为了更好地理解本发明的实质,下面将通过***的药理试验资料及结果来说明其在制药领域中的用途。但它们不是对本发明的限定。
实施例1
-藕节对营养性肥胖大鼠模型的影响
1.1材料和方法
1.1.1实验材料和饲料的制备
(1)受试材料 分别将藕节和藕芽洗净凉干,然后置于烤箱中在65℃下鼓风干燥,用粉碎机分别制成细粉,备当日使用。
藕渣的制备:将鲜藕洗净捣碎,浸泡在清水中并搅拌以去除淀粉,然后捞出,用纱布包裹挤去渣中水分,在上述同样条件下干燥并制成细粉,备当日使用。
(2)阳性药物 宁红减肥茶(江西宁红集团公司出品,批号:20011102.)粉碎成细粉,备当日使用。
(3)实验饲料
浓缩高热量饲料:基础饲料40%,猪油35%,蔗糖15%,鸡蛋8%,食盐2%。
实验饲料:每取一定量上述浓缩高热量饲料分别与一定量的基础饲料、藕渣粉、藕节粉、藕芽粉和阳性药粉混合,用颗粒饲料机制成模型高热量饲料、藕渣高热量饲料、藕节高热量饲料、藕芽高热量饲料和阳性药高热量饲料(每种饲料含浓缩高热量饲料68%,相应药粉32%,模型高热量饲料以32%的基础饲料替代药粉量,阳性药高热量饲料32%的药粉中含基础饲料21%,宁红减肥茶细粉11%。)
上述饲料制成后,自然风干,每7~10天重新加工一次。
1.1.2.实验动物与分组
SD雄性大鼠,体重444±17g,随机分为:空白组(I组)、模型对照组(II组)、藕渣组(III组)、藕节组(IV组)、藕芽组(V组)和阳性药组(VI组)。每组8只,单笼饲养。
1.1.3.造模及给药
每日下午5时许给予每只大鼠相应实验饲料22g,即I组给予基础饲料22g/只;II~VI组分别给予模型高热量饲料、藕渣高热量饲料、藕节高热量饲料、藕芽高热量饲料和阳性药高热量饲料22g/只(各种饲料每22g均含浓缩高热量饲料15g,其余7g分别为基础饲料、藕渣粉、藕节粉、藕芽粉和基础饲料4.6g+阳性药粉2.4g)。次日早上8时许给予每只大鼠基础饲料8g,吃完不再添加,各组大鼠均自由饮水。
1.1.4.观测指标及方法
(1)一般情况 包括精神、皮毛、眼睛、行为、摄食、饮水及大小便。设计表格,每日记录。
(2)摄食量 设计表格,每日记录。
(3)体重 每周称量一次。
(4)葡萄糖耐量 实验第四周末测定。大鼠禁食6小时,各取6只,腹腔注射葡萄糖2g/kg,尾静脉采血,用快速血糖测定仪测定0、0.5、1及2小时血糖值。
(5)空腹血糖、血清TC、TG、HDL-c及Ins实验结束时,股静脉采血,分离血清,取其一部分送昆明医学院附属一医院检验科测定(全自动生化仪测定),同时自己按试剂盒说明书手工测定血糖、血清TC、TG(7230分光光度计比色)。
(6)腹腔脂肪及睾丸脂肪垫湿重 大鼠取血后解剖,分离腹腔脂肪及睾丸脂肪垫,置于滤纸上吸去组织液,用电子天平称重并记录。
1.1.5.统计方法 用PEMS(Package for Encyclopaedia of MedicalStatistics,华西医科大学公共卫生学院编。)处理实验数据。多组均数及两两比较用单因素方差分析和q检验。
1.2试验情况
1.2.1.一般情况 除II组1号鼠和V组7号鼠死亡(死亡原因祥见一般情况观察记录表)以及VI组大鼠进食阳性药饲料少(由于该组大鼠每次均不能进食完给予的阳性药高热量饲料,因此不能真实反映药物的作用,故剔除实验。)外,其余各鼠未见异常。
1.2.2.0~4周末各组大鼠体重变化情况见表1~表5以及图1。表1显示,各组大鼠实验前体重无差异,因此各组体重具有可比性。由表2可以看出,实验进行到一周末时,各组大鼠体重无显著性差异,但各组大鼠体重均呈现不同程度下降,分析其原因主要为环境和生活方式的突然改变所致。表3显示,实验2周末藕渣组体重已明显高于空白组(高出7.1%,P<0.05),模型组、藕节组及藕芽组分别高出空白组4.6%、3.9%和1.6%,但无显著性差异。从体重增值和体重增加百分率看,模型组最大,明显高于空白组(P<0.05),其余依次是藕渣组、藕节组和藕芽组,但与空白组无性差异,而藕芽组明显低于模型组(P<0.05)。此结果表明,该高热量饲料可使400多克的成年大鼠体重增幅加大,故继续喂养这种饲料可能使大鼠发生肥胖。藕渣无明显阻止高热量饲料导致的体重过度增长的作用,藕节此时作用也不明显,藕芽似乎有一定的作用。表4显示,实验进行到3周末时,模型组和藕渣组体重均明显高于空白组(分别高出9.7%和10.3%,p<0.01),而藕节组和藕芽组与空白组无显著性差异(分别高出4.3%和4.0%,p>0.05)。从体重增幅看,模型组最大(与空白组比较p<0.01),其次是藕渣组(与空白组比较p<0.05),藕节组和藕芽组相近,略高于空白组,但无显著性,而二者均明显低于模型组(p<0.01),也低于藕渣组(p<0.05)。此结果说明,进食该高热量饲料可使400多克的成年大鼠体重明显高于进食普通饲料的同龄大鼠,藕渣无明显阻止高热量饲料导致的体重过度增长的作用,而藕节和藕芽均有较明显作用。表5显示,实验进行到4周末时,模型组和藕渣组体重更进一步超出空白组(分别高出12.3%和12.5%,p<0.01);藕节组和藕芽组与空白组对照,情形与上周相似(分别高出4.5%和4.7%,p>0.05),而与模型组和藕渣组比较,体重明显降低(均p<0.01)。此周体重增幅各组均较前两周减小,但模型组相对增幅更大。此结果进一步说明,进食该高热量饲料可使400多克的成年大鼠体重明显高于进食普通饲料的同龄大鼠,藕渣无明显阻止高热量饲料导致的体重过度增长的作用,而藕节和藕芽均有较明显作用。
从图1可以看出,藕节组和藕芽组较接近空白组,特别在实验后期,藕节组更趋向空白组。模型组和藕渣组却呈现体重不断高于空白组的趋势,尤其是模型组这种趋势更明显。说明该高热量饲料可使400多克的成年大鼠体重进行性过度增加,最后体重明显大于进食普通饲料的同龄大鼠;藕节和藕芽对这种作用趋势均有较明显的阻止作用,藕节似乎潜力更大;藕渣无阻止作用。
