CN113816933B - 一种羟基红花黄色素a的制备方法 - Google Patents
一种羟基红花黄色素a的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113816933B CN113816933B CN202111200000.2A CN202111200000A CN113816933B CN 113816933 B CN113816933 B CN 113816933B CN 202111200000 A CN202111200000 A CN 202111200000A CN 113816933 B CN113816933 B CN 113816933B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- membrane
- safflower
- column chromatography
- concentrated solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N (6e)-2,5-dihydroxy-6-[(e)-1-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enylidene]-2,4-bis[(2s,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]cyclohex-4-ene-1,3-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C(C(C(O)([C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C1=O)=O)=C(O)\C1=C(/O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N hydroxysafflor yellow A Natural products OCC1OC(C(O)C(O)C1O)C2=C(O)C(O)(C3OC(CO)C(O)C(O)C3O)C(=O)C(=C2O)C(=O)C=Cc4ccc(O)cc4 ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 24
- 229940119485 safflower extract Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 claims abstract description 16
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 16
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 241000628997 Flos Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 25
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 20
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 20
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 15
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 10
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 claims description 7
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 7
- -1 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 claims description 2
- KINGXFAMZNIVNL-SXQDSXCISA-N safflor yellow A Natural products OC[C@@H]1O[C@H]2[C@H](OC3=C2C(=O)C(=C(O)C=Cc4ccc(O)cc4)C(=O)[C@]3(O)[C@@H]5O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)[C@@H](O)[C@H]1O KINGXFAMZNIVNL-SXQDSXCISA-N 0.000 abstract description 9
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 150000001788 chalcone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229930194301 safflor yellow Natural products 0.000 description 2
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 2
- 206010000077 Abdominal mass Diseases 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- YKDBQWHZEDSTAI-FUAYHEDRSA-N Safflor yellow B Natural products OC[C@@H]1O[C@H]2[C@@H](OC3=C2C(=O)C(=C(O)[C@]3(O)[C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)C(=O)C=Cc5ccc(O)cc5)[C@@H](O)[C@@H]1O YKDBQWHZEDSTAI-FUAYHEDRSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010048992 Spinal cord haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003113 alkalizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- NKWPZUCBCARRDP-UHFFFAOYSA-L calcium bicarbonate Chemical compound [Ca+2].OC([O-])=O.OC([O-])=O NKWPZUCBCARRDP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000020 calcium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Chemical group CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- WBKUQZJRZIYAJL-JTAXDKCCSA-N safflor yellow b Chemical compound OC=1C(O)(C2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(O)=C(C(=O)\C=C/C=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)C=1C(C(O)C(O)C(O)C(O)CO)C(C(C(C(=O)\C=C\C=1C=CC(O)=CC=1)=C1O)=O)=C(O)C1(O)C1OC(CO)C(O)C(O)C1O WBKUQZJRZIYAJL-JTAXDKCCSA-N 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen carbonate;hydrate Chemical compound [OH-].[Na+].OC(O)=O XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/10—Oxygen atoms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法。该方法包括：提取：将红花药材与碱水溶液混合，浸泡得红花提取物碱水溶液，调节pH至酸性，得到红花提取物酸水溶液；超滤分离：将红花提取物酸水溶液进行超滤处理，得到超滤液；柱层析分离：取超滤液进行柱层析分离处理，浓缩，得到红花提取物浓缩液；纯化：将红花提取物浓缩液进行纯化处理，得到红花提取物纯化液；干燥：将红花提取物纯化液进行干燥处理，得到羟基红花黄色素A。本发明提供的羟基红花黄色素A的制备方法快速、低能耗、低成本、高纯度、收率高、安全性高和易于工业化生产，本发明制备的羟基红花黄色素A的纯度在98％以上，收率80％左右。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域，尤其涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法。
背景技术
中药红花为菊科红花属植物Carthamus tinctorius L.的干燥花，俗名草红花、红蓝花和红花草。红花性辛、温，是传统的活血化瘀药之一，具有活血化瘀、通经止痛的功效。现代药理学研究表明，红花具有扩张血管、增加血流量、改善微循环和抑制血小板聚集等作用，对治疗血栓性脑血管疾病有疗效，对脑梗塞动物的脑组织也有保护作用。中医临床上用于治疗闭经、痛经、恶露不行、癓瘕痞块、跌扑损伤、疮疡肿痛等症。同时利用红花或含红花的方剂治疗血液循环障碍疾病也有疗效。
红花的有效成分为水溶性的红花黄色素(Safflor yellow)，具有扩张冠状动脉、抗氧化、保护心肌、降血压、免疫抑制和脑保护等多种药理学功效。同时，红花黄色素还是一种毒性极低，着色力强，色调稳定的天然色素，具有色泽艳丽，耐高压、耐低温、耐酸、耐还原和耐微生物等特点。红花黄色素主要由三种水溶性成份组成：羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow-A，以下简称为HSYA)、红花黄色素B和红花黄色素C。其中，HSYA的含量最高，是红花最有效的水溶性成分，具有扩张冠状动脉、改善心肌缺血、降血压、保护脊髓出血/再灌注损伤、抗凝、抗血小板的聚集和血管再通作用；能有效缓解不稳定性心绞痛(UA)症状，降低纤维蛋白原浓度，清除自由基，控制心绞痛的发作及向心肌梗死的转化，抗疲劳及耐缺氧等。由于红花黄色素(包括HSYA)属于查尔酮类衍生物，其稳定性易受温度、相对湿度、光照和pH等影响。因此，在提取、分离、纯化、干燥和制剂的过程中均需关注稳定性的问题。研究发现，羟基红花黄色素A干粉受热时，温度不应高于50℃。目前一些关于从中药红花中提取分离羟基红花黄色素A的研究，如CN102702150采用超声法提取，再经柱层析分离精制及冷冻干燥，制备得到羟基红花黄色素A干粉的方法，但该方法采用的超声法对设备的要求高、噪音污染大，不易于工业化生产。CN101215307A公开了一种HSYA的制备方法，其中包括水提取(40～90℃)，大孔吸附树脂(AB-8型或H103型)或氢键键合型材料(聚酰胺)柱层析，非极性反相材料(MDS)柱层析，冷冻干燥等步骤。然而，该方法中纯化步骤采用的反相填料MDS价格昂贵，且再生次数及使用寿命有限；对设备要求也较高，至少应能加压洗脱，常规柱层析设备无法达到要求，不易于工业实际生产。此外，提取温度选定40～90℃，因HSYA具有热不稳定性，温度越高稳定性越低，而收率也会越低。另外，由于羟基红花黄色素A的稳定性受温度影响较大，现有技术中提取、纯化工艺处理时间长，普遍纯度和收率较低。例如，从食品药品检定研究院获得的药品标准物质羟基红花黄色素A的标准品的纯度仅在92％左右(参考药品标准物质使用说明书，批号111637-201810的含量为93.1％；批号111637-201609的含量为91.9％)。在此基础上进一步提高纯度异常困难。目前从红花中提取HSYA的方法普遍存在操作步骤繁琐，成本高昂，不易于实现工业化生产；并且制得的HSYA纯度低或收率低，稳定性差等问题。
目前，本领域亟需开发一种能够快速、低能耗、低成本、高纯度、收率高、安全性高和易于工业化制备羟基红花黄色素A的方法。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种羟基红花黄色素A的制备方法，本发明的制备方法快速、低能耗、低成本、高纯度、收率高、安全性高和易于工业化生产，制备的羟基红花黄色素A的纯度在98％以上，收率80％左右。
具体的，本发明首先提供羟基红花黄色素A的制备方法，包括：
1)提取：将红花药材与碱水溶液混合，浸泡得红花提取物碱水溶液，调节pH至酸性，得到红花提取物酸水溶液；
2)超滤分离：将所述红花提取物酸水溶液进行超滤处理，得到超滤液；
3)柱层析分离：取所述超滤液进行柱层析分离处理，浓缩，得到红花提取物浓缩液；
4)纯化：将所述红花提取物浓缩液进行纯化处理，得到红花提取物纯化液；
5)干燥：将所述红花提取物纯化液进行干燥处理，得到羟基红花黄色素A。
本发明发现，本发明提供的方法从红花中制备高纯度HSYA，制备的羟基红花黄色素A的纯度在98％以上，收率80％左右，相对于羟基红花黄色素A的标准品，本发明制备的羟基红花黄色素A的纯度大幅度提高，取得了预料不到的效果；同时本发明的制备方法快速、低能耗、低成本、高纯度、收率高、安全性高和易于工业化生产。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，所述碱水溶液的pH为8.0～8.4，所述碱水溶液的量优选为红花药材的10～15倍量。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，所述碱水溶液选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸氢钠和碳酸氢钙中的一种或多种的水溶液，优选为碳酸氢钠水溶液；更优选的，所述碱水溶液的浓度为0.01～0.2mol/L优选0.1mol/L，pH为8.30～8.33。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，步骤1)中，向所述红花提取物碱水溶液中加入酸，调节pH至4～6，优选为4.5；优选的，所述酸选自盐酸、甲酸、磷酸和醋酸中的一种或多种，优选为盐酸。
本发明方法中红花药材采用碱水溶液(pH调至8.0～8.4)温浸提取的好处在于，HSYA属于查尔酮类化合物显酸性，在碱水溶液中提取率更高；且需要的提取温度更低，更有利于防止HSYA遇热发生氧化或者分解。但pH不宜调至过高，且提取应当天完成。提取液过滤后再调至酸性(pH为4～6)的好处在于在酸性条件下更有利于提取液的长时间储存。
根据本发明提供的优选实施方式中，加入10～15倍量(优选12倍量)碱水溶液(pH为8.0～8.4)，更优选加入0.1mol/L碳酸氢钠水溶液(pH为8.30～8.33)，室温浸泡1～4h(优选2h)，35～45℃(优选40℃)提取0.5～1.5h(优选1h)(缓慢搅拌)，过滤。药材中再加入10～15倍量0.01～0.2mol/L碱水溶液(pH为8.0～8.4)，35～45℃提取0.5～1.5h(缓慢搅拌)。使用酸将所得到的红花提取物碱水溶液调pH，优选用盐酸、甲酸、磷酸或者醋酸，更优选盐酸调pH至4～6，更优选调pH至4.5，得到红花提取物酸水溶液。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，步骤2)中，所用超滤膜的截留分子量为3000～8000D，优选为5000D；优选的，所述超滤膜包括聚四氟乙烯膜、醋酸纤维膜、磺化聚醚砜膜、聚醚砜膜、聚丙烯腈膜和聚酰胺膜中的一种或多种，优选为聚四氟乙烯膜。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，还包括在所述超滤处理后将所得超滤液进行纳滤处理，所用纳滤膜的截留分子量为150～500D，优选为150～300D。本发明中，提取液经过滤并酸化后采用截留分子量3000～8000D的超滤膜超滤，以去除鞣质、大分子蛋白、多糖、细菌内毒素等杂质，很好的保留了有效成份；然后进一步采用截留分子量150～500D的纳滤膜纳滤，去除效果更佳同时还达到浓缩、除盐的目的。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，所述纳滤膜选自磺化聚醚砜复合纳滤膜、聚酰胺类复合纳滤膜、聚哌嗪酰胺类复合纳滤膜、混合型复合纳滤膜、醋酸纤维素类纳滤膜和荷电纳滤膜中的一种或多种，优选为磺化聚醚砜复合纳滤膜。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，步骤3)中，所述柱层析为聚酰胺柱层析；优选的，在所述聚酰胺柱层析中，红花提取物浓缩液与聚酰胺重量比为0.5:1～2:1，优选为1:1；柱床高径比为10:1～20:1，优选为15:1。本发明中，采用聚酰胺柱层析的方式进行HSYA的分离，好处还在于：一方面聚酰胺填料对黄酮类化合物(包括查尔酮类化合物)分离效果好；另一方面，聚酰胺填料的价格低廉、现有的聚酰胺生产工艺稳定，重复性良好，适合工业化生产。本发明还对红花提取物浓缩液与聚酰胺重量比及柱床高径比进行优化，进一步提高了分离效果。
根据本发明提供的优选实施方式中，在进行聚酰胺柱层析时，先用去离子水以10～20mL/min(优选为15mL/min)的流速洗脱(水洗至流出液无Molish反应)，再用5～7个柱床体积(优选为6个柱床体积)的15～25％乙醇溶液以5～15mL/min的流速洗脱，更优选以20％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液。乙醇洗脱溶液经低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.16～1.20(优选为1.17)，得到红花提取物浓缩液。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，步骤4)中，所述纯化为尺寸排阻树脂柱层析，优选的，所述尺寸排阻树脂为Toyopearl HW-40系列或Toyopearl HW-50系列树脂，优选为Toyopearl HW-40S、Toyopearl HW-40F或Toyopearl HW-40C，更优选为Toyopearl HW-40S。
根据本发明，尺寸排阻层析(SEC)又称分子筛层析(MSC)，是根据物质尺寸大小的不同来进行分离。选用的尺寸排阻树脂(ToyoPearl HW系列，由乙烯醇和甲基丙烯酸酯共聚而成的半坚硬的球状体，因表面有许多羟基和醚键而具有亲水性)与葡聚糖凝胶具有类似甚至更佳(如Toyopearl HW-40S)的层析效果，但价格(如ToyoPearl HW-40F、ToyopearlHW-40S)仅约为葡聚糖凝胶(如Sephadex LH-20)的1/5左右，适合工业化生产。本发明发现，羟基红花黄色素A的制备中通过加碱使提取液碱化之后再酸化来制备高纯度和高收率的羟基红花黄色素A；并且应用纳滤，聚酰胺柱层析，尺寸排阻层析，冷冻干燥，通过上述工艺的组合，采用特定尺寸排阻层析进行HSYA的纯化，得到的HSYA纯度很高，达98％以上。
根据本发明提供的优选实施方式中，在使用尺寸排阻树脂柱层析进行纯化时，红花提取物浓缩液与尺寸排阻树脂重量比为1:1～1:3优选1:2，柱床高径比为10:1～20:1优选15:1。上样完成后，采用4～6个柱床体积(优选为5个柱床体积)的10～20％乙醇溶液优选15％乙醇溶液，以5～15mL/min优选10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液。乙醇洗脱溶液经低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.13～1.16优选1.14，得红花提取物纯化液。
根据本发明提供的所述的羟基红花黄色素A的制备方法，步骤5)中，所述干燥为冷冻干燥。本发明中，选用冷冻干燥的方式，进一步降低HSYA损失率。
本发明的有益效果至少在于：本发明提供的制备工艺简单，制得HSYA纯度可达98％以上，收率80％左右。本发明使用的溶剂和试剂安全无毒，价格低廉，对环境无污染，本发明使用的分离和纯化材料成本较低，并可再生多次利用，适合工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中需要使用的附图作简单介绍，显而易见，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1制备的羟基红花黄色素A纯度检测的高效液相色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1
本实施例提供一种制备的羟基红花黄色素A的方法，具体步骤包括：取红花药材(HSYA含量1.9％)200g，采用中药磨粉机充分粉碎(过100目筛)。加入0.1mol/L碳酸氢钠水溶液(pH为8.31)2.4L，室温浸泡2h。40℃提取1h(缓慢搅拌)，过滤。药材中再加入0.1mol/L碳酸氢钠水溶液(pH为8.31)2.4L，40℃提取1h(缓慢搅拌)，过滤。合并滤液，用盐酸调pH至4.5得酸水液。酸水液经超滤(聚四氟乙烯超滤膜，截留分子量5000D)得超滤液；超滤液再经纳滤(磺化聚醚砜复合纳滤膜，截留分子量300D)浓缩，得浓缩液A。将浓缩液A以与聚酰胺(柱层析用聚酰胺粉，100～200目，按通用方法进行预处理)重量比1:1的比例上样吸附，柱床高径比15:1。先用去离子水以15mL/min的流速洗脱(水洗至流出液无Molish反应)，再用6个柱床体积的20％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液B，低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.17，得浓缩液C。将浓缩液C进行尺寸排阻(ToyoPearl HW-40S树脂)柱层析，上样浓缩液C与尺寸排阻树脂重量比为1:2，柱床高径比为15:1。上样完成后，采用5个柱床体积的15％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液D，再低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.14，得浓缩液E。浓缩液E经冷冻干燥，最终得到HSYA粉末2.97g(含量98.5％，收率77.8％)。
HPLC检测方法：液相色谱仪为Agilent HP1260；色谱柱为Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相为甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26:2:72)；流速为1.0mL/min；检测波长为403nm；柱温为25℃；进样体积10μL。理论塔板数按HSYA峰计算，不低于3000(图1)。
对比例1
具体步骤同实施例1，不同之处在于：取红花药材(HSYA含量1.9％)200g，采用中药磨粉机充分粉碎(过100目筛)。加入2.4L去离子水，室温浸泡2h，40℃提取1h(缓慢搅拌)，过滤。药材中再加入2.4L去离子水，40℃提取1h(缓慢搅拌)，过滤。合并滤液，用盐酸调pH至4.5得酸水液。其余步骤同实施例1。最终得到HSYA粉末2.67g(含量91.0％，收率68.2％)。
对比例2
具体步骤同实施例1，不同之处在于：第二次提取液过滤的滤液与第一次滤液合并后不用盐酸调pH至4.5。最终得到HSYA粉末2.72g(含量91.5％，收率65.5％)。
对比例3
具体步骤同实施例1，不同之处在于：将浓缩液A以与大孔吸附树脂重量比1:1的比例上样吸附(D101型大孔吸附树脂，天津允开树脂科技有限公司，按通用方法进行预处理)，柱床高径比15:1。先用去离子水以15mL/min的流速洗脱(水洗至流出液无Molish反应)，再用6个柱床体积的10％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液B，低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.14，得浓缩液C。其余步骤同实施例1。最终得到HSYA粉末2.91g(含量88.4％，收率67.7％)。
对比例4
具体步骤同实施例1，不同之处在于：浓缩液C的干燥方式采用喷雾干燥(喷雾口温度为80℃)，最终得到HSYA粉末2.69g(含量91.9％，收率67.9％)。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (5)
1.一种羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，包括：
1)提取：在红花药材中加入10～15倍量的0.1mol/L碳酸氢钠水溶液，pH为8.31，室温浸泡2h，40℃缓慢搅拌提取1h，过滤；药材中再加入10～15倍量0.1mol/L碳酸氢钠水溶液，pH为8.31，40℃缓慢搅拌提取1h，合并滤液，得到红花提取物碱水溶液；使用盐酸将所得到的红花提取物碱水溶液调pH至4.5，得到红花提取物酸水溶液；
2)超滤和纳滤分离：将所述红花提取物酸水溶液进行超滤处理，所用超滤膜的截留分子量为5000D，在所述超滤处理后将所得超滤液进行纳滤处理，所用纳滤膜的截留分子量为300D，得浓缩液A；
3)柱层析分离：取浓缩液A进行柱层析分离处理，浓缩，得到红花提取物浓缩液；所述柱层析为聚酰胺柱层析；在所述聚酰胺柱层析中，所述浓缩液A与聚酰胺重量比为1:1的比例上样吸附，柱床高径比为15:1；先用去离子水以15mL/min的流速洗脱，再用6个柱床体积的20％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液B，低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.17，得浓缩液C；
4)纯化：将浓缩液C进行尺寸排阻树脂柱层析，所述尺寸排阻树脂为Toyopearl HW-40S；上样浓缩液C与尺寸排阻树脂重量比为1:2，柱床高径比为15:1；上样完成后，采用5个柱床体积的15％乙醇溶液以10mL/min的流速洗脱，收集乙醇洗脱溶液D，再低压真空浓缩至60℃下相对密度为1.14，得浓缩液E；
5)干燥：将所述浓缩液E进行冷冻干燥，得到羟基红花黄色素A。
2.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述超滤膜包括聚四氟乙烯膜、醋酸纤维膜、磺化聚醚砜膜、聚醚砜膜、聚丙烯腈膜和聚酰胺膜中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述超滤膜为聚四氟乙烯膜。
4.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述纳滤膜选自磺化聚醚砜复合纳滤膜、聚酰胺类复合纳滤膜、聚哌嗪酰胺类复合纳滤膜、混合型复合纳滤膜、醋酸纤维素类纳滤膜和荷电纳滤膜中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述纳滤膜为磺化聚醚砜复合纳滤膜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111200000.2A CN113816933B (zh) | 2021-10-14 | 2021-10-14 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111200000.2A CN113816933B (zh) | 2021-10-14 | 2021-10-14 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113816933A CN113816933A (zh) | 2021-12-21 |
| CN113816933B true CN113816933B (zh) | 2024-02-09 |
Family
ID=78916729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111200000.2A Active CN113816933B (zh) | 2021-10-14 | 2021-10-14 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113816933B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101195647A (zh) * | 2006-12-06 | 2008-06-11 | 杨炜 | 羟基红花黄色素a及其制备方法和应用 |
| CN102702150A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-03 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法和应用 |
| CN103479702A (zh) * | 2012-06-14 | 2014-01-01 | 北京星昊医药股份有限公司 | 一种红花黄色素的提取方法及应用 |
| CN103980239A (zh) * | 2013-02-07 | 2014-08-13 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 羟基红花黄色素a钠及其生产方法和用途 |
| CN104109178A (zh) * | 2014-07-24 | 2014-10-22 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 |
-
2021
- 2021-10-14 CN CN202111200000.2A patent/CN113816933B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101195647A (zh) * | 2006-12-06 | 2008-06-11 | 杨炜 | 羟基红花黄色素a及其制备方法和应用 |
| CN103479702A (zh) * | 2012-06-14 | 2014-01-01 | 北京星昊医药股份有限公司 | 一种红花黄色素的提取方法及应用 |
| CN102702150A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-03 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法和应用 |
| CN103980239A (zh) * | 2013-02-07 | 2014-08-13 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 羟基红花黄色素a钠及其生产方法和用途 |
| CN104109178A (zh) * | 2014-07-24 | 2014-10-22 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 羟基红花黄色素A的提纯新工艺研究;张婕等;《河南化工》;20110610(第11期);第4页图1 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113816933A (zh) | 2021-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5484594A (en) | Process for preparing grapeseed extracts enriched in procyanidol oligomers | |
| JP2799734B2 (ja) | プロシアニドールオリゴマー画分、その製造方法、及びこれを含有する薬剤組成物 | |
| CN101912480B (zh) | 一种黑果枸杞原花青素提取物的制备方法 | |
| CN107898868B (zh) | 从枸杞中同步分离制备枸杞红素、枸杞多糖和枸杞黄酮的方法 | |
| CN102702150B (zh) | 一种羟基红花黄色素a的制备方法和应用 | |
| CN108689852B (zh) | 一种从平卧菊三七中提取绿原酸和异绿原酸的方法 | |
| JP2010516750A (ja) | オリーブからの抽出物又はオリーブ・オイルの抽出後の残留物を含む固体成分からヒドロキティロソルを生成するプロセスと装置 | |
| US6479081B2 (en) | Method for obtaining grape tannin, resulting tannin and uses | |
| CN113648834B (zh) | 一种陶瓷膜及其制备方法与应用 | |
| CN108690099A (zh) | 一种从黑果枸杞中提取分离原花青素的方法 | |
| CN114288308A (zh) | 一种以四糖为主的透明质酸寡糖组合物及其制备方法和应用 | |
| CN110981921B (zh) | 一种从无花果同步提取多种有效成分的连续化方法 | |
| CN105053952B (zh) | 一种无苦涩味的陈皮提取物的加工工艺 | |
| CN112694541A (zh) | 一种黄蜀葵花多糖的温和脱色方法 | |
| CN113816933B (zh) | 一种羟基红花黄色素a的制备方法 | |
| CN110484587B (zh) | 一种提高萝卜花青素抗氧化性能的方法 | |
| CN108997359B (zh) | 一种从甜菊糖生产废渣中提取叶绿素的方法 | |
| US20220160740A1 (en) | Anthocyanin powder extract and process for production | |
| CN111187244B (zh) | 一种从芹菜中提取芹菜素的新方法 | |
| JPH0631208B2 (ja) | プロアントシアニジンの製造法 | |
| CN109678981B (zh) | 一种红花多糖的制备方法、产品及应用 | |
| CN113616564A (zh) | 一种从莲花中提取水溶性黄酮的方法 | |
| JP6527744B2 (ja) | ニンジン抽出物の製造方法 | |
| CN103655677A (zh) | 从地锦草里提取总黄酮的新方法 | |
| CN116622002B (zh) | 一种辣木叶提取物的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |