CN103655677A - 从地锦草里提取总黄酮的新方法 - Google Patents

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万莉
姚德坤
张亚红
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Abstract

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草总黄酮的方法。其特点是：超临界CO2流体萃取技术在萃取过程中保持着药用植物的有效成分，萃取过程中不发生化学反应，安全性好，不仅萃取的效率高而且能耗较少，提高了生产效率也降低了费用成本。应用大孔吸附技术分离纯化总黄酮，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30％以上的总黄酮半成品和含量95％以上的总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。

Description

从地锦草里提取总黄酮的新方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种地锦草总黄酮的纯化方法，特别是涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
背景技术：
地锦草一年生匍匐草本。茎纤细，近基部分枝，带***，无毛。叶对生；叶柄极短；托叶线形，通常3裂；叶片长圆形，长4-10mm，宽4-6mm，先端钝圆，基部偏狭，边缘有细齿，两面无毛或疏生柔毛，绿色或淡红色。杯状花序单生于叶腋；总苞倒圆锥形，浅红色，顶端4裂，裂片长三角形；腺体4，长圆形，有白色花瓣状附属物；子房3室；花柱3，2裂。蒴果三棱状球形，光滑无毛；种子卵形，黑褐色，外被白色蜡粉，长约1.2mm，宽约0.7mm。花期6-10月，果实7月渐次成熟。主治：痢疾；泄泻；黄疸；咳血；吐血；尿血；便血；崩漏；乳汁不下；跌打肿痛及热毒疮疡。生态环境：生于平原、荒地、路旁及田间，为习见杂草。
地锦草含有三种黄酮甙，其中两个甙的甙元为山柰酚(kaempferol)，另一个甙的甙元为槲皮素(quercetin)。还含香豆精类成分：东莨菪素(scopoletin)，伞形花内酯(umbelliferone)，阿牙潘泽兰内酯(ayapin)。又含棕榈酸(palmitic acid)，没食子酸(Gallic acid)，没食子酸甲酯(methylgallate)和内消旋肌醇(mesoinositol)。近年来，人们发现天然植物地锦草中含有大量的总黄酮，由于原料地锦草来源较广，从中提取总黄酮已取得了可喜进展。目前国内对总黄酮的提取方法主要是微波逆流提取或甲醇制备工艺，其工艺主要为干品粉碎后用甲醇浸泡过夜，在用布氏滤斗过滤，提取4次，合并滤液，最后旋转蒸发、减压浓缩、喷雾干燥得总黄酮，所用的提取分离方法其效果远远不如超临界CO2流体萃取后进行大孔吸附树脂分离的效果。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下：
(1)将干地锦草粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(4)用40％、50％、60％、70％、80％、90％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为在30％以上；
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮，其含量在95％以上。
所述步骤(1)中，地锦草粉碎过80～100目筛；
所述步骤(3)中，所用的大孔吸附树脂为D101型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
本发明应用超临界CO2流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化；大孔吸附技术分离纯化总黄酮，对总黄酮的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的总黄酮半成品和含量95％以上的总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的特点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附总黄酮，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施案例1：一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下：
(1)将1000g干地锦草粉碎后过80目筛，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3％，萃取压力为20MPa，温度为55℃，CO2流量为2mg/g生药·min，萃取时间100min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为HPD400型树脂；
(4)用40％、50％、60％、70％、80％、90％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为30.2％；
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.169g，其含量在97.2％。
实施案例2：一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下：
(1)将1000g干地锦草粉碎后过90目筛，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4％，萃取压力为30MPa，温度为55℃，CO2流量为2mg/g生药·min，萃取时间120min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.8，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为D101型树脂；
(4)用40％、50％、60％、70％、80％、90％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为31.5％；
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.197g，其含量在96.6％。
实施案例3：一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下：
(1)将1000g干地锦草粉碎后过100目筛，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6％，萃取压力为40MPa，温度为60℃，CO2流量为3mg／g生药·min，萃取时间140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为AB-8H型树脂；
(4)用40％、50％、60％、70％、80％、90％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为33.7％；
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.186g，其含量在98.3％。

Claims (3)

1.一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下：
(1)将干地锦草粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa～40MPa，温度为50℃～60℃，萃取时间100min～140min，得萃取物；
(2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0～4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
(3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(4)用40％、50％、60％、70％、80％、90％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
(5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为在30％以上；
(6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮∶甲醇以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮，其含量在95％以上。
所述步骤(1)中，干地锦草粉碎过80～100目筛；
所述步骤(3)中，所用的大孔吸附树脂为D101型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
2.根据权利要求3所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3％～6％。
3.根据权利要求4所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其特征是：所述的步骤(7)中，浓缩液结晶所用的溶剂为无水乙醇。
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