CN114767924A - 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法 - Google Patents

一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114767924A
CN114767924A CN202210465543.5A CN202210465543A CN114767924A CN 114767924 A CN114767924 A CN 114767924A CN 202210465543 A CN202210465543 A CN 202210465543A CN 114767924 A CN114767924 A CN 114767924A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mussel
mucin
solution
chitosan
skin cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210465543.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114767924B (zh
Inventor
杨鹭
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hainan Denos Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Hainan Denos Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hainan Denos Biotechnology Co ltd filed Critical Hainan Denos Biotechnology Co ltd
Priority to CN202210465543.5A priority Critical patent/CN114767924B/zh
Publication of CN114767924A publication Critical patent/CN114767924A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114767924B publication Critical patent/CN114767924B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/008—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0004—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing inorganic materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0014—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0023—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0028—Polypeptides; Proteins; Degradation products thereof
    • A61L26/0033—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0028—Polypeptides; Proteins; Degradation products thereof
    • A61L26/0047—Specific proteins or polypeptides not covered by groups A61L26/0033 - A61L26/0042
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/0066—Medicaments; Biocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/232—Monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明提供一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，包括：(1)取5‑8wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加透明质酸钠碱性溶液，得类贻贝粘蛋白混合前液；(2)在30‑35℃水浴下，滴加海藻酸盐水溶液，得类贻贝粘蛋白预混物；(3)在20‑22℃磁性搅拌下，加酶解乌鳢胶原蛋白肽液，滴加氯化钠水溶液，得到类贻贝粘蛋白组合物；(4)在5‑8℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖混合，得壳聚糖多糖组合液；(5)在35‑45℃水浴条件下，加类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆，即得成品，本发明制备得到类贻贝粘蛋白水凝胶，不仅具有良好的粘附性，充分覆盖皮肤创面的受损细胞，而且具有稳定的缓释效果，促进皮肤屏障的修复，护理周期更久。

Description

一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备 方法
技术领域
本发明涉及生物护肤材料技术领域，特别涉及一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法。
背景技术
皮肤创面受损细胞的修复，主要包括止血阶段、炎症阶段、细胞增殖阶段和组织重塑阶段的四个阶段。随着人们对浅表皮肤创面愈合方面的重视，目前出现薄膜类、水凝胶、喷雾类等多种多样的创伤敷料。
由于在对受损的皮肤细胞修复的过程中，常因换药时将敷料从伤口剥离，而产生创面的二次伤害，而水凝胶具有良好的生物相容性，其作为一种柔性的功能材料，广泛应用于皮肤创面的受损细胞修复中。但现有的复合水凝胶类创伤敷料的粘附性不足，不利于覆盖皮肤创面，而且复合水凝胶的载药缓释性差，局部皮肤受损细胞的抗炎效果低，不利于创面的愈合修复等问题，因此，制备一种具有稳定缓释效果，且对皮肤细胞粘附性好和显著抗炎效果的蛋白水凝胶，有利于促进复合水凝胶在皮肤创面细胞修复敷料中的更广泛应用。
发明内容
鉴于此，本发明提出一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
(1)类贻贝粘蛋白混合前液：
取类贻贝粘蛋白溶于去离子水中，制得浓度为5-8wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加入透明质酸钠碱性溶液，在室温下搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白混合前液；
(2)类贻贝粘蛋白预混物：
将类贻贝粘蛋白混合前液在30-35℃水浴条件下，滴加海藻酸盐水溶液，恒温搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白预混物；
(3)类贻贝粘蛋白组合物
将类贻贝粘蛋白预混物，在20-22℃磁性搅拌状态下，加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液，并滴加氯化钠水溶液，所述类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液和氯化钠溶液体积比为3:1-2：4-6；氯化钠溶液质量浓度为3-3.5g/L；得到类贻贝粘蛋白组合物；
(4)壳聚糖多糖载体溶液：
取水溶性壳聚糖溶于去离子水中，制得浓度为10-12wt％的壳聚糖水溶液；并在5-8℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖，混合搅拌均匀，得到壳聚糖多糖组合液；
(5)将壳聚糖多糖组合液在35-45℃水浴条件下，加入类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白水凝胶。
进一步说明，所述海藻酸盐水溶液的滴加速度为5-10mL/min。
进一步说明，所述透明质酸钠碱性溶液是由透明质酸钠粉末溶于NaOH碱性水溶液中，得到pH＝10-11，浓度为3-6w％的透明质酸钠碱溶液。
进一步说明，所述透明质酸钠碱溶液与类贻贝粘蛋白溶液的体积比为：8-10:1-2。
进一步说明，所述仙草多糖水为仙草80-100℃热水浸提液，过滤浓缩烘干而得；所述壳聚糖与仙草多糖的质量比为2-4：0.3。
进一步说明，所述海藻酸盐水溶液是由海藻酸钠加水溶解得到20-22wt％的海藻酸盐水溶液；所述类贻贝粘蛋白混合前液与海藻酸盐水溶液的体积比为：1:8-10。
进一步说明，所述酶解乌鳢胶原蛋白肽液是由乌鳢胶原蛋白，加入蛋白酶进行酶解处理，灭菌，得到分子量＜1kDa乌鳢胶原蛋白肽液。
进一步说明，所述酶解乌鳢胶原蛋白肽液的制备方法为：将乌鳢胶原蛋白，加入浓度为0.05-0.1mol/L乙酸中，料液比为1：30-40mg/ml；添加0.3-0.6wt％胃蛋白酶和0.2-0.4wt％菠萝蛋白酶，在10℃-12℃下酶解2-3h后，升温至75℃，保温静置20-25min灭酶，离心，通过分子量＜1kDa的超滤膜，分离得到胶原蛋白肽液。
进一步说明，所述壳聚糖多糖组合液、类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆的质量比为：(35-45):(6-8):(0.3-0.5):(0.05-0.1)。
一种根据上述的制备方法制得的用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明将类贻贝粘蛋白应用至水凝胶制剂中，通过采用透明质酸钠碱性溶液、海藻酸盐水溶液与类贻贝粘蛋白的组合，得到类贻贝粘蛋白预混物的基础上，在低温的磁性搅拌作用下，将类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液与氯化钠溶液组合，得到具有良好的稳定性和高黏附性的类贻贝粘蛋白组合物。
(2)本发明通过首先利用透明质酸钠碱性溶液与类贻贝粘蛋白的预混后，再采用由壳聚糖水溶液与仙草多糖混合的壳聚糖多糖组合液，与含有酶解乌鳢胶原蛋白肽的类贻贝粘蛋白组合物，进行水浴混合，使得到类贻贝粘蛋白水凝胶，不仅具有良好的粘附性，充分覆盖皮肤创面的受损细胞，促进创面的愈合修复，而且有利于提高蛋白水凝胶的缓释效果，释药稳定，用于受损的皮肤屏障修复，使得护理周期更久，效果更佳。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，按照重量份数比，包括：壳聚糖多糖组合液35份、类贻贝粘蛋白组合物6份、三乙醇胺0.3份和卡波姆0.05份。
其制备方法，包括如下步骤：
(1)类贻贝粘蛋白混合前液：
取类贻贝粘蛋白溶于去离子水中，制得浓度为5wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加入pH＝10-11，浓度为3w％的透明质酸钠碱性溶液，在室温下搅拌均匀，透明质酸钠碱溶液与类贻贝粘蛋白溶液的体积比为：8:1；得到类贻贝粘蛋白混合前液；其中，类贻贝粘蛋白是贻贝粘蛋白的基因片段进行重组后，利用生物发酵技术制备而得的类贻贝粘蛋白。
(2)类贻贝粘蛋白预混物：
将类贻贝粘蛋白混合前液在32℃水浴条件下，以10mL/min滴加速度滴加浓度为20wt％的海藻酸盐水溶液，恒温搅拌均匀，类贻贝粘蛋白混合前液与海藻酸盐水溶液的体积比为：1:10；得到类贻贝粘蛋白预混物；
(3)类贻贝粘蛋白组合物：
将类贻贝粘蛋白预混物，在20℃磁性搅拌状态下，加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液，并以35mL/min滴加氯化钠水溶液；类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液和氯化钠溶液体积比为3:1：4；氯化钠溶液质量浓度为3.0g/L；得到类贻贝粘蛋白组合物；
其中，酶解乌鳢胶原蛋白肽液：将乌鳢胶原蛋白，加入浓度为0.05-0.1mol/L乙酸中，料液比为1：30-40mg/ml；添加0.3-0.6wt％胃蛋白酶和0.2-0.4wt％菠萝蛋白酶，在10℃-12℃下酶解2-3h后，升温至75℃，保温静置20-25min灭酶，离心，通过分子量＜1kDa的超滤膜，分离得到胶原蛋白肽液，下同。
(4)壳聚糖多糖载体溶液：
取水溶性壳聚糖溶于去离子水中，制得浓度为10wt％的壳聚糖水溶液；并在5℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖，混合搅拌均匀，壳聚糖与仙草多糖的质量比为2：0.3；得到壳聚糖多糖组合液；
(5)将壳聚糖多糖组合液在38℃水浴条件下，加入类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白水凝胶。
实施例2
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，按照重量份数比，包括：壳聚糖多糖组合液45份、类贻贝粘蛋白组合物8份、三乙醇胺0.5份和卡波姆0.1份。
其制备方法，包括如下步骤：
(1)类贻贝粘蛋白混合前液：
取类贻贝粘蛋白溶于去离子水中，制得浓度为8wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加入pH＝10-11，浓度为6w％的透明质酸钠碱性溶液，在室温下搅拌均匀，透明质酸钠碱溶液与类贻贝粘蛋白溶液的体积比为：10:2；得到类贻贝粘蛋白混合前液；
(2)类贻贝粘蛋白预混物：
将类贻贝粘蛋白混合前液在33℃水浴条件下，以5mL/min滴加速度滴加浓度为22wt％的海藻酸盐水溶液，恒温搅拌均匀，类贻贝粘蛋白混合前液与海藻酸盐水溶液的体积比为：1:8；得到类贻贝粘蛋白预混物；
(3)类贻贝粘蛋白组合物：
将类贻贝粘蛋白预混物，在22℃磁性搅拌状态下，加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液，并以35mL/min滴加氯化钠水溶液；类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液和氯化钠溶液体积比为3:2：6；氯化钠溶液质量浓度为3.5g/L；得到类贻贝粘蛋白组合物；
其中，酶解乌鳢胶原蛋白肽液是由乌鳢胶原蛋白，加入蛋白酶进行酶解处理，灭菌，得到分子量＜1kDa乌鳢胶原蛋白肽液。
(4)壳聚糖多糖载体溶液：
取水溶性壳聚糖溶于去离子水中，制得浓度为12wt％的壳聚糖水溶液；并在8℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖，混合搅拌均匀，壳聚糖与仙草多糖的质量比为4：0.3；得到壳聚糖多糖组合液；
(5)将壳聚糖多糖组合液在40℃水浴条件下，加入类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白水凝胶。
实施例3
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，按照重量份数比，包括：壳聚糖多糖组合液40份、类贻贝粘蛋白组合物7份、三乙醇胺0.4份和卡波姆0.08份。
其制备方法，包括如下步骤：
(1)类贻贝粘蛋白混合前液：
取类贻贝粘蛋白溶于去离子水中，制得浓度为7wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加入pH＝10-11，浓度为5w％的透明质酸钠碱性溶液，在室温下搅拌均匀，透明质酸钠碱溶液与类贻贝粘蛋白溶液的体积比为：9:1；得到类贻贝粘蛋白混合前液；
(2)类贻贝粘蛋白预混物：
将类贻贝粘蛋白混合前液在33℃水浴条件下，以8mL/min滴加速度滴加浓度为21wt％的海藻酸盐水溶液，恒温搅拌均匀，类贻贝粘蛋白混合前液与海藻酸盐水溶液的体积比为：1:9；得到类贻贝粘蛋白预混物；
(3)类贻贝粘蛋白组合物：
将类贻贝粘蛋白预混物，在21℃磁性搅拌状态下，加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液，并以35mL/min滴加氯化钠水溶液；类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液和氯化钠溶液体积比为3:1.5:5；氯化钠溶液质量浓度为3.3g/L；得到类贻贝粘蛋白组合物；
其中，酶解乌鳢胶原蛋白肽液是由乌鳢胶原蛋白，加入蛋白酶进行酶解处理，灭菌，得到分子量＜1kDa乌鳢胶原蛋白肽液。
(4)壳聚糖多糖载体溶液：
取水溶性壳聚糖溶于去离子水中，制得浓度为11wt％的壳聚糖水溶液；并在7℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖，混合搅拌均匀，壳聚糖与仙草多糖的质量比为3：0.3；得到壳聚糖多糖组合液；
(5)将壳聚糖多糖组合液在38℃水浴条件下，加入类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白水凝胶。
对比例1
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，其未制备类贻贝粘蛋白混合前液。
具体为：将7wt％的类贻贝粘蛋白溶液直接在33℃水浴条件下，以8mL/min滴加浓度为21wt％的海藻酸盐水溶液，得到类贻贝粘蛋白预混物，用于制备获得类贻贝粘蛋白组合物；
并且，在7℃下，将壳聚糖水溶液、pH＝10-11，浓度为5w％的透明质酸钠碱性溶液和仙草多糖，按比例混合搅拌均匀，得到壳聚糖多糖组合液，其余步骤条件如实施例3的制备方法。
对比例2
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，其类贻贝粘蛋白组合物的制备方法不同。
具体为：步骤1-3中，将浓度为7wt％的类贻贝粘蛋白溶液在33℃水浴条件下中，直接加入pH＝10-11，浓度为5w％的透明质酸钠碱性溶液、21wt％的海藻酸盐水溶液和酶解乌鳢胶原蛋白肽液，混合均匀后，以35mL/min滴加3.3g/L氯化钠水溶液，得到类贻贝粘蛋白组合物，其余步骤条件如实施例3的制备方法。
实施例4
对上述实施例和对比例分别制得的类贻贝粘蛋白水凝胶进行体外释放效果的测定。
(1)称取8mg类贻贝粘蛋白水凝胶加入50ml离心管中，浸入在30mL PBS溶液中，再放入100rpm、37℃恒温振荡器中。分别在6h、12h、18h、24h、30h的不同时间，取出3mL上清溶液替换等量新PBS溶液，采用紫外-可见分光光度法测定的药物浓度。
(2)释放率％＝一定时间内类贻贝粘蛋白组合物的释放量/水凝胶类贻贝粘蛋白组合物总量×100％。其结果如下表1所示：
表1
Figure BDA0003623868340000071
由上表可以看出，由本发明实施例1-3制备获得的贻贝粘蛋白水凝胶在24h内释放速率稳定，并且在30h内的类贻贝粘蛋白组合物释放量可达到70％左右，由此表明本发明的贻贝粘蛋白水凝胶具有良好的稳定的缓释效果，释药稳定，有利于对受损的皮肤屏障修复，护理周期更久，提高受损细胞的修复效果。
由实施例3与对比例1-2相比可知，对比例1在18h前释放速率高，在24h后的释放速率明显降低，且30h内的类贻贝粘蛋白组合物释放量降低；对比例2中在12h内释放率高，而在18h后的释放量明显降低，表明本发明采用透明质酸钠碱性溶液与类贻贝粘蛋白的预混制备类贻贝粘蛋白混合前液，使透明质酸钠碱性溶液、海藻酸盐水溶液与类贻贝粘蛋白的有效组合，得到类贻贝粘蛋白预混物的基础上，在低温的磁性搅拌作用下，将类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液与氯化钠溶液组合，有利于提高贻贝粘蛋白水凝胶的稳定缓释性。
对比例3
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，其类贻贝粘蛋白预混物与酶解乌鳢胶原蛋白肽液的混合条件不同。
具体为：将类贻贝粘蛋白预混物，在27℃室温下，直接加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液和3.3g/L氯化钠水溶液混合，搅拌均匀，类贻贝粘蛋白组合物，其余步骤条件如实施例3的制备方法。
对比例4
适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶，在类贻贝粘蛋白组合物中，氯化钠溶液质量浓度不同；氯化钠溶液质量浓度为5g/L，其余步骤条件如实施例3的制备方法。
实施例5
对上述实施例和对比例分别制得的类贻贝粘蛋白水凝胶的细胞粘附性的测定。
(1)采用3块24孔板，每块孔板分为6组，以多聚赖氨酸涂层的盖玻片作为对照组，其余各取实施例3、对比例1-4的类贻贝粘蛋白水凝胶100μL；以细胞1×103个/cm2的密度，接种HFF细胞；放在37℃，5％CO2浮箱下培养；
(2)分别取共培养6h、12h、18h后的孔板，弃去培养基，PBS缓冲液洗涤1次；加入4％多聚甲醛，室温固定20min，弃多聚甲醛；PBS溶液洗3次，弃PBS溶液；加入DAPI染色液，在室温、避光放置染色8min；吸出DAPI染色液，PBS溶液洗涤3次，去除悬浮细胞，置于荧光显微镜下，统计DAPI染色液染色附着在水凝胶的细胞数。
其结果如下表2所示：
表2
Figure BDA0003623868340000091
由上表可以看出，实施例3中的类贻贝粘蛋白水凝胶对细胞的粘附性明显提升，而由实施例3与对比例1-4相比，对比例2中改变了类贻贝粘蛋白组合物的制备方法，其与海藻酸盐水溶液和壳聚糖多糖组合液组合后的细胞粘附性明显下降，表明本发明以透明质酸钠碱性溶液与类贻贝粘蛋白的预混的基础上，再分步与海藻酸盐水溶液、酶解乌鳢胶原蛋白肽液的混合方式，类贻贝粘蛋白水凝胶具有更加稳定的粘附性；此外，对比例3-4较对比照组而言，其粘附性有所降低，表明其在控制类贻贝粘蛋白预混物与酶解乌鳢胶原蛋白肽液的混合条件，对类贻贝粘蛋白水凝胶的粘附性具有一定影响。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)类贻贝粘蛋白混合前液：
取类贻贝粘蛋白溶于去离子水中，制得浓度为5-8wt％的类贻贝粘蛋白溶液，加入透明质酸钠碱性溶液，在室温下搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白混合前液；
(2)类贻贝粘蛋白预混物：
将类贻贝粘蛋白混合前液在30-35℃水浴条件下，滴加海藻酸盐水溶液，恒温搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白预混物；
(3)类贻贝粘蛋白组合物
将类贻贝粘蛋白预混物，在20-22℃磁性搅拌状态下，加入酶解乌鳢胶原蛋白肽液，并滴加氯化钠水溶液，所述类贻贝粘蛋白预混物、酶解乌鳢胶原蛋白肽液和氯化钠溶液体积比为3:1-2：4-6；氯化钠溶液质量浓度为3-3.5g/L；得到类贻贝粘蛋白组合物；
(4)壳聚糖多糖载体溶液：
取水溶性壳聚糖溶于去离子水中，制得浓度为10-12wt％的壳聚糖水溶液；并在5-8℃下，将壳聚糖水溶液与仙草多糖，混合搅拌均匀，得到壳聚糖多糖组合液；
(5)将壳聚糖多糖组合液在35-45℃水浴条件下，加入类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆搅拌均匀，得到类贻贝粘蛋白水凝胶。
2.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述海藻酸盐水溶液的滴加速度为5-10mL/min。
3.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述透明质酸钠碱性溶液是由透明质酸钠粉末溶于NaOH碱性水溶液中，得到pH＝10-11，浓度为3-6w％的透明质酸钠碱溶液。
4.如权利要求3所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述透明质酸钠碱溶液与类贻贝粘蛋白溶液的体积比为：8-10:1-2。
5.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述仙草多糖水为仙草80-100℃热水浸提液，过滤浓缩烘干而得；所述壳聚糖与仙草多糖的质量比为2-4：0.3。
6.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述海藻酸盐水溶液是由海藻酸钠加水溶解得到20-22wt％的海藻酸盐水溶液；所述类贻贝粘蛋白混合前液与海藻酸盐水溶液的体积比为：1:8-10。
7.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述酶解乌鳢胶原蛋白肽液是由乌鳢胶原蛋白，加入蛋白酶进行酶解处理，灭菌，得到分子量＜1kDa乌鳢胶原蛋白肽液。
8.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述酶解乌鳢胶原蛋白肽液的制备方法为：将乌鳢胶原蛋白，加入浓度为0.05-0.1mol/L乙酸中，料液比为1：30-40mg/ml；添加0.3-0.6wt％胃蛋白酶和0.2-0.4wt％菠萝蛋白酶，在10℃-12℃下酶解2-3h后，升温至75℃，保温静置20-25min灭酶，离心，通过分子量＜1kDa的超滤膜，分离得到胶原蛋白肽液。
9.如权利要求1所述的一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述壳聚糖多糖组合液、类贻贝粘蛋白组合物、三乙醇胺和卡波姆的质量比为：(35-45):(6-8):(0.3-0.5):(0.05-0.1)。
10.一种如权利要求1-9中任意一项所述的制备方法制得的用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶。
CN202210465543.5A 2022-04-29 2022-04-29 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法 Active CN114767924B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210465543.5A CN114767924B (zh) 2022-04-29 2022-04-29 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210465543.5A CN114767924B (zh) 2022-04-29 2022-04-29 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114767924A true CN114767924A (zh) 2022-07-22
CN114767924B CN114767924B (zh) 2023-04-07

Family

ID=82435930

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210465543.5A Active CN114767924B (zh) 2022-04-29 2022-04-29 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114767924B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116196466A (zh) * 2023-03-16 2023-06-02 西安德诺海思医疗科技有限公司 贻贝粘蛋白乳膏剂敷料及其制备方法
CN116617109A (zh) * 2023-06-05 2023-08-22 广州植境生物科技有限公司 一种贻贝粘蛋白头皮修护组合物及其制备方法和应用
CN116942562A (zh) * 2023-07-24 2023-10-27 海南德诺海思生物科技有限公司 一种用于高热状态的皮肤屏障受损的皮肤修护水及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017101020A1 (zh) * 2015-12-15 2017-06-22 江阴市本特塞缪森生命科学研究院有限公司 一种改良的敷料
CN111973551A (zh) * 2020-08-31 2020-11-24 西安中天生物医药有限公司 一种贻贝粘蛋白抑菌凝胶及其制备方法
CN113372585A (zh) * 2021-07-26 2021-09-10 郑州大学 一种具有高粘附性复合功能水凝胶的制备方法及其应用
CN113368300A (zh) * 2021-05-31 2021-09-10 绽妍生物科技有限公司 一种eps与贻贝提取物复配修复皮肤屏障敷料及其制备方法
CN113769066A (zh) * 2021-09-17 2021-12-10 成都英普博集生物科技有限公司 一种促进创面愈合的组合物及其制备方法与用途
WO2022041401A1 (zh) * 2020-08-27 2022-03-03 振德医疗用品股份有限公司 一种创面覆盖物及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017101020A1 (zh) * 2015-12-15 2017-06-22 江阴市本特塞缪森生命科学研究院有限公司 一种改良的敷料
WO2022041401A1 (zh) * 2020-08-27 2022-03-03 振德医疗用品股份有限公司 一种创面覆盖物及其制备方法
CN111973551A (zh) * 2020-08-31 2020-11-24 西安中天生物医药有限公司 一种贻贝粘蛋白抑菌凝胶及其制备方法
CN113368300A (zh) * 2021-05-31 2021-09-10 绽妍生物科技有限公司 一种eps与贻贝提取物复配修复皮肤屏障敷料及其制备方法
CN113372585A (zh) * 2021-07-26 2021-09-10 郑州大学 一种具有高粘附性复合功能水凝胶的制备方法及其应用
CN113769066A (zh) * 2021-09-17 2021-12-10 成都英普博集生物科技有限公司 一种促进创面愈合的组合物及其制备方法与用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHONGWEI GUO,ET AL: "Mussel-Inspired Naturally Derived Double-Network Hydrogels and Their Application in 3D Printing: From Soft, Injectable Bioadhesives to Mechanically Strong Hydrogels", 《ACS BIOMATER. SCI. ENG. 》 *
高敏: "贻贝粘蛋白综述", 《安徽农业科学》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116196466A (zh) * 2023-03-16 2023-06-02 西安德诺海思医疗科技有限公司 贻贝粘蛋白乳膏剂敷料及其制备方法
CN116617109A (zh) * 2023-06-05 2023-08-22 广州植境生物科技有限公司 一种贻贝粘蛋白头皮修护组合物及其制备方法和应用
CN116617109B (zh) * 2023-06-05 2024-02-20 广州植境生物科技有限公司 一种贻贝粘蛋白头皮修护组合物及其制备方法和应用
CN116942562A (zh) * 2023-07-24 2023-10-27 海南德诺海思生物科技有限公司 一种用于高热状态的皮肤屏障受损的皮肤修护水及其制备方法
CN116942562B (zh) * 2023-07-24 2024-02-09 海南德诺海思生物科技有限公司 一种用于高热状态的皮肤屏障受损的皮肤修护水及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114767924B (zh) 2023-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114767924B (zh) 一种适用于受损皮肤细胞修复的类贻贝粘蛋白水凝胶的制备方法
FI91037B (fi) Bioliimat solujen ja kudosten kiinnittämiseen
Dhiman et al. Characterization and evaluation of chitosan matrix for in vitro growth of MCF-7 breast cancer cell lines
Jing et al. Alginate/chitosan-based hydrogel loaded with gene vectors to deliver polydeoxyribonucleotide for effective wound healing
CN105492595B (zh) 细胞培养制品及其方法
CN106983912B (zh) 一种3d打印的抗菌水凝胶修复支架及其制备方法
CN111662464A (zh) 一种壳聚糖/海藻酸钠双网络水凝胶的制备方法
WO2015085633A1 (zh) 一种基于γ-聚谷氨酸与ε-聚赖氨酸交联聚合物的水凝胶及其制备方法
CN112522191A (zh) 一种间充质干细胞的培养方法
WO2011059112A1 (ja) 粒子含有細胞集合体
Lai Biofunctionalization of gelatin microcarrier with oxidized hyaluronic acid for corneal keratocyte cultivation
CN111748120A (zh) 一种聚多巴胺掺杂葡聚糖水凝胶多孔支架及制备方法及应用
Suzuki et al. Characteristics of silica-chitosan complex membrane and their relationships to the characteristics of growth and adhesiveness of L-929 cells cultured on the biomembrane
Sazhnev et al. Preparation of chitosan cryostructurates with controlled porous morphology and their use as 3D-scaffolds for the cultivation of animal cells
CN111662866A (zh) 一种人羊膜间充质干细胞培养基
JP2003503318A (ja) 細胞培養のための表面
JP2609559B2 (ja) 組織系細胞の培養に用いる基質
EP3980029B1 (en) Means for use in preparation of hydrogel based on hydroxyphenyl derivative of hyaluronan, method of hydrogel preparation and use thereof
CN110680949B (zh) 一种基于母乳的创伤敷料的制备方法和应用
CN113425671A (zh) 一种调控肿瘤微环境免疫凝胶的制备方法及其应用
JPH02234670A (ja) 細胞培養用基材
CN106880512B (zh) Ha修饰的人脐带msc无血清培养液cs纳米粒冻干粉及其制备和应用
CN115844927B (zh) 干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途
CN110180029A (zh) 一种具有诱导成骨分化与骨再生功能的可降解材料的制备方法及应用
CN1255190C (zh) 胶原凝胶人工真皮替代物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant