CN1772089A - 一种含有白花蛇舌草冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种白花蛇舌草冻干粉针剂及其制备方法。其粉针剂以重量份计主料为白花蛇舌草提取物20－140份，辅料为甘露醇80－200份、吐温－80 20－100份、亚硫酸氢钠1－6份、灭菌注射用水适量。其制备方法是将主辅料精确称定，搅拌溶解，加0.1－1％针用活性炭，调节pH值为6.0－7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜过滤、分装，半加塞后转入冻干箱，在5－10Pa的条件下，进行冷冻干燥即可。本发明冻干粉针剂克服了现有白花蛇草提取物药剂有效期短、副作用大、纯度低、吸收率差等缺陷。本发明冻干粉针剂用于制备治疗各种炎症及手术后感染等，亦可用于癌症辅助治疗的药物中。

Description

一种含有白花蛇舌草冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及利用植物材料的提取物所制成的药物制剂及其制备方法，更具体地说是以白花蛇舌草提取物所制成的冻干粉针剂及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

中药材白花蛇舌草属茜草科一年生草本植物，白花蛇舌草--Oldenlan-diadiffusa.(Willd.)Roxd.的全草。别名蛇舌草，广泛分布于我国长江以南地区，生于田边、园地和旷野，含有丰富的有机锗、黄酮、多酚、免疫多糖、熊果酸等的化合物。药材性状：全草缠绕成团块状，灰绿色或灰褐色，茎纤弱，圆柱形，有分枝。叶对生，近无柄，常皱缩、破碎或脱落，完整叶展平后叶片线形，长1～2厘米或过之；托叶长0.1厘米左右。花或蒴果常单生叶腋，花白色，蒴果小，扁球形。气微，味微苦。以叶多、色灰绿者为佳。性味和功用：性寒，味微苦，微甘，凉，归心、肝、脾经。

白花蛇舌草以全草供药用，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛的功能。主治恶性肿瘤、阑尾炎、肝炎、呼吸道感染、支气管炎、扁桃体炎、喉炎、肺炎、胆囊炎、阑尾炎、泌尿***感染、***、***及手术后感染等症；外用治疮疖痈肿、毒蛇咬伤。现代中医临床用于治疗胃癌、食管癌、肠癌、子宫癌、鼻咽癌等多种癌症。

现今市场上含有白花蛇舌草的药剂较多，比如根据部颁药品标准WS3-B-3176-98中给出的制备方法制备而成的白花蛇舌草水针剂，具有清热解毒，利湿消肿作用，用于治疗湿热蕴毒所致的呼吸道感染，扁桃体炎、肺炎、胆囊炎、阑尾炎、痈疖脓肿及手术后感染等疾病，亦可用于癌症辅助治疗的纯中药水针剂，经临床验证，疗效确切，是临床和家庭用于治疗此类病症的常用药物。

由于现有水针剂受制备技术限制及中药成份复杂性的影响，中药水针剂往往容易产生急性过敏反应或不良反应，久置易沉淀，注射时增加疼痛等缺点。并且水针剂在使用过程中也多有不便：1、纯度低、剂量不准确；2、在实际操作需多抽用液体，制剂极易感染热源或被细菌污染；3、在实际临床中，多种病症要求减少病人输液量，而水针剂则无法解决；4、在寒冷季节，特别是在北方及高寒地区的运输及储藏均存在不便之处；5、液体制剂破损，对包装及内包装极易造成交叉污染；6、应用范围较窄。

另外，大多数药物的口服制剂，比如白花蛇舌草的口服制剂，均存在纯度低、副作用大、溶散时限长、溶出度低、吸收率差、肝肠首过效应和生物利用度较低等问题，从而影响药效的发挥，也直接影响着治疗效果。同时，常规的口服剂型，在制备过程中常会产生较大的粉尘污染，一定程度上会对工作人员的身体造成危害，同时也会给环境造成一定的污染。常规口服制剂的生产工艺也较复杂，生产成本较高，从而使患者的用药成本也随之提高，不利于提高广大患者的就医能力，亦不利于提高社会的总体健康水平。

