KR100318019B1 - 항암활성을가지는황칠나무추출물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항암 및 항산화활성을 가지는 황칠나무 추출물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 우리나라에서 유일하게 생산되는 천연 도료 황칠의 원료인 황칠나무 (Dendropanax morbiferaLev) 또는 그 수액을 저급 알코올로 추출하고 다시 핵산, 에틸아세테이트 및 부탄올 등을 사용하여 순차적으로 분획한 황칠나무 추출물로 구성되며, 상기 추출물은 탁월한 항암활성에 더하여 항산화활성도 나타내므로 기능성 건강식품으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

항암활성을 가지는 황칠나무 추출물{Extracts from Dendropanax morbifera Lev with anti-tumor activity}
본 발명은 항암 및 항산화활성을 가지는 황칠나무 추출물에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 본 발명은 우리나라에서 유일하게 생산되는 천연 도료 황칠의 원료인 황칠나무 (Dendropanax morbiferaLev) 또는 그 수액을 저급 알코올로 추출하고 다시 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올을 사용하여 순차적으로 분획한 황칠나무 추출물에 관한 것이다.
황칠나무는 우리나라 남해안의 일부 도서지역에만 자생하는 두릅나무과에 속하는 상록교목으로, 수피에 상처를 내면 황색의 액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라 하며 오래전부터 가구 등에 칠로서 사용되어 왔다 (이창복, 대한식물도감, 향문사, 1982).
황칠은 아름다운 황금빛이 나는 천연 투명 도료로서, 옛 백제의 특산품이었으며 조선시대에도 부채나 화선지 등에 칠로서 사용되었고 특히 황칠을 한 목공예품은 높이 평가되었다. 황칠은 금빛을 띠면서도 바탕의 나무결을 생생하게 떠오르게 하여 목공예품을 한층 화사하게 치장하는 최상의 도료일 뿐만 아니라 락카나 옻칠과는 달리 항파단성이 있어 부채에도 칠할 수 있는 장점이 있다. 이러한 황칠의 우수성 때문에 황칠을 한 것만이 우리의 전통공예품이라고 주장하는 부류의 사람도 있다.
황칠나무는 중국 당태종이 백제에 사신을 보내어 구할 정도로 귀하게 사용되었고, 명나라 이시진이 저술한 본초강목 (本草綱目)에는 황칠나무가 번열 (몸에 열이 몹시나고 가슴속이 답답하며 괴로운 증세) 제거, 술해독, 안질 및 황달 치료, 화상 치료, 나병 치료 등에 효과가 있음이 기술되어 있다 (이시진, 본초강목, 중국 문광도서, 1590).
그러나 황칠나무의 성분에 관한 연구는 아직까지 황칠나무의 수지성분에 대한 초보적인 내용만 있을 뿐 황칠을 대상으로 항암 또는 항산화활성 등의 약리 활성 물질에 대한 보고는 국내외적으로 전혀 없었다. 또한, 최근에 비로소 황칠나무의 자생지 분포와 자생지 환경조건 등에 대한 기초적인 조사도 이루어졌다 (정병석 등, 한국생물공학회 10:393, 1995).
상기에 기술한 바와 같이, 황칠나무가 약용으로 사용될 수 있는 점과 옻칠 목제품이 오래된 유적지에서 원형이 보존된 형태로 발굴되는 등의 내구성을 고려하면 황칠에는 다양한 약리활성물질이 존재할 것이 기대된다 (Terada, et. al.,Bull. Chem. Soc. Japan,62: 2977, 1989; Terada,Chemistry,45: 851, 1990). 이외에도 황칠은 옻칠과 달리 피부 알레르기를 거의 유발하지 않고 취급이 용이하므로 의약품 뿐만 아니라 식품으로도 널리 이용될 수 있다. 따라서, 황칠나무에 함유된 약리활성물질을 분리하는 경우 의약품 등에 이용하는 것뿐만 아니라 은행잎추출액, 인삼 추출액 등과 같이 약리활성물질을 포함하는 황칠나무 수액의 추출물은 다양한 제품에 이용될 수 있다.
이미 본 발명자들은 옻나무 (Rhus vernicifluaSTOKES) 수피의 상처(wounding) 부위로부터 분비되는 수액에서 상처로 인한 산화적인 스트레스에서 자신을 보호하는 생체방어물질 (항산화물질)이 생산될 수 있고, 실제로 중국, 우리나라의 약 7,000년, 약 2,000년전의 옻칠 목제품이 내구성을 보이며, 옻 수액이 실제로 우리나라 일부 지역에서 민간 암치료제로 사용되고 있는 점에 착안하여 옻칠의 원료인 옻 수액으로부터 강한 항암, 항산화 및 항곰팡이 활성을 지니는 4종의 우루시올계 화합물을 분리한 바 있었다 (대한민국 특허출원 제 97-4193호).
본 발명자들은 황칠나무로부터 새로운 약리활성물질을 확인하고자 연구한 결과, 황칠나무 수액에서 항암 활성과 항산화활성을 확인하고 이를 물/메탄올 혼합용매, 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 등으로 추출하여 순차적으로 분획하여 얻어진 분획들을 칼럼크로마토그래피로 정제하였고, 상기 분획중 헥산분획이 우수한 항암활성을 나타내고 에틸아세테이트 및 부탄올 분획이 우수한 항산화활성을 나타냄을 알아내어 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 항암활성 및 항산화활성이 우수한 황칠나무 추출물을 제공하는 데 그 목적이 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및저급 알코올로 추출후 다시 헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올을 사용하여 분획한 후 칼럼크로카토그래피를 수행하여 얻어지는 황칠나무 추출물을 제공한다.
또한, 본 발명은 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 저급 알코올로 추출하는 단계;
상기 추출후 헥산으로 추출하여 헥산 분획을 얻는 단계;
상기 헥산 분획을 톨루엔에 녹인 후 실리카겔 칼럼크로마토그래피 및 중압 ODS 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계로 얻어지는 항암활성을 가지는 헥산 분획 추출물을 제공한다.
또한 본 발명은 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 저급 알코올로 추출하는 단계;
상기 추출후 에틸아세테이트로 추출하여 에틸아세테이트 분획을 얻는 단계;
상기 에틸아세테이트 분획을 톨루엔에 녹인 후 실리카겔 칼럼크로마토그래피 및 세파덱스 칼럼칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계로 얻어지는 항암활성을 가지는 에틸아세테이트 분획 추출물을 제공한다.
또한 본 발명은 황칠나무 추출물을 기능성 건강식품으로 사용하는 용도를 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 우리나무 고유의 수종인 황칠나무 (Dendropanax morbifera Lev)의 수피 또는 수액으로부터 얻은 추출물을(이하 "황칠나무 추출물"이라 한다)을 제공한다.
황칠나무 수액에 물과 저급 알코올의 혼합액을 첨가하여 추출한 다음 유기용매로 헥산(n-hexane), 에틸아세테이트 (ethyl acetate) 또는 부탄올 (n-buthanol) 을 사용하여 순차적으로 분획함으로써 핵산 분획, 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획으로 분리한다. 이때 저급 알코올을 메탄올이 바람직하고, 물과 저급 알코올의 혼합 비율은 1:9 ~ 9:1이 바람직하다.
상기 얻어진 용매 분획을 칼럼크로마토그래피로 정제하여 항암활성 및 항산활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻는다.
먼저, 각 용매 분획은 항암활성을 측정하여 암세포주에 비교적 강한 항암활성을 나타내는 용매 분획을 선택한다.
이때, 선택된 용매 분획은 칼럼크로마토그래피를 반복 수행하여 정제과정을 통하여 항암활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻는다.
