CN115015446A - 绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 - Google Patents
绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115015446A CN115015446A CN202210405523.9A CN202210405523A CN115015446A CN 115015446 A CN115015446 A CN 115015446A CN 202210405523 A CN202210405523 A CN 202210405523A CN 115015446 A CN115015446 A CN 115015446A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tea
- sample
- caffeine
- theanine
- green tea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 title claims abstract description 153
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 title claims abstract description 88
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 title claims abstract description 66
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 64
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 57
- DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N N(5)-ethyl-L-glutamine Chemical compound CCNC(=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N 0.000 title claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 title claims abstract description 38
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 36
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 title claims abstract description 32
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- DATAGRPVKZEWHA-UHFFFAOYSA-N L-gamma-glutamyl-n-ethylamine Natural products CCNC(=O)CCC(N)C(O)=O DATAGRPVKZEWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 39
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 claims description 8
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 238000005173 quadrupole mass spectroscopy Methods 0.000 claims description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims description 2
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 239000001307 helium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 8
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 6
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 abstract description 5
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 239000012629 purifying agent Substances 0.000 abstract description 3
- CFNHVUGPXZUTRR-UHFFFAOYSA-N n'-propylethane-1,2-diamine Chemical compound CCCNCCN CFNHVUGPXZUTRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- -1 lipid compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 2
- 235000019224 Camellia sinensis var Qingmao Nutrition 0.000 description 1
- 235000009024 Ceanothus sanguineus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 240000003553 Leptospermum scoparium Species 0.000 description 1
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 1
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006229 carbon black Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 235000020333 oolong tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 235000020339 pu-erh tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940026510 theanine Drugs 0.000 description 1
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明属于分析检测技术领域,涉及绿茶中L‑茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法。本发明将茶叶样品经85℃热水浸泡后,用乙腈提取,N‑丙基乙二胺(PSA)和十八烷基硅烷(C18)为净化剂,结合气相色谱/串联三重四级杆质谱仪分析技术,实现了对绿茶品质化合物L‑茶氨酸、十六烷酸、咖啡因、茶多酚准确定性定量分析。本发明的检出限为0.001~0.005mg/kg,方法验证试验结果表明,所述化合物的平均回收率为67.3%~101.7%,相对标准偏差为1.03%~11.20%。通过对市售茶叶样品的检测,进一步验证本发明重现性好,准确度高,操作简单的优点,适用于绿茶中L‑茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的同时检测。
Description
技术领域
本发明属于分析检测技术领域,具体涉及绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法。
背景技术
我国绿茶品种繁多,茶树品种不同,其茶多酚、氨基酸和咖啡碱等品质化学成分含量不同,酶的特性和芳香物质等的化学特性也不同,各理化成分种类和含量不一,而绿茶的风味是茶叶内含物相互作用、不断变化的结果,因此各类绿茶品质滋味均有差异,不同品种茶叶,各具特色的“品种香”。茶多酚是茶叶滋味和色泽的主要成分,是构成茶叶品质的关键性物质,绿茶鲜爽性的主要贡献物。茶叶氨基酸中,以茶氨酸含量最多,占氨基酸总量一半以上,是构成茶汤鲜味的主要成分,也是衡量茶叶品质优劣的重要生化成分。
近年来,诸多研究人员利用不同方法开展了茶叶品质鉴别分析研究。利用计算机视觉图像处理技术结合感官审评结果进行茶叶筛选评级,利用各种类型的电子舌结合不同的化学计量法和模式识别法对茶叶组分定性,电子鼻同样用于茶叶香气识别与品质等级的划分以及加工过程样的监测,气相色谱-嗅觉-质谱测定法(GC-O-MS)等通过定量描述感官分析,GC-MS和GC-O技术在四种功夫红茶中鉴定出64种挥发性化合物,在鉴定绿茶、普洱茶、乌龙茶的特征香气中也取得了较好的效果。
上述方法对茶叶进行品质分析仍以感官评定方法为基础,仪器分析多采用NIST库定性、归一法定量。然而,茶叶品质物理检验结果受主观因素影响,缺乏可参照的标准,重复性较差,常规色质联用分析采用NIST库定性、归一法定量,定性定量均存在不足。
发明内容
本发明的目的在于提供一种绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法,对绿茶品质特征化合物及其含量进行准确定性定量分析,并将北方绿茶与南方绿茶成分对比差异,综合分析以期明确各地绿茶茶叶品质特征,为各地绿茶品质鉴别提供理论依据。
本发明所述的绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时快速测定的方法,其特征在于,采用气相色谱/串联三重四级杆质谱法对样品进行检测,包括以下步骤:
绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法,其特征在于,采用气相色谱/串联三重四级杆质谱法对样品进行检测,包括以下步骤:
(1)检测条件:
(1-1)色谱条件
色谱柱:HP-5MS,30m×0.25mm i.d.,0.25μm,弹性石英毛细管柱;载气:高纯氦气;碰撞气:高纯氮;流速:1.1ml/min;进样方式:不分流进样;进样口温度:250℃;柱温:初始50℃保持1min,再以10℃/min程序升温至150℃,再以20℃/min程序升温至280℃;进样口温度:260℃;进样量1.0μL;
(1-2)质谱条件
离子源:电子电离源;离子源温度:230℃;四级杆质量分析器温度150℃;传输线温度280℃;溶剂延迟:3min;检测方法:多反应监测模式:运行时间23.5min,后运行5min;
(2)标准溶液配制
(2-1)准确称取各化合物标准品,用甲醇溶解,配制质量浓度为1000mg/L的标准储备液,于-18℃保存;移取各化合物的标准储备液1mL,用丙酮+正己烷溶解,配置成浓度为10mg/L的中间液,于0~4℃避光保存;
(2-2)标准工作液的配制:
准确移取各化合物的标准储备液,用丙酮+正己烷稀释成0.01,0.02,0.050,0.10,0.50,1.0,5.0,10.0mg/L标准工作液,现配现用;
(3)待检样品前处理
称取茶叶试样,置于离心管中,加入85℃水浸泡后加入乙腈振荡提取,涡旋,离心,取上清液,加入净化粉末,涡旋,过滤,蒸除溶剂,准确加入丙酮+正己烷定容后,过滤膜,得滤液,供上机分析;
