CN114058614A - 核酸提取试剂盒及其应用、核酸提取方法 - Google Patents

核酸提取试剂盒及其应用、核酸提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种核酸提取试剂盒及其应用、核酸提取方法。该核酸提取试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、核酸吸附物、清洗液及洗脱液；其中，所述裂解液包括：57.3％±5％(m/v)的胍盐、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA，核酸吸附物包括磁微粒，胍盐为盐酸胍或者异硫氰酸胍。上述核酸提取试剂盒的提取纯度较高、对微量核酸提取效率较高。

Description

核酸提取试剂盒及其应用、核酸提取方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种核酸提取试剂盒及其应用、核酸提取方法。
背景技术
在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。
目前最常用的核酸提取方法是磁珠吸附法和硅胶膜吸附柱法。硅胶膜吸附柱法快速简便，获得的核酸纯度高，但是对小片段DNA或RNA提取效率不高，而且不适用于自动化提取流程。
磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。
但是目前磁珠法提取也存在一些问题，对微量核酸提取效率，提取纯度低且易出现盐分残留，对后续分子检测造成不利影响。尤其是鼻咽拭子这种样本量及其中病毒含量均不高(微量)的样本检测，高效的核酸提取更是至关重要。另外，目前市场上的基于磁珠法的商品化提取试剂盒提取过程一般需要加热步骤进行裂解孵育和核酸洗脱，而加热会对核酸产生一定程度的损伤，特别是对样本中的RNA，提取过程中如果采用50℃-60℃的加热会使样本中自带的、试剂耗材或环境中引入的RNase达到最适温度条件，进而导致RNA样本降解损失。这种损失，对待测样本量不高、样本中病毒含量微量的情况更是无法接受的，容易造成严重的结果误判。
发明内容
基于此，有必提供一种提取纯度较高、微量核酸提取效率较高的核酸提取试剂盒及其应用。
此外，还提供一种核酸提取方法。
一种核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、核酸吸附物、清洗液及洗脱液；其中，所述裂解液包括：57.3％±5％(m/v)的胍盐、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA，所述核酸吸附物包括磁微粒，所述胍盐为盐酸胍或者异硫氰酸胍。
上述核酸提取试剂盒中，裂解液的胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态，胍盐是一个核酸酶的强抑制剂，可以使蛋白变性，强度一般，在核酸提取中的主要作用是使蛋白质变性并抑制核酸酶活性，盐酸胍能够快速破坏细胞膜或病毒，释放核酸，使蛋白质变性，从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕，并与EDTA协同作用防止DNA/RNA被核酸酶降解；NaCl能提供一个高盐环境，在高盐条件下，蛋白与DNA/RNA分离，盐的阳离子会与DNA/RNA形成DNA/RNA阳离子盐，使DNA/RNA充分溶解于液相中；乙二胺四乙酸(EDTA)是一种二价离子螯合剂，能够螯合Mg2+、Ca2+或Mn2+等二价阳离子，抑制金属依赖性的酶如DNase和RNase的活性，能够抑制核酸酶对裂解后游离暴露出来核酸的降解，从而减少提取过程中游离核酸的损失；在外部磁场的作用下，磁微粒可以定向移动，实现与介质溶液的分离；在胍盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下，磁珠与核酸分子特异性地识别和高效结合，能将生物样本以及环境、食品等样本中的核酸分子(DNA和RNA)分离出来。上述核酸提取试剂盒中，裂解液和蛋白酶K配合能够在室温无需加热的条件下裂解组织、细胞、全血、血浆、唾液、咽拭子样本，能保证核酸与核酸结合蛋白迅速彻底分离，释放大量核酸，并且在裂解后能使变性蛋白质仍然具有较高的溶解度，裂解液中释放出来的核酸与磁微粒高效特异吸附结合，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于微量核酸提取，更简单、更快速、适用于自动化工作平台的核酸提取纯化，为病原核酸检测提供高质量核酸模板，提高检测效率和检测准确度。
在其中一个实施例中，所述裂解液由如下组分构成：57.32％±5％(m/v)的盐酸胍、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA。
在其中一个实施例中，所述蛋白酶K的浓度为10mg/mL-20mg/mL。
在其中一个实施例中，所述磁微粒为羟基修饰二氧化硅磁性颗粒，所述二氧化硅磁性颗粒的平均直径为200nm-500nm。
在其中一个实施例中，所述核酸吸附物还包括异丙醇及乙醇中至少一种。
在其中一个实施例中，所述清洗液还包括第一清洗液，所述第一清洗液包括1％±0.1％(m/v)的SDS、2.32％±0.2％(m/v)的NaCl和0.58％±0.05％(m/v)。
在其中一个实施例中，所述清洗液还包括第二清洗液，所述第二清洗液包括超纯水、去离子水及DEPC处理水中至少一种。
在其中一个实施例中，所述洗脱液为DEPC处理水。
上述核酸提取试剂盒在用于提取生物样本中的核酸中的应用，所述生物样本包括组织样本、细胞样本、全血样本、血浆样本、唾液样本或咽拭子样本。
一种核酸提取方法，采用上述核酸提取试剂盒提取待测样本中的核酸，所述核酸提取方法包括如下步骤：
将所述待测样本与所述裂解液、所述蛋白酶K混匀、反应，得到裂解后样本；
将所述裂解后样本和所述核酸吸附物混合、反应，得到吸附后的所述磁微粒；
采用所述清洗液清洗吸附后的所述磁微粒，得到清洗后的所述磁微粒；
采用所述洗脱液处理所述清洗后的所述磁微粒，分离所述磁微粒，得到所述核酸。
在其中一个实施例中，将所述待测样本与所述裂解液、所述蛋白酶K混匀的步骤中，所述待测样本、所述裂解液和所述蛋白酶K的比例为200：300：15～200：350：20。
在其中一个实施例中，将所述裂解后样本和所述核酸吸附物混合的步骤中，所述裂解后样本和所述磁微粒的比例为200：15～200：20。
附图说明
图1为实施例1和对比例1的扩增曲线对比图；
图2为实施例2和对比例2的扩增曲线对比图；
图3为实施例3和对比例3的扩增曲线对比图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
本研究一实施方式提供一种核酸提取试剂盒，包括：裂解液、蛋白酶K、核酸吸附物、清洗液及洗脱液；其中，裂解液包括：57.3％±5％(m/v)的胍盐、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA，所述核酸吸附物包括磁微粒，所述胍盐为盐酸胍或者异硫氰酸胍。
上述核酸提取试剂盒中，裂解液的胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态，胍盐是一个核酸酶的强抑制剂，可以使蛋白变性，强度一般，在核酸提取中的主要作用是使蛋白质变性并抑制核酸酶活性，盐酸胍能够快速破坏细胞膜或病毒，释放核酸，使蛋白质变性，从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕，并与EDTA协同作用防止DNA/RNA被核酸酶降解；NaCl能提供一个高盐环境，在高盐条件下，蛋白与DNA/RNA分离，盐的阳离子会与DNA/RNA形成DNA/RNA阳离子盐，使DNA/RNA充分溶解于液相中；乙二胺四乙酸(EDTA)是一种二价离子螯合剂，能够螯合Mg2+、Ca2+或Mn2+等二价阳离子，抑制金属依赖性的酶如DNase和RNase的活性，能够抑制核酸酶对裂解后游离暴露出来核酸的降解，从而减少提取过程中游离核酸的损失；在外部磁场的作用下，磁微粒可以定向移动，实现与介质溶液的分离；在胍盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下，磁珠与核酸分子特异性地识别和高效结合，能将生物样本以及环境、食品等样本中的核酸分子(DNA和RNA)分离出来。上述核酸提取试剂盒中，裂解液和蛋白酶K配合能够在室温无需加热的条件下裂解组织、细胞、全血、血浆、唾液、咽拭子样本，能保证核酸与核酸结合蛋白迅速彻底分离，释放大量核酸，并且在裂解后能使变性蛋白质仍然具有较高的溶解度，裂解液中释放出来的核酸与磁微粒高效特异吸附结合，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于咽拭子等微量核酸提取，更简单、更快速、适用于自动化工作平台的核酸提取纯化，为病原核酸检测提供高质量核酸模板，提高检测效率和检测准确度。
在其中一个实施例中，裂解液由如下组分构成：57.32％±5％(m/v)的盐酸胍、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA。此配方的裂解液能够在室温无需加热的条件下裂解组织、细胞、全血、血浆、唾液、咽拭子等生物样本，还能够裂解环境样本或者食品样本，能保证核酸与核酸结合蛋白迅速彻底分离，释放大量核酸，并且在裂解后能使变性蛋白质仍然具有较高的溶解度，裂解液中释放出来的核酸与磁微粒高效特异吸附结合，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于微量核酸提取。
蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围(4-12.5)内及高温(50℃-70℃)均有活性，用于质粒或基因组DNA、RNA的分离。在DNA提取中，主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白，使DNA游离在溶液中，随后用不同方法进行抽提，除去杂质，收集DNA。蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。在其中一个实施例中，蛋白酶K的浓度为10mg/mL-20mg/mL。
超顺磁微球简称磁珠，是运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后制备成的超顺磁性氧化硅纳米磁珠。磁珠的内部是一个磁核，外部是一层包覆层，表面分布着许多活性基团，能在微观界面上与细胞、蛋白质、核酸、酶等生化试剂发生偶联，在外部磁场的作用下，磁珠可以定向移动，实现与介质溶液的分离。在胍盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下，磁珠与核酸分子特异性地识别和高效结合，能将生物样本以及环境、食品等样本中的核酸分子(DNA和RNA)分离出来。
在其中一个实施例中，磁微粒为羟基修饰二氧化硅磁性颗粒，二氧化硅磁性颗粒的平均直径为200nm-500nm。选用平均直径为200nm-500nm的二氧化硅磁性颗粒，具有粒径分布均一、水分散性良好，可以在高盐条件下吸附核酸，在水或低盐条件下又与核酸分离，有益效果。
在其中一个实施例中，核酸吸附物还包括异丙醇及乙醇中至少一种。异丙醇或乙醇的添加能够增加核酸与磁微粒的吸附。进一步地，异丙醇与磁微粒的比例为300：15～320：20。具体地，异丙醇的添加体积为320μL。
在其中一个实施例中，清洗液还包括第一清洗液。第一清洗液包括1％±0.1％(m/v)的SDS、2.32％±0.2％(m/v)的NaCl和0.58％±0.05％(m/v)的EDTA。SDS是离子型表面活性剂，可以溶解细胞膜上的脂质和蛋白，从而破坏细胞膜。NaCl可以提供Na2+中和DNA分子的负电荷，减少核酸分子之间的同性电荷相斥力，有利于核酸相互聚集。EDTA可以螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，从而抑制核酸酶对DNA或RNA的降解。此配方的第一清洗液对吸附有核酸的磁微粒的清洗效果较好，去除蛋白，多糖，脂类等杂质，有利于提高核酸的纯度。
在其中一个实施例中，清洗液还包括第二清洗液，第二清洗液包括超纯水、去离子水及DEPC处理水中至少一种。通过第二清洗液的清洗能够进一步洗掉吸附于磁微粒上的杂质，有利于提高核酸的纯度。
在其中一个实施例中，洗脱液为DEPC处理水。DEPC水是用DEPC(diethylpyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的超纯水(一级水)，无色液体。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。采用盐浓度较低的洗脱液，能够较大程度地将核酸从磁微粒上洗脱，提高核酸的洗脱效率，DEPC处理水是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂，它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
上述核酸提取试剂盒在用于提取生物样本中的核酸中的应用，生物样本包括组织样本、细胞样本、全血样本、血浆样本、唾液样本或咽拭子样本，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于咽拭子等微量核酸提取，更简单、更快速、适用于自动化工作平台的核酸提取纯化，为病原核酸检测提供高质量核酸模板，提高检测效率和检测准确度。
本研究一实施方式还提供一种核酸提取方法，采用上述核酸提取试剂盒提取待测样本中的核酸，核酸提取方法包括如下步骤S110-S140：
S110、将待测样本与裂解液、蛋白酶K混匀、反应，得到裂解后样本。
在其中一个实施例中，将所述待测样本与所述裂解液、所述蛋白酶K混匀的步骤中，待测样本、裂解液和蛋白酶K的比例为200：300：15～200：320：20。
具体地，S110包括：取200μL样本至1.5mL离心管；向待测样本中加入300μL的裂解液、10μL蛋白酶K，震荡混匀，室温静置10min，短暂离心收集管壁液滴。
S120、将裂解后样本和核酸吸附物混合、反应，得到吸附后的磁微粒。
在其中一个实施例中，将裂解后样本和核酸吸附物混合的步骤中，裂解后样本和磁微粒的比例为200：15～200：20。
具体地，S120包括：向样本裂解液(裂解后样本)中加入320μL异丙醇和15μL的磁珠，漩涡震荡10秒后，置于室温10min，将离心管置于磁力架上，静置1分钟，待磁珠完全吸附后用移液器小心吸弃所有液体，得吸附后磁珠。
S130、采用清洗液清洗吸附后的所述磁微粒，得到清洗后的磁微粒。
在其中一个实施例中，清洗液还包括第一清洗液。第一清洗液包括1％±0.1％(m/v)的SDS、2.32％±0.2％(m/v)的NaCl和0.58％±0.05％(m/v)的EDTA。此配方的第一清洗液对吸附有核酸的磁微粒的清洗效果较好，有利于提高核酸的纯度。进一步地，清洗液还包括第二清洗液，第二清洗液包括超纯水。通过第二清洗液的清洗能够进一步洗掉吸附于磁微粒上的杂质，有利于提高核酸的纯度。
具体地，S130包括：向所得磁珠中加入500μL第一清洗液，漩涡震荡10秒后，恒温下置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体。接着，向所得磁珠中加入500μL第二清洗液，漩涡震荡10秒后，恒温下置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体，保证无液体残留。
S140、采用洗脱液处理清洗后的所述磁微粒，分离磁微粒，得到核酸。
具体地，S140包括：向所得漂洗后磁珠中加入60μL洗脱液，漩涡震荡5秒后，室温条件下静置2分钟后，将离心管置于磁力架上，待磁珠吸附后，收集洗脱后所得的核酸溶液，置于20℃保存。
上述核酸提取方法中，通过裂解液和蛋白酶K配合能够在室温无需加热的条件下裂解组织、细胞、全血、血浆、唾液、咽拭子样本，能保证核酸与核酸结合蛋白迅速彻底分离，释放大量核酸，并且在裂解后能使变性蛋白质仍然具有较高的溶解度，裂解液中释放出来的核酸与磁微粒高效特异吸附结合，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于咽拭子等微量核酸提取，更简单、更快速、适用于自动化工作平台的核酸提取纯化，为病原核酸检测提供高质量核酸模板，提高检测效率和检测准确度。
以下为具体实施例部分。
实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者试剂盒生产厂家推荐的方法实现。实施例中所使用的试剂均为市售。
如未特别说明，以下实施例中，蛋白酶K为市售蛋白酶K(纯度≥90％，酶活≥30U/mg)。
实施例1
本实施例的实验过程如下：
(1)实施例1的待测样本为样本1：腺病毒(DNA病毒)临床阳性咽拭子样本。
(2)实施例1的核酸提取试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、核酸吸附物、第一清洗液、第二清洗液及洗脱液；其中，裂解液包括：57.32％(m/v)的胍盐、1.16％(m/v)的NaCl和0.29％(m/v)的EDTA，胍盐为盐酸胍，蛋白酶K的浓度为20mg/mL，核酸吸附物包括磁微粒和异丙醇，磁微粒为羟基修饰二氧化硅磁性颗粒，二氧化硅磁性颗粒的直径为200nm-500nm，第一清洗液包括1％(m/v)的SDS、2.32％(m/v)的NaCl和0.58％(m/v)的EDTA，第二清洗液包括超纯水，洗脱液为DEPC处理水。
(3)本试剂盒核酸提取具体包括以下步骤：
(a)样本准备：取200μL的待测样本至1.5mL离心管；
(b)样本裂解：向待测样本中加入300μL的裂解液、10μL蛋白酶K，震荡混匀，室温静置10min，短暂离心收集管壁液滴，得到；
(c)核酸吸附：向样本裂解液中加入320μL的异丙醇和15μL的磁珠，漩涡震荡10秒后，置于室温10min，将离心管置于磁力架上，静置1分钟，待磁珠完全吸附后用移液器小心吸弃所有液体，得吸附后磁珠；
(d)磁珠漂洗：向所得磁珠中加入500μL的第一清洗液，漩涡震荡10秒后，恒温下置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体。
(e)磁珠漂洗：向第一清洗液清洗后所得磁珠中加入500μL的第二清洗液，漩涡震荡10秒后，恒温下置于磁力架上，静置至磁珠完全吸附后，弃去所有液体，保证无液体残留。
(f)核酸洗脱：向第二清洗液清洗后的磁珠中加入60μL洗脱液，漩涡震荡5秒后，室温条件下静置2分钟后，将离心管置于磁力架上，待磁珠吸附后，收集洗脱后所得的核酸溶液，置于20℃保存。
(4)检测：
将核酸溶液在Thermo ScientificTM NanoDrop One超微量紫外分光光度计进行浓度和纯度测定，并以腺病毒探针引物进行荧光定量分析。测定结果详见图1及表1。
实施例2
本实施例的实验过程如下：
(1)实施例2的待测样本为样本2：甲型流感病毒(RNA病毒)临床阳性咽拭子样本。
(2)实施例2的核酸提取试剂盒与实施例1大致相同，不同之处在于，实施例2的胍盐为异硫氰酸胍。
(3)实施例2的核酸提取具体步骤与实施例1相同。
(4)检测：
将核酸溶液在Thermo ScientificTM NanoDrop One超微量紫外分光光度计进行浓度和纯度测定，并以甲型流感病毒探针引物进行荧光定量分析。测定结果详见图2及表1。
实施例3
本实施例的实验过程如下：
(1)实施例3的待测样本为样本3：EDTA抗凝全血(正常人血液样本)。
(2)实施例3的核酸提取试剂盒与实施例1相同。
(3)实施例3的核酸提取具体步骤与实施例1相同。
(4)检测：
将核酸溶液在Thermo ScientificTM NanoDrop One超微量紫外分光光度计进行浓度和纯度测定，并以人源性内参GAPDH探针引物进行荧光定量分析。测定结果详见图3及表1。
对比例1
对比例1的实验过程与实施例1的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例1的核酸提取试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司的磁珠法病原微生物DNA/RNA提取试剂盒。测定结果详见图1及表1。
对比例2
对比例2的实验过程与实施例2的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例2的核酸提取试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司的磁珠法病原微生物DNA/RNA提取试剂盒。测定结果详见图2及表1。
对比例3
对比例3的实验过程与实施例3的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例3的核酸提取试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司的磁珠法病原微生物DNA/RNA提取试剂盒。测定结果详见图3及表1。
对比例4
对比例4的实验过程与实施例1的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例4的核酸提取试剂盒中，胍盐的含量为30％(m/v)。测定结果详见表1。
对比例5
对比例5的实验过程与实施例1的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例5的核酸提取试剂盒中，NaCl的含量为0.5％(m/v)。测定结果详见表1。
对比例6
对比例6的实验过程与实施例1的实验过程大致相同，不同之处在于，对比例6的核酸提取试剂盒中，EDTA的含量为0.05％(m/v)。测定结果详见表1。
表1实施例1-实施例3及对比例1-对比例6的核酸溶液浓度检测结果统计
Figure BDA0003363603880000131
从图1及表1可以看出，实施例1的核酸溶液浓度高于对比例1的试剂盒，实施例1的核酸提取试剂盒提取的核酸溶液荧光定量QPCR的CT值小于对比例1的试剂盒，说明本申请的核酸提取试剂盒比现有商业化的试剂盒更适于提取腺病毒(DNA病毒)临床阳性咽拭子样本中的核酸。
从图2及表1可以看出，实施例2的核酸溶液浓度高于对比例2的试剂盒，实施例2的核酸提取试剂盒提取的核酸溶液荧光定量QPCR的CT值小于对比例2的试剂盒，说明本申请的核酸提取试剂盒比现有商业化的试剂盒更适于提取甲型流感病毒(RNA病毒)临床阳性咽拭子样本中的核酸。
从图3及表1可以看出，实施例2的核酸溶液浓度高于对比例2的试剂盒，实施例2的核酸提取试剂盒提取的核酸溶液荧光定量QPCR的CT值小于对比例2的试剂盒，说明本申请的核酸提取试剂盒比现有商业化的试剂盒更适于提取EDTA抗凝全血样本中的核酸。从表1可以看出，实施例1的核酸溶液浓度高于对比例4-对比例6的试剂盒，实施例1的A260/A280高于对比例4-对比例6的试剂盒，相同的样本及样本加入量，本申请的核酸提取试剂盒提取的核酸溶液在纯度上A260/A280达到1.8左右，符合要求，且浓度高于现有商业化的试剂盒。
本申请的核酸提取试剂盒中能够在室温无需加热的条件下裂解组织、细胞、全血、血浆、唾液、咽拭子样本，能保证核酸与核酸结合蛋白迅速彻底分离，释放大量核酸，并且在裂解后能使变性蛋白质仍然具有较高的溶解度，裂解液中释放出来的核酸与磁微粒高效特异吸附结合，提取纯度较高，提取效率高，尤其适合于咽拭子等微量核酸提取，更简单、更快速、适用于自动化工作平台的核酸提取纯化，为病原核酸检测提供高质量核酸模板，提高检测效率和检测准确度。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (11)

1.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、核酸吸附物、清洗液及洗脱液；其中，所述裂解液包括：57.3％±5％(m/v)的胍盐、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA，所述核酸吸附物包括磁微粒，所述胍盐为盐酸胍或者异硫氰酸胍。
2.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液由如下组分构成：57.32％±5％(m/v)的盐酸胍、1.16％±0.1％(m/v)的NaCl和0.29％±0.03％(m/v)的EDTA。
3.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K的浓度为10mg/mL-20mg/mL。
4.根据权利要求1所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为羟基修饰二氧化硅磁性颗粒，所述二氧化硅磁性颗粒的平均直径为200nm-500nm。
5.根据权利要求4所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸吸附物还包括异丙醇及乙醇中至少一种。
6.根据权利要求1所述的所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液还包括第一清洗液，所述第一清洗液包括1％±0.1％(m/v)的SDS、2.32％±0.2％(m/v)的NaCl和0.58％±0.05％(m/v)的EDTA。
7.根据权利要求6所述的所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液还包括第二清洗液，所述第二清洗液包括超纯水、去离子水及DEPC处理水中至少一种。
8.根据权利要求1所述的所述的核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为DEPC处理水。
9.如权利要求1-8任意一项所述的核酸提取试剂盒在用于提取生物样本中的核酸中的应用，其特征在于，所述生物样本包括组织样本、细胞样本、全血样本、血浆样本、唾液样本或咽拭子样本。
10.一种核酸提取方法，其特征在于，采用权利要求1-9任意一项所述的核酸提取试剂盒提取待测样本中的核酸，所述核酸提取方法包括如下步骤：
将所述待测样本与所述裂解液、所述蛋白酶K混匀、反应，得到裂解后样本；
将所述裂解后样本和所述核酸吸附物混合、反应，得到吸附后的所述磁微粒；
采用所述清洗液清洗吸附后的所述磁微粒，得到清洗后的所述磁微粒；
采用所述洗脱液处理所述清洗后的所述磁微粒，分离所述磁微粒，得到所述核酸。
11.根据权利要求10所述的核酸提取方法，其特征在于，将所述待测样本与所述裂解液、所述蛋白酶K混匀的步骤中，所述待测样本、所述裂解液和所述蛋白酶K的比例为200：300：15～200：320：20；
及/或，将所述裂解后样本和所述核酸吸附物混合的步骤中，所述裂解后样本和所述磁微粒的比例为200：15～200：20。
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