구체적으로, 선택된 용매 분획을 톨루엔에 녹인후 실리카겔 칼럼으로 톨루엔, 톨루엔 : 헥산, 헥산, 헥산 : 클로로포름, 클로로포름, 클로로포름 : 에틸아세테이트, 에틸아세테이트, 메탄올의 용매를 사용하여 순차적으로 활성물질을 용출시킨다. 이 과정에서 암세포주에 비교적 강한 항암 활성을 나타내는 분획을 선택하여 헥산을 추출 용매로 2차 칼럼크로마토그래피를 수행하여 용출시키고, 다시 중압 ODS 칼럼에 통과시킴으로써 항암활성을 나타내는 활성물질을 더욱 정제한다.
본 발명은 황칠나무 추출물의 항암활성을 조사하기 위하여, 에스알비 법 (SRB법) 등을 사용하여, 피부 (Melanoma), 암 세포주, 폐 (Lung) 암 세포주, 전립선(Prostate)암 세포주, 위 암 세포주, 결장 (Colon) 암 세포주, 위 (Renal) 암 세포주, 췌장 암 세포주 등의 성장억제 정도를 측정하였다.
본 발명의 실시예에 의하면, 황칠나무 수액을 용매로 추출하여 얻어진 분획중 헥산 분획이 가장 우수한 항암활성을 나타내었고, 상기 핵산 분획을 3차에 의한 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하여 항암활성이 10 ppm 미만인 황칠나무 추출물을 얻었다.
상기한 결과로 본 발명은 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 저급 알코올로 추출후 헥산으로 분획하고 상기 헥산 분획을 톨루엔에 녹인 후 칼럼크로마토그래피 및 중압 ODS 칼럼크로마토그래피를 반복하여 얻어지는 항암활성을 가지는 헥산 분획 추출물을 포함한다.
한편, 황칠나무 수액에 증류수와 저급 알코올 첨가하여 추출한 다음 유기용매로 분획된 헥산 분획, 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획 및 물/저급 알코올 의 용매 분획은 항산화활성을 측정하여 강한 항산화활성을 나타내는 용매 분획을 선택한다.
선택된 용매 분획은 칼럼크로마토그래피를 반복 수행하여 항산화활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻는다.
구체적으로, 상기 황칠나무 추출물을 톨루엔에 용해시킨 다음 실리카겔 칼럼으로 톨루엔, 톨루엔 : 에틸아세테이트, 에틸아세테이트, 에틸아세테이트 : 메탄올, 메탄올의 용매를 이용하여 순차적으로 활성물질을 용출시킨다. 이 과정에서 에틸아세테이트 : 메탄올로 용출되는 항산화활성을 가지는 분획을 얻어 다시 에틸아세테이트에 용해시킨 다음, 세파덱스 LH-20 칼럼으로 에틸아세테이트를 이용하여칼럼크로마토그래피를 수행함으로써 항산화활성을 가지는 활성물질을 더욱 정제한다.
본 발명은 상기 황칠나무 추출물의 항산화활성을 조사하기 위하여, 자유 라디칼(Free radical)인 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질 (1,1-diphenyl-2-picryl- hydrazyl , DPPH)을 이용한 항산화활성 측정방법을 사용한다.
본 발명의 실시예에 의하면 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획이 항산화활성이 우수하였으며, 그중 에틸아세테이트를 이용하여 2차에 걸친 칼럼크로마토그래피로 정제하여 항산화활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻었다. 이러한 결과는 부탄올에서도 동일한 효과를 얻을 수 있다.
상기한 결과로 본 발명은 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 저급 알코올로 추출후 에틸아세테이트로 분획하고, 상기 에틸아세테이트 분획을 톨루엔에 녹인 후 칼럼크로마토그래피 및 세파덱스 칼럼크로마토그래피를 반복하여 얻어지는 항산화활성을 가지는 에틸아세테이트 분획 추출물을 포함한다.
본 발명에서는 상기 헥산 분획으로 얻어진 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암제용 약학적 조성물을 포함한다.
또한 본 발명에서는 상기 에틸아세테이트 분획 또는 부탄올 분획으로 얻어진 황칠나무 추출물을 유효성분으로 하는 항산화제용 약학적 조성물을 포함한다.
상기 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 분획으로 얻어진 황칠나무 추출물은 임상투여시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품제제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 분획으로 얻어진 황칠나무 추출물에 대하여 급성 실험을 다음과 같이 수행하였다. 구체적으로 상기 추출물을 물에 녹여 이를 마우스 (군당 10 마리)에 각각 1 g/kg 을 투여한 다음 14일 동안 관찰하였으나 사망하는 쥐는 없었다. 따라서 상기 황칠나무 추출물은 경구 투여 최소치사량(LD50)은 1g/kg이상으로 안전한 물질로 판단된다.
본 발명의 황칠나무 추출물이 치료용 약제로 이용되기 위해서는 약제학적 분야에서 공지의 방법에 의하여 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체 (carrier), 부형제 (forming agent), 희석제 (diluent) 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한, 이들은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 유효 성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 물활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로 성인에게 1일에 30 ~ 300 mg 정도를 투여하나 50 ~ 200 mg 정도를 투여하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 단위투여형 제제는 전술한 유효량 범위를 고려하여 본 발명의 활성물질을 20 ~ 100 mg 의 함량이 되도록 제조한다. 바람직하게는 10 ~ 50 mg 을 함유하도록 제형화하는 것이 좋다. 이렇게 제형화된 단위투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나, 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.
또한 본 발명은 상기 항암활성 및 항산화활성이 우수한 황칠나무 추출물을 의약품, 음료 및 식품에 이용하는 기능성 건강 식품에 적용하여 이용할 수 있다.
이하 본 발명을 실시에 의하여 상세히 설명한다.
하기 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 황칠나무 수액의 용매 분획
전라남도 보길도에서 채취한 황칠나무 수액 (Dendropanax morbiferaLev)의 수액 또는 수피를 용매로 분획하였다. 우선 수액 20 g에 증류수 500 ml과 메탄올 (methyl alcohol) 100 ml을 첨가한 다음 헥산 (n-hexane) 500 ml을 첨가하여 물/메탄올 층과 헥산 층으로 분리하여 핵산 분획을 얻었다.
이어서 상기 물/메탄올 층을 선택하여 에틸아세테이트 (ethyl acetate) 500 ml을 첨가하여 에틸아세테이트 층과 물/메탄올 층으로 분리하여 에틸아세테이트 분획을 얻었다.
이어서 상기 물/메탄올 층을 선택하여 n-부탄올 (n-buthanol) 500 ml을 첨가하여 부탄올 층과 물/메탄올 층으로 분리하여 최종적으로 물/메탄올 분획 및 부탄올 분획을 얻었다.
상기에서 얻은 각 분획을 감압 농축하여, 헥산 분획, 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획 및 메탄올을 제거한 물 분획을 각각 5 g, 11.3 g, 2.5 g, 1.1 g 씩 얻었다.
<실시예 2> 황칠나무 수액의 용매 분획 및 그의 항암활성
실시예 1 에서 얻어진 각 분획을 이용하여 인체 암세포에 대한 항암활성을 에스알비 방법 (SRB법, Skehan, et al.,Proc. Am. Assoc. Cancer Res.,30: 612, 1989)으로 조사하였다. 이 때 암세포로는 피부 암세포주 (Melanoma)인 UACC62, 폐(Lung) 암세포주인 A549, 전립선 (Prostate) 암세포주인 PC-3, 위 (Renal) 암세포주인 UO-31, 결장 (Colon) 암세포주인 HCT15 를 사용하였다.
상기 암 세포주는 10% 소태아 혈청이 포함된 RPMI 1640 배지를 사용하여 배양하고, 배양된 세포는 일 주일에 한 번 또는 두 번 정도 분주하여 유지하였다. 항암활성을 측정하는데 사용하는 세포 농도는 3,000 ~ 6,000 개/ml 이었으며, 상기 방법에 사용한 모든 시약은 100% 디메틸설포옥사이드 (dimethylsulfoxide, DMSO)에 녹이고 이를 단계적으로 희석하여 시약의 농도를 10, 3, 1, 0.3, 0.1 ㎍/ml로 맞추었다.
세포의 수를 측정하여 일정한 농도로 96-웰 플레이트에 분주하고 하루가 경과한 다음 세포가 나타내는 기본적인 흡광도를 확인하는데 필요한 Tz (Time/Zero) 플레이트로서 시료를 처리할 플레이트와 동일한 세포 농도를 가진 다른 플레이트를 50% TCA 를 사용하여 고정하였다. 그리고 시료를 처리할 플레이트는 시료의 최종농도를 0.1% DMSO 로 맞추어 5가지 시료 농도로 처리하였다. Tz 플레이트는 1시간이 경과하면 수돗물 (Tap water)로 세척하고, 시료를 처리한 플레이트는 2일이 경과한 다음 50% TCA 를 웰당 50 ㎕씩 처리하여 고정하고 역시 1시간이 경과하면 수돗물로 세척하였다. 세척한 플레이트는 상온에서 건조시키고, 그 후 0.4% SBR 용액(1% 아세트산에 용해되어 있는 용액)을 웰당 100 ㎕씩 가한 다음 30분이 경과하면 1% 아세트산 용액으로 세척하였고 이를 다시 상온에서 건조시켰다. 다음 10 mM 트리스 염기 (pH 10.5)를 웰 당 100 ㎕씩 가하여 다시 용해시키고, 효소면역측정법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)으로 ELISA 해독기를 사용하여 540 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 GI50(㎍/ml)은 암세포의 성장을 50% 억제하는 화합물의 농도를 나타낸다. 이때 비교군으로 아드리아마이신 (adriamycin)을 사용하였다.
[표 1]
각 용매 분획의 인체 암세포에 대한 항암활성 (단위 GI50: ㎍/ml)
표 1에서 볼 수 있듯이, 헥산 분획이 폐암, 전립선암, 위암 및 결장암 세포주에 대하여 우수한 항암활성을 나타냄을 알 수 있다. 특히 헥산 분획은 위암 세포주인 UO-31에 강한 활성을 나타내었고, 에틸아세테이트 분획도 A549 와 UO-31 암세포에 활성을 나타내었다.
<실시예 3> 황칠나무 수액으로부터 항암활성 물질의 분리 및 정제
실시예 2에서 얻어진 황칠나무 수액의 용매 분획 중 헥산분획을 사용하여 항암활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻기 위하여 하기와 같이 실시하였다.
1차 칼럼크로마토그래피에 의한 정제
실시예 2에서 얻어진 헥산 분획 4.9 g을 톨루엔에 용해시킨 다음 실리카겔을 충전시킨 유리칼럼 (∮ 3 × 32 cm, Merck사)을 이용하여 칼럼크로마토그래피를 수행하였다. 이때 용출용매는 톨루엔, 톨루엔 : 헥산, 헥산, 헥산 : 클로로포름, 클로로포름, 클로로포름 : 에틸아세테이트, 에틸아세테이트, 메탄올의 용매순으로 활성물질을 용출시켜 분획하였다.
상기 얻어진 분획 중 5개의 용출 분획을 감압농축하여 이에 대한 항암활성을 실시하였으며, 이에 대한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
[표 2]
1차 실리카겔 칼럼으로 분획된 각 분획별 인체 암세포에 대한 항암활성 (단위 GI50: ㎍/ml)
상기 표 2에서 볼 수 있듯이, 5개의 용출 분획 중에서 분획 2 (0.72 g), 분획 3 (1.97 g), 분획 5 (0.15 g)의 항암활성이 우수하였다. 특히, 분획 2는 피부암, 백혈암 및 결장암 세포주에 대해 더욱 우수한 항암활성을 나타내었고, 분획 3은 피부암, 폐암, 전립선암, 백혈암 및 결장암 세포주 모두에 대해 우수한 항암활성을 나타내었다.
2차 칼럼크로마토그래피에 의한 정제
상기에서 얻어진 항암활성이 우수한 분획 3을 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하였다.
분획 3는 헥산을 이용하여 2차 실리카겔 칼럼크로마토그래피 (7734, Merck)를 수행하였으며, 이로부터 4개의 용출분획을 얻었다. 이때 각 분획은 감압농축하여 분획 3a (0.68 g), 분획 3b (0.7 g), 분획 3c (0.27 g), 분획 3d (0.25 g)를 얻었다. 각 분획에 대한 항암활성을 측정하여 그 결과를 하기 표3에 나타내었다.
[표 3]
2차 실리카겔 칼럼으로 분획된 각 분획별 인체 암세포에 대한 항암활성 (단위 GI50: ㎍/ml)
표 3에서 볼 수 있듯이, 각 분획 모두 항암활성을 나타내었다. 특히 분획 3a는 췌장암, 전립선암, 결장암에 대해 우수한 항암활성을 나타내었고, 분획 3c는 췌장암, 폐암, 전립선암 및 결장암에 대해 우수한 항암활성을 나타내었다.
3차 칼럼크로마토그래피에 의한 정제
상기에서 얻어진 항암활성이 우수한 분획 3b를 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하였다.
분획 3b는 중압 ODS 칼럼크로마토그래피를 수행하여 5개의 분획을 얻었다. 이때 각 분획은 감압농축하여 분획 3b-1 (89 mg), 분획 3b-2 (64 mg), 분획 3b-3 (35 mg), 분획 3b-4 (6 mg), 분획 3b-5 (24 mg)을 얻었다. 상기 분획은 양이 적은 분획 3b-4를 제외하고 항암활성을 측정하여 하기 표 4에 나타내었다.
[표 4]
중압 ODS 겔 칼럼에 의한 분획된 각 분획의 인체 암세포에 대한 항암 활성 (단위 GI50: ㎍/ml)
표 4에서 볼 수 있듯이 분획 3b-3 및 분획 3b-5은 대부분의 인체 암세포주에 10ppm 이하에서 강한 암세포주 생장 억제를 나타내었다. 또한 TLC로 분석한 결과,분획 3b-5는 단일 화합물로, 분획 3b-3은 적어도 2개 이상의 유도체로 구성되어 있음이 확인되었다.
따라서, 황칠나무 수액의 헥산 분획을 칼럼크로마토그래피로 정제하여 인체 암세포에 대하여 항암활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻었으며, 이러한 결과는 에틸아세테이트 분획에 대하여도 동일한 효과를 얻을 수 있다..
<실시예 4> 황칠나무 수액의 용매 분획 및 그의 항산화활성
실시예 1에서 얻어진 각 분획을 이용하여 항산화활성을 측정하였다. 이때 항산화활성 측정방법은 자유라디칼 (Free radical)인 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질 (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)을 사용하여 측정하였다. (Blois,Nature,188: 1199, 1958; Choi, et al.,Kor. J. Phamacogn,24: 299-303, 1993)
유리 시험관에 4 ml 메탄올을 넣고 각 분획을 농도별 (2.5 ~ 30 ㎕)로 첨가한 다음, 상기 DPPH (0.15 mM) 용액을 1 ml 첨가하여 실온에서 30분간 반응시키고 517 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 RC50(㎍/ml)은 화합물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도를 나타낸다.
[표 5]
각 용매 분획의 DPPH 자유라디칼에 대한 항산화활성
표 5에서 볼 수 있듯이, 황칠나무 수액의 에틸아세테이트 분획과 부탄올 분획이 항산화활성을 나타내었다.
<실시예 5> 황칠나무 수액으로부터 항산화활성물질의 분리 및 정제
실시예 4 에서 얻은 황칠나무 수액의 용매 분획 중 부탄올 분획을 정제하여 항산화활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻기 위하여 하기와 같이 실시하였다.
1차 칼럼크로마토그래피에 의한 정제
실시예 4 에서 얻은 황칠나무 수액의 용매 분획 중에서 항산화활성이 강하고 함량이 많은 에틸아세테이트 분획을 대상으로 활성물질을 정제하였다. 에틸아세테이트 분획(11.3 g)을 톨루엔으로 용해시킨 다음 실리카겔을 충전시킨 유리칼럼(∮ 5.5 X 60 cm, Merck사)을 이용하여 칼럼크로마토그래피를 수행하였다.
이때 용출용매는 톨루엔, 톨루엔 : 에틸아세테이트, 에틸아세테이트, 에틸아세테이트 : 메탄올, 메탄올 순으로 용출시켜 각 분획을 얻었다. 상기 분획을 감압 농축하고 항산화활성을 측정한 결과 에틸아세테이트 : 메탄올로 용출되는 분획 I (2.1 g)이 RC50(㎍/ml)이 35로 우수한 항산화활성을 나타내었다 (표6).
2차 칼럼크로마토그래피에 의한 정제
항산화활성이 우수한 분획 I 을 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하였다.
분획 I을 에틸아세테이트로 용해시킨 다음 세파덱스 LH-20 칼럼 (∮ 2.2 × 69 cm, Merck사)을 이용하여 에틸아세테이트로 활성물질을 용출시켰다. 이 과정에서 얻은 여러 개의 분획의 항산화활성 측정한 결과 2개의 분획 (분획 Ia, 분획 Ib )이 우수한 항산화활성을 나타내었으며, 이러한 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 이때 분획 Ia 는 0.34 g을, 분획 Ib는 0.17 g을 얻었다.
[표 6]
에틸아세테이트 분획의 항산화활성
표 6에서 볼 수 있듯이, 황칠나무 수액의 에틸아세테이트 분획이 우수한 항산화활성을 나타냄을 알 수 있고, 정제에 의하여 그 활성이 더욱 증가됨을 알 수 있다.
따라서, 황칠나무 수액의 에틸아세테이트 분획을 칼럼크로마토그래피로 정제하여 인체 암세포에 대하여 항암활성이 우수한 황칠나무 추출물을 얻었으며, 이러한 결과는 부탄올 분획에 대하여도 동일한 효과를 얻을 수 있다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 약용성 및 내구성이 있으면서 피부 알러지 반응을 유발하지 않는 우리나라 고유의 수종인 황칠나무의 수액 등을 이용한 본 발명의 황칠나무 추출물은 항암 활성이 탁월할 뿐만 아니라 항산화활성도 가지고 있어 항암제용 또는 항산화제용 약학적 조성물에 이용할 수 있으며, 기능성 의약품 이외에도 식품 첨가물, 음료 첨가물 및 건강보조식품 등에 사용되어 기능성 건강식품에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (4)

  1. 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 메탄올로 추출후 헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올로 분획하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 항암활성 및 항산화활성을 가지는 황칠나무 추출물.
  2. 제 1 항의 황칠나무 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 건강식품.
  3. 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 메탄올로 추출하는 단계;
    상기 추출후 헥산으로 추출하여 헥산 분획을 얻는 단계;
    상기 헥산 분획을 톨루엔에 녹인 후 실리카겔 칼럼크로마토그래피 및 중압 ODS 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계로 얻어지는 것을 특징으로 하는 항암활성을 가지는 헥산 분획 추출물.
  4. 황칠나무 수피 또는 수액을 물 및 메탄올로 추출하는 단계;
    상기 추출후 에틸아세테이트로 추출하여 에틸아세테이트 분획을 얻는 단계;
    상기 에틸아세테이트 분획을 톨루엔에 녹인 후 실리카겔 칼럼크로마토그래피 및 중압 ODS 세파덱스 칼럼크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계로 얻어지는 것을 특징으로 하는 항암활성을 가지는 에틸아세테이트 분획 추출물.
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030005098A (ko) * 2002-11-21 2003-01-15 천성권 황칠나무를 이용한 술의 제조방법
KR101194947B1 (ko) * 2012-02-07 2012-10-25 박소현 황칠나무 추출물을 포함하는 간질환 치료용 약학 조성물
WO2014014177A1 (ko) * 2012-07-18 2014-01-23 조선대학교 산학협력단 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물
KR101454532B1 (ko) * 2012-07-18 2014-10-23 조선대학교산학협력단 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물
KR101796370B1 (ko) 2016-02-05 2017-11-10 경희대학교 산학협력단 황칠 추출물을 포함하는 금속 나노입자의 제조용 조성물 및 이의 이용
KR20180135845A (ko) 2018-12-14 2018-12-21 학교법인 한문화학원 황칠나무 유래 나노입자를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102305665B1 (ko) 2020-08-10 2021-09-28 (주)네이처페어리 황칠을 포함하는 항바이러스 또는 항균용 조성물
KR102385149B1 (ko) 2021-12-08 2022-04-11 김희용 항균 및 항바이러스 효과가 우수한 박하수(水)의 제조방법

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010037767A (ko) * 1999-10-19 2001-05-15 김우식 재조합 옻 도료 및 그 제조방법
KR100457970B1 (ko) * 2002-03-22 2004-11-18 주식회사 디피바이오텍 경조직 재생 및 증식 효과를 가지는 황칠 추출물, 황칠분획물 및 이를 함유한 약학 조성물
KR100494482B1 (ko) * 2002-04-02 2005-06-10 주식회사 디피바이오텍 간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물, 황칠 분획물 및이들을 함유한 약학 조성물
KR100514430B1 (ko) * 2002-12-12 2005-09-14 대한민국 스클레로티니아 트리폴리오럼 bwc98-105 균주가 분비하는 클로버 제초활성 2차 대사산물 분리방법
KR100988072B1 (ko) * 2010-03-22 2010-10-18 정철화 황칠나무 발효물 및 그것을 포함하는 약학 조성물
KR101450726B1 (ko) * 2011-12-09 2014-10-16 이종수 황칠나무 잎을 이용한 산화질소 생성효소(ｉＮＯＳ) 단백질 발현 저해제 및 그 추출방법
KR101487059B1 (ko) * 2012-06-25 2015-01-27 조선대학교산학협력단 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물
WO2014061838A1 (ko) * 2012-10-19 2014-04-24 재단법인 전라남도생물산업진흥재단 황칠나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환 치료 및 예방을 위한 조성물
KR101426258B1 (ko) * 2012-12-17 2014-08-05 동아대학교 산학협력단 황칠나무로부터 분리한 올레이폴리오사이드 a를 유효성분으로 포함하는 항암용 약학 조성물
KR101283775B1 (ko) * 2013-02-04 2013-07-08 재단법인 전라남도생물산업진흥재단 황칠 잎 추출물을 함유하는 진해 또는 거담용 약학 조성물
KR101644183B1 (ko) * 2014-01-08 2016-07-29 광주대학교산학협력단 황칠나무 추출물을 포함하는 고지혈증 예방용 식품 조성물
KR101650773B1 (ko) * 2014-06-16 2016-08-24 농업회사법인주식회사 함박재바이오팜 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역조절 또는 면역증강용 조성물
KR101739518B1 (ko) * 2015-08-20 2017-05-26 비알 컨설팅 인코포레이티드 황칠나무의 추출물을 포함하는 조성물
KR101726757B1 (ko) 2015-12-30 2017-04-13 아주대학교산학협력단 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물
KR101880031B1 (ko) 2016-08-25 2018-07-20 충남태안영농조합법인 황칠과 굼벵이를 이용한 중금속의 생체 내 흡수 방지 및 생체 외 배출을 위한 기능성 식품 조성물
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KR20230061090A (ko) * 2021-10-28 2023-05-08 국제뇌교육종합대학원대학교 산학협력단 황칠나무 수액 추출물 또는 이의 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030005098A (ko) * 2002-11-21 2003-01-15 천성권 황칠나무를 이용한 술의 제조방법
KR101194947B1 (ko) * 2012-02-07 2012-10-25 박소현 황칠나무 추출물을 포함하는 간질환 치료용 약학 조성물
WO2014014177A1 (ko) * 2012-07-18 2014-01-23 조선대학교 산학협력단 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물
KR101454532B1 (ko) * 2012-07-18 2014-10-23 조선대학교산학협력단 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물
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