CN116457348A - 新型ezh2抑制剂及其用途 - Google Patents

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CN116457348A
CN116457348A CN202280007243.0A CN202280007243A CN116457348A CN 116457348 A CN116457348 A CN 116457348A CN 202280007243 A CN202280007243 A CN 202280007243A CN 116457348 A CN116457348 A CN 116457348A
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雷永华
蒋茂
王心悟
李进
陈弘道
郑杨
刘浏
杨民民
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Nanjing Maisheng Technology Co.,Ltd.
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Abstract

公开了一种式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及其用于制备治疗EZH2介导的疾病药物的用途。

Description

新型EZH2抑制剂及其用途 技术领域
本申请属于化学医药领域，具体涉及一种新型EZH2抑制剂及其用途。
背景技术
多梳抑制复合物2(PRC2)核心组分(EZH2，EED和SUZ12)的活性异常与多种疾病，尤其是恶性肿瘤的发生、发展及侵袭密切相关。PRC2的核心组分EZH2在乳腺癌、***癌、大肠癌、软组织肉瘤、滤泡性淋巴瘤等多种恶性肿瘤组织中表达显著升高，其过表达水平与肿瘤恶化程度及不良预后呈正相关，通过遗传学方法下调EZH2的表达，可显著抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。同时在弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)等肿瘤细胞中已鉴定出EZH2的再发性体细胞突变。
Tazemetostat是目前FDA批准的唯一的EZH2抑制剂，用于治疗软组织肉瘤和滤泡性淋巴瘤(800mg/kg BID)。同时其他再开发的EZH2抑制剂均仍处于临床阶段，CPI-1205(临床I/II期)、CPI-0209(临床I期)、DS-3201(临床II期)、SHR-2554(临床II期)等。目前针对Tazemetostat的研究显示，其存在稳定性不足、给药剂量高、容易产生耐药性等问题，因此开发具有新颖的化合物结构、良好的活性及稳定性的EZH2抑制剂仍亟需进行。
发明内容
本申请公开了一类可作为EZH2抑制剂的化合物以及其在制备用于治疗EZH2介导的疾病的药物中的用途。
一方面，本申请提供了式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
L、U、V、T各自独立地选自C或N，且至少一个为N；
Y选自氢、卤素或C 1-C 6烷基；
X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
Z是C 3-C 7环烷基或4到7元杂环基，其中的每一个任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、卤代C 1-C 6烷氧基或-NRaRb的基团取代；
Ra是氢、C 1-C 6烷基或卤代C 1-C 6烷基；
Rb是C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或4到7元杂环基，其中所述杂环基任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基或卤代C 1-C 6烷氧基的基团取代；
或Ra和Rb与其所附接的氮原子一起形成任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或-ORc的基团取代的4到7元杂环基；
Rc是C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或C 3-C 7环烷基；
m、n’各自独立地为0、1或2；
n为0、1、2、3或4；以及
代表单键或双键。
在某些实施方案中，式(I)是式(Ia)：
其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
L、U、V、T各自独立地选自C或N，且至少一个为N；
Y选自氢、卤素或C 1-C 6烷基；
X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
m、n’各自独立地为0、1或2；
n为0、1、2、3或4；以及
代表单键或双键。
在某些实施方案中，式(I)是式(Ib)：
其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
U、V各自独立地选自C或N；
X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
m、n’各自独立地为0、1或2；
n为0、1、2、3或4；以及
代表单键或双键。
在某些实施方案中，式(I)是式(Ic)：
其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；U、V各自独立地选自C或N；
X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
m、n’各自独立地为0、1或2；
n为0、1、2、3或4；以及
代表单键或双键。
在某些实施方案中，式(I)所示的化合物选自：
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的前述化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、络合物、溶剂化物、水合物或异构体；以及药学上可接受的载体或赋形剂。
另一方面，本申请提供前述化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、络合物、溶剂化物、水合物或异构体用于制备治疗EZH2介导的疾病药物的用途。
在某些实施方案中，所述疾病为癌症。
在某些实施方案中，所述癌症为肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、胰腺癌、卵巢癌、***、结肠直肠癌、胶质瘤、黑色素瘤、***癌、肾癌、食道癌、间皮瘤、头颈癌、膀胱癌、唾腺癌、白血病或淋巴瘤。
另一方面，本申请提供式(II)所示的化合物或其立体异构体：
其中，R 1、R 2、R 3、U、V、m、n、n’、 如前述所定义，其可用于制备前述化合物。
术语：
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“异构体”包括给定结构的对映异构形式、非对映异构形式和几何(或构象)异构形式。例如，本申请包括每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体、Z和E构象异构体、单一立体化学异构体及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象)异构体混合物。
术语“药学上可接受的盐”指，诸如其酸加成盐和/或碱盐。合适的酸加成盐由酸形成，其形成无毒盐，例如盐酸盐/氯化物。合适的碱盐由碱形成，其形成无毒盐，例如钙盐和钠盐。 还可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
术语“治疗有效量”是指本申请化合物的以下量，其(i)治疗具体的疾病、病症或障碍；(ii)减轻、缓解或消除具体的疾病、病症或障碍的一种或多种症状；或(iii)预防或延迟本申请所述具体的疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。
术语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指不破坏用其配制的化合物的药理活性的无毒载体、辅料或媒介物。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。含有1至6个碳原子的低级烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。
术语“烯基”指具有至少一个碳-碳双键的脂族烃，包括具有至少一个碳-碳双键的直链和支链。在一些实施方案中，烯基基团具有2至20个碳原子、2至10个碳原子、2至6个碳原子、3至6个碳原子或2至4个碳原子。例如，术语“C 2-6烯基”包括2至6个碳原子的直链或支链不饱和基团(具有至少一个碳-碳双键)，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、异丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