冻干粉针剂自使用以来，因其具有储存时间长、使用方便等诸多优点，深受制药厂商、医院的信赖。但并非所原药都适宜做成粉针剂，且制备工艺、制备技术等较为复杂，所以现今市场上还未有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂面世。经申请人检索，只是目前有二个含有白花蛇舌草粉针剂的专利申请公开，申请号为200510042044.1和200510055292.X。虽然与本发明现较为相似，但本发明不仅解决了白花蛇舌草提取物的提取、粉针剂制备等问题，而且因本发明的提取、制备方法的特殊性，使得本粉针剂的有效成分含量、质量稳定性、治疗效果、使用效果等方面都更胜一筹。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效成分含量更高、稳定性更好、溶解速度更快、治疗效果更优的含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂。

本发明的另一目的在于提供一种含有白花蛇舌草提取物冻干粉针剂的制备方法。

本发明冻干粉针剂药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在下述重量份范围内都具有较好的疗效：

一、主料

白花蛇舌草提取物                20-140份

优选：

白花蛇舌草提取物              28份

上述提取物可采用如下方法进行制备：

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20-40粗粉，用70-90％，优选80％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取3-5次，优选4次，每次1-2h，优选1.5h，合并提取液，冷藏8-12小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为2-4ml/min，优选3ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以70-90％，优选80％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用40-60％硫酸溶液调节PH值至2-4，静置8-12小时，滤过，滤液再用30-50％NaOH溶液调PH值至中性，加入70-90％，优选80％乙醇1000-3000ml，优选2000ml，冷藏8-12小时，滤过，滤液减压浓缩至200-400ml，优选300ml，每次用2-8％，优选5％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解4-6次，优选5次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为1-3，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥即可。其中白花蛇舌草提取物以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计含5-8％总黄酮，优选含7.1％总黄酮。

二、辅料

甘露醇                     80-200份

吐温-80                    20-100份

亚硫酸氢钠                 1-6份

灭菌注射用水               适量

优选：

甘露醇                     150份

吐温-80                    40份

亚硫酸氢钠                 2份

灭菌注射用水               适量

本发明药物冻干粉针剂的工艺制备：

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加0.1-1％，优选0.5％针用活性碳，充分搅拌，用30-50％，优选40％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.0-7.0，优选PH值为6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤、分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥。

将放入冷冻干燥箱中的滤液温度迅速降至-30--55℃后，优选-42℃，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在5-10Pa，优选8Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-25--32℃，优选-28℃，以0.5-1.5℃/1.5小时，优选1.0℃/1.5小时的升温速度升至-22--15℃后，优选为-18℃，再以3-5℃/小时，优选4℃/小时的升温速度升至25-40℃，优选为32℃，在25-40℃的温度下，优选32℃保温5-20小时，优选13小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的1-6％，优选3.5％，即可出机轧盖。

所得制品规格为含总黄酮1-11.2mg/支。

本发明药物冻干粉针剂符合注射液检查标准，使用安全，性质稳定，检查结果如下：

PH值检查：取冻干粉，加注射用水，配制成注射液，PH值为6.0-7.0。

澄明度检查：取冻干粉，加注射用水，配制成注射液，取样，目视，未见异物。

细菌内毒素测定：依照中国药典2000年版二部附录XI E进行检查，本发明注射液每1mL中含细菌内毒素的量小于5EU。

异常毒性测定：依照中国药典2000年版二部附录XI C静脉注射法检查，未见异常。

蛋白质检查：取冻干粉，加注射用水，配制成注射液。取1ml，加新鲜配制的30％磺基水杨酸试液1ml，混合放置5min，未出现浑浊。

急性毒性试验：小鼠的LD50(半数致死量)为129±0.15mg/kg体量。

慢性毒性试验：给各实验组鼠按9mg/kg、12mg/kg的剂量连续给药90天后，处死各组实验小鼠，检查其血小板、血细胞、心功能、肝肾功能及组织病理学检查，无异常情况发生。

本发明药物冻干粉针剂稳定性测试结果良好。

本发明药物冻干粉针剂具有清热解毒，利湿消肿，用于湿热蕴毒所致的呼吸道感染、扁桃体炎、肺炎、胆囊炎、阑尾炎、痈疖脓肿及手术后感染，亦可用于癌症辅助治疗。

本发明药物的施用量可根据用药途径、服药者年龄、体重等变化，其日剂量可以是0.01-12mg/kg体重，优选1-6mg/kg体重，可以一次或多次施用。

本发明药物的冻干粉针剂是白花蛇舌草提取物，再加入其它辅料组成。辅料可以是药剂学上可接受的各种辅料。由于白花蛇舌草提取物具有清热解毒，利湿消肿作用，所以其组合物的冻干粉针剂是以冷冻干燥原理制备的注射用无菌粉末，为冻干粉针剂型，与现有技术相比，具备以下优点：

