JP4847712B2 - アカシア属樹皮由来物を含有する抗酸化組成物 - Google Patents

Description

本発明は、アカシア属（Acacia）に属する樹木に由来する、抗酸化組成物、並びにこの抗酸化組成物の食品、動物用飼料、医薬、及び医薬部外品としての用途に関する。

一般的に大気中において、酸素は三重項酸素と呼ばれる安定な物質である。その酸素の一部が、生体内でスーパーオキシドやヒドロキシラジカル、一重項酸素、過酸化水素などの活性酸素と呼ばれる反応性の高い物質に変化すると、その一部が好中球やマクロファージで産生された異物に対する生体防御の役割を担う一方で、活性酸素が過剰に生体内に存在すると、脂質、タンパク質、酵素、核酸等を攻撃し、生体膜や組織などを損傷し、動脈硬化症、脳血管障害、肺気腫、リウマチ性関節炎、白内障、高血圧症、老人性痴呆症、アルツハイマー病、又はシミ・ソバカス若しくは老化などの発症の原因にもなることが明らかにされている。

従来からこれらの過剰な活性酸素による酸化ストレスが引き起こす上述のような各種疾病を予防するために、出発物質であるスーパーオキシド（０_２ ⁻）を不均化して過酸化水素と酸素分子を生じる反応を触媒する酵素であるスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）と類似する働きをするＳＯＤ様物質や、活性酸素を捕捉する物質（活性酸素消去活性物質）を食品へ添加する抗酸化物質の探索が広く行われてきた。

例えば、このような物質としては、天然物由来の物質では脂溶性のα−トコフェロール（ビタミンＥ）や水溶性のアスコルビン酸（ビタミンＣ）が挙げられ、合成物質ではＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）、ＴＢＨＱ（第三級ブチルヒドロキノン）等のフェノール性物質がある。
しかしながら、これらの物質は食品の抗酸化物質として一般的には使用されているものの、生体への活性酸素消去作用が十分ではなく、特に合成物質のＢＨＡでは発癌性の疑いが生じる等の問題もでてきている。

そこで、近年、動植物などの天然物から安全性の高い活性酸素消去活性物質を探索する研究開発が盛んに行われており、例えば、特許文献１、２、３、４、及び５などがある。また、実際に製品化まで進んだものとしては、特に、茶葉、カカオ豆エキスから抽出されるカテキン類、ブルーベリー果皮に含有されるアントシアニン系化合物、発酵大豆中から得られるイソフラボン類等、ポリフェノール系化合物が非常に高い活性酸素消去効果があることで注目を集めている。

これらの活性酸素消去効果が高いことが明らかになってきたポリフェノール系化合物の中でも特に茶葉に含まれる（−）エピガロカテキン、（−）エピガロカテキン−３−ガレート、（−）エピカテキン、（−）エピカテキン−３−ガレート、（＋）カテキンなど、フラバン−３−オールを基本骨格とするフラバノールであるカテキン類が、他のポリフェノール類よりも高い活性酸素消去効果があることがわかってきた。

一方、アカシア属の一種である学名：Acacia mearnsii De Wild.の樹皮から水で抽出されるタンニンは古くから大量に南アフリカやブラジルで生産されており、一般的にはワトルタンニンと呼ばれ、主に皮なめし剤や木材用接着剤として非常に安価で利用されている。また、学名：Acacia mangium Willd.（アカシアマンギュウム）は生長が非常に早いことからも、近年、インドネシア、マレーシアを始めとする亜熱帯〜熱帯で植林が盛んになってきている。このワルトタンニンは、縮合型タンニンに分類されるものである。

最近はアカシア属の抽出物にＣＯＸ−２の選択的阻害効果（特許文献６）のあることやアカシア属の樹皮に活性酸素消去効果（特許文献７）やチロシナーゼ活性阻害効果による美白効果（特許文献８）のあることが開示されている。
しかしながら、アカシア属の樹皮や樹皮由来のポリフェノールが特定の用量にて摂取されることにより生体内で優れた抗酸化作用を発現し得ることは知られていなかった。
特開平０１−２５７２６号公報 特開平６−６５０７４号公報 特開平７−３００４２２号公報 特開平１１−５９７５号公報 特開２００１−９８２６４号公報 特表２００４−５３２８１１号公報 特開２００４−３５２６３９号公報 特開平１０−０２５２３８号公報

