CN115120604A - 芹菜素7-o-葡萄糖苷作为降尿酸和痛风性关节炎制剂的应用 - Google Patents

芹菜素7-o-葡萄糖苷作为降尿酸和痛风性关节炎制剂的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及芹菜素7‑O‑葡萄糖苷作为降尿酸和痛风性关节炎制剂的应用。本发明通过实验证实了芹菜素7‑O葡萄糖苷能有效降低血清尿酸水平并具有一定的降血压效果；此外，还进一步验证了其抗炎、镇痛效果，芹菜素7‑O葡萄糖苷有望被开发用于治疗痛风性关节炎。

Description

芹菜素7-O-葡萄糖苷作为降尿酸和痛风性关节炎制剂的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及芹菜素7-O-葡萄糖苷作为降尿酸和痛风性关节炎制剂的应用。
背景技术
芹菜素7-O-葡萄糖苷(芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)属于植物黄酮类化学成分，是许多药用植物如牡丹叶、蓝刺头和苦碟子等植物中的共有成分。芹菜素-7-O-葡萄糖苷也称之为大波斯菊苷(Apigenin 7-O-glucoside，C21H20O10；分子量：432.381；CAS号：578-74-5)。已知芹菜素7-O-葡萄糖苷及其衍生物主要可用于抗肿瘤、消炎、抗病毒。但是目前尚无关于芹菜素7-O-葡萄糖苷及其衍生物制剂并用于治疗高尿酸血症的报道。本发明提供一种芹菜素7-O-葡萄糖苷作为降尿酸制剂的应用。
发明内容
本发明提供芹菜素7-O-葡萄糖苷在制备降尿酸药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供芹菜素7-O-葡萄糖苷在预防和/或治疗高尿酸血症中的应用。芹菜素7-O-葡萄糖苷的给药剂量选自0.1-1.6mg/kg；优选0.8-1.6mg/kg。
本发明的另一实施方案提供芹菜素7-O-葡萄糖苷在预防和/或治疗痛风性关节炎中的应用。芹菜素7-O-葡萄糖苷的给药剂量选自0.1-1.6mg/kg；优选0.8-1.6mg/kg。
本发明的另一实施方案提供一种降尿酸药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。
本发明的另一实施方案提供一种预防和/或治疗高尿酸血症的药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。所述药物还任选包含药学上可接受的辅料(例如载体、稀释剂或赋形剂等)。所述药物的剂型可以选自固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
本发明的另一实施方案提供一种预防和/或治疗痛风性关节炎的药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。所述药物还任选包含药学上可接受的辅料(例如载体、稀释剂或赋形剂等)。所述药物的剂型可以选自固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明首次发现芹菜素7-O-葡萄糖苷能显著降低血清中尿酸，同时显示出一定的降血压效果；(2)本发明芹菜素7-O-葡萄糖苷相对于其他芹菜素衍生物(例如CAS登记号：1334524-22-9)不仅溶解性好，而且降尿酸作用显著，同时具备抗炎等效果，可开发作为预防和/或治疗高尿酸血症、痛风性关节炎等疾病的药物。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。本发明各实施例中疾病动物模型的建立方法均为本领域常规通用方法。
实施例1
1材料
1.1动物
SPF级雄性昆明小鼠，28-32g，由空军军医大学实验动物研究中心提供[合格证号：SCXK-(陕)2015-007]。正常摄食饮水，室温保持在25℃，相对湿度40％，12h光照/黑暗周期循环，适应性饲养一周后用于实验。实验过程中对动物的处理符合科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.2仪器
RT-9600型半自动生化分析仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司)；Sartorius电子分析天平(德国赛多利斯天平公司)；Biofuge Primo R多用途台式高速离心机(德国Heraeus公司)；SpectraMax 190型酶标仪(美国Molecular Devices公司)；XK96-A型快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司)；BP2010型无创血压仪(北京软隆生物技术有限公司)
1.3试药
酵母粉(英国OXOID公司)；腺嘌呤(北京索莱宝科技有限公司)；氧嗪酸钾(上海麦克林生化科技有限公司)；芹菜素7-O葡萄糖苷(宝鸡辰光生物有限公司)；尿酸(UA)测定试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司)
2方法
2.1高尿酸血症模型的建立、分组及给药
预防作用实验：雄性昆明小鼠100只，随机分为空白组、模型组、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.025，0.5，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mg/kg)及别嘌醇组(10mg/kg)，每组10只。按10mL/kg每天灌胃给药，连续7天，末次给药结束1小时后，腹腔注射给予模型组及各给药组氧嗪酸钾300mg/kg，空白组给予等剂量的生理盐水，1小时后取血，检测血尿酸水平。
治疗作用实验：将酵母干粉和腺嘌呤拌入粉碎的颗粒饲料中，充分混匀，重新重压成型，制备高嘌呤饲料，酵母干粉在饲料中的含量为10％，腺嘌呤在饲料中的含量为0.1％。小鼠适应性饲养1周后，随机分为空白组、模型组、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mg/kg)、别嘌醇组(10mg/kg)及芹菜素衍生物组(10mg/kg)，每组各10只。模型组及各给药组给予高嘌呤饲料，正常组给予普通饲料，各给药组给予不同剂量药物，空白组与模型组给予等量生理盐水，按10mL/kg每天灌胃给药，连续28天。末次给药1h后，除空白组外，其余各组均腹腔注射氧嗪酸钾300mg/kg。本实施例中芹菜素衍生物组使用的是CAS登记号：1334524-22-9的芹菜素衍生物。
2.2标本采集和指标观察
给予氧嗪酸钾1h后，各组小鼠摘眼球取血，室温静置2h，在4℃条件下以3500r/min离心15min，吸取上层血清。采用相应的试剂盒说明书要求分别检测小鼠血清中的尿酸(UA)含量。
2.3统计学分析
采用SPSS 23.0统计软件进行分析，数据以
Figure BDA0002989819280000032
表示，各组间比较采用单因素方差分析LSD法，P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示差异具有显著的统计学差异。
3结果
3.1芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠的预防作用
表1所示，与空白组相比，模型组血清尿酸显著升高(P＜0.01)；与模型组相比，芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mg/kg)及别嘌醇组(10mg/kg)均能显著降低血清尿酸(P＜0.05，P＜0.01)。
表1.芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠的预防作用
Figure BDA0002989819280000031
Figure BDA0002989819280000041
注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
3.2芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠的治疗作用
3.2.1治疗高尿酸血症的作用
表2可见，与空白组相比，模型组血清尿酸显著升高(P＜0.01)；与模型组
表2.芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠的降血清尿酸作用
Figure BDA0002989819280000042
注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
相比，芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.1，0.2，0.4，0.8，1.6mg/kg)及别嘌醇组(10mg/kg)均能显著降低血清尿酸(P＜0.05，P＜0.01)，优效剂量为0.8、1.6mg/kg。
3.2.2对高尿酸血症小鼠体重的影响
表3说明，各组小鼠初始体重及第一周体重无显著差异，模型组从第二周开始与空白组有显著差异(P＜0.01)，第三周、第四周模型组较空白组体重均有显著增长(P＜0.01)。
表3.各组小鼠体重变化
Figure BDA0002989819280000043
Figure BDA0002989819280000051
注：与空白组比较，##P＜0.01。
3.2芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠血压的影响
与空白组比较，模型组收缩压及舒张压均显著上升(P＜0.01)；与模型组对比，芹菜素7-O葡萄糖苷各剂量组及阳性药组收缩压及舒张压均下降(P＜0.05，P＜0.01；表4)。
表4.芹菜素7-O葡萄糖苷对高尿酸血症小鼠收缩压及舒张压的影响
Figure BDA0002989819280000052
注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
实施例2
1仪器与材料
1.1仪器 Sartorius电子分析天平(德国赛多利斯天平公司)；微量注射泵、微量注射针(山东威高集团医用高分子制品股份有限公司)；RB-200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司)；手术器械(上海医疗器械有限公司)；6mm打孔器。
1.2试药 芹菜素7-O葡萄糖苷(批号20191018，由陕西凤丹正元生物科技有限公司提供)；二甲苯(天津市富宇精细化工有限公司)；冰醋酸(西安化学试剂厂)；水合氯醛(上海山浦化工有限公司)；***片(山西同达药业有限公司)；双氯芬酸钠肠溶缓释胶囊(海南普利制药股份有限公司)；秋水仙碱片(广州彼迪药业有限公司，批号20190921)；尿酸钠(上海源叶生物科技有限公司，批号20190813)，尿酸(uric acid，UA；批号20190811)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XOD；批号20190814)、IL-1β(批号20190410)、肿瘤坏死因子α(TNF-α；批号20190517)试剂盒，均购自南京建成生物科技有限公司。
