CN104109178A - 一种羟基红花黄色素a的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，涉及一种中药红花药用成分的纯化制备技术，具体是涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法。本发明提供的羟基红花黄色素A的纯化方法，采用大孔吸附树脂纯化，水或者低浓度醇洗脱，最终得到的羟基红花黄色素A纯度超过99％，收率超过80％。本方法操作简单，成本低，产物纯度高，收率高，适用于羟基红花黄色素A的大量工业生产制备。

Description

一种羟基红花黄色素A的制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种中药红花药用成分的纯化制备技术，具体是涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法。

背景技术

中药红花来源于菊科植物Carthamus tinctorious L.的干燥花，性辛、温，具有活血通经散瘀止痛的功效。现代药理学研究表明，红花的主要活性组分集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素为黄酮类化合物，具有扩张冠状动脉、抗氧化、抗炎等功效，同时其还是一种血小板活化因子抑制剂，可抑制血栓的形成，用于心脑血管疾病的治疗。进一步的研究表明，红花黄色素是三种水溶性成分的混合物：羟基红花黄色素A、红花黄色素B和红花黄色素C，其中羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow-A)的含量最高，为药典规定的红花品质元素，是红花药理功效的最有效水溶性成分，其结构式如下：

鉴于红花黄色素类化合物结构相似，且均具有很强的水溶性，羟基红花黄色素A纯品的制备工艺较为繁琐且成本较高，国内研究一直没有取得满意的成果，普遍存在提取工艺耗时长、能耗高、收率低等问题。中国专利(公开号：CN101195647A)采用大孔吸附树脂对羟基红花黄色素A粗品进行初步纯化后，再使用凝胶树脂进一步纯化，得到的样品纯度可达99％以上，然而，该工艺中使用的葡聚糖凝胶树脂价格昂贵，同时其收率仅达到50％，处理周期长且繁杂，应用难度大，不易应用于大规模的工业生产中。中国专利(公开号：CN102127124A)采用高速逆流色谱纯化羟基红花黄色素A，得到的样品纯度可达97％。然而，高速逆流色谱仪器价格高昂，且每次只能制备少量样品，无法满足药物开发对产品的大批量需求。

基于上述原因，本发明人在长期的研究与实践中开发了羟基红花黄色素A的制备方法，该方法得到的产物纯度高、操作简单，能满足药物开发，特别是满足注射制剂原料药的需求，开发前景广阔。

发明内容

为克服以上问题，本发明提供一种工艺合理，操作简单，收率高，生产成本低，适于工业化生产的羟基红花黄色素A制备方法。

一种羟基红花黄色素A制备方法，包括如下步骤：

1)以红花提取液或羟基红花黄色素A粗品的溶液为原料，调节pH值至6～9作为上样液；

2)将上样液加入大孔吸附树脂柱，以水或低浓度醇作为洗脱液洗脱，收集流出液；

3)浓缩干燥。

优选的，步骤1)中的pH值调节过程，通过加入氢氧化钠溶液进行调节pH值。加入氢氧化钠溶液的量依据原料而定，优选氢氧化钠溶液的浓度为2M。

优选的，步骤1)中所述的原料的pH值调节为7～9，更优选为9。

优选的，步骤2)中所述的上样液与树脂重量比为1～2:1。

优选的，步骤2)中所述的大孔吸附树脂柱高径比为5～10:1。

优选的，步骤2)中所述的上样流速为1～5bV/h，更优选为2～3bV/h，最优选为2～2.5bV/h。

优选的，步骤2)中所述的洗脱液为去离子水或蒸馏水。

优选的，步骤2)中所述的洗脱液为低浓度的甲醇或乙醇，更优选为0～15％甲醇或0～10％乙醇。

优选的，步骤2)中所述的洗脱液洗脱流速为1～5bV/h，更优选为2～3bV/h。

更优选的，具体包括如下步骤：

1)取红花药材，加入10％乙醇，40℃超声提取两次，每次1h，提取液过滤，合并滤液，浓缩，用2M氢氧化钠调节浓缩液至pH＝9；

2)以上样液与树脂重量比1:1的比例上大孔吸附树脂柱吸附，大孔吸附树脂柱高径比10:1，上样流速为2bV/h，上样吸附后，采用去离子水洗脱，洗脱流速为2bV/h，收集流出液，HPLC检测流出液，合并纯度超过99％的流出液；

3)低压真空浓缩、冷冻干燥(或喷雾干燥)，最终得到高纯度的羟基红花黄色素A粉末。

羟基红花黄色素A粗品来源于市售或依据现有技术中的提取方法制备得到，红花提取液可参考以下方法得到：称取干燥红花粉末，加入10倍量的20％乙醇，维持提取温度为40摄氏度，超声提取1小时，过滤收集滤液即得红花提取液。

本发明的发明人意外发现，当上样液的pH调节至6～9时，有效解决了背景技术中现有技术存在的弊端，最终在不降低产率的情况下，仍然得到羟基红花黄色素A的纯度超过99％，在本发明对其他纯化条件进行优化后，收率能够超过80％。

附图说明

图1是实施例1得到的羟基红花黄色素A粉末的高效液相图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

下列实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中所需要的材料或试剂，如无特殊说明均为市场购得。

实施例1：

取红花药材100g(羟基红花黄色素A含量1.7％)，加入10％乙醇1L，40℃超声提取两次，每次1h，提取液过滤，合并滤液，浓缩至1L，采用2M氢氧化钠调节溶液至pH＝9，以上样液与树脂重量比1:1的比例上大孔吸附树脂柱吸附(大孔吸附树脂柱规格及型号：1000mL，微球1号，上海华震科技有限公司)，大孔吸附树脂柱高径比10:1，上样流速2bV/h。上样吸附后，采用去离子水作为洗脱液洗脱，洗脱流速2bV/h，收集流出液，HPLC检测流出液，合并纯度超过99％的流出液，低压真空浓缩、冷冻干燥，最终得到99.3％的羟基红花黄色素A粉末1.51g(收率88.8％)。

HPLC检测方法：选用C18色谱柱，安捷伦HP1260液相色谱仪，流动相甲醇：乙腈：0.7％磷酸＝26:2:72，检测波长403nm，进样体积10μL。

实施例2：

纯化用大孔吸附树脂柱高径比调节至8:1，其余同实施例1，最终得到99.3％的羟基红花黄色素A1.48g。(收率87.1％)

实施例3：

纯化用大孔吸附树脂柱高径比调节至5:1，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.40g。(收率82.4％)

对比例1：

纯化用大孔吸附树脂柱高径比调节至4:1，其余同实施例1，最终得到99.0％的羟基红花黄色素A1.28g。(收率75.3％)

对比例2：

纯化用大孔吸附树脂柱高径比调节至15:1，其余同实施例1，最终得到99.0％的羟基红花黄色素A1.39g。(收率81.8％)

实施例4：

纯化用大孔吸附树脂柱高径比调节至5:1，最后的干燥步骤采用喷雾干燥法，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.36g。(收率80.0％)

实施例5：

干燥步骤采用喷雾干燥法，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.42g。(收率83.5％)

实施例6：

纯化用大孔吸附树脂柱的树脂采用罗门哈斯树脂有限公司生产的XAD-2树脂，其余同实施例1，最终得到纯度99.0％的羟基红花黄色素A1.41g。(收率82.9％)

实施例7：

纯化用大孔吸附树脂柱的树脂采用安徽三星树脂有限公司生产的YPR-2树脂，其余同实施例1，最终得到纯度99.1％的羟基红花黄色素A1.37g。(收率80.6％)

实施例8：

纯化时调节红花提取浓缩液至pH＝6，其余同实施例1，最终得到纯度99.1％的羟基红花黄色素A1.39g。(收率81.8％)

实施例9：

纯化时调节红花提取浓缩液至pH＝8，其余同实施例1，最终得到纯度99.2％的羟基红花黄色素A1.44g。(收率84.7％)

对比例3：

纯化时调节红花提取浓缩液至pH＝5，其余同实施例1，最终得到99.1％的羟基红花黄色素A1.22g。(收率71.8％)

对比例4：

纯化时调节红花提取浓缩液至pH＝10，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A0.86g。(收率50.6％)

实施例10：

纯化时上样液与树脂重量比为2:1，其余同实施例1，最终得到纯度99.2％的羟基红花黄色素A1.53g。(收率90％)

对比例5：

纯化时上样液与树脂重量比为0.5:1，其余同实施例1，最终得到纯度99.0％的羟基红花黄色素A1.29g。(收率75.9％)

对比例6：

纯化时上样液与树脂重量比为2.5:1，其余同实施例1，最终得到纯度99.0％的羟基红花黄色素A1.16g。(收率68.2％)

实施例11：

洗脱液采用10％的甲醇，其余同实施例1，最终得到纯度99.2％的羟基红花黄色素A1.39g。(收率81.8％)

实施例12：

洗脱液采用15％的甲醇，其余同实施例1，最终得到纯度99.3％的羟基红花黄色素A1.41g。(收率82.9％)

对比例7：

洗脱液采用20％的甲醇，其余同实施例1，最终得到纯度99.0％的羟基红花黄色素A1.30g。(收率76.5％)

实施例13：

洗脱液采用5％的乙醇，其余同实施例1，最终得到纯度99.2％的羟基红花黄色素A1.39g。(收率81.8％)

实施例14：

洗脱液采用10％的乙醇，其余同实施例1，最终得到纯度99.3％的羟基红花黄色素A1.40g。(收率82.4％)

对比例8：

洗脱液采用15％的乙醇，其余同实施例1，最终得到99.0％的羟基红花黄色素A1.28g。(收率75.0％)

实施例15：

上样流速改为5bV/h，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.43g。(收率84.1％)

实施例16：

上样流速改为1bV/h，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.44g。(收率84.7％)

对比例9：

上样流速改为6bV/h，其余同实施例1，最终得到99.1％的羟基红花黄色素A1.28g。(收率75.3％)

实施例17：

洗脱流速改为1bV/h，其余同实施例1，最终得到99.2％的羟基红花黄色素A1.45g。(收率85.3％)

实施例18：

洗脱流速改为5bV/h，其余同实施例1，最终得到99.1％的羟基红花黄色素A1.40g。(收率82.3％)

对比例10：

洗脱流速改为0.5bV/h，其余同实施例1，最终得到99.0％的羟基红花黄色素A1.28g。(收率75.3％)

对比例11：

洗脱流速改为6bV/h，其余同实施例1，最终得到99.0％的羟基红花黄色素A1.02g。(收率60.0％)

以上内容仅仅是对本发明工艺路线所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)以红花提取液或羟基红花黄色素A粗品的溶液为原料，调节pH值至6～9作为上样液；

2)将步骤1)的上样液加入大孔吸附树脂柱，以水或低浓度醇作为洗脱液洗脱，收集流出液；

3)浓缩干燥得到纯的羟基红花黄色素A。

2.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，步骤1)将原料的pH值调节为9。

3.根据权利要求1或2所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，步骤2)中，上样液与大孔吸附树脂柱的树脂重量比为1～2:1。

4.根据权利要求1-2任一所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的大孔吸附树脂柱高径比为5～10:1。

5.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述的上样流速为1～5bV/h。

6.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述的洗脱液为去离子水、蒸馏水，或者为低浓度的甲醇或乙醇。

7.根据权利要求6所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述的甲醇浓度为0～15％，所述的乙醇浓度为0～10％。

8.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，所述的洗脱流速为1～5bV/h。

9.根据权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

1)取红花药材，加入10％乙醇，40℃超声提取两次，每次1h，提取液过滤，合并滤液，浓缩，采用2M氢氧化钠调节浓缩液至pH＝9作为上样液；

2)上样液与树脂重量比1:1的比例上大孔吸附树脂柱吸附，大孔吸附树脂柱高径比10:1，上样流速为2bV/h，上柱吸附后，采用去离子水洗脱，洗脱流速为2bV/h，收集流出液，HPLC检测流出液，合并纯度超过99％的流出液；

3)低压真空浓缩、冷冻干燥，最终得到高纯度的羟基红花黄色素A粉末。