(4)待检样品检测
将步骤(3)获得的滤液进行检测,测定滤液中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的含量。
本发明所述的绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时快速测定的方法,丙酮与正己烷的体积比为3:7。
优选的,待检样品前处理的具体过程为:称取2.0g茶叶试样,置于50mL离心管中,加入20ml 85℃水浸泡30min后加入20mL乙腈振荡提取30min,加入5g氯化钠涡旋1min,以5000r/min离心5min,取上清液10mL,加入400mgPSA、400mgC18QuEChERS净化粉末,涡旋30s,过滤,旋转蒸发蒸除溶剂,准确加入2.0mL丙酮+正己烷定容后,过0.22um滤膜,得滤液,供上机分析。
本发明采用的仪器与设备为:7000B GC-MS/MS气相色谱/串联三重四级杆质谱仪美国安捷伦科技有限公司、IKAK S260振荡器德国IKA公司、Buchi旋转蒸发仪瑞士Buchi公司、TDL-40B离心机上海安亭科学仪器厂、IKAMS3 basic涡旋混匀器德国IKA公司。
本发明采用的材料与试剂为:茶叶样品:日照绿茶(日照百润茶行)、南京绿茶(市售)、杭州龙井(市售)乙腈(色谱纯)美国TEDIA;丙酮(色谱纯)德国Merck;正己烷(色谱纯)德国Merck;氯化钠(分析纯)西陇化工股份有限公司;十六烷酸、L-茶氨酸、茶多酚、上海麦克林生化科技有限公司;咖啡因,质量浓度为1000ug/mL,北京坛墨质检科技有限公司;QuEChERS dSPE美国安捷伦科技有限公司。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1.该方法的建立可以对绿茶品质组分L-茶氨酸、十六烷酸、咖啡因、茶多酚进行更准确定性定量,克服了传统绿茶品质分析方法受人为因素影响及定性定量准确性差等缺点,且操作简单、准确、快速、方法学参数良好,可用于各地绿茶品质组分准确定性和定量分析。
2.该方法的建立可以对绿茶品质组分L-茶氨酸、十六烷酸、咖啡因、茶多酚进行更准确定性定量,能够将日照绿茶与南方绿茶品质进行准确区分,解决了绿茶市场出现以次充好、以假乱真等问题,为各地绿茶品质鉴别提供技术支持,对绿茶贸易发展具有重要价值。
附图说明
图1为不同溶剂对茶多酚、咖啡因提取含量的影响;
图2为不同溶剂L-茶氨酸、十六烷酸提取含量的影响;
图3为不同净化剂对茶多酚、咖啡因含量的影响
图4不同净化剂L-茶氨酸、十六烷酸含量的影响
图5为L-茶氨酸MRM图;
图6为咖啡因MRM图;
图7为茶多酚MRM图;
图8为十六烷酸MRM图;
图9为日照春茶4种化合物含量分析。
具体实施方式
实施例1前处理条件的优化
1、绿茶样品称样量的选择
(1)称取4.00g绿茶试样,置于100mL离心管中,加入40mL85℃蒸馏水静置30min,加入40mL乙腈振荡提取30min,加入10g氯化钠涡旋1min,以5000r/min离心5min,取上清液20mL,加入400mgPSA、400mgC18QuEChERS净化粉末,涡旋30s,过滤至鸡心瓶,旋转蒸发至近干,准确加入2.0mL丙酮+正己烷(30+70,体积比)定容后,过0.22um滤膜,并上机测定。
(2)称取2.00g绿茶试样,置于50mL离心管中,加入20mL 85℃蒸馏水静置30min,加入5g氯化钠涡旋1min,以5000r/min离心5min,取上清液10mL,加入400mgPSA、400mgC18QuEChERS净化粉末,涡旋30s,过滤至鸡心瓶,旋转蒸发至近干,准确加入2.0mL丙酮+正己烷(30+70,体积比)定容后,过0.22um滤膜,得滤液,上机测定。
试验发现,4.0g样品经蒸馏水浸泡后样品量较大,提取净化药品试剂消耗量过大,试验过程操作更为繁琐;提取液上机检测,样品中咖啡因、茶多酚含量较高,色谱柱过载,色谱峰形差,导致定量不准确等问题,试验最终确定称样量为2.0g。
2、提取溶剂的优化
茶叶呈香品质组分分析一般采用顶空进样法,而日常饮茶过程中,易挥发呈香化合物在茶汤中含量与干基含量却不相同。绿茶的冲泡温度建议85℃,为更大程度还原人体摄入茶汤中品质组分含量,本试验增加了85℃热水浸泡步骤,充分提取茶叶中品质化合物。
根据茶叶中待测组分的化学性质,本实验采用甲醇、乙酸乙酯、丙酮、0.5%(V/V)甲酸乙腈、乙腈作为提取溶剂,其它条件相同对同一绿茶样品提取效果进行考察。甲醇因极性较强可提取多种极性组分,提取液呈浑浊状态;丙酮可提取多种高色素组分,其提取液颜色为深绿色;乙酸乙酯提取过程色素类化合物较少,根据相似相容原理可提取部分脂类化合物其提取液呈透明浅绿色;酸化乙腈在提取过程中与茶汤中部分碱性化合物反应,提取液呈褐色。上述4种品质化合物不同提取剂提取结果见图表,结果表明乙腈提取绿茶中咖啡因、茶多酚含量最高、效果最好,综合考察提取率及后期净化效果确定乙腈为绿茶提取溶液。
表1不同溶剂对4种化合物提取含量的影响
3、净化条件的优化
茶叶基质复杂,常规茶叶基质前处理方法主要有QuEChERS法和固相萃取法净化,QuEChERS法因其操作简单、试剂消耗少、污染小等优点被推广使用。应用QuEChERS方法进行前处理分析时,常用N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基硅烷(C18)、石墨化炭黑(GCB)3种材料作为吸附剂,PSA能够去除基质中的有机酸、色素、金属离子,C18能够吸附脂肪和脂类等弱极性干扰物,GCB主要吸附基质中的色素。
实验选取同一茶叶样品,按照相同样品前处理过程,以无吸附剂的空白组为对照,分别组合选取PSA、C18和GCB为净化材料,比较不同吸附剂组合对同一样品中4种化合物含量的影响,图表结果显示,不同种类的吸附剂对4种绿茶中品质化合物影响明显,GCB可去除样品中色素类化合物但对茶多酚和十六烷酸吸附较大,C18可以有效去除绿茶中脂类化合物,且可以有效提高非脂溶性化合物茶多酚和咖啡因的提取率,因而使用PSA+C18时,可以有效吸附绿茶中脂类化合物、有机酸等共提取物,提高目标分析物的提取率。
表2不同净化剂对4种化合物含量的影响
从实验结果可以看到,PSA+C18为最佳净化组合,所以选择PSA+C18混合吸附剂作为本方法的净化剂。选取100mgPSA+100mg C18、200mg PSA+200mg C18、300mg PSA+300mgC18、400mgPSA+400mg C18、500mg PSA+500mg C18对净化剂用量进行优化。随着净化剂用量的增加,目标分析物的提取率有所提高。综合考虑4种目标分析物的提取率、经济效益、净化效果,最终净化材料的使用量为400mg PSA+400mg C18。
实施例2GC/MS/MS质谱条件的优化
按照欧盟方法学标准,质谱方法定性至少达到4个识别点要求才能准确定性,定性点越多定性越准确。对于三重四级杆质谱MRM监测模式下,至少选择2个离子对进行定性,1对离子对计为2~2.5个定性点,1个母离子加上2个子离子识别点为4,2个母离子,且每个有1个子离子识别点为5。本试验将4种标准溶液配置为10ug/mL的溶剂标准溶液进行全扫描,确定每种化合物的保留时间,并从每种化合物的一级质谱图中选择丰度高、m/z大的母离子碎片,在不同碰撞能量下对母离子进行碰撞解离,选取1组定量离子对和2组定性离子对,按照计算可以达到目标物识别点>4个,提高了定性准确性。
表3 4种化合物色谱保留时间、质谱条件
注:*Quantiative ion
气相色谱/串联三重四级杆质谱检测0.10mg/L4种绿茶中品质化合物标准溶液所得MRM谱图如图5-8所示。
实施例3方法学验证
1线性关系范围与检出限
试验以信噪比S/N=3和S/N=10所对应浓度,计算L-茶氨酸、茶多酚、咖啡因和十六烷酸的检出限(limit ofdetection,LOD)和定量限(limit ofquantitation,LOQ)。绿茶中4种品质化合物的检出限为0.001~0.005mg/kg,以目标组分的峰面积Y对相应的质量浓度X(mg/L),采用溶剂标准溶液绘制了0.01,0.02,0.050,0.10,0.50,1.0,5.0,10.0mg/L的标准工作曲线,其线性相关系数良好(R2>0.99),表明4种化合物在气相色谱/串联三重四级杆质谱法检测中具有较好的线性关系,该方法的灵敏度可满足方法学要求。各化合物线性方程、线性相关系数、线性范围和检出限见表4。
表4 4种化合物的线性回归方程、相关系数、线性范围、检出限、基质效应
2回收率和精密度
根据方法学验证要求,试验选取市售南京绿茶为基质,绿茶中咖啡因和茶多酚含量较高,色谱柱过载,峰形较差,定量准确率低,在定量分析时对原始上机液稀释10倍后上机检测。分别添加0.010、0.020、0.100mg/kg三个不同水平的4种化合物标准溶液,每个加标浓度水平平行测定6次,以溶剂配制的标准曲线计算加标样品的浓度,并计算回收率和精密度(relative standard deviation,RSD),其平均回收率及相对标准偏差见表5。由表5可知,方法的平均回收率在67.3%~101.7%之间,相对标准偏差在1.03%~11.20%之间,表明该方法的准确度高,稳定性好,通用性较强。
表5不同加标水平下4种化合物的加标回收率与相对标准偏差(n=6)
实施例4对比例
近年来随着茶叶品质化合物分析技术的发展,出现了光学探针分析茶叶中茶多酚类化合技术,但该方法操作繁琐,且仅能对茶多酚类化合物定性,不满足对茶多酚含量的准确定量。色谱法或色质联用技术在茶叶品质化合物测定中也得到广泛应用,该类方法可分析茶叶干物质中茶多酚等组分,采用保留时间定性,归一法定量,该方法对茶叶组分中单一化合物无法准确定量,且保留时间定性准确率低。近红外光谱技术分析茶叶中茶多酚、氨基酸等组分,该方法对于茶叶中具体化合物的定性和定量分析仍存在不足。以上茶叶化学品质分析存在前处理操作复杂、测试时间长效率低,测定结果准确性差等问题。
本方法最大程度还原饮用绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚、十六烷酸化合物的含量,采用气相色谱/串联三重四级杆质谱仪多反应监测模式(MRM),选取1组定量离子对和2组定性离子对,对目标组分进行精确定性,定性检测准确性远大于光谱法和常规色谱法,外标法定量其结果准确性优于归一法定量,且该方法同时可以测定茶叶中咖啡因、茶多酚、L-茶氨酸、十六烷酸含量,测定化合物目标明确、操作简单、数据直观、定量定性更准确,通过品质化合物具体含量数值比对能够更快速区分茶叶品质。
实施例5绿茶实际样品分析
利用本发明建立的方法对日照奎山、巨峰、三庄三地三季日照绿茶20个样本作为主要研究对象,选用市售南京绿茶、杭州龙井作为辅助研究对象,对南北方绿茶品质进行分析。
表6绿茶中4种品质组分分析
试验发现,日照绿茶春茶中品质化合物含量:L-茶氨酸0.06~0.10mg/kg、十六烷酸0.03~0.08mg/kg>、咖啡因24~49mg/kg、茶多酚23~43mg/kg。茶多酚和咖啡因随季节变化较大,春茶最高秋茶含量最低,早春茶含量为秋茶2倍;十六烷酸呈先增加再减少又增加趋势,其含量随季节变化明显,温差越大十六烷酸越容易富集,随着温度升高富集能力下降,秋季温度下降,昼夜温差增大后含量逐步提升。沿海春季温度提升较内陆慢,且昼夜温差较内陆小,因而同期沿海绿茶各组分含量低于内陆同期绿茶,南方绿茶与北方绿茶相比L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚品质化合物较低,其含量仅接近北方绿茶代表日照绿茶秋茶。
Claims (3)
1.绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法,其特征在于,采用气相色谱/串联三重四级杆质谱法对样品进行检测,包括以下步骤:
(1)检测条件:
(1-1)色谱条件
色谱柱:HP-5MS,30m×0.25mm i.d.,0.25μm,弹性石英毛细管柱;载气:高纯氦气;碰撞气:高纯氮;流速:1.1ml/min;进样方式:不分流进样;进样口温度:250℃;柱温:初始50℃保持1min,再以10℃/min程序升温至150℃,再以20℃/min程序升温至280℃;进样口温度:260℃;进样量1.0μL;
(1-2)质谱条件
离子源:电子电离源;离子源温度:230℃;四级杆质量分析器温度150℃;传输线温度280℃;溶剂延迟:3min;检测方法:多反应监测模式:运行时间23.5min,后运行5min;
(2)标准溶液配制
(2-1)准确称取各化合物标准品,用甲醇溶解,配制质量浓度为1000mg/L的标准储备液,于-18℃保存;移取各化合物的标准储备液1mL,用丙酮+正己烷溶解,配置成浓度为10mg/L的中间液,于0~4℃避光保存;
(2-2)标准工作液的配制:
准确移取各化合物的标准储备液,用丙酮+正己烷稀释成0.01,0.02,0.050,0.10,0.50,1.0,5.0,10.0mg/L标准工作液,现配现用;
(3)待检样品前处理
称取茶叶试样,置于离心管中,加入85℃水浸泡后加入乙腈振荡提取,涡旋,离心,取上清液,加入净化粉末,涡旋,过滤,蒸除溶剂,准确加入丙酮+正己烷定容后,过滤膜,得滤液,供上机分析;
(4)待检样品检测
将步骤(3)获得的滤液进行检测,测定滤液中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的含量。
2.根据权利要求1所述的绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法,其特征在于,丙酮与正己烷的体积比为3:7。
3.根据权利要求1所述的绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法,其特征在于,待检样品前处理的具体过程为:称取2.0g茶叶试样,置于50mL离心管中,加入20ml 85℃水浸泡30min后加入20mL乙腈振荡提取30min,加入5g氯化钠涡旋1min,以5000r/min离心5min,取上清液10mL,加入400mgPSA、400mgC18QuEChERS净化粉末,涡旋30s,过滤,旋转蒸发蒸除溶剂,准确加入2.0mL丙酮+正己烷定容后,过0.22um滤膜,得滤液,供上机分析。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210405523.9A CN115015446B (zh) | 2022-04-18 | 2022-04-18 | 绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210405523.9A CN115015446B (zh) | 2022-04-18 | 2022-04-18 | 绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115015446A true CN115015446A (zh) | 2022-09-06 |
CN115015446B CN115015446B (zh) | 2024-03-08 |
Family
ID=83067655
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210405523.9A Active CN115015446B (zh) | 2022-04-18 | 2022-04-18 | 绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115015446B (zh) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080113044A1 (en) * | 2006-03-23 | 2008-05-15 | Alberte Randall S | Extracts and Methods Comprising Green Tea Species |
JP2009014700A (ja) * | 2007-01-31 | 2009-01-22 | Osaka Univ | 緑茶の品質予測方法 |
CN107202836A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-09-26 | 苏州市职业大学 | 一种茶叶鲜样中茶氨酸含量的快速分析方法 |
-
2022
- 2022-04-18 CN CN202210405523.9A patent/CN115015446B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080113044A1 (en) * | 2006-03-23 | 2008-05-15 | Alberte Randall S | Extracts and Methods Comprising Green Tea Species |
JP2009014700A (ja) * | 2007-01-31 | 2009-01-22 | Osaka Univ | 緑茶の品質予測方法 |
CN107202836A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-09-26 | 苏州市职业大学 | 一种茶叶鲜样中茶氨酸含量的快速分析方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
MINGMING ZHANG 等: "Contribution of addition theanine/sucrose on the formation of chestnut-like aroma of green tea", LWT - FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY, vol. 129, pages 1 - 14 * |
PROTIVA RANI DAS 等: "Profiling of volatile and non-phenolic metabolites—Amino acids, organic acids, and sugars of green tea extracts obtained by different extraction techniques", FOOD CHEMISTRY, vol. 296, pages 69 - 77 * |
刘小力;李想;: "茶叶中茶氨酸含量的测定方法研究", 食品科学, no. 14, pages 281 - 284 * |
王玉飞: "微量化学-GC/MS法测定茶叶中咖啡因的含量", 中国卫生检验杂志, vol. 15, no. 7, pages 818 - 819 * |
王磊磊 等: "GC-MS法快速测定茶叶中脂肪酸", 分析实验室, vol. 28, no. 10, pages 9 - 11 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115015446B (zh) | 2024-03-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111366652A (zh) | 一种超高效液相色谱-串联质谱法测定茶叶中16种真菌毒素的方法 | |
CN106124674B (zh) | 一种快速测定茶叶中农药残留的前处理方法及定量分析方法 | |
CN109696499B (zh) | 一种基于高分辨率质谱的水中亚硝胺高灵敏测定方法 | |
CN111679008B (zh) | 一种同时检测烟叶、烟丝中挥发及半挥发酸、醇、酚的gc-ms-ms方法 | |
CN113295797A (zh) | 一种基于超高效液相色谱联用高分辨质谱快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法 | |
CN107192770B (zh) | 一种鉴别荆条蜜与糖浆掺假荆条蜜的分析方法 | |
CN108918747B (zh) | 滤头式固相萃取结合gc-qtof/ms快速筛查和定量测定烟草中农药残留的方法 | |
Thuan et al. | Elimination of caffeine interference in HPLC determination of urinary nicotine and cotinine. | |
CN103472178A (zh) | 液态调味品中丙烯酰胺含量的快速检测方法 | |
CN113325103A (zh) | 一种同时测定毛发中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的分析方法 | |
CN115015446B (zh) | 绿茶中l-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸同时测定的方法 | |
CN110221010B (zh) | 一种测定酱香型白酒大曲中吡喃酮类化合物的方法 | |
CN116953142A (zh) | 茶叶中花青素的液相色谱质谱联用检测方法 | |
CN111638278A (zh) | 一种水果水分氢氧同位素比值的测定方法和应用 | |
CN110333308A (zh) | 一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中nnal和可替宁的方法 | |
CN113267589B (zh) | 一种头发中16种合成***素类物质及其代谢物的分析方法 | |
CN108519454B (zh) | 一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法及其检测方法 | |
CN113866305A (zh) | 一种基于液质联用技术快速精准分析茶鲜叶中茶氨酸的方法 | |
CN107515262B (zh) | 同时测定动物血浆中林可霉素和庆大霉素的液质联用方法 | |
CN112557557A (zh) | 检测蔬菜中磺胺类、喹诺酮类及四环素类残留量的方法 | |
CN115356410B (zh) | 一种基于尿酸检测阿卡地新***的方法 | |
CN114460204B (zh) | 同时检测植物源性食品中环螨酯和烯虫炔酯农残的方法 | |
CN116148385A (zh) | 一种同时检测黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法 | |
CN115144504B (zh) | 一种定性定量检测芝麻油的成分芝麻素的方法 | |
CN114910588B (zh) | 一种茶叶中茅草枯、草芽畏、戊硝酚、消螨酚和毒菌酚的同步检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |