CN1904607A - 一种巯胺托品含量的分析方法 - Google Patents
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Abstract
一种巯胺托品含量的分析方法，属于仪器分析技术领域。本发明采用高效液相色谱－蒸发光散射检测器对巯胺托品样品进行检测，色谱分析所用仪器为：WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS 2420蒸发光散射检测器，色谱柱Hypersil C8柱，5μm，4.6×250mm。结果显示主成分峰与杂质峰分离良好，线性范围为12.5～50μg/mL，最小检出量为3.0ng(S/N≥3)，所得检测结果的相对标准偏差约为3.6％。本发明用液相色谱蒸发光散射检测器分析巯胺托品的含量及有关杂质，方法简便、可靠。
Description
技术领域
一种巯胺托品含量的分析方法，属于仪器分析技术领域。
背景技术
巯胺托品(TRODAT-1)，中文化学名：2β-[N，N′-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基-3β-(4-氯苯基)托烷，其化学结构式如下：
巯胺托品经锝[99mTc]标记的产物为锝[99mTc]巯胺托品(99mTc-TRODAT-1)，中文化学名：锝[99mTc]-2β-[N，N′-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基-3β-(4-氯苯基)托烷，该化合物是近年来研制成功的新型多巴胺转运蛋白显像剂，是国际上第一个成功用于临床研究的锝[99mTc]标记的脑受体类显像剂，在锝[99mTc]标记放射性药物领域、核药学领域、脑受体显像领域都是一个突破性进展。国内外的大量临床前药理、毒理研究及临床研究证实，锝[99mTc]巯胺托品是极具临床应用价值的脑显像剂，对帕金森病(PD)的诊断极具临床价值。99mTc-TRODAT-1作为一种用量极微的一次性诊断用药，国外已进行了大量的临床研究，发现对PD的诊断具有合适的灵敏度与准确率。该药在欧洲由GE公司正在进行三期临床研究；而我国台湾省的核能研究所于2005年6月获得了台湾省的新药许可(衛署藥製R00023號)；国内正进行一类新药申报工作，其中锝[99mTc]标记前的TRODAT-1的含量分析是药盒质量控制的关键。由于TRODAT-1结构中缺乏发色基团，一般的紫外检测器难以检测，未有文献报导过其含量检测方法。蒸发光散射检测器(ELSD)将柱洗脱液雾化成微小液滴，液滴流过加热漂移管后流动相蒸发。激光被未蒸发的样品颗粒散射，散射光用硅光电二极管检测。ELSD的检测不依赖样品的光学特性，可定量检测样品中任何非挥发性成分，因此我们采用HPLC-ELSD检测TRODAT-1的含量。
发明内容
本发明的目的是提供一种巯胺托品含量的分析方法，因巯胺托品分子中不存在发色基团，因此不能用普通的紫外检测器加以检测。我们采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对色谱行为进行了一系列的考察后，确定了本发明方法。
本发明的技术方案：采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对巯胺托品进行检测，色谱条件确定为：仪器：WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS2420蒸发光散射检测器，色谱柱Hypersil C8柱，5μm，4.6×250mm，流动相：甲醇-乙腈-水-三氟乙酸(TFA)体积比(80∶10∶10∶0.1)，使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱气，流速：1.0ml/min；巯胺托品样品的进样体积：5μl；柱温室温；蒸发光散射检测器漂移管温度60℃～80℃、载气(N2)压力为0.24MPa(35psi)。精密称取干燥恒重的巯胺托品对照品，用甲醇制成每1ml中含巯胺托品250μg的溶液，计为W对照，精密称取被测样品，配成每1ml中含被测巯胺托品样品控制为250μg的溶液，计为W样品，测定所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中巯胺托品的含量为：
(S样品/S对照)×(W对照/W样品)×100％。
本发明的有益效果：本发明提供了一种用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)检测巯胺托品含量的方法，显示主成分峰与杂质峰分离良好，线性范围为12.5～50μg/mL，最小检出量为3.0ng(S/N≥3)。所得检测结果的相对标准偏差约为3.6％。供试品溶液中各杂质峰的峰面积之和不超过对照品总峰面积的25％。本发明分析，方法简便、可靠。
附图说明
图1巯胺托品与合成前的两个中间体的分离图保留时间4.906的峰为TRODAT-1，另外两个峰为中间体。
图2甲醇空白的HPLC色谱图
图3两个中间体的甲醇溶液的HPLC色谱图
图4 TRODAT-1甲醇溶液的HPLC色谱图
图5碱破坏试验的HPLC色谱图
图6酸破坏试验的HPLC色谱图
具体实施方式
实施例1 流动相的选择
制备巯胺托品的反应式为：
由于化合物9(2β-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]-N-[[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]氨基]甲酰甲基]氨基甲基]-3β-(4-氯苯基)托烷)和化合物10(2β-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]氨基]乙基]氨基甲基]-3β-(4-氯苯基)托烷)是TRODAT-1的合成中间体；因而要考察TRODAT-1与它们的分离情况。分别以下列溶液为流动相，用C8柱(Symmetry，5μm，4.6×150mm)进行试验。
(A)甲醇-水(80∶20)
(B)甲醇-水(60∶40)
(C)乙腈-水(80∶20)
(D)乙腈-水(60∶40)
(E)甲醇-水-TFA(80∶20∶0.1)
(F)乙腈-水-TFA(80∶20∶0.1)
(G)甲醇-乙腈-水-TFA(80∶10∶10∶0.1)
以A、B、C、D为流动相的色谱图中主峰与杂质峰重叠；以E、F为流动相的色谱图中主峰与杂质峰的分离度较小；以G为流动相的色谱图中主峰与中间体能很好的分离，且主峰的保留时间比较合适，如图1所示。
实施例2 漂移管温度的设定
将漂移管温度分别设为40℃～100℃进行试验，结果显示漂移管温度为60℃～80℃时色谱分离较好。因此，色谱条件确定为：仪器：WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS 2420蒸发光散射检测器。色谱柱Hypersil C8柱，5μm，4.6×250mm，流动相：甲醇-乙腈-水-TFA(80∶10∶10∶0.1)，使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱气，流速：1.0ml/min；进样体积：5μl；柱温室温；ELSD漂移管温度60℃～80℃、载气(N2)压力为35psi。
实施例3 载气(N2)流量设置
载气(N2)压力选择15、25、35、45psi试验，压力为35psi时色谱效果较好。
实施例4 合成前的中间体与主成分的分离试验
本品用甲醇溶解，因此考查了甲醇对色谱行为的影响，图2显示为甲醇空白HPLC色谱图，表明甲醇对色谱行为无干扰。图3为两个中间体(合成路线中化合物9和10，2β-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]-N-[[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]氨基]甲酰甲基]氨基甲基]-3β-(4-氯苯基)托烷(9)，2β-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基苄基)硫基]乙基]氨基]乙基]氨基甲基]-3β-(4-氯苯基)托烷(10)和甲醇溶液HPLC色谱图，图4显示TRODAT-1色谱图，显示主成分峰与杂质峰分离良好。
实施例5 线性范围和检测限试验
精确称取一定量的对照品TRODAT-1适量，用甲醇溶解成2.5mg/ml，分别进样5、10、15、20μl，用积分面积对样品量作图。所得回归方程为y＝12710x-12342，R2＝0.9988。线性范围为12.5～50μg/mL。取对照品适量，用甲醇配成每1ml中含6×10-6mg的溶液作为供试品溶液。最小检出量为3.0ng(S/N≥3)。
实施例6 精密度试验
供试品在确定的色谱条件下于同一天内连续进样6次测定，根据峰面积计算所得相对标准偏差约为3.6％。
实施例7 样品含量测定
取干燥恒重的TRODAT-1对照品(由本所制备)适量，精密称定，用甲醇制成每1ml中含TRODAT-1 250μg(W对照)的溶液，作为对照溶液。另称取样品适量，配成每1ml中含被测TRODAT-1样品约250μg(W样品)的溶液作为供试品溶液。按上述色谱条件下分别取5μl注入色谱仪，进行测定，所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算样品中TRODAT-1含量为
(S样品/S对照)×(W对照/W样品)×100％。
实施例8 有关物质检查法和测定结果
取本品适量，精密称定，用甲醇制成每1ml中含TRODAT-1 5mg的溶液，作为对照溶液。另配成每1ml中含TRODAT-1 0.05mg的溶液作为供试品溶液。取对照溶液5μl注入色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2005版二部附录V D)试验，以键合硅胶为填充剂，流动相：甲醇-乙腈-水-TFA(80∶10∶10∶0.1)，ELSD漂移管温度80℃、载气(N2)压力为35psi。调节仪器灵敏度，使TRODAT-1峰的峰高为记录仪满量程的15％~30％。再量取供试品溶液5μl注入色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。按面积归一化法计算，供试品溶液中各杂质峰的峰面积之和不超过对照品总峰面积的25％。
实施例9 方法专属性研究，进行破坏试验
取本品两份，分别加入(1)1ml的6mol/L NaOH溶液溶解，(2)1ml的6mol/L HCl溶液溶解，分别置沸水浴加热破坏1小时。分别调pH至中性，减压蒸干，用甲醇溶解，稀释，分别在上述色谱条件下测试。
结果表明；在碱、酸破坏条件下经高效液相色谱分析杂质峰增加，且与主峰分离良好。由此可见该色谱体系专属性较好，能够检测到各种杂质。
Claims (1)
1.一种巯胺托品含量的分析方法，其特征是采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对巯胺托品样品进行检测，色谱条件确定为：仪器：WATERS 600型高效液相色谱仪，WATERS 2420蒸发光散射检测器，色谱柱Hypersil C8柱，5μm，4.6×250mm，流动相：甲醇-乙腈-水-三氟乙酸体积比为80∶10∶10∶0.1，使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱气，流速：1.0ml/min；巯胺托品的进样体积：5μl；柱温室温；蒸发光散射检测器漂移管温度60℃～80℃、载气N2压力为0.24MPa；精密称取干燥恒重的巯胺托品对照品，用甲醇制成每1ml中含巯胺托品250μg的溶液，计为W对照，精密称取被测样品，配成每1ml中含被测巯胺托品样品控制为250μg的溶液，计为W样品，测定所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中巯胺托品的含量为：(S样品/S对照)×(W对照/W样品)×100％。
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