1、制备工艺简单，过程易于控制；2、溶解速度快，纯度高，副作用小，疗效确切；3、稳定性好，有效期长，物理稳定性不受温度影响；4、剂量准确并可视情调整，能做到准确给药；5、成品制剂为固体制剂，体积小，便于运输和保存；6、克服了水针剂久置沉淀的缺点，能减轻注射时病人的疼痛感；7、能准确控制量，降低了病人的输液量，使许多临床上要求液体量的病种(如心衰等)得到治疗，减轻了病人负担；8、解决了破损后产品的交叉污染问题；9、解决了北方和寒冷地区冬季的运输及储藏问题；10、应用范围广，适用症多，还可提供静脉滴注给药。

具体实施方式：

下面的实施例可以使本专业的技术人员全面、更好地理解本发明，但不可以任何方式限制本发明：

实施例1  本发明药物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物            28mg(含2mg总黄酮)

其制备可采用如下方法

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成30目粗粉，用80％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取4次，每次1.5h。合并提取液，冷藏10小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为3ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以80％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用50％硫酸溶液调节PH值至3，静置10小时，滤过，滤液再用40％NaOH溶液调PH值至中性，加入80％乙醇2000ml，冷藏10小时，滤过，滤液减压浓缩至300ml，每次用5％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解5次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为2，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物4g，为淡黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品(中国药品生物制品鉴定所提供)10mg，置50ml量瓶中，加适量70％的乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备  精密量取标准液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0与6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％的乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为2.8mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为71mg，含量为7.1％。

二、辅料

甘露醇                            150mg

吐温-80                           40mg

亚硫酸氢钠                        2mg

灭菌注射用水                      适量

白花蛇草冻干粉针剂的工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加0.5％针用活性碳，充分搅拌，用40％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥。

使放入冷冻干燥箱中已经过滤后的滤液的温度迅速降至-42℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在8Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-28℃，以1.0℃/1.5小时的升温速度升至-18℃后，再以4℃/小时的升温速度升至32℃，在32℃的温度下保温13小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的3.5％，即可出机轧盖。

所得制品规格总黄酮含量为2mg/支。

实施例2  本发明药物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物                56mg(含4mg总黄酮)

其制备可采用如下方法

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成30目粗粉，用80％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取4次，每次1.5h。合并提取液，冷藏10小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为3ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以80％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用50％硫酸溶液调节PH值至3，静置10小时，滤过，滤液再用40％NaOH溶液调PH值至中性，加入80％乙醇2000ml，冷藏10小时，滤过，滤液减压浓缩至300ml，每次用5％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解5次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为2，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物4g，为淡黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备  标准曲线的制备同实施例1中的标准曲线制备。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为2.8mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为71mg，含量为7.1％。

二、辅料

甘露醇                          200mg

吐温-80                         80mg

亚硫酸氢钠                      4mg

灭菌注射用水                    适量

白花蛇草冻干粉针剂的工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加0.5％针用活性碳，充分搅拌，用40％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥。

使放入冷冻干燥箱中已经过滤后的滤液的温度迅速降至-42℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在8Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-28℃，以1.0℃/1.5小时的升温速度升至-18℃后，再以4℃/小时的升温速度升至32℃，在32℃的温度下保温13小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的3.5％，即可出机轧盖。

所得制品规格总黄酮含量为4mg/支。

实施例3  本发明药物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物                20mg(含1mg总黄酮)

其制备可采用如下方法：

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成40目粗粉，用70％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取3次，每次1h。合并提取液，冷藏8小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为4ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以70％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用40％硫酸溶液调节PH值至4，静置8小时，滤过，滤液再用30％NaOH溶液调PH值至中性，加入70％乙醇1000ml，冷藏8小时，滤过，滤液减压浓缩至200ml，每次用2％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解4次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为1，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物3g，为浅黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备  标准曲线的制备同实施例1中的标准曲线制备。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为2.0mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为50mg，含量为5％。

二、辅料

甘露醇                          80mg

吐温-80                         20mg

亚硫酸氢钠                      1mg

灭菌注射用水                    适量

工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加0.1％针用活性碳，充分搅拌，用50％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.0，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥

使放入冷冻干燥箱中已经过滤后的滤液的温度迅速降至-30℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在10Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-25℃，以1.5℃/1.5小时的升温速度升至-22℃后，再以5℃/小时的升温速度升至25℃，在25℃的温度下保温5小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的6％，即可出机轧盖。