1.3动物 SPF级昆明种小鼠[合格证号：SCXK-(陕)2015-007]，体质量(20±2)g；雄性Wistar大鼠[合格证号：SCXK-(陕)2015-0010]，体质量(180±16)g，由空军军医大学实验动物研究中心提供。适应性喂养5d，正常饮食饮水，室温保持在22～26℃，湿度50％～70％。实验过程中对动物的处理符合科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
2实验方法
2.1芹菜素7-O葡萄糖苷对小鼠耳肿胀的作用 将体质量为18～22g的健康雄性昆明小鼠随机分为10组，每组20只，分别为模型组(蒸馏水)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.05mg·kg-1)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.5mg·kg-1)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(5mg·kg-1)和阳性对照组(***5mg·kg-1)，各组每日灌胃给药1次，连续给药5d。末次给药1h后，用微量移液器在小鼠左耳廓两面均匀涂抹0.04ml二甲苯，右耳作为空白对照。30min后脱颈处死小鼠，沿耳廓线剪下双耳，用打孔器在两耳相同部位打下圆耳片(直径6mm)，精密称定其质量，以两耳片重量差作为肿胀度，计算肿胀抑制率。
抑制率＝(模型组平均耳片肿胀度-给药组平均耳片肿胀度)÷模型组平均耳片肿胀度×100％
2.2芹菜素7-O葡萄糖苷对小鼠棉球肉芽肿的影响 制备实验所需棉球，取无菌棉球10mg(每只小鼠所需)，电子天平精密称定质量，高压灭菌处理，置于烘箱内干燥，备用。取18～22g昆明小鼠200只，每组20只，雌雄各半，分组剂量同2.1项下。用5％水合氯醛(0.1ml·10g-1)腹腔注射进行麻醉，背部去毛，95％乙醇消毒，无菌条件下剪开背部正中皮肤，切口长0.5cm-1cm，用镊子小心扩充皮下组织，将10mg灭菌棉球植入小鼠皮下，用缝合线缝合切口并消毒。手术后第2天开始灌胃给药(分组、试药和剂量同耳肿胀实验)，各组每日灌胃给药1次，连续给药7天。末次给药后第2天脱颈处死小鼠，手术分离取出棉球，剔除周围脂肪组织，于100℃干燥10h后，称定质量，用该棉球质量减去原棉球质量即得棉球肉芽组织质量。
抑制率＝(模型组平均肉芽组织质量-给药组平均肉芽组织质量)÷对照组平均肉芽组织质量×100％
2.3芹菜素7-O葡萄糖苷对醋酸致小鼠扭体实验的作用 取18～22g昆明小鼠200只，每组20只，雌雄各半，分为模型组(蒸馏水)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.05mg·kg-1)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(0.5mg·kg-1)、芹菜素7-O葡萄糖苷组(5mg·kg-1)和阳性对照组(双氯芬酸钠5mg·kg-1)。各组每日灌胃给药1次，连续给药5d。末次给药1h后，各组小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml，观察并记录注射醋酸后15min内小鼠扭体次数(以腰部肌内反复收缩，腹部凹陷，躯干后腿伸直，臀部高起一系列动作为一次阳性反应)，计算抑制率。
抑制率＝(模型组平均扭体次数-药物组平均扭体次数)÷模型组平均扭体次数×100％
2.4芹菜素7-O葡萄糖苷对小鼠热板实验的作用 取18～22g昆明雌性小鼠100只，体重(20±2)g，分组剂量同2.3项下，使用智能热板仪，将小鼠置于(55±0.5℃)的热板上，记录小鼠从接触热板仪底盘至出现舔后足的时间，作为其痛阈值。预先测定每只小鼠的基础痛阈，每次测定时间间隔至少5分钟(min)，共测2次，剔除喜悦跳跃者或痛觉表现不灵敏者，选取平均基础痛阈值在5-30s之间的小鼠进行正式实验。各组每日灌胃给药(分组、试药和剂量同扭体实验)，连续给药5天，分别测定末次给药后15min、30min、45min、60min、90min、120min的痛阈值，为了避免小鼠后足被烫伤，若小鼠在热板仪上超过60s仍无舔足反应，立即取出，按60秒计算，比较各组间差异。
2.5芹菜素7-O葡萄糖苷对大鼠痛风性关节炎的作用 取10只大鼠设定为正常组；其余50只按照文献方法(中国实验动物学报，2017，25(5)：494-499)制备痛风性关节炎模型，即精密称取适量尿酸钠，以0.9％氯化钠溶液和聚山梨酯-80溶解，配制成20mg·mL-1尿酸钠溶液。将大鼠仰卧固定于解剖板，右后肢小腿踝关节75％乙醇消毒，从踝关节外侧进针，针口斜面朝上且与胫骨成45度角刺入踝关节腔，注入0.2mL尿酸钠溶液，正常组大鼠在相同部位注射0.2mL 0.9％氯化钠溶液。将造模大鼠随机分为模型，0.04mg·kg-1、0.40mg·kg-1和4.00mg·kg-1芹菜素7-O葡萄糖苷和1.0mg·kg-1秋水仙碱4组，每组10只。造模同时，6组动物均灌胃给予试品，其中正常组和模型对照组给予0.9％氯化钠溶液，连续8d。造模后1、8、12、24、48小时，用足趾容积测量仪测定各大鼠右后足跖容积，计算足跖肿胀率；足跖肿胀率(％)＝(造模后足容积-造模前足容积)/造模前足容积×100％。末次给药后30min，大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉，背卧位固定于解剖板，取腹主静脉血，分离血清，收集关节液，置于-80℃超低温冰箱保存，按照相关试剂盒操作，检测血清UA、XOD、IL-1β、TNF-α含量。
2.6数据统计及分析 采用SPSS 23.0统计软件进行分析，数据以
Figure BDA0002989819280000083
表示，各组间比较采用单因素方差分析LSD法，P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示差异具有显著的统计学差异。
3结果
3.1芹菜素7-O葡萄糖苷具有显著抗炎作用 实验观察到小鼠左耳涂抹二甲苯后，与右耳相比立即出现明显的红肿。见表5。由表5可知，与模型组比较，中、高剂量芹菜素7-O葡萄糖苷组对二甲苯致鼠耳肿胀有明显的抑制作用(P＜0.01)，其抑制率强于阳性对照组、结果表明芹菜素7-O葡萄糖苷具有良好的抗炎作用。
表5芹菜素7-O葡萄糖苷对二甲苯致鼠耳肿胀的作用
Figure BDA0002989819280000081
注：与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。“-”表示用生理盐水灌胃。
由表6可知，模型组棉球质量比原棉球质量增加，提示小鼠植入的棉球有肉芽肿增生。与模型组比较，中、高剂量的芹菜素7-O葡萄糖苷对小鼠棉球肉芽的形成有显著的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)。
表6芹菜素7-O葡萄糖苷对小鼠棉球肉芽肿的作用
Figure BDA0002989819280000082
注：与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。“-”表示用生理盐水灌胃。
3.2芹菜素7-O葡萄糖苷具有明显止痛作用由表7可知，实验中各组小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸后15min内，均出现阳性反应。与模型组比较，各给药组均能有效减少小鼠的扭体次数(P＜0.01)。其中阳性对照组和中、高剂量芹菜素7-O葡萄糖苷组可明显抑制冰醋酸刺激小鼠引起的疼痛反应，抑制率超过50％。
表7芹菜素7-O葡萄糖苷对醋酸致小鼠扭体实验的作用
Figure BDA0002989819280000091
注：与模型组比较：**P＜0.01。“-”表示用生理盐水灌胃。
Figure BDA0002989819280000101
由表8可知，与模型组比较，中、高芹菜素7-O葡萄糖苷组在给药后15min、30min、45min、60min、120min能明显延长小鼠对热刺激产生的疼痛耐受时间，且在药后120min的痛阈值达到高峰(P＜0.05或P＜0.01)。
3.3芹菜素7-O葡萄糖苷对痛风性关节炎具有显著治疗作用 由表9大鼠足跖肿胀率可知，与正常对照组比较，模型对照组各时间点足跖肿胀率显著升高(P＜0.01)，表明造模成功。与模型对照组比较，芹菜素7-O葡萄糖苷小剂量组、中剂量组、大剂量组12-48h肿胀率显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，并呈量效关系，秋水仙碱组8-48h足跖肿胀率显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表10可见，UA、XOD、IL-1β、TNF-α水平与正常对照组比较，模型对照组UA、XOD、IL-1β及TNF-α含量均明显增高(P＜0.01)。与模型对照组比较，中、高剂量芹菜素7-O葡萄糖苷与秋水仙碱组UA、XOD、IL-1β、TNF-α含量均显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表10芹菜素7-O葡萄糖苷对大鼠血清UA、XOD、IL-1β、TNF-a水平的影响
Figure BDA0002989819280000111
注：与正常对照组比较：#P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05。

Claims (10)

1.芹菜素7-O-葡萄糖苷在制备降尿酸药物中的应用。
2.芹菜素7-O-葡萄糖苷在预防和/或治疗高尿酸血症中的应用。
3.芹菜素7-O-葡萄糖苷在预防和/或治疗痛风性关节炎中的应用。
4.权利要求2-3任一项所述的应用，其特征在于芹菜素7-O-葡萄糖苷的给药剂量选自0.1-1.6mg/kg。
5.权利要求4所述的应用，其特征在于芹菜素7-O-葡萄糖苷的给药剂量选自0.8-1.6mg/kg。
6.一种降尿酸药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。
7.一种预防和/或治疗高尿酸血症的药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。
8.一种预防和/或治疗痛风性关节炎的药物，其特征在于该药物以芹菜素7-O-葡萄糖苷作为有效成分。
9.权利要求6-8任一项所述的药物，其特征在于所述药物还任选包含药学上可接受的辅料(例如载体、稀释剂或赋形剂等)。
10.权利要求9所述的药物，其特征在于所述药物的剂型可以选自固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
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