1.2.3各组大鼠血糖(Glu)、血胰岛素(Ins)和胰岛素敏感性指数(ISI)见表6。表6显示,藕渣组和藕芽组血糖明显高于空白组(分别p<0.01和p<0.05),模型组血糖值也较高,但与空白组无显著性;藕节组血糖较低,明显低于藕渣组(p<0.05)。除藕节组外,各实验组血Ins均明显高于空白组(均p<0.01),同时ISI均明显低于空白组(均p<0.01),而藕节组ISI与空白组差距较小(p<0.05),却明显高于其它各实验组(均p<0.01)。此结果说明,该肥胖模型产生了高胰岛素血症,有明显外周胰岛素抵抗(IR);藕渣、藕节和藕芽中,唯有藕节能阻止高热量食物造成的高胰岛素血症的形成,明显减轻了外周IR。
4各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)见表7。表7显示,模型组TC明显高于空白组(p<0.01),其它各实验组也明显高于空白组(p<0.01),与模型组无显著性。模型组TG也较高,但与空白组无显著性差异;藕渣组TG明显高于空白组(p<0.01);藕节组TG最低,明显低于藕渣组(p<0.01);藕芽组也较藕渣组低(p<0.05)。模型组HDL-c与空白组无显著性差异,而藕渣组、藕节组和藕芽组HDL-c均明显高于空白组。此结果表明,该肥胖模型有血脂异常,表现在血TC明显升高,血TG也有升高趋势;藕节有阻止血TG升高的作用趋势,藕渣不能阻止血TG升高,藕芽的作用尚不能肯定。藕节、藕芽和藕渣均无明显阻止TC升高的作用,但相对来说,藕节似乎略有一点作用趋势。藕节、藕芽和藕渣均有升高血HDL-c的作用。
5.各组腹腔内脂肪重量及脂肪指数见表8。
表8显示,模型组腹腔内脂肪重量及脂肪指数有明显增高的趋势;藕渣组已明显高于空白组(p<0.01);藕节组和藕芽组有低于模型组和藕渣组的趋势。
1.3小结
1.3.1对肥胖大鼠模型的评价
肥胖模型的造模方法通常有两种:营养性肥胖模型和下丘脑性肥胖模型。前者系用刚断乳的SD大鼠,喂高营养饲料(基础饲料加奶粉,鸡蛋,猪油,维生素AD及新鲜黄豆芽等)一段时间(45天),体重明显超过喂基础饲料的同龄大鼠。此种模型是用幼龄大鼠,生长正处于旺盛期,对营养需求大,给予富含蛋白质、脂肪和各种维生素的高营养饲料,其生长发育自然会超前,表现为体重明显增加,与儿童肥胖较为接近,是否伴有与肥胖相关的其它病理生理改变,如血脂异常、IR及葡萄糖耐量异常等,未见文献详细报道,但从大鼠的生长阶段(生长发育旺盛期)与提供的营养配方(营养丰富而全面,热卡高)分析,估计这种肥胖模型的上述肥胖相关病理改变至少不会突出,因此与临床上占多数的肥胖或超重患者的实际情况有较大出入。本实验模型也属于营养性肥胖模型,所用大鼠444g左右,已过了生长发育旺盛期,与成年人相当,所用造模饲料为基础饲料加多量的猪油,蔗糖和鸡蛋等,热卡高而营养不均衡,较接近临床肥胖及肥胖相关疾病如2型糖尿病的饮食发病因素。本实验结果显示,基础饲料组大鼠体重增加缓慢,而高热量饲料组大鼠体重进行性增加,在较短的时间里(28天)体重明显高于基础饲料组大鼠,同时伴有明显的高胆固醇、高甘油三酯和高胰岛素血症,ISI明显降低,葡萄糖耐量也有降低趋势(因OGTT试验操作失误,结论力度有限。)、腹腔脂肪和脂肪指数也有增高趋势(因操作欠严密,结论力度也有限。)。此结果表明,该肥胖大鼠模型较类似临床上多数成人肥胖,故可作为研究减肥药的更为合适的模型。
1.3.2.藕节或藕芽减肥效果的评价
有人用加工藕粉废弃的藕渣、藕节和藕芽混合加在饲料中喂养动物(猪或大鼠等),发现动物越来越瘦,或者只长瘦肉不长脂肪,动物精神、食欲及体力良好,无病态。为了证实藕渣、藕节或藕芽是否有减肥作用,本实验将藕渣、藕节和藕芽分别干燥打成细粉,拌入高热量饲料中喂养三组大鼠(相当于三组大鼠分别给予藕渣、藕节和藕芽粉7g/只/日)进行比较,同时以单纯喂养高热量饲料的大鼠和喂养基础饲料的大鼠作为对照。结果发现,藕渣组大鼠体重增幅较大,与模型对照组较接近,最后体重与模型组相当,明显高于藕节组和藕芽组;藕节组和藕芽组体重增幅明显低于藕渣组和模型对照组而与空白组较接近,最后体重明显低于藕渣组和模型对照组,与空白组无显著性差异。此结果说明,藕渣无阻止高热量食物致肥胖的作用,藕节和藕芽均有阻止高热量食物致肥胖的作用。对腹腔脂肪组织的影响,情况与上述类似。
肥胖不单纯是体重或脂肪增加的问题。临床上,肥胖者多有糖、脂代谢紊乱,IR是肥胖的重要病理生理基础,也是肥胖者易患2型糖尿病、高血压、高脂血症及缺血性心脏病的重要危险因素。因此考察药物的减肥疗效,不仅要以体重和脂肪为指标,也要同时考察药物对上述病理生理改变的影响。本实验结果表明,模型对照组大鼠血清Ins明显升高,ISI明显降低,即产生了明显IR,同时伴有血清TC明显升高,TG也有升高的明显趋势;藕渣组和藕芽组上述指标与模型组基本相同,唯有藕节组血清Ins明显低于模型组,ISI明显高于模型组,即IR减轻,同时血清TG不高,再回过头看对体重的影响,与藕芽组相比,藕节组体重增加趋势到后期越接近空白组。以上说明,藕节对阻止高热量食物致肥胖比藕芽有更全面的作用。
小结:该配方高热量饲料,可使成年大鼠发生肥胖并伴有血脂异常和IR;藕节和藕芽均可阻止该高热量饲料导致的大鼠体重过度增加,并有减少腹腔内脂肪量的作用趋势;藕节还可减轻该肥胖大鼠模型的IR并有阻止其TG升高的作用趋势。含淀粉相对较多的藕节减肥效果最佳,这就可排除藕渣、藕节和藕芽由于各自热卡的不同对减肥效果比较的影响。
实施例2
-藕节提取物对营养性肥胖大鼠的影响
2.1材料与方法
2.1.1药物及其制备
藕节水煎浸出物:取干燥藕节适量,粉碎至黄豆大小的颗粒,加6~10倍量的清水,加热煮沸后,小火煎煮30~40分钟,趁热过滤,药渣如此再提取一次,合并提取液,减压浓缩,真空干燥,含水量6%,密封保存,备用
