CN117106666B - 戊糖片球菌ll-07、戊糖片球菌ll-07胞外多糖及其生产方法和应用 - Google Patents

戊糖片球菌ll-07、戊糖片球菌ll-07胞外多糖及其生产方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了戊糖片球菌LL‑07、戊糖片球菌LL‑07胞外多糖及其生产方法和应用，属于微生物技术领域。本发明戊糖片球菌LL‑07的分类命名为：Pediococcus pentosaceus，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2023年7月11日，保藏编号为：CCTCC M20231264。本发明提供的戊糖片球菌LL‑07可以分别以葡萄糖、果糖、乳糖为碳源发酵，得到相应的胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS，这三种胞外多糖具有较强的抗氧化活性、抑制α淀粉酶活性和保湿性能，为戊糖片球菌及其胞外多糖在食品、药品及化妆品等产品的研发提供技术支持。

Description

戊糖片球菌LL-07、戊糖片球菌LL-07胞外多糖及其生产方法 和应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及戊糖片球菌LL-07、戊糖片球菌LL-07胞外多糖及其生产方法和应用。
背景技术
戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)作为乳酸菌的一种，近年来在乳酸菌的应用中逐渐发挥着越来越重要的作用。在20世纪90年代，已经证明了一些戊糖片球菌除可用于发酵，还可以作为动物生长的生物促进剂，但戊糖片球菌的大部分特性在当时没有得到深入的研究。经过多年的技术发展，以及对戊糖片球菌的深度挖掘，许多其他先前未被发现的特征被证实。戊糖片球菌除了能够行使乳酸菌产酸的功能外，还能够提升发酵产品的风味、品质以及安全性，并且越来越多的研究结果表明，戊糖片球菌具有作为益生菌的潜力。
胞外多糖(Exopolysaccharides，EPS)是微生物在生长代谢过程中产生的次级代谢产物，是存在于细胞外基质，与细胞膜没有共价连接的大分子糖类物质，自然界中分布广泛，在动物、植物、真菌、细菌中的分布均有据可查。许多研究发现，EPS具有多种生理功能，如抗氧化、抗肿瘤、降胆固醇、促肠道菌群平衡等，并且常被作为增稠剂、稳定剂、凝胶剂和乳化剂等应用于食品、药品、化妆品等行业中。戊糖片球菌在生长代谢过程中，除了会产生细菌素等活性物之外，也会产生具有活性功能的EPS，并且随着戊糖片球菌源EPS的功能被科研人员不断证实和深入挖掘，显示出戊糖片球菌的益生功能及特殊的理化性质均与EPS之间具有潜在的联系。
目前，关于乳酸菌源EPS的研究主要集中在植物乳杆菌和嗜热链球菌，而对戊糖片球菌源EPS方面的研究尚不够深入。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供戊糖片球菌LL-07、戊糖片球菌LL-07胞外多糖及其生产方法和应用，本发明提供的戊糖片球菌LL-07可以分别以葡萄糖、果糖、乳糖为碳源发酵，得到相应的胞外多糖，具有较强的抗氧化活性、抑制α淀粉酶活性和保湿性能，为戊糖片球菌及其胞外多糖在食品、药品及化妆品等产品的研发提供技术支持。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种戊糖片球菌LL-07，所述戊糖片球菌LL-07的分类命名为Pediococcuspentosaceus，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2023年7月11日，保藏编号为：CCTCC M20231264。
在某些实施方案中，所述戊糖片球菌LL-07分离自贵州酸肉中。
在某些实施方案中，所述戊糖片球菌LL-07的16S rDNA的具体核苷酸序列如SEQID NO：1所示。
本发明还提供戊糖片球菌LL-07胞外多糖，将上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07分别以葡萄糖、乳糖、果糖为碳源发酵得到戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS。
在某些实施方案中，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS的数均分子量分别为14.694kDa、13.237kDa、39.031kDa；重均分子量分别为29.781kDa、56.892kDa、83.224kDa；z均分子量分别为86.429kDa、1014.057kDa、147.623kDa，分子量分布宽度分别为2.027、4.298、2.132。
在某些实施方案中，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS包括GEPS-1M、GEPS-2M、GEPS-3M三种多糖；所述LEPS包括LEPS-1M、LEPS-2M、LEPS-3M三种多糖；所述FEPS包括FEPS-1M、FEPS-2M两种多糖；其中，GEPS的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.74％、L-***糖0.30％、D-半乳糖12.47％、D-葡萄糖17.44％、D-甘露糖67.47％、D-核糖1.58％；LEPS的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.37％、L-***糖0.21％、D-半乳糖17.79％、D-葡萄糖15.59％、D-甘露糖64.88％、D-核糖1.17％；FEPS的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.13％、L-***糖0.65％、D-半乳糖1.32％、D-葡萄糖26.75％、D-甘露糖71.14％。
在某些实施方案中，GEPS-1M、LEPS-1M、FEPS-1M为中性多糖；GEPS-2M、GEPS-3M、LEPS-2M、LEPS-3M、FEPS-2M为酸性多糖。
在某些实施方案中，所述GEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.46％、L-***糖0.24％、D-半乳糖5.75％、D-葡萄糖15.72％、D-甘露糖75.37％、D-核糖2.24％；所述GEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖1.79％、L-***糖0.42％、D-半乳糖13.45％、D-葡萄糖12.45％、D-甘露糖71.90％；所述GEPS-3M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.69％、L-***糖0.49％、D-半乳糖57.07％、D-葡萄糖37.31％、D-甘露糖4.44％；所述LEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.19％、L-***糖0.13％、D-半乳糖12.24％、D-葡萄糖14.74％、D-甘露糖70.92％、D-核糖1.77％；所述LEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.79％、L-***糖0.27％、D-半乳糖10.64％、D-葡萄糖8.29％、D-甘露糖80.01％；所述LEPS-3M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.58％、L-***糖0.51％、D-半乳糖60.08％、D-葡萄糖32.92％、D-甘露糖5.91％；所述FEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖1.01％、L-***糖1.11％、D-半乳糖13.10％、D-葡萄糖11.51％、D-甘露糖73.28％；所述FEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.09％、L-***糖0.07％、D-半乳糖0.64％、D-葡萄糖3.07％、D-甘露糖96.13％。
本发明还提供一种上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖的生产方法，包括以下步骤：
S1、将上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07按照2％～4％体积比的接种量分别接种于以葡萄糖、乳糖、果糖为碳源的液体培养基，32℃～37℃恒温培养发酵24h～48h，得发酵培养液；
S2、发酵培养液置于90℃～95℃水浴中恒温10min～30min，恒温后的发酵液经离心取上清液，加入浓度为0.75g/mL～0.85g/mL的三氯乙酸水溶液，使三氯乙酸终浓度为0.035g/mL～0.045g/mL，静置、离心后取上清液，浓缩后加入浓缩液4～6倍体积的预冷无水乙醇，静置、离心后得沉淀，沉淀中加无菌水，再次离心、浓缩至干，加无菌水复溶，得粗多糖溶液；
S3、将粗多糖溶液用8000Da～14000Da的透析袋在去离子水中透析48h～72h，透析温度2℃～4℃，透析后冷冻干燥，分别得戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS；
S4、分别将戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS经Cellulose DE-52层析柱分离、Sepharose CL-6B凝胶色谱柱纯化，获得戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS相应的纯化多糖组分。
在某些实施方案中，所述Cellulose DE-52层析柱的规格优选为30cm×Φ2.6cm。
在某些实施方案中，所述Cellulose DE-52层析柱分离具体为：按照10mg/mL～20mg/mL的料液比，分别将戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS溶于去离子水中；分别将各上清液上样至Cellulose DE-52层析柱，依次用去离子水、以及浓度分别为0.1mol/L、0.3mol/L、0.6mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂分别进行洗脱，流速为1mL/min；每隔6min收集洗脱液测定EPS含量，共收集得到8种多糖，经透析、浓缩、冷冻干燥，分别对应得到初步纯化多糖GEPS-1、GEPS-2、GEPS-3、LEPS-1、LEPS-2、LEPS-3、FEPS-1、FEPS-2。
在某些实施方案中，所述Sepharose CL-6B凝胶色谱柱的规格为100cm×Φ1.6cm。
在某些实施方案中，所述Sepharose CL-6B凝胶色谱柱纯化具体包括以下步骤：按照10mg/mL～20mg/mL的料液比，将初步纯化多糖溶于去离子水中，离心，取上清液；将上清液过0.45μm滤膜后，加样于Sepharose CL-6B凝胶色谱柱中，用去离子水作为洗脱剂进行洗脱，流速为0.3mL/min，每隔6min收集洗脱液测定EPS含量；将所得洗脱液经浓缩、冷冻干燥后，获得相应纯化多糖组分GEPS-1M、GEPS-2M、GEPS-3M、LEPS-1M、LEPS-2M、LEPS-3M、FEPS-1M、FEPS-2M。
本发明还提供一种上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07，和/或上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖在食品、药品、化妆品或保健品中的应用。
在某些实施方案中，本发明对所述食品、药品、化妆品或保健品的剂型或类型没有特殊限定，采用戊糖片球菌LL-07，和/或戊糖片球菌LL-07胞外多糖在相应产品中可接受的剂型或类型即可。本发明对所述食品、药品、化妆品或保健品的制备方法没有特殊限定，采用相应剂型或类型的制备方法即可。本发明对所述食品、药品、化妆品或保健品中戊糖片球菌LL-07，和/或戊糖片球菌LL-07胞外多糖的含量没有特殊限定，采用食品、药品、化妆品或保健品中常规活性物质的含量即可。
本发明还提供一种上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖在制备抗氧化、和/或抑制α淀粉酶的产品中的应用，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖为GEPS、LEPS中的一种或两种。
在某些实施方案中，所述产品中戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS的含量优选≥10mg/mL，其中，GEPS的含量更优选为50mg/mL。本发明所得GEPS的浓度为50mg/mL时，其对DPPH的清除能力与Vc相当。
在某些实施方案中，本发明对所述产品的类型没有特殊限定，采用戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS在相应产品中可接受的类型即可。本发明对所述产品的制备方法没有特殊限定，采用相应类型的制备方法即可。
本发明还提供一种上述技术方案中所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖在制备保湿产品中的应用，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖为FEPS。
在某些实施方案中，本发明对所述产品的类型没有特殊限定，采用戊糖片球菌LL-07胞外多糖FEPS在相应产品中可接受的类型即可。本发明对所述产品的制备方法没有特殊限定，采用相应类型的制备方法即可。本发明对所述产品中戊糖片球菌LL-07胞外多糖FEPS的含量没有特殊限定，采用相应产品中常规活性物质的含量即可。本发明的戊糖片球菌LL-07胞外多糖FEPS的保湿性能优于甘油，在RH43％中与透明质酸钠的保湿性能相近，可以达到87.3％。
有益技术效果：本发明提供了一种戊糖片球菌LL-07，所述戊糖片球菌LL-07的分类命名为：戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2023年7月11日，保藏编号为：CCTCC M20231264。本发明提供的戊糖片球菌LL-07可以分别以葡萄糖、果糖、乳糖为碳源发酵，得到相应的胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS，体外试验表明，这三种胞外多糖具有较强的抗氧化活性、抑制α淀粉酶活性和保湿性能，为戊糖片球菌及其胞外多糖在食品、药品及化妆品等产品的研发提供技术支持。
附图说明
图1为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07的16S rDNA的***发育树；
图2为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07API50试纸条及鉴定结果；
图3为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖洗脱曲线；其中，图3上图中的G1、G2、G3分别代表GEPS-1、GEPS-2、GEPS-3，L1、L2、L3分别代表LEPS-1、LEPS-2、LEPS-3，F1、F2分别代表FEPS-1、FEPS-2，DE-52代表DEAE-52；图3下图中的G1、G2、G3分别代表GEPS-1M、GEPS-2M、GEPS-3M，L1、L2、L3分别代表LEPS-1M、LEPS-2M、LEPS-3M，F1、F2分别代表FEPS-1M、FEPS-2M；
图4为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖DPPH清除能力；
图5为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖羟自由基清除率；
图6为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖α淀粉酶抑制能力；
图7为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖保湿性能。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
除非特别指明，否则基本上按照本领域内熟知的以及在各种参考文献中描述的常规方法进行实施例中描述的实验和方法。例如，本发明中所使用的免疫学、生物化学、化学、分子生物学、微生物学、细胞生物学、基因组学和重组DNA等常规技术，可参见萨姆布鲁克(Sambrook)、弗里奇(Fritsch)和马尼亚蒂斯(Maniatis)，《分子克隆：实验室手册》(MOLECULAR CLONING:ALABORATORY MANUAL)，第2次编辑(1989)；《当代分子生物学实验手册》(CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY)(F.M.奥苏贝尔(F.M.Ausubel)等人编辑，(1987))；《酶学方法》(METHODS IN ENZYMOLOGY)系列(学术出版公司)：《PCR2：实用方法》(PCR2:APRACTICAL APPROACH)(M.J.麦克弗森(M.J.MacPherson)、B.D.黑姆斯(B.D.Hames)和G.R.泰勒(G.R.Taylor)编辑(1995))，以及《动物细胞培养》(ANIMAL CELLCULTURE)(R.I.弗雷谢尼(R.I.Freshney)编辑(1987))。
另外，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。本文中全部公开案和其他参考资料以其全文通过引用合并入本文。
实施例1戊糖片球菌LL-07菌株的分离、鉴定
1.1戊糖片球菌LL-07菌株的分离
1.1.1固体培养基的配置：
葡萄糖20g/L、胰酪胨10g/L、牛肉膏粉5g/L、酵母粉4g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸三胺2g/L、吐温80 1g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L、琼脂14g/L，加双蒸水定容至1L，调节至pH＝6.5±0.2。常规高温灭菌，备用。
1.1.2戊糖片球菌LL-07菌株的分离、纯化
在无菌条件下取10g贵州酸肉样品(购自贵州省黔南布依族苗族自治州荔波县捞村)搅碎，放入无菌均质袋中，加入90mL无菌的生理盐水(0.9％)，放于无菌拍打式均质器中拍打5min，取1mL样品液加入9mL无菌生理盐水中稀释，继续将样品稀释至10-2、10-3、10-4、10-5、10-6梯度。然后将得到的样品稀释液涂布于添加CaCO3的琼脂培养基中，于37℃培养48h。培养结束后，挑选具有产粘和拉丝性能的菌株作为目标菌，挑选单菌落重新划线，重复4～5次，通过革兰氏染色观察是否纯化。将纯化的好的菌种进行保藏。
保藏信息如下：
保藏名称：戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07，分类命名：戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC M 20231264，保藏时间：2023年7月11日。
1.2戊糖片球菌LL-07的鉴定
1.2.1分子生物学鉴定
1)菌株DNA提取：
按照细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)说明书提取基因组。
2)16S rDNA扩增：
PCR扩增引物：
正向引物27F(SEQ ID NO：2)：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；
反向引物1492R(SEQ ID NO：3)：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。
PCR扩增体系参照2×Taq PCR MasterMix II(天根生化科技(北京)有限公司)说明书做适当调整。
扩增体系：模版(＜1μg)：4μL；Primer F(10μM)：2μL；Primer R(10μM)：2μL；2×TaqPCR MasterMix II：15μL；ddH2O补至30μL。
PCR扩增条件：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min 30s，30次循环；72℃再延伸10min。
PCR扩增产物经琼脂糖凝胶检验合格后送至生工进行测序，测序结果如SEQ IDNO：1所示。
SEQ ID NO：1：
AGCATGGCGGGTGCTATAATGCAGTCGAACGAACTTCCGTTAATTGATTATGACGTACTTGTACTGATTGAGATTTTAACACGAAGTGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAGAAGTAGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGTATAACAGAGAAAACCGCATGGTTTTCTTTTAAAAGATGGCTCTGCTATCACTTCTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCAGTGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTAAAGAAGAACGTGGGTAAGAGTAACTGTTTACCCAGTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTAATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGATTACTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCTCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGTAATCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAAGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTGACAGTCTAAGAGATTAGAGGTTCCCTTCGGGGACAGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTACTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTCGCGAGACCGCGAGGTTAAGCTAATCTCTTAAAACCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGGTAACCTTTTAGGAGCTAGCCGTCTAAGGTGACAGATA。
3)序列相似性分析及***发育树的构建
测定后的结果登陆美国国立生物技术中心(National Center forBiotechnology Information，NCBI)进行BLAST比对，采用MEGA软件构建***发育树(图1)。
根据图1结果可知LL-07为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。
1.2.2API50CH鉴定实验
1)菌株培养：
吸取200μL贮存菌液于10mL MRS液体培养基中，于37℃传代培养2次后接种于MRS琼脂中。
2)试条的准备：
准备一个培养盒，倒入约10mL蒸馏水于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室，在盘的边缘写上菌株编号，从包装袋中取出试条置于孵育盒底盘中。
3)接种物的准备：
使用棉拭子从MRS固体培养基上收集菌液，加入生理盐水中，制成高浓度菌悬液。往悬浮液中加入高浓度菌悬液制成2McF的菌悬液，记录滴数n。打开API50CHL培养基安瓿，加入2n滴菌液接种，混匀备用。
4)试条接种
用无菌加样器将上述菌液接于孵育盘各小孔中，于36℃±2℃培养48h，分别于培养第24h和48h读取试条结果并记录。培养结束后使用鉴定软件APIweb进行菌种鉴定，鉴定结果如图2所示。根据图2及鉴定结果可知，LL-07为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)。
实施例2戊糖片球菌LL-07胞外多糖的提取、纯化及分析
2.1培养基的配制：
液体培养基：葡萄糖20g/L、胰蛋白胨10g/L、牛肉膏粉5g/L、酵母粉4g/L、乙酸钠5g/L、柠檬酸三胺2g/L、吐温80 1mL/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L，加双蒸水定容至1L，调节至pH＝6.5±0.2。常规高温灭菌，备用。
2.2菌种活化及发酵液的制备：
活化培养：将超净台紫外灭菌30min，取出于-80℃保存的戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07冻存管，置于常温解冻。吸取200μL冻存菌液置于10mL液体培养基中，置于37℃恒温培养箱中，培养24h～48h进行菌种活化，重复2次活化培养。
发酵液制备：活化培养2代后，以体积比为3％的接种量接种于液体培养基中，37℃恒温培养箱24h～48h(优选24h)，得发酵培养液。
2.3戊糖片球菌LL-07胞外多糖的提取
1)将上述发酵菌液置于90℃水浴中恒温15min，使培养液中的菌体及分解多糖的酶灭活。
2)恒温后的发酵液经离心取上清液，在离心所得的上清液中加入浓度为0.75g/mL～0.85g/mL的三氯乙酸水溶液，使三氯乙酸终浓度为0.035g/mL～0.045g/mL，于2℃～4℃静置12h～16h；离心除去沉淀，得到去蛋白质的上清液；
3)将除蛋白质的上清液在真空度为50mBar、旋蒸温度为55℃的条件下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，加入为浓缩液4～6倍体积的2℃～4℃预冷无水乙醇，于2℃～4℃静置12h～24h，离心，在离心所得的沉淀中加无菌水，再次离心后取上清夜，上清液于真空度50mBar减压浓缩至干，加无菌水复溶，得粗多糖溶液；
4)于去离子水中，将粗多糖溶液用8000Da～14000Da的透析袋透析48h～72h，透析温度为2℃～4℃，透析时前24h每4h换一次去离子水，24h后每8h换一次去离子水至透析结束；透析液浓缩后冷冻干燥，得戊糖片球菌LL-07胞外多糖。
1L以葡萄糖为碳源的发酵培养液最终能获得561.12mg的戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS。
5)LEPS、FEPS的提取：将2.1培养基中的碳源“葡萄糖”分别替换为“乳糖”、“果糖”，用量保持不变；菌种活化及发酵液的制备、胞外多糖的提取与2.2、2.3相同，最终所得结果如下：
碳源为乳糖时，1L的发酵培养液最终能获得534.10mg的戊糖片球菌LL-07胞外多糖LEPS；
碳源为果糖时，1L的发酵培养液最终能获得428.85mg的戊糖片球菌LL-07胞外多糖FEPS。
2.4戊糖片球菌LL-07胞外多糖的分离纯化
2.4.1DEAE-52柱层析分离纯化戊糖片球菌LL-07胞外多糖(EPS)粗多糖
1)Cellulose DEAE-52的预处理：取DEAE-52粉末置于去离子水中，用玻璃棒轻轻搅拌，静置，倾去上层漂浮的纤维素单体和杂质碎片，重复2～3次。加适量热水进行溶胀后，使用去离子水抽滤3～4次，除去原填料中的乙醇。
2)装柱与平衡：取规格为30cm×Φ2.6cm的层析柱垂直固定好在铁架台上，在柱子下端加入少量去离子水除去柱中空气。关闭柱子下端出水口，柱内保留少量去离子水，将活化好的DEAE-52填料用玻璃棒紧靠柱壁引流，缓慢连续倒入柱子中，防止带入气泡。沉降过程中确保填料液面始终没于水面以下，待填料自然沉降至液面不再变化时，打开蠕动泵以5倍的洗脱流速冲压柱床，去离子水平衡24h备用。
3)上样与洗脱：分别称取10mg GEPS、10mg LEPS、10mg FEPS，分别溶于10mL去离子水中，将各溶液分别上样至Cellulose DE-52层析柱，依次用去离子水、以及浓度分别为0.1mol/L、0.3mol/L、0.6mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂分别进行洗脱，流速为1mL/min；每隔6min收集洗脱液测定EPS含量，共收集得到8种多糖，经透析、浓缩、冷冻干燥，分别对应得到初步纯化多糖(GEPS-1、GEPS-2、GEPS-3、LEPS-1、LEPS-2、LEPS-3、FEPS-1、FEPS-2)。
由图3上图的胞外多糖DEAE-52(图中简写为DE-52)洗脱曲线可知，洗脱曲线峰形尖细、峰宽较窄，说明洗脱后分离效果较好。GEPS、LEPS、FEPS经DEAE-52层析柱分离后分别得到3、3、2个组分。其中，GEPS-1、LEPS-1、FEPS-1为中性多糖；其余组分为酸性多糖。
2.4.2Sepharose CL-6B凝胶柱纯化
1)Sepharose CL-6B的预处理：取Sepharose CL-6B凝胶置于去离子水中，用玻璃棒轻轻搅拌，静置，倾去上层不溶物，重复2-3次。使用去离子水抽滤3～4次，除去原填料中的乙醇，加入去离子水溶胀后制成匀浆。
2)装柱与平衡：取规格为100cm×Φ1.6cm的层析柱垂直固定好在铁架台上，在柱子下端加入少量去离子水除去柱中空气。关闭柱子下端出水口，柱内保留少量去离子水，将活化好的Sepharose CL-6B凝胶用玻璃棒紧靠柱壁引流，缓慢连续倒入柱子中，防止带入气泡。沉降过程中确保填料液面始终没于水面以下，待填料自然沉降至液面不再变化时，打开蠕动泵以5倍的洗脱流速冲压柱床，去离子水平衡24h备用。
3)上样与洗脱：经上述分离出的EPS各组分(初步纯化多糖GEPS-1、GEPS-2、GEPS-3、LEPS-1、LEPS-2、LEPS-3、FEPS-1、FEPS-2、FEPS-3)各取10mg分别进行如下操作：用10mL去离子水溶解，用0.45μm的水膜过滤；加样于Sepharose CL-6B凝胶色谱柱中，用去离子水作为洗脱剂进行洗脱，流速为0.3mL/min，每隔6min收集洗脱液测定EPS含量；将所得洗脱液经浓缩、冷冻干燥后，获得相应纯化多糖组分(GEPS-1M、GEPS-2M、GEPS-3M、LEPS-1M、LEPS-2M、LEPS-3M、FEPS-1M、FEPS-2M、FEPS-3M)。多糖的Sepharose CL-6B洗脱曲线见图3下图。
2.5戊糖片球菌LL-07胞外多糖的成分分析
2.5.1标准品配制
分别准确称取各标准品后，加入水配成10mg/mL标准溶液母液单标，根据表1浓度梯度配制成所需系列标准品。
表1单糖混标梯度浓度信息
2.5.2样品前处理
取干净的色谱瓶，称取适量多糖样品，加入1mL 2M TFA酸溶液，121℃加热2h。通氮气，吹干。加入99.99％甲醇清洗，再吹干，重复甲醇清洗2～3次。加入无菌水溶解，转入色谱瓶中待测。
2.5.3仪器参数
采用Thermo ICS 5000+离子色谱***(ICS 5000+,Thermo Fisher Scientific,USA)，利用电化学检测器对单糖组分进行分析检测。
采用DionexTMCarboPacTMPA20(150*3.0mm，10μm)液相色谱柱；进样量为5μL。流动相A(H2O)，流动相B(0.1M NaOH)，流动相C(0.1MNaOH，0.2M NaAc)，流速0.5mL/min；柱温为30℃；洗脱梯度：0min A相/B相/C相(95:5:0，V/V/V)，26min A相/B相/C相(85:5:10，V/V/V)，42min A相/B相/C相(85:5:10，V/V/V)，42.1min A相/B相/C相(60:0:40，V/V/V)，52minA相/B相/C相(60:40:0，V/V/V)，52.1min A相/B相/C相(95:5:0，V/V/V)，60min A相/B相/C相(95:5:0，V/V/V)。
2.5.4单糖组成含量
各组分的单糖组成含量如表2所示。
表2各组分的单糖组成含量
2.6戊糖片球菌LL-07胞外多糖分子量测定
2.6.1样品前处理
将样品溶解在0.1M NaNO3水溶液(含0.02％ NaN3,w/w)中，终浓度为1mg/mL，并通过孔径为0.45μm的过滤器过滤后上机检测。
2.6.2仪器参数
采用凝胶色谱-示差-多角度激光光散射***，液相***为U3000(Thermo,USA)，示差检测器为Optilab T-rEX(Wyatt technology，CA，USA)，激光光散射检测器为DAWNHELEOSⅡ(Wyatt technology，CA，USA)。采用凝胶排阻色谱柱(Ohpak SB-805HQ(300×8mm)，Ohpak SB-804HQ(300×8mm)和Ohpak SB-803HQ(300×8mm)串联。柱温45℃，进样量100μL，流动相A(0.02％ NaN3，0.1M NaNO3)，流速0.4mL/min，洗脱梯度：等度100min。
2.6.3戊糖片球菌LL-07胞外多糖分子量测定结果
经检测，戊糖片球菌LL-07胞外多糖的分子量如表3所示。
表3多糖分子量表
实施例3抗氧化性、抑制α淀粉酶活性、保湿性能试验
3.1体外抗氧化活性实验
3.1.1DPPH清除能力测定：
用无菌水将3种胞外多糖样品(GEPS、LEPS、FEPS)配制成1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL不同浓度的样品溶液，取2mL样品溶液加入2mL 0.2mmol/L(0.04mg/mL)DPPH-99.9％乙醇溶液，混匀，放置在室温(25℃)暗处30min，5000r/min离心5min，取上清液测定517nm处吸光值，以VC为阳性对照，每样重复3次，取平均值，并按下列公式计算DPPH自由基清除率。
DPPH清除率(％)＝[1-(AS-ASB)/AC]*100
AS：2mL样液+2mL DPPH样品的吸光值；ASB：2mL样液+2mL乙醇样品的吸光值；AC：2mL水+2mL DPPH样品的吸光值。
戊糖片球菌LL-07胞外多糖的DPPH自由基清除率结果如图4所示。由图4可以看出，戊糖片球菌LL-07的胞外多糖GEPS、LEPS具有较好的DPPH自由基清除效果，当GEPS、LEPS浓度大于10mg/mL时，DPPH自由基清除率大于98％。并且，当GEPS浓度大于50mg/mL时，其与Vc的DPPH自由基清除效果相当，达到99.7％。
3.1.2羟自由基清除率测定：
用无菌水将3种胞外多糖样品(GEPS、LEPS、FEPS)配制成1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL不同浓度的样品溶液，在1mL样品中分别加入9mmol/L FeSO4和9mmol/L水杨酸-乙醇溶液各2mL最后加2mL 1.2mmol/L H2O2启动反应，于37℃反应30min，5000r/min离心5min，取上清液以去离子水调零在波长510nm测定样品浓度吸光度A1；另外，去离子水代替H2O2重复上述操作，测定样品本身的吸光值A2，同时以水代替样品溶液，测定吸光度A0。VC为阳性对照。每样重复3次，取平均值，并按下列公式计算羟自由基清除率。
羟自由基清除率(％)＝[1-(A1-A0)/A2]*100
戊糖片球菌LL-07胞外多糖的羟自由基清除率结果如图5所示。由图5可以看出，戊糖片球菌LL-07的胞外多糖GEPS、LEPS具有较好的羟自由基清除率，当多糖浓度为50mg/mL时，羟自由基清除率分别为59.9％和58.8％。
综上，戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)LL-07胞外多糖GEPS、LEPS具有较好的体外抗氧化活性。
3.2抑制α淀粉酶活性实验
用无菌水将3种胞外多糖样品(GEPS、LEPS、FEPS)配制成1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL不同浓度的样品溶液。取不同浓度的上述糖液各500μL，加入500μLα-淀粉酶(0.5mg/mL)，室温放置100min，然后加入500μL、1g/100mL的淀粉溶液反应10min(反应温度看α-淀粉酶最佳活性温度)后，加入1mL DNS试剂，沸水浴5min。冷却后用蒸馏水稀释定容至10mL，于540nm波长测定吸光度值，记为A1；另外，无菌水代替α淀粉酶液重复操作，作为对照组测定吸光值，记为A2；将胞外多糖样液替换为同体积的无菌水，重复操作作为空白组测定吸光值，记为A3；将淀粉溶液的吸光度值记为A4。阿卡波糖作为阳性对照。每样重复3次，取平均值计算α-淀粉酶活性的抑制率。
α淀粉酶活性抑制率(％)＝[1-(A1-A2)/(A3-A4)]*100
戊糖片球菌LL-07胞外多糖对α淀粉酶的抑制率如图6所示。由图6可以看出，LEPS在浓度为50mg/mL时对α淀粉酶的抑制能力可达94.68％，接近于同浓度阿卡波糖对α淀粉酶的抑制能力。
综上，戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS具有较好的抑制α淀粉酶能力。
3.3保湿性能实验
取干燥的具塞扁形称量瓶(外径50mm，高为15mm)，于实验前一天置于温度25℃±1℃、湿度43％、81％的恒温箱中。称取适量供试品(GEPS、LEPS、FEPS)，置于称量瓶中，称定质量为m1。按重量加入10％的去离子水，精密称定质量为m2。将称量瓶敞口，连同瓶塞一起放置于温度为25℃±1℃，相对湿度为43％的恒温培养箱和以硅胶为干燥剂的干燥器内放置5d，称定质量为m3。以甘油和透明质酸钠为对照。
保湿率(％)＝(m3-m2)/(m2-m1)*100％
戊糖片球菌LL-07胞外多糖的保湿率如图7所示。由图7可以看出，FEPS在相对湿度为43％的恒温培养箱中保湿率接近透明质酸，可以达到87.3％，具有较好的保湿性能。
综上所述，本发明提供的戊糖片球菌LL-07可以分别以葡萄糖、果糖、乳糖为碳源发酵，得到相应的胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS，体外试验表明，这三种胞外多糖具有较强的抗氧化活性、抑制α淀粉酶活性和保湿性能，为戊糖片球菌及其胞外多糖在食品、药品及化妆品等产品的研发提供技术支持。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种戊糖片球菌LL-07，其特征在于，所述戊糖片球菌LL-07的分类命名为：Pediococcus pentosaceus，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2023年7月11日，保藏编号为：CCTCC M 20231264。
2.戊糖片球菌LL-07胞外多糖，其特征在于，将权利要求1所述的戊糖片球菌LL-07分别以葡萄糖、乳糖、果糖为碳源发酵，得到戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS或FEPS；
所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖的生产方法包括如下步骤：
S1、将权利要求1中所述的戊糖片球菌LL-07按照2％~4％体积比的接种量分别接种于以葡萄糖、乳糖、果糖为碳源的液体培养基，32℃~37℃恒温培养发酵24h～48h，得发酵培养液；
S2、发酵培养液置于90℃~95℃水浴中恒温10min~30min，恒温后的发酵液经离心取上清液，加入浓度为0.75g/mL~0.85g/mL的三氯乙酸水溶液，使三氯乙酸终浓度为0.035g/mL~0.045g/mL，静置、离心后取上清液，浓缩后加入浓缩液4~6倍体积的预冷无水乙醇，静置、离心后得沉淀，沉淀中加无菌水，再次离心、浓缩至干，加无菌水复溶，得粗多糖溶液；
S3、将粗多糖溶液用8000Da~14000Da的透析袋在去离子水中透析48h~72h，透析温度2℃~4℃，透析后冷冻干燥，分别得戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS；
S4、分别将戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS经Cellulose DE-52层析柱分离、Sepharose CL-6B凝胶色谱柱纯化，获得戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS或FEPS相应的纯化多糖组分。
3.根据权利要求2所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖，其特征在于，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS、LEPS、FEPS的数均分子量分别为14.694kDa、13.237kDa、39.031kDa；重均分子量分别为29.781kDa、56.892kDa、83.224kDa；z均分子量分别为86.429kDa、1014.057kDa、147.623kDa，分子量分布宽度分别为2.027、4.298、2.132。
4.根据权利要求2或3所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖，其特征在于，所述戊糖片球菌LL-07胞外多糖GEPS包括GEPS-1M、GEPS-2M、GEPS-3M三种多糖；所述LEPS包括LEPS-1M、LEPS-2M、LEPS-3M三种多糖；所述FEPS包括FEPS-1M、FEPS-2M两种多糖。
5.根据权利要求4所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖，其特征在于，GEPS-1M、LEPS-1M、FEPS-1M为中性多糖；GEPS-2M、GEPS-3M、LEPS-2M、LEPS-3M、FEPS-2M为酸性多糖。
6.根据权利要求4所述的戊糖片球菌LL-07胞外多糖，其特征在于，所述GEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.46％、L-***糖0.24％、D-半乳糖5.75％、D-葡萄糖15.72％、D-甘露糖75.37％、D-核糖2.24％；所述GEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖1.79％、L-***糖0.42％、D-半乳糖13.45％、D-葡萄糖12.45％、D-甘露糖71.90％；所述GEPS-3M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.69％、L-***糖0.49％、D-半乳糖57.07％、D-葡萄糖37.31％、D-甘露糖4.44％；所述LEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.19％、L-***糖0.13％、D-半乳糖12.24％、D-葡萄糖14.74％、D-甘露糖70.92％、D-核糖1.77％；所述LEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.79％、L-***糖0.27％、D-半乳糖10.64％、D-葡萄糖8.29％、D-甘露糖80.01％；所述LEPS-3M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.58％、L-***糖0.51％、D-半乳糖60.08％、D-葡萄糖32.92％、D-甘露糖5.91％；所述FEPS-1M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖1.01％、L-***糖1.11％、D-半乳糖13.10％、D-葡萄糖11.51％、D-甘露糖73.28％；所述FEPS-2M的单糖组成按mol％计包括L-岩藻糖0.09％、L-***糖0.07％、D-半乳糖0.64％、D-葡萄糖3.07％、D-甘露糖96.13％。
7.一种权利要求2~6任一所述的戊糖片球菌胞外多糖在制备抗氧化、和/或抑制α淀粉酶的产品中的应用，其特征在于，所述戊糖片球菌胞外多糖为GEPS、LEPS中的一种或两种。
8.一种权利要求2~6任一所述的戊糖片球菌胞外多糖在制备保湿产品中的应用，其特征在于，所述戊糖片球菌胞外多糖为FEPS。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117431173A (zh) * 2023-09-13 2024-01-23 北京蓝晶微生物科技有限公司 一种抗菌高原戊糖片球菌tr-37及其无细胞提取物和应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LV13871B (lv) * 2007-07-05 2009-06-20 Univ Latvijas Pediococcus pentosaceus laktozes pozitīvais celms un tā sintezētais fruktānus saturošais eksopolisaharīdu komplekss
KR101523205B1 (ko) * 2013-08-28 2015-05-28 한국식품연구원 페디오코쿠스 펜토사세우스 kft-18 및 이를 이용하여 세포외다당류를 대량 생산하는 방법
CN105969680B (zh) * 2016-03-23 2019-07-05 贵州大学 一株降胆固醇、降亚硝酸盐的戊糖乳杆菌及其筛选方法
CN106222103B (zh) * 2016-07-21 2019-09-17 陕西理工大学 一株产胞外多糖的戊糖片球菌及其应用
CN113755403A (zh) * 2021-10-12 2021-12-07 浙江省农业科学院 一种产胞外多糖的戊糖乳杆菌及其发酵工艺和应用
CN113980848B (zh) * 2021-11-01 2023-10-31 河北科技大学 一种戊糖片球菌sbc5及其应用
CN114085875B (zh) * 2021-11-10 2023-04-25 四川大学 一种胞外多糖、制备方法及其应用
CN114085791A (zh) * 2021-11-12 2022-02-25 内蒙古农业大学 一种戊糖片球菌He10-a-1及其用途
CN114891683A (zh) * 2022-05-26 2022-08-12 梁天晓 一株戊糖片球菌及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117431173A (zh) * 2023-09-13 2024-01-23 北京蓝晶微生物科技有限公司 一种抗菌高原戊糖片球菌tr-37及其无细胞提取物和应用

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