所得制品规格含总黄酮为1.0mg/支。

实施例4  含有本发明提取物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物                140mg(含11.2mg总黄酮)

其制备可采用如下方法：

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20目粗粉，用90％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取5次，每次2h。合并提取液，冷藏12小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为2ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以90％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用60％硫酸溶液调节PH值至2，静置12小时，滤过，滤液再用50％NaOH溶液调PH值至中性，加入90％乙醇3000ml，冷藏12小时，滤过，滤液减压浓缩至400ml，每次用8％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解6次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为3，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物5g，为浅黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备  标准曲线的制备同实施例1中的标准曲线制备。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为3.2mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为80mg，含量为8％。

二、辅料

甘露醇                         150mg

吐温-80                        40mg

亚硫酸氢钠                     2mg

灭菌注射用水                   适量

工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加1％针用活性碳，充分搅拌，用30％氢氧化钠溶液，调节PH值为7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥。

将放入冷冻干燥箱中的滤液温度迅速降至-55℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在5Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-32℃，以0.5℃/1.5小时的升温速度升至-15℃后，再以3℃/小时的升温速度升至40℃，在40℃的温度下保温20小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的1％，即可出机轧盖。

所得制品规格含总黄酮为11.2mg/支。

实施例5  本发明药物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物                20mg(含1.6mg总黄酮)

其制备可采用如下方法：

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20目粗粉，用90％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取5次，每次2h。合并提取液，冷藏12小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为2ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以90％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用60％硫酸溶液调节PH值至2，静置12小时，滤过，滤液再用50％NaOH溶液调PH值至中性，加入90％乙醇3000ml，冷藏12小时，滤过，滤液减压浓缩至400ml，每次用8％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解6次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为3，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物5g，为浅黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备  标准曲线的制备同实施例1中的标准曲线制备。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为3.2mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为80mg，含量为8％。

二、辅料

甘露醇                          200mg

吐温-80                         20mg

亚硫酸氢钠                      6mg

灭菌注射用水                    适量

工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加0.1％针用活性碳，充分搅拌，用50％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.0，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥

使放入冷冻干燥箱中已经过滤后的滤液的温度迅速降至-30℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在10Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-25℃，以1.5℃/1.5小时的升温速度升至-22℃后，再以5℃/小时的升温速度升至25℃，在25℃的温度下保温5小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的6％，即可出机轧盖。

所得制品规格含总黄酮为1mg/支。

实施例6  含有本发明提取物冻干粉针剂的制备

一、主料

白花蛇舌草提取物            140mg(含7.0mg总黄酮)

其制备可采用如下方法：

取洗净、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成40目粗粉，用70％乙醇2000ml作溶剂，加热回流提取3次，每次1h。合并提取液，冷藏8小时，离心，收集上清液，加入到聚酰胺树脂柱中，调节流速为4ml/min，用蒸馏水洗去杂质，以70％乙醇为流动相解吸附，回收乙醇，用40％硫酸溶液调节PH值至4，静置8小时，滤过，滤液再用30％NaOH溶液调PH值至中性，加入70％乙醇1000ml，冷藏8小时，滤过，滤液减压浓缩至200ml，每次用2％碳酸钠溶液500ml加热，反复溶解4次，趁热过滤，滤液加盐酸，调节PH值为1，放冷滤取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物3g，为浅黄色粉末。

《含量测定》

对照品溶液的制备  标准曲线的制备同实施例1中的标准曲线制备。

测定法  精密量取本品1克，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70％乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶中，甲瓶中加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(附录VB)，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，为2.0mg/ml。

经计算，本品每1克中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计为50mg，含量为5％。

二、辅料

甘露醇                          80mg

吐温-80                         100mg

亚硫酸氢钠                      1mg

灭菌注射用水                    适量

工艺制备

将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全，加1％针用活性碳，充分搅拌，用30％氢氧化钠溶液，调节PH值为7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤，分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥。

将放入冷冻干燥箱中的滤液温度迅速降至-55℃后，形成冷冻块，启动真空泵抽真空，在5Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-32℃，以0.5℃/1.5小时的升温速度升至-15℃后，再以3℃/小时的升温速度升至40℃，在40℃的温度下保温20小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的1％，即可出机轧盖。

所得制品规格含总黄酮为7.0mg/支。

以下通过试验例进一步阐述本发明冻干粉针剂的有益效果：

试验例1  溶解速度对比评价试验

试验材料：

供试品A  取本发明实施例1所制备的含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂，规格为2mg/支。

供试品B  以申请号200510042044.1中提供的实施例1方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

供试品C  以申请号200510055292.X中提供的制备实施例1方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

注射用生理盐水(珠海生物化学制药厂实验室提供)

试验方法：在试验环境25±2℃湿度60±5％情况下，对三种粉针剂进行溶解速度对比试验，统计结果如下：

表1  三种粉针剂溶解速度对比情况统计表(试验环境：25±2℃湿度60±5％)

供试品供试品A供试品B供试品C

溶剂注射用生理盐水注射用生理盐水注射用生理盐水

溶解时间(秒)205040

外观色泽与颜色淡黄色液体浅黄色液体浅黄色液体

溶解情况(％约)100100100

试验结果：本发明冻干粉针剂，在同等条件下，溶解速度更快，更方便使用。

本发明的其它实施例2、3、4、5、6所得到的产品，采用上述方法进行试验，得到基本相同的结果。

试验例2  加速稳定性对比评价试验及有效成分含量对比

试验材料：

供试品A  取本发明实施例2所制备的含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂，规格为4mg/支。

供试品B  以申请号200510042044.1中提供的实施例2方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

供试品C  以申请号200510055292.X中提供的制备实施例2方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

试验方法：在试验环境50±2℃，湿度80±5％情况下，对三种粉针剂进行加速稳定性评价对比试验，统计结果如下：

表2  三种粉针剂加速稳定性试验统计表(试验环境：50±2℃湿度80±5％)

供试品	0天总黄酮含量mg/支	5天总黄酮含量mg/支	10天总黄酮含量mg/支	20天总黄酮含量mg/支
					供试品A供试品B供试品C	4.000.610.75	3.950.550.70	3.900.490.65	3.600.380.55

试验结果：通过上述加速稳定性对比实验，我们可以得出：本发明冻干粉针剂与先前公开的二个粉针剂相比，不仅含量上大大超过，而且在经过加速稳定性对比试验后，其有效成分保留了90％以上，而另两个粉针剂有效成分则只保留62％、73％。因此，足以证明按照本发明制备方法得到的粉针剂稳定性更好、有效成分含量更高。

本发明的其它实施例1、3、4、5、6所得到的产品，采用上述方法进行试验，得到基本相同的结果。

试验例3  对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的对比评价试验

试验材料：

供试品A  取本发明实施例3所制备的含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂，规格为1mg/支。

供试品B  以申请号200510042044.1中提供的实施例3方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

供试品C  以申请号200510055292.X中提供的制备实施例3方法得到的白花蛇舌草粉针剂(珠海生物化学制药厂实验室提供)。

注射用生理盐水(珠海生物化学制药厂实验室提供)

试验动物：昆明种小鼠(20±2)g，雌雄兼用(珠海生物化学制药厂动物房提供)。

试验方法：

小鼠30只，分为3组，每组10只，将三种供试品用注射用生理盐水溶解，按照3mg/kg给药剂量给小鼠尾静脉给药，每天一次，给药3天，生理盐水组给药容量0.5ml/只，每天1次，给药3天，于末次给药后1h，取二甲苯0.05ml/只均匀涂于左耳前后两面致炎，15min后，处死动物，剪下耳壳，两耳重叠，用直径为8mm打孔器取圆片，称量，左右耳重之差作为肿胀度，求出给药组的肿胀抑制率。结果见表3。

表3  对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的影响

组别注射用生理盐水供试品A供试品B供试品C

动物数(只)10101010

肿胀度(mg)21.62±7.07.12±2.8**[*]12.56±6.7**10.25±3.9**

抑制率(％)--67[*]41.952.5

注：与注射用生理盐水比较^**P＜0.01，与阳性对照组比较[^*]P＜0.05

试验结果：本发明粉针剂对由对二甲苯引起小鼠耳壳炎症有更好的抑制效果。

本发明的其它实施例1、2、4、5、6所得到的产品，采用上述方法进行试验，得到基本相同的效果。

试验例4  有效期、稳定性反应对比评价试验

试验材料：取本发明实施例4所制备的含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂，规格为11.2mg/支。

试验方法：1)本发明药物冻干粉针剂无菌粉末经高温(40℃、60℃、80℃)、高湿(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照4000LX影响因素进行试验。

试验结果：外观性状、澄明度、PH值、含量及无菌检查均符合要求。

试验方法：2)本发明药物冻干粉针剂加速试验(40℃RH75％)留样考察1、3、5、7、12、18个月。

试验结果：外观性状、澄明度、PH值、含量、及无菌检查均符合要求。

试验结论：本发明粉针剂保存期可达3年，有效地避免了注射剂在长期贮存中发生的降解、浑浊、沉淀等现象，延长了白花蛇舌草药物制剂的质量有效期。

本发明的其它实施例1、2、3、5、6所得到的粉针剂产品，采用上述方法进行试验，得到基本相同的效果。

对比例：

试验材料：取白花蛇舌草注射液，规格为2mg/支，吉林龙泰制药股份有限公司提供。

试验方法：1)将白花蛇舌草注射液经高温(40℃、60℃、80℃)、高湿(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照4000LX影响因素进行试验。

试验结果：外观性状淡黄色、混浊。

试验方法：2)将白花蛇舌草注射液加速试验(40℃RH75％)留样考察1、3、5、6个月。

试验结果：6个月开始外观变黄、混浊。

试验结论：推测白花蛇舌草注射液保存期可达2年。

试验例5  提取物纯度对比评价

根据中药部颁标准，白花蛇舌草注射液：拼音名BaihuaSheshecao Zhusheye，书页号：Z17-67，标准编号：WS3-B-3176-98。本品采用照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录IO)提取，再将白花蛇舌草提取物制成灭菌水溶液。本品每1ml中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于0.25mg。

采用本发明实施例1-6中白花蛇草提取物的制备方法，每1ml中含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，为1.6-3.2mg，是部颁标准的6.4-12.8倍，足以看出本发明方法制备的提取物纯度高，杂质少，副作用当然也就小。且根据不同病证、患者可以调整辅料的用量，以控制本发明药物冻干粉针剂的活性成分含量。

Claims (10)

1、一种含有白花蛇舌草提取物的冻干粉针剂，其组分中主料为白花蛇舌草提取物20-140份，辅料为甘露醇80-200份、吐温-80 20-100份、亚硫酸氢钠1-6份、灭菌注射用水适量。

2、根据权利要求1所述的一种冻干粉针剂，其特征在于所述的组分中白花蛇舌草提取物28份、甘露醇150份、吐温-80 40份、亚硫酸氢钠2份、灭菌注射用水适量。

3、根据权利要求1所述的一种冻干粉针剂，其特征在于所述的组分中白花蛇舌草提取物以芦丁C₂₇H₃₀O₁₆计含5-8％总黄酮。

4、根据权利要求3所述的一种冻干粉针剂，其特征在于所述的组分中白花蛇舌草提取物以芦丁C₂₇H₃₀O₁₆计含7.1％总黄酮。

5、权利要求1-4中任意一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

A)将主辅料精确称定，搅拌使之全部溶解完全；

B)加0.1-1％针用活性碳，充分搅拌，用30-50％氢氧化钠溶液，调节PH值为6.0-7.0；

C)用0.4μ和0.22μ的微孔滤膜脱碳过滤和除菌过滤、分装，半加塞后转入冻干箱进行冷冻干燥；

D)将放入冷冻干燥箱中的滤液温度迅速降至-30--55℃，形成冷冻块；

E)启动真空泵抽真空，在5-10Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-25--32℃；

F)以0.5-1.5℃/1.5小时的升温速度升至-22--15℃后，再以3-5℃/小时的升温速度升至25-40℃；

G)在25-40℃的温度下保温5-20小时，使冻干粉针剂所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的1-6％，即可。

6、根据权利要求5所述的一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的步骤B)中针用活性碳为0.5％，氢氧化钠溶液浓度为40％，PH值为6.5。

7、根据权利要求5所述的一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的步骤D)中将放入冷冻干燥箱中的滤液温度迅速降至-42℃，形成冷冻块。

8、根据权利要求5所述的一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的步骤E)中启动真空泵抽真空，在8Pa的条件下，使冷冻块的温度升至-28℃。

9、根据权利要求5所述的一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的步骤F)中以1.0℃/1.5小时的升温速度升至-18℃后，再以4℃/小时的升温速度升至32℃。

10、根据权利要求5所述的一种冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的步骤G)中，冻干粉针剂在32℃的温度下保温13小时，使其所含的水份为白花蛇舌草提取物、辅料总重量的3.5％，即可。