          200g

甘露醇          700g

无菌注射用水    加至2500ml

共制备          1000支

处方2

淫羊藿提取物    50g

钩藤提取物      16g

天麻素          400g

甘露醇          700g

无菌注射用水    加至2500ml

共制备          1000支

处方3

淫羊藿提取物    200g

钩藤提取物      16g

天麻素          100g

甘露醇          400g

无菌注射用水    加至4000ml

共制备          1000支

处方4

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      32g

天麻素          100g

甘露醇          700g

无菌注射用水    加至5000ml

共制备          1000支

处方5

淫羊藿提取物    200g

钩藤提取物      32g

天麻素          200g

甘露醇          400g

无菌注射用水    加至4000ml

共制备          1000支

处方6

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      8g

天麻素          400g

甘露醇          400g

无菌注射用水    加至4000ml

共制备          1000支

处方7

淫羊藿提取物     50g

钩藤提取物       8g

天麻素           200g

甘露醇           400g

无菌注射用水     加至4000ml

共制备           1000支

处方8

淫羊藿提取物     50g

钩藤提取物       8g

天麻素           100g

甘露醇           400g

无菌注射用水     加至4000ml

共制备           1000支

处方9

淫羊藿提取物      200g

钩藤提取物        8g

天麻素            200g

甘露醇            400g

无菌注射用水      加至4000ml

共制备            1000支

处方10

淫羊藿提取物      100g

钩藤提取物        16g

天麻素            400g

甘露醇            400g

无菌注射用水      加至4000ml

共制备            1000支

2、具体步骤：

(1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理；

(2)按照处方量称取原辅料；

(3)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素加入配液量50％无菌注射用水中加热溶解完全；甘露醇加配液量30％的无菌注射用水加热搅拌溶解完全，合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量；

(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；

(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值；

(6)经0.22μm的微孔滤膜精滤；

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；

(8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞；将样品放入冻干机中冷冻干燥；-45℃预冻5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时；

(9)冻干结束，压塞，轧盖；

(10)成品全检，包装入库。

实施例3YGT氯化钠注射液的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      16g

天麻素          200g

氯化钠          900g

注射用水        加至100000ml

共制备          1000瓶

2、具体步骤：

(1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；

(2)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素加入配液量40％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全；

(3)合并两溶液，补加注射用水至全量；

(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；

(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值；

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤；

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；

(8)灌装于100ml的输液瓶中；

(9)115℃热压灭菌30分钟；

(10)灯检；成品全检，包装入库。

实施例4YGT葡萄糖注射液的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物    100g

钩藤提取物      16g

天麻素          200g

葡萄糖          5000g

注射用水        加至100000ml

共制备          1000瓶

2、具体步骤：

(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗；

(2)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟；

(3)合并两溶液，补加注射用水至全量；

(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟；

(5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值；

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤；

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验；

(8)灌装于100ml的输液瓶中；

(9)115℃热压灭菌30分钟；

(10)灯检；成品全检，包装入库。

实施例5YGT滴丸的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物      100g

钩藤提取物        16g

天麻素            200g

聚乙二醇6000      600g

共制备            1000丸

2、具体步骤：

(1)聚乙二醇6000在水浴中加热熔融；

(2)聚乙二醇6000全部熔融后加入淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素，搅拌溶解；

(3)过60目筛过滤；

(4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸；

(5)成品全检，包装入库。

实施例6YGT片的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物     100g

钩藤提取物       16g

天麻素           200g

淀粉             40.0g

微晶纤维素       40.0g

2％HPMC水溶液    适量

硬脂酸镁         6.0g

羧甲淀粉钠       12.0g

共制备           1000片

2、具体步骤：

(1)将淫羊藿提取物和天麻素粉碎过100目筛备用；

(2)按照处方量称取原辅料；

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；

(4)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；

(5)过20目筛制颗粒；

(6)颗粒在60℃的条件下烘干；

(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀；

(8)取样，半成品化验；

(9)按照化验确定的片重压片；

(10)成品全检，包装入库。

实施例7YGT胶囊的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物     100g

钩藤提取物       16g

天麻素           200g

淀粉             60.0g

微晶纤维素       20.0g

2％HPMC水溶液    适量

硬脂酸镁         1.0g

共制备           1000粒

2、具体步骤：

(1)将淫羊藿提取物和天麻素粉碎过100目筛备用；

(2)按照处方量称取原辅料；

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用；

(4)将淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；

(5)过20目筛制颗粒；

(6)颗粒在60℃的条件下烘干；

(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀；

(8)取样，半成品化验；

(9)按照化验确定的装量装入胶囊；

(10)成品全检，包装入库。

实施例8YGT软胶囊的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物  100g

钩藤提取物    16g

天麻素        200g

大豆油        400g

大豆磷脂      20g

蜂蜡          12g

共制备        1000粒

2、具体步骤：

(1)处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷；

(2)加入淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素，混匀，过胶体磨；

(3)取样，半成品化验；

(4)压制成软胶囊；

(5)成品全检，包装入库。

实施例9YGT口服液制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物  100g

钩藤提取物    16g

天麻素        200g

苯甲酸钠      15g

甜菊甙        10g

水            加至10000ml

共制备        1000支

2、具体步骤：

(1)将淫羊霍提取物、钩藤提取物、天麻素加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；

(2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；

(3)合并上述两个溶液，补加水至全量；

(4)过0.8μm的微孔滤膜过滤；

(5)半成品化验；

(6)灌装；成品全检，包装入库。

实施例10YGT颗粒的制备工艺

1、处方：

淫羊藿提取物            100g

钩藤提取物              16g

天麻素                  200g

糖粉                    1800.0g

2％HPMC50％乙醇溶液     适量

共制备                  1000包

2、具体步骤：

(1)将蔗糖粉碎过100目筛备用；将淫羊藿提取物和天麻素粉碎过100目筛备用；

(2)按照处方量称取原辅料；

(3)将淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材；

(4)过20目筛制颗粒；

(5)颗粒在60℃的条件下烘干；

(6)干颗粒过18目筛整粒；

(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量；

(8)包装；成品全检，包装入库。

Claims (8)

1.一种药物组合物，其特征在于：由淫羊藿提取物、钩藤提取物和天麻素组成，所述的淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素按照重量组份分别为：淫羊藿提取物20～500份、钩藤提取物3～80份、天麻素40～1000份，所述淫羊藿提取物中含淫羊藿总黄酮不低于20％、淫羊藿苷不低于4％，所述钩藤提取物中含钩藤总碱不低于30％。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素按照重量组份计算为：淫羊藿提取物50～200份、钩藤提取物8～32份、天麻素100～400份。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素按照重量组份计算为：淫羊藿提取物100份、钩藤提取物16份、天麻素200份。

4.如权利要求1、2或3所述的任一药物组合物在制备降低血压、改善血流动力学或免疫调节的药物中的应用。

5.如权利要求1、2或3所述的任一药物组合物在制备抗心脑血管疾病的药物中的应用。

6.如权利要求1、2或3所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物制成任一种临床上或药学上可接受的剂型。

7.如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该组合物制成注射剂或口服制剂。

8.如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该组合物制成注射剂，其中的淫羊藿提取物含淫羊藿总黄酮不低于50％、淫羊藿苷不低于10％，钩藤提取物含钩藤总碱不低于50％。