本発明は、安全性の高い、生体内で優れた抗酸化作用を発揮する組成物を提供する。

本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、アカシア属樹皮由来物が特定の用量にて摂取されることにより生体内で優れた抗酸化作用を発揮することを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、特定の用量にてアカシア属樹皮由来物を含有することを特徴とする、抗酸化組成物に関する。

本発明によれば、特定用量にて摂取されることにより優れた抗酸化作用を発揮できる組成物を得ることができる。
また、本発明の組成物は、長期に服用しても副作用などの心配が少なく、安全性が高い。

本発明で使用できるアカシア属樹皮由来物とは、アカシア属（Acacia）に属する樹木（以下、「アカシア」又は「アカシア属」という）の樹皮を原料として得られるものであれば特に制限されず、例えば、アカシア属の樹皮の細片、粉末及びこれらの懸濁液、アカシア属の樹皮の抽出液、濃縮抽出液、及びエキス粉末などの抽出物並びにこの抽出物を精製して得た精製物が挙げられる。優れた抗酸化活性が得られる上で、アカシア属の樹皮の抽出物、特にアカシア樹皮ポリフェノールが好ましい。
本発明では、これらアカシア属樹皮由来物を１種のみ使用してもよいし、２種以上併用してもよい。

本発明で使用できるアカシアは、アカシア属に属する樹木であれば特に制限されないが、優れた抗酸化作用があるアカシア属樹皮由来物が得られる点で、学名：Acacia mearnsii De Wild.（一般名ブラックワトル）、学名：Acacia mangium Willd.（一般名アカシアマンギュウム）、学名：Acacia dealbata Link.、学名：Acacia decurrens Willd.、及び学名：Acacia pycnantha Benth.からなる群より選ばれるアカシア属の樹皮が好ましく、特にAcacia mearnsii De Wild.及びAcacia mangium Willd.が好ましい。
本発明では、これらアカシア属の樹皮を１種のみ使用してもよいし、２種以上併用してもよい。

上記アカシア属の樹皮は、通常、樹木として伐採したのち、樹皮だけを剥がして採取し乾燥することで得られるが、好ましくはさらに天日で乾燥させた樹皮である。
アカシア属の樹皮は、外皮とやや繊維質の内皮とからなり、含水率２０％程度以下に乾燥するとハンマーミルなどの粉砕機で容易に微粉化する。本発明では、アカシア属の樹皮として、このアカシア属の内皮と外皮の両方を一緒に用いてもよいし、いずれか一方のみを用いてもよい。

前記アカシア属の樹皮の細片は、慣用の方法に従って、アカシア属の樹皮を適当な大きさに粉砕して得ることができる。
また、前記アカシア属の樹皮の粉末は、アカシア属の樹皮を慣用の方法で粉砕し粉末化して得ることができるが、特に、粒径が１００μｍ以下、特に５０〜７０μｍである粉末が好ましい。粉末の分画は、含水率２０％以下に乾燥した樹皮を適当な大きさ、例えば粒径１．６ｍｍ以下程度に粉砕し、得られた粉末を振動ふるい機などで分級して所要の粉末を得ることができる。

上記アカシア属の樹皮の抽出物は、アカシア属の樹皮を慣用の方法に従って抽出して得ることができる。優れた抗酸化作用を有するアカシア属の樹皮の抽出物を得るために、アカシア属の樹皮をアルコールや極性溶媒で抽出することが好ましい。
このようなアルコールとしてエタノールが、極性溶媒として水などが使用でき、また必要に応じてそれら溶媒を単独あるいは２種以上を併用してもよい。特に、優れた抗酸化作用を得るために、水とエチルアルコールなどのアルコールとの混合溶媒が好ましい。
さらに、同一又は異なる溶媒によって複数回抽出操作を行ってもよい。
優れた抗酸化作用を有する抽出物を得る上で、アカシア属の樹皮からの水又は熱水による抽出物をさらにエタノールで抽出して得た抽出物を使用してもよい。

抽出は、アカシア属の樹皮の細片や粉末などに溶媒を加えて必要に応じて攪拌し抽出するが、温度や時間あるいは固液比については特に限定されない。溶媒に水を用いる場合には、熱水で抽出してもよい。得られた抽出液は、そのまま凍結乾燥あるいは噴霧乾燥してもよいし、あるいは減圧濃縮してから凍結乾燥又は噴霧乾燥してもよい。得られる抽出物は、抽出液、溶液、粉末、濃縮液、ペースト状物などの種々の形態とすることができ、広く必要に応じて使用できる。
さらに、これらの形態で得られた本発明のアカシア属の樹皮抽出物はそのまま抗酸化組成物として使用できるほか、さらに必要に応じて精製し、その精製物も抗酸化活性成分として使用することができる。

本発明では、アカシア属樹皮由来物として、アカシア属の樹皮に含有されている成分も例示される。このような成分として、アカシア樹皮ポリフェノールなどが例示される。特に、アカシア樹皮ポリフェノールは優れた抗酸化作用を示すので好ましい成分である。
本発明のアカシア樹皮ポリフェノールとは、フラバン−３−オールを基本骨格とするフラバノール類の重合体である縮合型タンニンの一種を意味する。ここで、このような縮合型タンニンとして分子量５００〜３０００のものが好ましい。本発明で用いるアカシア樹皮ポリフェノールは、上記アカシア属の樹皮の粉末などを熱水抽出することにより得ることができる。
また、アカシア樹皮ポリフェノール製品としてはMIMOSA CentralCo-operative Ltd.製の登録商標MIMOSA ME POWDER、MIMOSA MS POWDER、MIMOSA GS POWDER、MIMOSA FS POWDER、MIMOSA WS POWDER、MIMOSA RG POWDER、MIMOSA RN POWDER、MIMOSA DK POWDER、MIMOSA AL POWDER、MIMOSA CR POWDER、GOLDEN MIMOSA POWDERなどが例示される。

本発明の組成物は、アカシア属樹皮由来物、例えば、アカシア属の樹皮、その抽出物、その精製物、又はアカシア樹皮ポリフェノールそのものであってもよいが、他の抗酸化作用を有する物質、例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、コエンザイムＱ１０、α−トコフェロール、プロアントシアニン、イソフラボン、ケルセチン、緑茶、又は小麦胚芽を含んでもよい。特に、相乗効果による優れた抗酸化作用が得られる点で、コエンザイムＱ１０、緑茶、又は小麦胚芽を含有するのが好ましい。

本発明の組成物は、アカシア属樹皮由来物、例えば、アカシア属の樹皮、その抽出物、その精製物、又はアカシア樹皮ポリフェノールそのものであってもよいが、本発明の効果を損なわない限り、賦形剤、甘味料、酸味料、増粘剤、香料、色素、乳化剤、及びその他に医薬品や食品で一般に利用されている添加剤や素材を含んでいてもよい。

本発明の組成物は、活性酸素が関係する疾患の予防又は治療に使用することができる。本発明において、活性酸素が関係する疾患とは、スーパーオキシド、ヒドロキシラジカル、一重項酸素、若しくは過酸化水素などの活性酸素又はこれらにより酸化された過酸化脂質などが起因となる細胞又は組織障害であれば特に制限されず、動脈硬化症、脳血管障害、肺気腫、リウマチ性関節炎、白内障、高血圧症、老人性痴呆症、アルツハイマー病、又はシミ・ソバカス若しくは老化などが例示される。好ましくは動脈硬化症である。

本発明に係る組成物の摂取量は、特に制限されないが、剤型、並びに使用者若しくは患者などの摂取者又は摂取動物の年齢、体重及び症状に応じて適宜選択することができる。例えば、有効成分量として１日あたり摂取者又は摂取動物の体重１kgにつきアカシア樹皮ポリフェノール量で０．００５〜１ｇ、好ましくは０．００５〜０．５ｇ、より好ましくは０．００５〜０．１ｇを、摂取、特に経口的に摂取することにより、優れた抗酸化作用が得られる。
摂取期間は、摂取者又は摂取動物の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。

本発明に係る組成物は、食品又は動物用飼料として、例えば、健康食品、機能性食品、健康補助食品、特定保健用食品、美容食品、及び栄養補助食品（サプリメント）として使用することができる。これら食品及び動物用飼料は、例えば、お茶及びジュースなどの飲料水；並びにアイスクリーム、ゼリー、あめ、チョコレート、及びチューインガムなどの形態であってもよい。また、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、又は錠剤の形態であってもよい。ここで、動物用飼料の動物には、ペット動物、畜産動物、又は動物園などで飼育されている動物を含む、前記の活性酸素が関係する疾患の予防又は治療を必要とする全ての動物が含まれる。

また、本発明に係る組成物は、医薬又は医薬部外品として、例えば、散剤、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬若しくは軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳濁剤、又は懸濁剤の形態で経口投与できるが、例えば坐剤の形態で直腸的に；例えば軟膏、クリーム剤、ゲル剤、又は液剤の形態で局部的又は経皮的に非経口的に投与することもできる。

以下、製造例、試験例、配合例を挙げて本発明を更に詳しく具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。特に、ここでは本発明のアカシア属の樹皮を外皮と内皮とに分けないで実施例を示しているが、外皮を内皮から分離してそれぞれ使用することもできる。
以下の製造例、試験例等において、本発明の各アカシアをそれぞれの学名の後の括弧内に示した番号で示す。例えば、学名：Acacia mearnsii De Wild.のアカシアをアカシアＮｏ．１と記す。
学名：Acacia mearnsii De Wild.（Ｎｏ．１）、学名：Acacia mangium Willd.（Ｎｏ．２）、学名：Acacia dealbata Link.（Ｎｏ．３）、学名：Acacia decurrens Willd.（Ｎｏ．４）、学名：Acacia pycnantha Benth.（Ｎｏ．５）。

アカシア樹皮粉末の製造例１
アカシアＮｏ．１の樹皮を含水率２０％以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミル（Raymond社製）で１．６ｍｍ以下（１０メッシュ篩（タイラー：Tyler）通過）の粉末に粉砕した後、更に振動ふるい機で分級し、６３μｍ以下（２５０メッシュ篩下）の微粉末を得た。
同様にして、残り４種のアカシアＮｏ．２〜５の樹皮を粉砕してそれぞれ６３μｍ以下の微粉末を得た。種類によって２５０メッシュ篩通過の微粉末の収率に多少の差はあるが、目的とする微粉末が得られた。

アカシア樹皮抽出物の製造例２
本発明の各アカシアＮｏ．１〜５の樹皮をそれぞれ含水率２０％以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミルで１．６ｍｍ以下の粉末に粉砕した後、この乾燥粉砕樹皮１００ｇに対して５倍量の熱水を加え、沸騰してから１５分間抽出し、１０〜２０μｍのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液をスプレードライヤで噴霧乾燥し、樹皮抽出物各４０ｇを得た。
以下、各樹皮抽出物はアカシアＮｏ．１〜５熱水抽出物と記す。

アカシア樹皮抽出物の製造例３
本発明のアカシアの樹皮を含水率２０％以下まで乾燥し、その乾燥樹皮をハンマーミルで１．６ｍｍ以下の粉末に粉砕した後、この乾燥粉砕樹皮１００ｇに対して５倍量のエタノールを加え、沸騰させて還流させながら１５分間抽出し、１０〜２０μｍのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液からエタノールを蒸発させた後、濃縮液をクローズドスプレードライヤで噴霧乾燥し、樹皮抽出物（以下、アカシアＮｏ．１エタノール抽出物の如く記す）４０ｇを得た。
アカシアＮｏ．１〜５のエタノール抽出物を得た。

アカシア樹皮抽出物の製造例４
製造例２で得られたアカシア熱水抽出物１０ｇに３倍量のエタノールを加え、沸騰させて還流させながら１５分間抽出し、１０〜２０μｍのフィルターを用いて濾過した。得られた濾液からエタノールを蒸発させて、それに水を加えてから凍結乾燥させて９ｇの抽出物（以下、アカシアＮｏ．１熱水抽出物エタノール画分の如く記す）を得た。
アカシアＮｏ．１〜５の熱水抽出物エタノール画分を得た。

試験例１ 抗酸化試験
（１）試験試料の調製
カルボキシメチルセルロースナトリウム（CMC−Na、ナカライテスク株式会社販売）の粉末１．５０gに注射用水（株式会社大塚製薬工場販売）を加えて溶解し全量を５００mLとし、０．３％（W／V）CMC−Na溶液を調製した。
製造例２に記載のアカシアＮｏ．１熱水抽出物を６．０g秤量し、乳鉢で細かく粉砕下後、上記の０．３％（W／V）CMC−Na溶液で懸濁し全量を１５mLとし、試験試料を調製した。

（２）試験動物
ラット（Slc：SD、SPF、雄、６週齢）を日本エスエルシー株式会社から購入し、８日間の検疫・馴化期間を置いてから、試験に供した。
検疫・馴化期間中に、一般状態を１日１回観察し、動物入荷の翌日及び検疫・馴化終了日に体重を測定した。
検疫・馴化終了日の体重をもとに、コンピュータを用いた完全無作為抽出方法により各群の平均体重が等しくなるように、対照群及び試験群に８匹ずつ群分けした。
動物は、検疫・馴化期間及び試験期間を通して、温度２０〜２６℃、相対湿度４０〜７０％、換気回数１０〜２０回／時間、照明時間１２時間（７：００〜１９：００）に設定したクリーン飼育室で、ステンレス製ハンガーラックに設置されたステンレス製ケージで飼育した。１ケージ当たりの匹数は２〜３匹とした。
また飼料は、検疫・馴化期間及び試験期間を通して、市販固形飼料（F-2、株式会社船橋農場製）を自由に摂取させた。飲料水は上水道水を給水瓶により自由に摂取させた。

（３）試験方法
対照群には０．３％（W／V）CMC−Na溶液を、試験群には上記で調製された試験試料を、それぞれ５mL／kgの投与液量にて、１日１回１４日間経口投与した。

（４）観察及び検査項目
（ｉ）血清中８−ＯＨｄＧ（８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン）の測定
投与開始１４日目に、無麻酔下にて頸静脈より血液を約１mL採取し、この採取した血液を３０００rpmで１５分間遠心分離して血清を得た。得られた血清中の８−ＯＨｄＧ濃度を高感度８−ＯＨｄＧ Check（日研ザイル株式会社製）を用いて測定した。
（ii）尿中８−ＯＨｄＧ（８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン）の測定
上記の採血を行った日の午後５時〜翌日の午前９時までの約１６時間の間、ラットを代謝ケージに入れ、尿を採取した。この採取した尿を１５００rpmで５分間遠心分離して上清を得た。得られた上清中の８−ＯＨｄＧ濃度をNew ８−ＯＨｄＧ Check（日研ザイル株式会社製）を用いて測定した。

（５）統計学的手法
上記の各測定値は平均値±標準誤差で表した。対照群との有意差検定はStudentのｔ検定を行った。有意水準は５％で表示した。

（６）試験成績
全例において死亡及び一般状態異常は認められなかった。
血清中及び尿中の８−ＯＨｄＧ濃度は、対照群と比較して試験群で減少が認められ、特に、尿中８−ＯＨｄＧ濃度は、対照群と比較して試験群で有意な減少が認められた（表１）。

以上の結果より、アカシア樹皮ポリフェノールには血清中や尿中の８−ＯＨｄＧを低下させる作用があることが認められ、経口投与により生体内で抗酸化作用を示すことが確認できた。

試験例２ 急性毒性試験（経口投与）
ＯＥＣＤ（Guidelines for the Testing of Chemicals 401, 1987）に準拠し、マウスを用いた経口急性毒性試験を実施した。
ＩＣＲ系雌雄マウスについて、雄では７，０００mg/kg、雌では６，５００mg/kgを上限として、公差５００mg/kgで各９用量の検体（上記製造例２のアカシアＮｏ．１熱水抽出物）を雌雄マウスに単回経口投与した。検体は、本発明品を純水に懸濁して用いた。その結果、ＬＤ５０値は雄では４，４６８mg/kg、雌では３，５９４mg/kgであり、いずれも３，０００mg/kgの投与量で、死亡例を認めなかった。
上記試験を製造例２のアカシアＮｏ．２〜５熱水抽出物について行って同様の結果を得た。これにより、本発明の組成物は、安全性に優れていることがわかった。

試験例３ 突然変異誘起性試験
労働省告示第７７号（昭和６３年９月１日）に準拠し、突然変異誘起性試験を実施した。
Escherichia coli WP2 uvrA株及びSalmonella typhimurium TA株系４菌株を用いて代謝活性化を含む復帰突然変異試験を１５６〜５，０００μg/プレートの用量の検体（製造例２のアカシアＮｏ．１〜５熱水抽出物）で行った。その結果、いずれの菌株についても復帰変異コロニー数の増加が見られなかったことから、製造例２のアカシアＮｏ．１〜５熱水抽出物の突然変異誘起性は陰性であると結論づけられ、安全性に優れていることがわかった。

配合例１ 内服剤の調製
製造例４のアカシア樹皮熱水抽出物エタノール画分を用い、下記に示す組成にて内服剤を調製した。
製造例４の抽出物画分 １．０（重量％）
乳糖 ３０．０
コーンスターチ ６０．０
結晶セルロース ８．０
ポリビニールピロリドン １．０
計 １００．０

配合例２ ペットフードの調製
製造例２のアカシア樹皮熱水抽出物を用い、下記に示す組成にてペットフードを調製した。
製造例２の抽出物 １．０（重量％）
オートミール ８８．０
でんぷん ５．０
食塩 ２．５
全卵 ３．０
調味料 ０．５
計 １００．０

配合例３ 錠剤（菓子）の調製
製造例４のアカシア樹皮熱水抽出物エタノール画分を用い、下記に示す組成にて錠剤（菓子）を調製した。
製造例４の抽出物画分 １．０（重量％）
クエン酸 １．０
脱脂粉乳 １５．０
ショ糖エステル １．０
フレーバー ０．５
粉糖 ２０．０
乳糖 ６１．５
計 １００．０

本発明によれば、活性酸素が関係する疾患の予防及び／又は治療用の組成物を得ることができる。
より詳細には、本発明の組成物は、動脈硬化症の予防及び／又は治療に有用である。
これら組成物は、医薬品又は医薬部外品、あるいは健康食品、健康補助食品、特定保健用食品、若しくは栄養補助食品などの食品又は動物用飼料に利用できる。

Claims (3)

1. 学名：Acacia mearnsii De Wild.、学名：Acacia mangium Willd.、学名：Acacia dealbata Link.、学名：Acacia decurrens Willd.、及び学名：Acacia pycnantha Benth. からなる群より選ばれるアカシア属の樹皮由来物を、アカシア樹皮ポリフェノールとして１日あたり摂取者の体重１kgにつき０．００５〜１gの用量にて含有し、フリーＢ環フラボノイドを有効成分として含有しないことを特徴とする、経口摂取用の抗酸化剤。
2. アカシア属樹皮由来物がアカシア属の樹皮の抽出物である、請求項１記載の抗酸化剤。
3. アカシア属樹皮由来物がアカシア樹皮ポリフェノールである、請求項１記載の抗酸化剤。