藕节乙醇回流浸出物:取干燥藕节适量,粉碎至20目颗粒,加6~10倍量的30%~90%乙醇,水浴加热回流1小时,趁热过滤,药渣如此再提取一次,合并提取液,减压浓缩,回收乙醇,真空干燥,含水量5%,密封保存,性差异;与模型组相比,四个给药组体重均明显降低(p<0.01);水煎组和回流组的Lee’指数高于空白组(p<0.05),而生粉组和冷浸组与空白组无显著性差异;与模型组相比,生粉组和冷浸组的Lee’指数较低(p<0.01)。四个给药组的脂肪系数均与空白组无显著性差异,其中以模型组最靠近空白组。此结果说明,藕节生药粉、藕节水浸出物、藕节乙醇回流浸出物以及乙醇冷浸浸出物均有阻止高热量饲料引起的大鼠体重过度增加以及腹腔脂肪增多的作用,其中似乎以乙醇冷浸浸出物效果最好,其次是藕节生粉,藕节水浸出物和藕节乙醇回流浸出物效果相当。
2.2.3三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠血糖、胰岛素(Ins)及ISI的影响,见表10。表10显示,模型组空腹血糖较空白组高(p<0.05),其余各组与空白组无显著性差异。模型组血Ins明显高于空白组(p<0.01);四个给药组中,只有水煎组稍高于空白组(p<0.05);与模型组相比,四个给药组血Ins均较低(p<0.05,p<0.01),其中以冷浸组最低(p<0.01)。模型组ISI明显降低,四个给药组中,生药组、水煎组和回流组的ISI都有降低,以回流组更低(p<0.01),冷浸组与空白组无显著性差异;与模型组相比,四个给药组的ISI都有所回升,以生粉组和冷浸组回升更多。此结果说明,藕节生药粉、藕节水浸出物、藕节乙醇回流浸出物以及乙醇冷浸浸出物均有阻止高热量饲料引起的大鼠血糖和血Ins升高,改善其IR的作用,其中似乎以乙醇冷浸浸出物效果最好,其次是藕节生粉,藕节水浸出物和藕节乙醇回流浸出物效果相当。
2.2.4三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠血清TC、TG和HDL-c的影响,见表11。
表11显示,模型组TC明显升高(p<0.01),四个给药组也明显升高(p<0.01),与模型组相比无明显降低。模型组TG明显升高(p<0.01),四个给药组升高不明显(p>0.05),其中以生粉组和冷浸组更接近空白组。模型组HDL-c较空白组低(p<0.05),四个给药组均较模型组高,以生粉组和冷浸组更高(p<0.01),均与空白组无显著性差异。此结果说明,藕节生药粉、藕节水浸出物、藕节乙醇回流浸出物以及乙醇冷浸浸出物对高热量饲料引起的大鼠血清TC升高无明显阻止,而对其血清TG升高和HDL-c降低有阻止作用。其中似乎以藕节生粉和乙醇冷浸浸出物效果较好,藕节水浸出物和藕节乙醇回流浸出物效果相当。
2.3小结
实施例2重复了实施例1的造模方法,不同的是实施例周期延长了一周,结果显示,该模型体重、Lee’指数和腹腔脂肪量都更进一步超过正常大鼠,同时空腹血糖高出空白组大鼠,血Ins明显升高,ISI明显降低,血TC和TG明显升高,HDL-c降低,说明该营养性肥胖大鼠模型明显重复性很好,是研究肥胖和IR以及相关病理生理紊乱的较为理想的动物模型。
实施例2依据临床用药的经验和习惯,用几种常用提取方法,即水煎、65%乙醇热回流及65%冷浸提取藕节总成分,制得干浸膏粉,给予大鼠口服,进行药效比较,并设立了原生药粉对照组。结果显示,三种浸出物对阻止高热量饲料引起成年大鼠体重过度增加,Lee’指数增大及腹腔脂肪增多均有作用,同时对阻止空腹血糖和血Ins升高及改善IR均有一定效果,对TG升高和HDL-c降低也有一定阻止作用,对TC的升高,如同藕节生粉一样,阻止作用不明显。与藕节生粉相比,65%乙醇冷浸提取物与其效果相当或更优,水煎或65%乙醇热回流提取物效果稍逊。
实施例3
-藕节组合物对营养性肥胖大鼠的影响
3.1材料和方法
3.1.1药品①藕节冷浸提取物冷干粉(制备方法如实验2);②三七提取物(三七总皂甙:三七总皂甙含量88%,Rb1>30%,Rg1>20%;三七叶皂甙:含甙元以原人参二醇计算含量32%);③绿茶提取物(茶多酚40%,儿茶素25%,EGCG25%,咖啡因<5%)备用。
藕节乙醇冷浸浸出物:取干燥藕节适量,粉碎至20目颗粒,加6-10倍量的30%-90%乙醇,于室温下浸渍24小时,过滤,药渣另加上述浓度的乙醇,如此再提取两次,合并提取液,低温减压浓缩,回收乙醇,真空干燥,含水量5%,密封保存,备用。
藕节生药粉:制备方法同实施例1。
2.1.2动物分组及造模给药
SD雄性大鼠,体重434±17克,由本院动物室提供。随机分为空白组、模型组、水煎浸出物组(水煎组)、乙醇回流浸出物组(乙醇回流组)、乙醇冷浸浸出物组(乙醇冷浸组)和藕节生粉组(生粉组)。每组8只,单笼饲养。造模方法同实验1,即空白组给予基础饲料,其余各组给予高热量饲料,用量同前。自由饮水。
在造模的同时,于每日上午9时灌胃给药。上述三种浸出物粉末的用量均为实验1原生药材2倍量的提取物,即水煎组2.4g/kg,乙醇回流组1.92g/kg,乙醇冷浸组1.32g/kg,均用相同体积的蒸馏水稀释后灌胃。空白组、模型组和生粉组用相当体积的蒸馏水灌胃。生粉组给药方式同实施例1,实验周期为35天。
2.1.3观察指标与方法 同实施例1
2.1.4统计方法 同实施例1
2.2试验情况
2.2.1一般情况 各组大鼠在整个实验过程中精神、食欲、皮毛及大便等均正常。
2.2.2三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠体重、Lee’s指数及脂肪系数的影响,见表9。表9显示,实验末模型组大鼠体重、Lee’指数及脂肪系数均明显高于空白组(p<0.01)。四个给药组中,生粉组、水煎组和回流组体重仍高于空白组(前者p<0.05,后二者p<0.01),冷浸组与空白组无显著
