CN115385883B - 一种香豆素类化合物制备方法及其在抗单胺氧化酶b抑制药物中的应用 - Google Patents
一种香豆素类化合物制备方法及其在抗单胺氧化酶b抑制药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种香豆素类化合物制备方法及其在抗单胺氧化酶B抑制药物中的应用。针对现有技术中MAO‑B抑制剂药物的毒副作用问题,提供一种香豆素类化合物及其制备方法与在抗MAO‑B药物中的应用,香豆素类化合物5‑demethoxy‑10‑ethoxyexotimarin F从九里香Murraya exotica L中提取分离,对MAO‑B具有抑制活性,可用于制备抗单胺氧化酶B抑制药物组合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种香豆素类化合物制备方法及其在抗单胺氧化酶B抑制药物中的应用,属于药物技术领域。
背景技术
单胺氧化酶(Monoamine oxidase,MAO)是一类黄素依赖性蛋白,根据底物选择性和对抑制剂的灵敏度分为两种亚型MAO-A和MAO-B.研究表明神经衰弱等疾病与MAO-A有关,而MAO-B抑制剂主要用于治疗帕金森病和阿尔兹海默症。单胺氧化酶在维持大脑和哺乳动物组织中神经递质和生物胺的正常水平中起着重要的作用。MAO-B是治疗帕金森病和阿尔兹海默症的一个重要靶点。第一代、第二代MAO-B不可逆抑制剂毒副作用大,临床应用受到限制。随着老龄化进程加剧。寻找新的高效、可逆的MAO-B选择性抑制剂已迫在眉睫。
香豆素是广泛分布于芸香科、伞形科、菊科等高等植物中的一类天然有机化合物,其母核结构为苯骈α-吡喃酮。香豆素类化合物具有众多的药理活性如抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗MAO-B以及神经保护等多种药理活性,在临床上具有广泛的应用,同时由于香豆素类物质较强的MAO-B抑制活性和易于进行结构修饰的特性,近年来受到了科研工作者的青睐。
九里香(Murraya exotica L.),又称:七里香、千里香、过山香、山黄皮、月橘。为芸香科九里香属常绿灌木或小乔木,九里香是“三九胃泰”的主药之一,《中华人民共和国药典》也多次收录九里香,具有行气止痛、活血散瘀之功效。九里香中含有香豆素类、黄酮类、生物碱类等化学成分,其中香豆素是其主要的活性成分,也是该种植物的药效物质基础,8-异戊烯基香豆素为其特征类型。九里香中香豆素显示了抗炎、抗氧化、抗菌等多种生理活性,显示了其药理学潜力。
因此,从天然产物中发现香豆素类MAO-B抑制剂,找寻高活性、高选择性、低细胞毒性和可逆的苗头化合物,研发针对多个信号通路或靶标的多靶点抗神经退行性疾病的香豆素类化合物具有重大意义。
发明内容
针对现有技术中MAO-B抑制剂药物的毒副作用问题,提供一种香豆素类化合物及其制备方法与在抗MAO-B药物中的应用,香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F从九里香Murraya exotica L中提取分离,对MAO-B具有抑制活性,IC50(hMAO-B)值为:153.25±1.58nM,IC50(hMAO-A)26.3±1.03μM,选择性指数为:172,可用于制备抗单胺氧化酶B抑制药物组合物。
一种香豆素类化合物,具有以下化学结构式
一种抗单胺氧化酶B抑制药物组合物,含有药用载体和/或赋形剂,以及所述香豆素类化合物。所述单胺氧化酶B药物组合物的剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。
所述香豆素类化合物的提取方法,具体步骤如下:
1、采用乙醇渗漉提取九里香Murraya exotica L.枝叶干粉得到提取液,减压浓缩得到粗浸膏;
2、将步骤1的粗浸膏混悬于水中得到混悬液,采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相,石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏,再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液,乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏;
3、将步骤2乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析,依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系和二氯甲烷/甲醇混合液体系进行梯度洗脱,根据薄层色谱法检视合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e;
4、将步骤3中c组分进行凝胶柱层析,采用二氯甲烷洗脱,根据薄层色谱法检视合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d和e;
5、步骤4中b组分进行硅胶柱层析,采用采用二氯甲烷/甲醇混合液洗脱纯化得到香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F。
6、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤3梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为8:2、2:1、5:5、4:6和0:1,B组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分。
7、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤3梯度洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷与甲醇的体积比依次为8:2、7:3、6:4、1:1和0:1。
8、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤5中二氯甲烷/甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1。
进一步地,所述香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F在九里香提取物中的质量百分含量为0.0144‰;
药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒,并且为惰性;
药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种;
药物组合物以单位体重服用量的形式使用;
药物可经口服、注射(静注、肌注)、或皮肤给药。
本发明的有益效果:
(1)本发明香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F对MAO-B具有抑制活性,IC50(hMAO-B)值为:153.25±1.58nM,IC50(hMAO-A)26.3±1.03μM,选择性指数为:172;香豆素类化合物5-demethoxy-10-ethoxyexotimarin F与药用载体和/或赋形剂可制成抗MAO-B药物组合物;
(2)本发明香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F来自于可以食用的天然植物成分,其制成的抗单胺氧化酶B抑制药物组合物无毒或低毒。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明,但本发明的保护范围并不限于所述内容。
实施例1:香豆素类化合物的提取方法,具体步骤如下:
1、采用乙醇渗漉提取九里香Murraya exotica L.枝叶干粉得到提取液,减压浓缩得到粗浸膏;
2、将步骤1的粗浸膏混悬于水中得到混悬液,采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相,石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏,再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液,乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏;
3、将步骤2乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析,依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系和二氯甲烷/甲醇混合液体系进行梯度洗脱,根据薄层色谱法检视合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e;
4、将步骤3中C组分进行凝胶柱层析,采用二氯甲烷洗脱,根据薄层色谱法检视合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d和e;其中凝胶柱的直径为3cm,长度为160cm,SephadexLH-20凝胶干重为150g;
5、步骤4中b组分进行硅胶柱层析,采用采用二氯甲烷/甲醇混合液洗脱纯化得到香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F。
6、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤3梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为8:2、2:1、5:5、4:6和0:1,B组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分。
7、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤3梯度洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷与甲醇的体积比依次为8:2、7:3、6:4、1:1和0:1。
8、根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤5中二氯甲烷/甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1。
本实施例的香豆素类化合物,具有以下化学结构式:
命名为5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F。
本实施例香豆素类化合物的1H-NMR数据(400MHz)(δin ppm,J in Hz)和13C NMR数据(δin ppm,J in Hz)见表1.
表1 香豆素类化合物的1H-NMR数据和13C NMR数据(CDCl3)
香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F为白色固体,分子式为C32H37O10,高分辨质谱HRESIMS m/z 605.2359[M+Na]+(calcd 605.2357)。
实施例2:实施例1的香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F的体外抗MAO-B活性实验;
新型香豆素5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F抑制活性筛选,利用MAO-B抑制剂筛选试剂盒对化合物进行活性筛选,具体操作严格按照产品说明书进行。以司来吉兰和异丙肼为参考药物,采用Amplex Red MAO检测试剂盒,按照试剂盒说明书预先配制好样品溶液、空白溶液、酶溶液和底物溶液。反应体系为磷酸钠缓冲液Na3PO4(50mmol L-1,pH7.4),使用Na3PO4缓冲液将MAO-B稀释至75mg L-1,MAO-A稀释至12.5mg L-1;并将化合物稀释至所需的不同终浓度,分别将不同浓度待测化合物(20μL)和MAO(80μL)加入96孔黑板中于37℃孵育15min后,加入100μL工作液(含200μmol L-1Amplex Red,2U mL-1辣根过氧化物酶,10mmol L-1苄胺用于MAO-B/2mmol L-1酪胺用于MAO-A)37℃孵育15min,采用终点法在激发波长545nm,发射波长590nm处记录荧光值,考察对MAO的抑制作用,分析数据,计算IC50,选择性指数等于IC50(hMAO-A)/IC50(hMAO-B)。
抑制活性测试结果为:IC50(hMAO-B)值为:153.25±1.58nM,IC50(hMAO-A)26.3±1.03μM,选择性指数为:172;
通过活性测试试验,可以看出香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F显示了抗MAO-B活性,因此,香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F可用于制备抗MAO-B药物,可与其他药物制成抗MAO-B药物组合物;
以香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F为原料,加入药用载体和/或赋形剂即可得到含香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F的药物组合物;
本发明香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F来自于可以食用的天然植物成分,其制成的抗MAO-B药物组合物无毒或低毒;
药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒,并且为惰性;
药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒,并且为惰性;
药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种;
药物组合物以单位体重服用量的形式使用;
药物可经注射(静注、肌注)、口服或皮肤给药。
以上,对本发明的实施方式进行了说明。但是,本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
2.一种抑制单胺氧化酶B的药物组合物,其特征在于:含有药用载体和/或赋形剂,以及权利要求1所述香豆素类化合物。
3.根据权利要求2所述的抑制单胺氧化酶B的药物组合物,其特征在于,其剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。
4.权利要求1所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)采用乙醇渗漉提取九里香Murraya exotica L.枝叶干粉得到提取液,减压浓缩得到粗浸膏;
(2)将步骤(1)的粗浸膏混悬于水中得到混悬液,采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相,石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏,再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液,乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏;
(3)将步骤(2)乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析,依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系和二氯甲烷/甲醇混合液体系进行梯度洗脱,根据薄层色谱法检识合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e;
(4)将步骤(3)c组分进行凝胶柱层析,采用二氯甲烷洗脱,根据薄层色谱法检识合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d和e;
(5)步骤(4)b组分进行硅胶柱层析,采用二氯甲烷/甲醇混合液洗脱纯化得到香豆素类化合物5-demethoxy-10′-ethoxyexotimarin F。
5.根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(3)梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为8:2、2:1、5:5、4:6和0:1,b组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分。
6.根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(3)梯度洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷与甲醇的体积比依次为8:2、7:3、6:4、1:1和0:1。
7.根据权利要求4所述香豆素类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(5)中二氯甲烷/甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1。
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