CN114907385A - 氮杂芳基化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

氮杂芳基化合物、其制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114907385A
CN114907385A CN202210084388.2A CN202210084388A CN114907385A CN 114907385 A CN114907385 A CN 114907385A CN 202210084388 A CN202210084388 A CN 202210084388A CN 114907385 A CN114907385 A CN 114907385A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alkyl
substituted
methyl
group
unsubstituted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210084388.2A
Other languages
English (en)
Inventor
马世超
张忠国
张松
袁文佳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Blueray Biopharma Co ltd
Original Assignee
Shanghai Blueray Biopharma Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Blueray Biopharma Co ltd filed Critical Shanghai Blueray Biopharma Co ltd
Publication of CN114907385A publication Critical patent/CN114907385A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明公开了氮杂芳基化合物、其制备方法及应用。具体地，本发明公开了氮杂芳基化合物、其药学上可接受的盐及其溶剂化物，此外本发明也提供了该类化合物的制备方法、含有该类化合物的组合物以及该类化合物用于制备治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关疾病或障碍的药物用途。

Description

氮杂芳基化合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种氮杂芳基化合物、其制备方法及应用。
背景技术
PcG(Polycomb Group)蛋白是一类重要的染色质修饰酶。它通过对染色质的修饰达到调控基因的转录，从而对干细胞的生长、分化及长期的细胞记忆有重要作用。在哺乳动物细胞中，PcG蛋白主要分为两类转录抑制复合物，分别是PRC1(Polycomb RepressiveComplex 1)和PRC2(Polycomb Repressive Complex 2)。其中，PRC2是通过对染色质中组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)的甲基化修饰来抑制相关基因的表达。PRC2蛋白复合物主要由EZH2(Enhancer of Zeste Homolog 2)(或其非常类似的同源蛋白EZH1)，EED(Embryonicectoderm Development)以及SUZ12(Suppressor of Zeste 12)等核心蛋白组成。其中，EZH2具有酶催化活性，通过SET(Su(var),E(Z)，and Trithorax)蛋白结构域能够把底物SAM(S-adenosyl-L-methionine)的甲基转移到H3K27上，从而达到H3K27的一到三甲基化修饰。EZH2的酶催化活性也依赖于PRC2其他组成部分，比如属于WD40重复结构蛋白家族的EED蛋白。EED与三甲基化的H3K27Me3的结合作用一方面对EZH2的酶催化功能有很大的变构促进作用，另一方面也能把PCR2复合物定位在需要修饰的染色质上。PRC2的功能异常，比如EZH2的过表达或功能获得性突变，与临床上许多肿瘤疾病相关，包括肺癌，乳腺癌，直肠癌，***癌，膀胱癌，胰腺癌，肉瘤以及淋巴癌等等。PRC2也与多种细胞免疫功能相关，比如EZH2参与调节淋巴细胞活化，也能与糖酵解共同促进T细胞对肿瘤细胞的应答。因此，研发PRC2小分子抑制剂有重要且广阔的药物开发价值。
围绕PRC2抑制剂的研发主要是开发EZH2抑制剂以及EED抑制剂两个策略。目前进入临床的EZH2抑制剂有EPZ-6438(Epizyme，临床二期)，GSK2816126(GSK，临床一期)，以及CPI-1205(Constellation,临床一期)等等。尽管EZH2抑制剂研发有多个进入临床研究阶段，但这些抑制剂都含有一个共同的2-吡啶酮的药效团。并且，在用已有EZH2抑制剂于临床治疗中，已经开始出现二次突变。EED抑制剂对EZH2酶功能有变构抑制的作用，可以达到与EZH2相同或类似的生物功能。而且一方面EED抑制剂很好的克服了EZH2的耐药性问题，另一方面EED抑制剂可以与EZH2抑制剂联用达到更好的协同作用效果，因此，开发新的EED抑制剂具有非常重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于现有技术中的EED抑制剂结构单一。为此，本发明提供了一种氮杂芳基化合物、其制备方法及应用。本发明的氮杂芳基化合物表现出对肿瘤细胞很好的抑制活性，具有广阔的药物开发前景。
本发明提供了一种如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物：
Figure BDA0003479851330000021
其中，
A为
Figure BDA0003479851330000022
或
Figure BDA0003479851330000023
X为N或CR7；
R1为H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代或未取代的氨基、R3取代或未取代的C1-4卤代烷基、羟基取代的或未取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基、C3-6环烷基或C1-4烷基取代的或未取代的氨基；
R3独立地为羟基、羰基、-CN、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的或未取代的C1-4烷氧基、R6取代的或未取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4独立地为羰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
R5独立地为C1-4烷基或C3-6杂环烷基；R6独立地为R6-1取代的或未取代的C1-4烷基；
R6-1独立地为羟基或C1-4烷基取代的或未取代的氨基；
R7独立地为H、羟基、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
R3的个数为1、2、3或4；
R4的个数为1或2；
R5的个数为1、2、3或4；
R6的个数为1或2；
所述C3-6杂环烷基和C3-6杂芳基中的杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个；
所述的如式(I)所示的化合物不为
Figure BDA0003479851330000024
Figure BDA0003479851330000031
Figure BDA0003479851330000041
Figure BDA0003479851330000042
或
Figure BDA0003479851330000043
在本发明某些优选实施方案中，所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物中的某些基团如下定义，未提及的基团同本申请任一方案所述(简称“在本发明某些优选实施方案中”)：
当R1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氯。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R3取代或未取代的C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、1-戊基、2-戊基、3-戊基或异戊基，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基或3-戊基。
在本发明某些优选实施方案中：当R3为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟。
在本发明某些优选实施方案中：当R3为C3-6杂芳基时，所述的C3-6杂芳基为咪唑基，优选
Figure BDA0003479851330000044
在本发明某些优选实施方案中：当R3为羟基取代的或未取代的C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选异丁氧基，羟基的个数优选为1、2或3个。
在本发明某些优选实施方案中：当R3为羟基取代的C1-4烷氧基时，所述的羟基取代的C1-4烷氧基为
Figure BDA0003479851330000045
在本发明某些优选实施方案中：所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基。
在本发明某些优选实施方案中：当R3为C1-4卤代烷基时，所述的C1-4卤代烷基为三氟甲基、三氟乙基、二氟甲基、二氟乙基。
在本发明某些优选实施方案中：当R6独立地为R6-1取代的C1-4烷基时，所述的R6-1的个数为1、2或3个。
在本发明某些优选实施方案中：当R6独立地为R6-1取代的或未取代的C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选乙基或异丁基。
在本发明某些优选实施方案中：当R6-1独立地为C1-4烷基取代的氨基时，所述的C1-4烷基的个数为1或2个，所述的C1-4烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，更优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R6-1独立地为C1-4烷基取代的氨基时，所述的C1-4烷基取代的氨基为
Figure BDA0003479851330000051
在本发明某些优选实施方案中：当R6独立地为R6-1取代的C1-4烷基时，所述的R6-1取代的C1-4烷基为
Figure BDA0003479851330000052
或
Figure BDA0003479851330000053
在本发明某些优选实施方案中：当R1为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R3取代的C1-4烷基时，所述的R3取代的C1-4烷基为
Figure BDA0003479851330000054
Figure BDA0003479851330000055
或
Figure BDA0003479851330000056
在本发明某些优选实施方案中：当R4为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R4取代的氨基时，所述的R4取代的氨基为
Figure BDA0003479851330000057
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R3取代或未取代的C1-4卤代烷基时，所述的卤代中的卤素优选氟、氯、溴或碘，更优选氟，所述的C1-4卤代烷基中的烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，更优选甲基，所述的C1-4卤代烷基优选一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为羟基取代的或未取代的C3-6环烷基时，羟基的个数优选1、2或3个，所述的C3-6烷基优选环丙基、环丁基、环戊基或环己基，更优选环丙基或环丁基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为羟基取代的C3-6环烷基时，所述的羟基取代的C3-6环烷基为
Figure BDA0003479851330000061
或
Figure BDA0003479851330000062
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R5取代或未取代的C3-6杂环烷基时，所述的C3-6杂环烷基为四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚基，优选
Figure BDA0003479851330000063
Figure BDA0003479851330000064
或
Figure BDA0003479851330000065
在本发明某些优选实施方案中：当R5独立地为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R5独立地为C3-6杂环烷基时，所述的C3-6杂环烷基为四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚基，优选
Figure BDA0003479851330000066
Figure BDA0003479851330000067
或
Figure BDA0003479851330000068
更优选
Figure BDA0003479851330000069
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R5取代的C3-6杂环烷基时，所述的R5取代的C3-6杂环烷基为
Figure BDA00034798513300000610
或
Figure BDA00034798513300000611
在本发明某些优选实施方案中：当R1为C3-6杂环烷基时，所述的C3-6杂环烷基为
Figure BDA00034798513300000612
Figure BDA00034798513300000613
或
Figure BDA00034798513300000614
在本发明某些优选实施方案中：R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、
Figure BDA00034798513300000615
Figure BDA00034798513300000616
Figure BDA0003479851330000071
Figure BDA0003479851330000072
或
Figure BDA0003479851330000078
更佳地，R1为
Figure BDA0003479851330000073
Figure BDA0003479851330000074
Figure BDA0003479851330000075
或、
Figure BDA0003479851330000076
在本发明某些优选实施方案中：当R2为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R2为C3-6环烷基时，所述的C3-6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
在本发明某些优选实施方案中：当R2为C1-4烷基取代的或未取代的氨基时，所述的C1-4烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，更优选甲基，C1-4烷基的个数优选1或2个，C1-4烷基取代的氨基优选
Figure BDA0003479851330000077
在本发明某些优选实施方案中：当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟。
在本发明某些优选实施方案中：当R7为C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基。
在本发明某些优选实施方案中：当R7为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：A为
Figure BDA0003479851330000081
在本发明某些优选实施方案中：R1优选H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基，更优选H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基，进一步优选H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、
Figure BDA0003479851330000082
Figure BDA0003479851330000083
或
Figure BDA0003479851330000084
较佳地，R1为R3取代的C1-6烷基或羟基取代的C3-6环烷基，优选
Figure BDA0003479851330000085
Figure BDA0003479851330000086
Figure BDA0003479851330000091
或
Figure BDA0003479851330000092
在本发明某些优选实施方案中：R2优选H、C1-4烷基、或C1-4烷基取代的氨基，更优选H、甲基或
Figure BDA0003479851330000093
较佳地，R2为H或C1-4烷基，优选H或甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R3取代或未取代的C1-6烷基时，R3优选羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基，更优选羟基、氟、
Figure BDA0003479851330000094
甲基、乙基、二氟甲基、三氟甲基、
Figure BDA0003479851330000095
或
Figure BDA0003479851330000096
较佳地，R3为羟基、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基，优选羟基、氟、甲基、乙基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R4取代的氨基时，R4优选C1-4烷基，更优选甲基。
在本发明某些优选实施方案中：当R1为R5取代的C3-6杂环烷基时，R5优选甲基或
Figure BDA0003479851330000097
在本发明某些优选实施方案中：当R3为R6取代的氨基时，R6优选甲基、
Figure BDA0003479851330000098
或
Figure BDA0003479851330000099
在本发明某些优选实施方案中：当R6为R6-1取代的C1-4烷基时，R6-1优选羟基或C1-4烷基取代的氨基，更优选羟基或
Figure BDA00034798513300000910
在本发明某些优选实施方案中：R7优选H、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基，更优选H、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基，进一步优选H、氟、甲氧基或甲基；较佳地，R7为H、卤素或C1-4烷基，优选H、甲基或氟。
在本发明某些优选实施方案中：
R1为以下任一结构：
Figure BDA0003479851330000101
或
Figure BDA0003479851330000102
优选
Figure BDA0003479851330000103
或
Figure BDA0003479851330000104
R3a、R3b独立地为H、C1-4烷基(优选甲基或C2-4烷基)、C1-4卤代烷基(例如一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基)、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基，优选H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；R3a和R3b不同时为甲基；当R3a为甲基时，R3b不为H；当R3a为H时，R3b不为甲基；
或R3a、R3b与所接连的原子一起形成C3-6环烷基(例如环丙基或环丁基)、C3-6杂环烷基，优选C3-6环烷基；
所述C3-6杂环烷基中的杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个。
在本发明某些优选实施方案中：R2为H。
在本发明某些优选实施方案中：R7为H、卤素(例如氟)或C1-6烷基(例如甲基)。
在本发明某些优选实施方案中：
所述如式(I)所述的化合物选自如下所示的化合物：
Figure BDA0003479851330000105
Figure BDA0003479851330000111
优选地，
Figure BDA0003479851330000112
上述化合物中，R1的定义如上所述。在本发明某些优选实施方案中：基团
Figure BDA0003479851330000121
优选
Figure BDA0003479851330000122
Figure BDA0003479851330000123
Figure BDA0003479851330000131
Figure BDA0003479851330000132
或
Figure BDA0003479851330000133
在本发明某些优选实施方案中：所述的如式(I)所述的化合物为如下任一方案：
方案一：
R1为H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基、或C1-4烷基取代的氨基；
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
方案二：
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基、或C1-4烷基取代的氨基；
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
方案三：
A为
Figure BDA0003479851330000141
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、甲基或
Figure BDA0003479851330000142
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案四：
A为
Figure BDA0003479851330000143
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、甲基或
Figure BDA0003479851330000144
R3为羟基、氟、
Figure BDA0003479851330000145
甲基、乙基、二氟甲基、三氟甲基、
Figure BDA0003479851330000146
或
Figure BDA0003479851330000147
R4为甲基；
R5为甲基或
Figure BDA0003479851330000148
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案五：
A为
Figure BDA0003479851330000151
R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、
Figure BDA0003479851330000152
Figure BDA0003479851330000153
Figure BDA0003479851330000154
或
Figure BDA0003479851330000155
R2为H、甲基或
Figure BDA0003479851330000156
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案六：
A为
Figure BDA0003479851330000157
R1为R3取代的C1-6烷基或羟基取代的C3-6环烷基，优选
Figure BDA0003479851330000158
Figure BDA0003479851330000161
Figure BDA0003479851330000162
或
Figure BDA0003479851330000163
R2为H或C1-4烷基，优选H或甲基；
R3为羟基、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基，优选羟基、氟、甲基、乙基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基；
R7为H、卤素或C1-4烷基，优选H、甲基或氟。
在本发明某些优选实施方案中：所述的如式(I)所示的化合物为如下任一结构：
Figure BDA0003479851330000164
Figure BDA0003479851330000171
Figure BDA0003479851330000181
Figure BDA0003479851330000191
在本发明某些优选实施方案中：所述的如式(I)所示的化合物为如下任一化合物：
在下述条件下保留时间为3.134min的
Figure BDA0003479851330000192
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为3.547min的
Figure BDA0003479851330000193
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为4.974min的
Figure BDA0003479851330000194
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：等度洗脱45％，流速为2.8mL/min；
在下述条件下保留时间为5.440min的
Figure BDA0003479851330000195
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：等度洗脱45％，流速为2.8mL/min；
在下述条件下保留时间为2.782min的
Figure BDA0003479851330000201
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为2.907min的
Figure BDA0003479851330000202
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为0.971min的
Figure BDA0003479851330000203
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为异丙醇；梯度：等度洗脱45％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为1.134min的
Figure BDA0003479851330000204
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为异丙醇；梯度：等度洗脱45％流动相B，流速为4mL/min。
本发明还提供所述如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其溶剂化物的同位素标记化合物。所述同位素标记化合物中所述同位素选自2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。式(I)化合物中能够被同位素标记的原子包括但不局限于氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘等，它们可分别被同位素2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I等代替。
在本发明某些优选实施方案中：所述的溶剂化物为水合物。
本发明还提供所述如式(I)所示的化合物的制备方法，其包含如下步骤：
将卤代中间体B0与中间体E0进行偶联反应得到如式(I)所示的化合物；
Figure BDA0003479851330000211
其中，W代表卤素；Rx为-B(OH)2或
Figure BDA0003479851330000212
A、R1、R2、X的定义如上所述。
所述如式(I)所示的化合物的制备方法，其还可进一步包含如下步骤制备中间体E0；
Figure BDA0003479851330000213
其中，W代表卤素，优选Br；Rx为-B(OH)2或
Figure BDA0003479851330000214
R1、X、R2的定义均如本发明所定义。
本发明还提供一种中间体化合物C1-7、C1-a或C1-b的制备方法，包括以下步骤：
化合物C1-1与1,2二卤代乙烷(例如1,2二溴乙烷)反应得到化合物C1-2，C1-2经过消除反应后得到化合物C1-3，C1-3与对甲苯磺酰肼缩合得到磺酰腙C1-4，C1-4关呋喃并三元环反应得到化合物C1-5，C1-5的溴原子催化条件下被氰基取代得到化合物C1-6，氰基还原成胺基并原位Boc酸酐保护得到C1-7；
