CN103655677A - 从地锦草里提取总黄酮的新方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域,涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草总黄酮的方法。其特点是:超临界CO2流体萃取技术在萃取过程中保持着药用植物的有效成分,萃取过程中不发生化学反应,安全性好,不仅萃取的效率高而且能耗较少,提高了生产效率也降低了费用成本。应用大孔吸附技术分离纯化总黄酮,分离效果明显,提取纯度高,可以得到含量30%以上的总黄酮半成品和含量95%以上的总黄酮终产品,克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
Description
技术领域:
本发明属于天然有机化学领域,涉及一种地锦草总黄酮的纯化方法,特别是涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
背景技术:
地锦草一年生匍匐草本。茎纤细,近基部分枝,带***,无毛。叶对生;叶柄极短;托叶线形,通常3裂;叶片长圆形,长4-10mm,宽4-6mm,先端钝圆,基部偏狭,边缘有细齿,两面无毛或疏生柔毛,绿色或淡红色。杯状花序单生于叶腋;总苞倒圆锥形,浅红色,顶端4裂,裂片长三角形;腺体4,长圆形,有白色花瓣状附属物;子房3室;花柱3,2裂。蒴果三棱状球形,光滑无毛;种子卵形,黑褐色,外被白色蜡粉,长约1.2mm,宽约0.7mm。花期6-10月,果实7月渐次成熟。主治:痢疾;泄泻;黄疸;咳血;吐血;尿血;便血;崩漏;乳汁不下;跌打肿痛及热毒疮疡。生态环境:生于平原、荒地、路旁及田间,为习见杂草。
地锦草含有三种黄酮甙,其中两个甙的甙元为山柰酚(kaempferol),另一个甙的甙元为槲皮素(quercetin)。还含香豆精类成分:东莨菪素(scopoletin),伞形花内酯(umbelliferone),阿牙潘泽兰内酯(ayapin)。又含棕榈酸(palmitic acid),没食子酸(Gallic acid),没食子酸甲酯(methylgallate)和内消旋肌醇(mesoinositol)。近年来,人们发现天然植物地锦草中含有大量的总黄酮,由于原料地锦草来源较广,从中提取总黄酮已取得了可喜进展。目前国内对总黄酮的提取方法主要是微波逆流提取或甲醇制备工艺,其工艺主要为干品粉碎后用甲醇浸泡过夜,在用布氏滤斗过滤,提取4次,合并滤液,最后旋转蒸发、减压浓缩、喷雾干燥得总黄酮,所用的提取分离方法其效果远远不如超临界CO2流体萃取后进行大孔吸附树脂分离的效果。
发明内容:
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点,提供一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干地锦草粉碎,加入到CO2超临界萃取器中,用乙醇作为夹带剂,萃取压力为20MPa~40MPa,温度为50℃~60℃,萃取时间100min~140min,得萃取物;
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0~4.0,静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物;
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附;
(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液;
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得总黄酮半成品,其含量为在30%以上;
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱,并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液,减压浓缩,回收溶剂;
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶,分离结晶,洗涤,干燥精制得总黄酮,其含量在95%以上。
所述步骤(1)中,地锦草粉碎过80~100目筛;
所述步骤(3)中,所用的大孔吸附树脂为D101型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种,吸附为静态吸附或动态吸附。
本发明应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏,更能确保其中热敏性,易氧化物质不被破坏;还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化;大孔吸附技术分离纯化总黄酮,对总黄酮的吸附选择性良好,吸附快解析也快,吸附容量较大;提取方便快捷,原料来源丰富,生产成本低廉,分离效果明显,提取纯度高,可以得到含量35%以上的总黄酮半成品和含量95%以上的总黄酮终产品,克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的特点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂,不容于酸、碱及有机媒,对有机物选择性较好,不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响,可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附总黄酮,吸附快、解析也快,吸附容量较大。
具体实施方式:
实施案例1:一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将1000g干地锦草粉碎后过80目筛,加入到CO2超临界萃取器中,用乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%,萃取压力为20MPa,温度为55℃,CO2流量为2mg/g生药·min,萃取时间100min,得萃取物;
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0,静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物;
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附,所用的大孔树脂为HPD400型树脂;
(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液;
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得总黄酮半成品,其含量为30.2%;
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱,并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液,减压浓缩,回收溶剂;
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶,分离结晶,洗涤,干燥精制得总黄酮0.169g,其含量在97.2%。
实施案例2:一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将1000g干地锦草粉碎后过90目筛,加入到CO2超临界萃取器中,用乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%,萃取压力为30MPa,温度为55℃,CO2流量为2mg/g生药·min,萃取时间120min,得萃取物;
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.8,静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物;
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附,所用的大孔树脂为D101型树脂;
(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液;
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得总黄酮半成品,其含量为31.5%;
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱,并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液,减压浓缩,回收溶剂;
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶,分离结晶,洗涤,干燥精制得总黄酮0.197g,其含量在96.6%。
实施案例3:一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将1000g干地锦草粉碎后过100目筛,加入到CO2超临界萃取器中,用乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%,萃取压力为40MPa,温度为60℃,CO2流量为3mg/g生药·min,萃取时间140min,得萃取物;
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为4.0,静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物;
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附,所用的大孔树脂为AB-8H型树脂;
(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液;
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得总黄酮半成品,其含量为33.7%;
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱,并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液,减压浓缩,回收溶剂;
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶,分离结晶,洗涤,干燥精制得总黄酮0.186g,其含量在98.3%。
Claims (3)
1.一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干地锦草粉碎,加入到CO2超临界萃取器中,用乙醇作为夹带剂,萃取压力为20MPa~40MPa,温度为50℃~60℃,萃取时间100min~140min,得萃取物;
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0~4.0,静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物;
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附;
(4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液;
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得总黄酮半成品,其含量为在30%以上;
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱,并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集总黄酮各阶段洗脱液,减压浓缩,回收溶剂;
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶,分离结晶,洗涤,干燥精制得总黄酮,其含量在95%以上。
所述步骤(1)中,干地锦草粉碎过80~100目筛;
所述步骤(3)中,所用的大孔吸附树脂为D101型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种,吸附为静态吸附或动态吸附。
2.根据权利要求3所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其特征是:所述的步骤(1)中,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%~6%。
3.根据权利要求4所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法,其特征是:所述的步骤(7)中,浓缩液结晶所用的溶剂为无水乙醇。
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