3.1.2动物分组与造模给药
SD雄性大鼠,体重435±16g,由本院动物室提供。随机分为空白组,模型组,藕节乙醇冷浸提取物冷干粉组(藕节单方组),藕节乙醇冷浸提取物冷干粉加三七提取物组(藕节复方1组),藕节乙醇冷浸提取物冷干粉加绿茶提取物组(藕节复方2组)和藕节乙醇冷浸提取物冷干粉加三七提取物加绿茶提取物组(藕节复方3组)。每组8只,单笼饲养。空白组给予基础饲料,其余各组给予高热量饲料造模(方法同前两次实验)。各大鼠自由饮水。
在造模的同时,于每日上午9时灌胃给药:藕节单方组给予藕节冷浸提取物冷干粉1.32g/kg;藕节复方1组给予藕节冷浸提取物冷干粉1.32g/kg+三七皂甙和三七叶甙各0.066g/kg;藕节复方2组给予藕节冷浸提取物冷干粉1.32g/kg+茶多酚0.132g/kg;藕节复方3组给予藕节冷浸提取物冷干粉1.32g/kg+三七皂甙和三七叶甙各0.066g/kg+茶多酚0.132g/kg。以上各药用同体积的蒸馏水稀释后灌胃。空白组和模型组用相同体积的蒸馏水灌胃,给药连续28天。
3.1.3观察指标与方法
一般情况 精神,食欲,毛发,活动及大便。
体重体长和Lee’指数 体重每周测一次,实验末测体长(大鼠鼻尖至***的长度,单位为厘米)。Lee’指数=体重(g)/体长(cm2)。
葡萄糖糖耐量 大鼠禁食6小时,腹腔注射葡萄糖2g/kg,测定0′,30′,60′和120′血糖值。
空腹血糖,Ins和血脂(包括TC,TG,LDL-c和HDL-c),并计算动脉硬化指数AI(AI=TC/HDL-c)和冠心指数R-CHR(R-CHR=LDL/HDL-c)。
体内脂肪重量 腹腔内脂肪等,换算成腹腔脂肪g/体重100g。
脂肪细胞大小和数量 取生殖器周围同一部位的脂肪一小块,用2.5%甲醛乙醇液固定,石蜡切片,在400倍显微镜下计数全视野中脂肪细胞个数,并用测微器测量脂肪细胞的大小。
血清SOD及LPO
血液粘度
3.1.4统计方法 同实施例1。
3.2试验情况
3.2.1一般情况 整个实验过程中,各组大鼠一般情况好,未见异常。
3.2.2藕节复方对营养性肥胖大鼠体重和Lee’s指数的影响,见表12。
表12显示,实验初各组大鼠体重无差异。实验末模型组大鼠体重明显超过空白组(p<0.01);四个给药组中,单方组、复方1组及复方2组也高于空白组(p<0.01,p<0.05),以复方2组高出的幅度相对较小(p<0.05),复方3组与空白组无差异。与模型组相比,四个给药组体重均较低(p<0.01);与单方组相比,只有复方3组体重较低(p<0.05)。各组体长无显著差异。模型组的Lee’s指数明显高于空白组(p<0.01);四个给药组与空白组无明显差异;与模型组相比,四个给药组的Lee’s指数较小(p<0.01),以复方3组最小。此结果说明,这四种配方对高热量饲料引起的体重过度增加和Lee’s指数的增大均有阻止作用,其中以复方3效果最佳,其次是复方2,复方1同单方效果相当。
3.2.3藕节组合物对营养性肥胖大鼠体脂及脂肪细胞的影响,见表13。
表13显示,模型组大鼠的腹腔脂肪明显多于空白组(p<0.01);四个给药组中,只有单方组和复方1组高于空白组(p<0.05);复方3组最接近空白组。模型组大鼠的脂肪细胞数量明显低于空白组(p<0.01);四个给药组中,只有单方组和复方1组低于空白组(p<0.05,p<0.01);与模型组相比,四个给药组脂肪细胞数量均较多;与单方组比较,复方2组和复方3组脂肪细胞数量较多(p<0.05,p<0.01),以复方3组最多,而最接近空白组。模型组脂肪细胞的直径明显大于空白组(p<0.01);四个给药组也大于空白组,但复方2组和复方3组与空白组的差距相对较小(p<0.05);四个给药组脂肪细胞直径均明显小于模型组(p<0.01);复方3组明显小于单方组(p<0.01)。此结果说明,这四种配方对高热量饲料引起的腹腔脂肪增加,脂肪细胞的肥大以及由此引起的脂肪细胞数量减少都有阻止作用,其中以复方3效果最好,其次是复方2,复方1与单方相当。
3.2.4藕节复方对营养性肥胖大鼠血脂的影响,见表14。表14显示,模型组血清TC明显升高(p<0.01);四个给药组中,单方组仍明显高于空白组(p<0.01),复方1组和复方2组略高于空白组(p<0.05),复方3组与空白组无明显差异;三个复方组都低于模型组(p<0.05,p<0.01)。模型组血清TG也升高(P<0.05);四个给药组均低于模型组(p<0.05),与空白组无显著性差异。模型组LDL-c明显升高(p<0.01);单方组也明显升高(p<0.01),其余三个给药组未明显升高。模型组HDL-c降低(p<0.05);四个给药组均较模型组高(p<0.05),与空白组无差异。此结果说明,藕节单方对高热量饲料引起的大鼠血清TC升高无明显阻止作用,复方1和复方2有一定效果,复方3效果最佳。这四种配方对该模型的血清TG升高都有阻止作用。藕节单方对该模型血清LDL-c的升高无明显阻止作用,但三个复方都有阻止作用。这四种配方都可阻止该模型血清HDL-c的降低。
3.2.5藕节复方对营养性肥胖大鼠动脉硬化指数(AI)和冠心指数(R-CHD)的影响,见表15。表15显示,模型组大鼠的动脉硬化指数明显升高(p<0.01);四个给药组均与空白组无显著性差异,其中复方1组和复方3组低于模型组,更接近空白组。模型组冠心指数明显高于空白组(p<0.01),四个给药组中,单方组仍明显高于空白组(p<0.01),复方2组略高于空白组(p<0.05);四个给药组均明显低于模型组(p<0.01)。三个复方组又都低于单方组(p<0.05,p<0.01),以复方3最低(p<0.01)。此结果说明,这四种配方对该模型动脉硬化指数的升高和冠心指数的升高均有阻止作用,其中复方3效果最佳,其次是复方1,复方2再次之,单方最次。
3.2.6藕节复方对营养性肥胖大鼠葡萄糖耐量的影响,见表16。表16显示,各组空腹血糖,以模型组较高,但无显著性差异。糖负荷后各个时间点模型组血糖值都明显升高;单方组、复方1组和复方2组糖负荷后各个时段血糖也高于空白组,只有复方3组接近空白组。但与模型组相比,各个给药组糖负荷后各个时间点血糖较低(均p<0.01)。复方3组糖负荷后各个时段血糖明显低于单方组(p<0.01),复方1组和复方2组在糖负荷后120分钟低于单方组(p<0.05)。此结果说明,这四种配方对高热量饲料引起的大鼠葡萄糖耐量降低都有一定的阻止作用,其中复方3效果明显,复方1和复方2有一定作用,单方作用相对较弱。
3.2.7藕节复方对营养性肥胖大鼠血糖,Ins和ISI的影响,见表17。表17显示,各组空腹血糖无显著性差异,但模型组空腹血清Ins明显升高(p<0.01);四个给药组空腹血清Ins均明显低于模型组(p<0.01),与空白组无显著性差异。模型组的ISI明显低于空白组(P<0.01);四个给药组中,单方组、复方1组和复方2组ISI仍低于空白组(p<0.05),复方3组接近空白组,与其无显著性差异;四个给药组均明显高于模型组。此结果说明,这四种配方均可阻止高热量饲料引起的血浆Ins升高,从而减轻机体胰岛素敏感性的降低,以复方3效果最佳,其余三种效果相近。
3.2.8藕节复方对营养性肥胖大鼠血粘度的影响,见表18。表18显示,模型组大鼠血浆粘度明显增大(p<0.01)。四个给药组血浆粘度均较模型组小,以三个复方组更小(p<0.01);单方组和复方2组尚大于空白组(p<0.01,p<0.05);复方1组和复方3组均明显小于单方组。模型组红细胞压积大于空白组(p<0.05),四个给药组与空白组无显著性差异,其中,复方3组最靠近空白组。此结果说明,这四种对该模型血浆粘度的增大均有阻止作用,其中以复方3和复方1效果最佳,其次是复方2,单方效果较弱。对红细胞压积的影响,情形相似。
3.2.9藕节复方对营养性肥胖大鼠SOD和LPO的影响,见表19。表19显示,模型组的血浆SOD明显降低(p<0.01),四个给药组降低不明显,以复方3组和复方2组更接近空白组。模型组血浆LPO明显增高(p<0.01);四个给药组均明显低于模型组(p<0.01);除单方组仍高于空白组(p<0.01)外,三个复方组均与空白组无显著性差异,以复方3组最靠近空白组,其次是复方2组;三个复方组均低于单方组(P<0.05,p<0.01),以复方2组和复方3组更低(p<0.01)。此结果说明,这四种配方对该模型血浆SOD的降低和LPO的升高均有阻止作用,其中以复方3和复方2效果最佳,其次是复方1,单方效果较弱。
3.3小结
实施例3使用已证明重现性很好的成年营养性肥胖大鼠模型,考察了藕节单用与藕节配伍三七提取物三七总甙等和绿茶提取物茶多酚,对该模型体重、腹腔脂肪、脂肪细胞大小和数量,糖耐量,胰岛素抗性,血脂、血液粘度及脂质过氧化等多方面的影响。结果显示,藕节单用对上述指标,除血清TC外,都有一定程度的改善作用,但在减少腹腔脂肪量,调节血脂,改善血液粘度,以及抗动脉硬化,抗氧化方面作用较弱。配伍三七总甙,使血清TC和血液粘度降低更明显,AI和R-CHD也更小;配伍茶多酚,使腹腔脂肪量和脂肪细胞数量及大小更接近正常,并且使SOD活性增强,LPO降低。同时配伍三七总甙和茶多酚,则上述各指标都趋于正常。
三七及其主要有效成分之一三七总甙是研究较多的一种中药和天然化学物质,大量研究表明,三七皂甙和叶甙有较好的调节血脂、降低血液粘度及保护血管内皮细胞功能的作用。肥胖症患者常伴有高脂血症和血液粘度增高,动脉硬化的发病率明显高于非肥胖者。本实验用藕节配伍三七皂甙和叶甙,结果使该肥胖模型的血脂和血液粘度更趋于正常,说明这个配伍对肥胖症的综合治疗是必要的。
绿茶是自古以来用于减肥降脂的药食两用性植物制品,其主要成分之一茶多酚也是研究较多的一类天然化学物质。研究显示,荼多酚对高脂饲料喂养的大鼠体内和肝内脂肪堆积有明显抑制作用,并可降低血中TC;同时,茶多酚还有良好的抗氧化作用,通过其自身的氧化,抑制胆固醇的氧化,从而减少胆固醇在动脉壁上的沉积。本实验用藕节与茶多酚配伍,结果使该肥胖模型腹腔脂肪明显减少,脂肪细胞明显缩小,同时血中SOD明显升高,LPO明显下降,说明这个配伍对肥胖症的综合疗效也优于单用藕节。
本实验所用复方3为藕节提取物为主与三七根茎叶的皂甙和绿茶多酚配伍组成,结果显示,这一配伍综合了三者的优势,对该模型的影响在各方面都达到了较为理想的效果。说明藕节为主配伍三七根茎叶的皂甙和绿茶多酚,是治疗肥胖症的一个较为完美的组合物。
肥胖症是一个存在多种复杂情况的综合体,不仅是体重和脂肪增加的问题,更重要的是肥胖症患者存在明显的IR以及糖、脂代谢紊乱,正是这些病理生理紊乱,使肥胖者常合并存在2型糖尿病,血脂异常,高血压以及动脉硬化性心脑血管病等严重疾病,使肥胖人群的平均寿命低于非肥胖人群。本研究发明的这种新型组合物,其主要组分藕节,不仅有较好的减肥作用,重要的是它具有明显改善IR的特殊作用。IR是肥胖者发生糖、脂代谢紊乱和易患上述重大疾病的病理生理基础,因此,藕节及其提取物作为组方的主要组分,对于肥胖症的治疗和预防,有着不可替代的重要作用。配伍茶多酚和三七根茎叶皂甙,使组方在消除体内多余脂肪,调节血脂,改善血液粘度及保护动脉管壁等方面作用更强,见效更快,使该组方既抓住了肥胖症的中心环节-IR,从根本上对其治疗,又发挥了配伍的优势,兼顾了肥胖症多种复杂的病理生理紊乱。因此,该组合物对肥胖症本身及其多种并发症的治疗和预防都应该有较好的效果。
有益效果:
综上所述,本发明通过深入***的研究,对寻找能全面改善IR及其相关疾病群的安全有效的药物取得了实质性的突破。本发明以天然藕节为主要原料,来源广泛,无毒副作用,物美价廉,寻常百姓乐于接受,从而为千千万万患者造福。本发明提供的藕节组合物,配伍茶多酚和三七根茎叶皂甙,使组方在消除体内多余脂肪,调节血脂,改善血液粘度及保护动脉管壁等方面作用更强,见效更快,使该组方既抓住了肥胖症的中心环节-IR,从根本上对其治疗,又发挥了配伍的优势,兼顾了肥胖症本身存在或伴发的多种复杂的病理生理紊乱。因此,该组合物对肥胖症本身及其引发的2型糖尿病、高血压、高脂血症及心脑血管病的治疗和预防都具有出人意料的良好效果。
表1.第0周各组大鼠体重情况
X±SD
组别 | 动物数n |
体重(g) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
444.0±13.1442.0±20.8443.8±19.3443.0±19.0444.3±16.1 |
均p>0.05
表2.第一周末各组大鼠体重变化情况
X±SD
组别 |
动物数n |
体重(g) |
体重增长(g) |
体重增长率(%) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
420.5±17.0424.3±29.2442.3±18.3432.0±13.5426.0±12.3 |
-23.5±5.4-13.7±14.9-1.5±6.0**-11.0±10.0-18.3±11.4 |
-0.053±0.013-0.032±0.035-0.003±0.013**#-0.024±0.021-0.041±0.025 |
续表
方差分析 |
P=0.185 |
P=0.008 |
P=0.0014 |
Q检验,与空白组相比:**P<0.01;
与模型对照组相比:△P<0.05。
与藕芽组相比:#P<0.05,##P<0.01
表3.第二周末各组大鼠体重变化情况
X±SD
组别 |
动物数n |
体 重(g) |
体重增长(g) |
体重增长率(%) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
438.0±13.8458.3±28.1469.0±17.9*455.3±19.3445.5±19.7 |
17.5±8.334.0±8.6*26.8±6.323.3±12.919.5±12.3△ |
4.2±2.18.1±2.2*6.1±1.55.4±3.04.6±2.9△ |
方差分析 | |
P=0.0216 |
P=0.0211 |
P=0.0318 |
Q检验,与空白组相比:*P<0.05;
与模型对照组相比:△P<0.05。
表4.第三周末各组大鼠体重变化情况
X±SD
组别 |
动物数n |
体重(g) |
体重增长(g) |
体重增长率(%) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
444.5±17.8487.7±29.6**491.3±18.0**464.3±19.7#463.4±21.0 |
6.5±4.625.8±13.4**20.0±8.9*9.0±3.9△△#10.3±8.8△# |
1.5±1.06.4±2.0**4.3±1.9**△2.0±0.8△△#2.6±2.0△△# |
方差分析 | |
P=0.0007 |
P=0.0003 |
P=0.0000 |
Q检验,与空白组相比:*P<0.05,**P<0.01;
与模型对照组相比:△P<0.05, △△P<0.01;
与藕芽组相比:#P<0.05,##P<0.01。
表5.第四周末各组大鼠体重变化情况
X±SD
组别 |
动物数n |
体重(g) |
体重增长(g) |
体重增长率(%) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
446.8±15.2501.7±31.7**503.3±17.1**467.3±23.4△△##468.0±21.9△△## |
2.2±6.814.0±6.2*9.2±5.83.0±6.0△4.6±9.2△ |
0.54±1.592.86±1.24*1.90±1.220.62±1.3△1.00±1.97 |
方差分析 | |
P=0.0000 |
P=0.0117 |
P=0.032 |
Q检验,与空白组相比:*P<0.05,**P<0.01;
与模型对照组相比:△P<0.05;
与藕芽组相比:##P<0.01。
表6.各组血糖、胰岛素(Ins)、胰岛素敏感性指数(ISI)比较
X±SD
组别 |
动物数n | GLU(mmol/l) | Ins(mIU/L) | ISI |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
4.55±0.585.25±0.776.20±0.98**5.02±0.54#5.79±0.88* |
36.98±6.0968.77±12.09**64.06±7.40**47.70±23.35#62.65±13.91** |
-5.108±0.1736(1.000)-5.909±0.2366**(0.8645)-5.969±0.2412**(0.8559)-5.442±0.3068*△△##(0.9386)-5.904±0.2603**(0.8653) |
方差分析 | |
P =0.0008 |
P =0.0000 |
P=0.0000 |
Q检验,与空白组相比:*P<0.05,**P<0.01;
与模型对照组相比:△P<0.05,△△P<0.01;
与藕芽组相比:#P<0.05,##P<0.01。
注:ISI=In1/Glu×Ins,括号中数字为相对值。
表7.各组血清TC、TG、HDL-C比较
X±SD
续表
组别 |
动物数n |
TC(mmol/l) |
TG(mmol/l) |
HDL-C(mmol/l) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
1.67±0.292.44±0.40**2.72±0.43**2.41±0.31**2.73±0.67** |
1.62±0.642.59±1.213.75±1.77**1.54±1.04##2.12±1.33# |
0.76±0.120.98±0.161.17±0.19**1.10±0.12**1.38±0.31**,△△ |
方差分析 | |
P=0.0000 |
P=0.0007 |
P=0.0000 |
Q检验,与空白组相比:**P<0.01;
与模型对照组相比:△P<0.05。
与藕芽组相比:##P<0.01。
表8各组脂肪重量、脂肪指数的比较
X±SD
组别 |
动物数n |
脂肪重量(g) |
脂肪指数(g/100g) |
空白组模型对照组藕渣组藕节组藕芽组 |
87887 |
10.58±2.5216.47±5.8818.06±4.08**15.30±3.5814.90±5.37 |
2.36±0.533.27±1.053.60±0.843.26±0.663.15±1.02 |
方差分析 | |
P=0.0242 |
P=0.0652 |
Q检验,与空白组相比:**P<0.01。
表9.三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠体重、Lee’s指数及脂肪系数的影响
X±S
组别 |
实验初体重(g) |
实验末体重(g) |
体长(cm) |
Lee’s指数(g/cm2) |
脂肪系数(g/kg) |
空白组模型组 |
434.5±22.5434.3±19.3 |
461.4±25.6574.2±30.7** |
25.7±1.326.4±2.1 |
0.68±0.020.82±0.08** |
5.78±1.799.87±2.24** |
续表
生粉组水煎组回流组冷浸组 |
435.0±16.9434.8±21.2433.9±15.1434.7±17.2 |
496.5±28.3**△△530.3±30.1**△△528.3±29.4**△△489.7±30.0△△ |
26.2±1.826.3±1.726.3±1.226.2±1.7 |
0.73±0.05△△0.77±0.04*0.76±0.06*0.71±0.05△△ |
7.34±1.938.18±2.017.92±1.896.77±1.54△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01。
n=8
表10.三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠血糖、胰岛素(Ins)及ISI的影响
X±S
组别 |
血糖(mmol/L) |
Ins(mmol/L) |
ISI |
空白组模型组生粉组水煎组回流组冷浸组 |
4.620.515.830.69*5.140.715.330.845.280.765.020.54 |
36.785.8970.1412.13**50.0611.65△56.3413.91*△51.4815.74△45.1014.09△△ |
-5.1060.173-6.0130.324**-5.5140.192*△△-5.6910.412**△-5.6040.293*△-5.4160.231△△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01。
n=8
表11.三种藕节浸出物对成年营养性肥胖大鼠血清TC、TG和HDL-c的影响
X±S
组别 |
TC(mmol/L) |
TG(mmol/L) |
HDL-c(mmol/L) |
空白组模型组生粉组水煎组回流组 |
1.660.302.580.41**2.380.45**2.410.32**2.430.54** |
1.040.702.841.02**1.520.922.431.071.981.12 |
1.010.130.740.15*1.140.17△△0.980.29△1.060.24△ |
续表
冷浸组 |
2.310.47** |
1.681.04 |
1.220.26△△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01。n=8
表12.藕节组合物对营养性肥胖大鼠体重和Lee’s指数的影响
X±S
组别 |
实验初体重(g) |
实验末体重(g) |
体长(cm) |
Lee’s指数(g/cm2) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
436.5±16.2436.2±18.1436.8±16.9436.3±15.3436.4±17.2436.7±18.3 |
458.3±21.0569.7±28.3**513.6±33.4**△△517.2±30.0**△△503.2±31.2*△△471.3±28.3△△# |
25.5±1.226.1±2.026.1±1.826.2±1.326.1±1.426.1±1.5 |
0.69±0.030.89±0.05**0.75±0.07△△0.74±0.05△△0.73±0.06△△0.68±0.05△△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:#p<0.05
n=7
表13藕节复方对营养性肥胖大鼠体脂及脂肪细胞的影响
X±S
组别 |
腹腔脂肪(g/kg) |
脂肪细胞数目(个/HPF) |
脂肪细胞直径(μm) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
5.27±1.839.52±2.11**8.14±1.62*7.83±2.23*7.07±1.646.06±1.58△ |
126.3±11.585.4±9.1**106.5±10.4*△△98.2±8.3**△112.4±11.5△△#118.5±13.2△△## |
27.1±1.844.3±2.5**36.5±2.1**△△38.1±3.4**△△34.2±3.3*△△31.0±2.4*△△## |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:#p<0.05,##p<0.01。
n=7
表14.藕节复方对营养性肥胖大鼠血脂的影响
X±S
组别 |
TC(mmol/L) |
TG(mmol/L) |
LDL-c(mmol/L) |
HDL-c(mmol/L) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
1.54±0.252.73±0.41**2.45±0.32**2.09±0.40*△2.14±0.46*△1.93±0.52△△ |
0.92±0.642.68±1.02*1.34±1.13△1.20±0.89△1.24±0.88△1.01±0.66△ |
2.43±0.415.16±1.33**4.97±1.47**3.55±1.333.87±1.543.16±1.39 |
1.32±0.151.08±0.18*1.37±0.09△1.32±0.20△1.28±0.19△1.35±0.23△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01。
n=7
表15.藕节复方对营养性肥胖大鼠AI和R-CHD的影响
X±S
组别 |
AI |
R-CHD |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
1.17±0.372.53±0.75**1.77±0.811.48±0.69△1.56±0.721.40±0.58△ |
1.83±0.344.76±0.59**3.62±0.70**△△2.65±0.66△△#2.81±0.54*△△#2.42±0.45△△## |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:#p<0.05,##p<0.01。
n=7
表16.藕节复方对营养性肥胖大鼠葡萄糖耐量的影响
X±S
组别 |
血糖(mmol/L) |
0 |
30 |
60 |
120(min) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
5.06±0.446.02±0.865.33±0.495.41±0.915.30±0.565.09±0.53 |
11.21±0.4215.97±1.06**14.02±0.97**△△13.98±1.04**△△14.11±1.15**△△12.13±1.23△△## |
9.62±0.7616.34±1.03**14.11±1.01**△△12.76±1.21**△△11.22±1.19**△△10.87±1.17*△△## |
5.64±0.8311.74±0.94**9.83±1.12**△△8.01±0.98**△△#7.88±1.02**△△#6.64±1.14△△## |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:#p<0.05,##p<0.01.
n=7
表17.藕节复方对营养性肥胖大鼠血糖,Ins和ISI的影响
X±S
组别 |
血糖(mmol/L) |
Ins(Mu/L) |
ISI |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
4.38±0.525.44±0.765.03±0.485.21±0.835.13±0.724.79±0.55 |
36.54±5.7869.08±11.33**48.14±15.22△△46.57±12.36△△47.03±13.34△△42.35±7.83△△ |
-5.142±0.164-6.083±0.214**-5.504±0.204*△△-5.493±0.291*△△-5.481±0.128*△△-5.301±0.172△△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01。
n=7
表18.藕节复方对营养性肥胖大鼠血粘度的影响
X±S
组别 |
血浆粘度(厘泊) |
红细胞压积(%) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
1.32±0.092.26±0.17**1.98±0.34**△1.35±0.28△△##1.77±0.21*△△1.34±0.31△△## |
34.12±2.0137.85±1.98*35.87±2.1534.35±1.7935.76±2.4334.19±2.03△ |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:##p<0.01。
n=7
表19藕节复方对营养性肥胖大鼠SOD和LPO的影响
X±S
组别 |
SOD(u/g) |
LPO(nmol/ml) |
空白组模型组单方组复方1组复方2组复方3组 |
17.31±1.9412.35±2.01**14.83±1.99△15.02±2.3516.04±2.51△16.98±1.84△△ |
0.69±0.122.74±0.45**1.58±0.37**△△1.16±0.23△△#0.98±0.32△△##0.81±0.14△△## |
与正常组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:△p<0.05,△△p<0.01;
与单方组比较:#p<0.05,##p<0.01。
n=7