CN110607254B - 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物学领域，公开了一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法，所述菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)DMBA‑K4，已于2019年4月16日保藏于保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏编号为GDMCC NO:60644。胞外多糖制备方法，步骤包括：1)菌种活化；2)扩大培养，扩大培养基的pH为7.5±0.5，碳源为蔗糖，氮源为质量比为1:(1～2)的胰蛋白胨+酵母提取物；3)发酵培养；4)胞外粗多糖的提取。本发明的方法能有效提高该菌胞外多糖的得率，获得有一定抗氧化活性的胞外多糖。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法
技术领域
本发明涉及一种益生菌胞外多糖的提取方法，属于微生物学领域。
背景技术
益生菌胞外多糖是指一些益生菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的次级代谢产物，根据其与细胞壁结合的能力强弱可分为两种，一种失去与细胞结合的能力而渗入培养基形成粘液，称粘液多糖；另一种粘附于细胞壁形成荚膜，称荚膜多糖。在自然环境中，胞外多糖通常起着保护微生物的作用，它可以避免细胞干燥脱水，遭噬菌体侵染、受抗生素或者有毒物质损害、原生动物伤害，还可以稳定渗透压、支持细胞结构、参与细胞信息传递和细胞构成等。
益生菌胞外多糖作为一种安全的天然产物，因其独特的理化特性，越来越多地被应用于食品工业中。它能改善乳制品和豆乳制品的流变性、乳化性、黏着性以及质构特性，使其变得更加细腻均匀、平滑稠密，还因其较高的熔点，可用于热加工食品的制作中，如焙烤类食品。近年来，由于科技进步和人们对健康的追求，益生菌胞外多糖的抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等生理功能也逐步吸引人们的目光。
在胞外多糖提取过程中，常用的除蛋白方法是三氯乙酸法。这种方法反应程度剧烈，对多糖的结构破坏较大。除此之外，三氯乙酸是一种有机试剂，具有毒性，用这种方法得到的胞外多糖不适于功能性研究与应用。
因为益生菌菌株具有不同的生长特性，按照现有的生产方法，其胞外多糖产量范围较大。最低得率可能是几十毫克每升，制约其工业化生产。因此，提高胞外多糖的产量与提取量是一个迫切的问题。
发明内容
针对益生菌胞外多糖产量的问题，本发明的目的是提供一种能提高益生菌胞外多糖产量的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明解淀粉芽孢杆菌为DMBA-K4的生物学特性：在LB固体培养基上的单菌落呈圆形、微凸、白色且表面光滑。
一种解淀粉芽孢杆菌，所述菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)DMBA-K4，已于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏编号为GDMCC NO:60644。
一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为108～109CFU/mL；
(2)扩大培养：将上述种子发酵液按体积比3±1：100接入扩大培养基中，摇床上培养，得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；所述扩大培养基的 pH为7.5±0.5，碳源为蔗糖，氮源为质量比为1:(1～2)的胰蛋白胨+酵母提取物；
(3)除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心，除去沉淀菌体，保留上清液；
(4)醇沉：向上清液加入乙醇，静置，离心，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析；
(5)除蛋白：向步骤(4)中所得的液体加入sevage试剂，室温下置于摇床振荡，使蛋白吸附在有机相中，然后离心，保留水相，重复操作，直至蛋白完全除去。
优选地，步骤(2)中，按质量体积比(w/v)计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.4～0.6％，酵母提取物0.7～0.8％，胰蛋白胨0.7～0.8％，蔗糖 0.3～0.5％，余量为水。
优选地，所述的扩大培养基于0.08～0.10MPa灭菌15～20min，冷却至 36～38℃。
优选地，步骤(2)中，摇床转速为150～180r/min，温度为28～32℃，时间为12±4h。
优选地，步骤(3)和(4)中，离心时间是15～20min，离心温度为4℃，转速为10000rpm/min；步骤(5)离心条件为4000×g离心1min。
优选地，步骤(4)中，乙醇浓度为95％，按体积比，乙醇：上清液＝3:1， 4℃静置24h。
优选地，步骤(4)中，透析的时间为24～48h。
优选地，步骤(5)中，按体积比，sevage试剂：透析液＝1:4，其中sevage 试剂为氯仿：正丁醇＝4:1。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)本发明通过优化培养基的配方和培养发酵的条件，提高了益生菌胞外多糖的得率。
(2)通过本发明的方法制备的益生菌微生物胞外多糖具有抗氧化活性。
(3)本发明采用sevage试剂，通过吸附作用除去多糖提取液中的蛋白质，反应条件温和，对多糖结构破坏程度较小。
本发明解淀粉芽孢杆菌为DMBA-K4，已于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏编号为GDMCC NO:60644，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。根据16SrDNA寡核苷酸序列(如SEQ ID NO：1所示)，生理生化特性鉴定 DMBA-K4为解淀粉芽孢杆菌。
附图说明
图1是实施例1解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4生长曲线。
图2是实施例1Box-Behnken优化实验拟合响应曲面交互作用影响图；(a) A：时间与B：pH交互作用影响等高线图，(b)A：时间与B：pH交互作用影响3D曲面图，(c)A：时间与C：接种量交互作用影响等高线图，(d)A：时间与C：接种量交互作用影响3D曲面图，(e)B：pH与C：接种量交互作用影响等高线图，(f)B：pH与C：接种量交互作用影响3D曲面图。
图3是实施例2中DPPH自由基清除实验结果图；左两支试管是加入解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖的实验组，左边第三支试管是对照组，最右边一支试管是空白试验。
图4是实施例2中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖对DPPH自由基清除作用图。
图5是实施例2中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖对OH自由基清除作用图。
图6是实施例3中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖的DEAE色谱洗脱曲线。
图7是实施例3中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的胞外多糖的紫外吸收光谱。
图8是实施例3中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖的红外吸收光谱。
图9是实施例3中GPC测定葡聚糖标品分子量的标准曲线。
图10是实施例3中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖凝胶渗透色谱图(GPC)。
图11是实施例3中解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖水解液的液相色谱图。
图12(A)和图12(B)是实施例3中观察解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的胞外多糖扫描电镜图(12A:1000×，12B:5000×)。
图13是解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的菌落形态图。
图14是解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4显微镜下革兰氏染色后细菌形态图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于此。
实施例1：胞外多糖产量优化
第一步菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌的斜面保种置于LB培养基中分别进行两次活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为108CFU/mL；
第二步扩大培养：将上述种子发酵液按体积比为3～10:100比例接入扩大培养基中，于30℃培养12h，摇床转速为180rpm/min；以质量份数计，所述的扩大培养基为：氯化钠，胰蛋白胨，酵母提取物，蔗糖，用蒸馏水定容至 100份，调节pH至7.5，搅拌溶解均匀后于0.10MPa灭菌15min，冷却备用。
第三步除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液以转速10000rpm、温度为4℃离心15min，除去沉淀菌体，保留上清液；
第四步醇沉：向上清液加入3倍体积比的95％乙醇，4℃静置24h，离心15min，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析24h；
第五步除蛋白：向上述所得的液体加入1/4体积比sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，室温下置于摇床振荡30min，使蛋白吸附在有机相中，然后4000 ×g离心1min，保留水相。重复4～5次，直至蛋白完全除去，冻干保存。
通过对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4培养条件的研究，以发酵时间对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4OD600nm作曲线如图1，从图1可以看出8h时OD600达到最高值，此时活菌数为(1.28±0.13)×108CFU/mL。
所述的第二步扩大培养基通过单因素优化、Plackett-Burmen实验而获得，具体如下：
1.1培养基配方单因素优化
1.1.1碳源优化
在基础LB培养基基础上改变碳源的种类，分别加入1％蔗糖、1％葡萄糖、 1％麦芽糖、1％乳糖、1％甘露糖。从表1可以看出，当碳源选择为蔗糖时，胞外多糖产量最高(p<0.05)。
表1不同碳源种类对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000051
选择蔗糖作为培养基的碳源种类进行进一步的优化，在基础LB培养基基础上分别加入1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％蔗糖。从表2可以看出，当蔗糖添加量为4％或5％时，获得胞外多糖量最高(p<0.05)，从经济效益考虑，选择蔗糖含量为4％作为最优的碳源。
表2蔗糖添加量对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000052
注：单位％指：蔗糖添加量是质量体积比(g/ml)。
1.1.2氮源优化
在基础LB培养基基础上改变氮源的种类，分别加入质量比为1:1的胰蛋白胨+酵母提取物、胰蛋白胨+牛肉膏、牛肉膏+酵母提取物、蛋白胨+牛肉膏、蛋白胨+胰蛋白胨。从表3可以看出，当氮源种类选择为胰蛋白胨+酵母提取物时，胞外多糖产量最高(p<0.05)。没有添加酵母提取物的培养基，胞外多糖产量较低，由此可见，酵母提取物在培养基中对胞外多糖积累起关键作用。
表3不同氮源种类对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000053
Figure BDA0002180611840000061
选择胰蛋白胨+酵母提取物作为培养基的氮源种类进行进一步的优化，在基础LB培养基基础上加入胰蛋白胨+酵母提取物，质量比分别是1:1、1:2、 1:3、2:1、3:1。从表4可以看出，当胰蛋白胨+酵母提取物质量比为1:1时，获得胞外多糖量最高(p<0.05)。因此，选择质量比为1:1的胰蛋白胨+酵母提取物作为最优的碳源。
表4胰蛋白胨+酵母提取物质量比对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000062
1.1.3培养时间优化
用经过优化的培养基进行后续实验，培养时间分别为8h、12h、16h、20h、24h。从表5可以看出，当培养时间为12h时，获得胞外多糖量最高(p<0.05)。推测可能是随着培养时间的延长，糖水解酶的积累会时胞外多糖产量下降。
表5不同培养时间对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000063
1.1.4培养基pH优化
用经过优化的培养基进行后续实验，培养基pH分别为6、6.5、7、7.5、8。从表6可以看出，当pH为7.5时，获得胞外多糖量最高(p<0.05)。可以认为 pH为7.5是解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产糖较佳的酸碱环境。
表6不同pH对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000064
Figure BDA0002180611840000071
1.1.5接种量优化
在上面实验基础上，优化菌液接种量。分别取接种量为1％、2％、3％、 4％、5％。从表7可以看出，当接种量为3％时，获得胞外多糖量最高(p<0.05)。
表7不同接种量对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4产胞外多糖量的影响
Figure BDA0002180611840000072
1.2培养发酵条件优化设计
使用Design Expert 8.0.5软件进行培养发酵条件优化。选择Box-Behnken 对培养时间、培养pH、接种量进行优化实验。
表8 Box-Behnken实验结果表
Figure BDA0002180611840000073
Figure BDA0002180611840000081
利用Box-Behnken的中心组合设计实验数据进行分析，然后利用Design Expert8.0.5软件进行分析。
表9 Box-Behnken实验分析表
Figure BDA0002180611840000082
由表9可知，拟合模型的p<0.0001，决定系数R2＝0.9495，说明模型与实际情况拟合良好。根据以上分析得知产糖量Y值对自变量时间(A)、pH(B)、接种量(C)的多元回归方程：
P＝169.48-4.03*A+4.34*B-0.70*C+2.19*AB+0.26*AC-5.01*BC-34.26* A2-15.80*B2-8.13*C2
该方程表达了解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖产量和3个自变量之间的线性关系是显著的，即这种方法是可靠的。回归方程的一次项系数A、B 比较大，交互项系数中AB、BC的交互系数比较大，说明时间和pH、pH和接种量之间的交互效应大，而AC的交互系数比较小，说明时间和接种量之间的交互效应小。
为了检验方程的有效性，对测定的解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖产量的数学模型进行方差分析，并对各因子的偏回归系数进行检测。一次项中 A、B的回归系数较显著(p＜0.05)，说明时间和pH对解淀粉芽孢杆菌 DMBA-K4胞外多糖产量有比较显著的作用。而B的回归系数比A的回归系数小，说明不同pH对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖产量影响大于时间。二次项A、B、C的偏回归系数达到极显著水平。拟合度R2＝0.9495，说明该方程对实验拟合度良好。
对二次回归方程求一阶偏导，当响应值Y(产糖量)最大值时各因子水平为：时间11.78h、pH为7.57、接种量为2.91。此时理论预测解淀粉芽孢杆菌 DMBA-K4胞外多糖产量为169.944mg/mL。
实施例2：
一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的斜面保种置于LB培养基中分别进行两次活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为 108～109CFU/mL；
(2)扩大培养：将上述种子发酵液按体积比为3：100比例接入扩大培养基中，摇床上培养12h，摇床温度为30℃，转速为180rpm/min。得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；
(3)除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心15min，设置离心机温度为4℃，转速为10000rpm/min，除去沉淀菌体，保留上清液；
(4)醇沉：向上清液加入3倍体积比的95％乙醇，4℃静置24h，离心 15min，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析24h；
(5)除蛋白：向步骤(4)中所得的液体加入1/4体积比sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，室温下置于摇床振荡30min，使蛋白吸附在有机相中，然后4000×g离心1min，保留水相。重复4～5次，直至蛋白完全除去，冻干保存。
按质量体积比(w/v)计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.5％，酵母提取物0.75％，胰蛋白胨0.75％，蔗糖0.4％。
所述的扩大培养基为：将上述原料用蒸馏水定容至100份，调节pH至7.5，搅拌溶解均匀后于0.08～0.10MPa，灭菌15～20min，冷却至36～38℃备用。
所述的离心温度为4℃，离心转速为10000rpm/min。
对上述培养发酵条件进行验证试验，实际的胞外多糖产量为175.46mg/mL。
实施例3：
一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的斜面保种置于LB培养基中分别进行两次活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为 108～109CFU/mL；
(2)扩大培养：将上述种子发酵液按体积比为3：100比例接入扩大培养基中，摇床上培养8h，摇床温度为30℃，转速为180rpm/min。得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；
(3)除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心15min，设置离心机温度为4℃，转速为10000rpm/min，除去沉淀菌体，保留上清液；
(4)醇沉：向上清液加入3倍体积比的95％乙醇，4℃静置24h，离心 15min，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析24h；
(5)除蛋白：向步骤(4)中所得的液体加入1/4体积比sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，室温下置于摇床振荡30min，使蛋白吸附在有机相中，然后4000×g离心1min，保留水相。重复4～5次，直至蛋白完全除去，冻干保存。
按质量体积比(w/v)计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.5％，酵母提取物0.75％，胰蛋白胨0.75％，蔗糖0.4％。
所述的扩大培养基为：将上述原料用蒸馏水定容至100份，调节pH至8.0，搅拌溶解均匀后于0.08～0.10MPa，灭菌15～20min，冷却至36～38℃备用。
所述的离心温度为4℃，离心转速为10000rpm/min。
对上述培养发酵条件进行验证试验，实际的胞外多糖产量为124.22mg/mL。
实施例4：
一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的斜面保种置于LB培养基中分别进行两次活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为 108～109CFU/mL；
(2)扩大培养：将上述种子发酵液按体积比为2：100比例接入扩大培养基中，摇床上培养16h，摇床温度为30℃，转速为180rpm/min。得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；
(3)除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心15min，设置离心机温度为4℃，转速为10000rpm/min，除去沉淀菌体，保留上清液；
(4)醇沉：向上清液加入3倍体积比的95％乙醇，4℃静置24h，离心 15min，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析24h；
(5)除蛋白：向步骤(4)中所得的液体加入1/4体积比sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，室温下置于摇床振荡30min，使蛋白吸附在有机相中，然后4000×g离心1min，保留水相。重复4～5次，直至蛋白完全除去，冻干保存。
按质量体积比(w/v)计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.5％，酵母提取物0.75％，胰蛋白胨0.75％，蔗糖0.4％。
所述的扩大培养基为：将上述原料用蒸馏水定容至100份，调节pH至7.5，搅拌溶解均匀后于0.08～0.10MPa，灭菌15～20min，冷却至36～38℃备用。
所述的离心温度为4℃，离心转速为10000rpm/min。
对上述培养发酵条件进行验证试验，实际的胞外多糖产量为123.65mg/mL。
实施例5：
一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的斜面保种置于LB培养基中分别进行两次活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为 108～109CFU/mL；
(2)扩大培养：将上述种子发酵液按体积比为4：100比例接入扩大培养基中，摇床上培养12h，摇床温度为30℃，转速为180rpm/min。得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；
(3)除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心15min，设置离心机温度为4℃，转速为10000rpm/min，除去沉淀菌体，保留上清液；
(4)醇沉：向上清液加入3倍体积比的95％乙醇，4℃静置24h，离心 15min，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析24h；
(5)除蛋白：向步骤(4)中所得的液体加入1/4体积比sevage试剂(氯仿：正丁醇＝4:1)，室温下置于摇床振荡30min，使蛋白吸附在有机相中，然后4000×g离心1min，保留水相。重复4～5次，直至蛋白完全除去，冻干保存。
按质量体积比(w/v)计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.5％，酵母提取物0.75％，胰蛋白胨0.75％，蔗糖0.4％。
所述的扩大培养基为：将上述原料用蒸馏水定容至100份，调节pH至7.0，搅拌溶解均匀后于0.08～0.10MPa，灭菌15～20min，冷却至36～38℃备用。
所述的离心温度为4℃，离心转速为10000rpm/min。
对上述培养发酵条件进行验证试验，实际的胞外多糖产量为146.96mg/mL。
实施例6：自由基清除实验
6.1DPPH自由基清除实验
分别取0.5mL不同浓度梯度(1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、 5mg/mL)的样品加入0.5mL 0.2mM DPPH·，用无水乙醇作为空白，对照组以抗坏血酸代替样品。测定OD519nm。每组实验重复3次。
计算清除率公式：
DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A样-A空)/A对照]×100％
A样：0.5mL样品+0.5mL 0.2mM DPPH·
A空：0.5mL样品+0.5mL无水乙醇
A对照：0.5mL无水乙醇+0.5mL 0.2mM DPPH·
6.2OH自由基清除实验
取0.5mL不同浓度样品(1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL) +0.5mL9.0mmol/L水杨酸-乙醇溶液+0.5mL 9mmol/L FeSO4 +0.5mL 8.8mmol/L H2O2，37℃水浴反应30min后流水冷却，在510nm处测定吸光度为A1；以蒸馏水替代H2O2，同上操作，在510nm处测定吸光度为A0；以蒸馏水替代样品，同上操作，在510nm处测定吸光度为Ax。以对照组以抗坏血酸代替样品。每组实验重复三次。
OH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A0)/Ax]×100％
实验结果：如图4所示，解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖对DPPH 自由基的清除效率随着样品的浓度提高而提高。当胞外多糖浓度达到5mg/mL 时，DPPH自由基清除效果达到70.71％。
如图5所示，解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖对OH自由基的清除效率随着样品的浓度提高而提高。当胞外多糖浓度达到0.6mg/mL时，羟基自由基清除效果达到30％。
实施例7：胞外多糖结构解析
7.1DEAE Sepharose fast flow柱对胞外多糖纯化
对DEAE Sepharose fast flow凝胶进行预处理并装柱。用50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)溶解粗多糖样品50mg，配制成5mg/mL的粗多糖溶液。用DEAE Sepharose fastflow凝胶对粗多糖溶液进行吸附，再分别用NaCl浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mol/L的50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)依次进行梯度洗脱，收集不同NaCl浓度下的洗脱液，每管收集5mL洗脱液，每个浓度收集4管，并用苯酚-硫酸法测定各管的多糖含量，绘制多糖洗脱曲线，合并相同组分。
结果如图6所示，在其洗脱曲线中出现了两个不同的峰，第一个峰是由 NaCl浓度为0mol/L的磷酸盐缓冲液洗脱得到，苯酚硫酸法测得的OD490nm最高，说明是DMBA-K4胞外多糖的主要成分，该部分洗脱液为中性多糖，收集该部分洗脱液，利用凝胶渗透色谱法进一步对其分子量进行测定。第二个峰是由NaCl浓度为0.6mol/L的磷酸盐缓冲液洗脱得到的，洗脱峰较小，说明多糖含量很少，因此不对该组份进行分析。
7.2DMBA-K4胞外多糖紫外光谱扫描
取20mg纯化后的多糖，定容至20mL，配制成1mg/mL的多糖溶液，用紫外可见光分光光度仪在200～440nm进行扫描，对其扫描结果进行分析。
对纯化后的DMBA-K4胞外多糖溶液进行波长200-440nm紫外光谱扫描，结果如图7所示。在波长260nm和280nm处，纯化后的DMBA-K4胞外多糖溶液没有明显的吸收峰，说明纯化过后的DMBA-K4胞外多糖样品中核酸和蛋白质的含量极低。
7.3DMBA-K4胞外多糖红外光谱扫描
将1mg干燥的多糖样品与200mg干燥的溴化钾粉末混合并研磨均匀，通过压片机压成薄片，再使用傅里叶红外光谱仪进行4000-500cm-1范围的红外光谱扫描，通过实验结果对多糖的化学键和官能团等进行分析。
对样品进行4000cm-1-500cm-1的红外光谱扫描，结果如图8所示。 DMBA-K4胞外多糖的红外光谱表现出明显的碳水化合物吸收峰。3277cm-1处出现宽而强的吸收峰，这是由O-H伸缩振动引起的；在2928cm-1处的吸收峰，是甲基或亚甲基中的C-H伸缩振动的结果；在1649cm-1处存在的吸收峰对应 C＝O不对称伸缩振动，说明多糖中可能存在游离羧基，同时糖的水化物通常在1650-1600cm-1存在吸收峰；1408cm-1处为-OH变形振动引起的吸收峰。1032cm-1处的吸收是由C-O-H和C-O-C两种C-O伸缩振动引起的。1220cm-1处的弱吸收峰是C-H的弯曲振动引起的。905cm-1处的吸收峰表示β-糖苷键。
7.4凝胶渗透色谱测定多糖分子量
称取一定量的多糖，把多糖样品用流动相充分溶解以及混匀，配制成终浓度为2～3mg/mL的多糖溶液，用0.45μm的水系滤膜过滤，进样量10μL，运行时间45min，记录图谱，使用Breeze软件，对样品进行积分，用葡聚糖标准曲线分析结果，得到多糖的分子量大小及分布。
标准曲线的绘制：用低浓度磷酸二氢钾水溶液溶解8种不同分子量的葡聚糖标准品，其相对分子质量在1×103～1×107Da范围内的，充分混匀，得到浓度为2mg/mL的葡聚糖标准溶液，用0.45μm的水系滤膜过滤后，用高效凝胶渗透色谱(GPC)***进行检验分析，用Breeze软件处理实验数据，以葡聚糖标品相对分子质量的对数(logMw)作为纵坐标，洗脱体积(V)为横坐标，进行拟合，得到回归方程和标准曲线。
色谱条件：流动相为0.02mol/L的KH2PO4缓冲溶液，凝胶柱为TSK G-5000PWXLcolumn(7.8×300mm)和TSK G-3000PWXL column(7.8×300mm)串联使用，流速为0.6mL/min，waters 2414示差检测器，柱温35℃。
利用凝胶渗透色谱测定解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖的重均分子量(Mw)，以分子量大小在1×103～1×107Da范围内的葡聚糖标准品作为对照，绘制标准曲线(Log MW＝-0.293VE+9.667，R2＝0.9963)，如图9所示。解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖的凝胶渗透色谱图如图10所示，根据回归方程对样品的重均分子量(Mw)进行计算，得出多糖样品的Mw为91.146kDa。
7.5DMBA-K4胞外多糖的单糖组成分析
取5mg纯化后的多糖样品，加入2mol/L三氟乙酸4mL，混合均匀，在110℃下水解2h，用旋转蒸发仪对溶液进行减压蒸干，再向溶液中加入80％的甲醇溶液3mL，再用旋转蒸发仪进行减压蒸干，重复4-5次，以充分除去溶液中的三氟乙酸，并定容至5mL，用液相色谱进行分析。
单糖标准品溶液的配制：称取葡萄糖、果糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖六种单糖标品各10mg，分别定容至10mL，得到1.0mg/mL的六种单糖标准品溶液，用液相色谱进行分析，得到各单糖的保留时间，与多糖水解样品作比对，从而判断多糖的单糖组成。
混合单糖标准品溶液的配制：称取葡萄糖、果糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖六种单糖标准品各50mg，分别定容至5mL，得到10mg/mL的各单糖标准品溶液，各取六种单糖标准品溶液1mL，充分混匀，再定容至10mL，得到各单糖浓度均为1.0mg/mL的混合标准单糖溶液，在分别稀释至0.2、0.4、 0.6、0.8mg/mL，得到五个浓度的混合标准品溶液，进行液相色谱分析，根据不同浓度单糖的峰面积，建立各单糖的标准曲线和回归方程，从而对多糖的单糖组成进行定量分析。
先对半乳糖、甘露糖、果糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖以及混合标准品进样，测定各单糖的保留时间，并根据各单糖浓度对应的峰面积得到其回归方程，结果如表10所示。
表10各单糖标准品的保留时间和回归方程
Figure BDA0002180611840000151
而后，对DMBA-K4胞外多糖样品的水解溶液进样，得到水解液的各组分的保留时间及其峰面积，结果如图11所示。通过与标准单糖样品进行比对，得出多糖由葡萄糖、甘露糖及果糖等组成。再根据各组分的峰面积以及单糖回归方程计算各组分的含量，得出多糖中果糖、葡萄糖、甘露糖的摩尔比为1： 1.02：13.52。
7.6DMBA-K4胞外多糖扫描电镜分析
取适量的纯化后的DMBA-K4胞外多糖冻干粉，均匀贴于洁净云母片上，并将多余的样品吹去，再对样品进行喷金处理，再用扫描电镜对样品进行观察。
对解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4胞外多糖进行扫描电镜观察，结果如图12(A)12(B)所示。从图中可见，解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4的胞外多糖冻干粉呈现不规则的片状结构，并伴随大小不一的孔洞，在5000倍放大倍数下观察，EPS表现出较为光滑的表面结构。
序列表
<120> 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1460
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gcaagtgcgg gcgtgctaat acatgcaagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga 60
tgttagcggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc 120
cgggaaaccg gggctaatac cggatggttg tttgaaccgc atggttcaga cataaaaggt 180
ggcttcggct accacttaca gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg 240
ctcaccaagg cgacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag 300
acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc 360
tgacggagca acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg 420
gaagaacaag tgccgttcaa atagggcggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg 480
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt 540
gggcgtaaag ggctcgcagg cggtttctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg 600
gggagggtca ttggaaactg gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg 660
tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct 720
gtaactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc 780
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 840
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 900
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 960
caggtcttga catcctctga caatcctaga gataggacgt ccccttcggg ggcagagtga 1020
caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 1080
agcgcaaccc ttgatcttag ttgccagcat tcagttgggc actctaaggt gactgccggt 1140
gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta 1200
cacacgtgct acaatggaca gaacaaaggg cagcgaaacc gcgaggttaa gccaatccca 1260
caaatctgtt ctcagttcgg atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagc tggaatcgct 1320
agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg 1380
tcacaccacg agagtttgta acacccgaag tcggtgaggt aacctttatg gagccagccg 1440
ccgaaggtga acagaattgg 1460

Claims (10)

1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在，所述菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）DMBA-K4，已于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏编号为GDMCC NO: 60644。
2.一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）菌种活化：将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为108~109CFU/mL；
（2）扩大培养：将上述种子发酵液按体积比3±1：100接入扩大培养基中，摇床上培养，得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；所述扩大培养基的pH为7.5±0.5，碳源为蔗糖，氮源为质量比为1:（1~2）的胰蛋白胨+酵母提取物；
（3）除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心，除去沉淀菌体，保留上清液；
（4）醇沉：向上清液加入乙醇，静置，离心，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析；
（5）除蛋白：向步骤（4）中所得的液体加入sevage试剂，室温下置于摇床振荡，使蛋白吸附在有机相中，然后离心，保留水相，重复操作，直至蛋白完全除去。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，按质量体积比（w/v）计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.4~0.6%，酵母提取物0.7~0.8%，胰蛋白胨0.7~0.8%，蔗糖0.3~0.5%，余量为水。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的扩大培养基于0.08~0.10MPa灭菌15~20min，冷却至36~38℃。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，摇床转速为150~180r/min，温度为28~32℃，时间为12±4h。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）和（4）中，离心时间是15~20min，离心温度为4℃，转速为10000rpm/min；步骤（5）离心条件为4000×g离心1min。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，乙醇浓度为95%，按体积比，乙醇：上清液=3:1，4℃静置24h。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，透析的时间为24~48h。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，按体积比，sevage试剂：透析液=1:4，其中sevage试剂为氯仿：正丁醇=4:1。
10.权利要求2~9任一项所述的方法制备的解淀粉芽孢杆菌胞外多糖。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112143664B (zh) * 2020-07-08 2022-02-11 常熟理工学院 一株贝莱斯芽孢杆菌株及其在合成微生物多糖中的应用
CN112043723B (zh) * 2020-08-21 2022-05-24 华南理工大学 一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的应用
CN114163542A (zh) * 2021-11-26 2022-03-11 中国农业科学院植物保护研究所 一种含有胞外多糖的提取物、胞外多糖及组合物
CN115011531B (zh) * 2022-07-21 2023-07-14 北京工商大学 一种解淀粉芽孢杆菌ba-1，溶胞产物及其制备方法，在化妆品中的应用和面霜
CN116925962B (zh) * 2023-06-19 2024-03-29 东北农业大学 具有肠道菌群和免疫调节功能的解淀粉芽孢杆菌jm033产胞外多糖及其应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816716A (zh) * 2012-07-31 2012-12-12 西安交通大学 一株解淀粉芽孢杆菌菌株的胞外多糖代谢产物提取及应用
CN105112326A (zh) * 2015-08-19 2015-12-02 华南理工大学 一种芽孢杆菌及其高密度培养方法
CN106520641A (zh) * 2016-12-30 2017-03-22 甘肃尚农生物科技有限公司 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法
CN107586742A (zh) * 2017-10-18 2018-01-16 中国科学院天津工业生物技术研究所 一株高产果聚糖的解淀粉芽胞杆菌及其应用
CN108374030A (zh) * 2018-01-18 2018-08-07 昆明理工大学 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用
CN108486002A (zh) * 2018-03-14 2018-09-04 广西师范大学 一株产胞外多糖的罗汉果内生菌菌株及其生产胞外多糖的方法和胞外多糖的应用
CN110403011A (zh) * 2019-07-17 2019-11-05 华南理工大学 一种凝结芽孢杆菌发酵乳及其制备方法
US10941379B2 (en) * 2016-05-09 2021-03-09 Massachusetts Institute Of Technology Microbial system for biosynthesis of natural and engineered products coupled to in situ extraction in supercritical CO2

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816716A (zh) * 2012-07-31 2012-12-12 西安交通大学 一株解淀粉芽孢杆菌菌株的胞外多糖代谢产物提取及应用
CN105112326A (zh) * 2015-08-19 2015-12-02 华南理工大学 一种芽孢杆菌及其高密度培养方法
US10941379B2 (en) * 2016-05-09 2021-03-09 Massachusetts Institute Of Technology Microbial system for biosynthesis of natural and engineered products coupled to in situ extraction in supercritical CO2
CN106520641A (zh) * 2016-12-30 2017-03-22 甘肃尚农生物科技有限公司 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法
CN107586742A (zh) * 2017-10-18 2018-01-16 中国科学院天津工业生物技术研究所 一株高产果聚糖的解淀粉芽胞杆菌及其应用
CN108374030A (zh) * 2018-01-18 2018-08-07 昆明理工大学 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用
CN108486002A (zh) * 2018-03-14 2018-09-04 广西师范大学 一株产胞外多糖的罗汉果内生菌菌株及其生产胞外多糖的方法和胞外多糖的应用
CN110403011A (zh) * 2019-07-17 2019-11-05 华南理工大学 一种凝结芽孢杆菌发酵乳及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Characterization and Antioxidant Activity of the Exopolysaccharide Produced by Bacillus amyloliquefaciens GSBa-1;Zhao wen等;《Journal of Microbiol Biotechnology》;20180828;1282-1292页 *
Two novel exopolysaccharides from Bacillus amyloliquefaciens C-1: antioxidation and effect on oxidative stress;Yang haixia等;《Current Biology》;20141102;298-306页 *
解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4高产胞外多糖的发酵条件优化及其抗氧化活性研究;邝嘉华等;《食品与发酵工业》;20200604;28-35页 *
解淀粉芽孢杆菌胞外多糖发酵优化及功能研究;张丽姣;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工程科技Ⅰ辑》;20170715;B018-36页 *

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