术语“炔基”指具有至少一个碳-碳三键的脂族烃，包括具有至少一个碳-碳三键的直链和支链。在一些实施方案中，炔基基团具有2至20个碳原子、2至10个碳原子、2至6个碳原子、或3至6个碳原子。例如，“C 2-6炔基”包括2至6个碳原子的直链或支链不饱和基团(具有至少一个碳-碳三键)。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基如上所定义。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子(例如3、4、5或6个碳原子)，最优选包含5至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基，更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。
术语“稠环烷基”指5至20元，***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，优选四氢吡喃基、哌啶基、吡咯烷基。多环杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基，更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。
术语“稠杂环基”指5至20元，***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但每个环均不具有完全共轭的π电子***，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。
所述杂环基包括如上所述的杂环基(包括单环、螺杂环、稠杂环和桥杂环)稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基和哒嗪基等。
所述杂芳基包括如上所述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷氧基”指烷氧基被一个或多个氘原子取代，其中烷氧基如上所定义。
术语“环烷基烷基”指烷基被一个或多个环烷基取代，其中环烷基和烷基如上所定义。
术语“环烷基氧基”指-O-环烷基，其中环烷基如上所定义。
术语“杂环基烷基”指烷基被一个或多个杂环基取代，其中杂环基和烷基如上所定义。
术语“芳基烷基”指烷基被一个或多个芳基取代，其中芳基和烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH 2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO 2。
术语“羧基”指-C(O)OH。
具体实施方式
实施例1：10-((1r，4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二噁唑[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
在冰水浴下向反应瓶中加入3,4-二羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(20.00g，0.11mol，1.0eq.)，二氯甲烷(DCM，100mL)与乙酸(10mL)，而后滴加液溴(17.57g，0.11mol，1.0eq.)，自然升温至室温，过夜反应12h。旋干反应液，加入水(100mL)打浆，抽滤。滤饼用二氯甲烷(20mL)打浆后再次抽滤。将滤饼用油泵抽干，得中间体1.1(24.60g，85.9％产率)。MS:[M+H] +＝261。
将中间体1.1(24.60g，0.094mol，1.0eq.)溶于甲苯(250mL)。搅拌下加入反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(25.00g，0.11mol，1.2eq.)，Ru 3(CO) 12(1.81g，0.003mol，0.03eq.)，氮气置换3次后加热至105℃，过夜反应10h后补加反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(25.00g，0.11mol，1.2eq.)，Ru 3(CO) 12(1.81g，0.003mol，0.03eq.)，氮气抽充3次后加热至105℃，再反应10h。反应液冷却至室温后，垫硅藻土过滤。滤液浓缩后通过柱层析分离纯化(PE:EA)＝10:1，得到中间体1.2(36.70g，80.4％产率)。MS:[M+H] +＝485。
向反应瓶中加入中间体1.2(36.70g，0.076mol，1.0eq.)，加入乙酸酐(120mL)溶解，滴入1滴浓硫酸。冰盐浴条件下，滴加稀硝酸(110mL)。控制内温不超过45℃，滴加完毕后室温反应1h。将反应液倒入冰的30％氢氧化钠水溶液中(500mL)，乙酸乙酯萃取两次，饱和食盐水溶液洗涤有机相，并用MgSO 4干燥，旋干后得中间体1.3(32.60g，100％产率)， 直接投入下一步反应。
DCM溶解中间体1.3(32.60g，0.076mol，1.0eq.)，加入三乙胺(23.00g，0.23mol，3.0eq.)和DMAP(0.93g，0.0076mol，0.1eq.)。冰浴条件下，加入二碳酸二叔丁酯(24.80g，0.11mol，1.5eq.)。将该反应转移至室温，反应2h。浓缩反应液后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.4(22.89g，56.9％产率)。MS:[M+H] +＝530。
向装有中间体1.4(2.20g，0.0043mol，1.0eq.)的反应瓶中加入二异丙胺(200mL)和四氢呋喃(20mL)。搅拌溶解后加入CuI(7.74mg，0.043mmol，0.01eq.)、TMSA(1.57g，0.0086mol，2eq.)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(0.090g，0.13mmol，0.03eq.)。氮气置换三次后升温至70℃，反应6h。硅藻土过滤反应液。旋干反应液后，通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.5(1.89g，80.3％产率)，为深棕色油状物。MS:[M+H] +＝547。
向装有中间体1.5(1.89g，0.035mol，1.0eq.)的反应瓶中加入TBAF的四氢呋喃溶液(1M，10mL)，室温搅拌1h。旋干反应液后，加入水，乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤后无水硫酸镁干燥。通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.6(1.49g，90.9％产率)。MS:[M+H] +＝475。
向装有中间体1.6(1.49g，0.003mol，1.0eq.)的反应瓶中加入DCM(15mL)和DMF(15mL)。搅拌溶解后加入二水合氯化亚锡(3.56g，0.150mol，5.0eq.)。室温搅拌2h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(2L)。乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.7(0.89g，63.9％产率)。MS:[M+H] +＝445。
向装有中间体1.7(0.89g，0.002mol，1.0eq.)的反应瓶中，加入吡啶(10mL)、Cp(PPh 3) 2RuCl(0.15g，0.003mol，0.1eq.)。氮气置换三次后升温至90℃反应2h。硅藻土过滤反应液。通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.8(0.81g，90.6％产率)。MS:[M+H] +＝445。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.91(s,1H),7.30-7.24(m,1H),6.75(d,J＝7.9Hz,1H),6.37-6.34(m,1H),3.87(s,3H),3.25-3.10(m,1H),2.48(s,3H),1.93-1.74(m,5H),1.59(s,3H),1.36(s,9H),1.30-1.06(m,4H).
向装有中间体1.8(0.81g，0.0018mol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(50mL)，搅拌，降低温至0℃，缓慢加入NaH(0.087g，0.0022mol，1.2eq.)，反应0.5h后加入1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物(0.81g，0.0036mol，2.0eq.)。自然升温至室温，反应6h。向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，MgSO 4干燥。旋干得中间体1.9(0.62g，58.1％产率)。MS:[M+H] +＝588.
向装有中间体1.9(0.62g，0.001mol，1.0eq.)的反应瓶中加入甲醇(12mL)，再加入盐酸1,4-二氧六环溶液(4M，3mL)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液后得中间体1.10，直接投入下一步反应。
向装有中间体1.10的反应瓶中加入甲醇(10mL)，搅拌溶解后加入碳酸铯(0.98g，0.003mol，3.0eq.)，升温至70℃，反应2h。旋干反应液后得中间体1.11，直接投入下一步反应。
向装有中间体1.11的反应瓶中加入DCM(10mL)，搅拌溶解后加入三乙胺(0.30g，0.003mol，3.0eq.)，冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(0.33g，0.0015mol，1.5eq.)。转移至室温反应1h。旋干反应液后，通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得中间体1.12(0.29g，61.5％产率)。MS:[M+H] +＝456。
向装有中间体1.12(0.29g，0.60mmol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(5mL)，搅拌，冰水浴条件下加入t-BuOK(0.14g，12.0mol，2.0eq.)，搅拌20min后加入2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶(0.2g，0.72mmol，1.2eq.)。反应3h后，向反应液中加入水(50mL)，而后乙酸乙酯(50mL×3)萃取。饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后，通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.13(0.39g，90.4％产率)。MS:[M+H] +＝713。
将中间体1.13(0.39g，5.4mmol，1.0eq.)溶于5mL甲醇中，再加入盐酸1,4-二氧六环(1mL，7M)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液，得中间体1.14(0.28g，100％产率)。
将中间体1.14(0.28g，5.4mmol，1.0eq.)溶于5mL甲醇中，加入甲醛水溶液(0.5mL，37％，10eq.)，搅拌15min后加入STAB(0.57g，2.7mmol，5eq.)，再搅拌15min。而后旋干反应液，通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝8:1)，得实施例1标题化合物(0.28g，94.3％产率)。MS:[M+H] +＝551。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)11.70(s,1H),7.21(s,1H),6.30(s,1H),6.14(s,1H),4.73(s,2H),4.07(s,2H),3.51(s,2H),2.65(s,3H),2.41(d,J＝7.7Hz,6H),2.32-2.36(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),1.89(s,5H),1.59(s,3H),1.19-1.28(m,4H)。
实施例2：8-氯-10-((1r，4r)-4-(二甲氨基)环己基)-10-甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮
在冰水浴下向反应瓶中加入3,4-二羟基-2-氯苯甲酸甲酯(20g，0.10mol，1.0eq.)，二氯甲烷(100mL)与乙酸(10mL)，而后滴加液溴(17.50g，0.1mol，1.1eq.)，自然升温至室温，过夜反应12h。旋干反应液，加入水(100mL)打浆，抽滤。滤饼用二氯甲烷(20mL)打浆后再次抽滤。将滤饼用油泵抽干，得中间体2.1(24.00g，85.7％产率)。MS:[M+H] +＝280。 1H NMR(400MHz,DMSO),7.35(d,J＝3.3Hz,1H),3.70(s,3H)。
将中间体2.1(24.00g，0.085mol，1.0eq.)溶于甲苯(200mL)。搅拌下加入反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(20.00g，0.88mol，0.88.00eq.)，Ru 3(CO) 12(1.60g，0.00255mol，0.03eq.)，氮气置换3次后加热至105℃，过夜反应10h后补加反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(20.00g，0.88mol，0.88eq.)，氮气抽充3次后加热至105℃，再反应10h。反应液冷却至室温后，垫硅藻土过滤。浓缩后通过柱层析分离纯化(PE:EA)＝10:1，得到中间体2.2(24.00g，56.6％产率)。MS:[M+H] +＝504。
向反应瓶中加入中间体2.2(24.00g，0.047mol，1.0eq.)，加入乙酸酐(120mL)溶解，滴入1滴浓硫酸。冰盐浴条件下滴加稀硝酸(60mL)。控制内温不超过45℃，滴加完毕后室温反应1h。将反应液倒入冰的30％氢氧化钠水溶液中(300mL)，乙酸乙酯萃取两次，饱和食盐水溶液洗涤有机相，MgSO 4干燥，旋干后得中间体2.3(21.30g，100％产率)，直接投入下一步反应。
DCM溶解中间体2.3(21.30g，0.047mol，1.0eq.)，加入三乙胺(15.00g，0.15mol，3.0eq.)，DMAP(0.57g，0.0047mol，0.1eq.)。冰浴条件下加入二碳酸二叔丁酯(17.50g，0.64mol，1.5eq.)。转移至室温反应2h。浓缩反应液后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体2.4(20.80g，75.0％产率)。MS:[M+H] +＝549。 1H NMR(400MHz,DMSO),7.51(s,1H),6.75(d,J＝3.3Hz,1H),3.80(s,3H),3.21-3.05(m,1H),1.95-1.65(m,5H),1.70(s,3H),1.45(s,9H),1.30-1.15(m,4H)。
向装有中间体2.4(2.00g，3.80mmol，1.0eq.)的反应瓶中加入二异丙胺(20mL)和四氢呋喃(5mL)。搅拌溶解后加入CuI(7.10mg，0.038mmol，0.01eq.)、TMSA(1.38g，7.6mol，2eq.)、Pd(PPh 3) 2Cl 2(83.60mg，0.11mmol，0.03eq.)。氮气置换三次后升温至70℃，反应6h。硅藻土过滤反应液。旋干反应液后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体2.5(1.89g，80.3％产率)，为深棕色油状物。MS:[M+H] +＝567。
向装有中间体2.5(1.89g，3.30mmol，1.0eq.)的反应瓶中加入TBAF的四氢呋喃溶液(1M，10mL)，室温搅拌1h。旋干反应液后，加入水，乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤后无水硫酸镁干燥。通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体2.6(1.49g，90.3％产率)，为深棕色油状物。MS:[M+H] +＝495。
向装有中间体2.6(1.49g，0.0030mmol，1.0eq.)的反应瓶中加入DCM(15mL)和DMF(15mL)。搅拌溶解后加入二水合氯化亚锡(3.38g，0.0150mmol，5.0eq.)，室温搅拌2h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(2L)。乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体2.7(1.10g，78.6％产率)。MS:[M+H] +＝465。
向装有中间体2.7(1.10g，0.0023mol，1.0eq.)的反应瓶中，加入吡啶(50mL)、Cp(PPh 3) 2RuCl(0.15g，0.00023mol，0.1eq.)。氮气置换三次后升温至90℃反应2h。硅藻土过滤反应液。通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体1.8(1.00g，90.9％产率)。MS:[M+H] +＝465。
向装有中间体2.8(1.00g，0.0022mol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(20mL)。搅拌，降低温至0℃。缓慢加入NaH(0.10g，0.0026mol，1.2eq.)。0.5h后加入1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物(1.46g，0.0044mol，2.0eq.)。自然升温至室温，反应6h。向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，MgSO 4干燥。旋干得中间体2.9(0.95g，73.0％产率)。MS:[M+H] +＝608。
向装有中间体2.9(0.95g，0.0015mol，1.0eq.)的反应瓶中加入甲醇(12mL)，再加入盐酸1,4-二氧六环溶液(4M，3mL)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液后得中间体2.10，直接投入下一步反应。
向装有中间体2.10的反应瓶中加入甲醇(10mL)，搅拌溶解后加入碳酸铯(1.38g，0.0045mol，3.0eq.)，升温至70℃，反应2h。旋干反应液后得中间体2.11，直接投入下一步反应。
向装有中间体2.11的反应瓶中加入DCM(60mL)，搅拌溶解后加入三乙胺(0.58g，0.0045 mol，3.0eq.)，冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(0.49g，0.0225mol，1.5eq.)。转移至室温反应1h。旋干反应液后通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得中间体2.12(0.51g，71.4％产率)。MS:[M+H] +＝476。
向装有中间体2.12(0.51g，0.001mol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(30mL)，搅拌，冰水浴条件下加入t-BuOK(0.22g，0.002mol，2.0eq.)，搅拌20min后加入2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶(0.32g，0.0012mol，1.2eq.)。反应3h后，向反应液中加入水(200mL)，而后乙酸乙酯(80mL×3)萃取。饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体2.13(0.65g，91.5％产率)，为黄色固体。MS:[M+H] +＝733.
将中间体2.13(0.65g，0.89mmol，1.0eq.)溶于5mL甲醇中，再加入盐酸1,4-二氧六环(0.5mL，7M)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液，得中间体2.14(0.56g，100％产率)。
将中间体2.14(0.56g，0.89mmol，1.0eq.)溶于50mL甲醇中，加入甲醛水溶液(1.0mL，37％，10eq.)，搅拌15min后加入STAB(0.95g，4.45mmol，5eq.),再搅拌15min。而后旋干反应液，通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝8:1)，得实施例2标题化合物(0.28g，48.3％产率)。MS:[M+H] +＝571。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),7.35(d,J＝3.3Hz,1H),6.38(d,J＝3.3Hz,1H),6.15(s,1H),4.73(d,J＝17.8Hz,2H),4.23(d,J＝6.5Hz,2H),3.55(s,2H),2.63(s,3H),2.43(s,3H),2.49(s,3H),2.30-2.36(m,1H),2.22(s,3H),1.95-2.05(m,4H),1.65(d,J＝6.4Hz,3H),1.48-1.55(m,1H),1.25-1.40(m,4H)。
实施例3:10-((1r，4r)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-2,3-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲达唑-7(4H)-酮的合成
将3,4-二羟基-2,5-二甲基苯甲酸甲酯(10.0g，51.48mmol，1.0eq.)溶于甲苯(150mL)。搅拌下加入反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(11.50g，51.47mmol，1.0eq.)，Ru 3(CO) 12(0.64g，1.54mmol，0.03eq.)，氮气置换3次后加热至105℃，过夜反应10h后补加反式-N-(4-乙炔基环己基)氨基甲酸叔丁酯(11.50g，51.48mmol，1.2eq.)，Ru 3(CO) 12(0.639g，1.54mmol，0.03eq.)，氮气抽充3次后加热至105℃，再反应10h。反应液冷却至室温后，垫硅藻土过滤。浓缩后通过柱层析分离纯化(PE:EA)＝10:1，得到中间体3.1(12.86g，59.53％产率)。MS:[M+H] +＝420。
向反应瓶中加入中间体3.1(12.00g，0.028mol，1.0eq.)，加入乙酸酐(60mL)溶解，滴入1滴浓硫酸。冰盐浴条件下滴加稀硝酸(55mL)。控制内温不超过45℃，滴加完毕后室温反应1h。将反应液倒入冰的30％氢氧化钠水溶液中(250mL)，乙酸乙酯萃取两次，饱和食盐水溶液洗涤有机相，MgSO 4干燥，旋干后得中间体3.2(10.42g，100％产率)，直接投入下一步反应。
DCM溶解中间体3.2(10.42g，0.028mol，1.0eq.)，加入三乙胺(8.67g，0.085mol，3.0eq.)，DMAP(0.37g，0.0028mol，0.1eq.)。冰浴条件下加入二碳酸二叔丁酯(9.36g，0.043mol，1.5eq.)。转移至室温反应2h。浓缩反应液后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体3.3(6.75g，50.8％产率)。MS:[M+H] +＝465。
向装有中间体3.3(6.75g，0.0145mol,1.0eq.)的反应瓶中加入DCM 80mL)和DMF(80mL)。搅拌溶解后加入二水合氯化亚锡(16.4g，0.073mol，5.0eq.)。室温搅拌2h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(1L)。乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤， MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体3.4(5.10g，80.9％产率)。MS:[M+H] +＝435。
向装有中间体3.4(5.10g，0.012mol，1.0eq.)的反应瓶中，加入氯仿(50mL)乙酸酐(8.17g,0.029mol，2.5eq.)乙酸钾(0.58g,0.006mol,0.5eq.)。升温70℃后，滴加亚硝酸异戊酯(3.46g，0.029mol，2.5eq.)。反应1小时，向反应液中加入水(50mL)。乙酸乙酯100mL*2萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体3.5(4.20g，80.7％产率)。MS:[M+H] +＝446。
向装有中间体3.5(1.00g，0.0022mol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(10mL)。搅拌，降低温至0℃。缓慢加入NaH(0.108g，0.0027mol，1.2eq.)。0.5h后加入1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物(1.02g，0.0045mol，2.0eq.)。自然升温至室温，反应6h。向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，MgSO 4干燥。旋干得中间体3.6(0.850g，64.4％产率)。MS:[M+H] +＝589。
向装有中间体3.6(0.850g，0.0015mol，1.0eq.)的反应瓶中加入甲醇(10mL)，再加入盐酸1,4-二氧六环溶液(4M，3mL)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液后得中间体3.7，直接投入下一步反应。
向装有中间体3.7的反应瓶中加入甲醇(10mL)，搅拌溶解后加入碳酸铯(1.41g，0.0045mol，3.0eq.)，升温至70℃，反应2h。旋干反应液后得中间体3.8，直接投入下一步反应。
向装有中间体3.8的反应瓶中加入DCM(10mL)，搅拌溶解后加入三乙胺(0.438g，0.0045mol，3.0eq.)，冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(0.472g，0.0022mol，1.5eq.)。转移至室温反应1h。旋干反应液后通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得中间体3.9(0.35g，53.1％产率)。MS:[M+H] +＝457。
向装有中间体3.9(0.35g，0.765mmol，1.0eq.)的反应瓶中加入DMF(10mL)，搅拌，冰水浴条件下加入t-BuOK(0.174g，1.53mmol，2.0eq.)，搅拌20min后加入2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶(0.256g，0.92mmol，1.2eq.)。反应3h后，向反应液中加入水(50mL)，而后乙酸乙酯(50mL×3)萃取。饱和氯化钠水溶液洗涤，MgSO 4干燥。旋干后通过柱层析分离纯化(PE:EA＝4:1)，得中间体3.10(0.24g，43.8％产率)，为黄色固体。MS:[M+H] +＝714。
将中间体3.10(0.24g，0.336mmol，1.0eq.)溶于10mL甲醇中，再加入盐酸1,4-二氧六环(3mL，7M)，升温至70℃，反应0.5h。旋干反应液，得中间体2.11(0.51g，100％产率)。
将中间体3.10(0.51g，0.336mmol，1.0eq.)溶于10mL甲醇中，加入甲醛水溶液(1.10mL，37％，10eq.)，搅拌15min后加入STAB(0.35g，1.68mmol，5eq.),再搅拌15min。而后旋干反应液，通过柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝8:1)，得实施例3标题化合物(0.11g，59.5％产率)。MS:[M+H] +＝552。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)11.71(s,1H),8.04(s,1H),6.15(s,1H),4.73(s,2H),4.07(s,2H),3.51(s,2H),2.65(s,3H),2.41(d,J＝7.7Hz,6H), 2.32-2.36(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),1.89(s,5H),1.59(s,3H),1.19-1.28(m,4H)。
中间体1.4.1甲基(R)-7-溴-2-((1r，4S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-2,4-二甲基-6-硝基苯并[d][1,3]二恶英-5-羧酸酯和中间体1.4.2甲基(S)-7-溴-2-((1R,4R)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-2,4-二甲基-6-硝基苯并[d][1,3]二噁英-5-羧酸酯
通过中间体1.4的手性分离制备化合物1.4.1和化合物1.4.2，具体信息如下：
分离设备:Waters UPC2 analytical SFC
色谱柱:ChiralCel OJ，150×4.6mm I.D.，3μm
流动相:A for CO 2and B for Methanol(0.1％NH 3H 2O)
梯度:B 10％
流速:2.0mL/min
波长:220nm
化合物1.4.1保留时间4.22分钟，[α]＝-30.3°(MeOH，c＝1.0g/100mL)
化合物1.4.2保留时间3.70分钟，[α]＝25.4°(MeOH，c＝1.0g/100mL)
HPLC设备：Shimadzu LC-20AD
MS:[M+H] +＝529。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.76(d,J＝7.8Hz,1H),3.79(s,3H),3.18(s,1H),2.18(s,3H),1.90-1.75(m,5H),1.70(s,3H),1.37(s,9H),1.27-1.09(m,4H)。
实施例4:(R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物4采用实施例1中相似步骤合成，将中间体1.4拆分后，替换为1.4.1(2.20g，0.0043mol，1.0eq.)制得。MS:[M+H] +＝551。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.71(s,1H),7.21(d,J＝3.1Hz,1H),6.30(d,J＝3.0Hz,1H),6.14(s,1H),4.72(s,2H),4.06(s,2H),3.51(s,2H),2.68(s,1H),2.54(s,6H),2.42(s,3H),2.40(s,3H),2.21(s,3H),2.08-1.76(m,5H),1.59(s,3H),1.36-1.20(m,4H)。
实施例5:(S)-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物5采用实施例1中相似步骤合成，将中间体1.4拆分后，替换为1.4.2(2.20g，0.0043mol，1.0eq.)制得。MS:[M+H] +＝551。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)11.70(s,1H),7.21(s,1H),6.30(s,1H),6.14(s,1H),4.73(s,2H),4.07(s,2H),3.51(s,2H),2.65(s,3H),2.41(d,J＝7.7Hz,6H),2.32-2.36(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),1.89(s,5H),1.59(s,3H),1.29-1.19(m,4H)。
实施例6:(4R,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-4,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物6采用实施例4中相似步骤合成,将1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为(S)-5-甲基-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-羧酸叔丁酯-2,2-二氧化物即可制得。MS:[M+H] +＝565。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.65(s,1H),7.36-7.26(m,1H),6.29(s,1H),6.13(s,1H),5.12(s,2H),4.53(s,2H),4.23(s,1H),3.46(s,3H),2.68(s,1H),2.51(s,3H),2.44(s,3H),2.39(s,3H),2.21(s,3H),1.95(m,5H),1.60(s,3H),1.43(s,3H),1.32(m,4H)。
实施例7:(4S,10R)-10-((1r,4R)-4-(二甲氨基)环己基)-4,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物7采用实施例6中相似步骤合成，将(R)-4-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为(R)-5-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物即可制得。MS:[M+H] +＝565。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.67(s,1H),7.31(s,1H),6.30(s,1H),6.13(s,1H),5.11(s,1H),4.51(d,J＝15.8Hz,2H),3.50-3.43(m,2H),2.68(s,1H),2.63(s,6H),2.44(s,3H),2.39(s,3H),2.21(s,3H),2.09-1.87(m,5H),1.61(s,3H),1.44(s,3H),1.39-1.20(m,4H)。
实施例8:(10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-5,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物8采用实施例6中相似步骤合成,将(R)-4-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为4-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物即可制得。MS:[M+H] +＝565。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.69(s,1H),7.18(d,J＝2.9Hz,1H),6.30(d,J＝3.0Hz,1H),6.13(s,1H),4.93(d,J＝13.8Hz,1H),4.54(d,J＝13.7Hz,1H),4.31(dd,J＝13.5,4.5Hz,1H),4.15(d,J＝13.5Hz,1H),3.90-3.80(m,1H),2.52(s,3H),2.47(s,3H),2.42(s,6H),2.38-2.25(m, 1H),2.20(s,3H),2.06-1.83(m,5H),1.60(s,3H),1.42-1.20(m,4H),0.59(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例9:(R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-6-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-8,10-二甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物9采用实施例4中相似步骤合成,将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝535。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)11.58(s,1H),7.21(s,1H),6.29(s,1H),6.14(s,1H),5.15(s,2H),4.33(s,2H),3.80(s,3H),3.51(s,2H),2.40(d,J＝8.0Hz,6H),2.32-2.36(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),1.95-1.79(m,5H),1.59(s,3H),1.29-1.19(m,4H)。
实施例10:(S)-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-6-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-8,10-二甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物10采用实施例5中相似步骤合成，将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝535。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)11.58(s,1H),7.21(s,1H),6.29(s,1H),6.14(s,1H),4.56(s,2H),4.33(s,2H),3.79(s,3H),3.51(s,2H),2.40(s,6H),2.32-2.36(m,1H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),1.95-1.79(m,5H),1.59(s,3H),1.29-1.19(m,4H)。
实施例11:(R)-6-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物11采用实施例4中相似步骤合成，将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝519。 1H NMR(400MHz, DMSO-d 6)11.66(s,1H),7.23(s,1H),6.31(s,1H),5.94(s,1H),4.74(s,2H),4.13(s,2H),3.63(s,2H),2.80(s,1H),2.38(s,3H),2.19(s,3H),2.15(s,3H),1.95-1.80(m,5H),1.60(s,3H),1.41-1.24(m,4H),1.11(s,6H)。
中间体3.5.1甲基(R)-2-((1r，4R)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-2,4-二甲基-6H-[1,3]二氧杂环[4,5-e]吲唑-5-羧酸酯和中间体3.5.2甲基(S)-2-((1r，4S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-2,4-二甲基-6H-[1,3]二氧杂环[4,5-e]吲唑-5-羧酸酯的合成
通过中间体3.5的手性分离制备化合物3.5.1和化合物3.5.2，具体信息如下：
分离设备:Waters UPC2 analytical SFC
色谱柱:ChiralCel OJ，150×4.6mm I.D.，3μm
流动相:A for CO 2and B for Methanol(0.1％NH 3H 2O)
梯度:B 40％
流速:2.0mL/min
波长:220nm
化合物3.5.1保留时间2.72分钟，[α]＝38.0°(MeOH，c＝1.0g/100mL)
化合物3.5.2保留时间4.39分钟，[α]＝-29.1°(MeOH，c＝1.0g/100mL)
MS:[M+H] +＝446。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),8.11(d,J＝1.3Hz,1H),6.75(d,J＝7.9Hz,1H),3.90(s,3H),3.23-3.11(m,1H),2.54(s,3H),1.94-1.77(m,5H),1.64(s,3H),1.36(s,9H),1.24-1.05(m,4H)。
实施例12：(R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲达唑-7(4H)-酮的合成
化合物12采用实施例3中相似步骤合成，将中间体3.5拆分后，替换为3.5.1(2.20g，0.0043mol，1.0eq.)制得。MS:[M+H] +＝552。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.69(s,1H),8.03(s,1H),6.15(s,1H),4.75(s,2H),4.26(s,2H),3.60(s,2H),2.49(s,3H),2.42(s,3H),2.23(s,3H),2.17(s,6H),2.15-2.08(m,1H),1.89(m,5H),1.64(s,3H),1.21(m,4H)。
实施例13：(S)-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲达唑-7(4H)-酮的合成
化合物13采用实施例12中相似步骤合成，将中间体3.5.1替换为3.5.2(2.20g，0.0043mol，1.0eq.)制得。MS:[M+H] +＝552。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.71(s,1H),8.04(s,1H),6.15(s,1H),4.75(s,2H),4.26(s,2H),3.59(s,2H),2.52(s,3H),2.49(s,6H),2.42(s,3H),2.34(s,1H),2.23(s,3H),1.98m,5H),1.65(s,3H),1.33-1.14(m,4H)。
实施例14：(4R,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-4,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲达唑-7(4H)-酮的合成
实施例14采用实施例12中相似步骤合成，将1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为(S)-5-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物制得。MS:[M+H] +＝566。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.70(s,1H),8.03(s,1H),6.13(s,1H),5.01(s,1H),4.60(d,J＝13.9Hz,2H),3.68-3.45(m,2H),2.46(s,3H),2.43(s,3H),2.23(s,3H),2.17(s,6H),2.14-2.08(m,1H),2.02-1.75(m,5H),1.63(s,3H),1.42(s,3H),1.25-1.14(m,4H)。
实施例15：(4S,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-4,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲唑-7(4H)-酮的合成
实施例15采用实施例12中相似步骤合成，将1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为(R)-5-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物制得。MS:[M+H] +＝566。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.70(s,1H),8.03(s,1H),6.14(s,1H),5.02(s,1H),4.59(m,2H),3.55(s,2H),2.46(s,3H),2.43(s,3H),2.33(s,1H),2.27(s,6H),2.22(s,3H),1.91(d,J＝22.4Hz,5H),1.64(s,3H),1.41(d,J＝14.4Hz,3H),1.23(s,4H)。
实施例16：(R)-1-氯-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-8,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
将中间4.4(0.81g，1.8mmol，1.0eq.)溶于二氯甲烷中，加入N-氯代丁二酰亚胺(0.36g，2.7mmol，1.5eq.)，常温搅拌过夜。而后旋干反应液，通过柱层析分离纯化得中间体16.1(0.81g，92.0％产率)。MS:[M+H] +＝479。
化合物16用化合物4相类似的合成方法，以中间体16.1替换中间体4.4制得。MS:[M+H] +＝586。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.72(s,1H),7.39(s,1H),6.14(s,1H),4.71(s,3H),4.03(s,2H),3.50(s,2H),2.68(s,1H),2.54(s,2H),2.50(s,3H),2.43(s,3H),2.39(s,3H),2.21(s,3H),2.05-1.87(m,5H),1.63(s,3H),1.34-1.19(m,4H)。
实施例17:(4R,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-6-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,8,10-三甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物17采用实施例6中相似步骤合成,将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝549.24。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.53(s,1H),7.30(s,1H),6.29(d,1H),6.14(s,1H),5.15(s,2H),4.33(s,2H),3.80(s,3H),3.51-3.79(m,2H),2.35(m,7H),2.21(s,3H),1.58(m,3H),1.90(m,4H),1.85(s,3H),1.39-1.23(m,7H)。
实施例18:(4S,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-6-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,8,10-三甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物18采用实施例7中相似步骤合成,将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝549.27。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.53(s,1H),7.30(s,1H),6.29(d,1H),6.13(s,1H),5.09(brs,2H),4.23(m,2H),3.80(s,3H),2.60(m,2H),2.37(m,6H),2.21(s,3H),1.91-1.86(m,8H),1.58(s,3H),1.38-1.25(m,7H)。
实施例19:(4R,10R)-6-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-4,8,10-三甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物19采用实施例6中相似步骤合成,将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶制得。MS:[M+H] +＝533.36。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.60(s,1H),7.31(s,1H),6.30(s,1H),5.92(s,1H),5.06(s,1H),4.47(s,2H),3.69(s,1H),3.59(s,1H),2.51(s,2H),2.35(s,3H),2.39(s,2H),2.22(s,6H),2.15(s,3H),1.92-1.87(m,5H),1.58(s,3H),1.44-1.43(m,3H),1.20-1.18(m,4H)。
实施例20:((5R,10R)-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-5,8,10-三甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物20采用实施例4中相似步骤合成,将1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换 为(R)-4-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯-2,2-二氧化物即可制得。MS:[M+H] +＝565.46。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.69(s,1H),7.18(d,J＝2.9Hz,1H),6.30(d,J＝3.0Hz,1H),6.13(s,1H),4.93(d,J＝13.8Hz,1H),4.54(d,J＝13.7Hz,1H),4.31(dd,J＝13.5,4.5Hz,1H),4.15(d,J＝13.5Hz,1H),3.90-3.80(m,1H),2.52(s,3H),2.47(s,3H),2.42(s,6H),2.38-2.25(m,1H),2.20(s,3H),2.06-1.83(m,5H),1.60(s,3H),1.42-1.20(m,4H),0.59(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例21:(S)-8-氯-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-10-甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物21采用实施例2中相似步骤合成,将中间体1.4拆分后，替换为1.4.1即可制得。MS:[M+H] +＝571.14。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.72(s,1H),7.33(s,1H),6.38(d,1H),6.15(s,1H),4.70(s,2H),4.08(s,2H),3.55(s,2H),2.51(s,3H),2.43(s,3H),2.22(m,8H),1.92(m,4H),1.64(m,3H),1.23(m,4H)。
实施例22:(4R,10S)-8-氯-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-4,10-二甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物22采用实施例21中相似步骤合成,将1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物替换为(S)-5-甲基-1,2,3-噁硫唑烷-3-羧酸叔丁酯-2,2-二氧化物即可制得。MS:[M+H] +＝585.16。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.68(s,1H),7.43(d,1H),6.28(d,1H),6.13(s,1H),5.05(s,2H),4.52(s,2H),3.50(s,2H),2.51-2.50(m,3H),2.49(s,3H),2.20(m,7H),1.91(m,4H),1.62(m,3H),1.32(m,7H)。
实施例23:(R)-8-氯-10-((1r，4R)-4-(二甲氨基)环己基)-10-甲基-6-((6-甲基-4-(甲硫基)-2-氧基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5,6-二氢-[1,4]二氮杂卓[6,7,1-hi][1,3]二氧杂[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物23采用实施例2中相似步骤合成,将中间体1.4拆分后，替换为1.4.2即可制得。MS:[M+H] +＝572.23。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.73(s,1H),7.35(d,J＝3.3Hz,1H),6.38(d,J＝3.3Hz,1H),6.15(s,1H),4.73(d,J＝17.8Hz,2H),4.56(s,2H),3.55(s,2H),2.63(s,3H),2.43(s,3H),2.34(s,1H),2.22(s,7H),2.01(m,4H),1.62(m,3H),1.38(m,7.5Hz,4H)。
实施例24:(4R,10S)-8-氯-6-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-10-((1r，4S)-4-(二甲氨基)环己基)-4,10-二甲基-5,6-二氢-[1,4]二氮杂[6,7,1-hi][1,3]二噁英[4,5-e]吲哚-7(4H)-酮的合成
化合物24采用实施例22中相似步骤合成,将2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-6-甲基-4-(甲硫基)吡啶替换为2-(苄氧基)-3-(氯甲基)-4,6-二甲基吡啶即可制得。MS:[M+H] +＝572.42。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.65(s,1H),7.54(s,1H),6.38(d,1H),5.93(s,1H),5.08(s,1H),4.52(m,2H),3.74(s,1H),3.35(s,2H),2.51-2.50(m,3H),2.21(s,2H),2.06(m,6H),1.85(m,5H),1.63(m,3H),1.47(m,3H),1.14(m,5H)。
实验例1
PRC2/EZH 2HTRF酶抑制实验
PRC2复合物购买于Carna Biosciences(日本)，Histone H3(21-44)-GK(biotin)，Streptavidin-XL665 and Mab Anti histone H3K27Me1-Eu(K)购买于Cisbio(法国)。
SAM(30mM)，DTT(1M)，10％BAS，Tris-HCl(50mM)，NaCl(50mM)，10％Tween和二甲基亚砜(DMSO)购买于Sigma。384孔白板购买于CORNING(美国)。
实验所用的assay buffer由50mM Tris-HCl，50mM NaCl，1mM DTT，0.01％Tween，0.1％BSA组成。使用assay buffer配制5％DMSO的化合物、PRC2酶和Histone H3(21-44)-GK混合溶液，配制完成后，将2μL 5％DMSO的化合物和4μL的PRC2混合液分别加入Opti Plate-384White孔板中盖膜800转1min，室温孵育0.5h，加入4μL Histone H3(21-44)-GK(biotin)/SAM盖膜800转1min，室温孵育2h。PRC2、Histone H3(21-44)-GK(biotin)、SAM和DMSO终浓度分别为1ng/μL、5μM、15μM和1％。然后加入5μL检测抗体Mab Anti histone H3K27Me1-Eu(K)和5μL Streptavidin-XL665，室温孵育2h。在TECAN(Switzerland)的SPARK多功能酶标仪器上读取平板，激发光波长为320nm，发射光波长为665nm。在Prism7(LaJolla，CA)中使用S形剂量反应模型(可变斜率，四个参数)确定化合物IC 50值。
细胞增殖抑制实验
Karpas422细胞购自中国科学院细胞库(上海)；RPMI1640培养基、青霉素-链霉素双抗和0.5％的胰酶(10X)购自ThermoFisher(Waltham，MA，USA)。经认证的胎牛血清(FBS)购自Biological Industries(Israel)。康宁96孔细胞培养板购自CORNING(USA)。Counting Kit-8检测试剂盒购自碧云天(中国)。
为了评估合成化合物对人大细胞淋巴瘤SU-DHL-10，人类B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞Karpas422的增殖抑制水平，将处于指数增长的SU-DHL-10、Karpas422细胞分别接种于含20％牛血清和1％青霉素-链霉素双抗的RPMI1640培养基，密度1000个细胞/mL，96孔板，每孔100μL，并放置在37℃，5％CO 2的培养箱中过夜。将化合物在DMSO中稀释，初始浓度为2mM，3倍稀释，12个浓度。将化合物储备板的1μL DMSO溶液添加到99μL细胞培养基，测定中化合物的最终最高浓度为10μM，并且DMSO的最终浓度为(0.5％)。将培养基中的100μL化合物溶液加到SU-DHL-10和Karpas422细胞板的每个孔中。在加入化合物溶液后，将96孔板放置于37℃，5％CO 2培养箱中孵育8天。采用Counting Kit-8检测试剂盒，通过定量细胞培养中生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，测定细胞活力。2小时孵育后使用TECAN公司的SPARK多功能酶标仪在化学发光的程序下进行读数。在Prism 7(LaJolla，CA)中使用S形剂量反应模型(可变斜率，四个参数)确定化合物使细胞成活率抑制50％的浓度(IC 50值)。
本文所述的代表性化合物的EZH2酶抑制实验及细胞增殖抑制实验结果在表1中示出。
表1
从表1测试结果分析，此类化合物大多数具有优异的EZH2抑制活性，同时其中部分化合物的EZH2抑制活性同现有阳性参照具有更优的结果，尤其是化合物4、化合物6、化合物7、化合物12及化合物16。同时此类化合物也表现出了明显的增殖移植活性，和已经上市的药物Tazemetostat相比具有明显的优势。
实验例2 体外肝微粒体稳定性测试
人肝微粒体来自Corning，ICR/CD-1大鼠肝微粒体(雄)也来自Corning，分别储存于-80℃冰箱。磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、NADPH均购自Sigma.
将受试物用DMSO配制高浓度储备液，使用前用DMSO稀释到200μM的工作液，受试物的终浓度为1μM。先称取7.098g磷酸氢二钠，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g磷酸二氢钾，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。向溶液A里面加入溶液B，直至pH为7.4。实验前现称取适量NADPH，用磷酸盐溶液配制浓度为10mM的工作液。转移25μL NADPH或磷酸缓冲盐到上述孵育体系，加入2μL 200μM受化合试物。对于加NADPH的样品进行双平行制备；对于NADPH阴性的样品进行单平行制备。分别于0.5、5、15、30和60分钟，取30μL混悬液。加入180μL含内标的乙腈终止反应，涡旋10分钟。之后于3220g离心20分钟进行蛋白沉淀。将板子置于4℃冰箱放30分钟后，于3220g重新离心20分钟。转移100μL上清液到进样板，加入100μL纯水混匀，用于UPLC-MS/MS分析。所有的数据计算均通过Microsoft Excel软件进行。通过提取离子图谱检测峰面积。通过对母药消除百分比的自然对数与时间进行线性拟合，检测母药的体外半衰期(t 1/2)，计算清除率。
本文所述的代表性化合物的肝微粒体稳定性实验结果在表2中示出。
表2
从表2测试结果分析，此类化合物大多数具有优异的体外肝微粒稳定性，同时其中部分化合物的体外肝微粒体稳定性同现有阳性参照具有更优的结果，尤其是化合物3、化合物4、化合物6、化合物7、化合物9、化合物11、化合物12和化合物19。

Claims (11)

  1. 一种如下式(I)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
    其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
    L、U、V、T各自独立地选自C或N，且至少一个为N；
    Y选自氢、卤素或C 1-C 6烷基；
    X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
    Z是C 3-C 7环烷基或4到7元杂环基，其中的每一个任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、卤代C 1-C 6烷氧基或-NRaRb的基团取代；
    Ra是氢、C 1-C 6烷基或卤代C 1-C 6烷基；
    Rb是C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或4到7元杂环基，其中所述杂环基任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基或卤代C 1-C 6烷氧基的基团取代；
    或Ra和Rb与其所附接的氮原子一起形成任选地被1到3个选自卤素、C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或-ORc的基团取代的4到7元杂环基；
    Rc是C 1-C 6烷基、卤代C 1-C 6烷基或C 3-C 7环烷基；
    m、n’各自独立地为0、1或2；
    n为0、1、2、3或4；以及
    代表单键或双键。
  2. 根据权利要求1所述的化合物，其中式(I)是式(Ia)：
    其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
    L、U、V、T各自独立地选自C或N，且至少一个为N；
    Y选自氢、卤素或C 1-C 6烷基；
    X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
    m、n’各自独立地为0、1或2；
    n为0、1、2、3或4；以及
    代表单键或双键。
  3. 根据权利要求1所述的化合物，其中式(I)是式(Ib)：
    其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
    U、V各自独立地选自C或N；
    X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
    m、n’各自独立地为0、1或2；
    n为0、1、2、3或4；以及
    代表单键或双键。
  4. 根据权利要求1所述的化合物，其中式(I)是式(Ic)：
    其中，R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、羟基、氰基或氨基；
    U、V各自独立地选自C或N；
    X选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、烷氧基或-S-R 4，R 4为C 1-C 6烷基；
    m、n’各自独立地为0、1或2；
    n为0、1、2、3或4；以及
    代表单键或双键。
  5. 根据权利要求1所述式(I)所示的化合物，其选自：
  6. 一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、络合物、溶剂化物、水合物或异构体；以及药学上可接受的载体或赋形剂。
  7. 权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、络合物、溶剂化物、水合物或异构体用于制备治疗EZH2介导的疾病药物的用途。
  8. 根据权利要求7所述的用途，其中所述疾病为癌症。
  9. 根据权利要求8所述的用途，其中所述癌症为肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、胰腺癌、卵巢癌、***、结肠直肠癌、胶质瘤、黑色素瘤、***癌、肾癌、食道癌、间皮瘤、头颈癌、膀胱癌、唾腺癌、白血病或淋巴瘤。
  10. 一种如下式(II)所示的化合物或其立体异构体：
    其中，R 1、R 2、R 3、U、V、m、n、n’、 如权利要求1所定义。
  11. 权利要求10所述的化合物用于制备权利要求1所述化合物的用途。
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