和/或，进一步，C1-7经过手性SFC分离得到C1-7 a和C1-7b，C1-7 a和C1-7b分别脱去保护基得到C1-a和C1-b。
Figure BDA0003479851330000221
其中Z为卤素(例如Cl、Br或I)，优选Br。
本发明还提供一种中间体化合物B的制备方法，包括以下步骤：
化合物D-1和水合肼反应得到化合物D-2，化合物D-2与原甲酸三甲酯在催化剂(例如三氟乙酸)作用下关环得到中间体D，D与中间体C反应得到中间体B，反应方程式如下：
Figure BDA0003479851330000222
其中，W、A的定义如上所述。
本发明还提供中间体化合物：
Figure BDA0003479851330000231
或
Figure BDA0003479851330000232
其中，X、R3的定义如上所述。
本发明所涉及到的溶剂例如可选自：甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯、二甲苯、氯苯、水、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氧六环、DMF、乙腈、DMSO、NMP、THF或其组合；例如选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、二氧六环、DMF、乙腈、DMSO、NMP、THF或其组合。
本发明所涉及到的碱可包括有机碱和无机碱。
本发明所涉及到的有机碱例如可选自：TEA、DIPEA或其组合。
本发明所涉及到的无机碱例如可选自：氢化钠、甲醇钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、叔丁醇钾、叔丁醇钠、叔丁醇锂、LiHMDS、LDA、丁基锂、氢氧化钾、醋酸钾、氢化铝锂或其组合；例如选自氢化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、叔丁醇钾、叔丁醇钠、LiHMDS、LDA、丁基锂或其组合。
本发明所述的如式(I)所示化合物的同位素标记化合物可通过与未标记化合物类似的合成方法来制备，所不同的是把未标记的起始原料和/或试剂换成同位素标记的起始原料和/或试剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物以及药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料可以为稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。
本发明还提供了如上所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物在制备药物中的用途。所述的药物优选治疗癌症的药物。
本发明还提供了如上所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物在制备治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关的癌症药物方面的用途。
优选地，所述癌症包括但不局限于扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金森淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、***癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。
优选地，所述化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物与其他药物联合使用；更优选地，所述其他药物选自抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药或细胞保护药物。
本发明还提供了一种药物制剂，其包含如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物。所述药物制剂优选为片剂、胶囊(如持续释放或定时释放的胶囊)、药丸、粉末、颗粒(如小颗粒)、酏剂、酊剂、悬浮液(如纳米混悬液、微悬浮液)和喷雾干燥的分散体等形式的悬浮物、糖浆、乳液、溶液等形式。所述药物制剂优选的给药方式为口服、舌下含服、包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射、注入等形式的注射、鼻部服用(比如鼻膜吸入)、局部表面(如乳霜和药膏)给药、直肠给药(如栓剂)等等方式。本发明公开的化合物可以单独服用也可以与适当的药物载体一起服用。
本发明还提供了前述的药物制剂可配方成适当的药物剂量以方便并控制药物的服用量。本发明公开的化合物的剂量方案根据具体的因素有所不同，比如药效学及服用的方式、服用对象、性别、年龄、健康状况以及服药对象的体重、病情特征、其它同时服药状况、服药的频率、肝肾功能以及想达到的效果等等。本发明公开的化合物可以每天单剂量的服用，也可以总剂量分多次服用(比如每天两至四次)。
本发明还提供了一种治疗癌症的方法，其包括向需要此治疗的患者给予治疗有效量的如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物。所述的癌症包括但不局限于扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金森淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、***癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。
本发明还提供了式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物与其他药物联合使用，所述其他药物选自：抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药、细胞保护药物等等，一起联用具有更好的效果。
本发明中，所述的癌症优选与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物相关的癌症。
本发明还提供了一种抑制EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物活性的方法，其包括给予受试者治疗有效量的如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物。
本发明还提供了一种阻断EED与H3K27(例如H3K27me3)结合的方法，其包括给予受试者治疗有效量的如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
基团定义
可在参考文献(包括Carey and Sundberg"ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4THED."Vols.A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/VIS光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH2O-等同于-OCH2-。
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
在本文中定义的某些化学基团前面通过简化符号来表示该基团中存在的碳原子总数。例如，C1-6烷基是指具有总共1至6个碳原子(如1,2,3,4,5,6个碳原子)的如下文所定义的烷基。简化符号中的碳原子总数不包括可能存在于所述基团的取代基中的碳。
除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
在本申请中，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
Figure BDA0003479851330000251
表示单键时，是指
Figure BDA0003479851330000252
和
Figure BDA0003479851330000253
的混合。
“羟基”是指-OH基团。
“羰基”是指-C(＝O)-基团。当
Figure BDA0003479851330000254
中的R为羰基时，
Figure BDA0003479851330000255
为
Figure BDA0003479851330000256
“氰基”是指-CN。
“氨基”是指-NH2。
“取代的氨基”是指被一个或两个如下文所定义的烷基、烷基羰基、芳烷基、杂芳烷基取代的氨基，例如，单烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰氨基、芳烷基氨基、杂芳烷基氨基。
“羧基”是指-COOH。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”是指完全饱和的直链或支链的烃链基，仅由碳原子和氢原子组成、具有例如1至12个(优选1至8个，更优选1至6个，更优选1至4个)碳原子，且通过单键与分子的其余部分连接，例如包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、辛基、壬基和癸基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“卤代烷基”是指烷基(如本发明中所定义)中的一个或多个氢原子被卤素(如本发明中所定义)所取代，卤素的个数可以为一个或多个；当卤素的个数为多个时，卤素相同或不同。例如，氟代烷基是指烷基被一个或多个氟取代。卤代烷基的例子包括但不限于三氟甲基、二氟甲基和一氟甲基。
本申请中，优选地，“杂环烷基”中碳原子数为3、4、5或6个，杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个，进一步优选地，碳原子数为4或5个，杂原子选自N和O，杂原子数为1或2个；例如
Figure BDA0003479851330000261
或
Figure BDA0003479851330000262
本申请中，优选地，“杂螺环烷基”中碳原子数为4、5或6个，杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个，进一步优选地，杂原子选自N和O，杂原子数为1或2个；例如
Figure BDA0003479851330000263
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烃基”意指仅由碳原子和氢原子组成的稳定的非芳香族单环或多环烃基，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系，具有3至15个碳原子，优选具有3至10个碳原子，更优选具有3至8个碳原子，且其为饱和或不饱和并可经由任何适宜的碳原子通过单键与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外特别指明，环烃基中的碳原子可以任选地被氧化。环烃基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、1H-茚基、2,3-二氢化茚基、1,2,3,4-四氢-萘基、5,6,7,8-四氢-萘基、8,9-二氢-7H-苯并环庚烯-6-基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基、5,6,7,8,9,10-六氢-苯并环辛烯基、芴基、二环[2.2.1]庚基、7,7-二甲基-二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.1.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛烯基、二环[3.2.1]辛烯基、金刚烷基、八氢-4,7-亚甲基-1H-茚基和八氢-2,5-亚甲基-并环戊二烯基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烷基”意指饱和的环烃基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烯基”意指具有至少一个双键(如碳碳双键)的环烃基。环烯基可以通过其中的双键的原子与分子的其余部分连接。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂环基”意指由2至14个碳原子以及1至6个选自氮、磷、氧和硫的杂原子组成的稳定的3元至20元非芳香族环状基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂环基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系；其杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化；且杂环基可为部分或完全饱和。杂环基可以经由碳原子或者杂原子并通过单键与分子其余部分连接。在包含稠环的杂环基中，一个或多个环可以是下文所定义的芳基或杂芳基，条件是与分子其余部分的连接点为非芳香族环原子。就本发明的目的而言，杂环基优选包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至11元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团，更优选包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至8元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团。杂环基的实例包括但不限于：吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-7-基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-基、氮杂环丁烷基、吡喃基、四氢吡喃基、噻喃基、四氢呋喃基、噁嗪基、二氧环戊基、四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、喹嗪基、噻唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、二氢吲哚基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、吡咯烷基、吡唑烷基、邻苯二甲酰亚氨基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“芳基”意指具有6至18个碳原子(优选具有6至10个碳原子)的共轭烃环体系基团。就本发明的目的而言，芳基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、2,3-二氢-1H-异吲哚基、2-苯并噁唑啉酮、2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等。
在本申请中，术语“芳基烷基”是指被上文所定义的芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂芳基”意指环内具有1至15个碳原子(优选具有1至10个碳原子)和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至16元共轭环系基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂芳基可为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是杂芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。就本发明的目的而言，杂芳基优选包含1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至12元芳香性基团，更优选包含1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至10元芳香性基团或者包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至6元芳香性基团(例如杂芳基为C1-C5的杂芳基，其中杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4)。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吲哚基、呋喃基、吡咯基、***基、四唑基、三嗪基、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、异吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氮萘基、萘啶基、喹噁啉基、蝶啶基、咔唑基、咔啉基、菲啶基、菲咯啉基、吖啶基、吩嗪基、异噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、噁***基、噌啉基、喹唑啉基、苯硫基、中氮茚基、邻二氮杂菲基、异噁唑基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩基、萘并吡啶基、[1,2,4]***并[4,3-b]哒嗪、[1,2,4]***并[4,3-a]吡嗪、[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶、[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪等。
在本申请中，“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。本发明权利要求书和说明书部分所述的“任选地”的取代基选自烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烃基、任选取代的杂环烃基。
在本发明中，术语“取代”或“取代基”是指一个或多个氢原子被指定的基团所代替。当没有指明取代基的个数时，取代基可以为一个或多个；当没有指明取代位置时，取代可以在任何位置，但是只有形成一个稳定的或者是化学意义上可行的化学物才是被允许的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。例如，在
Figure BDA0003479851330000281
中，当n为2时，表示苯环被2个R取代，并且每个R都有独立的选项，即2个R可以相同，也可以不同。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。
当本发明的化合物中含有烯双键时，除非另有说明，否则本发明的化合物旨在包含E-和Z-几何异构体。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移至相同分子的另一个原子而形成的异构体。本发明的化合物的所有互变异构形式也将包含在本发明的范围内。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可能含有一个或多个手性碳原子，且因此可产生对映异构体、非对映异构体及其它立体异构形式。每个手性碳原子可以基于立体化学而被定义为(R)-或(S)-。本发明旨在包括所有可能的异构体，以及其外消旋体和光学纯形式。本发明的化合物的制备可以选择外消旋体、非对映异构体或对映异构体作为原料或中间体。光学活性的异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行拆分，例如采用结晶以及手性色谱等方法。本发明的化合物的立体异构体可有为(R)-或(S)-异构体。
制备/分离个别异构体的常规技术包括由合适的光学纯前体的手性合成，或者使用例如手性高效液相色谱法拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)，例如可参见GeraldGübitz and Martin G.Schmid(Eds.),Chiral Separations,Methods and Protocols,Methods in Molecular Biology,Vol.243,2004；A.M.Stalcup,Chiral Separations,Annu.Rev.Anal.Chem.3:341-63,2010；Fumiss et al.(eds.),VOGEL’SENCYCLOPEDIA OFPRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED.,Longman Scientific and TechnicalLtd.,Essex,1991,809-816；Heller,Acc.Chem.Res.1990,23,128。
在本申请中，术语“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
在本申请中，“药学上可接受的辅料”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本文所用术语“预防的”、“预防”和“防止”包括使病患减少疾病或病症的发生或恶化的可能性。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物***的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、局部给药和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,ThePharmacological Basis of Therapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington’s,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。在优选的实施方案中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。
本文所使用术语“药物组合”、“药物联用”、“联合用药”、“施用其它治疗”、“施用其它治疗剂”等是指通过混合或组合不止一种活性成分而获得的药物治疗，其包括活性成分的固定和不固定组合。术语“固定组合”是指以单个实体或单个剂型的形式向患者同时施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同药剂。术语“不固定组合”是指以单独实体的形式向患者同时施用、合用或以可变的间隔时间顺次施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同制剂。这些也应用到鸡尾酒疗法中，例如施用三种或更多种活性成分。
本领域技术人员还应当理解，在下文所述的方法中，中间体化合物官能团可能需要由适当的保护基保护。这样的官能团包括羟基、氨基、巯基及羧酸。合适的羟基保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等。合适的氨基、脒基及胍基的保护基包括叔丁氧羰基、苄氧羰基等。合适的巯基保护基包括-C(O)-R”(其中R”为烷基、芳基或芳烷基)、对甲氧基苄基、三苯甲基等。合适的羧基保护基包括烷基、芳基或芳烷基酯类。
保护基可根据本领域技术人员已知的和如本文所述的标准技术来引入和除去。保护基的使用详述于Greene,T.W.与P.G.M.Wuts,Protective Groups in OrganiSynthesis,(1999),4th Ed.,Wiley中。保护基还可为聚合物树脂。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
与US20160176882A1，WO2017219948A1中的化合物N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺相对比，本发明的化合物抗细胞增殖活性增加了约10倍。本发明公开的化合物在与EED蛋白的结合时，在结合的“口袋”外侧的双环结构能使化合物具有更好的代谢稳定性。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所用的起始物可由化学品销售商如Aldrich、TCI、Alfa Aesar、毕得、安耐吉等处购得，或者可通过已知的方法来合成。
下述实施例中，冰浴是指-5摄氏度至0摄氏度，室温是指10摄氏度至30摄氏度，回流温度一般是指常压下溶剂回流温度。反应过夜是指时间为8-15小时。下述实施例中，未限定具体操作温度的，均在室温下进行。
下述实施例中，中间体和最终产物的分离提纯是通过正相或反相色谱柱分离或者其它合适的方法。正相快速色谱柱是用乙酸乙酯和正己烷或甲醇和二氯甲烷等作为流动相。反相制备性高压液相色谱(HPLC)是用C18柱并用UV 214nm和254nm来检测，其流动相为A(水和0.1％甲酸)、B(乙腈)或者流动相A(水和0.1％碳酸氢铵)、B(乙腈)。
各实施例中：
LCMS仪器：Pump Agilent 1260UV检测器：Agilent 1260DAD
Mass Spectrometer API 3000
层析柱：Waters sunfire C18,4.6×50mm,5um
流动相：A-H2O(0.1％HCOOH)；B-乙腈
NMR仪器：Bruker Ascend 400M(1H NMR:400MHz；13C NMR:100MHz)。
实施例1：8-溴-5-氯-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶(D)
步骤一:5-溴-2-氯-4-肼基嘧啶(D-2)：
Figure BDA0003479851330000311
在50mL单口瓶中加入D-1(2g,8.78mmol)和乙醇(20mL)，冰浴中缓慢滴加水合肼(1.72g,53.65mmol)，悬浊液于60℃搅拌3小时。反应结束后，降至室温，析出淡黄色固体，过滤收集固体，滤饼用乙醇(5mL)洗，干燥得到淡黄色固体产物D-2(1.8g，收率92％)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.06(s,1H),7.85(s,1H),4.34(s,2H)ppm.
步骤二:8-溴-5-氯-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶(D)：
Figure BDA0003479851330000312
在50mL单口瓶中加入D-2(1.2g，5.37mmol)，原甲酸三甲酯(12mL)，三氟乙酸(1滴)，升温至100℃反应10h。反应结束后，降温至室温，旋蒸除去原甲酸三甲酯，浓缩物用硅胶柱(PE:EA＝20:1)纯化得到黄色固体产物D(960mg,收率77％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),8.05(s,1H)ppm；LCMS:m/z 232.9[M+H]+.
实施例2：((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C1-a)
步骤一：中间体2-溴-6-(2-溴乙氧基)-3-氟苯甲醛(C1-2)：
Figure BDA0003479851330000313
在250mL单口瓶中加入C1-1(19g，86.7mmol)，加入无水DMF(90mL)搅拌溶解，依次加入碳酸钾(24g，173.5mmol)，1,2-二溴乙烷(24g,130.1mmol)，升温至64℃，搅拌18个小时。反应结束后，降至室温，加入乙酸乙酯(400mL)稀释，搅拌15分钟，过滤除去不溶性盐，滤饼用乙酸乙酯(100mL)洗涤一次，滤液用饱和氯化钠(100mL)洗涤两次，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，再减压浓缩，粗品经短硅胶柱快速纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50：1)，得到中间体C1-2(25g，88％产率)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.52-10.27(m,1H),7.40-7.09(m,1H),7.02-6.78(m,1H),4.53-4.05(m,2H),3.68(t,J＝6.0Hz,2H)ppm.
步骤二：中间体2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)苯甲醛(C1-3)：
Figure BDA0003479851330000321
在1L单口瓶中加入C1-2(10g，30.7mmol)，加入无水四氢呋喃(400mL)搅拌溶解，降温至-20℃，分批次缓慢加入叔丁醇钠(4.4g，46.0mmol)。加入结束后，升温至室温搅拌过夜。反应结束后，降温至-10℃，缓慢滴加水(60mL)淬灭，加入乙酸乙酯(100mL)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝80:1至30:1)得到C1-3(5g，66％产率)，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.32(d,J＝9.8Hz,1H),7.29(dt,J＝16.2,8.3Hz,1H),7.15-6.98(m,1H),6.68-6.46(m,1H),4.89-4.68(m,1H),4.68-4.42(m,1H)ppm.
步骤三：中间体(E)-N'-(2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)亚苄基)-4-甲基苯磺酰肼(C1-4)：
Figure BDA0003479851330000322
在250mL单口瓶中加入C1-3(5g，20.4mmol)，加入无水甲醇(100mL)搅拌溶解，室温下缓慢加入对甲苯磺酰肼(4.2g，22.4mmol)，室温搅拌18个小时。反应结束后，析出大量白色固体，降温至0℃，过滤收集固体产物，母液浓缩，固体粗品用混合溶剂石油醚和乙酸乙酯(20:1)打浆，收集固体产物，减压干燥得到C1-4(7.5g，89％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.81(s,1H),7.97(s,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,2H),7.42(t,J＝9.0Hz,2H),7.16(dd,J＝9.1,4.3Hz,1H),6.67(dd,J＝13.6,6.2Hz,1H),4.49(dd,J＝21.4,9.8Hz,3H),2.35(s,3H)ppm；LCMS:m/z 414.1[M+H]+.
步骤四：中间体6-溴-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃(C1-5)：
Figure BDA0003479851330000331
在250mL单口瓶中加入C1-4(3g，7.3mmol)，加入甲苯(100mL)搅拌溶解，室温下缓慢加入叔丁醇锂(639mg，7.9mmol)，锌铑酸二聚物(56mg，72.6μmol)氮气保护，升温至100℃搅拌3个小时。反应结束后，降温至室温，过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，滤液减压浓缩，得到C1-5(1.67g，100％产率)，为淡黄色油状物，直接投入下一步反应，无需进一步纯化。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03-6.81(m,2H),4.97(t,J＝5.2Hz,1H),2.84(dt,J＝9.0,4.4Hz,1H),1.26(dt,J＝8.0,6.1Hz,1H),0.55-0.37(m,1H)ppm.
步骤五：中间体5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-甲腈(C1-6)：
Figure BDA0003479851330000332
在100mL单口瓶中加入C1-5(1.9g，8.30mmol)，氰化锌(1.46g，12.4mmol)，四三苯基膦钯(1.44g,1.24mmol)，DMF(12mL)，氮气保护，升温至110℃搅拌18个小时。反应结束后，降温至室温，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，过滤，滤液用饱和食盐水(10mL)洗涤二次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经由硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1至20:1)得到C1-6(1.35g，92％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03-6.84(m,2H),4.97(t,J＝5.2Hz,1H),2.84(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),1.33-1.20(m,1H),0.52-0.40(m,1H)ppm.
步骤六：中间体叔-丁基((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-7)：
Figure BDA0003479851330000333
在100mL单口瓶中加入C1-6(1.2g,6.8mmol)，加入甲醇(30mL)溶解，室温加入二-叔-丁基二碳酸酯(2.2g，10.3mmol)，降温至-5℃，缓慢加入六水合氯化镍(1.95g，8.22mmol)，分批次加入硼氢化钠固体(778mg，20.5mmol)，自然升温至室温搅拌2个小时。反应结束后，用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(10mL)洗涤，滤液降温至0℃，用水(5mL)淬灭，减压浓缩，粗品加入乙酸乙酯(80mL),有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经由硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1至40:1)得到C1-7(1.2g，63％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.90(s,1H),4.82(t,J＝5.3Hz,1H),4.48(d,J＝6.1Hz,1H),4.46-4.33(m,1H),2.85(d,J＝3.8Hz,1H),1.44(s,9H),1.05(dd,J＝14.6,6.0Hz,1H),0.32(s,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
步骤七：中间体叔-丁基((5-氟-1aR,6bR-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-7a)和((5-氟-1aS,6bS-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-7b)：
Figure BDA0003479851330000341
将C1-7(1.2g，4.3mmol)通过如下的手性SFC进一步纯化:柱:AD-H 20x250 mm，10um(Daicel),流速:80g/min，流动相:13％(0.2％氨气甲醇/甲醇)在CO2中，检测:214nM，得到C1-7a(0.52g，43.3％产率)，Rt:0.99min；和C1-7b(0.57g，47.5％产率)，Rt:0.71min.
C1-7a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.98-4.73(m,2H),4.45(ddd,J＝41.3,14.0,5.7Hz,2H),2.84(s,1H),1.45(d,J＝7.7Hz,9H),1.05(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.31(d,J＝4.6Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
C1-7b:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.98-4.73(m,2H),4.45(ddd,J＝41.3,14.0,5.7Hz,2H),2.84(s,1H),1.45(d,J＝7.7Hz,9H),1.05(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.31(d,J＝4.6Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
步骤八：中间体((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C1-a)：
Figure BDA0003479851330000342
在100mL单口瓶中加入化合物C1-7a(1.2g,4.30mmol)，加入二氯甲烷(20mL)溶解，室温下加入三氟乙酸(4mL，52mmol)，并搅拌2小时，反应结束后，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸得到无色固体C1-a的三氟乙酸盐，1.26g，收率100％。产物可直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.84(dd,J＝8.8,4.0Hz,1H),4.97(t,J＝5.4Hz,1H),4.31(q,J＝13.7Hz,2H),2.92-2.77(m,1H),1.26-1.11(m,1H),0.38-0.21(m,1H)ppm；LCMS:m/z 180.1[M+H]+.
实施例3：中间体4-(氨基甲基)-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-3-醇(C2)：
步骤一：中间体2-溴-3,6-二氟苯甲醛(C2-2)：
Figure BDA0003479851330000351
在500mL干燥的三口烧瓶中加入C2-1(22g,114mmol)和干燥的THF(200mL)，冷却至–70℃。二异丙基氨基锂(2M,68.4mL)缓慢滴加入反应液中。反应液在相同温度下搅拌45分钟后，加入DMF(17.8mL,228mmol)。反应液在相同温度下搅拌两小时后升至0℃。饱和氯化铵(200mL)加入到反应液中。反应液用EtOAc(200mL X2)萃取。合并的有机相用盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物在硅胶上纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1)，得到C2-2(20g，79.4％产率)，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.34(s,1H),7.34(ddd,J＝9.2,7.4,4.5Hz,1H),7.16(td,J＝9.3,4.0Hz,1H)ppm.
步骤二：中间体2-溴-3-氟-6-甲氧基苯甲醛(C2-3)：
Figure BDA0003479851330000352
在2L的三口烧瓶中加入C2-2(20g，90.5mmol)，用无水THF(1000ml)和MeOH(200ml)搅拌溶解。加入甲醇钠(5.87g，108.6mmol)，反应液在60℃.搅拌18小时。减压浓缩除去大部分溶剂，加入500mL水。悬浊液搅拌30分钟后过滤，收集固体。固体用石油醚和乙酸乙酯(5:1)混合液打浆，过滤得到固体，减压干燥得到C2-3(18g,85％产率)，为黄色固体。
LC-MS:m/z 233.1[M+H]+.
步骤三：中间体2-溴-3-氟-6-羟基苯甲醛(C2-4)：
Figure BDA0003479851330000353
在1L的单口烧瓶中加入C2-3(16.8g，72.1mmol)和二氯甲烷(300mL)。在-78℃下缓慢滴加三溴化硼(21.7g,86.5mmol),反应液升至室温，并搅拌18小时。反应液用二氯甲烷(300mL)稀释，缓慢加入饱和碳酸氢钠(300mL)。有机相用盐水洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物在硅胶上纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50：1)，得到C2-4(10g，63.3％产率)，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.77(s,1H),10.34(s,1H),7.29(dt,J＝12.7,6.3Hz,1H),6.94(dd,J＝9.3,4.1Hz,1H)ppm.
步骤四：中间体4-溴-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-3-醇(C2-5)：
Figure BDA0003479851330000361
在干燥的三口烧瓶中加入三甲基碘化亚砜(9.73g，44.2mmol)和DMSO(50ml)。在冰水浴下加入叔丁醇钠(4.25g，44.2mmol)。反应液在室温下搅拌2小时，加入C2-4(8.8g，40.2mmol)。反应液在室温下搅拌18小时后，加入乙酸乙酯(250ml)和水(250ml)，用乙酸乙酯萃取(250ml X2)。有机相用水和盐水分别洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物在硅胶上纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得到C2-5(6.2g，66.2％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(t,J＝8.7Hz,1H),6.76(dd,J＝8.8,3.5Hz,1H),5.51-5.40(m,1H),4.58(ddd,J＝13.4,10.8,4.6Hz,2H),2.33(d,J＝4.9Hz,1H)ppm.
步骤五：中间体5-氟-3-羟基-2,3-二氢苯并呋喃-4-甲腈(C2-6)：
Figure BDA0003479851330000362
在干燥的单口烧瓶中依次加入C2-5(2.7g，11.6mmol)，氰化锌(2.04g，17.4mmol)，DMF(50ml)和四三苯基膦钯(1.34g，1.16mmol)。反应液在氮气保护下加热至120℃，搅拌18小时。反应液冷却至室温，用乙酸乙酯(200mL X3)和水(200ml)萃取。有机相用水和盐水分别洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物在硅胶上纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到C2-6(1.6g，77％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20-6.99(m,2H),5.63(dd,J＝6.9,2.9Hz,1H),4.69(dd,J＝10.8,7.1Hz,1H),4.55(dd,J＝10.8,3.1Hz,1H),2.74(s,1H)ppm.
步骤六：中间体(5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲胺(C2)：
Figure BDA0003479851330000363
在100mL单口瓶中依次加入C2-6(1.55g，8.65mmol)，三氟乙酸(1.09g，8.65mmol)，甲醇(20mL)和10％钯碳(2g，含50％水)。反应混合物用氢气鼓气5分钟，用氢气球换气三次，在氢气球下60℃搅拌48小时。混合物经硅藻土过滤，用甲醇(50mL X2)洗涤，滤液减压浓缩加入二氧六环(10mL)和10M氢氧化钠水溶液(1mL)，用二氧六环(10mL X2)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。得到化合物C2(1.4g，90％纯度，87％产率)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.27(t,2H),3.77(s,2H),4.56(t,2H),6.59(dd 1H),6.81(dd,1H)ppm；LC-MS:m/z 168.1[M+H]+.
实施例4：8-溴-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(B1)
Figure BDA0003479851330000371
在100mL单口瓶中依次加入化合物C1-a的三氟乙酸盐(1.0g，3.41mmol)，化合物D(0.95g，4.09mmol)，三乙胺(0.69g，6.82mmol)，乙腈(20mL)，室温搅拌3小时，反应结束后，加入乙酸乙酯(80mL)稀释溶解，有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析纯化(流动相：PE:EA＝30:1至PE:EA＝10:1)得到化合物B1(1.2g,收率94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.87(d,J＝4.5Hz,1H),7.85(s,1H),6.94(t,J＝9.5Hz,1H),6.77(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.92(t,J＝5.2Hz,1H),4.79(p,J＝9.7Hz,1H),2.88(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),0.97(dd,J＝14.4,5.7Hz,1H),0.10(s,1H)ppm；LCMS:m/z376.0[M+H]+.
使用实施例4的方法，用中间体D和C2反应得到中间体B2：
Figure BDA0003479851330000372
LCMS:m/z 364.0[M+H]+
实施例5：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇
步骤一：(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亚甲基)氨基)-吡啶-2-甲酸甲酯E27-1
Figure BDA0003479851330000373
将(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亚甲基)氨基)-吡啶-2-甲酸甲酯(5.0g,21.6mmol)，1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(5.16g，43.3mmol)溶于甲苯(100mL)，反应液升温至110℃下反应4小时，TLC检测无原料剩余，反应液浓缩得到粗品E27-1(6.00g)。
LCMS:m/z 285.7[M+H]+.
步骤二：(E)-5-溴-6-(((羟胺基)亚甲基)氨基)-吡啶-2-甲酸甲酯E27-2
Figure BDA0003479851330000381
在反应瓶中依次加入E27-1(6.0g,20.97mmol),盐酸羟胺(2.91g,41.94mmol),乙酸钠(3.44g，41.9mmol)，乙醇(60mL)。反应液于氮气氛围下升温至50℃反4小时，LCMS监测反应结束，降至室温，过滤得到E27-2(5.9g，85.0％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41-8.29(m,1H),8.26-8.19(m,1H),7.93(d,J＝7.9Hz,1H),7.57(d,J＝7.9Hz,1H),3.97(s,3H)ppm；LCMS:m/z 273.7[M+H]+.
步骤三：8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E27-3
Figure BDA0003479851330000382
在室温下往E27-2(10g,36.49mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中逐滴加入三氟乙酸酐(23.0g，109mmol)。然后缓慢升至75℃，并搅拌反应3小时。反应结束后，在0℃向混合物中加入饱和的碳酸氢钠水溶液(100mL)进行淬灭，用乙酸乙酯(100mL*3)进行萃取，合并的有机相干燥，浓缩。浓缩物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到4:1)纯化得到白色固体E27-3(5.00g,收率53.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.85(d,J＝7.8Hz,1H),7.68(d,J＝7.9Hz,1H),4.08(s,3H)ppm；LCMS:m/z 256.0[M+H]+.
步骤四：1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酮E27-4
Figure BDA0003479851330000383
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E27-3(5.0g，19.3mmoL)溶于四氢呋喃(100mL)，降温至-30℃滴加甲基溴化镁(3M，32.5mL)在氮气气氛下反应3小时，LCMS监测反应结束，升温至0℃，淬灭，萃取，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酮E27-4(0.3g，6.40％收率)。
LCMS m/z 240.0[M+H]+.
步骤五：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-丁醇E27-5
Figure BDA0003479851330000391
将1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酮E27-4(150mg，0.6mmoL)溶于四氢呋喃(10mL)，降温至-30℃滴加乙基溴化镁(1M，3.75mL)在氮气气氛下反应6小时，LCMS监测反应结束，升温至0℃，淬灭，萃取，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-丁醇E27-5(100mg，59.3％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),5.68(s,1H),2.48-2.41(m,1H),1.97-1.89(m,1H),1.70(s,3H),0.59(t,J＝7.4Hz,3H).LCMS m/z 270.0[M+H]+.
步骤六：(5-(2-羟基丁烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸
Figure BDA0003479851330000392
将2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-丁醇E27-5(100mg，0.37mmol)，双(频哪醇合)二硼(123mg，0.44mmol)，醋酸钾(109mg，1.11mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(60.5mg，0.07mmol)，1,4-二氧六环(1.5mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应5小时，TLC检测无原料剩余，含E27-6反应液不处理直接用于下一步。
步骤七：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇E27-7
Figure BDA0003479851330000393
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并4,3-c]嘧啶-5-胺(53.7mg，0.15mmol)，碳酸钠(117mg，1.11mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(30.1mg，0.04mmol)，1,4-二氧六环和(4mL)水(1mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化，再用HPLC纯化调碱得到2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇E27-7(43.0mg，23.3％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.39(s,1H),9.10(d,J＝8.0Hz,1H),8.91(br s,1H),8.62(s,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.71(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),5.67(s,1H),4.78(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.33-3.30(m,2H),2.55-2.51(m,1H),1.99(dd,J＝7.4,13.8Hz,1H),1.75(s,3H),0.64(t,J＝7.4Hz,3H).LCMS m/z475.1[M+H]+.
步骤八：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇E27-7的拆分
Figure BDA0003479851330000401
将2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇E27-7通过手性SFC分离，(分离方法：column(色谱柱):DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm,10um)；mobile phase(流动相):A[0.1％NH3H2O IPA]；B(乙醇):5％-40％梯度,4mL/min)，得到(S)-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇((S)-E27-7)或(R)-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丁烷-2-醇((R)-E27-7)，其中一个的保留时间为3.134min(化合物a)，另一个对映体的保留时间为3.547min(化合物b)。
化合物a：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.39(s,1H),9.10(d,J＝8.0Hz,1H),8.91(br s,1H),8.62(s,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.71(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),5.67(s,1H),4.78(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.33-3.30(m,2H),2.55-2.51(m,1H),1.99(dd,J＝7.4,13.8Hz,1H),1.75(s,3H),0.64(t,J＝7.4Hz,3H)ppm.
化合物b:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.38(s,1H),9.10(d,J＝8.0Hz,1H),8.91(br s,1H),8.62(s,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),6.99-6.93(m,1H),6.71(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),5.67(s,1H),4.78(s,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.33-3.30(m,2H),2.54-2.51(m,1H),2.04-1.94(m,1H),1.75(s,3H),0.64(t,J＝7.4Hz,3H)ppm.
实施例6：3-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊烷-3-醇
步骤一：3-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊-3-醇E28-1
Figure BDA0003479851330000411
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5甲酸甲酯E27-3(240mg，0.940mmoL)溶于四氢呋喃(5.00mL)，降温至-30℃滴加乙基溴化镁(1M，2.83mL)在氮气气氛下反应3小时，LCMS监测反应结束，升温至0℃，淬灭，萃取，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到3-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊-3-醇E28-1(80.0mg，29.8％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝7.9Hz,1H),5.37(s,1H),2.60-2.51(m,2H),1.91-1.80(m,2H),0.54(t,J＝7.4Hz,6H)ppm；LCMS:m/z 286.0[M+H]+.
步骤二：(5-(3-羟基戊烷-3-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E28-2
Figure BDA0003479851330000412
将3-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊-3-醇E28-1(80.0mg，0.280mmol)，双(频哪醇合)二硼(79.0mg，0.310mmol)，醋酸钾(8.03mg，0.840mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(46.0mg，0.056mmol)，1,4-二氧六环(1.00mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应5小时，TLC检测无原料剩余，含E28-2反应液不处理直接用于下一步。
步骤三：3-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊-3-醇
Figure BDA0003479851330000413
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(41.0mg，0.110mmol)，碳酸钠(89.0mg，0.800mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(46.0mg，0.056mmol)，1,4-二氧六环和(1.00mL)水(0.500mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到3-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)戊-3-醇(50.0mg，35.6％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.40(s,1H),9.11(d,J＝7.9Hz,1H),8.95-8.86(m,1H),8.61(s,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.75-6.67(m,1H),5.36(s,1H),4.78(br d,J＝4.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.33-3.30(m,2H),2.69-2.53(m,2H),1.97-1.84(m,2H),0.59(t,J＝7.4Hz,6H).LCMS m/z 489.3[M+H]+.
实施例7：1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：8-溴-5-(1,1,1-三氟-2-((三甲基硅烷基)氧基)丙烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E29-1
Figure BDA0003479851330000421
将1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酮E27-4(500mg，2.08mmol)，氟化铯(55.0mg，0.362mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，在氮气氛围，0℃条件下，加入三氟甲基三甲基硅烷(326mg，2.29mmol)。在氮气氛围下于20℃反应1小时。然后再加入三氟甲基三甲基硅(296mg，2.08mmol)，在20℃下接着反应1小时。TLC和LCMS监测无原料剩余，含E29-1反应液不处理直接用于下一步。
LCMS:m/z 383.9[M+H]+.
步骤二：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1,1-三氟丙-2-醇E29-2
Figure BDA0003479851330000422
向上一步反应液中加入乙醇(5mL)，20℃反应2小时，TLC监测反应结束，反应液浓缩后加入二氯甲烷稀释，用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，过滤，浓缩。粗品通过柱层析纯化，得到白色固体产物2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1,1-三氟丙-2-醇E29-2(340mg，52.7％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.70-7.66(m,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),1.93(s,3H)ppm.
步骤三：(5-(1,1,1-三氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E29-3
Figure BDA0003479851330000431
在手套箱中向闷瓶中依次加入2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1,1-三氟丙烷-2-醇E29-2(150mg，0.482mmol)，联硼酸频那醇酯(135mg，0.530mmol)，醋酸钾(95.0mg，0.964mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯·二氯甲烷络合物(39.4mg,0.048mmol)和二氧六环(5mL)。在氮气氛围下于120℃反应5小时，LCMS监测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤四：1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E29-4
Figure BDA0003479851330000432
向上一步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(150mg，0.412mmol)，碳酸钾(134mg，0.967mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯·二氯甲烷络合物(39.5mg，0.048mmol)以及水(1mL)。反应液于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，浓缩，浓缩物通过柱层析纯化，得到灰白色固体产物1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E29-4(90.0mg，38.9％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.44(s,1H),9.17(d,J＝8.0Hz,1H),9.00(t,J＝4.8Hz,1H),8.70(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.01-6.92(m,1H),6.75-6.68(m,1H),4.78(d,J＝4.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.34(m,2H),2.16(s,3H)ppm；LCMS:m/z 515.3.0[M+H]+.
步骤五：1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇的拆分
1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E29-4通过手性SFC分离，(分离方法：column(色谱柱):DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm,10um)；mobilephase(流动相):A[0.1％NH3H2O IPA]；B(乙醇):45％梯度,2.8mL/min)，得到(S)-1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇((S)-E29-4)或(R)-1,1,1-三氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇((R)-E29-4)，其中一个的保留时间为4.974min(化合物c)，另一个对映体的保留时间为5.440min(化合物d)。
Figure BDA0003479851330000441
化合物c：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.44(s,1H),9.17(d,J＝8.0Hz,1H),9.00(t,J＝4.8Hz,1H),8.70(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.01-6.92(m,1H),6.75-6.68(m,1H),4.78(d,J＝4.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.34(m,2H),2.16(s,3H)ppm；LCMS:m/z 515.3.0[M+H]+.
同时得到实施例8：化合物d：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.44(s,1H),9.17(d,J＝8.0Hz,1H),9.00(t,J＝4.8Hz,1H),8.70(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.01-6.92(m,1H),6.75-6.68(m,1H),4.78(d,J＝4.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.34(m,2H),2.16(s,3H)ppm；LCMS:m/z 515.3.0[M+H]+.
实施例9：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基丙烷-2-醇
步骤一：(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲脒E30-2
Figure BDA0003479851330000442
将3-溴-6-甲基吡啶-2-胺E30-1(4.50g，24.1mmoL)，N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(14.3g，120mmol)溶于甲苯(10.0mL)，然后升温至100℃，在氮气气氛下反应2小时，反应结束后，降至室温，将反应液减压浓缩，得到(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲脒E30-2(5.80g，粗品)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),7.66(d,J＝7.9Hz,1H),6.60(d,J＝7.9Hz,1H),3.14(s,3H),3.10(s,3H),2.40(s,3H)ppm；LCMS:m/z 242.1[M+H]+.
步骤二：(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N-羟基甲脒E30-3
Figure BDA0003479851330000443
将(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲脒E30-2(5.80g，24.0mmoL)，乙酸钠(4.32g，52.7mmoL)，盐酸羟胺(3.33g，43.9mmoL)溶于乙醇(60.0mL)，升温至50℃在氮气气氛下反应2小时，TLC监测反应结束，降至室温，用水稀释，过滤，将滤饼干燥得到(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N-羟基甲脒E30-3(5.50g，98.8％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25-8.09(m,2H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(d,J＝8.0Hz,1H),2.43(s,3H)ppm；LCMS:m/z 230.1[M+H]+.
步骤三：8-溴-5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E30-4
Figure BDA0003479851330000451
将(E)-N’-(3-溴-6-甲基-吡啶-2-基)-N–羟基甲脒E30-3(5.50g，23.9mmol)，溶于多聚磷酸(5.00mL)，温度升温至90℃于氮气气氛下反应2小时，TLC检测无原料剩余，降至室温，用碳酸氢钠淬灭，萃取，过滤，洗涤干燥，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到8-溴-5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E30-4(1.70g，33.4％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),2.72-2.69(m,3H)ppm；LCMS:m/z 212.1[M+H]+.
步骤四：1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基-丙-2-醇E30-5
Figure BDA0003479851330000452
将8-溴-5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E30-4(1.50g，7.07mmoL溶于四氢呋喃(40.0mL)，降温至-78℃滴加二异丙基胺基锂(2.00M,7.07mL)，在-78℃氮气气氛下反应2小时，加入丙酮(2.47g,42.4mmol,3.12mL)在-78℃氮气气氛下反应3小时。TLC和LCMS监测反应结束，淬灭，萃取，过滤，洗涤干燥粗品用快速硅胶柱纯化，再用HPLC纯化得到1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基-丙-2-醇E30-5(450mg，21.9％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H),4.72(s,1H),3.31(s,2H),1.13(s,6H)ppm；LCMS:m/z 270.0[M+H]+.
步骤五：(5-(2-羟基-2-甲基-丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E30-6
Figure BDA0003479851330000453
将1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基-丙-2-醇E30-5(150mg，0.56mmol)，双(频哪醇合)二硼(155mg，0.61mmol)，醋酸钾(163mg，1.67mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(90.7mg，0.110mmol)，1,4-二氧六环(2.00mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤六：1-(-8-(5-(((-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-[1,2,4]***[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基-丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000461
向上一步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(80.6mg，0.220mmol)，碳酸钠(176mg，1.66mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(45.2mg，0.055mmol)1.4-二氧六环(1.00mL)和水(0.500mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化，再用HPLC纯化得到1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-甲基丙烷-2-醇(5.00mg，1.86％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),9.10(d,J＝7.8Hz,1H),8.94-8.87(m,1H),8.59(s,1H),7.30(br d,J＝7.8Hz,1H),6.97(br t,J＝9.5Hz,1H),6.72(brdd,J＝3.4,8.5Hz,1H),4.78(br d,J＝4.4Hz,2H),4.76(s,1H),4.55(br t,J＝8.6Hz,2H),3.41(br s,2H),3.27-3.18(m,2H),1.17(s,6H)ppm；LCMS:m/z 475.3[M+H]+.
实施例10：1,1,3,3-四氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-羧酸E31-1
Figure BDA0003479851330000462
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E27-3(2.50g，9.76mmol)，氢氧化钠(1.17g，29.3mmol)溶于水(10.0mL)，甲醇(20.0mL)和四氢呋喃(20.0mL)。混合物在氮气氛围下在80℃反应12小时。TLC监测发现反应完毕。反应液真空浓缩，加入饱和氯化钠溶液稀释，用4M的盐酸调pH值至5，过滤并收集固体，饱和氯化钠溶液洗涤，得到粗品产物8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-羧酸E31-1(2.50g，粗品)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H)ppm.
步骤二：8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酰氯E31-2
Figure BDA0003479851330000471
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸E31-1(700mg，2.89mmol)，N,N-二甲基甲酰胺(35mg，0.479mmol)和二氯亚砜(10.0mL)的混合物，在氮气氛围下80℃反应6小时。LCMS监测发现反应完全。反应液浓缩，得到粗品产物8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酰氯E31-2(770mg，粗品)。
步骤三：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1,3,3-四氟丙-2-醇E31-3
Figure BDA0003479851330000472
8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酰氯E31-2(770mg，2.96mmol)，(溴二氟甲基)三甲基硅烷(1.80g，8.87mmol)，三苯基膦(1.94g，7.39mmol)，1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-嘧啶酮(1.52g，11.8mmol)的乙腈(10.0mL)溶液，在20℃下反应12小时，然后加水(5.00mL)和吡啶(0.935g，11.8mmol)淬灭，反应液在80℃反应1.5小时。LCMS监测发现反应完全。反应液减压浓缩，加水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机相干燥，过滤，浓缩。粗品通过柱层析分离，得到白色固体产物2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1,3,3-四氟丙-2-醇E31-3(300mg，30.6％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ.44(s,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),6.67-6.36(m,3H)ppm；LCMS:m/z 327.9[M+H]+.
步骤四：(5-(1,1,3,3-四氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E31-4
Figure BDA0003479851330000473
在手套箱中向闷瓶中依次加入2-(8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇E31-3(250mg，0.762mmol)，联硼酸频那醇酯(232mg，0.914mmol)，1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯·二氯甲烷络合物(62.2mg，0.0762mmol)，醋酸钾(150mg，1.52mmol)以及二氧六环(5.00mL)。反应液在氮气氛围120℃下反应5小时。TLC监测反应完毕。反应液直接用于下一步。
步骤五：1,1,3,3-四氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000481
向步骤四的反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(222mg，0.609mmol)，碳酸钾(211mg，1.52mmol)，水(1.00mL)，二氧六环(5.00mL)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯·二氯甲烷络合物(62.2mg，0.0761mmol)。反应液在氮气氛围下100℃反应2小时。LCMS监测反应完毕。反应液浓缩，通过柱层析纯化，粗品再用二氯甲烷：甲基叔丁基醚(10：1)打浆，之后再用乙腈打浆，最后通过pre-HPLC纯化，得到的产物盐溶液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，浓缩，固体用水打浆，过滤，洗涤，冻干，得到纯品产物1,1,3,3-四氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇(95.0mg，23.4％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.45(s,1H),9.23(d,J＝8.0Hz,1H),9.04(s,1H),8.74(s,1H),7.86(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(br t,J＝53.8Hz,2H),7.00-6.94(m,1H),6.75-6.70(m,1H),4.79(s,2H),4.56(t,J＝8.8Hz,2H),3.34-3.29(m,2H)ppm；LCMS m/z 533.3[M+H]+.
实施例11：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-1-醇
步骤一：1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-酮E32-1
Figure BDA0003479851330000482
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E27-3(1.50g，5.86mmoL)溶于四氢呋喃(20.0mL)中，降至-30℃，滴加乙基溴化镁，保持温度反应4小时，LCMS监测反应结束，淬灭、萃取、洗涤、干燥、浓缩，用硅胶柱纯化得到1-(8-溴-[1,2,4]苯***[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-酮E32-1(1.00g，67.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),8.14(d,J＝7.9Hz,1H),7.61(d,J＝7.9Hz,1H),3.40-3.34(m,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)ppm；LCMS:m/z 256.0[M+3]+.
步骤二：1-(8-溴-[1,2,4]苯***[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇E32-2
Figure BDA0003479851330000483
将1-(8-溴-[1,2,4]苯***[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-1-酮E32-1(1.00g，3.94mmoL)溶于甲醇(20.0mL)中，降至-5℃，加入硼氢化钠(447mg，11.8mmoL)，升至0℃，反应2小时，TLC监测反应结束,淬灭、浓缩、萃取、洗涤、干燥、浓缩，用硅胶柱纯化得到1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇E32-2(800mg，79.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.05(d,J＝7.8Hz,1H),7.17-7.15(m,1H),5.88(d,J＝5.1Hz,1H),5.19-5.13(m,1H),2.02-1.90(m,1H),1.74-1.62(m,1H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)ppm；LCMS:m/z 258.0[M+3]+.
步骤三：(5-(1-羟丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸
Figure BDA0003479851330000491
将1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇E32-2(800mg，3.12mmol)，联硼酸频那醇酯(872mg，3.44mmol)，醋酸钾(919mg，9.37mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(510mg，0.624mmol)，溶于1,4-二氧六环(8.00mL)，温度升温至120℃于氮气氛围下反应5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
LCMS:m/z 222.0[M+3]+.
步骤四：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇E32-4
Figure BDA0003479851330000492
向上一步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(512mg，1.40mmol)，碳酸钠(993mg，9.36mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(509mg，0.624mmol)1，4-二氧六环(3.00mL)和水(1.00mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降至室温，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-1-醇E32-4(产物：300mg,21.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),9.18(d,J＝7.8Hz,1H),8.95-8.89(m,1H),8.64(s,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.74-6.69(m,1H),5.85(d,J＝5.0Hz,1H),5.30-5.24(m,1H),4.81-4.74(m,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.32-3.30(m,2H),2.08-1.96(m,1H),1.80-1.68(m,1H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H)ppm；LCMS:m/z461.0[M+H]+.
步骤五：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-1-醇E32-4的拆分
Figure BDA0003479851330000501
将1-(8-(5-(((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇E32-4通过手性SFC分离，(分离方法：column(色谱柱):DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm,10um)；mobile phase(流动相):A[0.1％NH3H2O IPA]；B(乙醇):5％-40％梯度,4mL/min)，得到(S)-1-(8-(5-(((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇((S)-E32-4)或(R)-1-(8-(5-(((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-1-醇((R)-E32-4)，其中一个的保留时间为2.782min(化合物e)，另一个对映体的保留时间为2.907min(化合物f)。
化合物e：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),9.18(d,J＝7.8Hz,1H),8.95-8.89(m,1H),8.63(s,1H),7.41(d,J＝7.9Hz,1H),7.01-6.93(m,1H),6.75-6.69(m,1H),5.84(d,J＝5.0Hz,1H),5.30-5.24(m,1H),4.78(br d,J＝4.5Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.32-3.30(m,2H),2.08-1.96(m,1H),1.80-1.68(m,1H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H)ppm.
化合物f：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),9.18(d,J＝7.8Hz,1H),8.95-8.89(m,1H),8.64(s,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.74-6.69(m,1H),5.85(d,J＝5.0Hz,1H),5.30-5.24(m,1H),4.81-4.74(m,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.32-3.30(m,2H),2.08-1.96(m,1H),1.80-1.68(m,1H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H)ppm.
实施例12：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：6-氨基-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-2
Figure BDA0003479851330000511
将6-氨基-3-溴吡啶-2-甲酸甲脂E33-1(5g,21.6mmol)，甲基硼酸(3.24g,54.1mmol)，2-二环己基膦基-2′,6′-二异丙氧基-1,1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)甲烷磺酸盐(904mg,1.08mmol)，碳酸钾(4.49g,32.4mmol)1，4-二氧六环(50mL)混合，抽置换氮气三次。反应液于氮气氛围下升温至100℃反应12小时，LCMS监测反应结束，降至室温，减压浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到6-氨基-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-2(3.50g,21.06mol,97.3％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15(d,J＝8.4Hz,1H),6.42(d,J＝8.4Hz,1H),4.54(brs,2H),3.75(s,3H),2.24(s,3H).
步骤二：6-氨基-5-溴-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-3
Figure BDA0003479851330000512
将6-氨基-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-2(3.5g,21.1mmol)，四丁基三溴化铵(15.2g，31.6mmol)溶于二氯甲烷(42.0mL)，在25℃下反应12小时，TLC检测无原料剩余。反应液用亚硫酸钠淬灭，萃取干燥，减压浓缩。浓缩物用快速硅胶柱纯化得到6-氨基-5-溴-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-3(2.10g，8.57mmol，40.7％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(s,1H),5.05(br s,2H),3.95(s,3H),2.44(s,3H)
步骤三：5-溴-6-(((二甲胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-4
Figure BDA0003479851330000513
将6-氨基-5-溴-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-3(2.10g,8.57mmol)，N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(2.04g，17.1mmol)溶于甲苯(20.0mL)，反应液升温至110℃下反应4小时，TLC检测无原料剩余，反应液浓缩得到粗品5-溴-6-(((二甲胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-4(2.30g，7.66mmol，89.4％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.75(s,1H),3.94(s,3H),3.16(s,3H),3.14(s,3H),2.46(s,3H)ppm.
步骤四：(5-溴-6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-5
Figure BDA0003479851330000521
在反应瓶中依次加入(5-溴-6-(((二甲胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-4(2.30g,7.66mmol),盐酸羟胺(1.06g,15.3mmol),乙酸钠(1.26g，15.3mmol)，乙醇(23.0mL)。反应液于氮气氛围下升温至50℃反4小时，LCMS监测反应结束，降至室温，过滤得到(5-溴-6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-5(1.12g，50.7％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23-8.20(m,2H),7.75(s,1H),3.95(s,3H),2.48(s,3H)ppm.
步骤五：8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E33-6
Figure BDA0003479851330000522
在室温下往(5-溴-6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯E33-5(1.12g,3.89mmol)的加入多聚磷酸(3.89mmol,10.0mL)。然后缓慢升至95℃，并搅拌反应2小时。反应结束后，在0℃加入饱和的碳酸氢钠水溶液进行淬灭，用乙酸乙酯进行萃取，干燥，浓缩柱层析纯化得到白色固体产物8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E33-6(1.01g,3.74mmol,96.2％收率)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.70(s,1H),4.11(s,3H),2.48(s,3H)ppm.
步骤六：2-(8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E33-7
Figure BDA0003479851330000523
在-30℃下，8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E33-6(1.01g,3.74mmol)的四氢呋喃溶液中(10.0mL)滴加甲基溴化镁(3M,12.4mL)并在此温度下搅拌3小时。反应结束后，向反应液中加入水(30mL)进行淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩后用快速硅胶柱纯化得到2-(8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E33-7(410mg，1.52mmol,40.6％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.55(s,1H),6.93(s,1H),2.51(s,3H),1.76(s,6H)ppm.
步骤七：(5-(2-羟丙基-2-基)-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E33-8
Figure BDA0003479851330000531
在手套箱中向反应瓶中依次加入化合物2-(8-溴-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇E33-7(310mg,1.15mmol)，双联频哪醇硼酸酯(320mg，1.26mmol)，醋酸钾(225mg，2.30mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(187mg，0.229mmol)，1,4-二氧六环(3.00mL)。反应升温至120℃于氮气氛围下反应7小时，LCMS检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤八：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-6-嘧啶-8-基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000532
向上步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(433mg,1.19mmol)，碳酸钾(470mg,3.40mmol)，[1,1'-双(二苯基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(124mg,0.170mmol)，1，4-二氧六环(5mL)和水(1mL)。反应液于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降至室温，减压浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到粗品，再用HPLC分离后冻干得到2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-6-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇(240mg,0.505mmol,29.7％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),9.36(s,1H),8.92(s,2H),8.55(s,1H),6.96(t,J＝9.4Hz,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),5.79(s,1H),4.77(s,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.35-3.35(m,2H),2.77(s,3H),1.86(s,6H)ppm.
实施例13：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：4-胺基-5-溴嘧啶-2-甲腈E34-2
Figure BDA0003479851330000533
在25℃下，向5-溴-2-氯嘧啶-4-胺E34-1(50g，239mmol)，三亚乙基二胺(26.9g，239mmol)，的二甲基亚砜溶液中(450mL)溶液中加入***(14.1g，287mmol)的水(20ml)溶液，反应液升温至60℃，并在60℃下搅拌反应18小时。LCMS监测反应结束，反应液降至室温，向混合物中加水和乙酸乙酯，有机相干燥，浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到4-胺基-5-溴嘧啶-2-甲腈E34-2(29.0g，59.5％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(s,1H),8.35(br s,1H),7.55(br s,1H)ppm；LCMS:m/z 201.0[M+3H]+.
步骤二：4-胺基-5溴嘧啶-2-甲酸甲酯E34-3
Figure BDA0003479851330000541
将4-胺基-5-溴嘧啶-2-甲腈E34-2(29.0g，145mmol)溶于甲醇(290mL)，然后在0℃滴加浓硫酸(533g，5.33mol)反应液升温至70℃下反应12小时，TLC检测无原料剩余，反应液pH调至7，萃取，有机相用食盐水洗涤，然后硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用快速硅胶柱纯化得到4-胺基-5-溴嘧啶-2-甲酸甲酯E34-3(17.0g，49.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(s,1H),8.05(s,1H),7.28(s,1H),3.82(s,3H)ppm；LCMS:m/z234.0[M+3H]+.
步骤三：(E)-5-溴-4-((1-(二甲胺基)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯
Figure BDA0003479851330000542
将4-氨基-5-溴嘧啶-2-甲酸甲酯E34-3(7.00g，30.2mmoL)，N,N-二甲基乙酰胺二甲基缩醛(12.1g，90.5mmoL)溶于甲苯(70.0mL)，升温至100℃在氮气气氛下反应1.5小时，LCMS监测反应结束，降至室温，将反应液浓缩，干燥得到(E)-5-溴-4-((1-(二甲胺基)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯E34-4(8.00g，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),3.85-3.81(m,3H),3.16-3.11(m,6H),2.16(s,3H)ppm；LCMS:m/z 302.9[M+3H]+.
步骤四：(E)-5-溴-4-((1-(羟胺基)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯E34-5
Figure BDA0003479851330000551
将(E)-5-溴-4-((1-(二甲胺基)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯E34-4(8.00g，26.6mmoL)，盐酸羟胺(3.69g，53.1mmoL)，溶于甲醇(80.0mL)中，在20℃下反应3小时，LCMS监测反应结束，将反应液减压，浓缩，打浆，干燥得到(E)-5-溴-4-((1-(羟胺)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯E34-5(7.10g，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93(s,1H),8.84(s,1H),8.77(s,1H),3.87(s,3H),2.40(s,3H)ppm；LCMS:m/z 289.0[M+H]+.
步骤五：8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-甲酸甲酯E34-6
Figure BDA0003479851330000552
将(E)-5-溴-4-((1-(羟胺)乙亚基)胺基)嘧啶-2-甲酸甲酯E34-5(7.10g，24.5mmoL)溶于多聚磷酸(70.0mL)中，在85℃下反应2.5小时，LCMS监测反应结束，用碳酸氢钠调节pH到7，将反应液萃取、浓缩得到8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-甲酸甲酯E34-6(2.60g，39.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),4.02(s,3H),2.57(s,3H)ppm；LCMS:m/z272.9[M+3H]+.
步骤六：2-(8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙-2-醇E34-7
Figure BDA0003479851330000553
将8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-甲酸甲酯E34-6(1.60g，5.90mmoL)，溶于四氢呋喃(100mL)中，降温至-30℃，滴加甲基溴化镁(3M，9.84mL)，保持温度反应0.5小时，TLC监测反应结束，将反应液淬灭、萃取、干燥、浓缩，粗品用快速硅胶柱分离得到2-(8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙-2-醇E34-7(180mg，20.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),5.58(s,1H),2.57(s,3H),1.70(s,6H)ppm；LCMS:m/z273.0[M+3H]+.
步骤七：(5-(2-羟丙基-2-yl)-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-8-基)硼酸
Figure BDA0003479851330000561
将2-(8-溴-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙烷-2-醇E34-7(300mg，1.11mmol)，联硼酸频那醇酯(309mg，1.22mmol)，醋酸钾(325mg，3.32mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(180mg，0.221mmol)，溶于1,4-二氧六环(3.00mL)，温度升温至120℃于氮气气氛下反应5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤八：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
Figure BDA0003479851330000562
向上一步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺E34-8(260mg，1.10mmol)，碳酸钠(350mg，3.30mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(179mg，0.220mmol)，1,4-二氧六环(3.00mL)和水(1.00mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降至室温，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化，得到2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(84.0mg，15.88％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(s,1H),9.55(s,1H),9.35(s,1H),9.07-8.99(m,1H),7.01-6.93(m,1H),6.75-6.69(m,1H),5.63(s,1H),4.82-4.76(m,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.31-3.28(m,2H),2.64(s,3H),1.76(s,6H)ppm；LCMS:m/z 476.4[M+H]+.
根据实施例12的方法，在步骤三中将N,N-二甲基乙酰胺二甲基缩醛替换成N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛其他条件不变可以得到如下化合物：
实施例14：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
Figure BDA0003479851330000563
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.56(s,1H),9.38(s,1H),9.05(br s,1H),8.84(s,1H),6.97(t,J＝9.4Hz,1H),6.72(dd,J＝3.8,8.7Hz,1H),5.66(s,1H),4.79(s,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.34(m,2H),1.78(s,6H)ppm；LCMS:m/z 462.0[M+H]+.
实施例15：2-(6-氟-8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：6-氨基-5-溴-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯E35-2
Figure BDA0003479851330000571
将6-氨基-5-溴吡啶-2-甲酸甲酯E35-1(5.00g，21.6mmol)和1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(9.97g，28.1mmol)溶于乙腈(25.0mL)中，在氮气氛围下，90℃搅拌12小时，LCMS监测原料剩余，降至室温，加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到6-氨基-5-溴-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯E35-2(620mg，9.20％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(d,J＝9.4Hz,1H),6.55(s,2H),3.82(s,3H)，LCMSm/z 251.1[M+H]+.
步骤二：5-溴-6-(((二甲氨基)甲亚基)氨基)-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯E35-3
Figure BDA0003479851330000572
将6-氨基-5-溴-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯E35-2(1.50g，6.02mmol)和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(2.87g，24.1mmol)溶于甲苯(10.0mL)中，在氮气氛围下，100℃搅拌3小时，LCMS检测反应结束，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到5-溴-6-(((二甲氨基)甲亚基)氨基)-3-氟吡啶-2-甲酸甲酯E35-3(1.40g，68.7％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.19(d,J＝9.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.13(s,3H),3.04(s,3H)。LCMS m/z 306.1[M+H]+.
步骤三：5-溴-3-氟6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)吡啶-2-甲酸甲酯E35-4
Figure BDA0003479851330000573
将5-溴-6-(((二甲氨基)甲亚基)氨基)-3-氟吡啶-2甲酸甲酯E35-3(1.40g，4.06mmol)和盐酸羟胺(639mg，9.21mmol)溶于乙醇(6.00mL)中，在氮气氛围下，50℃搅拌5小时，LCMS监测反应结束，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到5-溴-3-氟6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)吡啶-2-甲酸甲酯E35-4(1.30g，87.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),8.44(d,J＝9.3Hz,1H),8.23(d,J＝9.8Hz,1H),7.81(d,J＝9.5Hz,1H),3.89(s,3H)。LCMS m/z 292.1[M+H]+.
步骤四：8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E35-5
Figure BDA0003479851330000581
将5-溴-3-氟6-(((羟胺基)甲亚基)氨基)吡啶-2-甲酸甲酯E35-4(1.30g，4.45mmol)溶于多聚磷酸(6.00mL)中，在氮气氛围下，100℃下搅拌12小时，LCMS监测反应结束，饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并，干燥，浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E35-5(600mg，44.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.48(d,J＝9.3Hz,1H),4.03(s,3H)ppm；LCMS m/z276.1[M+H]+.
步骤五：2-(8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇E35-6
Figure BDA0003479851330000582
将8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯E35-5(550mg，2.01mmol)溶于四氢呋喃(8.00mL)，降温至-50℃滴加甲基溴化镁(3M，4.5mL)在氮气气氛下反应1.5小时，LCMS监测反应结束，饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到2-(8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇E35-6(370mg，63.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.28(d,J＝11.4Hz,1H),5.96(s,1H),1.77(s,3H),1.75(s,3H)ppm；LCMS m/z 274.0[M+H]+.
步骤六：(6-氟-5-(2-羟丙基-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E35-7
Figure BDA0003479851330000583
将2-(8-溴-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇E35-6(320mg，1.17mmol)，双联嚬哪醇硼酸酯(355mg，1.40mmol)，醋酸钾(229mg，2.34mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(95.3mg，0.117mmol)，1,4-二氧六环(8.00mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应6.5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤七：2-(6-氟-8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000591
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(298mg，0.819mmol)，碳酸钠(372mg，3.51mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(95.5mg，0.117mmol)，补加1,4-二氧六环(1.00mL)和水(1.50mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化，再重结晶得到2-(6-氟-8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇(183mg，32.1％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),9.57(s,1H),9.24(d,J＝14.3Hz,1H),9.14-9.06(m,1H),8.77(s,1H),6.97(t,J＝9.3Hz,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.5Hz,1H),6.10(s,1H),4.80(br d,J＝4.3Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.37-3.36(m,2H),1.83(s,3H),1.82(s,3H)ppm；LCMS m/z 479.4[M+H]+.
实施例16：1,1-二氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
步骤一：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1-二氟丙-2-醇E36-2
Figure BDA0003479851330000592
向1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙-1-酮E27-4(670mg,2.79mmol),二氟溴甲基三甲基硅烷(1.42g，6.98mmol)和三苯基膦溶于乙腈(5mL)的溶液中加入1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-嘧啶酮(1.07g，8.37mmol)，反应液在20℃反应12小时。TLC检测原料反应完全。向反应液中加入氢氧化钾溶液(400mg氢氧化钾溶于3mL水)，20℃下搅拌2小时。再加入5mL 6M盐酸，继续搅拌2小时。LCMS检测到产物。反应液用碳酸氢钠调节pH为8，乙酸乙酯萃取，干燥浓缩后用prep-HPLC纯化，得产物2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1-二氟丙-2-醇E36-2(570mg，1.91mmol，68.7％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝7.9Hz,1H),6.92(t,J＝55.6Hz,1H),6.77(s,1H),1.78(s,3H)ppm；LCMS m/z 291.9/293.9[M+H]+
步骤二：(5-(1,1-二氟-2-羟丙基-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E36-3
Figure BDA0003479851330000601
将2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,1-二氟丙-2-醇E36-2(500mg，1.68mmol)，双联嚬哪醇硼酸酯(511mg，2.01mmol)，醋酸钾(329mg，3.36mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(137mg，0.167mmol)，1,4-二氧六环(10.0mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应6小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤三：1,1-二氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000602
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(488mg，1.68mmol)，碳酸钠(533mg，5.03mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(137mg，0.167mmol)，补加1,4-二氧六环(1.00mL)和水(2.00mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化和制备色谱得到1,1-二氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇(475mg，57.0％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.42(s,1H),9.18(d,J＝7.9Hz,1H),9.01-8.95(m,1H),8.70(s,1H),7.64(d,J＝7.9Hz,1H),7.17-6.83(m,2H),6.77-6.68(m,2H),4.79(br d,J＝3.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.35(m,2H),1.82(s,3H)ppm；LCMSm/z 497.3[M+H]+.
实施例17：1,3-二氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***[1,5-a]吡啶-5-基]丙-2-醇
步骤一：(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯E37-1
Figure BDA0003479851330000603
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-羧酸E31-1(4.50g,18.5mmol)，4A分子筛(5.00g)，叔丁醇(13.7g，185mmol)，二异丙基乙胺(7.21g，55.7mmol)加入到甲苯中(25.0mL)，置换氮气三次，在25℃下搅拌30分钟，叠氮磷酸二苯酯(7.68g，27.8mmol)加入到反应液中，85℃下搅拌8小时，TLC检测反应结束，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯E37-1(3.20g，54.4％收率).
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.24(br s,1H),7.77(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),1.57(s,9H)ppm.LCMS m/z 315.0[M+H]+.
步骤二：8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-胺盐酸盐E37-2
Figure BDA0003479851330000611
将(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯E37-1(3.20g，9.83mmol)溶于乙醇(10.0mL)中，滴加盐酸/1,4-二氧六环溶液(4M，5.00mL)，50℃下搅拌10小时，TLC检测反应结束，减压浓缩，得到粗品8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-胺盐酸盐E37-2(2.50g，粗品)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),6.24(d,J＝8.4Hz,1H)ppm；LCMS m/z 213.1[M+H]+.
步骤三：8-溴-5-碘-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E37-3
Figure BDA0003479851330000612
将8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-胺盐酸盐E37-2(450mg,1.80mmol)和对甲苯磺酸(931mg，5.41mmol)溶于乙腈(10.0mL)中，0℃搅拌30分钟后，缓慢滴加碘化钾(748mg，4.51mmol)和亚硝酸钠(248mg，3.61mmol)的水(2.00mL)溶液，反应升至20℃，搅拌2.5小时。TLC检测反应结束，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到8-溴-5-碘-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E37-3(240mg，39.8％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H)ppm.LCMS m/z 325.9[M+H]+.
步骤四：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,3-二氟丙-2-醇E37-4
Figure BDA0003479851330000613
将8-溴-5-碘-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E37-3(230mg，0.710mmol)溶于的四氢呋喃(5.00mL)中，降至-65℃，缓慢滴加正丁基锂的四氢呋喃溶液(2.5M，284uL)，反应液搅拌3分钟后，向反应液中缓慢滴加1,3-二氟丙-2-酮(66.7mg，0.710mmol)的四氢呋喃溶液(2.00mL)，继续在-65℃下搅拌1小时。LCMS监测反应结束，饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,3-二氟丙-2-醇E37-4(170mg，60.6％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.12(d,J＝7.9Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(s,1H),5.31-5.26(m,1H),5.15(d,J＝9.6Hz,1H),5.00(d,J＝9.6Hz,1H),4.88(d,J＝9.6Hz,1H)ppm；LCMS m/z 294.0[M+H]+.
步骤五：(5-(1,3-二氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E37-5
Figure BDA0003479851330000621
将2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1,3-二氟丙-2-醇E37-4(170mg，0.582mmol)，双联嚬哪醇硼酸酯(177mg，0.698mmol)，醋酸钾(114mg，1.16mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(47.5mg，0.0582mmol)，1,4-二氧六环(6.00mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应6.5小时，LCMS检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤六：1,3-二氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇
Figure BDA0003479851330000622
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(121mg，0.332mmol)，碳酸钠(184mg，1.74mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(47.3mg，0.0579mmol)，补加1,4-二氧六环(1.00mL)和水(1.50mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化和制备色谱得到1,3-二氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***[1,5-a]吡啶-5-基]丙-2-醇(50.0mg，17.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(br s,1H),9.43(s,1H),9.17(d,J＝8.0Hz,1H),8.98(br s,1H),8.70(s,1H),7.64(br d,J＝7.4Hz,1H),7.12-6.87(m,2H),6.72(dd,J＝3.4,8.4Hz,1H),5.34(br d,J＝9.5Hz,1H),5.22(br d,J＝9.6Hz,1H),5.07(d,J＝9.5Hz,1H),4.96(d,J＝9.4Hz,1H),4.78(s,2H),4.56(t,J＝8.8Hz,2H),3.42-3.41(m,2H)ppm；LCMS m/z 497.4[M+H]+.
实施例18：1-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***[1,5-a]吡啶-5-基]环丙-1-醇
步骤一：8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙烯基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-1
Figure BDA0003479851330000631
在-78℃下，向1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酮E27-4(1.30g,5.42mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)滴加双(二甲基硅基)氨基钠(1M，8.12mL)，反应液在25℃下搅拌1小时。在0℃下向反应液中滴加叔丁基二甲基氯硅烷(1.63g，10.8mmol，1.33mL)。反应液在25℃下搅拌12小时.LCMS监测反应结束，用氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到白色固体8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙烯基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-1(1.20g，3.39mmol，62.5％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.13(d,J＝8.1Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.49(d,J＝1.6Hz,1H),5.18(d,J＝1.8Hz,1H),0.98(s,9H),0.24(s,6H).
步骤二：8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-2
Figure BDA0003479851330000632
在0℃下，向8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙烯基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-1(1.20g,3.39mmol)的二氯甲烷溶液中(150mL)滴加三甲基铝(2M，10.1mL)，然后滴加二碘甲烷(7.26g，27.0mmol，2.19mL)的二氯甲烷溶液(10mL)。反应液在在40℃下搅拌48个小时。反应完全后用盐酸(1M)淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥，浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到黄色油状物：8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-2(412mg,27.6％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),8.00(d,J＝7.8Hz,1H),7.23(d,J＝7.8Hz,1H),1.28-1.16(m,4H),0.67(s,9H),-0.17(s,6H)ppm；LCMS m/z 368.1[M+H]+.
步骤三：(5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E38-3
Figure BDA0003479851330000633
将8-溴-5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E38-2(412mg，1.12mmol)，联硼酸频那醇酯(312mg，1.23mmol)，醋酸钾(329mg，3.36mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(182mg，223umol)，溶于1,4-二氧六环(6.00mL)，温度升温至120℃于氮气气氛下反应5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。LCMS:m/z334.2[M+H]+
步骤四：8-(5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺E38-4
Figure BDA0003479851330000641
向上一步反应液中加入8-溴-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(244mg,0.671mmol)，碳酸钠(355mg,3.36mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(182mg，0.223mmol)，1.4-二氧六环(5.00mL)和水(1.00mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降至室温，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化，得到8-(5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺E38-4(430mg,0.707mmol,63.2％收率)棕色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(d,J＝1.4Hz,2H),9.17(d,J＝7.8Hz,1H),8.97(t,J＝5.1Hz,1H),8.66(s,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,1H),7.02-6.92(m,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),4.79(d,J＝4.9Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.38-3.35(m,2H),1.32-1.19(m,4H),0.68(s,9H),-0.17(s,6H)ppm；LCMS:m/z.573.4[M+H]+
步骤五：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)环丙醇
Figure BDA0003479851330000642
8-(5-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧基)环丙基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-苯并二氢呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺E38-4(430mg,0.707mmol,94.2％纯度)和四丁基氟化胺(1M in THF,2.83mL)的混合物25℃搅拌2小时。LCMS监测反应结束，反应液降至室温，向混合物中加水和乙酸乙酯，有机相干燥，浓缩，浓缩物用快速硅胶柱纯化得到1-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***[1,5-a]吡啶-5-基]环丙-1-醇(159mg，0.344mmol，48.6％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.47(s,1H),9.14(d,J＝7.9Hz,1H),8.94(br s,1H),8.64(s,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,1H),7.01-6.93(m,1H),6.75-6.70(m,J＝3.9Hz,1H),6.39(s,1H),4.79(br d,J＝3.3Hz,2H),4.56(t,J＝8.8Hz,2H),3.39-3.36(m,2H),1.56-1.51(m,2H),1.21-1.17(m,2H)ppm；LCMS:m/z 459.4[M+1H]+.
实施例19：1-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]环丁-1-醇
步骤一：1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)环丁醇E39-1
Figure BDA0003479851330000651
将8-溴-5-碘-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E37-3(800mg,2.47mmol)溶于四氢呋喃(15.0mL)，降温至-70℃滴加正丁基锂(2.5M,988uL)在氮气气氛下反应5min，然后在此温度下滴加正丁酮(173mg，2.47mmol)的四氢呋喃(2.0mL)溶液，并在-70℃反应1小时。TLC和LCMS检测反应完毕。反应液用氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)环丁醇E39-1(500mg,61.0％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.82(d,J＝7.8Hz,1H),6.99(d,J＝7.8Hz,1H),2.71-2.56(m,4H),2.27-2.13(m,1H),1.91-1.74(m,1H)ppm；LCMS:m/z 270.0[M+H]+.
步骤二：(5-(1-羟基环丁基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E39-2
Figure BDA0003479851330000652
将1-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)环丁醇E39-1(500mg,1.86mmol)，双联频哪醇硼酸酯(568mg，2.24mmol)，醋酸钾(549mg，5.59mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(304mg，0.372mmol)溶于1,4-二氧六环(15.0mL)，反应液升温至120℃于氮气氛围下反应5小时，TLC检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤三：1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)环丁醇
Figure BDA0003479851330000653
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺B2(203mg，0.558mmol)，碳酸钠(592mg，5.59mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(304mg，0.372mmol)，1,4-二氧六环和(10.0mL)水(2.0mL)。反应液于氮气氛围下升温至100℃反应1小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到1-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基]-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]环丁-1-醇(90.0mg，0.189mmol，10.2％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.47(s,1H),9.15(d,J＝7.8Hz,1H),8.94(br s,1H),8.65(s,1H),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),6.97(t,J＝9.4Hz,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),5.92(s,1H),4.78(s,2H),4.56(t,J＝8.6Hz,2H),3.37-3.35(m,2H),2.96-2.80(m,2H),2.38(ddd,J＝6.9,9.1,12.1Hz,2H),2.18-2.02(m,1H),1.87-1.71(m,1H)ppm.
实施例20：1-氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基}-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]丙烷-2-醇
步骤一：2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1-氟丙烷-2-醇E40-1
Figure BDA0003479851330000661
将8-溴-5-碘-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶E37-3(1.50g，4.63mmol)溶于的四氢呋喃(10.0mL)中，降至-65℃，缓慢滴加正丁基锂的四氢呋喃溶液(2.5M，1.85mL)，反应液搅拌1分钟后，向反应液中缓慢滴加1-氟丙-2-酮(352mg，4.63mmol)的四氢呋喃溶液(1.00mL)，继续在-65℃下搅拌0.5小时。LCMS监测反应结束，饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化得到2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1-氟丙烷-2-醇E40-1(920mg，66.3％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),8.09(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),6.39(s,1H),5.32-5.13(m,1H),4.82-4.62(m,1H),1.66(d,J＝2.4Hz,3H)ppm；LCMS m/z 275.9[M+H]+.
步骤二：(5-(1-氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸E40-2
Figure BDA0003479851330000662
将2-(8-溴-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)-1-氟丙烷-2-醇E40-1(920mg，3.36mmol)，双(频哪醇合)二硼(1.02g，4.03mmol)，醋酸钾(1.15g，11.75mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(548mg，0.631mmol)，1,4-二氧六环(8.00mL)，反应升温至120℃于氮气氛围下反应6.5小时，LCMS检测无原料剩余，反应液不处理直接用于下一步。
步骤三：1-氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇E40-3
Figure BDA0003479851330000671
向上一步反应液中加入8-溴-N-((-5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺(855mg，2.35mmol)，碳酸钠(1.07g，10.0mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(411mg，0.503mmol)，补加1,4-二氧六环(1.00mL)和水(2.00mL)。反应于氮气氛围下升温至100℃反应2小时，LCMS监测反应结束，降温至室温，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用快速硅胶柱纯化和制备色谱得到1-氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基}-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]丙烷-2-醇E40-3(816mg，50.7％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.40(s,1H),9.15(d,J＝7.9Hz,1H),8.94(t,J＝4.9Hz,1H),8.67(s,1H),7.59(d,J＝7.9Hz,1H),7.01-6.92(m,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),6.33(s,1H),5.41-5.15(m,1H),4.92-4.68(m,3H),4.56(t,J＝8.8Hz,2H),3.35-3.34(m,2H),1.73(d,J＝2.1Hz,3H)ppm；LCMS m/z 479.4[M+H]+.
步骤四：1-氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基}-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]丙烷-2-醇E40-3的拆分
Figure BDA0003479851330000672
将1-氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇(627mg，1.29mmol)通过手性SFC分离，(分离方法：column(色谱柱):DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm,10um)；mobile phase(流动相):A[0.1％NH3H2O IPA]；B(异丙醇):45％梯度,4mL/min)，得到(S)-1-氟-2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)胺)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)丙-2-醇((S)-E40-3)或(R)-1-氟-2-[8-(5-{[(5-氟-2,3-二氢-1-苯并呋喃-4-基)甲基]氨基}-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基]丙烷-2-醇((R)-E40-3)，其中一个的保留时间为0.971min(化合物g)(210mg，34.1％收率，98.6ee％)；另一个对映体的保留时间为1.134min(化合物h)(206mg，33.1％收率，98.4ee％)。
化合物g：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.40(s,1H),9.14(d,J＝8.0Hz,1H),8.95(br s,1H),8.67(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.02-6.92(m,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),6.35(s,1H),5.44-5.15(m,1H),4.90-4.68(m,3H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.39-3.38(m,2H),1.72(d,J＝2.1Hz,3H)ppm；LCMS m/z 479.4[M+H]+.
手性分离中同时得到实施例21的化合物h：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.40(s,1H),9.15(d,J＝7.9Hz,1H),8.94(br t,J＝4.9Hz,1H),8.67(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.03-6.91(m,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),6.33(s,1H),5.46-5.14(m,1H),4.89-4.69(m,3H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.36-3.35(m,2H),1.73(d,J＝2.3Hz,3H)ppm；LCMS m/z 479.4[M+H]+.
实施例21使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000681
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),9.45(s,1H),9.11(d,J＝7.7Hz,1H),9.04(s,1H),8.63(s,1H),7.29(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),6.96(dd,J＝10.3,8.7Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),5.00–4.85(m,3H),2.97(dt,J＝9.1,4.5Hz,1H),2.79(s,3H),1.02(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),0.14(ddd,J＝6.1,4.0,1.9Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 429.0[M+H]+.
实施例22使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000682
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.45(s,1H),9.11(d,J＝7.7Hz,1H),8.90(t,J＝5.0Hz,1H),8.64(d,J＝9.7Hz,1H),7.28(d,J＝7.8Hz,1H),7.02–6.92(m,1H),6.72(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.78(d,J＝4.9Hz,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),3.35(s,2H),2.79(s,3H)ppm；LCMS:m/z 417.0[M+H]+.
实施例23使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-氯-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000683
1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.40-9.30(m,1H),9.25-9.19(m,1H),8.88(dd,J＝9.3,7.4Hz,1H),8.53-8.47(m,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(dd,J＝17.3,7.3Hz,1H),6.70-6.64(m,1H),4.82(d,J＝18.0Hz,1H),4.63(dd,J＝20.5,11.7Hz,1H),3.45(d,J＝17.4Hz,2H)ppm；LCMS:m/z 437.0[M+H]+.
实施例24使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(三氟甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000691
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(d,J＝2.6Hz,1H),9.58(s,1H),9.36(d,J＝7.9Hz,1H),9.18(t,J＝4.9Hz,1H),8.82(d,J＝2.4Hz,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(t,J＝9.4Hz,1H),6.72(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),4.81(d,J＝4.8Hz,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),3.32(s,2H)ppm；LCMS:m/z 471.1[M+H]+.
实施例25使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-甲氧基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000692
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.33(s,1H),9.17(d,J＝8.4Hz,1H),8.83(s,1H),8.59(s,1H),6.99-6.93(m,1H),6.91(d,J＝8.5Hz,1H),6.72(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.77(s,2H),4.55(s,2H),4.20(s,3H),3.30(t,J＝6.4Hz,2H)ppm；LCMS:m/z 433.1[M+H]+.
实施例26使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-吗啉代-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000693
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),9.32(s,1H),9.10(d,J＝8.3Hz,1H),8.81(s,1H),8.59(s,1H),6.99-6.94(m,1H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H),6.72(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.77(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.92-3.81(m,4H),3.56-3.46(m,4H),3.35(s,2H)ppm；LCMS:m/z 488.1[M+H]+.
实施例27使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(二甲氨基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000701
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.34(s,1H),8.63(s,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,2H),6.85-6.72(m,1H),6.61(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),6.48(d,J＝8.1Hz,1H),4.77(s,2H),4.57(t,J＝8.7Hz,2H),3.41(t,J＝8.7Hz,2H),3.24(s,6H)ppm；LCMS:m/z 446.1[M+H]+.
实施例28使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000702
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),9.31(s,1H),9.08(d,J＝8.3Hz,1H),8.80(d,J＝4.7Hz,1H),8.58(s,1H),6.99-6.92(m,1H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.77(d,J＝4.3Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.51(s,4H),3.34(d,J＝7.4Hz,2H),2.58(s,4H),2.28(s,3H)ppm；LCMS:m/z 501.2[M+H]+.
实施例29使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(2,5-二甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000703
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),9.44(s,1H),9.05(d,J＝7.7Hz,1H),8.88(t,J＝5.1Hz,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H),7.03-6.92(m,1H),6.72(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.79(d,J＝4.9Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.30(d,J＝8.8Hz,2H),2.74(s,3H),2.58(s,3H)ppm；LCMS:m/z 431.1[M+H]+.
实施例30使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
1-((8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)甲氧基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure BDA0003479851330000711
1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.35(d,J＝2.7Hz,1H),9.08(d,J＝3.4Hz,1H),8.78(d,J＝7.6Hz,1H),8.44(s,1H),7.44(s,1H),7.40(d,J＝7.8Hz,1H),6.89-6.81(m,1H),6.67(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),5.35(t,J＝4.6Hz,1H),5.13(s,2H),4.84(s,2H),4.64(t,J＝8.7Hz,2H),3.93(s,2H),3.22(s,2H),1.28(s,6H)ppm；LCMS:m/z 460.2[M+H]+.
实施例31使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-((二甲氨基)甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000712
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.46(s,1H),9.18(d,J＝7.7Hz,1H),8.93(s,1H),8.63(s,1H),7.38(d,J＝7.7Hz,1H),6.97(dd,J＝10.3,8.7Hz,1H),6.72(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.78(d,J＝4.9Hz,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),4.01(s,2H),3.36(t,2H),2.35(s,6H)ppm；LCMS:m/z 460.2[M+H]+.
实施例32使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000713
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.45(s,1H),9.16(d,J＝7.7Hz,1H),8.93(s,1H),8.63(s,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.02-6.92(m,1H),6.72(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.78(d,J＝4.7Hz,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),4.07(s,2H),3.30(s,2H),2.61(s,4H),2.40(s,4H),2.19(s,3H)ppm；LCMS:m/z515.2[M+H]+.
实施例33使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
1-(((8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)甲基)氨基)-2-甲基丙烷-2-醇
Figure BDA0003479851330000714
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.45(s,1H),9.16(d,J＝7.7Hz,1H),8.92(s,1H),8.65(s,1H),7.42(d,J＝7.7Hz,1H),6.96(d,J＝10.1Hz,1H),6.72(dd,J＝8.6,4.0Hz,1H),4.79(d,J＝4.9Hz,2H),4.56(s,2H),4.28(s,3H),3.37(s,1H),3.30(s,2H),2.07(s,2H),1.12(s,6H)ppm；LCMS:m/z 504.1[M+H]+.
实施例34使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(吗啉代甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000721
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.45(s,1H),9.17(d,J＝7.7Hz,1H),8.94(s,1H),8.64(s,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),6.97(t,J＝9.4Hz,1H),6.72(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),4.79(s,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),4.08(s,2H),3.65(s,4H),3.33(s,2H),2.60(s,4H)ppm；LCMS:m/z 502.1[M+H]+.
实施例35使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(吡咯烷-1-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000722
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),9.24(s,1H),9.02(d,J＝8.4Hz,1H),8.68(s,1H),8.46(s,1H),7.00-6.91(m,1H),6.71(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),6.41(d,J＝8.5Hz,1H),4.75(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.82(s,4H),3.31(s,2H),2.00(s,4H)ppm；LCMS:m/z 472.1[M+H]+.
实施例36使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(4-吗啉代哌啶-1-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000723
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),9.31(s,1H),9.07(d,J＝8.3Hz,1H),8.78(s,1H),8.58(s,1H),7.01-6.92(m,1H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.76(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),4.12(d,J＝11.9Hz,2H),3.72-3.50(m,4H),3.32-3.28(m,2H),2.91(t,J＝11.1Hz,2H),2.58-2.51(m,4H),2.43(d,J＝9.8Hz,1H),1.96(d,J＝12.3Hz,2H),1.66(dd,J＝20.5,11.4Hz,2H)ppm；LCMS:m/z 571.2[M+H]+.
实施例37使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000731
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),9.25(s,1H),9.05(d,J＝8.3Hz,1H),8.70(s,1H),8.50(s,1H),7.02-6.91(m,1H),6.71(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),6.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.76(d,J＝11.0Hz,6H),4.62-4.44(m,6H),3.31(d,J＝8.8Hz,2H)ppm；LCMS:m/z500.2[M+H]+.
实施例38使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N1-((8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)甲基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺
Figure BDA0003479851330000732
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.43(s,1H),9.14(d,J＝7.7Hz,1H),8.94(s,1H),8.62(s,1H),7.40(d,J＝7.7Hz,1H),6.97(t,J＝9.5Hz,1H),6.72(dd,J＝8.5,3.7Hz,1H),4.78(s,2H),4.56(s,2H),4.11(s,2H),3.35(d,J＝8.6Hz,2H),2.64(d,J＝7.0Hz,2H),2.46(d,J＝6.9Hz,2H),2.36(s,3H),2.15(s,6H)ppm；LCMS:m/z 517.2[M+H]+.
实施例39使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-(2-甲基吗啉代)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000733
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),9.32(s,1H),9.09(d,J＝8.2Hz,1H),8.81(s,1H),8.60(s,1H),6.97(s,1H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),6.76-6.67(m,1H),4.77(d,J＝4.0Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.99(d,J＝11.3Hz,3H),3.82(dd,J＝19.0,9.7Hz,2H),3.31(s,2H),2.96(dd,J＝11.6,8.7Hz,1H),2.70(d,J＝10.6Hz,1H),1.19(d,J＝6.2Hz,3H)ppm；LCMS:m/z 502.2[M+H]+.
实施例40使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(6-氟-5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000741
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(s,1H),9.57(s,1H),9.32(d,J＝11.5Hz,1H),9.09-9.04(m,1H),8.70(s,1H),6.98(t,J＝9.5Hz,1H),6.73(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),4.80(d,J＝3.4Hz,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),3.64-3.58(m,1H),3.32-3.30(m,2H),2.76(d,J＝2.5Hz,3H)ppm；LCMS:m/z 435.1[M+H]+.
实施例41使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(6-甲氧基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000742
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.59(s,1H),9.55(s,1H),9.05(d,J＝2.3Hz,1H),9.01(s,1H),8.65(d,J＝2.3Hz,1H),8.53(s,1H),7.00-6.94(m,1H),6.72(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.79(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.93(s,3H),3.31(s,2H)ppm；LCMS:m/z 433.1[M+H]+.
实施例42使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(2-(二甲氨基)-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000743
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(s,1H),9.55(s,1H),9.18(dd,J＝2.3,11.3Hz,1H),8.98-8.90(m,2H),6.98(t,J＝9.5Hz,1H),6.73(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),4.80(d,J＝4.8Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.31-3.28(m,2H),3.10(s,6H)ppm；LCMS:m/z 464.3[M+H]+.
实施例43使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(2-(二甲氨基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000751
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),9.50(s,1H),9.07(dd,J＝7.7,1.2Hz,1H),8.82(s,1H),8.61(dd,J＝6.6,1.2Hz,1H),7.10(dd,J＝7.7,6.6Hz,1H),6.98(dd,J＝10.3,8.7Hz,1H),6.73(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),4.79(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.30(d,J＝8.8Hz,2H),3.10(s,6H)ppm；LCMS:m/z446.1[M+H]+.
实施例44使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(二氟甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000752
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.60(s,1H),9.57(s,1H),9.33(br d,J＝7.6Hz,1H),9.09(br s,1H),8.77(s,1H),7.78(br s,1H),7.65(t,J＝52.8Hz,1H),6.98(br t,J＝9.5Hz,1H),6.73(br dd,J＝3.4,8.5Hz,1H),4.81(br d,J＝3.4Hz,2H),4.56(t,J＝8.5Hz,2H),3.31-3.23(m,2H)ppm；LCMS:m/z 453.3[M+H]+.
实施例45使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(二甲氨基)-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000753
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(br s,1H),9.35(s,1H),9.07(s,1H),8.59(s,1H),6.93(t,J＝9.2Hz,1H),6.68(dd,J＝4.0,8.8Hz,1H),4.73(s,2H),4.53(t,J＝8.8Hz,2H),3.44(s,6H),3.32-3.28(m,2H)ppm；LCMS:m/z 447.3[M+H]+.
实施例46使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
1-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-5-基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003479851330000754
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.43(s,1H),9.19-9.17(d,J＝8.0Hz,1H),8.93(s,1H),8.64(s,1H),7.44-7.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.99-6.94(m,1H),6.73-6.70(m,1H),5.90-5.89(d,J＝4.0Hz,1H),5.43-5.40(m,1H),4.78(s,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.34-3.27(m,2H),1.56-1.54(d,J＝8.0Hz,3H)ppm；LCMS:447.3m/z[M+H]+.
实施例47使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(二甲氨基)-6-氟-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000761
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.49(s,1H),9.25(d,J＝14.4Hz,1H),8.95-8.90(m,1H),8.62(s,1H),6.97(t,J＝9.5Hz,1H),6.72(dd,J＝4.1,8.7Hz,1H),4.77(br d,J＝4.0Hz,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.27(br d,J＝5.1Hz,2H),3.15(d,J＝2.8Hz,6H)ppm；LCMS m/z 464.1[M+H]+.
实施例48使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(二甲氨基)-2-甲基-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000762
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),9.28(s,1H),9.00(d,J＝8.4Hz,1H),8.74(d,J＝1.2Hz,1H),6.96(t,J＝9.6Hz,1H),6.71(dd,J＝3.9,8.8Hz,1H),6.61(d,J＝8.4Hz,1H),4.76(s,2H),4.54(t,J＝8.8Hz,2H),3.31-3.27(m,2H),3.13(s,6H),2.55(s,3H)ppm；LCMS:m/z 460.3[M+H]+.
实施例49使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-6-甲腈
Figure BDA0003479851330000763
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.81(s,1H),9.59(s,1H),9.57(br s,1H),9.40(s,1H),9.14(br d,J＝1.1Hz,1H),8.86(s,1H),6.97(t,J＝9.6Hz,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),4.80(s,2H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),3.25-3.22(m,2H)ppm；LCMS:m/z 428.0[M+H]+.
实施例49使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-([1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000771
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),9.51(s,1H),9.19(dd,J＝7.6,0.9Hz,1H),8.98(s,1H),8.93(dd,J＝6.7,1.0Hz,1H),8.63(s,1H),7.43–7.38(m,1H),7.01–6.95(m,1H),6.73(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.79(s,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),3.33(d,J＝8.8Hz,2H)ppm；LCMS:m/z 403.1[M+H]+.
实施例50使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-([1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000772
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),9.51(s,1H),9.19(dd,J＝7.6,0.9Hz,1H),8.98(s,1H),8.93(dd,J＝6.7,1.0Hz,1H),8.63(s,1H),7.43–7.38(m,1H),7.01–6.95(m,1H),6.73(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.79(s,2H),4.56(t,J＝8.7Hz,2H),3.33(d,J＝8.8Hz,2H)ppm；LCMS:m/z 403.1[M+H]+.
实施例51使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
8-(5-((1H-咪唑-1-基)甲基)-[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000773
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54-9.51(m,1H),9.44(s,1H),9.12(d,J＝7.8Hz,1H),8.72(s,1H),7.90(s,1H),7.35(s,1H),7.07(d,J＝7.9Hz,1H),6.96(s,1H),6.72(s,1H),5.81(s,2H),4.78(s,2H),4.55(s,2H),3.17-3.15(m,2H)ppm；LCMS:m/z 483.1[M+H]+.
实施例52使用上述方法，替换原料，合成以下化合物：
N-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-甲基-[1,2,4]***并[1,5-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]***并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0003479851330000781
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(s,1H),9.55(s,1H),9.38(s,1H),9.02(br t,J＝5.1Hz,1H),8.78(s,1H),7.00-6.93(m,1H),6.72(dd,J＝3.9,8.6Hz,1H),4.78(d,J＝4.9Hz,2H),4.55(t,J＝8.8Hz,2H),3.32-3.30(m,2H),2.96(s,3H)ppm；LCMS:m/z 418.0[M+H]+.
药理学及应用
EED作为PRC2蛋白复合物的主要组成部分之一，虽然并不具有酶催化的活性，但是它对PRC2的整体功能具有重要的作用。EED对PRC2的作用具体表现为两个方面：1)EED直接与三甲基化的H3K27Me3结合，这样能够把PCR2复合物定位在需要修饰的染色质上；2)EED对EZH2的酶催化功能有很大的变构促进作用。因此，开发作为变构蛋白EED的靶点化合物为提供抑制EZH2酶活性提供了新策略。而且这样的抑制剂具有比EZH2酶催化位点抑制剂具有更好或互补的优势，比如当病人对于EZH2酶抑制剂产生耐药性时，EED抑制剂同样可以起到抑制EZH2酶活性的作用。本发明公开了化合物可以作为EED靶点抑制剂，并对与EED和/或PRC2作用机理相关的疾病有治疗作用。
本发明公开化合物的生物学功能在生化以及细胞水平的测试中得到了证明。比如在生化测试中，本发明公开的化合物能够与和EED蛋白结合的H3K27Me3多肽有很强的竞争结合作用(IC50可达<1nM)。在细胞水平上，本发明公开化合物不仅可以抑制组蛋白H3K27的甲基化水平而且也可以通过这一作用抑制癌细胞的增殖(IC50可达<5nM)。本发明公开的化合物在与EED蛋白的结合时，在结合的“口袋”外侧的双环结构能使化合物具有更好的代谢稳定性。
实施例53：通过AlphaScreen(a-筛选)方法评价化合物在阻断EED与H3K27me3结合的效果
首先配置不同浓度梯度的化合物溶液。化合物粉末用DMSO溶解成母液。取1.5μl化合物母液至198.5μl反应缓冲液(25mM HEPES(pH 8.0)，50mM NaCl，0.015％Tween 20，0.5％BSA)中混匀，再用含有0.75％DMSO的上述缓冲液进行3-倍梯度稀释，同一化合物设置9个不同的测试浓度。取5μL不同浓度梯度的化合物至ProxiPlate-384 Plus，White检测板(PerkinElmer，6008280)中，每个浓度梯度设置2个平行重复。
其次进行结合阻断反应。用上述缓冲液稀释带有His6标签的全长EED蛋白(441个氨基酸)至60nM，以及生物素标记的多肽片段H3K27me3(第19-33位氨基酸)(Biotinylated-H3K27me3)至75nM。分别转移5μl浓度为75nM多肽片段以及5μl的60nM蛋白至含有化合物的检测孔内，薄膜封住检测板，室温孵育30分钟。
最后AlphaScreen方法检测。临用前，镍螯合受体珠与链霉抗生物素供体珠以1:1的比例(Perkin Elmer，产品号6760619M)混入上述反应缓冲液中，再向各检测孔中加入5μl上述预混的检测液，供体珠和受体珠终浓度均为5μg/mL。锡箔遮封住检测板，室温避光放置1小时。使用Spectra max i3上的AlphaScreen检测器读取信号。根据阳性对照(最大信号对照)和阴性对照(最小信号对照)获得的读数对AlphaScreen信号进行标准化，以给出不同浓度化合物的抑制率,之后用GraphPad Prism 5进行非线性回归分析，通过Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))剂量响应方程做出抑制曲线，得到各化合物的IC50值。
为了排除由于化合物干扰AlphaScreen检测***而产生的假阳性，以同样的方法稀释化合物，用生物素标记的多肽Biotinylated-(His)6代替检测体系中的EED和多肽H3K27me3，孵育同等时间后，在Spectra max i3上读取信号值。以同样的方法处理数据。
下表3显示了部分化合物的IC50值。
表3
Figure BDA0003479851330000791
Figure BDA0003479851330000801
实施例54：ELISA(H3K27三甲基化)分析
将代表性的本公开内容的化合物用DMSO中进行3-倍梯度稀释，每化合物检测10个浓度梯度，最高测定浓度为10μM。化合物200-倍稀释到在96-孔板中培养的G401细胞中(DMSO终浓度为0.5％)。给药细胞培养72小时后，ELISA方法检测组蛋白H3K27三甲基化水平。
组蛋白提取:96-孔板中化合物处理的细胞用1x PBS(10x PBS缓冲液(80g NaCl(Sigma,产品号S3014),2g KCl(Sigma,产品号60128),14.4g Na2HP04(Sigma,产品号S5136),2.4g KH2P04(Sigma,产品号P9791)至1L水中，pH至7.4)洗涤三次，每孔加入100μL0.4N HCl，置于4℃，温和振摇2小时裂解细胞。细胞裂解液再用80μL中和缓冲液(0.5M磷酸氢二钠，pH 12.5,2.5mM DTT；1％cocktail(Sigma，产品号P8340)中和(充分混匀细胞裂解液与中和缓冲液)。
ELISA检测方法:将细胞裂解液平行转移至2个384-孔检测板(PerkinElmer，OptiPlate-384HB,产品号6007290)中，一块板用于检测H3K27三甲基化水平，另一块板用于测定H3的水平，PBS调至终体积为50μL/孔，4℃包被过夜。次日，弃去孔内溶液，用TBST缓冲液(l xTBS(10x TBS:24.2gTris(Sigma,产品号T6066),80g NaCl(Sigma，产品号S3014)至1L水中，HCl调pH至7.6),0.1％Tween-20)洗涤5次，于吸水纸上扣干水分。将70μL封闭缓冲液(TBST,5％BSA)加入已包被之反应孔中，于室温孵育1小时。弃去封闭缓冲液，加入一级抗体(30μL/孔)。所需一级抗体均用封闭缓冲液稀释，稀释倍数如下：抗H3K27me3抗体(CellSignaling Technology,产品号9733)，1:2000稀释；抗H3抗体(Cell SignalingTechnology,产品号4499),1：10000稀释。加入一抗后，置室温孵育1小时。TBST洗涤5次后，扣干水分，各反应孔加入二级抗体(30μL/孔)，室温孵育1小时。二级抗体(抗兔抗体(Jackson ImmunoResearch,产品号111-035-003))用封闭缓冲液稀释2000倍后使用。1小时后，TBST洗涤，扣干水分。于各孔中加入30μL的ECL底物(Pierce，产品号34080)，2000rpm离心30秒。利用Molecular Devices，SpectraMax检测各样品信号。数据处理：H3K27甲基化读数先用H3信号进行标准化，0.5％DMSO处理的样品作为对照，计算出化合物的抑制百分率。采用GraphPad prisim5程序将数据拟合为剂量响应曲线，得到测试化合物的IC50值。
下表4显示了部分化合物的IC50值。
表4
Figure BDA0003479851330000811
Figure BDA0003479851330000821
Figure BDA0003479851330000831
Figure BDA0003479851330000841
实施例55：细胞增殖分析
采用标准细胞培养条件，人类B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞KARPAS-422S培养在培养瓶中。培养基为含15％胎牛血清(FBS，Invitrogen，产品号10099-141)，1％青霉素/链霉素溶液(P/S)RPMI-1640(Invitrogen，产品号11875)，培养瓶置于温度37℃，相对湿度95％，5％CO2的无菌培养箱中培养。为了检测PRC2抑制剂对细胞增殖的影响，取指数生长期的细胞，以1x104细胞/孔的密度接种到96孔板(Corning，产品号3904)中，每孔加入100μL培养基。随后，将本文公开内容的、不同浓度的化合物加入到已接种细胞的孔中(每个化合物设置9个浓度梯度，最高检测浓度为10μM,3-倍梯度稀释)，每个处理浓度设置2个平行重复，DMSO终浓度为0.5％。之后每隔3～4天用Vi-CELL(Beckman Coulter)测定存活细胞数。每次计过数的细胞以同等密度(1X104个细胞/孔)接种到新的96-孔板中，补充新鲜培养基至100μL，同时加入不同浓度的化合物。培养至第13天，每孔加入100μL的CellTiter-Glo(CellTiter-GloCellTiter-GloCellTiter-GloCTG)(Promega,产品号G7573),室温避光放置10～20分钟，利用Molecular Devices,SpectraMax i3X读取发光信号。采用GraphPadprisim5将数据拟合为剂量响应曲线，从而得到测试化合物的IC50值。
下表5显示了部分化合物的IC50值。
表5
Figure BDA0003479851330000842
Figure BDA0003479851330000851
Figure BDA0003479851330000861
Figure BDA0003479851330000871
上述本发明公开的化合物可用于治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关的癌症，包括但不局限于扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金森淋巴瘤等等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、***癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。

Claims (13)

1.一种如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物：
Figure FDA0003479851320000011
其中，
A为
Figure FDA0003479851320000012
X为N或CR7；
R1为H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代或未取代的氨基、R3取代或未取代的C1-4卤代烷基、羟基取代的或未取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基、C3-6环烷基或C1-4烷基取代的或未取代的氨基；
R3独立地为羟基、羰基、-CN、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的或未取代的C1-4烷氧基、R6取代的或未取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4独立地为羰基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
R5独立地为C1-4烷基或C3-6杂环烷基；
R6独立地为R6-1取代的或未取代的C1-4烷基；
R6-1独立地为羟基或C1-4烷基取代的或未取代的氨基；
R7独立地为H、羟基、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
R3的个数为1、2、3或4；
R4的个数为1或2；
R5的个数为1、2、3或4；
R6的个数为1或2；
所述C3-6杂环烷基和C3-6杂芳基中的杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个；
所述的如式(I)所示的化合物不为
Figure FDA0003479851320000021
Figure FDA0003479851320000022
Figure FDA0003479851320000031
2.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于：
所述的溶剂化物为水合物；
和/或，当R1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氯；
和/或，当R1为C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基；
和/或，当R1为R3取代或未取代的C1-6烷基时，所述的C1-6烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、1-戊基、2-戊基、3-戊基或异戊基，优选甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基或3-戊基；
和/或，当R3为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟；
和/或，当R3为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；
和/或，当R3为C1-4卤代烷基时，所述的C1-4卤代烷基为三氟甲基、三氟乙基、二氟甲基、二氟乙基；
和/或，当R3为C3-6杂芳基时，所述的C3-6杂芳基为咪唑基，优选
Figure FDA0003479851320000041
和/或，当R3为羟基取代的或未取代的C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选异丁氧基；
和/或，当R3为羟基取代的C1-4烷氧基时，羟基的个数为1、2或3个；
和/或，当R6独立地为R6-1取代的C1-4烷基时，R6-1的个数为1、2或3个；
和/或，当R6独立地为R6-1取代的或未取代的C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R6-1独立地为C1-4烷基取代的氨基时，C1-4烷基的个数为1或2个；
和/或，当R6-1独立地为C1-4烷基取代的或未取代的氨基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R4为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R1为R3取代或未取代的C1-4卤代烷基时，所述的卤代中的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟；
和/或，当R1为R3取代或未取代的C1-4卤代烷基时，所述的C1-4卤代烷基中的烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，更优选甲基；
和/或，当R1为羟基取代的C3-6环烷基时，羟基的个数为1、2或3个；
和/或，当R1为羟基取代的或未取代的C3-6环烷基时，所述的C3-6烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，优选环丙基或环丁基；
和/或，当R1为R5取代或未取代的C3-6杂环烷基时，所述的C3-6杂环烷基为四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚基，优选
Figure FDA0003479851320000042
Figure FDA0003479851320000043
和/或，当R5独立地为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R5独立地为C3-6杂环烷基时，所述的C3-6杂环烷基为四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚基，优选
Figure FDA0003479851320000044
Figure FDA0003479851320000045
更优选
Figure FDA0003479851320000046
和/或，当R2为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R2为C3-6环烷基时，所述的C3-6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
和/或，当R2为C1-4烷基取代的或未取代的氨基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基；
和/或，当R2为C1-4烷基取代的氨基时，C1-4烷基的个数为1或2个；
和/或，当R7为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟；
和/或，当R7为C1-4烷氧基时，所述的C1-4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，优选甲氧基；
和/或，当R7为C1-4烷基时，所述的C1-4烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选甲基。
3.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于：
A为
Figure FDA0003479851320000051
和/或，R1为H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基，优选H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基，更优选R3取代的C1-6烷基或羟基取代的C3-6环烷基；较佳地，R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、
Figure FDA0003479851320000052
Figure FDA0003479851320000053
Figure FDA0003479851320000061
更佳地，R1为
Figure FDA0003479851320000062
Figure FDA0003479851320000063
和/或，R2为H、C1-4烷基或C1-4烷基取代的氨基，优选H、甲基或
Figure FDA0003479851320000064
较佳地，R2为H或C1-4烷基，优选H或甲基；
和/或，当R1为R3取代或未取代的C1-6烷基时，R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基，优选羟基、氟、
Figure FDA0003479851320000065
甲基、乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、
Figure FDA0003479851320000066
较佳地，R3为羟基、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基，优选羟基、氟、甲基、乙基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基；
和/或，当R1为R4取代的氨基时，R4为C1-4烷基，优选甲基；
和/或，当R1为R5取代的C3-6杂环烷基时，R5为甲基或
Figure FDA0003479851320000067
和/或，当R3为R6取代的氨基时，R6为甲基、
Figure FDA0003479851320000068
和/或，当R6为R6-1取代的C1-4烷基时，R6-1为羟基或C1-4烷基取代的氨基，优选羟基或
Figure FDA0003479851320000069
和/或，R7为H、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基，优选H、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基，进一步优选H、氟、甲氧基或甲基；较佳地，R7为H、卤素或C1-4烷基，优选H、甲基或氟。
4.一种如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于：
所述如式(I)所述的化合物选自如下所示的化合物：
Figure FDA0003479851320000071
上述化合物中，R1的定义如权利要求1～3中任一项所述；
优选地，
Figure FDA0003479851320000081
5.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于，所述的如式(I)所述的化合物为如下任一方案：
方案一：
R1为H、卤素、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基或C1-4烷基取代的氨基；
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、-CN、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
方案二：
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、C1-4烷基或C1-4烷基取代的氨基；
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、卤素、C1-4烷氧基或C1-4烷基；
方案三：
A为
Figure FDA0003479851320000091
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、甲基或
Figure FDA0003479851320000092
R3为羟基、卤素、C3-6杂芳基、羟基取代的C1-4烷氧基、R6取代的氨基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷基取代的或未取代的C3-6杂环烷基；
R4为C1-4烷基；
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案四：
A为
Figure FDA0003479851320000093
R1为H、C1-4烷氧基、R3取代或未取代的C1-6烷基、R4取代的氨基、C1-4卤代烷基、羟基取代的C3-6环烷基、或R5取代或未取代的C3-6杂环烷基；
R2为H、甲基或
Figure FDA0003479851320000094
R3为羟基、氟、
Figure FDA0003479851320000095
甲基、乙基、二氟甲基、三氟甲基、
Figure FDA0003479851320000096
R4为甲基；
R5为甲基或
Figure FDA0003479851320000101
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案五：
A为
Figure FDA0003479851320000102
R1为H、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、
Figure FDA0003479851320000103
Figure FDA0003479851320000104
R2为H、甲基或
Figure FDA0003479851320000105
R7为H、氟、甲氧基或甲基；
方案六：
R1为以下任一结构：
Figure FDA0003479851320000106
优选
Figure FDA0003479851320000107
R3a、R3b独立地为H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基，优选H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；R3a和R3b不同时为甲基；当R3a为甲基时，R3b不为H；当R3a为H时，R3b不为甲基；
或R3a、R3b与所接连的原子一起形成C3-6环烷基或C3-6杂环烷基，优选C3-6环烷基；
所述C3-6杂环烷基中的杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个；
方案七：
R1为以下任一结构：
Figure FDA0003479851320000111
优选
Figure FDA0003479851320000112
R3a、R3b独立地为H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环烷基，优选H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；R3a和R3b不同时为甲基；当R3a为甲基时，R3b不为H；当R3a为H时，R3b不为甲基；
或R3a、R3b与所接连的原子一起形成C3-6环烷基或C3-6杂环烷基，优选C3-6环烷基；
所述C3-6杂环烷基中的杂原子选自N、O和S，杂原子数为1、2、3或4个；
R2为H；
R7为H、卤素或C1-6烷基；
方案八：
A为
Figure FDA0003479851320000113
R1为R3取代的C1-6烷基或羟基取代的C3-6环烷基，优选
Figure FDA0003479851320000114
Figure FDA0003479851320000115
R2为H或C1-4烷基，优选H或甲基；
R3为羟基、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基，优选羟基、氟、甲基、乙基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基；
R7为H、卤素或C1-4烷基，优选H、甲基或氟。
6.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于，所述的如式(I)所述的化合物为如下任一化合物：
Figure FDA0003479851320000121
Figure FDA0003479851320000131
7.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物，其特征在于，所述的如式(I)所示的化合物为如下任一化合物：
在下述条件下保留时间为3.134min的
Figure FDA0003479851320000132
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为3.547min的
Figure FDA0003479851320000141
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为4.974min的
Figure FDA0003479851320000142
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：等度洗脱45％，流速为2.8mL/min；
在下述条件下保留时间为5.440min的
Figure FDA0003479851320000143
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：等度洗脱45％，流速为2.8mL/min；
在下述条件下保留时间为2.782min的
Figure FDA0003479851320000144
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为2.907min的
Figure FDA0003479851320000145
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为乙醇；梯度：梯度洗脱5％流动相B→40％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为0.971min的
Figure FDA0003479851320000151
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为异丙醇；梯度：等度洗脱45％流动相B，流速为4mL/min；
在下述条件下保留时间为1.134min的
Figure FDA0003479851320000152
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IG，柱长250mm，柱内径30mm，填料颗粒直径10μm；流动相A为含0.1％NH3H2O的IPA，流动相B为异丙醇；梯度：等度洗脱45％流动相B，流速为4mL/min。
8.一种如权利要求1-7中任一项所述的如式(I)所示的化合物的制备方法，其包含如下步骤：
将卤代中间体B0与中间体E0进行偶联反应得到如式(I)所示的化合物；
Figure FDA0003479851320000153
其中，W代表卤素；Rx为-B(OH)2或
Figure FDA0003479851320000154
A、R1、R2、X的定义如权利要求1所述。
9.如下所示的化合物：
Figure FDA0003479851320000155
其中，X、R3的定义如权利要求1所述。
10.一种如权利要求1-7中任一项所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物在制备药物中的用途；所述的药物优选治疗癌症的药物；所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或它们的同位素标记化合物可单独使用，也可与其他药物联合使用；所述其他药物优选为抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药或细胞保护药物。
11.如权利要求10所述的用途，其中，所述癌症选自淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、***癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、***、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤，所述淋巴瘤优选扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤或非霍奇金森淋巴瘤。
12.一种药物组合物，其包含如权利要求1-7中任一项所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物以及药学上可接受的辅料。
13.一种药物制剂，其包含如权利要求1-7中任一项所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、其溶剂化物或它们的同位素标记化合物，或如权利要求12所述的药物组合物；所述药物制剂优选片剂、胶囊、药丸、粉末、颗粒、酏剂、酊剂、悬浮物、糖浆、乳液或溶液；所述的药物制剂的给药方式优选口服、舌下含服、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射、鼻部服用、局部表面给药或直肠给药。
CN202210084388.2A 2021-02-10 2022-01-20 氮杂芳基化合物、其制备方法及应用 Pending CN114907385A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110188129X 2021-02-10
CN202110188129 2021-02-10

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114907385A true CN114907385A (zh) 2022-08-16

Family

ID=82763107

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210084388.2A Pending CN114907385A (zh) 2021-02-10 2022-01-20 氮杂芳基化合物、其制备方法及应用

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP4293029A4 (zh)
JP (1) JP2024506518A (zh)
CN (1) CN114907385A (zh)
TW (1) TW202246271A (zh)
WO (1) WO2022171166A1 (zh)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LT3237418T (lt) 2014-12-23 2019-05-10 Novartis Ag Triazolpirimidino junginiai ir jų panaudojimas
BR112018076443A2 (pt) 2016-06-20 2019-04-09 Novartis Ag formas cristalinas de um composto de triazolopirimidina
CN109575013A (zh) * 2017-09-28 2019-04-05 中国科学院上海药物研究所 三氮唑并嘧啶、三氮唑并吡啶化合物及其组合物用于治疗prc2介导的疾病
CN110156787B (zh) * 2018-02-13 2021-11-02 中国科学院上海药物研究所 一种三氮唑并嘧啶衍生化合物、包含其的药物组合物及其用途
CN111518100A (zh) * 2019-02-02 2020-08-11 上海青煜医药科技有限公司 环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物及其应用
KR20220027933A (ko) * 2019-06-05 2022-03-08 미라티 테라퓨틱스, 인크. 암을 치료하기 위한 prc2 억제제로서의 이미다조[1,2-c]피리미딘 유도체
CN112409385A (zh) * 2019-08-22 2021-02-26 上海青煜医药科技有限公司 氮杂芳基化合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
TW202246271A (zh) 2022-12-01
EP4293029A4 (en) 2024-04-03
EP4293029A1 (en) 2023-12-20
JP2024506518A (ja) 2024-02-14
WO2022171166A1 (zh) 2022-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113651814B (zh) Kras突变蛋白抑制剂
CN112300194B (zh) 一类稠环吡啶酮类化合物、制备方法和用途
TW202043217A (zh) Ｂｃｌ－２抑制劑
CN113286794A (zh) Kras突变蛋白抑制剂
CN110563722A (zh) 吡啶或哒嗪并环化合物及其应用
CN110461841B (zh) 一种具有csf1r抑制活性的氮杂芳基衍生物、其制备方法和应用
JP7357146B2 (ja) アザヘテロアリール化合物及びその使用
CN111518100A (zh) 环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物及其应用
CN110655520A (zh) 嘧啶并环化合物及其制备方法和应用
ES2962136T3 (es) Compuestos de pirimidina fusionados como moduladores de KCC2
CN112300173B (zh) 一类含氮多环类化合物、制备方法和用途
JP2024516194A (ja) Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１阻害剤としての化合物及びその方法
CN114907385A (zh) 氮杂芳基化合物、其制备方法及应用
WO2022171088A1 (zh) 吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物
WO2022148439A1 (zh) 作为bcl-2抑制剂的杂环化合物
EP4061819A1 (en) Macrocyclic indole derivatives as mcl-1 inhibitors
EP4168413B1 (en) N-linked macrocyclic 4-(pyrazol-5-yl)-indole derivatives as inhibitors of mcl-1
CN115703799A (zh) 氮杂芳基化合物、其制备方法及应用
US20240182492A1 (en) Azaheteroaryl compound, preparation method therefor, and application thereof
CA3181816A1 (en) N-linked macrocyclic 4-(pyrazol-5-yl)-indole derivatives as inhibitors of mcl-1
WO2022122037A1 (zh) 一种二氢异喹啉酮衍生物及其应用
WO2021255257A1 (en) N-linked macrocyclic 7-(pyrazol-5-yl)-indole derivatives as inhibitors of mcl-1
CN116023368A (zh) Crbn免疫调节剂
CN116332922A (zh) 作为tead抑制剂的杂环化合物
CN111763217A (zh) 一类噻吩并氮杂环类化合物、制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination