CN113660931A - 用于治疗皮肤癌的芳基苯胺和杂芳基苯胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于治疗有需要的受试者的皮肤癌的化合物及其药物组合物,其中所述化合物为式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)中的任一种：其中，X1、X2、X3、R1、R2、R2a、R13、R13a、R23、R23a、R23b、R33、R33a、R33b、R43、R43a、R51、R53、R53a、R53b、键“a”和下标n如本文所述。
Figure DDA0003170052880000011

Description

用于治疗皮肤癌的芳基苯胺和杂芳基苯胺化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年11月20日提交的编号为No.62/769,879的美国临时申请的优先权，其内容通过引用并入本文。
发明背景
鳞状细胞皮肤癌，又称皮肤鳞状细胞癌(cSCC)是与基底细胞癌、黑色素瘤并列的主要皮肤癌之一。日光暴露和免疫抑制是皮肤SCC的危险因素，其中慢性日光暴露是最强的环境危险因素。
绝大部分SCC都是皮肤上的SCC，和所有皮肤癌一样，都是紫外线暴露的结果。SCC通常发生在身体经常暴露在阳光下的部位；面部、耳朵、脖子、手或手臂。美国大约12％的男性和7％的女性在某个时间点发展为cSCC。虽然预后通常良好，但如果发生远处扩散，五年生存率约为34％。SCC代表约20％的非黑色素瘤皮肤癌，但由于其更明显的性质和生长速度，他们占所有最初表现头颈部癌症的90％。
不幸的是，实体器官移植受者(SOTRs)的免疫抑制会带来一些风险。这些风险包括非黑色素瘤皮肤癌的患病率增加，这是器官移植后发病的主要原因之一。在所有的皮肤恶性肿瘤中，cSCC是主要类型，与普通人群相比，SOTR的发病率增加了65-250倍。在高加索人的SOTR中，cSCCs约占皮肤癌的70％。截至2017年，生活在美国的实体器官移植接受者估计为35.5万人。上述3-8％的死亡率意味着，在这一组中，将有10,650-28,400名患者死于cSCC。
大多数鳞状细胞癌是通过手术切除的。皮肤科医生对SOTR进行常规筛查，以监测新的光化性角化病(AKs)和SCCs的出现，并通过手术去除。筛查主要基于临床检查，随后对可疑病灶进行活检组织学评估，然后通过刮除术和电干燥、冷冻手术、简单切除、激光和莫氏手术来手术切除。由于皮肤癌是移植患者最常见的癌症形式，而移植患者的cSCC侵袭性和致命性要大得多。即使在手术切除后，它们仍有局部复发的倾向，这意味着患者将倾向于进行多次且反复的手术来切除cSCC。
当侵袭性或高度侵袭性cSCC发生在头部和颈部时，手术治疗可产生深刻功能上、美容和心理社会影响，有时会导致眼睛、耳朵或鼻子的丧失。这可能需要进行重大的重建，并降低生活质量。此外，晚期癌症患者的生活质量受到重大影响，并且与晚期癌症治疗相关的费用也很高。对于未进展到晚期癌症的患者，疤痕、毁容和不能阻止新的cSCC的形成的多次重复手术，对生活质量也有显著影响。
光动力疗法是FDA批准的光化性角化病(AK)的治疗方法，也用于治疗cSCC。一项研究显示，在3个月的评估中，cSCC的完全治疗应答率为71.4％，3年的随访中为64％(n＝30)。好处是它可以安全地重复，光敏性本身有很少的轻微副作用，不排除进一步的辐射或手术，并且愈合的疤痕最小。主要的缺点是光敏性(可达6周)、疼痛、长期治愈率低于切除，以及成本。局部药物如咪喹莫特、5-氟尿嘧啶和巨大戟醇酯(ingenol mebutate)均可用于AKs的治疗，但没有一种药物被特别批准用于免疫抑制患者。分别有高达100％和97％的应用咪喹莫特和5-氟尿嘧啶的患者至少经历了1次从轻到重的不良事件；红斑、瘙痒和疼痛是常见的不良事件。
目前cSCC的治疗标准包括手术干预，包括莫氏手术。存在其他手术治疗可选项，如电手术和冷冻手术，但有一个需求是尽量减少疤痕治疗的方案。光动力疗法未被FDA批准用于cSCC。在复发性cSCC的情况下，这些方法都有问题，疤痕和毁容的影响可能成为更大的担忧。
FDA批准的唯一用于晚期cSCC的药物是西米普利单抗(cemiplimab),一种抗PD1抗体(Migden，Michael R.，新英格兰医学杂志(New England Journal of Medicine)，vol.379,no.4,2018,pp.341–351)。该药物是一类全身免疫疗法的一员，其中一些已被批准用于内脏或粘膜SCC。这些药物不仅不适合用于化学预防，而且由于PD-1在介导耐受性和移植物排斥风险升高方面的作用，它们不适合用于SOTRs。
阿维A素等维甲酸类药物用于cSCC的化学预防有争议，但有潜在的前景，但可引起显著的副作用，包括粘膜皮肤干燥、脱发、肌肉骨骼疼痛、甘油三酯和胆固醇水平升高，而限制了其全身应用。
晚期SCC缺乏有效的化疗或靶向疗法，目前尚无标准的cSCC靶向治疗方法。皮肤鳞状细胞癌是所有人类癌症中最易发生和临床特征良好的典型进展序列，从明显的癌前病变，光化性角化病(AK)，到原位鳞状细胞癌，再到浸润性癌。因此，它是建立SCC分子靶向癌症化学预防范式的理想模型，有可能解决对靶向治疗的重要未满足的医学需求。
口服曲美替尼(2mg/kg/天)和帕博西尼(cobimetinib)(10mg/kg/天)已被证明能有效地减少UV驱动cSCC无毛小鼠模型中的皮肤肿瘤，该模型使用慢性、低剂量、模拟太阳紫外线。然而，口服MEK抑制剂有显著的副作用，包括左室射血分数降低、肺炎、肾功能衰竭、腹泻和皮疹。参见Adelmann,C.H.等人，皮肤病学研究杂志(Journal of InvestigativeDermatology)，vol.136,no.9,2016,pp.1920-1924。
最后，SOTR的数量继续以每年3.6％的速度增长，随着手术成功率的提高，外科医生继续为越来越年轻的病人进行移植手术。在这一具有挑战性的人群中，不断增长的人口和免疫抑制治疗时间的延长将继续增加cSCC的发病率。鉴于对患者的巨大负担、晚期病例的高护理费用以及日益增长的高危人群，显然需要有效的化学预防剂来治疗cSCC，同时最大限度地减少口服MEK抑制剂所见的全身副作用。
发明内容
在一方面中，本文提供了一种治疗或预防皮肤癌的方法。该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的选自下组的化合物：式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)
Figure BDA0003170052860000031
或其N-氧化物、立体异构体、立体异构体的混合物和/或其药学上可接受的盐，
其中：
X1为–CR13b或N；X2为C1-C6烷基；X3为S或O；
下标n为0到2的整数；
键“a”为单键或双键；
R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；
R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R2a为卤素或C1-C6烷基；
R4、R5和R5b各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中各C3-C8环烷基和杂环烷基未被取代或被1-6个R6取代；
R5a为氢或C1-6烷基；
各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基；
R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基；
R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46；
R43a为氢、卤素、C1-C6烷基；或
R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-，它们各自为未被取代的或被一个或两个R49取代的；
R46为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C8环烷基或杂环烷基；
R48和R48a各自独立地为氢或C1-C6烷基；和
各R49独立地为C1-C6烷基、C3-C8环烷基或C3-C8环烷基-C1-C6烷基；
R51为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基、R7-C(O)-C1-C6烷基或–OR54，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未被取代的或被1-6个R6取代的；
各R53独立地为卤素或C1-C6烷基；
R53a和R53b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；和
R54为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的。
附图简要说明
图1-4示出了小鼠在基线、治疗开始和治疗结束时的照片，使用实施例1中描述的方案，使用含化合物2.003(按制剂重量计算，分别为0.5％、0.15％和0.01％)的局部凝胶制剂与仅用溶媒的局部制剂相比。
图5示出了使用实施例1中描述的方案，使用含化合物2.003的局部凝胶制剂(按制剂重量计算，分别为0.5％、0.15％和0.01％)与仅用溶媒的局部制剂相比，从治疗开始到结束，每只小鼠的新肿瘤数量。
图6示出了使用实施例1中描述的方案，使用含化合物2.003(按制剂重量计算，分别为0.5％、0.15％和0.01％)的局部凝胶制剂与仅用溶媒的局部制剂相比，在治疗开始和治疗结束时，每只小鼠的肿瘤体积。
图7和8分别显示了用于制备式(Ia)化合物的合成方案I-1和方案I-2。
图9显示了用于制备式(Ib)化合物的合成方案I-3。
图10-14分别显示了用于制备式(II)化合物的合成方案II-1至II-5。
图15-16分别显示了用于制备式(IIIa)化合物的合成方案III-1和III-2。
图17显示了用于制备式(IVa)、(IVb)和(IVc)中任一化合物的合成方案IV-1。
图18显示了用于制备式(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一化合物的合成方案IV-2。
图19显示了用于制备式(IVa)化合物的合成方案IV-3。
图20-21分别显示了用于制备式(Va)化合物的合成方案V-1和V-2。
图22显示了用于制备式(Vb)化合物的合成方案V-3。
具体实施方式
I.通用
本文提供了使用化合物和包含该化合物的药物组合物来治疗皮肤癌，特别是皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的方法。
II.定义
本文所用的缩写具有其在化学和生物领域中常规意义。
在取代基由其常规化学式(从左向右书写)指定的情况下，它们等同地包括由从右到左书写的结构所得的取代基，例如-CH2O-意在包括-OCH2-。
“烷基”是指具有指定碳原子数(即C1-C6表示1至6个碳)的直链或支链的饱和、脂肪族基团。烷基可包括任意数量的碳，例如C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5、C1-C6、C1-C7、C1-C8、C1-C9、C1-C10、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C4-C5、C4-C6和C5-C6。例如，C1-C6烷基包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、戊基、异戊基、己基等。烷基也可指具有至多20个碳原子的烷基，例如但不限于庚基、辛基、壬基、癸基等。
“亚烷基”是指具有指定数量的碳(也就是说，C1-C6表示1到6个碳)的直链或支链饱和脂肪族基团，且连接至少两个其他基团，即二价烃基。与亚烷基连接的两个部分可与亚烷基的相同原子或不同原子连接。例如，直链亚烷基可以是二价基团-(CH2)n-，其中，n是1、2、3、4、5或6。代表性的亚烷基包括但不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、异亚丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲-丁基、亚戊基和亚己基。
“烯基”是指具有至少2个碳原子和至少一个双键且具有指定碳原子数(即C2-C6表示2到6个碳)的直链或支链烃。烯基可包括任意数量的碳，例如C2、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C3、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C4、C4-C5、C4-C5、C5、C5-C6和C6。烯基可以具有任何合适数量双键，包括但不限于1、2、3、4、5或更多。烯基的实例包括但不限于：乙烯基(vinyl)(乙烯基(ethenyl))、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、异戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基，或1,3,5-己三烯基。
“炔基”是指具有至少2个碳原子和至少一个三键且具有指定碳原子数(即C2-C6表示2到6个碳)的直链或支链烃。炔基可包括任意数量的碳，例如C2、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C3、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C4、C4-C5、C4-C6、C5、C5-C6和C6。炔基的实例包括但不限于：乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、丁二炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、异戊炔基、1,3-戊二炔基、1,4-戊二炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、1,3-己二炔基、1,4-己二炔基、1,5-己二炔基、2,4-己二炔基或1,3,5-己三炔基。
“环烷基”是指包含3-12个环原子或指定原子数的饱和或部分不饱和的、单环、稠合双环或桥接多环的环组件。环烷基可包括任意数量的碳，例如C3-C6、C4-C6、C5-C6、C3-C8、C4-C8、C5-C8、C6-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11和C3-C12。饱和单环环烷基环包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环辛基。饱和双环和多环环烷基环包括例如降冰片烷(norbornane)、[2.2.2]双环辛烷、十氢萘和金刚烷。环烷基也可以是部分不饱和的，在环中具有一个或多个双键或三键。代表性部分不饱和的环烷基包括但不限于：环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基(1,3-和1,4-异构体)、环庚烯基、环庚二烯基、环辛烯基、环辛二烯基(1,3-、1,4-和1,5-异构体)、降冰片烯基(norbornene)和降冰片二烯基(norbornadiene)。当环烷基是饱和单环C3-C8环烷基时，示例性基团包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
“环烷基烷基”是指具有烷基组成部分和环烷基组成部分的基团，其中烷基组成部分将环烷基组成部分连接到连接点。所述烷基组成部分如上定义，除了所述烷基组成部分是至少二价的(亚烷基)以连接到环烷基组成部分和连接到连接点。所述烷基组成部分可包括任意数量的碳，例如C1-C6、C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C4-C5、C4-C6和C5-C6。环烷基组成部分如上定义。示例性环烷基-烷基包括但不限于：环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基和环己基甲基。
“烷氧基”是指具有将烷基连接至连接点的氧原子的烷基：烷基-O-。烷氧基可以具有任何合适数目的碳原子，例如C1-C6。烷氧基包括，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、己氧基等。
“羟烷基”是指如上所述的烷基，其中至少一个氢原子被羟基取代。至于烷基，羟烷基可以具有任何合适数目的碳原子，例如C1-C6。示例性羟烷基包括但不限于：羟甲基、羟乙基(其中羟基在1-或2-位)、羟丙基(其中羟基在1-、2-或3-位)、羟基丁基(其中羟基在1-、2-、3-或4-位)、羟基戊基(其中羟基在1-、2-、3-、4-或5-位)、羟基己基(其中羟基在1-、2-、3-、4-、5-或6-位)、1,2-二羟乙基等。
“烷氧基烷基”是指具有烷基组成部分和烷氧基组成部分的基团，其中烷基组成部分将烷氧基组成部分连接到连接点。所述烷基组成部分如上定义，除了所述烷基组成部分是至少二价的(亚烷基)以连接到烷氧基组成部分和连接到连接点。所述烷基成分可包括任意数量的碳，例如C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5、C1-C6、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C3-C4、C3-C5、C3-C6、C4-C5、C4-C6和C5-C6。烷氧基组成部分如上定义。烷氧基-烷基的实例包括但不限于：2-乙氧基-乙基和甲氧基甲基。
“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴或碘。
“卤代烷基”是指如上定义的烷基，其中一些或全部氢原子被卤素原子取代。至于烷基，卤代烷基可以具有任何合适数目碳原子，例如C1-C6。例如，卤代烷基包括：三氟甲基、氟代甲基、2,2,2-三氟乙基等。在一些情况下，术语“全氟”可用于定义其中所有氢被氟取代的化合物或基团。例如，全氟甲基是指1,1,1-三氟甲基。
除非另有说明，如本文所用“氨基”是指-NH2。
除非另有说明，如本文所用“烷基氨基”是指-NHR基团，其中R是如本文所定义的烷基，或其N-氧化物衍生物。在一些实施方式中，烷基氨基是C1-C6-烷基-氨基。在一些实施方式中，C1-C6-烷基-氨基是甲氨基、乙氨基、正、异-丙氨基、正、异、叔-丁基氨基或甲基氨基-N-氧化物等等。
除非另有说明，如本文所用“二烷基氨基”是指NR’R基团，其中R和R’是如本文所定义的烷基，或其N-氧化物衍生物。在一些实施方式中，二烷基氨基是二-C1-C6烷基-氨基。在一些实施方式中，二-C1-C6烷基-氨基是二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基或二甲基氨基-N-氧化物等等。
除非另有说明，如本文所用“氨基烷基”是指被一个或两个NH2取代的烷基。在一些实施方式中，氨基烷基是氨基-C1-C6-烷基。在一些实施方式中，氨基烷基为氨基-C1-C6烷基。
除非另有说明，如本文所用“烷基氨基烷基”是指被一个或两个-NH(烷基)基团取代的烷基。在一些实施方式中，烷基氨基烷基是C1-C6-烷基-氨基-C1-C6-烷基。
除非另有说明，如本文所用“二烷基氨基烷基”是指被一个或两个-N(烷基)2基团取代的烷基。在一些实施方式中，二烷基氨基烷基是二-C1-C6烷基-氨基-C1-C6烷基。
除非另有说明，如本文所用“羟基氨基”是指-NHOH。
除非另有说明，如本文所用“N-烷基羟基氨基”是指-NHOH的氨氢被如本文所定义的烷基取代。在一些实施方式中，N-烷基羟基氨基是N-C1-C6烷基-羟基氨基。在一些实施方式中，N-C1-C6烷基-羟基氨基是N-甲基羟基氨基、N-乙基羟基氨基、N-(正-、异-丙基)-羟基氨基或N-(正-、异-、叔-丁基)羟基氨基等。
“杂环烷基”是指具有3至12个环成员和1至4个N、O和S杂原子的饱和环体系。杂原子也可以被氧化，例如但不限于，-S(O)-和-S(O)2-。杂环烷基可以包括任意数目的环原子，例如，3至6、4至6、5至6、3至8、4至8、5至8、6至8、3至9、3至10、3至11或3至12个环成员。任何合适数目的杂原子可以包含在杂环烷基中，例如1、2、3或4、或1至2、1至3、1至4、2至3、2至4或3至4。杂环烷基可以包括，诸如，吖丙啶基(aziridinyl)、氮杂环丁基(azetidinyl)、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚基(azepanyl)、氮杂环辛基(azocanyl)、奎宁环基、吡唑烷基、咪唑烷基、哌嗪基(1,2-、1,3-和1,4-异构体)、环氧乙烷基(oxiranyl)、氧杂环丁基、四氢呋喃基、氧杂环己基(oxanyl)(四氢吡喃基)、氧杂环庚基(oxepanyl)、环硫乙烷基、硫杂环丁基、硫杂环戊基(四氢噻吩基)、硫杂环己基(thianyl)(四氢噻喃基)、恶唑烷基、异恶唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、二氧戊环基、二硫戊环基、吗啉基、硫代吗啉基、二恶烷基或二噻烷基。杂环烷基也可以稠合到芳族或非芳族环体系以形成包括但不限于吲哚啉的成员。杂环烷基可以是未取代的或取代的。例如，杂环烷基可以被C1-C6烷基或氧代基(＝O)等等取代。
杂环烷基可以通过环上的任何位置连接。例如，吖丙啶基可以是1-或2-吖丙啶基，氮杂环丁基可以是1-或2-氮杂环丁基，吡咯烷基可以是1-、2-或3-吡咯烷基，哌啶基可以是1-、2-、3-或4-哌啶基，吡唑烷基可以是1-、2-、3-或4-吡唑烷基，咪唑烷基可以是1-、2-、3-或4-咪唑烷基，哌嗪基可以是1-、2-、3-或4-哌嗪基，四氢呋喃基可以是1-或2-四氢呋喃基，恶唑烷基可以是2-、3-、4-或5-恶唑烷基，异恶唑烷基可以是2-、3-、4-或5-异恶唑烷基，噻唑烷基可以是2-、3-、4-或5-噻唑烷基，异噻唑烷基可以是2-、3-、4-或5-异噻唑烷基，以及吗啉基可以是2-、3-或4-吗啉基。
“N-连接杂环烷基”或“氮-连接杂环烷基”是指通过环上的N-位置连接的杂环烷基。例如，N-连接吖丙啶基是吖丙啶-1-基，N-连接氮杂环丁基是氮杂环丁-1-基，N-连接吡咯烷基是吡咯烷-1-基，N-连接哌啶基是哌啶-1-基，N-连接吡唑烷基是吡唑烷-1-基或吡唑烷-2-基，N-连接咪唑烷基可以是咪唑烷-1-基或咪唑烷-3-基，N-连接哌嗪基是哌嗪-1-基或哌嗪-4-基，N-连接恶唑烷基是恶唑烷-3-基，N-连接异恶唑烷基是异恶唑烷-2-基，N-连接噻唑烷基是噻唑烷-3-基，N-连接异噻唑烷基是异噻唑烷-2-基，以及N-连接吗啉基是4-吗啉基。
当杂环烷基包含3至8个环成员和1至3个杂原子时，代表性成员包括但不限于：吡咯烷基、哌啶基、四氢呋喃基、氧杂环己烷基、四氢噻吩基、硫杂环己基、吡唑烷基、咪唑烷基、哌嗪基、恶唑烷基、异恶唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二恶烷基和二噻烷基。杂环烷基也可以形成具有5至6个环成员和1至2个杂原子的环，代表性成员包括但不限于：吡咯烷基、哌啶基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、哌嗪基、恶唑烷基、异恶唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基和吗啉基。
“保护基团”是指使官能团对特定反应条件不活泼的化合物，但在随后的合成步骤中可移除，以使官能团恢复到其原始状态。这种保护基团对于本领域普通技术人员是公知的，并且包括在“有机合成中的保护基”第4版，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，John约翰威立国际出版公司，纽约，2006中公开的化合物，其全部内容通过引用并入本文。
“盐”是指本发明化合物的酸式盐或碱式盐。药学上可接受的盐的说明性实例是无机酸(盐酸、氢溴酸、磷酸等)盐、有机酸(乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸等)盐、季铵(甲基碘、乙基碘等)盐。应当理解，药学上可接受的盐是无毒的。关于合适的药学上可接受的盐的其他信息可以在雷明顿药学大全(Remington’s Pharmaceutical Sciences)(第17版，麦克出版公司(Mack Publishing Company)，宾夕法尼亚州伊斯顿，1985)中找到，其通过引用并入本文。
本发明的酸性化合物的药学上可接受的盐包括与碱形成的盐，即阳离子盐，例如碱金属和碱土金属盐，例如钠、锂、钾、钙、镁，以及铵盐，例如铵、三-甲基铵，二-乙基铵和三-(羟甲基)-甲基-铵盐。
类似地，酸加成盐，例如无机酸、有机羧酸和有机磺酸，例如盐酸、甲磺酸、马来酸的酸加成盐，也可能提供碱性基团(如吡啶基)，其构成结构的一部分。
化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。所述化合物的母体形式在某些物理性质上不同于其各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解性，但是出于本发明目的在其他方面盐等同于化合物的母体形式。
“异构体”是指具有相同化学式但在结构上可区分的化合物。本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体，非对映异构体，几何异构体，和单个异构体均旨在包括在本发明的范围内。
互变异构体是指平衡存在的两种或多种结构异构体中的一种，它们很容易从一种形式转化为另一种形式。
“溶剂化物”是指本文提供化合物或其盐，其进一步包括通过非共价分子间作用力结合的化学计量量或非化学计量量的溶剂。当溶剂是水时，溶剂化物是水合物。
“水合物”是指与至少一个水分子复合的化合物。“本发明的化合物可与1-10个水分子复合。
关于组合物，“基本上不含”或“基本上不存在”立体异构体是指组合物中包含至少85或90重量％，在一些实施方式中包含至少95％、98％、99％或100重量％化合物的指定立体异构体。在一些实施方式中，本文提供的方法和化合物中，所述化合物基本上不含立体异构体。
关于组合物，“分离的”是指包含至少85％、90％、95％、98％、99％至100重量％的特定化合物，剩余部分包含其它化学形态或立体异构体的组合物。
如本文所用，“组合物”是指包含特定的量的特定成分的产品，以及直接或间接地基于包含特定量的特定成分的组合的制造的任何产品。“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害。
“药学上可接受的赋形剂”是指辅助向对象施用活性剂和对象吸收的物质。可用于本发明的药用赋形剂包括但不限于：粘合剂、填料、崩解剂、润滑剂、包衣、甜味剂、调味剂和色素。本领域技术人员将认识到，其它药物赋形剂可用于本发明。
“IC50”是指特定测试化合物在测量响应的分析中达到最大该响应50％的抑制的量、浓度或剂量。
“抑制”、“抑制了”和“抑制剂”是指禁止特定作用或功能的化合物或禁止特定作用或功能的方法。
“给药”是指向对象口服给药、作为栓剂给药、局部(topical)接触、胃肠外、静脉内、腹膜内、肌内、病灶内、鼻内或皮下给药、鞘内给药，或植入缓-释装置，例如迷你-渗透泵。
“治疗”、“治疗的”和“治疗法”是指在治疗或改善损伤、病理或病况中取得成功的任何标志，包括任何客观或主观参数，例如症状的减轻；缓解；削弱或使损伤、病理或病况对患者而言能够忍受；减慢退化或衰退的速度；使衰退的终点不那么衰弱；改善病人的身体或精神健康。症状的治疗或改善可以是基于客观或主观参数；包括身体检查、神经精神病学检查和/或精神病学评估的结果。
在一些实施方式中，“预防性治疗”和“预防”皮肤鳞状细胞癌(cSCC)指的是降低接受实体器官移植并处于免疫抑制药物治疗下的受试者的cSCC风险。在一些实施方式中，“预防性治疗”或“预防”包括延迟由实体器官移植和免疫抑制药物治疗导致的cSCC的发作。在一些实施方案中，“预防性治疗”或“预防”包括延缓cSCC转移的进展或改善与cSCC进展相关的一个或多个症状。
“患者”或“对象”是指患有或易患可通过施用本文提供的药物组合物来治疗的疾病或病症的活生物体。非限制性实例包括人类、其它哺乳动物、牛、大鼠、小鼠、狗、猴子、山羊、绵羊、奶牛、鹿和其它非哺乳动物。在一些实施方式中，患者是人。
“治疗有效量”或“有效量”是指可用于治疗或改善已鉴定的疾病或病症(如本文所述的皮肤癌)，或用于显示可检测的治疗或抑制效果的化合物或药物组合物的量。准确的量将取决于治疗的目的，并且是本领域技术人员使用已知技术可以确定的(参见，例如，Lieberman的《药物剂型(Pharmaceutical Dosage Forms)》(1992年第13卷))；劳埃德(Lloyd)的《药物配混的工艺、科学和技术(The Art,Science and Technology ofPharmaceutical Compounding)》(1999)；Pickar的《剂量计算(Dosage Calculations)》(1999)；和《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy)》，第20版，2003年，Gennaro编，利平科特，威廉姆斯和威尔金斯(Lippincott，Williams&Wilkins))。
“局部”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物应用于皮肤以治疗皮肤癌。“皮下”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物应用于表皮和真皮层下面的层。“皮内”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物应用于真皮或皮下层中。“病灶内”是指在病变部位(如如鳞状细胞癌)注射合适的化合物(如活性剂)或包含化合物(如活性剂)的组合物。
在一些实施方式中，“局部”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物应用于皮肤，并充分穿透表皮或真皮，以治疗表皮和/或真皮层的皮肤癌。在局部应用的一些实施方式中，所述化合物或组合物穿透表皮或真皮，而没有明显的全身暴露，也没有意向治疗或预防另一器官***的疾病。在一些实施方式中，“皮下”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物注射至表皮和真皮层下面的层。在一些实施方式中，“皮内”指将适当的化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合物注射于真皮层。在一些实施方式中，“病灶内”是指将化合物(例如活性剂)或包含化合物(例如活性剂)的组合后直接注射进病变中，如cSCC，以治疗皮肤癌或病变。
本发明公开提供“软”MEK抑制剂、包含“软”MEK抑制剂的组合物、以及治疗和/或改善皮肤癌，特别是鳞状细胞癌(cSCC)的方法(例如，MEK抑制剂反应性或MEK介导的cSCC)。例如，本文描述的方法提供局部或非全身给药，如局部、皮下、经皮、皮内或病灶内给药MEK抑制剂，如“软”MEK抑制剂，如本文描述的“软”MEK抑制剂，从而使得在全身暴露时显示出的一个或多个副作用，例如，设计用于全身给药的MEK抑制剂显示出的已知一个或多个副作用，显著减少。
在一些实施方式中，“软MEK抑制剂”是一种抑制MEK1和/或2化合物，并且其特征在于在皮肤中发挥治疗作用后，可预测和可控的代谢/降解为无毒、生物活性较小或非活性(即不抑制或在较低程度上抑制MEK1和/或2)产品。
“硬MEK抑制剂”是指本领域已知MEK抑制剂。在一些实施方案中，硬MEK抑制剂被设计用于口服生物利用度。这对于用全身递送将治疗有效水平的MEK抑制剂递送至周围病变是必要的。硬MEK抑制剂包括例如PD0325901；PD184161；SMK-17；AS703026(Pimasertib、MSC1936369)；RO-4987655；司美替尼(Selumetinib)(AZD6244、ARRY142886)；比美替尼(Binimetinib)(MEK162、ARRY-162、ARRY-438162)；雷法替尼(Refametinib)；卡比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973、XL518)；GDC-0623；AZD8330(ARRY-424704)；CI-1040(PD184352)；PD198306；PD318088；曲美替尼；RO-4987655；GDC-0623；TAK-733；WX-554；CH5126766(也叫RO5126766)；G-573；Arry 300；SHR 7390；MSC2015103B(也称为AS-703988)；CS 3006；和LY 2228820(也称为雷利米替尼(Ralimetinib))。
虽然不希望被理论束缚，但相信软MEK抑制剂，例如，如本文所述的“软”MEK抑制剂，比已知的“硬”MEK抑制剂代谢更不稳定。由于它们固有的代谢不稳定性,例如，对于到达体内循环的降解，“软”MEK抑制剂，例如，诸如本文所述的“软”MEK抑制剂，具有皮肤活性，但在局部或非全身(如局部(topical)、皮下、皮内或病灶内)给药后具有低全身暴露，因为它们在暴露于血浆或血液或肝脏代谢酶时迅速降解。与“软”MEK抑制剂不同，已知MEK抑制剂在过去一直为了口服生物利用度而设计，这就要求允许在治疗有效或有效水平进行全身递送所必需的在血浆或血液中的良好稳定性和对肝代谢的良好的稳定性，并且更容易产生不希望的一种或多种副作用和更高的毒性。因此,“软”MEK抑制剂，例如诸如本文所述的软MEK抑制剂，全身毒性较小。
“一个(a)”、“一个(an)”或“一(个)”，当在本文中用于取代基的基团或“取代基基团”时，是指至少一个。例如，当化合物被“一个”烷基或芳基取代时，所述化合物任选地被至少一个烷基和/或至少一个芳基取代，其中每个烷基和/或芳基任选地是不同的。在另一个实例中，当化合物被“一个”取代基取代时，所述化合物被至少一个取代基取代，其中每个取代基任选地是不同的。
III.方法
在一方面中，本文提供了一种治疗或预防皮肤癌的方法。所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的选自下组的化合物：式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)：
Figure BDA0003170052860000111
或其N-氧化物、立体异构体、立体异构体的混合物和/或其药学上可接受的盐，
其中：
X1为–CR13b或N；X2为C1-C6烷基；X3为S或O；
下标n为0到2的整数；
键“a”为单键或双键；
R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；
R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R2a为卤素或C1-6烷基；
R4、R5和R5b各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中各C3-C8环烷基和杂环烷基为未被取代的或被1-6个R6取代的；
R5a为氢或C1-6烷基；
各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基；
R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基；
R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46；
R43a为氢、卤素、C1-C6烷基；或
R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-，它们各自为未被取代的或被一个或两个R49取代的；
R46为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C8环烷基或杂环烷基；
R48和R48a各自独立地为氢或C1-C6烷基；和
各R49独立地为C1-C6烷基、C3-C8环烷基或C3-C8环烷基-C1-C6烷基；
R51为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基、R7-C(O)-C1-C6烷基或–OR54，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未被取代的或被1-6个R6取代的；
各R53独立地为卤素或C1-C6烷基；
R53a和R53b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；和
R54为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未被取代的或被1-6个R6取代的。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的本文公开的化合物，例如具有式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)中任一项的化合物和表1-5中的化合物，包括其单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、磷酸盐或其活性代谢物。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的具有式(I)的化合物和表1中的化合物，包括其单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的具有式(II)化合物和表2中的化合物，包括其单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的具有式(III)的化合物和表3中的化合物，包括单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者治疗施用治疗有效量或有效量的具有式(IV)的化合物和表4中的化合物，包括其单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量或有效量的具有式(V)化合物和表5中的化合物，包括其单个对映异构体、对映异构体对的混合物、单个非对映异构体、非对映异构体的混合物、单个立体异构体、立体异构体的混合物或其互变异构形式；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一些实施方式中，皮肤癌为对MEK-抑制剂响应或MEK-介导的皮肤癌。
在一些实施方式中，皮肤癌为皮肤鳞状细胞癌(cSCC)。
在一些实施方式中，皮肤鳞状细胞癌与固体器官移植受者中暴露于紫外线辐射或免疫抑制相关。在一些实施方式中，皮肤鳞状细胞癌与实体器官移植受者中的免疫抑制相关。
在一些实施方案中，实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌为MEK-抑制剂响应性或MEK-介导的皮肤鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，给药包括通过局部或非全身给药(如局部、皮内、或病灶内给药)或通过栓剂给药软MEK抑制剂使软MEK抑制剂与受试者的皮肤、粘膜、***、***、喉、外阴、子宫颈或***接触。
在一些实施方式中，相对于参考标准，与皮肤鳞状细胞癌(cSCC)相关的肿瘤(如真皮癌)例如，肿瘤的大小或总体积减少至少约15％(如约15％至约60％)，从而治疗受试者。在一些实施方式中，参考标准是未处理对照中的肿瘤大小或总体积，例如，来自相同受试者或不同受试者。
在SOTR人群中，这些包括目前患有SCC、以前患有cSCC、或患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变或光化角化病(这两种疾病均已知进展为SCC)的患者。
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者目前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变，或患有光化角化病。在一些实施方式中，本文提供了一种治疗实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的进展的方法。在一些实施方式中，本文提供了一种治疗实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)。在一些实施方式中，本文提供了一种治疗实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变。在一些实施方式中，本文提供了一种治疗实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的进展的方法，其中，实体器官移植受者目前患有光化角化病。
在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法，其中实体器官移植受者目前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变，或患有光化角化病。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法，其中实体器官移植受者先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法，其中实体器官移植受者患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法，其中，实体器官移植受者目前患有光化角化病。
在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以延迟皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者目前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变，或患有光化角化病。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以延迟皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以延迟皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以延迟皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者具有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌症病变。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以延迟皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中，实体器官移植受者目前患有光化角化病。
在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中，实体器官移植受者目前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌前病变，或患有光化角化病。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者先前患有皮肤鳞状细胞癌(cSCC)。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中实体器官移植受者患有包括原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)的癌症病变。在一些实施方式中，本文提供了一种预防性治疗或预防实体器官移植受者中的皮肤鳞状细胞癌以预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中，实体器官移植受者目前患有光化角化病。
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗患者的皮肤鳞状细胞癌以减少皮肤鳞状细胞癌(cSCC)进展的方法，其中患者患有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，同时免疫功能低下，并且易受显著升高的cSCC率的影响。在一些实施方式中，本文提供了预防性治疗或预防患者中的皮肤鳞状细胞癌以降低皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的肿瘤进展风险的方法，其中患者患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)，同时免疫功能低下，并且易受cSCC率显著升高的影响。在一些实施方式中，本文提供了预防性地治疗或预防患者的皮肤鳞状细胞癌以延迟或预防皮肤鳞状细胞癌(cSCC)的进展的方法，其中患者患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)，同时免疫功能低下，并且易受cSCC率显著升高的影响。
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗患者的皮肤鳞状细胞癌以减少cSCC进展的方法，其中患者患有不可手术的cSCC。在一些实施方式中，本文提供了预防性治疗或预防患者的皮肤鳞状细胞癌以降低cSCC的肿瘤进展风险的方法，其中患者患有不可手术的cSCC。在一些实施方式中，本文提供了预防性治疗或预防患者的皮肤鳞状细胞癌以延迟或预防cSCC的进展的方法，其中患者患有不可手术的cSCC。
在一些实施方式中，本文提供了一种治疗患者的皮肤鳞状细胞癌以减少cSCC进展的方法，其中患者先前通过外科手术切除了cSCC。在一些实施方式中，本文提供了预防性治疗或预防患者的皮肤鳞状细胞癌以降低cSCC的肿瘤进展风险的方法，其中患者先前通过外科手术切除了cSCC。在一些实施方式中，本文提供了预防性治疗或预防患者的皮肤鳞状细胞癌以延迟或预防cSCC的进展的方法，其中患者先前通过外科手术切除了cSCC。
在一些或任何实施方式中，使用本文所述的方法来减少、预防性治疗或预防的与皮肤鳞状细胞癌相关的肿瘤或皮肤癌是癌(carcinoma)。
在一些实施方式中，要减少、改善、治疗或预防的疾病是皮肤癌。在一些实施方案中，要减少、改善、治疗或预防的疾病选自下组：基底细胞癌、鳞状细胞癌、原位鳞状细胞癌(也称为博文氏病)、光化角化病和HPV相关的鳞状细胞癌。在一些实施方式中，要减少、改善、治疗或预防的疾病为与鳞状细胞癌相关的真皮疾病。在一些实施方式中，要减少、改善、治疗或预防的疾病为与实体器官移植受者中的鳞状细胞癌相关的真皮疾病。在一些实施方式中，要减少、改善、治疗或预防的疾病为与患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的患者的鳞状细胞癌相关的真皮疾病。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于减少有需要的受试者的MEK抑制剂应答性皮肤癌或MEK介导的皮肤癌。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于改善有需要的受试者的MEK抑制剂应答性皮肤癌或MEK介导的皮肤癌。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于预防有需要的受试者的MEK抑制剂应答性皮肤癌或MEK介导的皮肤癌。
在一些实施方式中，本文所述化合物用于治疗有需要的受试者的MEK-抑制剂应答性鳞状细胞癌或MEK-介导的鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述化合物用于减少有需要的受试者的MEK-抑制剂应答性鳞状细胞癌或MEK-介导的鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述化合物用于改善有需要的受试者的MEK-抑制剂应答性鳞状细胞癌或MEK-介导的鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述化合物用于预防有需要的受试者的MEK-抑制剂应答性鳞状细胞癌或MEK-介导的鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于治疗有需要的受试者的皮肤鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于减少有需要的受试者的皮肤鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于改善有需要的受试者的皮肤鳞状细胞癌
在一些实施方式中，本文所述的化合物用于预防有需要的受试者的皮肤鳞状细胞癌。
在一些实施方式中，有需要的受试者为人。
测定方法
可以根据本领域技术人员已知的任何测定来测定化合物在治疗或预防有需要受试者的皮肤癌(例如MEK-抑制剂应答性或MEK-介导的皮肤癌)中的疗效。本文其他地方提供了示例性测定方法。
IV.化合物
本发明提供一种用于治疗本文定义和描述的皮肤癌的方法中的化合物，其中，所述化合物选自下组：式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)：
Figure BDA0003170052860000171
或其N-氧化物、立体异构体、立体异构体的混合物和/或其药学上可接受的盐，
其中：
X1为–CR13b或N；X2为C1-C6烷基；X3为S或O；
下标n为0到2的整数；
键“a”为单键或双键；
R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；
R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R2a为卤素或C1-6烷基；
R4、R5和R5b各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中各C3-C8环烷基和杂环烷基为未被取代的或被1-6个R6取代的；
R5a为氢或C1-6烷基；
各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基；
R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基；
R8为羟基、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基；
R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46；
R43a为氢、卤素、C1-C6烷基；或
R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-，它们各自为未被取代的或被一个或两个R49取代的；
R46为氢、C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、C3-C8环烷基或杂环烷基；
R48和R48a各自独立地为氢或C1-C6烷基；和
各R49独立地为C1-C6烷基、C3-C8环烷基或C3-C8环烷基-C1-C6烷基；
R51为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基、R7-C(O)-C1-C6烷基或–OR54，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的；
各R53独立地为卤素或C1-C6烷基；
R53a和R53b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；和
R54为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的。
在一些实施方式中，式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)中提供的环烷基为饱和单环C3-C8环烷基。在一些实施方式中，单独或作为C3-C8环烷基-C1-C6烷基的一部分的C3-C8环烷基为环丙基或环丁基。在一些实施方式中，单独或作为C3-C8环烷基-C1-C6烷基的一部分的C3-C8环烷基为未取代的。在一些实施方式中，单独或作为C3-C8环烷基-C1-C6烷基的一部分的C3-C8环烷基为被1-6个R6取代的，并且R6如本文定义和描述。
关于R6，作为C3-C8环烷基的一个或多个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基或二-(C1-C6烷基)氨基。在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或氨基。在一些实施方式中，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，各R6独立地为羟基或氨基。
在一些实施方式中，式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)中提供的杂环烷基为具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的3至8元杂环烷基。在一些实施方式中，杂环烷基为具有1至2个N或O的杂原子的3至6元杂环烷基。在一些实施方式中，单独或作为杂环烷基-C1-C6烷基的一部分的杂环烷基为未取代的。在一些实施方式中，单独或作为杂环烷基-C1-C6烷基的一部分的杂环烷基为被1-6个R6取代的，并且R6如本文定义和描述。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基被一个或两个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。
关于R6，作为杂环烷基或N-连接的杂环烷基的一个或多个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基或二-(C1-C6烷基)氨基。在一些实施方式中，各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或氨基。在一些实施方式中，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，各R6独立地为羟基、氧代基或氨基。在一些实施方式中，各R6独立地为羟基或氨基。
在一些实施方式中，可用于本发明方法的化合物为式(I)化合物。
关于式(I)，在一些实施方式中，X1为–CR13b，所述化合物由式(Ia)表示：
Figure BDA0003170052860000191
其中，R1、R2、R2a、R13、R13a和R13b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(Ia)的一些实施方式中，R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素或C1-C6烷基。
在式(Ia)的一些实施方式中，R13为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13为氢。在一些实施方式中，R13为卤素。在一些实施方式中，R13为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R13为氟。在一些实施方式中，R13为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R13为甲基。
在式(Ia)的一些实施方式中，R13a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13a为氢。在一些实施方式中，R13a为卤素。在一些实施方式中，R13a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R13a为氟。在一些实施方式中，R13a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R13a为甲基。
在式(Ia)的一些实施方式中，R13b为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13b为氢。在一些实施方式中，R13b为卤素。在一些实施方式中，R13b为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R13b为氟。在一些实施方式中，R13b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13b为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R13b为甲基。
在式(Ia)的一些实施方式中，R13、R13a和R13b都为氢。在式(Ia)的一些实施方式中，R13和R13a都为氢，R13b为卤素。在式(Ia)的一些实施方式中，R13和R13a都为氢，R13b为氟。
回到式(I)，在一些实施方式中，X1为N，所述化合物由式(Ib)表示：
Figure BDA0003170052860000201
其中，R1、R2、R2a、R13和R13a如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(Ib)的一些实施方式中，R13和R13a各自独立地为氢、卤素或C1-C6烷基。
在式(Ib)的一些实施方式中，R13为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13为氢。在一些实施方式中，R13为卤素。在一些实施方式中，R13为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R13为氟。在一些实施方式中，R13为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13为甲基。
在式(Ib)的一些实施方式中，R13a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13a为氢。在一些实施方式中，R13a为卤素。在一些实施方式中，R13a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R13a为氟。在一些实施方式中，R13a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R13a为甲基。
在式(Ib)的一些实施方式中，R13和R13a各自独立地为氢或卤素。在一些实施方式中，R13和R13a都为氢。在一些实施方式中，R13和R13a之一为氢，另一个为卤素。在一些实施方式中，R13和R13a之一为氢，另一个则为氟。
关于式(I)、(Ia)和(Ib)中的任何一个，在一些实施方式中，R1为-OR4、-NR5R5a或-N(OR5b)R5a。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为-OR4。在一些实施方式中，R4为氢。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000211
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为-NR5R5a。在一些实施方式中，R5为氢。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1至6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基中为未取代的或被1-6个R6取代的，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；并且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；并且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为-NR5R5a，并且R5选自下组：氢、
Figure BDA0003170052860000221
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为–N(OR5b)R5a。在一些实施方式中，R5b为氢。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；并且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；并且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为-N(OR5b)R5a，并且-OR5b选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000231
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R5a为氢。在一些实施方式中，R5a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5a为C1-C4烷基。在一些实施例中，R5a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔基丁基。在一些实施例中，R5a为甲基。
关于式(I)、(Ia)和(Ib)中的任何一个，在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基、N-连接的吡咯烷基、N-连接的异恶唑烷基、N-连接的哌啶基或N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的氮杂环丁基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吡咯烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的哌啶基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的异恶唑烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吗啉基，其中，R6如本文所定义和描述。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个中，关于R6，其作为N-连接的杂环烷基的一个或两个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为羟基、氧代基或氨基。在一些实施方式中，各R6为羟基。在一些实施方式中，各R6为氧代基。在一些实施方式中，各R6为氨基。在一些实施方式中，一个R6为羟基，另一个R6为氨基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的杂环烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吗啉基。
关于式(I)、(Ia)和(Ib)中的任何一个，在一些实施方式中，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为卤素、–CH3、–SCH3、C2-C3烯基或C2-C3炔基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为卤素。在一些实施方式中，R2为氟。在一些实施方式中，R2为碘。在一些实施方式中，R2为氯。在一些实施方式中，R2为溴。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为甲基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为-SCH3。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R2为环丙基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6烯基。在一些实施方式中，R2为C2-C4烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基、异丁烯基或丁二烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为C2-C3炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基或丙炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基。
关于式(I)、(Ia)和(Ib)中的任何一个，在一些实施方式中，R2a为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为卤素还是CH3。在一些实施方式中，R2a为氟或CH3。在一些实施方式中，R2a为碘或CH3。在一些实施方式中，R2a为氯或CH3。在一些实施方式中，R2a为溴或CH3。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2a为卤素。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R2a为碘。在一些实施方式中，R2a为氯。在一些实施方式中，R2a为溴。
在式(I)、(Ia)和(Ib)中任一个的一些实施方式中，R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2a为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为CH3。
关于式(I)、(Ia)和(Ib)中的任何一个，在一些实施方式中，R2和R2a均为卤素。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为环丙基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6烯基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2和R2a各自独立地为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为溴和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。
在一些实施方式中，式(I)化合物由下式中的任何一个表示：
Figure BDA0003170052860000251
Figure BDA0003170052860000261
Figure BDA0003170052860000271
其中，X1、R2、R2a、R13和R13a如本文所述的任何方面或实施方式中所定义。
在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1为-CR13b，并且R13b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义。在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1为N。
在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为甲基。
在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1为–CR13b；和R13、R13a和R13b都为氢。在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1为–CR13b；R13和R13a均为氢，且R13b为卤素。在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1为–CR13b；R13和R13a均为氢，且R13b为氟。
在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，X1是N；R13和R13a都为氢。
在一些实施方式中，用于本发明方法的化合物为式(II)化合物。
关于式(II)，在一些实施方式中，X2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，X2为甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方式中，X2为甲基，且所述化合物由式(IIa)表示：
Figure BDA0003170052860000272
其中，R1、R2、R2a、R23、R23a和R23b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R23为氢。在一些实施方式中，R23为卤素。在一些实施方式中，R23为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R23为氟。在一些实施方式中，R23为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R23为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R23为甲基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23a为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R23a为氢。在一些实施方式中，R23a为卤素。在一些实施方式中，R23a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R23a为氟。在一些实施方式中，R23a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R23a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R23a为甲基。在一些实施方式中，R23a为C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R23a为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基或己氧基。在一些实施方式中，R23a为甲氧基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23b为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R23b为氢。在一些实施方式中，R23b为卤素。在一些实施方式中，R23b为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R23b为氟。在一些实施方式中，R23b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R23b为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R23b为甲基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23、R23a和R23b都为氢。在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23和R23b均为氢，且R23a为卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R23和R23b均为氢，且R23a为氟、甲基或甲氧基。
关于式(II)或(IIa)中的任何一个，在一些实施方式中，R1为-OR4、-NR5R5a或-N(OR5b)R5a。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1为-OR4。在一些实施方式中，R4为氢。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；并且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000291
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1为-NR5R5a。在一些实施方式中，R5为氢。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R5选自下组：氢、
Figure BDA0003170052860000292
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1为–N(OR5b)R5a。在一些实施方式中，R5b为氢。
在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。
在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。
在一些实施方式中，R5b为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。
在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1为-N(OR5b)R5a，且-OR5b选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000301
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R5a为氢。在一些实施方式中，R5a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5a为C1-C4烷基。在一些实施例中，R5a可以为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。在一些实施方式中，R5a为甲基。
关于式(II)或(IIa)，在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基、N-连接的吡咯烷基、N-连接的异恶唑烷基、N-连接的哌啶基或N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的氮杂环丁基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吡咯烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的哌啶基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的异恶唑烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吗啉基，其中，R6如本文所定义和描述。
在式(II)或(IIa)中，关于R6，其作为N-连接的杂环烷基的一个或两个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为羟基、氧代基或氨基。在一些实施方式中，各R6为羟基。在一些实施方式中，各R6为氧代基。在一些实施方式中，各R6为氨基。在一些实施方式中，一个R6为羟基，另一个R6为氨基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的杂环烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吗啉基。
关于式(II)或(IIa)，在一些实施方式中，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为卤素、–CH3、–SCH3、C2-C3烯基或C2-C3炔基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为卤素。在一些实施方式中，R2为氟。在一些实施方式中，R2为碘。在一些实施方式中，R2为氯。在一些实施方式中，R2为溴。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为甲基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为-SCH3。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R2为环丙基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为C2-C6烯基。在一些实施方式中，R2为C2-C4烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基、异丁烯基或丁二烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2为C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为C2-C3炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基或丙炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基。
关于式(II)或(IIa)，在一些实施方式中，R2a为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为卤素或CH3。在一些实施方式中，R2a为氟或CH3。在一些实施方式中，R2a为碘或CH3。在一些实施方式中，R2a为氯或CH3。在一些实施方式中，R2a为溴或CH3。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2a为卤素。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R2a为碘。在一些实施方式中，R2a为氯。在一些实施方式中，R2a为溴。
在式(II)或(IIa)的一些实施方式中，R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2a为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为CH3。
关于式(II)或(IIa)，在一些实施方式中，R2和R2a均为卤素。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为环丙基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6烯基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2和R2a各自独立地为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为溴和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。
在一些实施方式中，式(II)或(IIa)化合物由下式中的任何一个表示：
Figure BDA0003170052860000321
Figure BDA0003170052860000331
其中，R2、R2a、R23、R23a和R23b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在具有式(II)或(IIa)的上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为甲基。
在具有式(II)或(IIa)的上述结构的一些实施方式中，R23、R23a和R23b均为氢。在上述结构的一些实施方式中，R23和R23b均为氢，且R23a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R23和R23b均为氢，且R23a为甲氧基。
在一些实施方式中，用于本发明方法的化合物为式(III)化合物。
关于式(III)，在一些实施方式中，X3为S，所述化合物由式(IIIa)表示：
Figure BDA0003170052860000341
其中，R2、R2a、R33、R33a和R33b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(III)的一些实施方式中，X3为O，所述化合物由式(IIIb)表示：
Figure BDA0003170052860000342
其中，R2、R2a、R33、R33a和R33b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33为氢。在一些实施方式中，R33为卤素。在一些实施方式中，R33为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R33为氟。在一些实施方式中，R33为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R33为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R33为甲基。在一些实施方式中，R33为C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基或己氧基。在一些实施方式中，R33为甲氧基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33a为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33a为氢。在一些实施方式中，R33a为卤素。在一些实施方式中，R33a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R33a为氟。在一些实施方式中，R33a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R33a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R33a为甲基。在一些实施方式中，R33a为C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33a为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基或己氧基。在一些实施方式中，R33a为甲氧基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33b为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33b为氢。在一些实施方式中，R33b为卤素。在一些实施方式中，R33b为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R33b为氟。在一些实施方式中，R33b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R33b为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R33b为甲基。在一些实施方式中，R33b为C1-C6烷氧基。在一些实施方式中，R33b为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基或己氧基。在一些实施方式中，R33b为甲氧基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33、R33a和R33b均为氢。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33a和R33b均为氢，且R33为卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33和R33b均为氢，且R33a为氟、甲基或甲氧基。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33和R33a均为氢，且R33b为卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33a和R33b均为氢，且R33为氟、甲基或甲氧基。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33和R33b均为氢，且R33a为氟、甲基或甲氧基。在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R33和R33a均为氢，且R33b为氟、甲基或甲氧基。
关于式(III)、(IIIa)和(IIIb)中的任何一个，在一些实施方式中，R1为-OR4、-NR5R5a或-N(OR5b)R5a。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1为-OR4。在一些实施方式中，R4为氢。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。
在一些实施方式中，R4为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1选择下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000361
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1为-NR5R5a。在一些实施方式中，R5为氢。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1至6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R5选择下组：氢、
Figure BDA0003170052860000362
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1为–N(OR5b)R5a。在一些实施方式中，R5b为氢。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，环丙基和环丁基中的每一个为未取代或被1-6个R6取代，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1为-N(OR5b)R5a，且-OR5b选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000371
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R5a为氢。在一些实施方式中，R5a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5a为C1-C4烷基。在一些实施例中，R5a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔基丁基。在一些实施方式中，R5a为甲基。
关于式(III)、(IIIa)和(IIIb)中的任何一个，在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基、N-连接的吡咯烷基、N-连接的异恶唑烷基、N-连接的哌啶基或N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的氮杂环丁基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吡咯烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的哌啶基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的异恶唑烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吗啉基，其中，R6如本文所定义和描述。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个中，关于R6作为N-连接的杂环烷基的一个或两个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为羟基、氧代基或氨基。在一些实施方式中，各R6为羟基。在一些实施方式中，各R6为氧代基。在一些实施方式中，各R6为氨基。在一些实施方式中，一个R6为羟基，另一个R6为氨基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的杂环烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-氮杂环丁基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吗啉基。
关于式(III)、(IIIa)和(IIIb)中的任何一个，在一些实施方式中，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为卤素、–CH3、–SCH3、C2-C3烯基或C2-C3炔基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为卤素。在一些实施方式中，R2为氟。在一些实施方式中，R2为碘。在一些实施方式中，R2为氯。在一些实施方式中，R2为溴。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为甲基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为-SCH3。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R2为环丙基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6烯基。在一些实施方式中，R2为C2-C4烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基、异丁烯基或丁二烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为C2-C3炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基或丙炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基。
关于式(III)、(IIIa)和(IIIb)中的任何一个，在一些实施方式中，R2a为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为卤素或CH3。在一些实施方式中，R2a为氟或CH3。在一些实施方式中，R2a为碘或CH3。在一些实施方式中，R2a为氯或CH3。在一些实施方式中，R2a为溴或CH3。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2a为卤素。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R2a为碘。在一些实施方式中，R2a为氯。在一些实施方式中，R2a为溴。
在式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一个的一些实施方式中，R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2a为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为CH3。
关于式(III)、(IIIa)和(IIIb)中的任何一个，在一些实施方式中，R2和R2a均为卤素。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为环丙基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6烯基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2和R2a各自独立地为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为-CH3。在一些实施方式中，R2为溴和R2a为-CH3。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为-CH3。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。
在一些实施方式中，式(III)化合物由下式中的任何一个表示：
Figure BDA0003170052860000391
Figure BDA0003170052860000401
其中，X3、R2、R2a、R33、R33a和R33b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在具有式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一种的上述结构的一些实施方式中，R2为碘，且R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为甲基。
在具有式(III)、(IIIa)和(IIIb)中任一种的上述结构的一些实施方式中，R33、R33a和R33b均为氢。在上述结构的一些实施方式中，R33和R33b均为氢，且R33a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R33和R33b均为氢，且R33a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R33和R33b均为氢，且R33a为甲氧基。在上述结构的一些实施方式中，R33和R33a均为氢和R33b为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R33和R33a均为氢和R33b为甲氧基。在上述结构的一些实施方式中，R33a和R33b均为氢和R33为甲基。
在一些实施方式中，可用于本发明方法的化合物为式(IV)化合物。
关于式(IV)，在一些实施方式中，R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46，和R43a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R43a为氢。在一些实施方式中，R43a为卤素。在一些实施方式中，R43a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R43a为氟。在一些实施方式中，R43a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R43a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R43a为甲基。
在式(IV)的一些实施方式中，R43为氰基，所述化合物由式(IVa)表示：
Figure BDA0003170052860000411
其中，R1、R2、R2a和R43a如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(IVa)的一些实施方式中，R43a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R43a为氢、卤素或甲基。在一些实施方式中，R43a为甲基。
关于式(IV)，在一些实施方式中，R43为-C(O)NR48R48a，所述化合物由式(IVb)表示：
Figure BDA0003170052860000412
其中，R1、R2、R2a、R43a、R48和R48a如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(IVb)的一些实施方式中，R43a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R43a为氢、卤素或甲基。在一些实施方式中，R43a为甲基。
在式(IVb)的一些实施方式中，R48和R48a各自独立地为氢或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R48和R48a都为氢。在一些实施例中，R48和R48a各自独立为C1-C6烷基。在一些实施例中，R48和R48a中的一个为氢，另一个为C1-C6烷基。
在式(IV)的一些实施方式中，R43为-C(O)NH2，和R43a为甲基。
关于式(IV)，在一些实施方式中，R43为-C(O)R46，所述化合物由式(IVc)表示：
Figure BDA0003170052860000421
其中，R1、R2、R2a、R43a和R43如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(IVc)的一些实施方式中，R43a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R43a为氢、卤素或甲基。在一些实施方式中，R43a为甲基。
在式(IVc)的一些实施方式中，R46为氢、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基。在一些实施方式中，R46为氢、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基，其中，所述卤代烷基为被1、2或3个氟取代的烷基。
在式(IVc)的一些实施方式中，R46为氢。在式(IVc)的一些实施方式中，R46为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R46为C1-C4烷基。在一些实施方式中，R6为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。
在式(IVc)的一些实施方式中，R46为C1-C6卤代烷基，其中，所述卤代烷基为被1、2或3个氟取代的烷基。在一些实施方式中，R46为C1-C4卤代烷基，其中，C1-C4卤代烷基为被1、2或3个氟取代的C1-C4烷基。在一些实施方式中，R46为三氟甲基、氟甲基或2,2,2-三氟乙基。
在式(IVc)的一些实施方式中，R46为C3-C8环烷基或杂环烷基。在一些实施方式中，R46为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R46为环丙基或环丁基。在一些实施方式中，R6为杂环烷基。在一些实施方式中，R46为具有1-3个N、O或S杂原子的3-8元杂环烷基。在一些实施方式中，R46为具有1-2个N或O杂原子的3-6元杂环烷基。在一些实施方式中，R46为吖丙啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、异恶唑烷基或吗啉基。
回到式(IV)，在一些实施方式中，R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-，其各自为未取代的或被一个或两个R49取代的。在一些实施方式中，R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-。
在式(IV)的一些实施方式中，所述化合物由式(IVd-1)或(IVd-2)表示：
Figure BDA0003170052860000422
其中，R1、R2、R2a和R49如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(IV)的一些实施方式中，所述化合物由式(IVe-1)或(IVe-2)表示：
Figure BDA0003170052860000431
其中，R1、R2、R2a和R49如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在式(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，各R49独立地为C1-C6烷基。在式(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)或(IVe-2)中的一些实施方式中，R49为不存在。
关于式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中的任一个，在一些实施方式中，R1为-OR4、-NR5R5a或–N(OR5b)R5a。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为-OR4。在一些实施方式中，R4为氢。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R4为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R4为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氨基-C1-C6烷基。
在一些实施方式中，R4为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R4为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R4为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000441
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为-NR5R5a。在一些实施方式中，R5为氢。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施例中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施例中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为-NR5R5a，并且R5选自下组：氢、
Figure BDA0003170052860000442
Figure BDA0003170052860000451
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为–N(OR5b)R5a。在一些实施方式中，R5b为氢。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和烷基。在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5b为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R5b为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为–N(OR5b)R5a，并且-OR5b选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000452
Figure BDA0003170052860000461
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R5a为氢。在一些实施方式中，R5a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5a为C1-C4烷基。在一些实施例中，R5a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔基丁基。在一些实施方式中，R5a为甲基。
关于式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中的任一个，在一些实施方式中，R1为未取代的或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基、N-连接的吡咯烷基、N-连接的异恶唑烷基、N-连接的哌啶基或N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吡咯烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，N-连接的杂环烷基为N-连接的吗啉基。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的氮杂环丁基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吡咯烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的哌啶基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的异恶唑烷基，其中，R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R1为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的吗啉基，其中，R6如本文所定义和描述。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个中，关于R6，其作为N-连接的杂环烷基的一个或两个取代基，在一些实施方式中，各R6独立地为羟基、氧代基或氨基。在一些实施方式中，各R6为羟基。在一些实施方式中，各R6为氧代基。在一些实施方式中，各R6为氨基。在一些实施方式中，一个R6为羟基，另一个R6为氨基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R1为未取代的或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的杂环烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的氮杂环丁基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吡咯烷基。在一些实施例中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的哌啶基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的异恶唑烷基。在一些实施方式中，R1为未取代或被羟基、氧代基或氨基取代的N-连接的吗啉基。
关于式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中的任一个，在一些实施方式中，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为R2为卤素、–CH3、–SCH3、C2-C3烯基或C2-C3炔基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为卤素。在一些实施方式中，R2为氟。在一些实施方式中，R2为碘。在一些实施方式中，R2为氯。在一些实施方式中，R2为溴。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为甲基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为-SCH3。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R2为环丙基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6烯基。在一些实施方式中，R2为C2-C4烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基、异丁烯基或丁二烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为C2-C3炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基或丙炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基。
关于式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中的任一个，在一些实施方式中，R2a为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为卤素或CH3。在一些实施方式中，R2a为氟或CH3。在一些实施方式中，R2a为碘或CH3。在一些实施方式中，R2a为氯或CH3。在一些实施方式中，R2a为溴或CH3。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2a为卤素。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R2a为碘。在一些实施方式中，R2a为氯。在一些实施方式中，R2a为溴。
在式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中任一个的一些实施方式中，R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2a为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为CH3。
关于式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd-1)、(IVd-2)、(IVe-1)和(IVe-2)中的任一个，在一些实施方式中，R2和R2a均为卤素。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为环丙基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6烯基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2和R2a各自独立地为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为溴和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。
在一些实施方式中，式(IV)化合物由下式中的任何一个表示：
Figure BDA0003170052860000481
Figure BDA0003170052860000491
其中，R2、R2a、R43和R43a如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
在具有式(I)的上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为甲基。
在具有式(IV)的上述结构的一些实施方式中，R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46，且R43a为C1-C6烷基。在上述结构的一些实施方式中，R43为氰基和R43a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R43为-C(O)NR48R48a；R48和R48a均为氢；R43a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R43为-C(O)R46；R46为C1-C4烷基；R43a为C1-C4烷基。在上述结构的一些实施方式中，R43为-C(O)R46；R46为C1-C4烷基；R43a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-。
在一些实施方式中，可用于本发明方法的化合物为式(V)化合物。
关于式(V)，在一些实施方式中，键“a”为双键，所述化合物由式(Va)表示：
Figure BDA0003170052860000501
其中，下标n、R2、R2a、R51、R53、R53a和R53b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义。
在式(V)的一些实施方式中，键“a”为单键，所述化合物由式(Vb)表示：
Figure BDA0003170052860000502
其中，下标n、R2、R2a、R51、R53、R53a和R53b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义。
在式(V)、(Va)和(Vb)中任一个的一些实施方式中，R53各自独立地为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R53各自独立地为氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方式中，各R53为甲基。
在式(V)、(Va)和(Vb)中任一个的一些实施方式中，下标n为0或1。在一些实施方式中，下标n为0，所述化合物由式(Va-1)或(Vb-1)表示：
Figure BDA0003170052860000503
其中，R2、R2a、R51、R53a和R53b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义的。
关于式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中的任一各种，R53a和R53b各自独立地为氢、卤素或C1-C6烷基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R53a为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R53a为氢。在一些实施方式中，R53a为卤素。在一些实施方式中，R53a为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R53a为氟。在一些实施方式中，R53a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R53a为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R53a为甲基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R53b为氢、卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R53b为氢。在一些实施方式中，R53b为卤素。在一些实施方式中，R53b为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R53b为氟。在一些实施方式中，R53b为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R53b可以为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。在一些实施方式中，R53b为甲基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R53a和R53b均为氢。在一些实施方式中，R53a为氢和R53b为卤素。在一些实施方式中，R53a为氢和R53b为氟。
参考式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中的任何一个，在一些实施方式中，R51为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R51为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R51为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R51为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R51为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R51为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R5为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R51为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R51为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R51为R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R51选自下组：氢、
Figure BDA0003170052860000511
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R51为OR54。在一些实施方式中，R54为氢。在一些实施方式中，R54为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R54为未取代或被1-6个R6取代的C3-C8环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R54为C3-C8环烷基-C1-C6烷基，其中，C3-C8环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基；并且各个环丙基和环丁基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R5为环丙基、环丁基、环丙基-C1-C6烷基或环丁基-C1-C6烷基，各个环丙基和环丁基为未取代或被1-6个R6取代的，各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为C1-C6羟烷基。在一些实施方式中，R54为C1-C6烷氧基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R54为未取代或被1-6个R6取代的杂环烷基，并且各R6独立地为羟基和C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，并且R6如本文所定义和描述。在一些实施方式中，R54为杂环烷基-C1-C6烷基，其中，所述杂环烷基为未取代或被1-6个R6取代，并且各R6独立地为羟基或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、氧杂环丁基-C1-C6烷基、氮杂环丁基-C1-C6烷基、吡咯烷基-C1-C6烷基、哌啶基-C1-C6烷基或2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R54为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基。在一些实施方式中，R54为R7-C(O)-C1-C6烷基；且R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R51选自下组：-OH、
Figure BDA0003170052860000521
关于式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中的任何一个，在一些实施方式中，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为卤素或C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为卤素、–SCH3、C2-C3烯基或C2-C3炔基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为卤素。在一些实施方式中，R2为氟。在一些实施方式中，R2为碘。在一些实施方式中，R2为氯。在一些实施方式中，R2为溴。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为甲基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2为-SCH3。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基。在一些实施方式中，R2为环丙基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6烯基。在一些实施方式中，R2为C2-C4烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基、异丁烯基或丁二烯基。在一些实施方式中，R2为乙烯基。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2为C2-C6炔基。在一些实施方式中，R2为C2-C3炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基或丙炔基。在一些实施方式中，R2为乙炔基。
关于式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中的任何一个，在一些实施方式中，R2a为卤素或C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为卤素或CH3。在一些实施方式中，R2a为氟或CH3。在一些实施方式中，R2a为碘或CH3。在一些实施方式中，R2a为氯或CH3。在一些实施方式中，R2a为溴或CH3。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2a为卤素。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R2a为碘。在一些实施方式中，R2a为氯。在一些实施方式中，R2a为溴。
在式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中任一个的一些实施方式中，R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2a为C1-C3烷基。在一些实施方式中，R2a为CH3。
关于式(V)、(Va)、(Vb)、(Va-1)和(Vb-1)中的任何一个，在一些实施方式中，R2和R2a均为卤素。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为C1-C6烷基。在一些实施方式中，R2为C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为-S-C1-C6烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C3-C8环烷基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为环丙基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6烯基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为C2-C6炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为卤素。在一些实施方式中，R2和R2a各自独立地为氟、氯、溴或碘。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为卤素和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为溴和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为碘和R2a为CH3。在一些实施方式中，R2为–SCH3和R2a为氟。在一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。
在一些实施方式中，式(V)化合物由下式中的任何一个表示：
Figure BDA0003170052860000541
Figure BDA0003170052860000551
其中键“a”、R2、R2a、R53a和R53b如本文所述的任何方面或实施方式中所定义。
在具有式(V)的上述结构的一些实施方式中，键“a”为双键。在具有式(V)的上述结构的一些实施方式中，键“a”为单键。
在具有式(V)的上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为碘和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为乙炔基和R2a为甲基。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为氟。在上述结构的一些实施方式中，R2为-SCH3和R2a为甲基。
在具有式(V)的上述结构的一些实施方式中，R53a和R53b均为氢。在上述结构的一些实施方式中，R53a为氢和R53b为卤素。在上述结构的一些实施方式中，R53a为氢和R53b为氟。
表1-5列出了具有式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)中任一种的示例性化合物。
表1：式(I)化合物
Figure BDA0003170052860000561
Figure BDA0003170052860000571
Figure BDA0003170052860000581
Figure BDA0003170052860000591
Figure BDA0003170052860000601
表2：式(II)化合物
Figure BDA0003170052860000602
Figure BDA0003170052860000611
Figure BDA0003170052860000621
Figure BDA0003170052860000631
Figure BDA0003170052860000641
Figure BDA0003170052860000651
表3：式(II)化合物
Figure BDA0003170052860000652
Figure BDA0003170052860000661
Figure BDA0003170052860000671
表4：式(IV)化合物
Figure BDA0003170052860000681
Figure BDA0003170052860000691
Figure BDA0003170052860000701
Figure BDA0003170052860000711
表5：式(V)化合物
Figure BDA0003170052860000712
Figure BDA0003170052860000721
本发明的化合物可以以盐的形式存在。本发明包括这样的盐。可应用的盐形式的实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物、琥珀酸盐、苯甲酸盐和与氨基酸(如谷氨酸)的盐。这些盐可以通过本领域技术人员已知的方法制备。还包括碱加成盐，如钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐，或类似盐。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸接触而获得酸加成盐，所述酸可以是无溶剂的或在合适的惰性溶剂中。可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些、以及衍生自如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等有机酸的盐。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，以及有机酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。
其它盐包括用于本发明方法的化合物的酸式盐或碱式盐。药学上可接受的盐的说明性实例包括无机酸(盐酸、氢溴酸、磷酸等)盐、有机酸(乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸等)盐和季铵(甲基碘、乙基碘等)盐。应当理解，药学上可接受的盐是无毒的。关于合适的药学上可接受的盐的其他信息可以在雷明顿药学大全(Remington’s Pharmaceutical Sciences)(第17版，麦克出版公司(Mack Publishing Company)，宾夕法尼亚州伊斯顿，1985)中找到，其通过引用并入本文。
药学上可接受的盐包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于本文所述化合物上存在的特定取代基。当本发明化合物含有相对较酸性的官能团时，碱加成盐可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需碱无溶剂或在合适的惰性溶剂中接触而获得。药学上可接受的碱加成盐包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机氨基酸盐、镁盐或类似盐。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸接触而获得酸加成盐，所述酸可以是无溶剂的或在合适的惰性溶剂中。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些、以及衍生自如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等相对无毒的有机酸的盐。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，以及有机酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如，Berge等，“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,药物科学杂志(Journal of PharmaceuticalScience),1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。
化合物的中性形式优选通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。所述化合物的母体形式在某些物理性质上不同于各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度。
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式等同于未溶剂化形式，并且包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所设想的用途是等同的，并且意图在本发明的范围内。
本发明的某些化合物有不对称碳原子(光学中心)或双键；对映异构体、外消旋体、非对映异构体、互变异构体、几何异构体、立体异构形式，就绝对立体化学而言，可定义为(R)-或(S)-或，如对于氨基酸(D)-或(L)-，且单独的异构体在本发明的范围内。本发明的化合物不包括本领域已知的太不稳定而不能合成和/或分离的化合物。本发明意在包括外消旋和光学纯形式的化合物。光学活性的(R)-和(S)-，或(D)-和(L)-异构体可以使用手性合成子(chiral synthons)或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。
同分异构体包括具有相同数量和种类的原子，因此具有相同的分子量，但在原子的结构排列或构型方面不同的化合物。
对本领域技术人员来说是显而易见的是，本发明的某些化合物可能以互变异构体形式存在，所有这些化合物的互变异构体形式都在本发明的范围内。互变异构体是指平衡存在的两种或多种结构异构体中的一种，它们很容易从一种异构体形式转化为另一种异构体形式。
除非另有说明，本文描述的结构还意味着包括结构的所有立体化学形式；即每个不对称中心的R和S构型。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映体、非对映体异构体混合物均在本发明的范围内。
除非另有说明，本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。例如，本发明的化合物可以用放射性或稳定同位素标记，例如氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)、氟-18(18F)、氮-15(15N)、氧-17(17O)、氧-18(18O)、碳-13(13C)或碳-14(14C)。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均包括在本发明的范围内。
除了盐形式外，本发明提供了以前药形式存在的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下易于发生化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转化成本发明的化合物。例如，当将前药放置在具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药会缓慢地转化成本发明的化合物。
本应用的化合物被设计用于局部、皮下、皮内或病灶内应用，导致抑制真皮和表皮层(或胎记内)的MEK活性，以治疗胎记。在治疗胎记之后，在一些实施方案中，化合物被设计成代谢不稳定，以便通过限制化合物在外周循环中保留的时间量来限制局部、皮下、经皮、皮内、病灶内应用后的全身毒性。本申请提供了一种用显示出穿透皮肤和抑制磷酸ERK能力的化合物治疗胎记的解决方案。
V.组合物
本发明提供一种药物组合物,其包括具有式(I)至(V)中任一项的化合物和药学上可接受的载体用于皮肤癌治疗方法中，如本文所定义和描述。
可以使用本领域可获得和本文公开的方法将本文提供的化合物配制成药物组合物。可在适当的药物组合物中提供本文公开的任何化合物，并通过适当的给药途径给药。
向对象给药本文所述化合物可以是局部的(local)或非全身性的，例如局部的、皮下的、皮内的或病灶内的。在一些实施方式中，化合物可以通过局部给药施用。在一些实施方式中，化合物可以通过皮内给药施用。在一些实施方式中，化合物可以通过病灶内给药(如通过病灶内注射)施用。
本文提供的方法包括：在患者需要时，施用含有至少一种如本文所述化合物的药物组合物，包括单独使用的或以与一种或多种相容的和药学上可接受的载体(例如稀释剂或佐剂)组合的形式使用的具有式(I)至(V)任一种的化合物(如果合适的话以盐形式)，或者，与另一种用于治疗皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的药剂组合施用。
在一些实施方式中，第二药剂可以与本文提供的化合物一起配制或包装。当然，仅当根据本领域技术人员的判断这种共配制剂不应干扰任一制剂的活性或给药方法时，第二种药剂将与本文提供的化合物配制在一起。在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二药剂是分开配制的。为本领域从业者的方便起见，它们可以包装在一起，或单独包装。
在临床实践中，本文提供的活性剂可通过任何常规途径给药，特别是局部、皮下、皮内或病灶内给药。在一些实施方式中，本文提供的化合物是局部给药的。在一些实施方式中，本文提供的化合物皮下给药的。在一些实施方式中，本文提供的化合物是皮内给药的。在一些实施方式中，本文提供的化合物是病灶内给药的。
作为局部施用的组合物，可以使用糊剂、洗剂、酊剂、乳剂、喷雾剂、软膏、乳膏或凝胶。在替代实施方式中，局部给药可以以包含活性剂的贴片形式实现，其中贴片与皮肤上的受影响区域接触。在进一步的实施方式中，局部给药可以以液体涂剂的形式实现，其中，液体涂剂在涂敷到受影响区域后在皮肤上干燥。在一些这样的实施方式中，组合物可包含皮肤渗透剂，使得活性剂渗透表皮并经皮递送。在进一步的实施方式中，组合物配制用于皮内注射。在可替代的实施方式中，组合物配制用于病灶内注射。
作为局部施用的组合物，可以使用糊剂、洗剂、酊剂、乳剂、喷雾剂、软膏、乳膏或凝胶。在这些组合物中，活性产物与一种或多种惰性赋形剂混合，所述赋形剂包括：水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1,3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物。局部组合物(例如，凝胶、乳膏、软膏、洗剂)可包含药学上可接受的聚合物。乳膏和软膏可包含石蜡基。对于经皮递送的活性剂，局部组合物可进一步包含皮肤渗透促进剂(例如，DMSO、吡咯烷酮)。皮肤润肤剂(例如甘油、可可脂)可以存在于包含具有本文所述式(I)至(V)中任一项的化合物的组合物中。
用于局部、皮下、皮内或病灶给药的组合物可以是乳剂或无菌溶液。作为溶剂或溶媒，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油，特别是橄榄油，或可注射的有机酯，在一些实施方式中，油酸乙酯。这些组合物还可以含有助剂，特别是润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。在一些实施方式中，灭菌可以通过几种方式进行，使用细菌过滤器、通过辐射或通过加热。它们还可以以无菌固体组合物的形式制备，所述无菌固体组合物可在使用时溶解在无菌水或任何其它可注射无菌介质中。
直肠给药的组合物是栓剂或直肠胶囊，除活性成分外，还含有赋形剂，如可可脂、半合成甘油酯或聚乙二醇。
组合物也可以是气溶胶，可以喷在受影响的区域。对于以液体气溶胶的形式使用，所述组合物可以是稳定的无菌溶液或在使用时溶解在不制热无菌水、盐水或任何其它药学上可接受的载体中的固体组合物。为了以打算直接吸入的干燥气雾剂的形式使用，活性成分被精细分割并与水溶性固体(在一些实施方式中，右旋糖酐、甘露醇或乳糖)稀释剂或载体组合。
在一些实施方式中，本文提供的组合物是药物组合物或单一单位剂型。本文提供的药物组合物和单一单位剂型包含有效量，预防或治疗有效量的一种或多种预防或治疗剂(例如，本文提供的化合物或其它预防或治疗剂)，以及典型的一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。在特定实施方式中并在此上下文中，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其他普遍认可的药典中列出的用于动物的，更具体地用于人类的。术语“载体”包括稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或给药载体。这样的药物载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物静脉给药时，水可用作载体。盐溶液以及葡萄糖水溶液和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物载体的实例在雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy)，第22版(2012年9月15日)中描述。
典型的药物组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂对于药剂学领域的技术人员是公知的，并且在一些实施方式中，合适的赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。特定赋形剂是否适合掺入药物组合物或剂型中取决于本领域公知的多种因素，包括但不限于将剂型施用给对象的方式和剂型中的特定活性成分。如果需要，组合物或单个单位剂型还可以含有少量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。
本文提供的无乳糖组合物可以包含本领域公知，并且在一些实施方案式中，在美国药典(USP 36-NF 31S2)中列出的的赋形剂。通常，无乳糖组合物包含活性成分、粘合剂/填料和药学相容量和药学可接受量的润滑剂。示例性无乳糖剂型包括活性成分、微晶纤维素、预糊化淀粉和硬脂酸镁。
本文还涵盖了无水药物组合物和剂型，其包含活性成分，因为水可以促进某些化合物的降解。例如水的加入(如5％)作为模拟长期贮存的一种方法在药学领域中被广泛接受，以确定例如制剂的保质期或随时间的稳定性等的特性。参见例如Jens T.Carstensen,药物稳定性：原理与实践，第二版，马塞尔德克(Marcel Dekker)，纽约，1995年，第379-80页。实际上，水和热加速了某些化合物的分解。因此，水对制剂的影响是非常重要的，因为在制剂的制造、处理、包装、储存、装运和使用过程中通常会遇到湿气和/或湿度。
本文提供的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低水分成分和低水分或低湿度条件制备。如果期望在制造、包装和/或储存过程中与水分和/或湿度大量接触，则包含乳糖和包含伯胺或仲胺的至少一种活性成分的药物组合物和剂型可以是无水的。
应制备和储存无水药物组合物，以保持其无水性质。因此，可以使用已知的防止暴露于水的材料包装无水组合物，使得它们可以被包括在合适的配方包中。在一些实施方式中，合适的包装包括但不限于：气密密封的箔片、塑料、单位剂量容器(如瓶)、罩板包装、和条状包装。
还提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低活性成分分解速率的化合物。在本文中称为“稳定剂”的这种化合物包括但不限于抗氧化剂，如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂。
所述药物组合物可为溶液剂、混悬剂、乳剂、凝胶剂、乳膏、软膏或气溶胶制剂。在一些实施方式中，所述组合物浸在合适的基质中以形成贴剂。在一些实施方式中，所述组合物是缓释制剂。制剂应以与给药方式(如:局部给药、皮下给药、皮内给药或病灶内给药)相适应。在一些实施方式中，药物组合物或单独单位剂型是无菌的，并且以适合形式给药给对象，在一些实施方式中，动物对象(如哺乳动物对象)，在某些实施方式中，为人。
一种药物组合物被配制成与其预期的给药途径相容。在一些实施方案式中，给药途径包括但不限于肠道外给药，如皮内、皮下、肌内、吸入、鼻内、滑膜内、直肠、局部、病灶内和黏膜给药。在一些实施方式中，给药途径是皮下给药、皮内给药、局部给药或病灶内给药。在一些实施方式中，给药途径是非全身给药。在特定实施方式中，所述组合物根据常规方法配制为适于向人皮下或局部给药的药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物根据常规方法配制为用于向人皮内或病灶内给药。通常，用于注射给药(如，皮内或皮下注射)的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液剂、乳液剂、混悬剂。必要时，所述组合物还可包含增溶剂和局部麻醉剂(例如利多卡因)，以在注射部位缓解疼痛。
在一些实施方案式中，剂型包括但不限于：软膏；巴布膏(泥罨剂(poultices))；糊剂；粉末；敷料剂；乳膏；膏药；溶液剂；贴片；气雾剂(如鼻腔喷雾剂、吸入剂或皮肤喷雾剂)；凝胶剂；适用于向对象皮肤给药的液体剂型，包括混悬剂(如含水或非含水液体悬浮液、水包油乳液或油包水液体乳液)、溶液剂和洗剂；适合于向对象粘膜给药的液体剂型；包括混悬剂(如含水或非含水液体悬浮液、水包油乳液或油包水液体乳液)、溶液剂和酏剂；适用于向对象肠胃外(如皮下或皮内)给药的液体剂型；和可被重组以提供适合于对对象进行胃肠外给药的液体剂型的无菌固体(如晶体或无定形固体)。
本文提供的剂型的组成、形状和类型通常根据它们的用途而变化。在一些实施方案式中，用于初治皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的剂型可以含有比用于维持治疗相同病症或疾病的剂型更大量的其所包含的一种或多种活性成分。类似地，与用于治疗相同疾病或病症的局部形式相比，胃肠外(皮内)剂型可包含更小量的其所含的一种或多种活性成分。本文所涵盖的特定剂型的这些和其他方式彼此不同，其对于本领域技术人员来说是显而易见的。参见，例如，雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy)；医药出版社；22版(2012年9月15日)。
通常，组合物的成分以单独供应或混合在一起以单位剂型提供，在一些实施方式中，作为在指示活性剂量的气密密封容器(如安瓿或小袋)中干燥的冻干粉末或无水浓缩物提供。当组合物要通过输液给药时，可以用装有无菌药物级水或盐水的输液瓶配药。在通过注射给药组合物的情况下，可以提供一安瓿的无菌注射用水或生理盐水，以便在给药前将成分混合。
典型的剂型包括本文提供的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物，在每天约0.1mg至约1000mg的范围内，在早晨以每天一次的单剂量给药，或以与食物一起全天分剂量服用。特定剂型可具有约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、100、200、250、500或1000mg活性化合物。
在某些情况下，本文描述的组合物包括润滑剂。可用于药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇类、硬脂酸、十二醇硫酸钠、滑石、氢化植物油(如花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、桂冠酸乙酯、琼脂，及它们的混合物。在一些实施方式中，另外的润滑剂包括微粉(syloid)硅胶(AEROSIL 200，由马里兰州巴尔的摩市的W.R.Grace公司制造)、合成二氧化硅的凝固气溶胶(由德克萨斯州普莱诺市的Degussa公司销售)、CAB O SIL(由马萨诸塞州波士顿市的Cabot公司销售的热解二氧化硅产品)，及它们的混合物。如果都使用，润滑剂通常以小于它们所掺入的药物组合物或剂型的约1重量％的量使用。
延迟释放剂型
活性成分如本文提供的化合物可通过本领域普通技术人员公知的控释手段或递送装置给药。在一些实施方式中，但不限于下述美国专利序列号中描述的那些：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,639,480；5,733,566；5,739,108；5,891,474；5,922,356；5,972,891；5,980,945；5,993,855；6,045,830；6,087,324；6,113,943；6,197,350；6,248,363；6,264,970；6,267,981；6,376,461；6,419,961；6,589,548；6,613,358；和6,699,500；其中每一个内容通过引用整体并入本文。这种剂型可用于提供一种或多种活性成分的缓慢或受控释放，在一些实施方式中，使用羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透***、多层涂层、微粒、脂质体、微球、或其组合以提供不同比例的所需释放曲线。本领域普通技术人员已知的合适的控释制剂，包括本文所述的制剂，可容易地选择用于与本文提供的活性成分一起使用并且可以在诸如绷带或贴片中使用。因此，本文所包括的是适合于皮肤给药的单独单位剂型，例如但不限于适合于控制释放的凝胶、软膏、贴片、乳膏、损害敷料等。
所有的控释药物产品都有一个共同的目标，即相对于它们对应的非控释药物改善药物治疗。理想地，在医疗中使用优化设计的控释制剂的特征在于，在最短的时间内使用最少的原料药来治愈或控制疾病或病症。控释制剂的优点包括延长的药物的活性、减少的剂量频率和增加的患者的依从性。此外，控释制剂可用于影响作用开始的时间或其它特性，例如药物的血液水平，并因此可影响一种或多种副(如不利的)作用的发生。
大多数控释制剂被设计成最初释放一定量的药物(活性成分)以迅速产生所需的治疗效果，并逐渐和持续地释放其他量的药物以在延长的时间内保持该水平的治疗或预防效果。为了在体内维持这种恒定的药物水平，药物必须以一种速率从剂型中释放出来，该速率将取代正在代谢和排出体外的药物量。活性成分的受控释放可由各种生理因素刺激，包括但不限于pH、温度、酶、水或其它皮肤癌相关的生理因素或化合物。
在一些实施方式中，药物可以使用透皮贴剂、脂质体或其他给药方式来给药。在一些实施方式中，可以使用聚合物材料。在一些实施方式中,可将受控释放***放置在患者中由本领域技术人员确定的适当位置处，即因此只需要全身剂量的一小部分(参见，例如，Goodson，控释药物的医学应用(Medical Applications of Controlled Release,)，卷2,第115-138页(1984年))。其他控释***在Langer的综述中描述(科学249：1527-1533(1990))。活性成分可以分散在固体内基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑聚氯乙烯、增塑尼龙、增塑聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、碳酸硅酮共聚物、亲水性聚合物如丙烯酸和甲基丙烯酸酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇和交联部分水解的聚乙酸乙烯酯，它们被不溶于体液的例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯与乙酸乙烯酯、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离聚物聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡胶环氧氯丙烷橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/乙酸乙烯酯/乙烯醇三元共聚物和乙烯/乙烯基氧乙醇的外部共聚物膜所包围。然后活性成分在释放速率控制步骤中扩散通过外部聚合物膜。这种肠胃外(如皮下)组合物中的活性成分的百分比高度取决于其特性以及患者的需要。
肠外(肌内、皮下、病灶内、皮内)剂型
在一些实施方式中，提供了肠外剂型。在一些实施方式中，肠胃外剂型可以通过各种途径给药至对象，包括但不限于皮下、肌肉内和皮内。在一些实施方式中，肠胃外剂型可以通过各种途径给药至对象，包括但不限于皮下、肌肉内、皮内或病灶内。因为它们的给药通常绕过对象对污染物的天然防御，胃肠外剂型通常是无菌的或能够在给药至对象前被消毒。在一些实施方式中，肠胃外剂型包括但不限于，准备注射用溶液、可溶解或悬浮在药学上可接受的注射载体中的干产品、注射用悬浮液和乳剂。
可用于提供肠胃外剂型的合适载体是本领域技术人员公知的。在一些实施方式中，合适的载体包括但不限于：注射用水USP；水性载体，例如但不限于氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、和乳酸林格氏注射液；水可混溶载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。
增加本文公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物也可以掺入到非肠道剂型中。
局部和粘膜剂型
还提供了局部和粘膜剂型。透皮、局部和粘膜剂型包括但不限于糊剂、、喷雾剂、气雾剂、乳膏、洗剂、软膏、凝胶、溶液剂、乳液、悬浮液或本领域技术人员已知的其它形式。参见，例如，雷明顿：药学的科学与实践；医药出版社；22版(2012年9月15日)；以及药物剂型介绍(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)，第4版，Lea&Febiger，费城(1985)。适用于治疗口腔内粘膜组织的剂型可配制成漱口水或口腔凝胶。此外，透皮剂型包括“储库型”或“基质型”贴剂，其可敷于皮肤并佩戴特定时间段以允许所需量的活性成分的渗透。
术语“药学上可接受的载体”是指携带或运输任何对象组合物或其组分所涉及的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。每个载体必须从与对象组合物及其组分兼容且不对患者有害的意义上而言是“可接受的”。可用于提供本文所包括的透皮、局部和在一些实施方式中，粘膜剂型的合适的载体(如赋形剂和稀释剂)和其它材料是制药领域的技术人员所熟知的，并且取决于将涂敷给定药物组合物或剂型的特定组织。考虑到这一事实，典型载体包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁烷1,3二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其混合物，以形成无毒和药学上可接受的洗剂、酊剂、乳膏、乳液、凝胶或软膏。在一些实施方式中，可用作药学上可接受的载体的材料包括：(1)糖类，如乳糖、葡萄糖、和蔗糖；(2)淀粉类，如玉米淀粉、和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)黄耆粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，如可可脂、栓剂蜡；(9)油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、和大豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多元醇类，如甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯、和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁、和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于药物制剂的其他无毒相容物质。如果需要，还可以在药物组合物和剂型中添加保湿剂(moisturizers)或湿润剂(humectants)。这种附件成分的实例在本领域中是公知的。参见例如雷明顿：药学的科学与实践(Remington:TheScience and Practice of Pharmacy)，第22版(2012年9月15日)。
根据待治疗的特定组织，可在使用所提供的活性成分进行治疗之前使用、与其结合使用或之后使用附加组分。在一些实施方式中，渗透促进剂可用于辅助将活性成分递送到组织。合适的渗透促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇类，如乙醇、油醇和四氢呋喃甲醇；烷基亚砜类，如二甲基亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮类,如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(Kollidon)等级(聚维酮(Povidone)、聚乙烯吡咯酮(Polyvidone))；尿素；和各种水溶性或不溶性糖酯如吐温80(聚山梨醇酯80)和斯盘60(Span 60)(山梨醇单硬脂酸酯)。
还可以调节药物组合物或剂型的pH值，或药物组合物或剂型施加到的组织的pH值，以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力(tonicity)以改善递送。还可以向药物组合物或剂型中添加诸如硬脂酸酯的化合物，以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲油性，从而改善递送。在这方面，硬脂酸盐可用作制剂的脂质载体、乳化剂或表面活性剂以及作为递送增强或渗透增强剂。可使用活性成分的不同盐、水合物或溶剂化物来进一步调节所得组合物的性质。
剂量和单位剂型
在人类治疗学中，医生将根据预防性或治疗性治疗，并根据待治疗对象特有的年龄、体重、病症或疾病的阶段和其他特定因素，确定他认为最合适的剂量学。在一些实施方式中，剂量为成人每天约1至约1000mg，或成人每天约5至约250mg或每天约10至50mg。在一些实施方式中，剂量为每个成人每天约5至约400mg或每天25至200mg。在一些实施方式中，也考虑到每天约50至约500mg的剂量率。
在其它方面，提供了通过向有需要的对象施用治疗有效量或有效量的本文提供的化合物或其药学上可接受的盐来治疗对象中的皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的方法。在治疗皮肤癌或其一种或多种症状中的具有治疗或有效的化合物或组合物的量将随疾病或病症的性质和严重程度以及活性成分的施用途径而变化。频率和剂量也将根据每个对象的特定因素而变化，取决于特定疗法(如治疗剂或预防剂)、病症、疾病或病况的严重程度、给药途径以及对象的年龄、身体、体重、反应和既往病史。有效剂量可由衍生自体外或动物模型试验***的剂量-反应曲线推测到。
在一些实施方式中，组合物的示例性剂量包括每千克对象或样品重量的毫克或微克量的活性化合物(例如，每千克约10微克至每千克约50毫克，每千克约100微克至每千克约25毫克，或每千克约100微克至每千克约10毫克)。对于本文提供的组合物，在一些实施方式中，给予对象的剂量为对象体重的0.140mg/kg至3mg/kg，基于活性化合物的重量。在一些实施方式中，施用给对象的剂量为对象体重的0.20mg/kg和2.00mg/kg之间、0.30mg/kg和1.50mg/kg之间、1mg/kg和100mg/kg之间、5mg/kg和50mg/kg之间、10mg/kg和50mg/kg之间、20mg/kg和50mg/kg之间、15mg/kg和40mg/kg之间、15mg/kg和35mg/kg之间、15mg/kg和30mg/kg之间、25mg/kg和35mg/kg、10mg/kg和30mg/kg之间、10mg/kg和20mg/kg之间、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg，或约50mg/kg。
在一些实施方式中，本文提供的用于本文所述疾病或病症的组合物的推荐每日剂量范围在每天约0.1mg至约1000mg的范围内，以每日一次的单剂量或全天的分剂量给出。在一些实施方式中，每日剂量以等分剂量每日给药两次。在一些实施方式中，每日剂量范围应为每天约10mg至约200mg，在一些实施方式中，每天约10mg至约150mg，在其他实施方式中，每天约25mg至约100mg。在某些情况下可能需要使用本文公开的范围之外的活性成分的剂量，这对于本领域普通技术人员将是显而易见的。此外，应注意的是，临床医生或治疗医生将知道如何和何时结合患者反应来中断、调整或终止治疗。
不同的治疗有效量或有效量可适用于不同的疾病和病况，如本领域普通技术人员容易知道的那样。类似地，足以预防、控制、治疗或改善这种病症，但不足以引起或足以减少与本文提供的组合物相关的不良影响的量也包括在本文所述的剂量量和剂量频率表中。此外，当给对象被施用多个剂量的本文提供的组合物时，不是所有剂量都需要相同。在一些实施方式中，给予对象的剂量可以增加以改善组合物的预防或治疗效果，或者可以减少以减少特定对象正在经历的一种或多种副作用。
在一些实施方式中，给药以预防、治疗、控制或改善对象的病症或一种或多种其症状本文提供的组合物的剂量，基于活性化合物的重量，为对象体重的0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg或15mg/kg或更多。在一些实施方式中，所述组合物或本文提供的给药以预防、治疗、控制或改善对象中疾病或一种或多种其症状的组合物的剂量为0.1mg至200mg、0.1mg至100mg、0.1mg至50mg、0.1mg至25mg、0.1mg至20mg、0.1mg至15mg、0.1mg至10mg、0.1mg至7.5mg、0.1mg至5mg、0.1至2.5mg、0.25mg至20mg、0.25至15mg、0.25至12mg、0.25至10mg、0.25mg至7.5mg、0.25mg至5mg、0.5mg至2.5mg、1mg至20mg、1mg至15mg、1mg至12mg、1mg至10mg、1mg至7.5mg、1mg至5mg、或1mg至2.5mg的单位剂量。
在一些实施方式中，治疗或预防可以用一个或多个负荷剂量(loading dose)的本文提供的化合物或组合物开始，然后再用一个或多个维持剂量。在这样的实施方式中，负荷剂量可以是，例如，每天约60至约400mg、或每天约100至约200mg，持续1天至5周。负荷剂量之后可以是一个或多个维持剂量。在一些实施方式中，各个维持剂量独立地为约每天约10mg至约200mg、每天约25mg和约150mg之间、或每天约25和约80mg之间。维持剂量可以每日给药，可作为单剂量或作为分剂量给药。
在一些实施方式中，本文提供的化合物或组合物的剂量可以施用以在患者的血液或血清中实现活性成分的稳态浓度。稳态浓度可以通过根据技术人员可用的技术进行测量或者可以基于患者的身体特征(如身高、体重和年龄)来确定。在一些实施方式中，施用足够量的本文提供的化合物或组合物，以在患者的血液或血清中实现约300至约4000ng/mL、约400至约1600ng/mL或约600至约1200ng/mL的稳态浓度。在一些实施方式中，可施用负荷剂量以在1至5天内获得约1200至约8000ng/mL或约2000至约4000ng/mL的稳态血液或血清浓度。在一些实施方式中，可施用维持剂量以在患者的血液或血清中获得约300至约4000ng/mL、约400至约1600ng/mL或约600至约1200ng/mL的稳态浓度。
在一些实施方式中，可以重复给药相同组合物，并且给药可以间隔至少6小时、12小时、1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。在一些实施方式中，可以重复给药相同的预防或治疗剂，并且给药可以间隔至少至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。
在某些方面，本文提供的是单位剂量，其包含适合给药形式的化合物或其药学上可接受的盐。本文详细描述了这些形式。在一些实施方式中，单位剂量包括1至1000mg、5至250mg或10至50mg的活性成分。在特定实施方式中，单位剂量包含约1、5、10、25、50、100、125、250、500或1000mg的活性成分。这样的单位剂量可以根据本领域技术人员熟悉的技术制备。
剂量可以在取决于所使用的剂型和使用的给药途径的范围内变化。对于任何化合物，治疗有效剂量或有效量可以从细胞培养分析中初步估计。可以在动物模型中配制一种剂量以在有皮肤癌(如本文描述的cSCC)的皮肤中达到一定水平，包括在细胞培养中测定的IC50(即达到症状最大抑制的一半的测试化合物的浓度)。这些信息可用于更准确地确定对人体有用的剂量。此外，可以通过例如高效液相色谱法测量血浆中的水平，以确定全身暴露。
还应理解，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方式将取决于多种因素，包括所使用的特定化合物的活性、年龄、病变的大小、病变的数量、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、药物组合、以及治疗医师的判断和正在治疗的特定疾病的严重程度。在组合物中软MEK抑制剂(如本文所述的软MEK抑制剂)的量也将取决于组合物中的特定软MEK抑制剂。
在一些实施方式中，局部(topical)、皮下、皮内或病灶内剂量为约0.01μg/cm2、约0.05μg/cm2、约0.1μg/cm2、约0.15μg/cm2、约0.2μg/cm2、约0.3μg/cm2、约0.4μg/cm2、约0.5μg/cm2、约0.6μg/cm2、约0.7μg/cm2、约0.8μg/cm2，或约0.9μg/cm2；或在约0.01-0.03μg/cm2、约0.03-0.05μg/cm2、约0.05-0.1μg/cm2、约0.1-0.3μg/cm2、约0.3-0.5μg/cm2、约0.5-0.8μg/cm2、约0.8-1.0μg/cm2、约1-10μg/cm2、约10-20μg/cm2、约20-30μg/cm2、约30-40μg/cm2、约40-50μg/cm2、约50-60μg/cm2、约60-70μg/cm2、约70-80μg/cm2、约80-90μg/cm2、约90-100μg/cm2、约100-125μg/cm2、约125-150μg/cm2、约150-175μg/cm2、约175-200μg/cm2、约200-250μg/cm2、约250-300μg/cm2、约300-350μg/cm2、约350-400μg/cm2、约400-450μg/cm2、约450-500μg/cm2、约500-550μg/cm2、约550-600μg/cm2、约600-650μg/cm2、约650-700μg/cm2、约700-750μg/cm2、约750-800μg/cm2、约800-850μg/cm2、约850-900μg/cm2、约900-950μg/cm2或约950-1000μg/cm2范围内。
在一些实施方式中，局部、皮下、皮内或病灶内剂量为在约0.5-1.0mg/cm2、1.0-1.5mg/cm2、1.5-2.0mg/cm2、2.5-2.5mg/cm2、3.0-3.5mg/cm2、3.5-5.0mg/cm2、5.0-7.5mg/cm2、7.5-10mg/cm2、1-10mg/cm2、约10-20mg/cm2、约20-30mg/cm2、约30-40mg/cm2、约40-50mg/cm2、约50-60mg/cm2、约60-70mg/cm2、约70-80mg/cm2、约80-90mg/cm2、约90-100mg/cm2、约100-125mg/cm2、约125-150mg/cm2、约150-175mg/cm2、约175-200mg/cm2、约200-250mg/cm2、约250-300mg/cm2、约300-350mg/cm2、约350-400mg/cm2、约400-450mg/cm2、约450-500mg/cm2、约500-550mg/cm2、约550-600mg/cm2、约600-650mg/cm2、约650-700mg/cm2、约700-750mg/cm2、约750-800mg/cm2、约800-850mg/cm2、约850-900mg/cm2、约900-950mg/cm2或约950-1000mg/cm2范围内。
VI.试剂盒
还提供了试剂盒，其用于治疗或预防有需要的受试者的皮肤癌(例如MEK-抑制剂响应性或MEK-介导的皮肤癌)的方法。所述试剂盒可包括本文提供的化合物或组合物、第二试剂或组合物、以及向医疗服务人员提供关于治疗皮肤癌(例如MEK-抑制剂响应性或MEK-介导的皮肤癌)的用法的信息的说明书。说明书可以以印刷形式提供，也可以以诸如软盘、CD或DVD之类的电子介质的形式提供，或者以可获得此类说明书的网站地址的形式提供。本文提供的化合物或组合物或第二试剂或组合物的单位剂量可以包括这样的剂量，即当给予受试者时，所述化合物或组合物的治疗有效血浆水平可以在受试者中保持至少1天。在一些实施方式中，化合物或组合物可以作为无菌水性药物组合物或干粉(例如,冻干)组合物。
在一些实施方式中，提供了合适的包装。如本文所用，“包装”包括通常用于***中的固体基质或材料，并能够在固定限度内容纳本文提供的化合物和/或适用于给药对象的第二试剂。这些材料包括玻璃和塑胶(例如聚乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯)瓶、小瓶、纸、塑料和塑料箔层压封套等。如果使用电子束杀菌技术，包装应具有足够低的密度，以允许对内容物进行杀菌。
VII.联合疗法
在一些实施方式中，本文提供的化合物和组合物可用于在有需要的对象中治疗皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的方法，所述方法包括进一步施用能有效治疗皮肤癌的第二药剂。第二药剂可以是本领域技术人员已知的对治疗皮肤病症或疾病有效的任何药剂，包括目前由美国食品和药物管理局或美国以外国家的其他类似机构批准的药剂。
在一些实施方式中，本文提供的化合物与一种第二药剂联合给药。在进一步的实施方式中，本文提供的化合物与两种第二药剂联合给药。在依旧进一步的实施方式中，本文提供的化合物与两种或更多的第二药剂联合给药。
在一些实施方式中，所述方法包括下述步骤：将有效治疗有需要的对象中的皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的量的化合物，与有效治疗或预防有需要的对象中的皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)的第二药剂联合施用(例如，局部、皮下、皮内或病灶内施用)给有需要的对象。所述化合物可以是本文所述的任何化合物，并且所述第二药剂可以是本领域或本文所述的任何第二药剂。在一些实施方式中，所述化合物为药物组合物或剂型的形式，如本文其他地方所述。
如本文所用，术语“联合”包括使用多于一种疗法(例如一种或多种预防和/或治疗剂)。使用术语“联合”并不限制治疗(如预防和/或治疗剂)给予患有疾病的对象的顺序。第一种疗法(例如预防或治疗剂如本文提供的化合物)可以在向患有疾病的对象施用第二药剂(如一种预防或治疗剂)之前(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)，同时施用第二药剂或在施用第二药剂之后(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)。
如本文所用，术语“协同”包括本文提供的化合物和已经或正在被用于预防、控制或治疗疾病的另一种疗法(如预防剂或治疗剂)的联合，其比这些疗法的叠加效果更有效。联合疗法(如预防剂或治疗剂的联合)的协同作用允许对患有病症的对象使用较低剂量的一种或多种疗法和/或较少频率的施用所述疗法。使用较低剂量的疗法(如预防或治疗剂)和/或更低频率地施用所述疗法降低了与向对象施用所述疗法相关联的毒性，而不降低所述疗法在预防或治疗疾病中的功效)。此外，协同效应可导致改进药剂在预防或治疗病症中的功效。最后，协同疗法(如预防或治疗剂的组合)可避免或减少与单独使用任何一种疗法相关的一种或多种不良或不期望的副作用。
本文提供的活性化合物可以与另一种治疗剂组合或交替施用，特别是能有效治疗有需要的对象中的皮肤癌(如MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤癌)。在联合治疗中，一起给药两种或多种药剂的有效剂量，而在交替或顺序步骤治疗中，连续或顺序给药每种药剂的有效剂量。给予的剂量取决于药物的吸收、失活和***率以及本领域技术人员已知的其它因素。需要注意的是，剂量值还将随着待缓解的皮肤癌的严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定的对象，特定的剂量方案和时间表应根据个体需要和管理或监督组合物施用的人的专业判断随时间而调整。
在一些实施方式中，本文提供了在联合治疗中使用的第二药剂的剂量。在一些实施方式中，在本文提供的联合疗法中使用的剂量低于已经或当前用于治疗MEK抑制剂响应性或MEK介导的皮肤病症的剂量。第二药剂的推荐剂量可从本领域技术人员的知识中获得。对于那些被批准用于临床的第二药剂，推荐剂量在例如Hardma等人编辑,1996,古德曼&吉尔曼治疗学的药理学基础(Goodman&Gilman The Pharmacological Basis OfTherapeutics)第九版,Mc-Graw-Hill,纽约；医师案头参考(PDR)第57版,2003,医药经济股份有限公司(Medical Economics Co.,Inc.),蒙特威尔,新泽西州；其全部并入本文作为参考。
本公开提供了通过将本文的MEK抑制剂，如软MEK抑制剂和一种或多种另外的药剂一起给药的联合治疗。在一些实施方式中，所述一种或多种另外的药剂选自：
治疗痤疮的药剂(如维甲酸(Accutane)、壬二酸、过氧化苯甲酰、水杨酸)；
镇痛药(如对乙酰氨基酚、辣椒素)，例如Cox2抑制剂，如塞来昔布(Celecoxib))；
***(如苯佐卡因(Benzocaine)、苯佐卡因/薄荷醇、地布卡因(Dibucaine)、地哌冬(Diperodon)、利多卡因(Lidocaine)、利多卡因/丙胺卡因(Prilocaine)、普莫卡因(pramoxine))；
抗感染药(如克罗米通(Crotamiton))；
抗瘙痒药(如乳酸铵、苯佐卡因、子囊霉素大环内酰胺，如吡美莫司(Pimecrolimus))；
抗瘙痒药/5HT3受体拮抗剂(如昂丹司琼(Ondansetron))；
抗生素(如克林霉素、强力霉素、红霉素、四环素)；
反副交感神经生理作用的止吐药(如苯海拉明)；
抗纤维化药(如胶原酶、吡非尼酮)；
抗组胺药(如曲普利啶
Figure BDA0003170052860000841
非索非那定
Figure BDA0003170052860000842
阿斯特罗/阿斯特林(Astepro/Astelin)鼻喷剂(氮卓斯汀(Azalastine))
Figure BDA0003170052860000843
盐酸羟嗪
Figure BDA0003170052860000844
Figure BDA0003170052860000851
)、盐酸苯海拉明
Figure BDA0003170052860000852
溴苯那敏(
Figure BDA0003170052860000853
感冒和过敏反应酏剂)、
Figure BDA0003170052860000854
(西替利嗪)、
Figure BDA0003170052860000855
(氯苯吡胺(Chlorpheniramine))、地氯雷他定(Descoratadine)
Figure BDA0003170052860000856
Figure BDA0003170052860000857
氯雷他定(
Figure BDA0003170052860000858
和
Figure BDA0003170052860000859
)、茶苯海明
Figure BDA00031700528600008510
苯海拉明
Figure BDA00031700528600008511
多西拉敏
Figure BDA00031700528600008512
Figure BDA00031700528600008513
加强夜间感冒药)、赛庚啶
Figure BDA00031700528600008514
异丙嗪
Figure BDA00031700528600008515
阿伐斯汀(Acrivastine)
Figure BDA00031700528600008516
Figure BDA00031700528600008517
氯马斯汀(Clemastine)
Figure BDA00031700528600008518
多西拉敏
Figure BDA00031700528600008519
左西替利嗪(Levoceterizine)
Figure BDA00031700528600008520
肥大细胞稳定剂(例如β2-肾上腺素能激动剂、色甘酸、色甘酸钠、
Figure BDA00031700528600008521
酮替芬、甲基黄嘌呤、奥马珠单抗、哌罗来斯(Pemirolast)、槲皮素、酮替芬
Figure BDA00031700528600008522
)；
抗炎药(例如NSAID(如阿司匹林、胆碱和水杨酸镁、双氯芬酸钾
Figure BDA00031700528600008523
双氯芬酸钠
Figure BDA00031700528600008524
双氯芬酸钠与米索前列醇
Figure BDA00031700528600008525
Figure BDA00031700528600008526
二氟尼柳
Figure BDA00031700528600008527
依托度酸
Figure BDA00031700528600008528
非诺洛芬钙
Figure BDA00031700528600008529
氟比洛芬
Figure BDA00031700528600008530
布洛芬
Figure BDA00031700528600008531
Figure BDA00031700528600008532
Figure BDA00031700528600008533
吲哚美辛
Figure BDA00031700528600008534
酮洛芬
Figure BDA00031700528600008535
水杨酸镁(Arthrita、
Figure BDA00031700528600008536
选择、多恩片(Doan’pill)、美根(Magan)、Mobidin、Mobogesic)甲氯芬那酸钠
Figure BDA00031700528600008537
Figure BDA00031700528600008538
甲芬那酸
Figure BDA00031700528600008539
美洛昔康
Figure BDA00031700528600008540
纳布美通(Nabumetone)
Figure BDA00031700528600008541
萘普生
Figure BDA00031700528600008542
萘普生钠
Figure BDA00031700528600008543
Figure BDA00031700528600008544
恶丙嗪(Oxaprozin)
Figure BDA00031700528600008545
吡罗昔康
Figure BDA00031700528600008546
罗非昔布
Figure BDA00031700528600008547
双水杨酯(Salsalate)(Amigesic、Anaflex 750、Disalcid、Marthritic、Mono-Gesic、Salflex、Salsitab)、水杨酸钠、舒林酸
Figure BDA00031700528600008548
托美丁钠
Figure BDA00031700528600008549
伐地昔布(Valdecoxib)
Figure BDA00031700528600008550
)；
受体酪氨酸激酶抑制剂(如舒尼替尼)；
烷化剂(如达卡巴嗪、卡铂)；
CDK4/6抑制剂(如LEE011)；
PKC抑制剂(如AEB071)；
MAPK抑制剂(如RAS抑制剂/法尼基转移酶抑制剂(如替吡法尼(Tipifarnib))、Raf激酶抑制剂(如索拉非尼(BAY43-9006、多吉美(Nexavar))、维莫非尼(Vemurafenib)、达拉菲尼(Dabrafenib)、LGX818、TAK-632、MLN2480、PLX-4720)、ERK抑制剂(如SCH772984、VTX11e)；
BRAF抑制剂(如维莫非尼、达拉菲尼)；
PI3K抑制剂(如LY294002)；
AKT抑制剂(如MK 2206)；
PI3K/AKT抑制剂(如布帕尼西(buparlisib)、西妥木单抗(Cixutumumab))；
mTOR抑制剂(如外用雷帕霉素、RAD001(依维莫司/雷帕霉素)、替西罗莫司、西罗莫司)；
酪氨酸激酶抑制剂(如伊马替尼
Figure BDA0003170052860000861
卡博替尼(酪氨酸激酶c-Met和VEGFR2抑制剂)、尼罗替尼
Figure BDA0003170052860000862
VEGF抑制剂(如雷珠单抗
Figure BDA0003170052860000863
西地尼布)；
免疫反应调节剂(如局部咪喹莫特、干扰素、PEG干扰素)；
钙通道阻断剂(如Avocil(美德玛(Mederma))/15％维拉帕米、单独的维生素D、多西环素注射液)；
他汀(如洛伐他汀、甲氨蝶呤、长春花碱、普瑞巴林、替莫唑胺、PLX3397)；
HDAC抑制剂(如AR-42)；
HSP-90抑制剂(如格拉替雷(Ganetespib))；
维甲酸类(如阿达帕林、异维A酸、他扎罗汀、维A酸)；
类固醇(如阿氯米松、安西奈德、倍他米松、二丙酸倍他米松、增强型(augmented)二丙酸倍他米松、布***、丙酸氯倍他索(Clobetasol propionate)、可的松、***、***、醋酸双氟拉松(Diflorasone diacetate)、醋酸氟轻松(Fluocinoloneacetonide)、氟轻松(fluocinonide)、氟氢缩松(Flurandrenolide)、丙酸氟替卡松(Fluticasone propionate)、丙酸卤贝他松(Halobetasol propionate)、氯氟舒松(Halocinonide)、氢化可的松、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、甲基强的松龙、莫米松、糠酸莫米松、泼尼卡酯(prednicarbate)、***龙(prednisolone)、强的松、氟羟氢化***、曲安奈德)；
局部钙调磷酸酶抑制剂(如吡美莫司(pimecrolimus)(爱宁达
Figure BDA0003170052860000864
乳膏1％，诺华(Novartis)，他克莫司(tacrolimus)(普特彼
Figure BDA0003170052860000865
软膏，安斯泰来(Astellas)))；和
非药物干预(如光动力疗法(Levulan Kerastick外用+光疗)、电干燥法(ED)、YAG激光)。
在各种实施方式中，疗法(如本文提供的化合物和第二药剂)间隔至少5分钟、间隔至少30分钟、间隔至少1小时、间隔约1小时、间隔约1小时至约2小时、间隔约2小时至约3小时、间隔约3小时至约4小时、间隔约4小时至约5小时、间隔约5小时至约6小时、间隔约6小时至约7小时、间隔约7小时至约8小时、间隔约8小时至约9小时、间隔约9小时至约10小时、间隔约10小时至约11小时、间隔约11小时至约12小时、间隔约12小时至18小时、间隔18小时至24小时、间隔24小时至36小时、间隔36小时至48小时、间隔48小时至52小时、间隔52小时至60小时、间隔60小时至72小时、间隔72小时至84小时、间隔84小时至96小时、或间隔6小时至120小时给药。在各种实施方式中，疗法间隔不超过24小时或不超过48小时给药。在一些实施方式中，在同一患者就诊中给予两种或更多种疗法。在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二药剂同时给药。
在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二药剂间隔约2至4天、间隔约4至6天、间隔约1周、间隔约1至2周或间隔超过2周给药。
在一些实施方式中，可以重复给药相同药剂，并且给药可以间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。在一些实施方式中，可以重复给药相同的药剂，并且给药可以间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。
在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二药剂以顺序且在时间间隔内给药给患者，在一些实施方式中，给药给哺乳动物，例如人，使得本文提供的化合物可以与其他药剂一起作用，以提供比以其他方式给药时增加的益处。在一些实施方式中，第二活性剂可以同时施用或以任何顺序依次在不同时间及时施用；然而，如果不是同时施用，它们应该在时间上足够近下给药，以便提供所需的治疗或预防效果。在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二活性剂在重叠的时间发挥其作用。每个第二活性剂可以以任何适当的形式和通过任何适当的途径单独施用。在一些实施方式中，本文提供的化合物在给药第二活性剂之前、同时或之后给药。
在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二药剂循环给药给患者。循环疗法包括施用第一药剂(如第一预防或治疗剂)持续一段时间，随后施用第二药剂和/或第三药剂(如第二和/或第三预防或治疗剂)持续一段时间并重复该顺序的给药。循环疗法可以减少对一种或多种疗法的耐药性的发展，避免或减少一种疗法的一种或多种副作用，和/或提高治疗的疗效。
在一些实施方式中，本文提供的化合物和第二活性剂以少于约3周、约每两周一次、约每10天一次或约每周一次的周期给药。一个循环可以包括通过每次循环约90分钟、每次循环约1小时、每次循环约45分钟的输液给药本文提供的化合物和第二药剂。每个循环可以包括至少1周的暂停、至少2周的暂停、至少3周的暂停。给药的循环数为约1至约12个循环，更典型地为约2至约10个循环，更典型地为约2至约8个循环。
在一些实施方式中，患者同时接受不同疗程的治疗，即在一定的时间间隔内单独施用单独剂量的第二试剂，使得本文提供的化合物可以与第二活性试剂一起作用。在一些实施方式中，一种组分可与可每两周或每三周施用一次的其他组分联合每周施用一次。换句话说，即使不是同时或在同一天给药，给药方式也是同时进行的。
第二试剂可与本文提供的化合物起相加或协同作用。在一些实施方式中，本文提供的化合物在相同的药物组合物中与一种或多种第二试剂同时施用。在一些实施方式中，本文提供的化合物在单独的药物组合物中与一种或多种第二试剂同时施用。在一些实施方式中，本文提供的化合物在使用第二药剂之前或之后施用。还考虑了通过相同或不同的给药途径(如口服和肠道外)施用本文提供的化合物和第二药剂。在一些实施方式中，当本文提供的化合物与潜在产生包括但不限于毒性的一种或多种不良副作用的第二药剂同时施用时，第二活性剂可有利地以低于引起不良副作用的阈值的剂量施用。
VIII.实施例
通用合成方法
本文提供的化合物可通过对本领域技术人员显而易见的任何方法制备、分离获得。本文提供的化合物可以根据下面提供的示例性制备方案制备。示例性制备方案中未提供的反应条件、步骤和反应物对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且是已知的。如本文所使用，在这些过程、方案和实施例中使用的符号和惯例，无论特定缩写是否被具体定义，都与当代科学文献(例如是《美国化学学会杂志》或《生物化学杂志》)中使用的符号和惯例一致。具体地，但不限于，以下缩写可在实施例中和整个说明书中可以使用：g(克)；mg(毫克)；mL(毫升)；μL(微升)；mM(毫摩尔)；μM(微摩尔)；Hz(赫兹)；MHz(兆赫兹)；mmol(毫摩尔)；hr或hrs(小时)；min(分钟)；MS(质谱)；ESI(电喷雾离子化)；TLC(薄层色谱)；HPLC(高效液相色谱)；THF(四氢呋喃)；CDCl3(氘代氯仿)；AcOH(乙酸)；DCM(二氯甲烷)；DMSO(二甲基亚砜)；DMSO-d6(氘化二甲基亚砜)；EtOAc(乙酸乙酯)；MeOH(甲醇)；Tces(2,2,2-三氯乙氧基磺酰基)；-Si(tert-Bu)(Ph)2和-SitBuPh2(叔丁基-二苯基硅烷基)；和BOC(叔丁氧羰基)。
对于以下所有实施例，可以使用本领域技术人员已知的标准处理和纯化方法。除非另有说明，所有温度均以℃(摄氏度)表示。除非另有说明，所有反应都在室温下进行。本文中所示的合成方法旨在通过使用特定的例子来举例说明适用的化学物质，并且不表示本公开的范围。
式(I)化合物
式(Ia)化合物可根据如图7所示方案I-1制备，其中，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；X1、R2、R2a、R13、R13a、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R13和R13a都为氢。
从市售或常规可得的式(I-101)的酸和市售或常规可得的式(I-102)的苯胺开始，式(I-103)的化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。式(I-103)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(I-103)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(I-103)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(Ia)化合物。
式(Ia)化合物可根据如图8所示方案I-2制备，其中，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2为碘；R13b为氟；R2a、R13、R13a、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R13和R13a都为氢。
从市售或常规可得的式(I-104)的酸和市售或常规可得的式(I-105)的苯胺开始，式(I-106)的化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。然后在催化剂如Pd(PPh3)4存在下，用Zn(CN)2处理式(I-106)化合物。在三氟乙酸银存在下，用碘处理(I-107)或可选地用一氯化碘处理(I-107)制备得到式(I-108)的化合物。式(I-108)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(I-108)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(I-108)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5aRa-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(Ia)化合物，其中，R2为碘，R13b为氟。
式(Ib)化合物可根据如图9所示方案I-3制备，其中，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2为碘；R3b为氟；R2a、R13、R13a、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R13和R13a都为氢。在一些实施方式中，R3为氢，R13a为氟。
从市售或常规可得的式(I-109)的酸和市售或常规可得的式(I-105)的苯胺开始，式(I-110)的化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。或者，式(I-110)的化合物可以通过本领域已知的方法转化为式(I-111)的甲酯。然后在催化剂如Pd(PPh3)4存在下，用Zn(CN)2处理式(I-110)或式(I-111)化合物。在三氟乙酸银存在下，用碘处理式(I-110)或式(I-111)化合物或可选地用一氯化碘处理，制得式(I-114)或(I-115)化合物。在式(I-115)化合物的情况下，甲酯然后水解成相应的酸。式(I-114)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(I-114)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(I-114)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(Ib)化合物。
式(II)化合物
式(II)化合物可根据分别如图10-14所示方案II-1、II-2、II-3、II-4和II-5制备，如方案II-1、II-2、II-3、II-4和II-5所示，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；X2、R2、R2a、R23、R23a、R23b、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，X2为甲基。在一些实施方式中，X2为甲基；R23和R23b都为氢；和R23a为氟、甲基或甲氧基。在一些实施方式中，X2为甲基，和R23、R23a和R23b都为氢。
式(II)化合物可以按照图10所示的方案II-1制备，从市售可得的中间体(II-101)开始。式(II-102)化合物是由中间体(II-101)与X2-LG烷基化制备，其中，LG为合适的离去基团。式(II-103)化合物可通过本领域技术人员显而易见的方法制备，并通过碘化转化为式(II-104)化合物。然后在Pd催化剂存在下，式(II-104)化合物与苯胺反应，得到式(II-105)化合物。在三氟乙酸银存在下，用碘处理(II-106)或用一氯化碘处理(I-107)制备得到式(II-106)的化合物。式(II-106)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(II-106)与亚硫酰氯反应生成的酰氯。然后酰氯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(II)化合物，其中，R2为碘。
式(II)化合物可以按照图11所示的方案II-2制备，从市售或容易获得的式(II-107)中间体开始。式(II-108)化合物是由中间体(II-107)与X2-LG烷基化制备，其中，LG为合适的离去基团。式(II-109)化合物可通过本领域技术人员显而易见的氯化方法制备。然后将式(II-109)化合物与苯胺反应，得到式(II-110)化合物，该化合物进一步转化为式(II-111)的酸。式(II-111)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(II-111)与亚硫酰氯反应生成的酰氯。然后酰氯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(II)化合物。
式(II)化合物可以按照图12所示的方案II-3制备，从市售或容易获得的式(II-107)中间体开始。式(II-108)化合物是由中间体(II-107)与X2-LG烷基化制备，其中，LG为合适的离去基团。式(II-112)化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备，通过将腈基水解成酸，对酸基保护，并氯化。然后将式(II-112)化合物与苯胺反应，得到式(II-113)化合物，该化合物进一步水解为式(II-114)的酸。式(II-114)的含酸化合物可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(II-114)与亚硫酰氯反应生成的酰氯。或者，式(II-113)化合物按照方案II-4或II-5所述的方法，可以直接转化为酰氯或活化酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(II)化合物。
式(II)化合物可以按照图13所示的方案II-4制备，从市售可得或容易获得的式(II-115)中间体开始。通过对(II-115)的吡咯氮进行N-烷基化制备的中间体(II-116)容易转化为三氟甲基酮中间体(II-117)，水解为相应的酸(II-118)，并通过本领域技术人员显而易见的方法，通过酯化转化为叔丁酯(II-119)。通过用碱如LDA处理(II-119)，在中间体(II-119)的2-位进行氯化，然后用氯化剂如全氯乙烷处理，得到氯化中间体(II-120)。在碱存在下，用合适的苯胺置换中间体(II-120)的氯得到中间体(II-121)，该中间体可通过用亚硫酰氯处理，加入或不加入二氧六环中的4N HCl，而容易地转化为相应的酰氯(II-122)(J.Org.Chem.,2017,82(6),pp 3245–3251)。可选地，中间体(II-122)可通过用醇如五氟苯酚处理而转化为活化酯。然后酰氯或活化酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(II)化合物。
此外，式(II)化合物可以通过如图14所示的方案II-5中给出的合成路线制备。在(II-107)的吡咯氮上进行N-烷基化制备的腈(II-108)可水解成相应的酸并酯化成叔丁酯(II-120)。然后，按照方案II-4的顺序，可以制备式(II)的化合物。
式(III)化合物
式(IIIa)化合物可根据分别如图15-16所示方案III-1或III-2制备。如方案III-1或III-2所示，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2、R2a、R33、R33a、R33b、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R33a和R33b都为氢；和R33为氟、甲基或甲氧基。在一些实施方式中，R33和R33b都为氢；和R33a为氟、甲基或甲氧基。在一些实施方式中，R33和R33a都为氢，R33b为氟、甲基或甲氧基。在一些实施方式中，X2为甲基，和R33、R33a和R33b都为氢。
式(IIIa)化合物可根据如图15所示的方案III-1制备。从市售或常规可得的取代异硫氰酸苯酯(III-101)和中间体(III-102)开始，中间体(III-103)可通过本领域技术人员显而易见的方法制备。在适当溶剂(如二氯甲烷或二氧六环)中，中间体(III-103)可通过与适当酸(如盐酸或三氟乙酸)接触即可水解，得到中间体(III-104)。酸中间体(III-104)可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以生成含与羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(III-104)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(III-104)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(IIIa)化合物。
或者，其中R2为C2-C6炔基的式(IIIa)化合物可以根据如图16所示的方案III-2，从式(IIIa)化合物(其中，R2最初为碘(即式III-105))制备。可以采用类似于发表在药物化学杂志(Journal of Medical Chemistry)2007，50，5090-5102中的反应条件来提供从芳香碘基到炔烃的转化。中间体(IIIa-107)可以使用本文和以上方案III-1描述的方法转化为式(IIIa)化合物。
式(IV)化合物
式(IVa)、(IVb)和(IVc)化合物可根据如图17所示方案IV-1制备，其中，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2、R2a、R43a、R4、R5、R5a、R5b、R6、R46、R48和R48a如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。
从市售或常规可得式(IV-101)苯胺和硫光气开始，中间体(IV-102)可通过本领域技术人员显而易见的方法制备。在碱和溶剂存在下，中间体(IV-102)可容易地与式(IV-103)的中间体缩合，然后用式(IV-104)中间体处理，得到式(IV-105)中间体。然后通过在适当的溶剂(如THF和/或乙醇和/或水)中，中间体(IV-105)与适当的碱(如LiOH)接触水解，得到中间体(IV-106)。酸中间体(IV-106)可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以生成含与羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由中间体(IV-106)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(IV-106)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(IVa)、(IVb)和(IVc)任一项的化合物，其中，R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46。
其中R3a和R3一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-的式(IV)化合物，例如式(IVe-1)的化合物可以使用WO2008/020206中描述的方法或通过图18所示的方案IV-2制备。如方案IV-2所示，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2a、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R2a为氟。
从市售或常规可得的式(IV-108)化合物和市售或常规可得的式(IV-109)的苯胺开始，式(IV-110)的化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。在三氟乙酸银存在下，用碘处理(IV-110)或可选地用一氯化碘处理(IV-110)制备得到式(IV-111)的化合物。然后式(IV-111)化合物进行酯水解，得到式(IV-112)含酸化合物。式(IV-112)化合物的酸基团可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生含与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(IV-112)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(IV-112)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(IVe-1)化合物，其中，R2为碘。类似地，其中R2为碘的式(IVd-1)、(IVd-2)和(IVe-2)中任一种的化合物可以根据方案IV-2从相应的起始原料开始制备。
式(IVa)化合物可根据如图19所示方案IV-3制备，其中，R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a，或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；R2a、R43a、R4、R5、R5a、R5b和R6如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R2a为氟。在一些实施方式中，R43a为甲基。
从市售或常规可得的式(IV-113)化合物开始，式(IV-115)化合物可通过本领域已知的方法制备。从式(IV-115)化合物和市售或常规可得的式(IV-109)苯胺开始，式(IV-116)化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。在三氟乙酸银存在下，用碘处理(IV-116)或可选地用一氯化碘处理(IV-116)制备得到式(IV-117)的化合物。然后式(IV-117)化合物进行酯水解，得到式(IV-118)含酸化合物。式(IV-118)化合物的酸基团可以用本领域技术人员显而易见的多种试剂活化，以产生含与C(O)OH酸基团的羰基相连的合适的离去基团的化合物，例如由(IV-118)与亚硫酰氯反应产生的酰氯或由(IV-118)与试剂如EDCI或HOBT反应生成的活性酯。然后酰氯或活性酯可与式R4OH、HNR5R5a、HN(OR5b)R5a、Ra-H化合物(其中，Ra为未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基)或其适当的保护形式反应，以生成式(IVa)化合物，其中，R2为碘。
式(V)化合物
式(Ia)化合物可根据如图20所示的方案V-1制备，其中，下标n为0；R51不为–OR54，但包括-OH；R51、R2、R2a、R53a和R53b如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R53a和R53b均为氢。
从市售或常规可得式(V-101)吡啶开始，和市售的氯甲酸甲酯、式(V-102)化合物可以通过本领域技术人员显而易见的方法制备。然后在Cs2CO3和催化剂(例如PdXPhos G2)存在下，使式(V-102)化合物与式(V-103)化合物反应，其中式(V-103)化合物由频哪醇硼烷和乙基乙烯基醚制备。在酸性条件下，式(V-104)化合物环化得到式(V-105)中间体。各种市售或常规可得R51NH2的胺或保护的胺可与式(V-105)中间体反应，得到式(V-106)化合物。式(Va)化合物可通过本领域技术人员显而易见的方法，由式(V-106)化合物与市售的或常规可获得的苯胺发生偶联反应，然后进行任选的脱保护制备。在式(Va)化合物的一些实施方式中，其中，R51为HOC(O)-C1-C烷基，在用本领域已知的方法进一步活化-C(O)OH基团之后，这些化合物转化为式(Va)的化合物，其中，R51为R7C(O)-C1-C6烷基。
式(Va)化合物可根据如图21所示的方案V-2制备，其中，下标n为0；R51为–OR54；R2、R2a、R53a、R53b和R54如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R53a和R53b均为氢。
如方案V-1所示由式(V-104)常用中间体开始,各种市售或常规可得的R54ONH2的羟胺或保护的羟胺可与式(V-104)化合物反应，得到式(V-107)化合物。在碱条件下，式(V-107)化合物环化得到式(V-108)的化合物(注意R51中的任何酯基也被水解成相应的酸)。式(Va)化合物可通过本领域技术人员显而易见的方法，由式(V-108)化合物与市售的或常规可获得的苯胺发生偶联反应，然后进行任选的脱保护制备。在式(Va)化合物的一些实施方式中，其中R51为–OR54，R54为HOC(O)-C1-C6烷基，在用本领域已知的方法进一步活化C(O)OH基团之后，这些化合物转化为式(Ia)化合物，其中，R51为–OR54，R54为R7C(O)-C1-C6烷基。在一些实施方式中，当R51为-OH时，根据方案V-1制备相应的式(Va)化合物。
式(Vb)化合物可根据如图22所示的方案V-3制备，其中，下标n为0；R51、R2、R2a、R53a和R53b如本文所述的任何方面、实施方式或权利要求中所定义。在一些实施方式中，R53a和R53b均为氢。
如方案V-1所示，由式(V-104)常用中间体开始,各种市售或常规可得的R51NH2的胺、羟胺、保护的胺或保护的羟胺可与式(V-104)化合物反应，得到式(V-109)化合物。在还原剂(例如NaCNBH3)下，式(V-109)化合物还原环化得到式(V-110)化合物(注意R51中的酯基也被水解成相应的酸)。式(Va)化合物可通过本领域技术人员显而易见的方法，由式(V-110)化合物与市售的或常规可获得的苯胺发生偶联反应，然后进行任选的脱保护制备。在式(Va)化合物的一些实施方式中，其中，R51为HOC(O)-C1-C6烷基或–OR54，R54为HOC(O)-C1-C6烷基，在用本领域已知的方法进一步活化C(O)OH基团之后，这些化合物转化为式(Ia)化合物，其中，R51为R7C(O)-C1-C6烷基或–OR54，R54为R7C(O)-C1-C6烷基。
利用本文提供的示例性制备方案和本领域普通技术人员已知的方法，可以制备表1-5中的化合物。
实施例1：UV照射无毛小鼠皮肤鳞状细胞癌模型
小鼠模型：UV照射无毛小鼠皮肤鳞状细胞癌模型按照Adelmann,C.H等皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology),vol.136,no.9,2016,pp.1920-1924中描述的方法使用，其全部内容通过引用并入本文，以供所有目的参考。
研究方法：在本研究中使用了一种包括0.01％、0.15％和0.5％(以基础制剂的重量计)的化合物2.003的胶凝制剂。
对于图1至6中提供的数据，化合物2.003的外用凝胶制剂或仅含媒介的外用制剂被涂敷到紫外线照射的无毛小鼠的皮肤鳞状细胞癌，治疗一段时间(例如，大约20-30天疗程的治疗)。凝胶制剂A(即，FA)的组成如下所示。
Figure BDA0003170052860000931
完成研究的前12只小鼠的数据表明，在30天的治疗过程中，用局部媒介(安慰剂)治疗的小鼠形成的肿瘤相比用所有浓度的化合物2.003治疗的小鼠大幅增加。
图1-4示出了使用含化合物2.003(按制剂重量计算，浓度分别为0.5％、0.15％和0.01％)的局部凝胶制剂与仅用溶媒的局部制剂相比，小鼠在基线、治疗开始和治疗结束时的照片。
图5示出了使用含化合物2.003的局部凝胶制剂(按制剂重量计算，分别为0.5％、0.15％和0.01％)与仅用溶媒的局部制剂相比，从治疗开始到结束，每只小鼠的新肿瘤数量。
图6示出了使用含化合物2.003(按制剂重量计算，分别为0.5％、0.15％和0.01％)的局部凝胶制剂与仅用溶媒的局部制剂相比，治疗结束时，每只小鼠的肿瘤体积。
图5-6证明了化合物2.003能完全抑制肿瘤诱导，缩小已有肿瘤的大小。重要的是，没有一只老鼠体重减轻，这表明局部给药2.003看来不会引起与“硬”MEK抑制剂相关的毒性。
实施例2：人cSCC外植体方案
正常皮肤和鳞状细胞癌(cSCC)的人外植体模型中MEK抑制剂对RAS/MAPK通路抑制 作用的体外研究
研究目的：RAS/MAPK通路抑制暴露在正常皮肤和鳞状细胞癌(cSCC)人外植体模型中的体外研究。
研究方法：使用索拉诺皮肤病协会(Solano Dermatology Associates)的废弃手术标本(根据Western IRB批准获得)，将正常皮肤和SCC的六个活检组织进行体外外植体分析，收集在DMEM/F-12(赛默飞世尔，CAT#11320033)中，DMEM/F-12添加1×B27补充剂(赛默飞世尔，CAT#17504044)、2.5μg/ml两性霉素B(赛默飞世尔，CAT#15290018)和50单位/ml青霉素-50μg/ml链霉素(赛默飞世尔，CAT#15070063)并在相同的培养基中孵育以供后续处理。标本切成3mm×3mm的碎片，包含表皮和下面的真皮。修剪皮下脂肪。组织部分浸没在384孔板的培养基中，表皮暴露于空气中。将5μL的包含0.01、0.15或0.5％(w/v)的测试化合物(在FA凝胶制剂中)的局部制剂添加到外植体的外露表皮表面。在37℃和5％CO2条件下培养4小时后，将一半的标本在液氮中快速冷冻，用于Western Blot分析磷酸化ERK、总ERK和磷酸化MEK水平，以及液相色谱质谱(LCMS)用于分析被测化合物浓度。另一半标本在10％***中固定24小时，然后转移到70％乙醇中以进行免疫组化。对于部分浸没的组织，将2.5μL凝胶制剂局部涂敷到部分浸没的组织上。在37℃和5％CO2条件下培养4h后，以如上所述的相同方式收获组织。
液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析；称取皮肤样品并加入到1体积的子弹破碎珠(Next Advance，Cat#SSB14B)和10体积的包含1％胶原酶(西格玛，Cat#C9891)和0.5mMCaCl2(在1×PBS中)的消化溶液中。随后将组织切碎并在室温下孵育1小时，然后根据制造商的说明用子弹破碎仪(Next Advance，型号#BBX24)在4℃下均质化。标准品的原液在DMSO中配制，再用50％甲醇稀释制成加标溶液。对于加标标准曲线，将25μL标准加标溶液(1ng/mL-1000ng/mL)加至25μL空白皮肤匀浆或血浆。将所有标准品和样品涡旋后，向混合物中加入150μL甲醇/乙腈20:80(v/v)，剧烈涡旋1分钟，然后以3000rpm离心15分钟。上清液用超纯水1：1稀释。LC-MS/MS***由QTRAP 4000质谱仪(AB SCIEX)与岛津UFLC***耦合组成。使用LC和MS条件测量被测化合物的水平，并使用分析师1.6.1软件(AB SCIEX)进行数据分析。
蛋白质印迹分析：皮肤样品在10体积(每mg组织10μL)裂解缓冲液(RIPA缓冲液+0.5mM EDTA+1×终止蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物)中裂解，并在冰上用超声探头匀浆。匀浆样品在12000rpm 4℃下离心10分钟，上清液转移到新管中，在-80℃下保存，直到进行蛋白质印迹分析。由BCA蛋白质测定试剂盒以牛血清白蛋白(BSA)为标准测定蛋白质浓度。在1×NuPAGE MES SDS操作缓冲液(赛默飞世尔，cat#NP0002)中的NuPAGE 4-12％Bis-Tris凝胶(赛默飞世尔)上分离10-20μg总蛋白，然后转移到PVDF膜上。在1×TBST(Tris缓冲盐水+0.1％吐温20)中用5％脱脂牛奶(用于磷酸化MEK、总ERK和肌动蛋白)或5％牛血清白蛋白(用于磷酸化ERK和微管蛋白)封闭膜1小时后，用一抗在4℃下探膜过夜，洗涤后，与二抗在室温下孵育1-3小时。用1×TBST洗涤三次后，用WesternBright ECL HRP底物(Advansta，CAT#K12045-D50)显影印迹。
一抗包括1:3000的单克隆兔抗磷酸化-p44/42MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)抗体(细胞信号(Cell Signaling)，Cat#4370L)，1:3000的单克隆兔抗磷酸化-MEK1/2(Ser217/221)抗体(细胞信号，Cat#9154S)，1:3000的单克隆兔抗p44/42MAPK(Erk1/2)抗体(细胞信号，Cat#4695S)，1:5000-1:10000的单克隆小鼠抗-β-肌动蛋白(西格玛，Cat#A1978)。二抗包括山羊抗兔IgG(H+L)、HRP(赛默飞世尔，Cat#31460)和过氧化物酶结合的亲合纯山羊抗鼠IgG(H+L)(杰克逊免疫研究(Jackson Immuno Research)，Cat#115-035-062)
MEK抑制剂应用于源自正常皮肤和鳞状细胞癌的角质形成细胞后的细胞活力评估
原代人角质形成细胞(ATCCPCS200-11)和SCC细胞系(SRB12和SCC13)一式三份置于96孔、平坦、透明底、白壁微孔板中，并使其在37℃和5％CO2的加湿的培养箱里贴附过夜。将溶解在DMSO中并在培养基中稀释至最终浓度为30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01μM(每个浓度重复一次)的测试化合物与细胞在37℃和5％CO2下孵育72小时。DMSO作为阴性对照，阿霉素(30μM)作为阳性对照。将使用细胞滴定-Glo发光细胞活力测定法(普洛麦格(Promega))根据存在的ATP的定量来测量细胞活力，该ATP表示存在代谢活性细胞。Z'作为分析性能和数据质量的测试，将根据阳性(p)和阴性(n)对照的均值(μ)和标准差(σ)如下计算(Z'>0.5表示可接受数据)：
测试孔值(x)将归一化为阳性和阴性对照，并表示为归一化抑制百分比(NPI)，如下所示：
Figure BDA0003170052860000951
将使用NPI和log10浓度的非线性拟合来定义IC50。
Figure BDA0003170052860000961
实施例3：cSCC体内模型
研究目标：确定如公开和描述的MEK抑制剂作为cSCC的化学预防剂在自发的紫外线照射的cSCC小鼠模型中的效力。
研究目标-1：评估短期药代动力学和药效学特征以及对如本文公开和描述的MEK抑制剂作为cSCC化学预防剂在自发的紫外线照射的cSCC小鼠模型中响应的持久性。
紫外线照射的cSCC小鼠模型见述于Adelmann,C.H.等发表的皮肤病学研究杂志。在实施例1中也使用了该小鼠模型以获得如图1至图4所示的数据。重要的是，这些小鼠出现Trp53热点突变、RAS突变和CDKN2A突变，其比例与人类cSCC相似。这些研究的生化药效学终点可以是皮肤免疫组织化学评估的磷酸ERK状态。或者，可以使用能够定量测量裂解物中ERK活性的经验证的高灵敏度的基于SOX肽的ERK传感器。炎症、免疫浸润和水肿的组织学评估也可用于评估潜在的不良反应。
使用上述紫外线照射的癌前AK(***状瘤)和cSCC的自发无毛小鼠模型来测试受试化合物的效力。与异种移植物模型不同，该模型使我们可以评估化学预防剂的潜力。为了评估受试化合物的药代动力学和药效学特性以及在皮肤vs血浆/全身暴露中产生的ERK途径抑制，将包括特定浓度的受试化合物的局部制剂给药无毛小鼠一次，并每6小时获取组织和血液样品，持续24小时。药代动力学分析是基于每6小时，持续24小时在完整皮肤和血浆中测试化合物水平的测量(n＝5个时间点)。药效学分析基于对完整小鼠皮肤中p-ERK表达的定量IHC和/或蛋白质印迹分析，以及对来自全血的淋巴细胞的FACS分析，每6小时，持续24小时(n＝5个时间点)。对于LCMS分析，样品通过蛋白质沉淀和稀释法处理，其中均质化的皮肤或血浆与4体积的有机溶剂混合。涡流离心后，取上清液，用HPLC级水稀释后进行分析。校准标准品是通过在空白皮肤匀浆或血浆中加入加标标准品(spiking neat standard)来制备的。LCMS***由岛津UFLC***与QTRAP 4000质谱仪(AB SCIEX)连接组成，以进行多反应监测模式运行。通过将未知样品与校准标准品进行比较，得到定量结果。总共需要15只老鼠来一式三份地进行这些研究。
研究目标-2：评估对包含如本文公开和描述的MEK抑制剂的局部制剂在***状瘤和cSCC的化学预防中响应的持久性
在cSCC的紫外线照射小鼠模型中进行试验以评估响应的持久性(n＝12个/臂x3-1个对照，2个如本文所定义和描述的活性化合物)
主要结果：绘制给药后x30天反应的持久性-到下一个新病变的时间/现有病变到允许终点的进展
次要结果：使用全外显子组测序(WES)对暴露表皮回复(reversion)中紫外线诱导突变负荷的回复的持久性或暴露表皮中紫外线诱导的突变/突变负荷的减少进行分析
评估了被测试化合物对癌前***状瘤或cSCC发展的化学预防作用的体内持久性。相对溶媒，测试了包含0.1％和0.5％重量的被测试化合物的凝胶制剂。因此，共有3组小鼠(整个试验共n＝36只雌性小鼠)。使用《皮肤病学研究杂志》(Journal of InvestigativeDermatology)开发的标准方案对小鼠进行照射，其是一个在莫菲特小鼠厂房设施的90天的慢性紫外线暴露方案(Oriel；12.5kJ/m2 UVB每周分三次)。停止紫外线照射后，小鼠在30天内发生***状瘤。一旦它们出现最大尺寸大于3毫米的病变，则用如上所述的局部溶媒或测试化合物治疗它们30天，在此期间跟踪单个肿瘤的大小。毒性是通过每两周测量体重和监测皮肤来监测的。主要结果是绘制给药后反应的持久性x30天-到下一个新病变的时间/现有病变进展到允许终点(最大肿瘤直径1.5cm)的时间。在单侧α＝0.05的情况下，这些数字用于检测活性剂组相对安慰剂组肿瘤最大线性尺寸之和的比值(治疗30天相对基线)的2倍下降，如果变异系数分别为0.5或0.7，则统计功效(power)幂为97％或83％。一个次要的结果是暴露表皮中紫外线诱导的突变负荷的回复的持久性。
实施例4：MEK抑制测试-1
以下方法可用于测定生化活性。用以下方法测试化合物的MEK1抑制活性。参见Anastassiadis T，等.激酶催化活性的综合测定揭示了激酶抑制剂选择性的特点(Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinaseinhibitor selectivity).自然-生物技术(Nat Biotechnol).2011,29(11),1039-45.
试剂：
反应缓冲液：20mM Hepes(pH7.5)，10mM MgCl2,1mM EGTA,0.02％Brij35,0.02mg/ml BSA,0.1mM Na3VO4,2mM DTT,1％DMSO
酶：MEK1,Invitrogen Cat#PV3303
N-末端His标记的重组人全长蛋白，在昆虫细胞中表达。在体外被RAF1激活。MW＝49.2kDa，基因库登录号NP_002746。
底物：5μM ERK2(K52R)，
激酶死亡(Kinase-dead)突变体(基因库登录号NM_0011949)，带有N端His6标签的aa2-358，MW＝43.63kDa，在大肠杆菌中表达。
底物是在新制备的反应缓冲液中制备的。将激酶送入底物溶液中并轻轻混合。通过声学技术(ECHO550；纳升范围)将测试化合物在100％DMSO中输送到激酶反应混合物中，并在室温下温育20分钟。在反应混合物中加入33P-ATP引发反应。反应混合物在室温下温育2小时。P81滤膜结合法检测激酶活性。
实施例5：MEK抑制测试-2
使用以下方法测试化合物的MEK1抑制活性(方案可通过thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/files/drug-discovery/pdfs.par.60256.file.dat/20130430％20ssbk％20customer％20protocol％20and％20assay％20conditions.pdf获得)。Z′-LYTE生化测定(赛默飞世尔)采用基于荧光的偶联酶格式，并基于磷酸化和非磷酸化肽对蛋白水解裂解的不同敏感性。
在100％DMSO中的测试化合物，在孔中用1％DMSO(最终)进行筛选。对于10点滴定，从30μM的起始浓度开始进行3倍的连续稀释。
将肽/激酶、MAP2K1(MEK1)/非活性MAPK1(ERK2)/Ser/Thr 03、混合物(“肽/激酶混合物”)在以下缓冲液(“激酶缓冲液”)中稀释至2X工作浓度：50mM HEPES pH 7.5,0.01％BRIJ-35,10mM MgCl2,1mM EGTA。最终的10μL激酶反应包括0.06-0.25ng MAP2K1(MEK1)、105ng非活性MAPK1(ERK2)和2μM Ser/Thr 03在50mM HEPES pH7.5、0.01％BRIJ-35、10mMMgCl2中，1mM EGTA。孵育1小时后，加入5μL 1:1024稀释的显影试剂A(可购自英杰公司(Invitrogen)，目录号PV3295)。
将ATP溶液在激酶缓冲液(50mM HEPES pH7.5、0.01％BRIJ-35、10mM MgCl2、1mMEGTA)中稀释至4X工作浓度。ATP Km表观值使用Z′-LYTE测试预先确定。将显影试剂稀释在显影缓冲液(可从购自英杰公司，目录号P3127)中。
测试规程：将2.5μL的4X测试化合物或100nL的100X测试化合物加上2.4μL的激酶缓冲液、5μL的2X肽/激酶混合物、2.5μL的4X ATP溶液加入到板中，并放置在摇板上30秒。在加入5μL显影试剂溶液之前，允许激酶反应在室温下进行60分钟，并将混合物在摇板上搅拌30秒。混合物在室温下温育60分钟。用读板仪测定荧光，并对数据进行分析。
最大发射率由0％磷酸化对照(100％抑制对照)建立，其中不含ATP，因此没有表现出激酶活性。此对照在显影反应中产生100％的裂解肽。100％磷酸化对照由与肽底物序列相同的合成磷酸化肽组成，设计用于计算磷酸化百分比。这种对照在显影反应中产生了非常低百分比的裂解肽。0％磷酸化和100％磷酸化对照可以计算在特定反应孔中实现的磷酸化百分比。对照孔不包括任何激酶抑制剂。
通过含活性激酶的0％抑制对照，确定了筛选中的最小发射率。该对照被设计为在激酶反应中产生10-50％的磷酸化肽。级联分析可产生高达70％磷酸化肽。
在与激酶相同的板上对每个单独的激酶进行已知的抑制剂对照标准曲线，10点滴定，以确保激酶在预期的先前确定的IC50范围内被抑制。
为所测定的测试化合物的每个浓度准备以下对照品。通过比较不含ATP的测试化合物对照孔与0％磷酸化对照(不含测试化合物)建立显影反应干扰。无干扰化合物的预期值应为100％。标记90％到110％以外的任何值。通过比较不含激酶/肽混合物的测试化合物对照孔(零肽对照)与0％抑制对照来确定测试化合物荧光干扰。非荧光化合物的期望值应为0％。标记任何大于20％的值。
对表A中的数据进行计算。使用了IDBS中的XLfit。剂量响应曲线拟合模型数为205(s型剂量响应模型)。如果曲线底部在-20％&20％抑制之间没有拟合，则将其设置为0％抑制。如果曲线顶部在70％和130％抑制之间没有拟合，则将其设置为100％抑制。
表A.
Figure BDA0003170052860000991
FI＝荧光强度
C100％＝100％Phos对照的平均香豆素发射信号
C0％＝0％Phos对照的平均香豆素发射信号
F100％＝100％Phos对照的平均荧光素发射信号
F0％＝0％Phos对照的平均荧光素发射信号
DRI＝显影反应干扰
TCFI＝测试化合物荧光干扰
表6列出了根据上述方法选择的化合物的MEK1抑制测定结果。A表示IC50小于或等于150nM，B表示IC50大于150nM，且小于或等于1.5μM，C表示IC50大于1.5μM。
表6：MEK抑制测试结果
Figure BDA0003170052860000992
Figure BDA0003170052860001001
ND-未确定
实施例6：基于细胞的测试-1
用于在NF1相关细胞增殖分析中测试软MEK抑制剂的细胞系的制备可在Basu等，自然(Nature)356:713-715,1992；和DeClue等，细胞(Cell)69:265-273,1992中找到。此外，确定本文所述的软MEK抑制剂的效力的示例性的体外和体内模型可在美国专利序列号8,211,875和8,487,004中找到，其全部内容通过引用并入。
实施例7：基于细胞的测试-2
或者，使用以下方法测定基于细胞的活性。将测试化合物溶解在DMSO中，作为10mM的母液。细胞滴度
Figure BDA0003170052860001002
(Cell
Figure BDA0003170052860001003
)2.0发光细胞活力分析试剂购自普洛麦格(Promega)(麦迪逊，威斯康星州)。A375和HCT116细胞系购自美国菌种保藏中心(马纳萨斯，弗吉尼亚州)。对于A375细胞的细胞培养基为DMEM+10％FBS。细胞培养基列于下表。对于HCT116细胞，细胞培养基为McCoy's 5A+10％FBS。所有培养基均添加100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素。将培养保持在37℃在5％CO2和95％空气的加湿气氛中。
测试化合物在DMSO溶液中稀释，从10mM开始在源板中进行10剂量和3倍稀释。通过Echo550将25nL的每种测试化合物从源板递送至384孔细胞培养板(T＝最终)的每孔。将25μL含2000个A375或HCT116细胞的培养基一式两份地加入至细胞培养板(T＝0和T＝最终)的每个孔中。将25μL细胞滴度Glo2.0试剂加入到细胞培养板(T＝0)的每个孔中。在定轨摇床上混合内容物2分钟，并在室温下孵育15分钟以稳定发光信号。用Envision2104多标记读板器(珀金埃尔默，圣克拉拉，加利福尼亚州)记录发光。基于定量每个培养孔中存在的ATP确定培养基中活细胞的数量。将细胞培养板(T＝最终)中的细胞与化合物在37℃,5％CO2一起孵育72小时。将25μL细胞滴度Glo2.0试剂加入到每个孔中。在定轨摇床上混合内容物2分钟，并在室温下孵育15分钟以稳定发光信号。用Envision 2104多标记读板器(珀金埃尔默，圣克拉拉，加利福尼亚州)记录发光。基于定量每个培养孔中存在的ATP确定培养基中活细胞的数量。用GraphPad Prism4程序基于S形剂量-反应方程Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))绘制GI50曲线。用GraphPad Prism 4程序计算了方程中的所有参数。GI50是根据[(Ti-Tz)/(C-Tz)]*100＝50计算的化合物浓度，其中，Ti是T＝最终时含测试化合物的细胞行数据；Tz为T＝0h时不含化合物的细胞行数据；C是T＝72h时含对照化合物星形孢菌素(西格玛奥德里奇)的细胞行数据。因此，GI50是10X的值，其中X是用Excel在Y＝50时通过曲线拟合方程计算得出的。
实施例8：测试化合物的测定结果
式(I)的受试化合物
下表7适用于式(I)的测试化合物。
测试1为生化MEK IC50(nM)测定，如实施例4中所述。A1表示IC50小于或等于150nM，B1表示IC50大于150nM且小于或等于1.5μM。
测试2为A375(BRAF)GI50(nM)细胞基测定，如实施例7中所述。A2表示IC50小于或等于500nM，B2表示IC50大于500nM且小于或等于1.5μM。
测试3为HCT116(Kras)GI50(nM)测定，如实施例7中所述。A3表示IC50小于或等于750nM，B3表示IC50大于750nM且小于或等于2μM。
表7：式(I)的测试化合物的测定结果
Figure BDA0003170052860001011
式(II)的受试化合物
下表8适用于式(II)的测试化合物。NT表明该化合物没有在特定的测试进行测试。测试1是生化MEK IC50(nM)测定，如实施例4中所述且用于除用实施例5测试的化合物2.042、2.044、2.047和2.048以外的所有被测化合物。测试2为A375(BRAF)GI50(nM)细胞基测定，如实施例7中所述。测试3为HCT116(Kras)GI50(nM)测定，如实施例7中所述。
表8：式(III)的测试化合物的测定结果
Figure BDA0003170052860001012
式(III)的受试化合物
下表9适用于式(III)的受试化合物。NT表明该化合物没有在特定的测试进行测试。测试1是生化MEK IC50(nM)测定，如实施例4中所述且用于化合物2和6；化合物1、3、5和7-8使用实施例5的方法进行测试。测试2为基A375(BRAF)GI50(nM)细胞基测定，如实施例7中所述。测试3为HCT116(Kras)GI50(nM)测定，如实施例7中所述。
表9：式(III)的测试化合物的测定结果
Figure BDA0003170052860001021
式(IV)的受试化合物
下表10适用于式(IV)的受试化合物。
测试1为生化MEK IC50(nM)测定，如实施例4中所述。A1表示IC50小于或等于500nM，B1表示IC50大于500nM，且小于或等于1μM；C3表示IC50大于1μM且小于等于5μM，D1表示IC50大于5μM，且小于或等于10μM。
测试2为A375(BRAF)GI50(nM)细胞基测定，如实施例7中所述。A2表示IC50小于或等于1μM，B2表示IC50大于1μM，小于或等于2μM。
测试3为HCT116(Kras)GI50(nM)测定，如实施例7中所述。A3表示IC50小于或等于5μM，B3表示IC50大于5μM且小于或等于10μM。
表10：测试化合物的测定结果
Figure BDA0003170052860001022
实施例9：体内模型
研究步骤：将本文所述化合物的局部制剂与溶媒的局部制剂一式两份施用于裸鼠皮肤。在离散的时间间隔对皮肤进行活检，并将其一分为二，其中一半在液氮中急冻，一半在***中固定并石蜡包埋。分离蛋白质用于蛋白质印迹分析p-ERK水平。在FFPE切片上进行p-ERK免疫染色，用于细胞特异性分析p-ERK水平。其他分析包括H&E染色以研究皮肤完整性。
化合物在抑制p-ERK方面进行了评估，p-ERK是小鼠皮肤中RAS/MAPK信号传导的下游生物标志物。此外，还对小鼠皮肤的增殖、小鼠皮肤的细胞凋亡和小鼠皮肤的组织学完整性进行了评估。
小鼠：在研究开始前，从Jackson实验室获得的129只8周龄小鼠被剃毛。约21只小鼠被用于研究。将化合物施用于小鼠的无毛背侧皮肤，并以12小时为间隔，在治疗前、24小时、72小时和96小时使用6mm穿孔活检获得皮肤活检。
蛋白质印迹分析：对于免疫印迹，活检后立即将表皮皮肤在液氮中快速冷冻。表皮在裂解缓冲液中裂解并在蛋白质印迹上运行。用于免疫印迹的抗体包括兔抗磷酸化-p44/42MAPK(1:3000，赛信通(Cell Signaling))和兔抗p44/42MAPK(1:3000，赛信通)、鼠抗肌动蛋白(1:5000，西格玛奥德里奇)，驴抗鼠IgG偶联辣根过氧化物酶(HRP；1:40,000,安玛西亚)和山羊抗兔IgG结合的HRP(1:40,000,杰克逊免疫研究(Jackson ImunoResearch))。
免疫组化：在5μm石蜡切片上进行免疫组化。使用标准方案酶处理(1:1000)的抗原提取。所用抗体为兔p-ERK(赛信通，4307S，1:100)。根据制造商方案使用键合聚合物精炼抗兔HRP检测(徕卡生物***(Leica Biosystems))。然后用苏木精复染切片、脱水，用TissueTek-Prisma和封片机(Coverslipper)(樱花(Sakura))盖膜。
组织学分析：在5μM石蜡切片上进行H&E，并对组织进行检查，以评估小鼠皮肤的细胞毒性、炎症或完整性中的其他变化。
小鼠皮肤的外源性RAS激活：实验将在未经处理的小鼠皮肤上进行。可选地，用TPA预处理皮肤以提高p-ERK水平。TPA诱导的RAS/MAPK激活用在100μL丙酮溶液中的12.5uGTPA对裸鼠皮肤进行96小时。在TPA暴露后，研究进行48小时。
t检验用于评估经局部MEK1抑制剂处理的样品中p-ERK和Ki-67与载体对照相比的差异。
实施例10：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸
Figure BDA0003170052860001031
在N2中-78℃下搅拌的4-氰基-2-氟苯甲酸(3.0g，18.1mmol)的THF(30mL)溶液，滴加LDA(2.0M在THF中，27.2mL，54.5mmol)处理。20分钟后，滴加2-氟-4-碘苯胺(12.9g，54.5mmol)的干燥THF(15mL)溶液，并进一步搅拌反应混合物，使其升温至室温。16h后，真空浓缩反应混合物，用1M HCl酸化,Et2O萃取两次。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物在沸腾的DCM中研磨纯化，得到黄色固体产物(1.57g，22.7％)。m/z381.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.91(s,1H),9.74(s,1H),8.04(d,J＝8.2Hz,1H),7.77(dd,J＝10.3,2.0Hz,1H),7.58(dt,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.42–7.33(m,2H),7.24(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H)
实施例11：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸
Figure BDA0003170052860001041
在一个微波炉小瓶中装入4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(80％纯)(0.19g，0.4mmol)、3-羟基吖丁啶盐酸盐(0.07g，0.6mmol)、HATU(0.25g，0.6mmol)、二异丙基乙胺(140μL,0.8mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(6mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机物用水、盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂。残余物通过快速色谱(12g二氧化硅，0-5％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，并再次通过反相HPLC(30-95％乙腈/水)，得到淡黄色固体产物(71mg，41％)。m/z 438.1[M+1]+.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.97(s,1H),7.69-7.65(dd,J＝1.2Hz and 0.9Hz,1H),7.55-7.47(m,2H),7.40(s,1H),7.28-7.18(m,2H),5.80(s,1H),4.45(s,1H),4.35(t,J＝7.6Hz,1H),4.21(t,J＝8.9Hz,1H),4.00-3.98(m,1H),3.76-3.73(m,1H).
按照实施例9所述制备以下化合物，将3-羟基吖丁啶盐酸盐替换为适当的胺，其为市售可得的或使用本领域普通技术人员已知的条件制备的。
Figure BDA0003170052860001042
Figure BDA0003170052860001051
Figure BDA0003170052860001061
Figure BDA0003170052860001071
实施例25：N-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺
Figure BDA0003170052860001072
步骤1：3-(((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)甲基)氮杂环 丁烷-1-羧酸叔丁酯
将4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(0.100g，0.3mmol)、3-((氨基氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(60％纯)(0.13g，0.4mmol)、HATU(0.15g，0.4mmol)和二异丙基乙胺(135μL0.8mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液装入微波小瓶中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机物用水、盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂。残余物经快速色谱纯化(12g二氧化硅，0-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。收集产物级分，除去溶剂，得到黄色油状物(77mg，52％)。m/z 565.2[M-1]-.
步骤2：N-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰 胺
将3-(((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.077g，0.1mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液装入圆底烧瓶中，并滴加氯化氢(4.0M在1,4-二氧六环中，0.510mL，2.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物真空浓缩。残余物用反相HPLC(10-95％乙腈/水(0.1％TFA))纯化。收集产物级分，用碳酸氢钠洗涤并真空干燥，得到黄色固体产物。m/z 461.7[M+1]+.1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),7.67(d,J＝8.1Hz,1H),7.50-7.42(m,2H),7.35(s,1H),7.12-7.03(m,1H),4.16-4.10(m,1H),4.06-4.00(m,1H),3.94-3.90(m,1H),3.73-3.68(m,1H),2.89-2.79(m,3H).
实施例26：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-羟基苯甲酰胺
Figure BDA0003170052860001081
在室温下搅拌盐酸羟胺(333mg，0.52mmol)于干燥的DMF(2.4mL)和干燥的乙腈(2.4mL)的溶液，用Et3N(1.33mL，9.6mmol)处理。1h后，用DCM(2.4mL)稀释悬浮液，冷却至0℃，并加入4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氯(209mg，0.52mmol)的干燥的THF(2.4mL)溶液。1h后，用EtOAc稀释反应混合物，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，萃取，水相用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备HPLC纯化粗原料，得到黄色固体产物(37mg，17.8％)。m/z 396.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm11.60(s,1H),9.46(s,1H),9.41(s,1H),7.72(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.56–7.49(m,1H),7.46(s,1H),7.37–7.28(m,2H).
实施例27：2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氨基)氧基)乙-1-铵2,2,2-三氟乙酸盐
步骤1：(2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙基)氨基甲 酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001082
将4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(150mg，0.39mmol)和HATU(298mg，0.78mmol)的干燥的DMF(3.9mL)溶液用干燥的DIPEA(0.13mL，0.78mmol)处理。将反应混合物在50℃下搅拌30min，冷却至室温，加入(2-(氨基氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(103mg,0.58mmol)的干燥的DMF(0.5mL)溶液。16h后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O淬灭，分配，水相用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过快速柱层析(二氧化硅，1-40％EtOAc的己烷溶液)，得到黄色油状产物(87mg，41％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.27min.m/z 539.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 10.56(s,1H),9.45(s,1H),7.59(d,J＝8.1Hz,1H),7.57–7.46(m,2H),7.32(s,1H),7.16–7.07(m,2H),5.06(s,1H),4.01(t,J＝4.9Hz,2H),3.54–3.45(m,2H),1.49(s,9H).
步骤2：2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氨基)氧基)乙-1-铵2,2,2- 三氟乙酸盐
Figure BDA0003170052860001091
在室温下搅拌(2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(67mg,0.12mmol)的二氧六环(1.0mL)溶液，用4N HCl的二氧六环(62μL,0.24mmol)溶液处理。1h后，再加入一份4N HCl的二氧六环溶液(62μL，0.24mmol)，16h后进行类似步骤。48小时后，再加入一份4N HCl的二氧六环溶液(0.25mL,1mmol)。48h后，真空浓缩反应混合物。通过制备HPLC纯化粗原料，得到三氟乙酸盐形式黄色固体产物(21.1mg，32％)。m/z 441.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.79–7.69(m,2H),7.54(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.45(d,J＝1.5Hz,1H),7.35(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.29(t,J＝8.6Hz,1H),4.07(t,J＝5.1Hz,2H),3.08(t,J＝5.2Hz,2H).
实施例28：2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酸甲酯
Figure BDA0003170052860001092
将4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(500mg，1.30mmol)和HATU(995mg，2.61mmol)的干燥的DMF(13.0mL)溶液用干燥的DIPEA(0.45mL，2.61mmol)处理。将反应混合物在50℃下搅拌30min，冷却至室温，加入(2-(氨基氧基))乙酸甲酯盐酸盐(270mg,1.96mmol)的干燥的DMF(1.0mL)溶液，然后加入干燥的DIPEA(0.34mL,2.0mmol)。48h后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O淬灭，分配，水相用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过快速柱层析(二氧化硅，10-41％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(373mg，61％)。m/z 468.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.29(s,1H),9.16(s,1H),7.76–7.60(m,2H),7.52(dt,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.41(s,1H),7.35–7.19(m,2H),4.72–4.55(m,2H),3.70(s,3H).
实施例29：2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酸
Figure BDA0003170052860001093
室温下搅拌2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酸甲酯(306mg,0.64mmol)的THF(1.93mL)、MeOH(0.64mL)和H2O(1.28mL)溶液，用1M LiOH(0.64mL，0.64mmol)处理。24h后，再加入一份1M LiOH(0.64mL，0.64mmol)并继续搅拌。24h后，用饱和NaHCO3水溶液稀释反应混合物，用EtOAc分配，水相用1M HCl酸化并用EtOAc萃取。有机相用1M HCl和盐水洗涤，用NaHCO3干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色固体产物(238mg,81％)。m/z454.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.00(s,1H),12.30(s,1H),9.21(s,1H),7.72(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.68(s,1H),7.53(dt,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.40(d,J＝1.6Hz,1H),7.34–7.24(m,2H),4.52(s,2H).
实施例30：N-(2-氨基-2-氧代基乙氧基)-4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺
Figure BDA0003170052860001101
步骤1：2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酰氯
Figure BDA0003170052860001102
将在N2室温条件下搅拌2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酸(181mg，0.39mmol)的二氧六环(1.5mL)溶液，用SOCl2(0.3mL，3.9mmol)处理。24h后，真空浓缩反应混合物并与干燥甲苯(3×5mL)共沸。得到的橙色固体用于随后的反应，无需进一步纯化。m/z 468.1[m+h]-(在用10％吡啶的MeOH溶液中淬灭混合物的等分液后，检测为相应的甲酯)。
步骤2：N-(2-氨基-2-氧代基乙氧基)-4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰 胺
Figure BDA0003170052860001103
将2-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)乙酰氯(188mg，0.39mmol)的干燥的二氧六环(0.9mL)溶液在0℃ N2条件下搅拌，用0.5M NH3的二氧六环(0.91mL)溶液处理。48h后，反应混合物用EtOAc稀释，用1M HCl淬灭，分配，有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和真空浓缩。通过制备HPLC纯化粗原料，得到黄色固体产物(49.7mg，28％)。m/z 453.0[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.29(br s,1H),9.40(br s,1H),7.74–7.69(m,2H),7.54–7.48(m,1H),7.40(s,1H),7.34–7.24(m,2H),4.34(s,2H).
实施例31：3-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)丙酸甲酯
Figure BDA0003170052860001111
在室温下搅拌4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(500mg，1.30mmol)和HATU(995mg，2.61mmol)的干燥的DMF(13.0mL)溶液，用干燥的DIPEA(0.45mL，2.61mmol)处理。将反应混合物在50℃下搅拌30min，冷却至室温，加入3-(氨基氧基)丙酸甲酯盐酸盐(305mg，1.96mmol)的干燥的乙腈(2.9mL)和干燥的THF(2.9mL)悬浮液，然后加入干燥的DIPEA(0.45mL，2.6mmol)。16h后，用EtOAc稀释反应混合物，用H2O淬灭，分配，水相用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过快速柱层析(二氧化硅，20-50％EtOAc的己烷溶液)，得到黄色固体产物(369mg，59％)。m/z 482.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.05(s,1H),9.29(s,1H),7.72(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),7.66(s,1H),7.53(d,J＝8.6Hz,1H),7.42(d,J＝1.7Hz,1H),7.36–7.25(m,2H),4.14(m,2H),3.61(s,3H),2.70(t,J＝6.6Hz,2H).
实施例32：3-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)丙酸
Figure BDA0003170052860001112
室温下搅拌3-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)丙酸甲酯(321mg,0.66mmol)的THF(4.0mL)、MeOH(1.33mL)和H2O(2.65mL)溶液，用1M LiOH(1.33mL，1.33mmol)处理。3天后，再加入一份1M LiOH(0.32mL，0.32mmol)并继续搅拌。3h后，用饱和NaHCO3水溶液稀释反应混合物，用EtOAc分配，水相酸化并用EtOAc萃取。将第一EtOAc提取物依次用1M HCl和盐水洗涤，用NaHCO3干燥，过滤和真空浓缩，得到黄色固体产物(203mg,收率65.5％，纯度79％)。第二EtOAc提取物用盐水洗涤，用NaHCO3干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色固体产物(46mg,收率14.8％，纯度100％)。m/z 468.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.37(m,2H),9.29(s,1H),7.76–7.62(m,2H),7.53(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.42(d,J＝1.7Hz,1H),7.35–7.24(m,2H),4.12(s,2H),2.61(t,J＝6.1Hz,2H).
实施例33：3-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-(3-氧代异恶唑烷-2-羰基)苯甲腈
Figure BDA0003170052860001121
在N2室温条件下搅拌3-((4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺基)氧基)丙酸(203mg，0.43mmol)的二氧六环(1.7mL)溶液，用SOCl2(0.32mL，4.3mmol)处理。24h后，真空浓缩反应混合物并与干燥甲苯(3×5mL)共沸。得到的橙色固体无需进一步纯化用于下一步反应。m/z 450.0[M+H]-.
实施例34：N-(3-氨基-3-氧代基丙氧基)-4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺
Figure BDA0003170052860001122
在0℃ N2条件下搅拌3-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-(3-氧代异恶唑烷-2-羰基)苯腈(195mg,0.43mmol)的干燥的二氧六环(1.03mL)溶液，用0.5M NH3的二氧六环(0.99mL，0.49mmol)溶液处理。30min后，反应混合物用EtOAc稀释，用1M HCl淬灭，分配，有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和真空浓缩。通过制备HPLC纯化粗原料，得到黄色固体产物(22.2mg，11％)。m/z 467.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.04(br s,1H),9.47(br s,1H),7.71(dd,J＝10.4,2.0Hz,2H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.41(s,1H),7.33–7.26(m,2H),6.90(br s,2H),4.09(t,J＝5.1Hz,2H),2.44(t,J＝6.3Hz,2H).
实施例35：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸3-羟基环丁酯
Figure BDA0003170052860001123
步骤1：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氯(通用制备)
Figure BDA0003170052860001124
在室温下搅拌4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(200mg，0.52mmol)的二氧六环(1.61mL)悬浮液，用SOCl2(0.38mL，5.23mmol)处理。在N2 50℃条件下，反应混合物进一步搅拌。48h后，真空浓缩反应混合物并与干燥甲苯(2×5mL)共沸。在残留甲苯中得到的粗原料用于下一步，而无需进一步纯化。
步骤2：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸3-羟基环丁酯
在0℃ N2气氛中搅拌下，向环丁烷-1,3-二醇(159mg，1.8mmol)和Et3N(0.16mL，1.1mmol)干燥的THF(1.0mL)中的溶液加入4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氯(157mg,0.39mmol)的干燥的THF(1.3mL)溶液。1h后，用EtOAc稀释反应混合物，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，分配，水相用EtOAc再萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过快速柱层析(二氧化硅，5-31％EtOAc的己烷溶液)，得到黄色固体产物(43.7mg，24.7％)。m/z 451.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.36(s,1H),8.06(d,J＝8.2Hz,1H),7.76(dd,J＝10.3,1.9Hz,1H),7.58(dt,J＝8.4,1.3Hz,1H),7.38–7.30(m,2H),7.27(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),5.26(d,J＝6.5Hz,1H),4.74(p,J＝7.3Hz,1H),3.88(h,J＝6.9Hz,1H),2.86–2.70(m,2H),2.12–1.98(m,2H).
实施例36：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸3-羟基-2,2,4，4-四甲基环丁酯
Figure BDA0003170052860001131
在0℃ N2气氛中搅拌下，向2,2,4，4-四甲基环丁烷-1,3-二醇(520mg，3.6mmol)和Et3N(0.32mL，2.3mmol)干燥的THF(2.0mL)中的溶液加入4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氯(314mg,0.78mmol)的干燥的THF(2.7mL)溶液。48h后，用EtOAc稀释反应混合物，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，分配，水相用EtOAc再萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过快速柱层析(二氧化硅，0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(26.6mg，6.7％)。m/z 506.9[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm(注:非对映异构体的混合物2:1)9.31(s,0.35H),9.29(s,0.67H),8.10(d,J＝8.2Hz,0.37H),8.06(d,J＝8.2Hz,0.63H),7.77(dd,J＝10.3,1.9Hz,1H),7.59(dd,J＝7.8,1.9Hz,1H),7.39–7.34(m,2H),7.34–7.27(m,1H),5.01(t,J＝4.8Hz,1H),4.52(s,0.35H),4.41(d,J＝0.9Hz,0.67H),3.53(d,J＝4.8Hz,0.36H),3.37(d,J＝4.8Hz,0.66H),1.18(s,4H),1.09(s,2H),1.07(s,2H),1.00(s,4H).
实施例37：4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸2,3-二羟丙酯
Figure BDA0003170052860001141
在0℃ N2气氛中搅拌下，向1，2,3-丙三醇(332mg，3.6mmol)和Et3N(0.32mL，2.3mmol)的干燥的THF(2.7mL)的溶液加入4-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰氯(314mg,0.78mmol)的干燥的THF(2.0mL)溶液。16h后，用EtOAc稀释反应混合物，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，分配，水相用EtOAc再萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备HPLC纯化一份粗原料(198mg)，得到玻璃状黄色固体产物(34mg,9.5％)。m/z 455.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.33(s,1H),8.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.77(dd,J＝10.3,1.9Hz,1H),7.59(dt,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.39–7.30(m,2H),7.29(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),5.12(d,J＝5.3Hz,1H),4.75(t,J＝5.7Hz,1H),4.37(dd,J＝11.1,3.9Hz,1H),4.23(dd,J＝11.1,6.2Hz,1H),3.88–3.76(m,1H),3.53–3.38(m,2H).
实施例38：4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸
Figure BDA0003170052860001142
步骤1：2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯胺
在圆底烧瓶中加入4-溴-2-氟苯胺(1.00g,5.3mmol)和无水四氢呋喃(8mL)，冷却至-78℃，滴加2.5M的nBuLi的己烷(8ml,20mmol)溶液，保持内部温度低于-60℃。滴加氯三甲基硅烷(2.26ml，17.4mmol.)处理反应混合物，保持内部温度低于-60℃。将反应混合物在1小时内加热至0℃。将反应混合物倒入冰冷的2M盐酸中，并剧烈搅拌10分钟。分离有机层，用乙酸乙酯萃取水层。合并的有机物用硫酸镁干燥并蒸发至干，得到无色油状产物(0.58g，54％)。m/z 184.2[M+1]+.
步骤2：4-溴-3-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)苯甲酸
在-78℃，向搅拌的由2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯胺(1.0g,5.1mmol)的四氢呋喃(6mL)组成的溶液中加入二异丙酰胺锂(2.0M在THF/庚烷/乙苯中，2.5ml,5.1mmol)。将所得悬浮液剧烈搅拌10分钟，之后加入4-溴-2,3-二氟苯甲酸(0.400g,1.7mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液。随后除去冷浴，将反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩混合物并用3M盐酸(10mL)处理浓缩物。所得悬浮液用***萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥。真空除去溶剂。残余物中加入己烷。沉淀的米色固体(382mg)用己烷和几滴乙酸乙酯洗涤并通过过滤分离。m/z400.1[M+].1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.06(s,1H),7.70-7.66(m,1H),7.38-7.33(m,1H),7.27(d,J＝11.7Hz,1H),7.20-7.17(m,1H),6.93-6.86(m,1H),0.22(s,9H).
步骤3：4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)苯甲酸
在氩气下，在微波小瓶中加入4-溴-3-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)苯甲酸(0.180g，0.4mmol)、氰化锌(0.05g，0.4mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.05g，0.05mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液。将反应混合物在90℃搅拌过夜。反应用水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机物用水、盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂。残余物通过快速色谱纯化(12g二氧化硅，0-70％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到黄色固体产物(50mg,32％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.95(s,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.24-7.21(m,2H),7.19-7.08(m,1H),7.00-6.93(m,1H),0.28(s,9H).
步骤4：4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸
在圆底烧瓶中加入4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)苯甲酸(0.49g,1.4mmol)的无水甲醇(6mL)和无水二氯甲烷(6mL)溶液。加入三氟乙酸银(0.66g，3.0mmol)。将反应混合物冷却至0℃。然后一次性加入碘(0.72g，2.8mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土过滤并除去溶剂。残余物用饱和硫代硫酸钠处理，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥。真空除去溶剂。向残余物中加入二氯甲烷，从而析出固体。过滤收集固体并干燥，得到米黄色固体产物(200mg,35％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.83-7.81(m,1H),7.59-7.54(dd,J＝1.8and 1.8Hz,1H),7.39-7.36(m,2H),6.74-6.66(m,1H).
实施例39：4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)苯甲酰胺
Figure BDA0003170052860001151
在微波小瓶中加入4-氰基-3-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸(0.100g，0.2mmol)、2-(氨基氧基)乙醇(0.03g，0.4mmol)、HATU(0.14g，0.4mmol)、和二异丙基乙胺(86μL，0.5mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机物用水、盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂。残余物通过快速色谱(12g二氧化硅，0-5％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化。收集产物级分并除去溶剂。残余物用反相HPLC(20-80％乙腈/水)再次纯化，得到淡黄色固体产物。m/z 458.0[M-1]-.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ11.93(s,1H),8.44(s,1H),7.67-7.62(m,1H),7.56(d,J＝9.6Hz,1H),7.47-7.44(m,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),6.70-6.63(m,1H),3.79(t,J＝4.4Hz,2H),3.55-3.53(m,2H).
按照实施例37所述制备以下化合物，将2-(氨基氧基)乙醇替换为适当的胺，其为市售可得的或使用本领域普通技术人员已知的条件制备的。
Figure BDA0003170052860001161
实施例41：6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001162
步骤1：6-氯-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸
Figure BDA0003170052860001163
在-78℃搅拌下，向2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯胺(9.2g,50mmol)的干燥THF(40mL)溶液中加入LiHMDS(1M在THF中,100mL,100mmol)。反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后加入2,6-二氯异烟酸(8g,41.7mmol)的干燥的THF(31mL)溶液。反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后逐渐升温至室温。在0℃，反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭，用EtOAc(200mL)稀释，用1M HCl酸化至pH3，并分配。水相用EtOAc(2×100mL)萃取，有机相用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。粗原料用甲醇研磨纯化，得到黄色固体产物(10.6g，75％)。m/z 339.1/341.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.94(s,1H),10.79(d,J＝2.9Hz,1H),8.41(t,J＝8.1Hz,1H),8.27(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(m,2H),7.00(d,J＝8.1Hz,1H),0.26(s,9H).
步骤2：6-氯-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001164
在室温下搅拌的6-氯-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸(0.5g，1.476mmol)于DCM(7.4mL)中的溶液用DIPEA(0.26mmol，1.476mmol)处理。10min后，将反应混合物冷却至0℃，并用DMF(0.03mL)和草酰氯(0.12mL，1.476mmol)处理，随后升温至室温。将反应混合物搅拌30分钟，然后在0℃搅拌下缓慢加入到DIPEA(0.26mL，1.476mmol)于MeOH(7.4mL)中的溶液中，随后升温至室温。15分钟后，真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc(20mL)中，用饱和NaHCO3水溶液(10mL)、H2O(10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到呈褐色固体产物(0.45g，87％)。m/z 353.1/355.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.48(d,J＝3.0Hz,1H),8.36(t,J＝7.9Hz,1H),8.29(d,J＝8.2Hz,1H),7.43–7.33(m,2H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),3.91(s,3H),0.26(s,9H).
步骤3：6-氰基-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001171
6-氯-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯(0.4g，1.13mmol)、氰化锌(0.11g，0.96mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.13g，0.11mmol)于NMP(3.5mL)中的脱气溶液在微波炉中，190°加热15min。过滤反应混合物，用EtOAc(20mL)稀释,用饱和NaHCO3水溶液(10mL)、H2O(10mL)盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-15％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(0.133g，43％)。m/z 344.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.43(d,J＝2.8Hz,1H),8.46(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(t,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.45–7.36(m,2H),3.94(s,3H),0.26(s,9H).
步骤4：6-氰基-2-(2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001172
四氟硼酸银(85mg,0.437mmol)于DCM(0.5mL)中的悬浮液在-50℃黑暗中搅拌5min，然后滴加6-氰基-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)-烟酸甲酯(50mg，0.146mmol)于DCM(1mL)中的溶液。15min后，用DCM(0.3mL)中的一氯化碘(26mg,0.161mmol)处理反应混合物。将反应混合物搅拌15min，再加入一份一氯化碘(7mg,0.044mmol)于DCM(0.1mL)中。15min后，反应混合物用饱和Na2S2O3水溶液(1mL)淬灭，用EtOAc(3×5毫升)萃取，有机相用盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂，得到黄色固体产物(53mg,91％)。m/z 398.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.37(d,J＝2.8Hz,1H),8.46(d,J＝7.8Hz,1H),8.11(t,J＝8.6Hz,1H),7.76(dd,J＝10.6,2.0Hz,1H),7.64(dd,J＝8.6,1.7Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),3.94(s,3H).
实施例42：6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸
Figure BDA0003170052860001181
室温搅拌6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯(0.42g，1.06mmol)于THF(3.2mL)、MeOH(1.05mL)和H2O(2.1mL)中的悬浮液，用1M LiOH水溶液(1.06mL，1.06mmol)处理。30min后，再加入一份M LiOH水溶液(1.06mL，1.06mmol)。30min后，真空浓缩反应混合物，将残余物在EtOAc(10mL)和H2O(10mL)之间分配。水相用1M HCl水溶液酸化至pH3，用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到黄色固体产物(0.40g，定量)。m/z 382.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.42(d,J＝7.7Hz,1H),8.21(t,J＝8.5Hz,1H),7.73(dd,J＝10.8,1.9Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.52(d,J＝7.7Hz,1H).
实施例43：6-氰基-N-乙氧基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酰胺
Figure BDA0003170052860001182
向6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸(100mg,0.26mmol)于干燥的DMF(2.5mL)中的悬浮液中加入HATU(200mg,0.52mmol)和DIPEA(0.13mL,0.65mmol)并将反应混合物加热至50℃，30min。然后将反应混合物冷却至室温，并加入乙氧胺盐酸盐(38mg,0.39mmol)于干燥的DMF(0.5mL)中的溶液，用DIPEA(0.05mL,0.39mmol)预处理5min。1h后，真空浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc(5mL)中，用H2O(5mL)和盐水(5mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，并真空浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅，0-37％EtOAc的己烷溶液)纯化，然后用***研磨，得到黄色固体产物(7mg，6％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.26min，m/z425.1[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.18(s,1H),10.89(s,1H),8.16(d,J＝7.7Hz,2H),7.71(dd,J＝10.7,2.0Hz,1H),7.60(dt,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),4.00(d,J＝7.1Hz,2H),1.24(t,J＝7.0Hz,3H).
实施例44：6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)烟酰胺
Figure BDA0003170052860001183
向室温下搅拌的6-氰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸(100mg,0.261mmol)和HATU(198.5mg,0.522mmol)于DMF(3mL)中的溶液中滴加DIPEA(91μl,0.522mmol)并监测反应，直至完成酸的HATU活化。2h后，2-(氨基氧基)乙烷-1-醇(30.2mg，0.395mmol)加入反应混合物中，在室温下搅拌45min。反应混合物用H2O(30mL)淬灭,用EtOAc(4×20mL)提取。合并的有机相用盐水(2×20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品经制备HPLC纯化，得到黄色固体产物(55.2mg，48％)。m/z 443.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 12.29(brs,1H),10.73(s,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),8.14(t,J＝8.5Hz,1H),7.71(dd,J＝10.7,2.0Hz,1H),7.60(dt,J＝8.6,1.3Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),4.79(br s,1H),4.00(t,J＝4.8Hz,2H),3.66(t,J＝4.9Hz,2H).
实施例45：6-氰基-5-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001191
步骤1：6-氯-5-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸
Figure BDA0003170052860001192
在-78℃下，搅拌的2-氟-4-(三甲基甲硅烷基)苯胺(8.4g，45.7mmol)于干燥的THF(34mL)中的溶液用LiHMDS(1M在THF中，91.2mL，91.2mmol)处理。反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后加入2,6-二氯-5-氟异烟酸(8g,38mmol)于干燥的THF(30mL)中的溶液。反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后逐渐升温至室温并搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃并用饱和的NH4Cl水溶液淬灭，然后用EtOAc(200mL)稀释,用1M HCl酸化至pH3,分配,水相用EtOAc(2×100mL)萃取。有机相用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料用甲醇研磨纯化，得到黄色固体产物(7.5g，55％)。m/z 357.0/359.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.69(s,1H),8.36(t,J＝8.0Hz,1H),8.28(d,J＝8.5Hz,1H),7.41–7.32(m,2H),0.25(s,9H).
步骤2：6-氯-5-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001193
在0℃搅拌的6-氯-5-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸(2.4g，6.726mmol)和DMF(0.32mL)于DCM(32mL)中的悬浮液用草酰氯(2.85mL，33.63mmol)处理，然后回流搅拌1h。真空浓缩反应混合物,用甲苯(3×25mL)共沸,然后用冰冷甲醇(32mL)处理残余物。回流搅拌得到的悬浮液。2h后，冷却反应混合物，减压过滤形成的沉淀。收集的沉淀用冰冷甲醇(3×5mL)洗涤并真空干燥，得到黄色固体产物(2.18g，88％)。m/z 371.1/373.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.33(d,J＝3.0Hz,1H),8.37–8.25(m,2H),7.44–7.33(m,2H),3.92(s,3H),0.26(s,9H).
步骤3：6-氰基-5-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001201
6-氯-5-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)烟酸甲酯(0.5g，1.35mmol)、氰化锌(0.14g，1.215mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.23g，0.20mmol)于NMP(3.5mL)中的脱气溶液在微波炉中，150°加热15min。。过滤反应混合物,用EtOAc(20mL)稀释,用饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤并分配。水相用EtOAc(3x10ml)萃取，合并的有机相用H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-15％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(0.425g，87％)。m/z 362.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.29(d,J＝2.8Hz,1H),8.51(d,J＝8.7Hz,1H),8.28(t,J＝8.0Hz,1H),7.46–7.37(m,2H),3.96(s,3H),0.27(s,9H).
步骤4：6-氰基-5-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001202
四氟硼酸银(0.69g,3.531mmol)于DCM(4.2mL)中的悬浮液在-50℃黑暗中搅拌10min，然后滴加6-氰基-5-氟-2-氟-2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)-烟酸甲酯(0.425g，1.177mmol)于DCM(8.5mL)中的溶液。30min后，用一氯化碘(0.21g,1.295mmol)于DCM(2.5mL)中处理反应混合物。将反应混合物搅拌30min，再加入一份一氯化碘(0.21g,1.295mmol)于DCM(2.5mL)中。30min后，反应混合物用饱和Na2S2O3水溶液(10mL)淬灭，用EtOAc(3×25毫升)萃取，有机相用盐水(25mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂，得到黄色固体产物(0.36g,76％)。m/z 416.4[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.22(s,1H),8.50(d,J＝8.8Hz,1H),8.05(t,J＝8.6Hz,1H),7.76(dd,J＝10.6,2.0Hz,1H),7.66–7.60(m,1H),3.95(s,3H).
实施例46：6-氰基-5-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸
Figure BDA0003170052860001203
室温搅拌6-氰基-5-氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)烟酸甲酯(0.36g，0.898mmol)于THF(2.7mL)、MeOH(0.9mL)和H2O(1.8mL)中的悬浮液，用1M LiOH水溶液(0.9mL，0.898mmol)处理。30min后，真空浓缩反应混合物，将真空浓缩反应混合物，将残余物在EtOAc(10mL)和H2O(10mL)之间分配。水相用1M HCl水溶液酸化至pH3，用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到棕色固体产物(0.30g,86％)。m/z 400.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.70(s,1H),8.43(d,J＝8.7Hz,1H),8.13(t,J＝8.7Hz,1H),7.72(dd,J＝10.7,1.9Hz,1H),7.61(dt,＝8.6,1.6Hz,1H).
实施例47：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
制备1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸的备选方案A
备选方案A的步骤1：1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲腈
Figure BDA0003170052860001211
将7-氮杂吲哚-3-甲腈(9.0g,62.8mmol)于干燥的DMF(80mL)中的溶液在冰浴中冷却至0℃，并用分批的方式用氢化钠(5.0g,125.7mmol，60％在矿物油中)处理。将所得混合物在0℃下搅拌45min，然后用碘甲烷(7.8mL，125.7mmol)处理，并在1h内逐渐升温至室温。然后小心地将混合物倒入H2O(450mL),用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机相依次用水(3×50mL)和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶120g，10-50％EtOAC的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(7.3g，74％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.30min，m/z 158.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.48(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.09(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.75(s,1H),7.25-7.30(m,1H),3.98(s,3H).
备选方案A的步骤2：1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001212
1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲腈(7.3g,46.5mmol)的浓盐酸(112M,73mL,876mmol)悬浮液，在100℃下搅拌加热10h，得到透明溶液。然后将反应混合物冷却到5℃(冰浴)，并用40％的NaOH水溶液小心处理，直到pH值达到2，导致白色沉淀的形成。将所得混合物搅拌1h，过滤，并用H2O洗涤固体直到在真空干燥前滤液pH变为中性，得到白色固体产物(6.9g，84％)。UPLC-MS(碱性法，2min)：rt 0.17min，m/z 175.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.28-8.37(m,2H),8.22(s,1H),7.25(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),3.86(s,3H).
制备1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸的备选方案B
备选方案B的步骤1：1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
Figure BDA0003170052860001213
向在冰浴中冷却的氢化钠(36.5g,914mmol)(60％在矿物油中)的无水DMF(300mL)悬浮液中经由加料漏斗在3h内加入7-氮杂吲哚(90.0g,762mmol)的DMF(200mL)溶液。搅拌反应混合物30分钟并在冰浴中冷却，然后经由滴液漏斗在30分钟内加入甲基碘(52mL,838mmol)。在r.t.下搅拌反应混合物经周末，UPLC分析显示反应不完全。加入另外的甲基碘(5mL，80.3mmol)，并用UPLC监测反应直到完成。反应混合物在冰浴中冷却并用H2O淬灭，萃取到EtOAc(3×800mL)中，合并的有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥，并真空除去溶剂，得到所需的深褐色双相油产物(130.7g(89.4g，89％活性化合物))。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt0.75min，m/z 133.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.25(dd,J＝4.6,1.5Hz,1H),7.94(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.50(d,J＝3.4Hz,1H),7.07(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),6.45(d,J＝3.4Hz,1H),3.82(s,3H).
备选方案B的步骤2：2,2,2-三氟-1-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酮
Figure BDA0003170052860001221
向在冰浴中冷却的1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(89.4g,676mmol)的DMF(450mL)溶液，经由加料漏斗在3h内滴加TFA(141mL,1.01mol)。反应在室温下搅拌过夜，然后用H2O(1L)稀释1h。H2O的加入导致沉淀形成，搅拌30分钟后，过滤。固体用H2O洗涤并干燥，得到白色固体状所需产物(121g,79％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.05min，m/z 229.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.80(d,J＝1.5Hz,1H),8.52(q,J＝1.5Hz,1H),8.50(s,1H),7.40-7.49(m,1H),3.97(s,3H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm:-71.6(s,1F).
备选方案B的步骤3：1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
向含有固体2,2,2-三氟-1-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙烯酮(89.9g,394mmol)的烧瓶中加入5M NaOH(788mL,3.94mol)，将所得混合物加热至50℃过夜。用H2O稀释反应混合物至50％，用TBME(800ml)洗涤。用浓HCl(330mL)将所得水层酸化至pH1，形成白色沉淀物。过滤沉淀物，用H2O(1.2L)洗涤并在40℃下真空干燥至恒定重量，得到白色固体状所需产物(69.9g，99％)。UPLC-MS(碱性法，2min)：rt 0.17min，m/z 175.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.28-8.37(m,2H),8.22(s,1H),7.25(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),3.86(s,3H
制备1-甲基-1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯的备选方案1
Figure BDA0003170052860001222
向在冰上冷却的按上述备选方案A或B制备的1-甲基-1H-吡咯并[2,3-B]吡啶-3-羧酸(10.0g，56.8mmol)的无水DCM(390mL)悬浮液中在15min内滴加草酰氯(14.4mL，170.4mmol)，并将混合物在室温下搅拌2h。然后真空浓缩混合物，得到黄色固体，用叔-丁醇(300mL,3.14mol)处理，然后加入叔丁醇钾(10.2g,91mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16h，然后真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶120g，0-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到浅棕色固体产物(12.6g，86％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.10min，m/z 233.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.35(dd,J＝4.6,1.6Hz,1H),8.27(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),8.20(s,1H),7.27(dd,J＝7.9,4.6Hz,1H),3.86(s,3H),1.56(s,9H).
制备1-甲基-1-H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯的备选方案2
在室温下搅拌下，如上所述备选方案A或B制备的1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(68.7g,390mmol)加入到亚硫酰氯(700mL,9.67mol)中，并将所得混合物搅拌过夜。然后在真空下除去亚硫酰氯，得到较浓的悬浮液，从甲苯(3×200mL)中共蒸馏除去，得到灰白色固体。这种材料随后悬浮于叔-丁醇(500mL)。固体叔丁醇钾(70g,624mmol)以分批的方式加入到悬浮液中，并将所得混合物搅拌过夜。在真空下除去溶剂，得到厚固体，将其在EtOAc(1.5L)和NaHCO3水溶液的饱和溶液(1L)之间分配。收集有机相并用NaHCO3水溶液的饱和溶液(1L)洗涤，Na2SO4干燥之前，过滤并蒸发至干，得到绿色固体状所需产物(66.7g，74％)。
2-氯-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001231
按上述备选方案1或备选方案2制备的1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(4.8g,21.0mmol)的干燥的THF(90mL)溶液用N2冲洗，冷却至-78℃,然后用LDA溶液(2M在THF中,21mL,42mmol)处理。混合物在-78℃下搅拌0.5h。加入六氯乙烷(9.9g,42.0mmol)的干燥的THF(30mL)溶液，将混合物逐渐升温至室温并搅拌1.5h。用饱和NH4Cl水溶液处理混合物，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶80g，0-12％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到淡黄色固体产物(4.5g，81％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.21min，m/z 267.1/269.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.37(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.27(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.32(dd,J＝7.9,4.7Hz,1H),3.83(s,3H),1.58(s,9H)
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001232
2-氯-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸酯(1.0g,3.8mmol)和2-氟-4-碘苯胺(0.8g,3.6mmol)的干燥的THF(20mL)悬浮液用N2冲洗,冷却至-78℃,用LiHMDS溶液(1M在THF中,7.5mL,7.5mmol)处理。将混合物逐渐升温至室温并搅拌3h。混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，然后用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶40g，0-12％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(1.5g，87％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.42min，m/z 468.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.57(s,1H),8.24(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.16(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.63(dd,J＝10.8,2.0Hz,1H),7.37(dt,J＝8.5,0.9Hz,1H),7.23(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),6.68(t,J＝8.8Hz,1H),3.55(s,3H),1.41(s,9H)
实施例48：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯
Figure BDA0003170052860001241
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(0.6g，1.3mmol)中加入亚硫酰氯(0.9mL，12.8mmol)，然后加入H2O(23μL)。烧瓶用橡胶隔板密封，混合物在室温下搅拌18h。混合物真空浓缩至干，得到米黄色固体产品(0.5g，94％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.28min，m/z 426.0[M+H]+(在用MeOH淬灭混合物的等分液后，检测为相应的甲酯)。
替代制备方法：搅拌的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(5.00g,10.7mmol)的无水1,4-二氧六环(28mL)溶液，在环境温度下用亚硫酰氯(7.7mL,107mmol)溶液处理，然后用4N氯化氢的1,4-二氧六环(14mL,5.35mmol)溶液处理,将所得混合物加热至50℃ 48h,将反应混合物冷却至40℃,并在真空下从无水甲苯中进行连续蒸馏过程(使该批次的总体积保持在30mL左右),以除去亚硫酰氯和1,4-二氧六环。得到2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯的深灰色悬浮液在后续步骤中使用，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.29min，m/z 426.0[M+H]+(将该批次等分样淬灭到甲醇中后，得到相应的甲酯)。
替代方案1制备2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001242
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(460mg,1.07mmol)的干燥的DCM(27mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，然后用干燥吡啶(970μL,11.98mmol)处理，将混合物搅拌15min，然后加入(2-氨基氧基)乙醇(124mg,1.61mmol)的干燥的DCM(2mL)溶液。将混合物搅拌15min，然后用DCM稀释，用1M柠檬酸水溶液酸化至pH3。有机相用H2O和盐水洗涤,用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品经制备HPLC纯化，得到白色固体产物(181mg，36％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.67min，m/z 471.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.84(br s,1H),8.69(br s,1H),8.25(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),8.13(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.63(dd,J＝10.8,1.9Hz,1H),7.33(dd,J＝8.5,1.1Hz,1H),7.21(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),6.52(t,J＝8.8Hz,1H),4.74(br s,1H),3.79(t,J＝4.9Hz,2H),3.48-3.54(m,5H).
替代方案2制备2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
在0℃，向2-(氨基氧基)乙醇(8.41g,109mmol)的无水THF(20mL)溶液中通过注射器加入2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(9.37g,21.8mmol)的无水THF(80mL)溶液和残余甲苯。40分钟后，UPLC分析显示完全转化。将反应混合物在EtOAc(300mL)和H2O(300mL)之间分配，过滤两相混合物并分离有机层。用EtOAc(200mL)萃取水层，合并有机物，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空除去溶剂。将粗固体悬浮在EtOAc(40mL，4体积)中，搅拌经过周末并过滤，可从苯甲醚重结晶得到暗米黄色固体状所需产物(7.45g，73％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.01min，m/z 471.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.84(br s,1H),8.69(br s,1H),8.25(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),8.13(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.63(dd,J＝10.8,1.9Hz,1H),7.33(dd,J＝8.5,1.1Hz,1H),7.21(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),6.52(t,J＝8.8Hz,1H),4.74(br s,1H),3.79(t,J＝4.9Hz,2H),3.48-3.54(m,5H).
实施例49：2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
2-((2-氟-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001251
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(100mg，0.21mmol，UPLC-MS纯度为71％)、碘化亚铜(1mg，0.004mmol)、PdCl2(PPh3)2(3mg,0.004mmol)的干燥的THF(0.5mL)溶液用N2冲洗，加入三甲基硅烷基乙炔(32μL，0.23mmol)的Et3N(21μL,1.49mmol)溶液。混合物在室温下搅拌3h。混合物用Et2O稀释，通过
Figure BDA0003170052860001252
Figure BDA0003170052860001253
垫过滤，滤液真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶4g，20-70％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到无色油状产物(25mg，38％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.20min，m/z441.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.83(s,1H),8.75(s,1H),8.27(dd,J＝4.7,1.6Hz,1H),8.15(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.51-7.63(m,1H),7.33(dd,J＝12.1,1.8Hz,1H),7.22(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),7.09(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),6.60(t,J＝8.7Hz,1H),4.70(t,J＝5.8Hz,1H),3.78(t,J＝4.9Hz,2H),3.47-3.57(m,5H),0.19(s,9H)
2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001261
2-((2-氟-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(100mg，0.23mmol，UPLC-MS纯度为80％)的MeOH(2.1mL)溶液用K2CO3(35mg,0.25mmol)处理。将混合物在室温温度下搅拌18h。混合物经制备HPLC纯化，得到白色固体产物(15mg，22％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.93min，m/z 369.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.25(br d,J＝3.5Hz,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(br d,J＝11.8Hz,1H),7.21(dd,J＝7.7,4.8Hz,1H),7.11(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),6.63(t,J＝8.7Hz,1H),4.09(s,1H),3.78(t,J＝4.7Hz,2H),3.37-3.55(m,5H).
实施例50：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-羟基-1-甲基-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸全氟苯基酯
Figure BDA0003170052860001262
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(0.9g,2.1mmol)的干燥的DCM(50mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，然后用Et3N(0.8mL，5.4mmol)和五氟苯酚(0.6g，3.2mmol)处理，搅拌1h。将混合物用1:1DCM/H2O溶液稀释。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到产物(1.56g，定量)用于下一步，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.43min，m/z 577.8[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.13(s,1H),8.29(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.13-8.17(m,1H),7.59-7.64(m,1H),7.42(dt,J＝8.4,1.0Hz,1H),7.20-7.31(m,1H),6.95(t,J＝8.7Hz,1H),3.65(s,3H).
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-羟基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001263
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-3-羧酸全氟苯基酯(400mg,0.69mmol,UPLC-MS纯度为85％)的干燥的DMF(2.4mL)悬浮液用盐酸羟胺(58mg,0.83mmol)和DIPEA(43μL,2.43mmol)处理。将混合物在室温下搅拌1h。将混合物真空浓缩，然后残余物用1：1EtOAc/H2O溶液稀释。有机相用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品经制备HPLC纯化，得到灰白色固体产物(104mg，39％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.03min，m/z 427.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.34(br s,1H),8.83(br s,1H),8.72(br s,1H),8.26(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.18(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.64(dd,J＝10.8,2.0Hz,1H),7.34(dt,J＝8.4,0.9Hz,1H),7.21(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),6.45(t,J＝8.9Hz,1H),3.52(s,3H).
实施例51：(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)异吲哚-1,3-二酮
Figure BDA0003170052860001271
在0℃，向N-羟基邻苯二甲酰亚胺(6.6g，40.5mmol)的THF(135mL)溶液中加入三苯基膦(10.6g，40.5mmol)和(S)-(2,2-二甲基-[1,3]二氧杂环戊烷-4-基)-甲醇(5mL,40.5mmol)。滴加偶氮二羧酸二异丙酯(10.3mL，52.7mmol)，同时保持内部温度低于15℃。加入完成后，将混合物加热至室温并在N2下搅拌2h。真空除去溶剂，残余物用DCM(50mL)稀释。过滤所得沉淀物，真空浓缩滤液。粗品通过快速柱层析(硅胶340g，10-100％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到白色固体产物(11.1g，99％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.06min，m/z278.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.85-7.82(m,2H),7.76-7.75(m,2H),4.52-4.46(m,1H),4.31(dd,J＝10.0,5.5Hz,1H),4.17(dd,J＝8.5,6.0Hz,1H),4.13(dd,J＝10.0,6.0Hz,1H),3.96(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),1.39(s,3H),1.33(s,3H).
(R)-邻-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)羟胺
Figure BDA0003170052860001272
在0℃下，向(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)异吲哚-1,3-二酮(3.0g，10.8mmol)的DCM(22mL)溶液中滴加甲基肼(0.62mL，11.9mmol)。将所得混合物加热至室温并在N2下搅拌1h。真空除去溶剂，残余物用***(20mL)稀释。将混合物搅拌0.5h，然后过滤和用***(2×20mL)洗涤。滤液真空浓缩至干，得到淡黄色油状产物(0.85g，46％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.00-4.94(m,1H),4.38-4.32(m,1H),4.06(dd,J＝8.5,6.5Hz,1H),3.74(dd,J＝6.0,5.0Hz,1H),3.69(dd,J＝8.5,6.5Hz,1H),1.43(s,3H),1.37(s,3H).
(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨 基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001281
向按实施例4中所述制备的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸全氟苯基酯(390mg,0.676mmol)的DMF(2mL)溶液中加入(R)-邻-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)羟胺(149mg,1.010mmol)的DMF(0.5mL)溶液和DIPEA(24μL,1.350mmo)。将所得混合物在室温N2下搅拌18h。用冰冷的H2O(50mL)稀释反应混合物,然后用EtOAc(2×25mL)萃取。合并的有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到暗红色固体产物(300mg,82％)，用于下一步，无需进一步纯化。
UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.15min，m/z 541.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.82(s,1H),8.75(s,1H),8.26(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),7.87(d,J＝7.5Hz,1H),7.50(dd,J＝10.0,1.5Hz,1H),7.40-7.37(m,1H),7.20(dd,J＝7.5,5.0Hz,1H),6.66(app t,J＝8.5Hz,1H),5.00-4.95(m,1H),4.51-4.45(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.85(dd,J＝9.0,6.5Hz,1H),3.52(s,3H),1.46(s,3H),1.40(s,3H)
实施例52：(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001282
向(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(220mg,0.40mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(39mg,0.20mmol)和乙二醇(13μL,2.40mmol)。将所得混合物在室温N2下搅拌0.5h。向反应混合物中加入几滴Et3N并真空除去溶剂。粗产物经制备HPLC纯化，得到灰白色固体产物(47mg，24％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.96min，m/z 501.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.89(s,1H),8.71(s,1H),8.27(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),8.16(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),7.64(dd,J＝10.5,1.5Hz,1H),7.37-7.35(m,1H),7.23(dd,J＝7.5,5.0Hz,1H),6.55(app t,J＝8.5Hz,1H),4.93(s,1H),4.60(s,1H),3.87-3.82(m,1H),3.72-3.66(m,2H),3.54(s,3H),3.39-3.35(m,2H).
实施例53：N-(环丙基甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001291
向按实施例4制备的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸全氟苯基酯(400mg,0.69mmol)的DMF(2.5mL)溶液中加入邻-(环丙甲基)羟胺盐酸盐(100mg,0.83mmol)的DMF(0.5mL)溶液和DIPEA(24μL,1.350mmo)。将所得混合物在室温N2下搅拌18h。用冰冷的H2O(50mL)稀释反应混合物,然后用EtOAc(2×25mL)萃取。合并的有机相用盐水(2×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗产物通过制备HPLC(ReachSeparations，UK)纯化，得到白色固体产物(135mg,36％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt1.95min，m/z 481.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 11.42(s,1H),10.75(s,1H),8.67(s,1H),8.25(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),8.14(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.63(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),7.22(dd,J＝7.5,5.0Hz,1H),3.56(d,J＝7.0Hz,1H),3.55(s,3H),1.04-0.97(m,1H),0.50-0.45(m,2H),0.22-0.18(m,2H).
实施例54：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
Figure BDA0003170052860001292
将5-甲氧基-7-氮杂吲哚(5.0g,33.7mmol)的干燥的DMF(25mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，并用分批的方式用氢化钠(1.6g,40.5mmol，60％在矿物油中)处理。将所得混合物在0℃下搅拌1h，然后用碘甲烷(2.3mL，37.1mmol)处理，并在在0℃下搅拌1h。然后小心地将混合物倒入H2O(200mL)，用EtOAc(3×30mL)萃取。合并的有机相依次用水(3×30mL)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到淡棕色固体产物(5.8g，定量)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 0.91min，m/z 161.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.12(d,J＝2.6Hz,1H),7.42(d,J＝2.8Hz,1H),7.27(s,1H),7.16(d,J＝3.4Hz,1H),6.37(d,J＝3.4Hz,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H).
5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001293
5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5.5g,46.5mmol)的干燥的DMF(7mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，并用三氟乙酸酐(10.6g,50.7mmol)处理。然后将反应混合物逐渐升温至室温并搅拌1h。将所得混合物在冰浴中冷却至0℃，用水(200mL)处理，并用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残留物悬浮于5M NaOH水溶液(68mL)中，在50℃下加热18h。反应混合物用Et2O(1×30mL)洗涤,用1M HCl水溶液小心处理,直至pH＝1，形成米黄色沉淀。通过过滤收集固体，用H2O洗涤直到滤液pH中性，干燥，得到米黄色固体产物(5.9g，85％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.80min，m/z 207.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.18(s,1H),8.10(d,J＝2.9Hz,1H),7.81(d,J＝2.9Hz,1H),3.86(s,3H),3.84(s,3H).
5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001301
向在冰上冷却的5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(5.9g,28.6mmol)的无水DCM(200mL)溶液中，在15min内滴加草酰氯(7.3mL,85.8mmol)并将混合物在室温下搅拌1.5h。然后在真空下浓缩混合物，得到黄色固体，在冰上冷却，然后用叔丁醇(150mL,1.6mol)处理，然后加入叔丁醇钾(5.1g，45.8mmol)。将所得混合物逐渐升温至室温并搅拌18h。真空浓缩反应混合物,在EtOAc(50mL)和H2O(50mL)分配，用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗物质通过快速柱层析(硅胶120g，0-3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到黄色固体产物(3.9g，53％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.15min，m/z 263.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.08–8.14(m,2H),7.76–7.81(m,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),1.57(s,9H).
2-氯-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001302
将5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(2.2g，8.6mmol)的干燥的THF(36mL)溶液用N2冲洗，冷却至-78℃，然后用LDA(2M在THF中，8.55mL,17.1mmol)溶液处理。在-78℃下搅拌30min。加入六氯乙烷(4.1g,17.1mmol)的干燥的THF(12mL)溶液，将混合物逐渐升温至室温并搅拌2h。用饱和NH4Cl水溶液处理混合物，并用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶120g，0-10％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到米黄色固体产物(2.4g，95％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.27min，m/z 297.1/299.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.12(br d,J＝2.6Hz,1H),7.78(br d,J＝2.5Hz,1H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),1.59(s,9H).
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔 丁酯
Figure BDA0003170052860001311
2-氯-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(2.4g,8.1mmol)和2-氟-4-碘苯胺(1.8g,7.7mmol)的干燥的THF(44mL)悬浮液用N2冲洗，冷却至-78℃，用LiHMDS溶液(1M在THF中,16.2mL,16.2mmol)处理。将混合物逐渐升温至室温并搅拌1.5h。混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，然后用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶120g，0-10％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到淡黄色固体产物(3.5g，91％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.59min，m/z 498.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.56(s,1H),7.98–8.03(m,1H),7.74(d,J＝2.8Hz,1H),7.64(dd,J＝10.8,1.9Hz,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),6.65(t,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,3H),3.56(s,3H),1.41(s,9H)
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯
Figure BDA0003170052860001312
将亚硫酰氯(5.1mL，69.8mmol)加入到2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-乙氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(3.5g，7.0mmol)中，然后加入H2O(130μL,7.0mmol)。烧瓶用橡胶隔板密封，混合物在室温下搅拌1.5h。将混合物真空浓缩至干，得到米黄色固体产物(3.6g，55％)，不经纯化用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.31min，m/z 456.0[M+H]+(在用MeOH淬灭混合物的等分液后，检测为相应的甲酯)。
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3- b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001313
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(1.0g,2.2mmol)的干燥的DCM(57mL)溶液在冰浴中冷却至0℃，然后用干燥吡啶(2mL,24.4mmol)处理，将混合物搅拌5min，然后加入(2-氨基氧基)乙醇(0.4g,5.4mmol)的干燥的DCM(5mL)溶液。混合物搅拌15min，然后真空浓缩。粗物质经制备HPLC纯化，得到米黄色固体产物(85mg，13％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.07min，m/z 501.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.79(s,1H),8.70(br s,1H),8.02(d,J＝2.6Hz,1H),7.75(d,J＝2.6Hz,1H),7.64(dd,J＝10.9,1.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.6Hz,1H),6.52(t,J＝8.8Hz,1H),4.75(br t,J＝5.8Hz,1H),3.80–3.89(m,5H),3.48–3.56(m,5H).
实施例55：(S)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001321
在N2中，2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(见实施例2，937mg,2.18mmol)的干燥的THF(4mL)溶液冰水浴中冷却同时搅拌。反应混合物用(S)-(+)-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(256mg,1.95mmol)和二异丙基乙胺(0.33mL,1.95mmol)的干燥的THF(5mL)溶液处理，搅拌18h，真空浓缩反应混合物，粗残余物通过快速柱层析(硅胶40g，20-80％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(512mg,44.4％)，用于后续步骤，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.10min，m/z 525.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.84(s,1H),8.34(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),8.29(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.65(dd,J＝10.7,1.9Hz,1H),7.59(s,1H),7.32-7.36(m,1H),7.24(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),6.44(t,J＝8.8Hz,1H),4.05-4.10(m,1H),3.86(dd,J＝8.3,6.27Hz,1H),3.56-3.62(m,1H),3.54(s,3H),3.36(td,J＝5.8,2.0Hz,2H),1.26(s,3H),1.22(s,3H).
实施例56：(S)-N-(2,3-二羟丙基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001322
(S)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)-氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(512mg,0.97mmol)的1,4-二氧六环(5.1mL)溶液用4N HCl的1,4-二氧六环(0.61mL,2.42mmol)溶液处理，在室温下搅拌72h。浓缩反应混合物，将残余物重悬浮于1,4-二氧六环(5.1mL)中，加入4N HCl的1,4-二氧六环(0.61mL,2.42mmol)溶液，搅拌16h直到反应完成。浓缩反应混合物，粗残余物通过制备HPLC纯化，得到絮状白色固体产物(172mg，36.6％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.89min，m/z 485.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.89(s,1H),8.33(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),8.29(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.65(dd,J＝10.7,1.9Hz,1H),7.52(t,J＝5.5Hz,1H),7.35(d,J＝8.6Hz,1H),7.24(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),6.46(t,J＝8.8Hz,1H),4.79(d,J＝4.8Hz,1H),4.57(t,J＝5.8Hz,1H),3.52(m,4H),3.39(m,1H),3.15-3.31(m,3H).
实施例57：((R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001331
在N2中，2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(见实施例2，937mg,2.18mmol)的干燥的THF(4mL)溶液冰水浴中冷却同时搅拌。反应混合物用(R)-(-)-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(256mg,1.95mmol)和二异丙基乙胺(0.33mL,1.95mmol)的干燥的THF(5mL)溶液处理，搅拌18h，真空浓缩反应混合物，粗残余物通过快速柱层析(硅胶40g，20-80％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(442mg,38.5％)，用于后续步骤，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.10min，m/z 525.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.83(s,1H),8.32-8.36(m,1H),8.27-8.32(m,1H),7.62-7.68(m,1H),7.55-7.62(m,1H),7.31-7.37(m,1H),7.21-7.27(m,1H),6.40-6.47(m,1H),4.05-4.09(m,1H),3.84-3.89(m,1H),3.57-3.62(m,1H),3.54(s,3H),3.37-3.38(m,2H),1.26(s,3H),1.22(s,3H).
实施例58：(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001332
(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)-氨基)-1-甲基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(442mg,0.84mmol)的1,4-二氧六环(4.4mL)溶液用4N HCl的1,4-二氧六环(0.52mL,2.1mmol)溶液处理,在室温下搅拌72h。浓缩反应混合物,将残余物重悬浮于1,4-二氧六环(4.4mL)中,加入4N HCl的1,4-二氧六环(0.52mL,2.1mmol)溶液,搅拌16h直到反应完成。浓缩反应混合物，粗残余物通过制备HPLC纯化，得到絮状白色固体产物(156mg，38％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.89min，m/z 485.0[M+H]+ .1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.89(s,1H),8.33(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),8.29(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.64(dd,J＝10.8,1.9Hz,1H),7.48-7.56(m,1H),7.35(dd,J＝8.5,1.1Hz,1H),7.24(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),6.46(t,J＝8.8Hz,1H),4.79(d,J＝4.8Hz,1H),4.57(t,J＝5.8Hz,1H),3.50-3.57(m,4H),3.41(dt,J＝13.2,5.6Hz,1H),3.14-3.31(m,3H).
实施例59：2-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001341
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基氯(0.50g，1.16mmol)的1，4-二氧六环(2.3mL)溶液在N2冰/水浴下搅拌，在5分钟内滴加0.5M NH3的1，4-二氧六环(2.7mL，1.33mmol)溶液。加入另外部分的1，4-二氧六环(2.3mL)，并将反应混合物搅拌18h，同时升温至室温。然后将反应混合物真空浓缩至干，粗品通过快速柱层析(硅胶20g，20-100％EtOAC的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(39.1mg，9％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.97min，m/z 411.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.07(s,1H),8.34(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),8.27(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.67(dd,J＝10.7,1.9Hz,1H),7.38(dd,J＝8.4,1.1Hz,1H),7.22(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),7.13(br s,2H),6.52(t,J＝8.8Hz,1H),3.50(s,3H).
实施例60：2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001342
步骤1：2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯
将硫光气(8.0g，69.6mmol)加入快速搅拌的2-氟-4-碘苯胺(15.00g,63.3mmol)的二氯甲烷(200mL)和水(150mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。分离有机相，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，过滤。真空除去溶剂，得到米色固体的标题化合物(17.1g，96.8％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.87(dd,J＝1.8Hz and 1.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.24(t,J＝8.3Hz,1H).
步骤2：2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸
将15％w/w氢氧化钠(150mL)溶液加入到2-(2-氯吡啶-3-基)乙腈(10.0g，62.3mmol)中.将混合物加热回流1小时，然后冷却至室温。将混合物进一步冷却至0～5℃,然后用浓HCl(～60mL)酸化至pH1。悬浮液在冰浴中静置1小时。通过过滤收集形成的沉淀并用冷水洗涤，然后用冷的2-丙醇(100毫升x 2)洗涤。真空干燥固体，得到灰白色固体的标题化合物(10.6g，99％)。1HNMR(300MHz,d6-DMSO):δ12.63(s,1H),8.32(dd,J＝4.8and 1.9Hz,1H),7.86(dd,J＝7.6and 1.9Hz,1H),7.41(dd,J＝7.5and 4.5Hz,1H),3.75(s,2H).
步骤3：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酸
向搅拌的二异丙胺(0.82mL，5.8mmol)的无水THF(5mL)中的溶液冷却至-15℃，缓慢地加入正丁基锂(2.5M在己烷中，2.3mL，5.8mmol)，将***温度保持在-10℃～0℃之间。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后冷却至0℃。将这样形成的LDA在0℃下加入到快速搅拌的2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸(500mg,2.9mmol)的无水THF(10mL)溶液中。将得到的亮黄色悬浮液搅拌15min。然后将2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(814mg,2.9mmol)的无水THF(10mL)溶液中加入反应混合物(棕色悬浮液)，并加热到65℃反应18h。冷却反应混合物，真空除去挥发物。将所得粗产物再溶解于THF中，冷却至0℃，并缓慢加入10％的乙酸水溶液(10mL)。缓慢加入乙腈(5mL)直到形成褐色固体，过滤分离固体并用***和乙腈洗涤，得到标题化合物。LC/MS:[M+1]+415；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ10.74(s,1H),9.21(s,1H),8.36-8.25(m,2H),7.79(d,J＝1.8Hz,1H),7.68-7.61(m,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H),7.42-7.31(m,1H).
步骤4：2-((2-氟-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3- 羧酸
在氮气下，将2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酸(0.150g，0.4mmol)、碘化铜(3mg,0.02mmol)二氯化二(三苯基)钯(II)(12mg,0.02mmol)的干燥的THF(10mL)溶液装入圆底烧瓶中。烧瓶脱气并用氮气冲洗3次。然后将溶解在0.4mL三乙胺中的三甲基硅烷基乙炔(0.040g，0.4mmol)在10分钟内非常缓慢地加入。将悬浮液搅拌15小时。然后将反应混合物倒入乙酸乙酯(150mL)中，用水(3x50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥。减压除去溶剂，残余物通过快速层析(12g二氧化硅，0-10％甲醇的DCM溶液)纯化，得到淡棕色油状产物(90mg，65％)。LC/MS:[M+1]385.1.
步骤5：2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
2-((2-氟-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(0.090g，0.2mmol)、甲醇(5mL)和THF(1mL)装入圆底烧瓶，碳酸钾(0.065g，0.5mmol)添加到所得的悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌3小时，此时TLC和LC/MS均表明反应完成。向反应混合物中加入水并用乙酸乙酯(3x25ml)萃取，合并的有机物用盐水洗涤，并用MgSO4干燥。将溶剂蒸发至干，得到棕色固体化合物(60mg，82％)。该用于下一步反应，无需进一步纯化。LC/MS:312.3[M+1].
步骤6：2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-(乙烯基氧基)乙氧基)噻吩并[2,3- b]吡啶-3-甲酰胺
将2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(0.060g，0.2mmol)、邻-(2-(乙烯基氧基)乙基)羟胺(0.03g，0.3mmol)、HATU(0.11g，0.3mmol)和二异丙基乙胺(66ul,0.4mmol)在DMF(4mL)中装入微波炉小瓶中。反应混合物在室温下，搅拌2小时。反应物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3x25 mL)萃取。减压除去溶剂，残余物通过快速层析(4g二氧化硅，0-5％甲醇的DCM溶液)纯化，得到黄色固体产物(35mg，46％)。LC/MS:398.2[M+1].
步骤7：2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3- 甲酰胺
将2-((4-乙炔基-2-氟苯基)氨基)-N-(2-(乙烯基氧基)乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(0.03g，0.1mmol)、乙醇(3mL)和2N HCl(1mL)装入圆底烧瓶中，反应混合物在室温下搅拌1小时。除去溶剂，用1N NaOH溶液将含水残余物中和至pH7，并用乙酸乙酯(3x25ml)萃取。合并的有机物，用水和盐水洗涤并用MgSO4干燥。减压除去溶剂，残余物通过快速色谱纯化(4g，0-10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到淡黄色固体产物(13mg，43％)。LC/MS:[M+1]+372.0；1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.47(s,1H),8.36(dd,J＝4.5and 1.2Hz,1H),7.90(dd,J＝8.1and 1.2Hz,1H),7.1(t,J＝8.4Hz,1H),7.37-7.30(m,3H),4.17-4.15(m,2H),3.85(t,J＝4.5Hz,2H).
实施例61：2-((2-氟-4-(甲硫基)苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001361
步骤1：(3-氟-4-异硫氰基苯基)(甲基)硫烷
将硫光气(5.48g，47.7mmol)加入快速搅拌的2-氟-4-(甲硫基)苯胺(5.00g，31.8mmol)的DCM(60mL)和水(40mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。分离有机相，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，过滤。真空除去溶剂，得到黄色固体的标题化合物(5g，78.9％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.41-7.31(m,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),2.49(s,3H).
步骤2：2-(2-氟-4-(甲硫基)苯胺基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
搅拌的二异丙胺(1.65mL，11.7mmol)的无水THF(10mL)溶液冷却至-15℃，在-10℃至0℃之间向其中缓慢加入正丁基锂(2.5M在己烷中，4.80mL，12.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后冷却至0℃。在0℃，将这样形成的LDA溶液加入到快速搅拌的2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸(1.00g，5.8mmol)的无水THF(20mL)悬浮液中。完全加入LDA溶液后，将得到的亮黄色悬浮液在0℃下搅拌15分钟。然后将(3-氟-4-异硫氰基苯基)(甲基)硫烷(1.63g，8.2mmol)于的无水THF(10mL)溶液加入到反应混合物并加热至65℃反应18小时。将反应混合物冷却至室温，真空除去挥发物。将得到的棕色胶重新溶解在THF中，冷却至0℃，缓慢加入10％乙酸水溶液10mL。缓慢加入乙腈(5mL)直到形成黄色固体，过滤分离固体并用***和乙腈洗涤，得到黄色固体状的标题化合物(546mg,20％)。LC/MS:[M+1]335.1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.34(d,J＝8.1Hz,1H),7.85-8.20(m,1H),7.61(t,J＝8.6Hz,1H),7.39-7.30(m,2H),7.21(d,J＝9.2Hz,1H),2.52(s,3H).
步骤3：N-(2-(乙烯基氧基)乙氧基)-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯基氨基)噻吩并[2,3- b]吡啶-3-甲酰胺
将2-(2-氟-4-(甲硫基)苯胺基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(0.100g，0.1mmol)、邻-(2-(乙烯基氧基)乙基)羟胺(25mg，0.2mmol)、HATU(0.085g，0.2mmol)和二异丙基乙胺(52ul,0.3mmol)和DMF(4mL)装入小瓶中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应用水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机物用水、盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，得到淡黄色固体(88mg)，无需进一步纯化即可使用。LC/MS:[M+1]420.0.
步骤4：2-(2-氟-4-(甲硫基)苯胺基)-N-(2-羟乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲 酰胺
在微波反应瓶中装入N-(2-(乙烯基氧基)乙氧基)-2-(2-氟-4-(甲硫基)苯胺基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(0.088g)、乙醇(2mL)和2N HCl(2mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应用水淬灭，调pH至8～10，再用乙酸乙酯萃取。有机物用水和盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂。残余物经快速层析(4g二氧化硅，0-5％MeOH/DCM)纯化。收集产物级分，真空除去溶剂。残余物通过制备TLC(5％MeOH/DCM)再次纯化，并干燥，得到淡黄色固体(12mg，24％)。LC/MS:[M+1]:394.19.1HNMR(300MHz,CDCl3):δ10.70(s,1H),8.37(s,1H),8.33-7.84(m,1H),7.88-7.81(m,1H),7.52(t,J＝8.4Hz,1H),7.32-7.25(m,1H),7.12-7.06(m,1H),4.15(t,J＝4.38Hz,2H),3.85(m,2H),2.46(s,3H).
实施例62：2-((2-氟-4-碘苯基))氨基)-N-(2-羟基乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺的合成
步骤1：(2-氯吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003170052860001371
0℃，氮气气氛下，20分钟内将固体氢化铝锂(11.06g，291.41mmol)小批次地加入到搅拌的2-氯烟酸甲酯(25g，145.71mmol)的无水THF(250mL)溶液中，保持内部温度低于5℃。将得到的灰色悬浮液加热到50℃保持2h，然后在搅拌下16h内冷却到室温。然后将反应混合物冷却至0℃，并小心地加入饱和硫酸钠水溶液淬灭，从而形成悬浮液。将混合物通过硅藻土垫，随后用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤硅藻土垫。合并的滤液用乙酸乙酯(500mL)稀释并用水(250mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，得到棕色油状粗产物。通过硅胶层析纯化，用乙酸乙酯(10-40％)的己烷溶液梯度洗脱，得到淡棕色固体状的所需化合物(7.13g，34.1％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.60min，m/z 144.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.28(dd,J＝4.77Hz,1.76Hz,1H),7.93(dt,J＝7.59Hz,0.97Hz,0.97Hz,1H),7.29(dd,J＝7.40Hz,5.14Hz,1H),4.79(s,2H),3.23(br,s,1H).
步骤2：(2-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯
Figure BDA0003170052860001372
在0℃，甲磺酰氯(7.70mL，99.380mmol)滴加到搅拌的(2-氯吡啶-3-基)甲醇(7.134g，49.960mmol)和Et3N(13.85mL，99.380mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液，注意保持内部温度在5℃以下。添加完成后，在搅拌下将反应混合物加热至环境温度2h。反应混合物用水(200mL)淬灭，用二氯甲烷(2×200mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到棕色油状所需产物(12.02g，100％)。这种材料未经进一步纯化即可用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.79min，m/z 222.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.43-8.36(m,1H),7.88-7.84(m,1H),7.35-7.28(m,1H),5.33(s,2H),3.69(s,1H),3.11(s,3H)
步骤3：2-(2-氯吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA0003170052860001381
在室温下，将***(7.98g，162.77mmol)一次性地加入到(2-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(12.02g，54.24mmol)的DMF(50mL)溶液中，并将所得混合物在相同温度下搅拌2h。然后将反应物倒入水中(200mL)，所得混合物用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到粗产物，该粗产物通过柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(10-30％)梯度洗脱，得到淡棕色固体状所需产物(5.34g，64.5％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.73min，m/z 153.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(dd,J＝4.77Hz,1.76Hz,1H),7.89(ddt,J＝7.62Hz,1.79Hz,0.82Hz,0.82Hz,1H),7.34(dd,J＝7.53Hz,4.77Hz,1H),3.87(s,2H)。
步骤4：2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001382
2-(2-氯吡啶-3-基)乙腈(5.34g，34.97mmol)溶解在15％(w/w)的NaOH水溶液(50mL)中，将所得溶液在环境温度下搅拌60min。然后用浓盐酸酸化反应至pH＝1，形成米色沉淀，过滤收集，用水(2×25mL)洗涤，并在烘箱中于40℃真空干燥，得到米色固体所需的产物(5.57g，92.8％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.66min，m/z 172.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.64(br,s,1H),8.33(dd,J＝4.77Hz,2.01Hz,1H),7.86(dd,J＝7.53Hz,2.01Hz,1H),7.41(dd,J＝7.53Hz,4.77Hz,1H),3.76(s,2H).
步骤5：2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001383
在0℃，向冷却的N,N'-二环己基碳二亚胺(7.36g，35.69mmol)的二氯甲烷(120mL)溶液加入DMAP(3.17g，25.96mmol)，然后加入2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸(5.57g，32.45mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌5min。然后向反应中加入叔-丁醇(9.3mL，97.337mmol)，将所得混合物在搅拌下加热至室温12h。然后将反应物蒸发至干，得到残余物，将其溶于***(400mL)中。然后通过硅藻土垫过滤***溶液，用***(2×200mL)洗涤。合并滤液依次用1MNaOH水溶液(300mL)、2N HCl水溶液(300mL)、水(300mL)和盐水(200mL)洗涤。然后有几层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到作为残余物的粗产物。通过快速柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(5-20％)梯度洗脱，得到米色固体所需产物(5.25g，71.0％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.08min，m/z 228.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.31(dd,J＝4.77Hz,2.01Hz,1H),7.63(dd,J＝7.53Hz,2.01Hz,1H),7.22(dd,J＝7.53Hz,4.77Hz,1H),3.68(s,2H),1.46(s,9H).
步骤6：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001391
向2-(2-氯吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(5.05g，22.16mmol，1eq)的四氢呋喃(200mL)溶液中加入叔丁醇钠(2.24g，23.27mmol，1.05eq)，并将所得混合物在室温下搅拌15min。然后将2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(6.18g，22.16mmol，1eq)加入到反应中，并将所得溶液搅拌30min。然后将混合物搅拌回流16h，然后冷却至室温，并在乙酸乙酯(300mL)和水(300mL)之间分配。收集水层并用乙酸乙酯(300mL)萃取，合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。粗品通过柱层析纯化，用二氯甲烷洗脱，得到米色固体所需产物(8.49g，78.3％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.54min，m/z 471.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 10.70(br,s,1H),8.25(q,J＝1.67Hz,1H),8.23(s,1H),7.46-7.43(m,2H),7.40-7.35(m,1H),7.19(dd,J＝4.52Hz,3.01Hz,1H),1.61(s,9H).
步骤7：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001392
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(1.00g，2.13mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液用4N HCl的二氧六环(20mL)溶液处理，所得混合物在室温下搅拌48h，然后将溶液浓缩至干，得到油状物，该油状物与二氯甲烷(2×25mL)共蒸馏，得到黄色固体所需产物(1.04g，100％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.24min，m/z 414.9[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.73(s,1H),8.42(dd,J＝8.16Hz,1.63Hz,1H),8.38(dd,J＝4.77Hz,1.51Hz,1H),7.90(dd,J＝10.16Hz,1.88Hz,1H),7.76-7.73(m,1H),7.60(t,J＝8.53Hz,8.53Hz,1H),7.48(dd J＝8.28Hz,4.77Hz,1H),3.63(s,1H).
步骤8：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲 酰胺
Figure BDA0003170052860001401
向搅拌的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(1.5g，3.62mmol，1eq)、HATU(1.9g，5.07mmol，1eq)和吡啶(0.59mL，7.24mmol，2eq)的DMF(15mL)和DMSO(15mL)的混合物中的溶液中加入2-氨基氧乙醇(0.56g，7.24mmol，2eq)，并将所得混合物在室温下搅拌16h。将反应倒入水(100mL)中，所得混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机物用盐水(3×50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到作为残余物的粗品。通过prep-HPLC纯化，得到淡黄色固体状所需产物(209mg，12％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.11min，m/z 473.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.29(br s,1H),10.36(br s,1H),8.30-8.41(m,1H),8.02-8.19(m,1H),7.70-7.87(m,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.42(br t,J＝8.7Hz,2H),4.63-4.86(m,1H),3.94(br d,J＝4.4Hz,2H),3.65(br d,J＝4.6Hz,2H).
实施例63：合成(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)-2-((2-氟-4-碘 苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001402
向磁力搅拌的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸在DMF中的混合物中加入HATU和TEA，并将所得混合物搅拌15min。然后向反应中加入(R)-邻-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)羟胺，并将所得混合物在室温下搅拌15h。将反应混合物倒入水(30mL)中，得到黄色沉淀物，过滤收集。所得固体用水(2×25mL)洗涤，并在40℃真空干燥，得到黄色固体状的粗产物(0.27g)，直接用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.17min，m/z 544.0[M+H]+.
步骤2：(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡 啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001411
(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺(270mg，0.50mmol)的甲醇(10mL)和乙二醇(140L)溶液用对-甲苯磺酸一水合物(41mg，0.21mmol)处理，将所得混合物搅拌15h。将混合物蒸发至干，得到胶状粗产物，用制备HPLC纯化，得到灰白色固体状所需产物(70mg)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.96min，m/z 503.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.94-11.70(m,1H),10.06-10.79(m,1H),8.29(br s,1H),8.13(br d,J＝4.39Hz,1H).7.76(br d,J＝10.04Hz,1H),7.55-7.64(m,1H)7.31-7.46(m,2H),4.82-5.12(m,1H),4.51-4.72(m,1H),3.93-4.05(m,1H),3.72-3.86(m,2H),3.42(br d,J＝4.77Hz,2H).
实施例64：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：2-氯-6-甲基吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003170052860001412
将冷2-氯-6-甲基吡啶-3-羧酸甲酯(10g，53.88mmol)的无水四氢呋喃(120mL)溶液用氢化铝锂(4.09g，107.75mmol)处理，该氢化铝锂在20min内分批加入，注意保持内部温度低于10℃。添加完成后，将反应混合物在50℃下搅拌12h。然后在冰水浴中冷却反应，并通过加入Na2SO4的饱和水溶液(100mL)来淬灭，形成悬浮液，通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(2×300mL)洗涤。将合并的滤液蒸发至干，得到浅橙色油，其通过柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(0-40％)梯度洗脱，得到淡黄色油状所需产物(5.5g，65％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.70min，m/z 158.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.74(d,J＝7.7Hz,1H),7.11(d,J＝7.8Hz,1H),4.74(s,2H),2.52(s,3H),2.46(br s,1H)
步骤2：(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)甲磺酸甲酯
Figure BDA0003170052860001413
在0℃下，将甲磺酰氯(5.4mL，69.8mmol)滴加到(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(5.5g，34.9mmol)和Et3N(9.7mL，69.8mmol)的二氯甲烷(52mL)溶液中，注意保持内部温度在5℃以下。添加完成后，在搅拌下使反应混合物升温至室温保持2h，然后用水(200mL)淬灭，并用二氯甲烷(2×250mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到棕色油状所需产物(7.9g，96％)，无需进一步纯化直接用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt0.86min，m/z 236.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.71(t,J＝7.5Hz,1H),7.14(dd,J＝7.7,14.62Hz,1H),5.29(s,1H),4.65(s,1H),3.03-3.16(m,3H),2.54(d,J＝6.2Hz,3H)
步骤3：2-(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA0003170052860001421
向(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(7.9g，33.5mmol)的DMF(48mL)溶液中加入***(4.9g，100.5mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌2h。然后将反应物倒入水中(250mL)，所得混合物用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到作为残余物的粗品，通过柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(0-30％)梯度洗脱，得到淡黄色固状所需产物(3.2g,58％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.84min，m/z 167.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),3.82(s,2H),2.56(s,3H)
步骤4：2-(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001422
搅拌的2-(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙腈(3.2g，19.2mmol)的15％(w/w)NaOH溶液(32mL)中的溶液加热回流30min。然后将混合物冷却至室温并用浓HCl酸化至pH＝1，得到米色沉淀物，通过过滤收集，用水(2×50mL)洗涤并在真空下干燥，得到米色固体状所需产物(3.2g，90％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.76min，m/z 186.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.53(d,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝7.7Hz,1H),3.79(s,2H),2.53(s,3H)
步骤5：2-(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001423
在0℃，向搅拌的N,N'-二环己基碳二亚胺(3.9g，18.92mmol)的二氯甲烷(72mL)溶液加入DMAP(1.7g，13.76mmol)，然后加入2-(2-氯6-甲基吡啶-3-基)乙酸(3.2g，17.2mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌5min。然后向反应中加入叔-丁醇(9.3mL，51.6mmol)，将所得混合物在搅拌下加热至室温16h。然后将反应物蒸发至干，得到残余物，将其溶于二***(400mL)中，通过硅藻土垫，用二***(2×200mL)洗涤。合并的滤液依次用1M NaOH水溶液(300mL)、2N HCl水溶液(300mL)、水(300mL)和盐水(200mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗物质通过柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(0-30％)梯度洗脱，得到淡黄色油状所需产物(3.03g，73％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.14min，m/z242.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.05(d,J＝7.7Hz,1H),3.62(s,2H),2.51(s,3H),1.44(s,9H)
步骤6：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001431
在氮气气氛下，向2-(2-氯-6-甲基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(3.03g，12.5mmol)的四氢呋喃(250mL)溶液中加入叔丁醇钠(1.26g，13.13mmol)。形成黄色溶液，在室温下搅拌15min。然后加入2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(3.5g，12.5mmol)，并将溶液搅拌30min。溶液变成浅棕色。最后将混合物搅拌回流过夜。将反应冷却至室温并在乙酸乙酯(300mL)和水(300mL)之间分配。收集有机相，水层用乙酸乙酯(300mL)萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤和浓缩。粗物质通过柱层析纯化，用二氯甲烷洗脱，得到黄色固体状所需产物(2.5g，42％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.56min，m/z 484.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm10.70(br s,1H),8.21(d,J＝8.3Hz,1H),7.49-7.54(m,2H),7.42-7.48(m,1H),7.13(d,J＝8.5Hz,1H),2.59(s,3H),1.68(s,9H).
步骤7：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001432
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(0.26克，0.54mmol)的二氯甲烷(5.5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.55mL，7.18mmol)，得到的混合物在室温下搅拌4h，然后浓缩反应混合物，得到残余物，从甲苯(3×50mL)中共蒸馏，得到黄色固体状所需产物(0.24g，100％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.15min，m/z 428.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.63(s,1H),8.24(d,J＝8.3Hz,1H),7.83(dd,J＝1.9,10.2Hz,1H),7.65-7.70(m,1H),7.52(t,J＝8.6Hz,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H)
步骤8：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶- 3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001433
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(0.24g，0.56mmol)的无水四氢呋喃(14mL)溶液中加入PyBOP(0.41mg，0.78mmol)，然后加入Et3N(0.23mL，1.68mmol)，并将所得溶液在室温下搅拌30min。然后向反应中加入2-(氨基氧基)乙-1-醇(65mg，0.84mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌反应12h。向反应中加入水(50mL)，形成两相混合物。收集水相，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗品经prep-HPLC纯化，得到淡黄色固体状所需产物(115mg，42％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 1.84min，m/z 487.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.24(br s,1H),10.11-10.38(br s,1H),7.93-8.06(m,1H),7.67-7.80(m,1H),7.58(br d,J＝7.7Hz,1H),7.36(br t,J＝8.6Hz,1H),7.28(br dd,J＝4.1,7.2Hz,1H),4.59-4.84(br s,1H),3.92(t,J＝4.9Hz,3H),3.63(br d,J＝3.8Hz,3H).
实施例65：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003170052860001441
在0℃下，向2-氯-6-甲氧基烟酸甲酯(5.0g，24.8mmol)的THF(50mL)溶液中分批次加入氢化铝锂(1.88g，49.6mmol)，注意温度保持在10℃以下。添加完成后，将反应混合物在50℃下搅拌反应3h。然后将反应混合物冷却至0℃，然后小心加入饱和硫酸钠水溶液(50mL)淬灭。将所得悬浮液搅拌20min，然后通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，得到黄橙色油状所需产物(3.82g，89％)。UPLC-MS(酸性法，10min)：rt 0.83min，m/z 174.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.69(d,J＝8.2Hz,1H)6.69(d,J＝8.2Hz,1H)4.70(s,2H)3.88(s,3H)
步骤2：(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯
Figure BDA0003170052860001442
在0℃下，将甲磺酰氯(3.4mL，44.0mmol)加入到搅拌的(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)甲醇(3.82g，22.0mmol)的二氯甲烷(90mL)溶液中，并将所得混合物在室温下搅拌3h。将反应混合物倒入水(100mL)中，得到两相溶液。收集有机相，水相用二氯甲烷(2×50mL)萃取。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，得到橙色固体状所需产物(4.26g，77％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.13min，m/z 252.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.65(d,J＝8.2Hz,1H)6.69(d,J＝8.2Hz,1H)4.64(s,2H)3.94(s,3H)3.14(s,3H)
步骤3：2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA0003170052860001443
在5分钟内将***(2.48g，50.7mmol)分批次加入到(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(4.26g，16.9mmol)的DMF(17mL)溶液中，并将所得混合物在室温下搅拌24h。将反应倒入水(100mL)中，所得混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机物用盐水(2×200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。粗品通过快速柱层析纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液(0-5％)梯度洗脱，得到白色固体状所需产物(1.75g，57％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.96min，m/z 183.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CHCl3)δppm 7.69(d,J＝8.2Hz,1H),6.73(d,J＝8.2Hz,1H),3.94(s,3H),3.75(s,2H).
步骤4：2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001451
在60℃下，将2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙腈(1.75g，9.5mmol)的15％w/wNaOH(16mL)水溶液中的悬浮液搅拌24h。然后将反应混合物冷却至室温，并用浓盐酸酸化pH＝1。过滤收集所得沉淀物，并用水(2×20mL)洗涤，然后在40℃下真空干燥，得到白色固体状所需产物(1.50g，78％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.84min，m/z 202.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.51(br s,1H),7.76(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),3.85(s,3H),3.66(s,2H).
步骤5：2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001452
向2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙酸(1.34g，6.65mmol)的叔丁醇(15mL)中的悬浮液中加入二碳酸二叔丁酯(2.3mL，9.97mmol)，然后加入DMAP(0.082g，0.67mmol)，所得混合物在50℃下搅拌18h。将反应混合物冷却至室温并蒸发至干，得到残余物，用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品，通过快速柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(20-80％)梯度洗脱，得到淡黄色油状所需产物(1.27g，69％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.21min，m/z 258.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.49(d,J＝8.2Hz,1H),6.65(d,J＝8.2Hz,1H),3.92(s,3H),3.58(s,2H),1.45(s,9H).
步骤6：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001453
将2-(2-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(1.0g，3.88mmol)和叔丁醇钠(0.41g，4.27mmol)加入微波小瓶中，然后加入THF(35mL)，将所得混合物搅拌5min。将2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(1.11g，3.88mmol)的THF(5mL)中的溶液加入到微波小瓶中，并将所得混合物在室温下搅拌1h。然后向小瓶中加入氟化铯(0.295g，1.94mmol)，并将反应混合物在微波辐射下于90℃加热1h。将混合物冷却至室温并蒸发至干，得到粗产物，该粗产物通过快速柱层析纯化，用二氯甲烷洗脱，得到黄色固体状所需产物(0.564g，30％)。
UPLC-MS(酸性法，4min):rt 2.95min，m/z 500.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 10.56(s,1H),8.25(d,J＝8.8Hz,1H),7.43-7.53(m,3H),6.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.96(s,3H),1.78(s,9H).
步骤7：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001461
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(0.050g，0.10mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(0.3mL)。在室温，N2氛围下，将所得混合物搅拌6h。真空除去溶剂，并与甲苯(2×10mL)共蒸馏，得到黄色固体状所需产物(0.44g，100％)，无需进一步纯化即可用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.35min，m/z 445.0[M+H]+.
步骤8：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡 啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001462
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(0.050g，0.11mmol)的THF(2mL)悬浮液中加入PyBOP(0.078g，0.15mmol)和三乙胺(0.05mL，0.33mmol)。将所得混合物在室温下，N2氛围中搅拌30min。加入2-(氨基氧基)乙醇(0.011mL，0.15mmol)的THF(0.1mL)溶液，反应混合物在室温下，N2氛围中搅拌1h。反应混合物用水(10mL)稀释，然后用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干，得到粗产物，用制备型HPLC纯化，得到灰白色固体状所需产物(0.023g，22％)。UPLC-MS(酸性法，4min):rt 2.10min，m/z 503.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.30(br s,1H),9.77(br s,1H),8.11(br s,1H),7.70(br s,1H),7.53(br d,J＝8.2Hz,1H),7.26(br d,J＝8.2Hz,1H),6.91(br d,J＝7.0Hz,1H),4.77(br s,1H),3.90(s,3H),3.89(br s,2H),3.62(br s,2H).
实施例66：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003170052860001463
将2-氯-5-甲氧基烟酸甲酯(0.5g，2.48mmol)的无水THF(5mL)溶液冷却至0℃并用氢化铝锂(0.19g，4.96mmol)分批次处理。添加完成后，将混合物加热至50℃反应1h。然后将混合物冷却至0℃并用硫酸钠水溶液处理，并将所得混合物在环境温度下搅拌0.5h。混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，通过硅藻土垫过滤。用乙酸乙酯(2×20mL)洗涤硅藻土垫，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到粗产物，通过快速柱层析纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液(0-5％)梯度洗脱，得到棕色油状所需产物(0.368g，86％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.72min，m/z 174.0/175.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.97(d,J＝3.0Hz,1H),7.47(dt,J＝3.1,0.8Hz,1H),4.74(s,2H),3.86(s,3H)
步骤2：(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯
Figure BDA0003170052860001471
将(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)甲醇(2.74g，15.84mmol)的无水二氯甲烷(60mL)溶液冷却至0℃，并依次用三乙胺(4.42mL，31.67mmol)和甲磺酰氯(2.45mL，31.67mmol)处理，将所得混合物缓慢升温环境温度搅拌1h。将混合物用水(30mL)稀释，并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，在真空下过滤并浓缩，得到棕色油状所需产物(3.99g，100％)。UPLC-MS(酸性法，2min):rt＝0.87min，m/z 252.0/254.0[M+H]+和1.01min,m/z 192.0/194.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.06-8.10(m,1H),7.35-7.43(m,1H),5.29(s,1H),4.65(s,1H),3.89(s,3H),3.14(s,1H),3.11(s,2H)
步骤3：2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA0003170052860001472
用***(117mg，2.39mmol)处理(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(200mg，80mmol)的无水DMF(1mL)溶液，并将所得混合物在环境温度下搅拌1h。混合物用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机相依次用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物通过快速柱层析纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液(0-4％)梯度洗脱，得到黄色固体状所需产物(89mg，61％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt0.86min，m/z 183.0/185.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.07(d,J＝2.9Hz,1H),7.41-7.44(m,1H),3.90(s,3H),3.84(s,2H)
步骤4：2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001473
将2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙腈(1.19g，6.55mmol)的15％(w/v)氢氧化钠水溶液(11.9mL)中的悬浮液在100℃下加热搅拌2h，得到透明溶液。然后将反应混合物冷却至5℃(冰浴)，并用1M氯化氢水溶液小心处理，直到溶液呈酸性(pH＝1)，导致形成灰白色沉淀。通过过滤收集固体，并用水洗涤，直到滤液pH呈中性。然后在真空下干燥固体，得到米色固体状所需产物(1.18g，89％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.78min，m/z 202.1/204.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.03(d,J＝3.0Hz,1H),7.52(d,J＝3.0Hz,1H),3.82(s,3H),3.69(s,2H)
步骤5：2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001474
2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙酸(980mg，4.80mmol)的叔丁醇(10.9mL)悬浮液依次用二碳酸二叔丁酯(1.67mL，7.28mmol)和4-二甲氨基吡啶(59mg，0.48mmol)处理，所得混合物在50℃下加热2h。将混合物冷却至环境温度，并在真空下浓缩，得到残余物，将其溶于乙酸乙酯(20mL)中。溶液用水(20mL)洗涤，水相用乙酸乙酯(120mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到油状粗产物，通过快速柱层析纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液(0-15％)梯度洗脱，得到黄色油状所需产物(990mg，79％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.16min，m/z 258.1/260.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.01(d,J＝3.0Hz,1H),7.21(d,J＝3.0Hz,1H),3.88(s,3H),3.66(s,2H),1.48(s,9H)
步骤6：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001481
将2-(2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(50mg，0.194mmol)的无水THF(2mL)溶液用叔丁醇钠(20mg，0.213mmol)处理，并将所得混合物在环境温度下搅拌5min。然后将2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(54mg，0.194mmol)的无水THF(0.5mL)溶液加入到反应中，得到的混合物在环境温度下搅拌1.5h，然后在90℃微波辐射下加热2h。将混合物冷却至环境温度，并真空浓缩，得到油状粗产物，通过快速柱层析(二氧化硅12g，0-7％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，然后用己烷研磨所得到的固体，得到淡黄色固体状所需产物(33mg，34％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.84min，m/z 500.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 10.79(br s,1H),8.08(d,J＝2.9Hz,1H),7.93(d,J＝2.8Hz,1H),7.45-7.56(m,3H),3.90(s,3H),1.71(s,9H)
步骤7：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001482
用三氟乙酸(2.5mL)处理2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(385mg，0.77mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液，并将所得混合物在环境温度下搅拌18h。然后真空浓缩混合物以得到油状物，从甲苯(2×20mL)共蒸馏，得到黄色固体状所需产物(342mg，100％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.14min，m/z 443.0[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.69(s,1H),8.06(d,J＝2.8Hz,1H),7.88(d,J＝2.8Hz,1H),7.82(dd,J＝10.2,1.9Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.51(t,J＝8.6Hz,1H),3.85(s,3H).
步骤8：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡 啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001491
将2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(342mg，0.77mmol)的THF(15mL)悬浮液依次用PyBOP(546mg，1.05mmol)和三乙胺(0.32mL，2.31)处理，并将所得混合物在环境温度下搅拌0.5h。向反应中加入(2-氨基氧基)乙醇(81mg，1.05mmol)，将所得混合物在环境温度下搅拌18h。然后将混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，用制备型HPLC纯化，得到黄色固体状所需产物(131mg，34％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 1.85min，m/z 503.9[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.29(s,1H),10.43(br s,1H),8.09(br s,1H),7.77(br d,J＝10.3Hz,1H)7.57-7.64(m,2H),7.41(t,J＝8.6Hz,1H),4.78(br s,1H),3.85-3.96(m,5H)3.68-3.61(m,2H)
实施例67：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：(2-氯-5-氟吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003170052860001492
将2-氯-5-氟烟酸甲酯(100mg，0.53mmol)的无水THF(4mL)溶液冷却至0℃，用硼氢化钠(120mg，3.17mmol)分批次处理5min，所得混合物在70℃下加热15min。然后在15min内滴加甲醇(0.8mL)，产生相当大的气泡，并将所得混合物在70℃下加热30min。将混合物冷却至环境温度，并用饱和氯化铵水溶液(5mL)处理。加入乙酸乙酯(5mL)，得到两相混合物，搅拌30min。收集有机相，水层用乙酸乙酯(2×5mL)萃取。然后用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤并在真空下浓缩，得到橙色玻璃状所需产物(84mg，99％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt0.73min，m/z 162.0/164.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.17(d,J＝3.0Hz,1H),7.71(ddt,J＝8.3,3.0,0.9,0.9Hz,1H),4.78(s,2H).
步骤2：(2-氯-5-氟吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯
Figure BDA0003170052860001493
将(2-氯-5-氟吡啶-3-基)甲醇(225mg，1.39mmol)的无水二氯甲烷(5mL)溶液冷却至0℃并用三乙胺(0.39mL，2.78mmol)处理，随后用甲磺酰氯(0.22mL，2.78mmol)处理。然后将所得混合物逐渐升温至环境温度并搅拌1h。将混合物用水(5mL)稀释，并用二氯甲烷(2×5mL)萃取。合并的有机相用盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到棕色油状所需产物(335mg，100％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt＝0.88min，m/z 240.1/242.0[M+H]+和1.03min,m/z 223.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.24-8.30(m,1H),7.62-7.68(m,1H),5.29(s,1H),4.65(s,1H),3.15(s,3H).
步骤3：2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙腈
Figure BDA0003170052860001501
用***(3.0g，61.7mmol)处理(2-氯-5-氟吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(4.93g，20.6mmol)的无水DMF(20.6mL)溶液，并将所得混合物在环境温度下搅拌4h。混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机相依次用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗产物，其通过快速柱层析纯化，用二氯甲烷的己烷溶液(0-80％)梯度洗脱，得到浅棕色油状所需产物(1.38g，39％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.84min，m/z 171.1/173.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.30(d,J＝2.9Hz,1H),7.70(ddt,J＝7.8,2.9,0.8,0.8Hz,1H),3.88(t,J＝0.6Hz,2H).
步骤4：2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001502
将2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙腈(1.38g，8.09mmol)的15％(w/v)氢氧化钠水溶液(13.8mL)中的悬浮液在100℃下加热搅拌0.5h，得到透明溶液。然后将反应混合物冷却至5℃(冰浴)，并用1M氯化氢水溶液小心处理，直到溶液呈酸性(pH＝1)，导致形成灰白色沉淀。通过过滤收集固体，并用H2O洗涤，直到滤液pH呈中性。然后在真空下干燥固体，得到灰白色固体状所需产物(1.22g，80％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.75min，m/z 190.0/192.00[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.73(br s,1H),8.38(d,J＝3.0Hz,1H),7.91(dd,J＝8.8,3.0Hz,1H),3.76(s,2H).
步骤5：2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001503
2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸(1.22g，6.43mmol)的叔丁醇(17mL)悬浮液依次用二碳酸二叔丁酯(2.22mL，9.65mmol)和4-二甲氨基吡啶(82mg，0.643mmol)处理，所得混合物在50℃下加热1.5h。然后将混合物冷却至环境温度，并在真空下浓缩，得到残余物，将其溶于乙酸乙酯(20mL)中。将所得溶液依次用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥、过滤和在真空下浓缩,得到油状粗产物，通过快速柱层析纯化，将其用乙酸乙酯的己烷溶液(0-10％)梯度洗脱，得到淡黄色油状所需产物(1.25g,79％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.16min，m/z 246.1/248.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.20(d,J＝3.0Hz,1H),7.45(dd,J＝8.0,2.9Hz,1H),3.69(s,2H),1.47(s,9H).
步骤6：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001511
将2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(1.15g，4.68mmol)的无水THF(34mL)溶液用叔丁醇钠(0.49g，5.148mmol)处理，并将所得混合物在环境温度下搅拌10min。然后将2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(1.31g，4.68mmol)的无水THF(6mL)溶液加入到反应中，得到的混合物在环境温度下搅拌1.5h，然后在90℃微波辐射下加热2h。将混合物冷却至环境温度，并真空浓缩，得到油状物，通过快速柱层析用乙酸乙酯的己烷溶液(0–5％)将其纯化，得到白色固体状所需产物(1.39g，56％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.63min，m/z 489.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.44(s,1H),8.34(dd,J＝2.8,0.8Hz,1H),7.95(dd,J＝10.6,2.8Hz,1H),7.85(dd,J＝10.0,1.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(t,J＝8.5Hz,1H),1.64(s,9H).
步骤7：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001512
用三氟乙酸(8mL)处理2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(1.39g，2.85mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液，并将所得混合物在环境温度下搅拌18h。然后真空浓缩混合物以得到油状物，其从甲苯(2×20mL)共蒸馏，得到黄色固体状所需产物(1.22g，99％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.30min，m/z 431.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.64(s,1H),8.33(dd,J＝2.7,0.7Hz,1H),8.07(dd,J＝10.42,2.76Hz,1H),7.85(dd,J＝10.1,1.8Hz,5H),7.68(dt,J＝8.5,1.0Hz,1H),7.51(t,J＝8.5Hz,1H).
步骤8：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3- 甲酰胺
Figure BDA0003170052860001513
将2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-3-羧酸(500mg，1.16mmol)的THF(20mL)悬浮液依次用PyBOP(822mg，1.58mmol)和三乙胺(0.49mL,3.48mmol)处理，并将所得混合物在环境温度下搅拌0.5h。向反应中加入(2-氨基氧基)乙醇(122mg，1.58mmol)，将所得混合物在环境温度下搅拌18h。将混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物，将其用制备型HPLC纯化，得到浅黄色固体状所需产物(115mg，20％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.19min，m/z491.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.33(s,1H),10.48(s,1H),8.36(s,1H),7.90(d,J＝9.9Hz,1H),7.81(dd,J＝10.2,1.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(t,J＝8.5Hz,1H),4.81(br s,1H),3.95(br t,J＝4.7Hz,2H),3.64(br d,J＝4.3Hz,2H).
实施例68：5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩-3-甲酸甲酯(四取代噻吩-3-酯的通用合成方法)
Figure BDA0003170052860001521
2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(2.0g，7.16mmol)和3-氧代戊酸甲酯(0.9mL，7.16mmol)的DMF(20mL)溶液在室温下搅拌，加入K2CO3(2.0g，14.33mmol)。在加入氯丙酮(10.6mL，7.16mmol)之前搅拌4.5h，并进一步继续搅拌18h。反应用H2O(150mL)淬灭,用EtOAc(2×150mL)萃取。合并的有机提取物用盐水(150mL)洗涤，经NaSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。粗品通过快速柱层析(硅胶40g，5-30％EtOAC的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(2.2g，67.3％)。m/z 448.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.82-7.87(m,1H),7.67-7.70(m,1H),7.45(m,1H),3.86(s,3H),3.15-3.23(q,J＝7.3Hz,2H),2.42(s,3H),1.11-1.19(t,J＝7.3Hz,3H).
实施例69：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-甲酸乙酯
Figure BDA0003170052860001522
按照实施例1中概述的四取代噻吩的通用方法合成标题物质，使用2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(2.0g，7.16mmol)、4-甲基-3-氧代戊酸乙酯(1.2mL，7.16mmol)、DMF(20mL)、K2CO3(2.0g，14.33mmol)和氯丙酮(0.6mL，7.16mmol)。在通过快速柱层析(硅胶40g，5-30％EtOAC的己烷溶液)纯化，产物作为白色絮状固体(2.4g，69.3％)分离。m/z 475.9[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.83(dd,J＝10.2,1.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(t,J＝8.6Hz,1H),4.33(q,J＝7.0Hz,2H),3.07(sep,J＝6.6Hz,1H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H),1.08(d,J＝6.7Hz,6H).
实施例70：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯
Figure BDA0003170052860001523
按照实施例1中概述的四取代噻吩的通用方法合成标题物质，使用2-氟-4-碘-1-异硫氰基苯(1.0g，3.6mmol)、乙酰乙酸乙酯(0.5mL,3.6mmol)、DMF(10mL)、K2CO3(1.0g,7.2mmol)和氯丙酮(0.3mL，3.6mmol)。产物经处理后以橙色固体(1.6g，99％)分离，未经进一步纯化使用。m/z 447.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 7.50-7.58(m,2H),7.44-7.50(m,1H),4.43(d,J＝7.1Hz,2H),2.79(s,3H),2.53(s,3H),1.44(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例71：5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩-3-羧酸(酯水解通用方法)
Figure BDA0003170052860001531
5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩-3-羧酸甲酯(1.8g，4.02mmol)、THF(72mL)、MeOH(24mL)和H2O(48mL)的溶液在室温下搅拌，并用1M LiOH(24.1mL，24.1mmol)处理。连接回流冷凝器，反应混合物在50℃下搅拌18h。冷却的反应混合物用1M HCl酸化，用EtOAc(2×100mL)萃取，合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，用NaSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色固体。粗固体用DCM研磨，得到产物(1.75g，定量)，未经进一步纯化使用。m/z 433.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.76-10.89(br s,1H),7.79-7.81(m,1H),7.65-7.70(m,1H),7.46-7.52(m,1H),3.20-3.27(q,J＝7.2Hz,2H),2.44(s,3H),1.15(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例72：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001532
按照如实施例4中概述的酯水解的通用方法合成标题物质，使用5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-羧酸乙酯(2.0g，4.2mmol)、THF(75.7mL)、EtOH(25.2mL)、H2O(50.5mL)和1M LiOH(25.2mL，25.2mmol)。用丙酮研磨纯化棕色粗固体，得到灰白色固体产物(1.0g，54.6％)。m/z 447.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.82(br s,1H),7.82(dd,J＝10.4,1.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(t,J＝8.6Hz,1H),3.10(sep,J＝6.6Hz,1H),2.67-2.74(m,3H),1.09(d,J＝6.6Hz,6H).
实施例73：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001533
按照实施例4中概述的酯水解的通用方法合成标题物质，使用5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(1.6g，3.6mmol)、THF(64mL)、EtOH(21.3mL)、H2O(42.8mL)和1M LiOH(21.3mL，21.3mmol)。用丙酮研磨纯化棕色粗固体，得到棕色固体产物(0.8g，68.7％)。m/z 419.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.43(br s,1H),10.82(br s,1H),7.81(dd,J＝10.4,1.8Hz,1H),7.68(m,1H),7.48(t,J＝8.6Hz,1H),2.70(s,3H),2.45(s,3H).
使用适当的起始中间体和试剂，按照上面给出的通用方法制备下列化合物：
Figure BDA0003170052860001541
实施例76：5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)噻吩-3-甲酰胺(酰胺偶联的通用方法)
Figure BDA0003170052860001542
5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩-3-羧酸(200mg，0.46mmol)、HATU(340mg，0.92mmol)、DMF(4.45mL)在反应小瓶TM中的溶液用DIPEA(0.15mL，0.92mmol)处理。密封反应小瓶TM，将反应混合物加热至50℃反应1h，然后冷却至室温，加入2-(氨基氧基)乙醇(48μL，0.69mmol)。重新密封反应小瓶TM，将反应混合物在室温下搅拌3天。反应混合物通过制备型HPLC纯化，得到灰白色/黄色固体产物(28mg，12.3％)。m/z 493.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.40-11.49(br s,1H),8.98-9.10(br s,1H),7.70(br d,J＝10.2Hz,1H),7.53(br d,J＝8.1Hz,1H),7.17(br t,J＝8.2Hz,1H),4.78-4.85(br s,1H),3.81(t,J＝4.0Hz,2H),3.53–3.59(t,J＝4.0Hz,2H),2.93(m,2H),2.38(s,3H),1.10(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例77：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-4-异丙基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001551
按照实施例9中概述的酰胺偶联的通用方法合成标题物质，使用5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-羧酸(100mg，0.22mmol)、HATU(170mg，0.44mmol)、DMF(2.2mL)、DIPEA(70μl,0.44mL)和2(氨基氧基)乙醇(23μL，0.33mL)。反应混合物用制备型HPLC纯化，得到淡黄色/灰白色固体产物(9.0mg，7.9％)。m/z 506.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.35(br s,1H),9.45(br s,1H),7.73(br d,J＝9.4Hz,1H),7.56(br d,J＝8.5Hz,1H),7.26(br t,J＝8.5Hz,1H),4.81(br s,1H),3.80-3.91(m,2H),3.40-3.64(m,2H),3.04(sep,J＝6.6Hz,1H),1.07(d,J＝6.6Hz,6H).
实施例78：5-乙酰基-N-(环丙基甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001552
按照实施例9的合成中概述的酰胺合成的通用方法合成标题物质，使用5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-羧酸(100mg，0.22mmol)、HATU(170mg，0.44mmol)、DMF(2.2mL)、DIPEA(70μl,0.44mL)和邻-环丙基甲基羟胺盐酸盐(41mg，0.33mL)的吡啶(0.25mL)溶液。反应混合物用制备型HPLC纯化，得到淡黄色/灰白色固体产物(7.2mg，7.8％)。m/z 516.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 7.58-7.65(m,2H),7.47(t,J＝8.6Hz,1H),3.77-3.79(d,J＝7.2,2H),3.09-3.20(m,1H),2.66(s,3H),1.78-1.81(m,1H),1.15-1.18(d,J＝6.6Hz,6H),0.57-0.62(m,2H),0.29-0.34(m,2H).
实施例79：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001553
按照如实施例9的中概述的酰胺的通用方法合成标题物质，使用5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-异丙基噻吩-3-羧酸(100mg，0.22mmol)、HATU(170mg，0.44mmol)、DMF(2.2mL)、DIPEA(70μl,0.44mL)和在1,4-二氧六环(0.67mL，0.33mmol)中的0.5M NH3。反应混合物用制备型HPLC纯化，得到灰白色固体产物(13.4mg，13.4％)。m/z 446.9[M+H]+.1HNMR(400MHz,CD3CN):δppm 11.05-11.14(br s,1H),7.55-7.62(m,2H),7.43-7.50(m,1H),6.19-6.30(br s,2H),3.06-3.18(m,1H),2.71(s,3H),1.13(d,J＝6.7Hz,6H).
实施例80：5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟乙氧基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001561
将5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-羧酸(400mg，0.95mmol)、PyBOP(631mg，1.21mmol)、THF(4.8mL)在反应瓶TM中的溶液用三乙胺(0.16mL，1.12mmol)处理，密封并在室温下搅拌30min。然后加入2-(氨基氧基)乙醇(106mg,1.38mmol)，重新密封反应瓶TM并继续搅拌18h。反应混合物用EtOAc(150mL)稀释，依次用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗产物经制备HPLC纯化，得到黄色固体产物(103mg，22.6％)。m/z 479.28[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3CN):δppm 7.59-7.66(m,2H),7.45(t,J＝8.8Hz,1H),3.99-4.05(m,2H),3.70-3.73(m,2H),2.64(s,3H),2.46(s,3H).
实施例81：(S)-5-乙酰基-N-(2,4-二羟基丁基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001562
步骤1：(S)-5-乙酰基-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2- 氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001563
5-乙酰基-4-乙基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)噻吩-3-羧酸(1.00g，2.39mmol)、PyBOP(1.61g，3.10mmol)和Et3N(0.4mL，2.87mmol)的THF(12.5mL)溶液于室温下搅拌30min，然后用(S)-(+)-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(0.47g，3.59mmol)处理搅拌2h。真空浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc(30mL)中，用水(30mL)洗涤，然后用盐水(30mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。粗固体通过快速柱层析(硅胶40g，0-35％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体状所需产物(0.87g，69％)。m/z 533.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.67(s,1H),8.16(t,J＝5.9Hz,1H),7.74(dd,J＝10.5,1.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.29(t,J＝8.7Hz,1H),4.13(quin,J＝5.9Hz,1H),3.94(dd,J＝8.3,6.3Hz,1H),3.67(dd,J＝8.3,5.6Hz,1H),3.36-3.44(m,1H),3.24-3.33(m,1H),2.54(s,3H),2.43(s,3H),1.34(s,3H)1.26(s,3H).
步骤2：(S)-5-乙酰基-N-(2,4-二羟基丁基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基 噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001571
(S)-5-乙酰基-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(0.64g，1.20mmol)的1,4-二氧六环(5mL)溶液用4M HCl的1,4-二氧六环(0.75mmol)溶液处理，并在室温下搅拌4h。过滤形成的沉淀，用1,4-二氧六环、Et2O和EtOH洗涤，得到灰白色固体产物(0.351g，59％)。m/z 492.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.87(s,1H),7.91(t,J＝5.8Hz,1H),7.73(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(t,J＝8.7Hz,1H),4.83(d,J＝5.0Hz,1H),4.61(t,J＝5.7Hz,1H),3.58-3.65(m,1H),3.33-3.41(m,3H),3.10-3.25(m,1H),2.55(s,3H),2.43(s,3H).
实施例82：(R)-5-乙酰基-N-(2,4-二羟基丁基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001572
步骤1：(R)-5-乙酰基-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2- 氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001581
向5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-羧酸(1.00g，2.39mmol)的THF(12.5mL)溶液中加入Et3N(0.4mL，2.87mmol)和PyBOP(1.62g，3.11mmol)。将所得混合物搅拌30min，然后加入(R)-(-)-(2,2-二甲基-[1,3]二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(471mg，3.59mmol)的THF(0.5mL)溶液。将反应混合物搅拌4h，然后真空除去溶剂，粗残余物经EtOAc和H2O之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并真空除去溶剂。粗品通过快速柱层析(硅胶40g，20-30％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到浅紫色固体产物(969mg，76％)。m/z533.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.66(s,1H),8.14(t,J＝5.9Hz,1H),7.73(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(t,J＝8.7Hz,1H),4.13(quin,J＝5.9Hz,1H),3.94(dd,J＝8.3,6.3Hz,1H),3.67(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.35-3.46(m,1H),3.23-3.31(m,1H),2.54(s,3H),2.42(s,3H),1.33(s,3H),1.25(s,3H).
步骤2：(R)-5-乙酰基-N-(2,4-二羟基丁基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基 噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001582
向(R)-5-乙酰基-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰胺(417mg,0.783mmol)的二氧六环(5mL)溶液中加入4NHCl的二氧六环(0.49mL,1.96mmol)溶液。将反应混合物在室温下搅拌18h，形成沉淀。过滤固体材料，并用Et2O洗涤，得到淡紫色固体产物(331mg，86％)。m/z 492.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.88(s,1H),7.93(br t,J＝5.6Hz,1H),7.74(dd,J＝10.4,1.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(t,J＝8.7Hz,1H),4.86(d,J＝5.0Hz,1H),4.64(t,J＝5.7Hz,1H),3.61(br d,J＝6.7Hz,1H),3.29-3.43(m,3H),3.13-3.22(m,1H),2.56(s,3H),2.42(s,3H).
实施例83：(R)-5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基-N-(哌啶-3-基)噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001591
步骤1：(R)-3-(5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰氨基) 哌啶-1-羧酸叔丁酯
按照上面给出的通用合成实施例，使用适当的起始中间体和试剂制备标题化合物。m/z:600.2[M-1]+.
步骤2：(R)-5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基-N-(哌啶-3-基)噻吩- 3-甲酰胺
将在二氯甲烷(8mL)中的(R)-3-(5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基噻吩-3-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.062g，0.1mmol)装入圆底烧瓶中，向其中滴加在二氧六环(0.26mL，1.0mmol)中的4M氯化氢。将反应混合物在室温下搅拌过夜。即使在加入更多酸(0.13mL)后，反应也仅完成50％。通过离心机分离形成的固体，用二氯甲烷洗涤3次，并用冷冻干燥器干燥，得到浅橙红色固体标题化合物(19mg，37％)。m/z 502.2[M+1]+.1H NMR(300MHz,DMSO[-d6):δ9.51(s,1H),8.93-8.80(m,2H),8.23(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(d,J＝9.9Hz,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),7.24(t,J＝8.9Hz,1H),4.08-4.05(m,1H),3.24-3.12(m,2H),2.73-2.70(m,2H),2.49(s,3H),2.39(s,3H),1.84-1.80(m,2H),1.67-163(m,1H),1.48-1.45(m,1H).
实施例74：(R)-5-乙酰基-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-4-甲基-N-(吡咯烷-3-基)噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001592
通过实施例14的两步方法制备标题化合物。m/z488.1[M+1]+.1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.54(s,1H),9.02-8.92(m,2H),8.36(d,J＝6.0Hz,1H),7.73(dd,J＝1.8and1.8Hz,1H),7.56(d,J＝9.0Hz,1H),7.25(t,J＝8.4Hz,1H),4.45-4.38(m,1H),3.24-3.08(m,4H),2.51(s,3H),2.40(s,3H),2.15-2.07(m,1H),1.91-1.85(m,1H).
实施例75：(R)-1-(4-(3-氨基吡咯烷-1-羰基)-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-3-甲基噻吩-2-基)乙酮
Figure BDA0003170052860001601
通过实施例14的两步方法制备标题化合物。m/z 488.1[M+1]+.
使用适当的起始中间体和试剂，按照上面给出的通用方法制备下列化合物：
Figure BDA0003170052860001602
Figure BDA0003170052860001611
实施例94：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯
Figure BDA0003170052860001612
步骤1：2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯胺
Figure BDA0003170052860001621
4-溴-2-氟苯胺(5.00g，26.31mmol)在无水THF(33mL)中的溶液在N2下冷却到-78℃，在20min内向其中滴加n-BuLi(1.6M在己烷中，65.75mL，105.25mmol)，保持内部温度在-60℃以下。然后除去冷却浴，当内部温度达到0℃时，向混合物中加入冰冷的2M HCl(150mL)并剧烈搅拌10min。分离有机相，用水(100mL)和饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤。另外用DCM(4×100mL)萃取水相，有机相用饱和NaHCO3溶液(2×200mL)洗涤。合并的有机相用Na2SO4干燥，真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶80g，0-10％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到红棕色油状固体产物(2.71g，56％)。m/z 184.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 7.02(dd,J＝1.2,11.8Hz,1H),6.97(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),6.76(dd,J＝7.8,8.9Hz,1H),5.21(br s,2H),0.17(s,9H).
步骤2：2-溴-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯
Figure BDA0003170052860001622
将三颈烧瓶中的溴化铜(II)(6.53g，29.25mmol)的乙腈(77mL)溶液在N2下冷却至0℃，向其中滴加亚硝酸叔丁酯(90％,3.2mL，24.03mmol)。将混合物在0℃下搅拌20min，然后在N2流下使用漏斗按批次加入固体2-氨基-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(5.00g，20.89mmol)。在N2中0℃下，进一步搅拌混合物30min,然后在2M HCl水溶液(250mL)和EtOAc(200mL)之间分配。水相另外用EtOAc(4×100mL)萃取。合并的有机相用Na2SO4，并真空浓缩。粗品通过快速柱层析(硅胶120g，0-100％DCM己烷的溶液)纯化，得到浅棕色固体产物(3.85g，61％)。m/z 304.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 4.40(q,J＝7.1Hz,2H),3.08(t,J＝6.1Hz,2H),2.61(dd,J＝7.2,6.0Hz,2H),2.01-2.35(m,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤3：2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b] 噻吩-3-羧酸乙酯
Figure BDA0003170052860001623
在反应瓶TM中，Pd2(dba)3(91mg,0.098mmol)和BINAP(124mg,0.199mmol)的干燥的甲苯(24mL)溶液用N2鼓泡1min，然后加入2-溴-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(600mg,1.979mmol)、Cs2CO3(904mg，2.774mmol)和2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯胺(436mg，2.379mmol)，用干燥甲苯(2mL)稀释。用N2进一步鼓泡混合物1min，密封，120℃搅拌48h。反应用饱和NH4Cl水溶液(120mL)淬灭，用EtOAc(4×50mL)萃取。合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品通过快速柱层析(二氧化硅80g+12g干燥，0-15％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到淡黄色固体产物(716mg，89％)。m/z406.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 10.93(br s,1H),7.68(t,J＝8.0Hz,1H),7.28-7.35(m,2H),4.41(q,J＝7.2Hz,2H),3.11(t,J＝6.1Hz,2H),2.51-2.66(m,2H),2.18(quin,J＝6.3Hz,2H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H),0.29(s,9H).
步骤4：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙 酯
Figure BDA0003170052860001631
AgBF4(3.72g,19.13mmol)的干燥的DCM(22mL)溶液N2冷却至-50℃并避光搅拌15min。在8分钟内滴加2-((2-氟-4-(三甲基硅烷基)苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(2.59g，6.38mmol)的干燥DCM(50mL)溶液，混合物在-50℃下进一步搅拌30min。在10分钟内滴加一氯化碘(0.35mL，7.01mmol)的干燥的DCM(10mL)溶液，并搅拌反应30min。用饱和Na2S2O3水溶液(200mL)淬灭反应，用EtOAc(4×100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品用乙醇(160mL)重结晶纯化，得到奶油色固体产物(2.37g，81％)。m/z 459.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 10.92(br s,1H),7.47-7.57(m,2H),7.35-7.47(m,1H),4.40(q,J＝7.2Hz,2H),3.09(t,J＝6.1Hz,2H),2.57(dd,J＝5.9,7.3Hz,2H),2.17(quin,J＝6.3Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例95：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸
Figure BDA0003170052860001632
向2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(2.37g，5.16mmol)的THF(93mL)、EtOH(31mL)和H2O(62mL)溶液中加入1M LiOH水溶液(31mL)。将混合物在60℃下搅拌48h。真空除去溶剂，残余物用1M HCl水溶液(200mL)超声处理2.5h。过滤所得沉淀物并用丙酮(25mL)研磨，得到淡米色固体产物(1.89g，85％)。m/z431.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.37(br s,1H),10.92(br s,1H),7.81(dd,J＝1.9,10.3Hz,1H),7.58-7.72(m,1H),7.47(t,J＝8.6Hz,1H),3.04(t,J＝6.0Hz,2H),2.46(br t,J＝6.5Hz,2H),2.06(quin,J＝6.0Hz,2H).
实施例96：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001641
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(509mg,1.180mmol)、HATU(897mg,2.360mmol)和吡啶(191μL,2.360mmol)的DMF(24mL)溶液在45℃搅拌，并监测酸的HATU活化的完成。3h后，将反应冷却至室温，加入2-氨基氧乙醇(182mg，2.360mmol)并在室温下搅拌26h。反应混合物用H2O(100mL)稀释，EtOAc(4×50mL)萃取。合并的有机相用冰冷盐水(2×200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗品经制备HPLC纯化，得到白色固体产物(238mg，41％)。m/z 490.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.07(br s,1H),10.25(br s,1H),7.77(d,J＝9.8Hz,1H),7.61(d,J＝7.9Hz,1H),7.36(t,J＝8.6Hz,1H),4.76(br t,J＝4.0Hz,1H),3.90(br t,J＝4.6Hz,2H),3.55-3.74(m,2H),2.92(br t,J＝4.0Hz,2H),2.45(br t,J＝6.1Hz,2H),2.04(br quin,J＝6.0Hz,2H).
实施例97：(R)-N-(2,3-二羟基丙氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001642
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(330mg,0.765mmol)、HATU(582mg,1.530mmol)和吡啶(124μL,1.530mmol)的DMF(16mL)溶液在45℃搅拌，并监测酸的HATU活化的完成。18小时后，将反应冷却至室温，加入(R)-邻-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)羟胺(168mg，1.148mmol)并在室温下搅拌1h。反应混合物用H2O(80mL)稀释,EtOAc(4×50mL)萃取。合并的有机相用冰冷盐水(2×200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。将粗残余物溶于MeOH(5.3mL)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(56mg，0.294mmol)和乙二醇(210μL,3.722mmol)。将所得混合物在室温下搅拌5h，然后将Et3N(105μL,0.767mmol)加入到反应混合物中，并真空除去溶剂。粗产物经制备HPLC纯化，得到淡黄色固体产物(174mg，43％)。m/z 520.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm11.09(br s,1H),10.25(br s,1H),7.77(br d,J＝10.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(t,J＝8.6Hz,1H),4.89(br d,J＝3.9Hz,1H),4.62(t,J＝5.7Hz,1H),3.94(br dd,J＝2.4,9.1Hz,1H),3.63-3.84(m,2H),3.34-3.49(m,2H),3.01-2.84(m,2H),2.39-2.48(m,2H),1.91-2.12(m,2H).
实施例98：2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-羟基-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001651
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(300mg,0.696mmol)、HATU(529mg,1.391mmol)和吡啶(112μL,1.391mmol)的DMF(12mL)溶液在40℃搅拌，并监测酸的HATU活化的完成。18h后，将反应冷却至室温，加入盐酸羟胺(725mg，1.044mmol)和吡啶(112μL,1.391mmol)并在室温下搅拌2h。反应混合物用H2O(100mL)稀释，EtOAc(4×50mL)萃取。合并的有机相用冰冷的盐水(2×150mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗产物通过制备HPLC(睿知分离(Reach Separations)，UK)纯化，得到浅黄色固体产物(137mg,44％)。m/z 447.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm10.58(br s,1H),10.48(br s,1H),9.16(br s,1H),7.75(br d,J＝9.5Hz,1H),7.61(br d,J＝8.8Hz,1H),7.38(brt,J＝8.7Hz,1H),2.92(br t,J＝5.0Hz,2H),2.43(br t,J＝5.0Hz,2H),1.98-2.06(br m,2H).
实施例99：N-(环丙基甲氧基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001652
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(44mg,0.102mmol)、HATU(2×78mg,0.408mmol)和吡啶(2×16μL,0.408mmol)的DMF(2mL)溶液首先在室温下搅拌18h，然后在40℃下搅拌1.5h，并监测直至酸的HATU活化完成。将反应冷却至室温,加入邻-(环丙基甲基)-羟胺盐酸盐(15+7+7mg，0.245mmol)并在室温下搅拌48h。反应混合物通过制备HPLC直接纯化，得到灰白色固体产物(9mg，17％)。m/z 500.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.00(br s,1H),10.25(br s,1H),7.69-7.83(m,1H),7.52-7.66(m,1H),7.21-7.45(m,1H),3.66(d,J＝7.5Hz,2H),2.88-2.96(m,2H),2.38-2.48(m,2H),1.99-2.12(m,2H),1.02-1.17(m,1H),0.44–0.60(m,2H),0.21-0.31(m,2H).
实施例100：N-(2-氨基乙氧基)-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA0003170052860001661
步骤1：2-(2-(2-氟-4-碘苯胺基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺 氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001662
向室温下搅拌的2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(600mg，1.391mmol)和HATU(1.06g,2.783mmol)的DMF(18mL)溶液中滴加DIPEA(0.486ml,2.783mmol)并监测反应直至完成酸的HATU活化。40min后，将2-(氨基氧基)-乙基氨基甲酸叔丁酯(368mg，2.086mmol)加入反应混合物中，在室温下搅拌1h。反应混合物用H2O(30mL)淬灭，过滤形成的沉淀并用H2O洗涤。粗品通过快速柱层析(硅胶40g，0-60％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到奶油色固体产物(473mg，58％)。m/z 590.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.95(br s,1H),10.31(br s,1H),7.77(d,J＝10.3Hz,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,1H),7.37(t,J＝8.8Hz,1H),6.84(br s,1H),3.93–3.78(m,2H),3.26–3.14(m,2H),3.00-2.85(m,2H),2.46–2.37(m,2H),2.13–1.99(m,2H),1.39(d,J＝2.5Hz,9H).
步骤2：N-(2-氨基乙氧基)-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b] 噻吩-3-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA0003170052860001663
2-(2-(2-氟-4-碘苯胺基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并-[b]噻吩-3-甲酰胺氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(50mg，84.8μmol)的二氧六环(0.5ml)悬浮液在室温下搅拌，并加入4NHCl的二氧六环(36μL，144.2μmol)溶液。30min后，向反应混合物中加入另一份二氧六环中的4N HCl(0.5ml，2.0mmol)。18H后，过滤悬浮液，收集的粗物质依次用二氧六环和Et2O洗涤，得到黄色固体产物(40.5mg，98％)。m/z 490.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm11.35(br s,1H),10.22(br s,1H),8.00(br s,3H),7.79(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.70–7.59(m,1H),7.38(t,J＝8.6Hz,1H),4.08(t,J＝5.2Hz,2H),3.09(q,J＝5.5Hz,2H),2.95(t,J＝5.9Hz,2H),2.50–2.42(m,2H),2.12–1.96(m,2H).
实施例101：(S)-N-(2,3-二羟丙基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001671
步骤1：(S)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯 基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001672
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(500mg,1.159mmol)、HATU(882mg,2.319mmol)和Et3N(320μL,2.319mmol)的DMF(15mL)溶液在室温搅拌，并监测酸的HATU活化的完成。加入(S)-(+)-(2,2-二甲基-[1,3]-二氧杂环戊烷-4-基)-甲胺(229mg，1.738mmol)，在室温下搅拌1小时，反应混合物用H2O(50mL)稀释，并出现沉淀。通过过滤收集固体并用水洗涤。水性滤液用EtOAc(3×25mL)萃取。合并的有机相用冰冷盐水(2×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。合并的粗品通过快速柱层析(硅胶40g，0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到浅紫色固体产物(314mg，50％)。m/z 545.0[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.64(d,J＝1.1Hz,1H),7.71-7.82(m,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(t,J＝8.7Hz,1H),4.20(quin,J＝5.6Hz,1H),3.98(dd,J＝6.3,8.3Hz,1H),3.69(dd,J＝5.6,8.4Hz,1H),3.40-3.49(m,1H),3.32-3.48(m,1H),2.97(q,J＝5.5Hz,2H),2.36-2.47(m,2H),2.00-2.07(m,2H),1.35(s,3H),1.26(s,3H).
步骤2：(S)-N-(2,3-二羟丙基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四 氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001673
(S)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(314mg,0.577mmol)的二氧六环(15ml)溶液用4N HCl的二氧六环(0.36ml,1.442mmol)溶液处理，并在室温下搅拌。24H后，再加入一份二氧六环(0.36ml，1.442mmol)中的4N HCl，并将反应转移到旋转蒸发仪2h以在40℃500mbar下除去生成的丙酮。该浓度形成沉淀，因此向反应加入另外的二氧六环(5ml)和4NHCl的二氧六环溶液(0.36ml，1.442mmol)，在室温下再搅拌18h，直到完成。过滤形成的沉淀并用二氧六环和Et2O洗涤，得到淡黄色固体产物(186mg，64％)。m/z 505.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.92(d,J＝1.1Hz,1H),7.77(dd,J＝1.9,10.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(t,J＝5.7Hz,1H),7.42(t,J＝8.7Hz,1H),4.88(d,J＝5.1Hz,1H),4.66(t,J＝5.7Hz,1H),3.60-3.72(m,1H),3.33-3.50(m,3H),3.14-3.26(m,1H),2.93-3.07(m,2H),2.44-2.47(m,2H),2.02-2.16(m,2H).
实施例102：(R)-N-(2,3-二羟丙基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001681
步骤1：(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯 基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001682
2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸(500mg,1.159mmol)、HATU(882mg,2.319mmol)和Et3N(320μL,2.319mmol)的DMF(10mL)溶液在室温搅拌，并监测酸的HATU活化的完成。加入(R)-(-)-(2,2-二甲基-[1,3]-二氧杂环戊烷-4-基)-甲胺(229mg，1.738mmol)，在室温下搅拌1小时，反应混合物用H 2O(40mL)稀释，并出现沉淀。通过过滤收集固体并用水洗涤。水性滤液用EtOAc(3×25mL)萃取。合并的有机相用冰冷盐水(2×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。合并粗品通过快速柱层析(硅胶40g，0-80％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到浅紫色固体产物(340mg，54％)。m/z 545.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.64(s,1H),7.77(dd,J＝1.9,10.3Hz,2H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H),7.38(t,J＝8.7Hz,1H),4.14-4.25(m,1H),3.98(dd,J＝6.3,8.3Hz,1H),3.70(dd,J＝5.6,8.3Hz,1H),3.40-3.51(m,1H),3.27-3.38(m,1H),2.97(q,J＝5.7Hz,2H),2.44-2.47(m,2H),2.01-2.11(m,2H),1.36(s,3H),1.26(s,3H).
步骤2：(R)-N-(2,3-二羟丙基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四 氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺
Figure BDA0003170052860001691
向(R)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(330mg,0.606mmol)的二氧六环(10mL)溶液中加入4N HCl的二氧六环(0.38mL,1.52mmol)溶液。将反应混合物在室温下搅拌18h，形成沉淀。过滤固体材料，并用Et2O洗涤，得到淡黄色固体产物(214mg，70％)。m/z 505.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.92(s,1H),7.77(dd,J＝10.5,1.8Hz,1H),7.62(s,1H),7.52(br t,J＝5.5Hz,1H),7.41(t,J＝8.7Hz,1H),4.89(d,J＝5.0Hz,1H),4.66(t,J＝5.7Hz,1H),3.60-3.71(m,1H),3.33-3.49(m,3H),3.16-3.26(m,1H),2.96-3.05(m,2H),2.47(br d,J＝6.8Hz,2H),2.07(br t,J＝5.9Hz,2H).
实施例103：(R)-2-(2,3-二羟丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001692
步骤1：3-溴-5-氟异烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001693
干燥的二异丙胺(8.8mL，62.5mmol)的干燥的THF(300mL)溶液在0℃搅拌，向其中加入n-BuLi(2.5M在己烷中,25mL,62.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后冷却至-78℃，加入3-溴-5-氟吡啶(10g，56.8mmol)的干燥的THF(300mL)溶液。将反应混合物搅拌1h，并用氯甲酸甲酯(5.3mmol，68.2mmol)处理。反应混合物搅拌1.5h，然后在0℃，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，用EtOAc(3×100mL)萃取，用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-7％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色液体产物(10.43g，78％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.86min，m/z 234.0/236.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.69(t,J＝0.5Hz,1H),8.57(d,J＝8.4Hz,1H),4.08(s,3H).
步骤2：2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(式(103)化合 物)
Figure BDA0003170052860001701
由于放热过程，小心地将乙酸钯(II)(0.176g，0.781mmol)加入到频那硼烷(20g，156mmol)和乙基乙烯基醚(61.4mL，640mmol)的混合物中。反应混合物在室温下搅拌18h。然后真空浓缩反应混合物，将残余物通过硅胶塞(0-10％EtOAc的己烷溶液)，得到黄色液体产物(24.6g，85％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.92和1.03min，m/z 199.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm(注:E:Z同分异构体的混合物1.25:1)7.03(d,J＝14.4Hz,1.25H),6.64(d,J＝0.4Hz,1H),4.43(d,J＝14.4Hz,1.25H),4.11(dd,J＝7.8,4.4Hz,1H),3.94(q,J＝7.1Hz,2H),3.84(q,J＝7.1Hz,2.5H),1.28–1.24(m,31H),0.95–0.84(m,3H).
步骤3：3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(式(104)化合物)
Figure BDA0003170052860001702
3-溴-5-氟异烟酸甲酯(10g，42.70mmol)、2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(12.7g，64.05mmol)、Cs2CO3(48.7g，49.45mmol)和PdXPhos G2催化剂(3.4g，4.27mmol)的THF/H2O(9:1v/v,90:10mL)的脱气溶液在85℃下搅拌18h。反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。有机滤液用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-25％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到棕色油状产物(7.07g，74％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.01和1.10min，m/z226.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm(注:E:Z同分异构体的混合物1.15:1)9.18–9.13(m,1H),8.48(s,1.15H),8.30(dd,J＝5.2,0.8Hz,2.15H),7.03(d,J＝12.9Hz,1.15H),6.41(dd,J＝7.1,0.7Hz,1H),5.91(d,J＝12.9Hz,1.15H),5.27(d,J＝7.1Hz,1H),4.05(q,J＝7.1Hz,2H),4.01–3.90(m,8.75H),1.37(td,J＝7.1,2.8Hz,6.5H).
步骤4：8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(式(105)化合物)
Figure BDA0003170052860001703
向3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(2.07g，9.2mmol)中加入4M HCl(26mL，104mmol)，反应混合物在100℃搅拌18h。冷却反应混合物，过滤分离形成的沉淀，用二氧六环(3×5mL)洗涤并真空干燥，得到淡棕色固体产物(0.93g，50％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.60，m/z 166.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.69(s,1H),8.63(d,J＝2.2Hz,1H),7.41(d,J＝5.6Hz,1H),6.60(dd,J＝5.6,2.5Hz,1H).
步骤5：(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-氟-2,6-萘啶-1 (2H)-酮
Figure BDA0003170052860001711
向8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(300mg，1.82mmol)的MeOH(13mL)溶液中加入(R)-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(334mg，2.55mmol)，将反应混合物在80℃下加热72h。真空浓缩反应混合物，残余物溶于EtOAc中，用H2O(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-80％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到灰白色固体产物(94mg，19％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.84min，m/z 279.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.74(s,1H),8.46(d,J＝3.1Hz,1H),7.37(d,J＝7.4Hz,1H),6.55(dd,J＝7.4,2.3Hz,1H),4.52(qd,J＝6.6,3.0Hz,1H),4.39(dd,J＝13.8,3.0Hz,1H),4.16(dd,J＝8.8,6.5Hz,1H),3.91(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),3.74(dd,J＝8.8,6.3Hz,1H),1,43(s,3H),1.34(s,3H).
步骤6：(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-(2-氟-4-碘苯胺 基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001712
在-78℃下，搅拌的2-氟-4-碘苯胺(49mg，0.21mmol)的干燥的THF(1mL)溶液用LiHMDS(1M在THF中，0.3mL，0.3mmol中)处理，并将反应混合物搅拌10min。然后加入(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-氟-2,6-萘啶-1(2H)-酮(60mg，0.216mmol)的干燥THF(1mL)溶液，将反应混合物在-78℃下搅拌15min，然后温至室温。在0℃，反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(1mL)淬灭，用EtOAc(3×7mL)萃取。合并的有机相用H2O(7mL)和盐水(7mL)洗涤,用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(68mg，64％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.17min，m/z 496.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.56(s,1H),8.41(s,1H),8.28(s,1H),7.56–7.43(m,2H),7.33(t,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,1H),6.50(d,J＝7.4Hz,1H),4.51(qd,J＝6.5,3.1Hz,1H),4.36(dd,J＝13.8,3.1Hz,1H),4.16(dd,J＝8.7,6.5Hz,1H),3.88(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),3.75(dd,J＝8.7,6.2Hz,1H),1.44(s,3H),1.35(s,3H).
步骤7：(R)-2-(2,3-二羟丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001721
用二氧六环(0.086mL)中的4M HCl处理(R)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(68mg，0.137mmol)的二氧六环(3.5mL)溶液，反应混合物在室温下搅拌18h，真空浓缩反应混合物，得到橙色固体(62mg，100％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.87min，m/z 456.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3CN):δ11.13(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.69(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),7.61(dd,J＝16.5,7.9Hz,2H),7.36(t,J＝8.4Hz,1H),6.75(d,J＝7.3Hz,1H),4.31(dd,J＝13.5,3.2Hz,1H),4.03-3.91(m,1H),3.87(dd,J＝13.4,8.2Hz,1H),3.58–3.44(m,2H).
实施例104：(S)-2-(2,3-二羟丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001722
步骤1：(S)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-氟-2,6-萘啶-1 (2H)-酮
Figure BDA0003170052860001723
向8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(500mg，3.03mmol)的MeOH(22mL)溶液中加入(S)-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲胺(556mg，4.24mmol)，将反应混合物在80℃下搅拌72h。真空浓缩反应混合物，残余物溶于EtOAc中，用H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-100％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(165mg，20％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.76min，m/z 279.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.74(s,1H),8.46(d,J＝3.1Hz,1H),7.37(d,J＝7.4Hz,1H),6.55(dd,J＝7.4,2.3Hz,1H),4.52(qd,J＝6.5,3.0Hz,1H),4.39(dd,J＝13.8,3.0Hz,1H),4.16(dd,J＝8.8,6.5Hz,1H),3.90(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),3.74(dd,J＝8.8,6.3Hz,1H),1.43(s,3H),1.34(s,3H).
步骤2：(S)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-(2-氟-4-碘苯胺 基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001731
在-78℃下，搅拌的2-氟-4-碘苯胺(53mg，0.222mmol)的干燥的THF(1mL)溶液用LiHMDS(1M在THF中，91.2mL，0.33mmol)处理，反应混合物搅拌10分钟。然后，加入(S)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-氟-2,6-萘啶-1(2H)-酮一种(65mg，0.234mmol)的干燥的THF(1mL)溶液，将反应混合物在-78℃下搅拌15分钟，然后温至室温。在0℃，反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(1mL)淬灭，用EtOAc(3×7mL)萃取。合并的有机相用H2O(7mL)、盐水(7mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到黄色固体产物(77mg，66％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.14min，m/z 496.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.55(s,1H),8.40(s,1H),8.27(s,1H),7.55–7.42(m,2H),7.32(t,J＝8.4Hz,1H),7.24(d,1H),6.49(d,J＝7.3Hz,1H),4.50(qd,J＝6.6,3.2Hz,1H),4.35(dd,J＝13.8,3.1Hz,1H),4.15(dd,J＝8.8,6.5Hz,1H),3.87(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),3.74(dd,J＝8.7,6.2Hz,1H),1.43(s,3H),1.34(s,3H).
步骤3：(S)-2-(2,3-二羟丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001732
(S)-2-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)-8-(2-氟-4-(三甲基甲硅烷基)苯基-氨基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(67mg，0.136mmol)的二氧六环(3.5mL)溶液用4MHCl的1,4-二氧六环(85μL)溶液处理，反应混合物在室温下搅拌18h。真空浓缩反应混合物，粗物质通过制备HPLC纯化，得到黄色固体产物(16mg，26％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt1.02min，m/z 456.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3CN):δ10.73(s,1H),8.35(d,J＝1.3Hz,1H),8.32(s,1H),7.62(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H),7.55(ddd,J＝8.5,2.1,1.0Hz,1H),7.44(t,J＝8.5Hz,1H),7.37(d,J＝7.4Hz,1H),6.60(d,J＝7.4Hz,1H),4.23(dd,J＝13.4,3.6Hz,1H),3.95(m,1H),3.85(dd,J＝13.4,7.8Hz,1H),3.54–3.46(m,2H).
实施例105：2-(3-氨基丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮盐酸盐
Figure BDA0003170052860001733
步骤1：3-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)丙基氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003170052860001741
8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(0.50g，2.48mmol)和3-氨基丙基氨基甲酸叔丁酯(0.74g，4.24mmol)的甲醇(22mL)溶液于80℃加热18h，然后真空浓缩。粗残余物用EtOAc处理，收集的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到产物(1.02g，35％纯)，不经进一步纯化，用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.97min，m/z322.1[M+H]+.
步骤2：3-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)丙基氨基甲酸叔 丁酯
Figure BDA0003170052860001742
在-78℃，N2下，滴加LiHMDS(1M在THF中,4.23mL,4.23mmol)来处理2-氟-4-碘苯胺(680mg,2.87mmol)的干燥的THF(15mL)溶液。反应混合物在-78℃下搅拌15min，然后加入3-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)丙基氨基甲酸叔丁酯(970mg，35％纯，1.06mmol)的干燥的THF(15mL)悬浮液。反应混合物在-7℃下继续搅拌，然后温热至室温。1h后，将反应混合物重新冷却至-78℃，并通过滴加的另一份LiHMDS(1M在THF中，4.23mL，4.23mmol)来处理；再一次重复该添加。将反应混合物继续搅拌1h并使其温热至室温。在0℃,反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗物质，其通过快速柱色谱纯化(二氧化硅，0-90％EtOAc的己烷溶液)，得到产物(73mg，13％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.28min，m/z 539.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 10.57(s,1H),8.38(d,J＝1.3Hz,1H),8.26(s,1H),7.52(dd,J＝9.8,2.0Hz,1H),7.46(dt,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.31(t,J＝8.3Hz,1H),7.16(d,J＝7.3Hz,1H),6.52(d,J＝7.3Hz,1H),5.01(br s,1H),4.03(t,J＝6.7Hz,2H),3.18(q,J＝6.3Hz,2H),1.96(p,J＝6.6Hz,2H),1.44(s,9H).
步骤3：2-(3-氨基丙基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮盐酸盐
Figure BDA0003170052860001743
将3-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)丙基氨基甲酸叔丁酯(73mg，0.136mmol)的干燥的二氧六环(1mL)溶液在室温下搅拌，用HCl溶液(4N在二氧六环中，50μL，0.195mmol)处理。1.5h后，加入另一份HCl溶液(4N在二氧六环中，2×50μL，0.390mmol)，并将反应混合物继续搅拌18h。然后真空浓缩反应混合物，得到黄色固体产物(62mg，97％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.85min，m/z 439.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.83(s,1H),8.45(d,J＝1.6Hz,1H),8.31(s,1H),7.89(br s,3H),7.77(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.72(d,J＝7.7Hz,1H),7.58(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.50(t,J＝8.5Hz,1H),6.81(dd,J＝7.2,1.3Hz,1H),4.07(t,J＝6.9Hz,2H),2.84(q,J＝7.2,6.8Hz,2H),2.01(p,J＝7.0Hz,2H).
实施例106：2-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001751
步骤1：2-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸甲酯
Figure BDA0003170052860001752
用Et3N(0.59mL，4.24mmol)处理甘氨酸甲酯盐酸盐(0.53g，4.24mmol)的MeOH(5mL)悬浮液，并将所得溶液加入到8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(0.50g，2.48mmol)的MeOH(17mL)溶液中。反应混合物在80℃下加热72h，然后真空浓缩。粗残余物用EtOAc处理多次，收集的有机相用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到产物(465mg，80％)，不经进一步纯化，用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.71min，m/z237.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δppm 8.75(s,1H),8.48(d,J＝3.0Hz,1H),7.16(d,J＝7.4Hz,1H),6.59(dd,J＝7.3,2.3Hz,1H),4.69(s,2H),3.80(s,3H).
步骤2：2-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001753
2-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸甲酯(465mg，1.97mmol)的MeOH(12mL)和H2O(12mL)溶液在0℃下搅拌，用1M LiOH水溶液(3.9mL，3.94mmol)处理。将反应混合物搅拌30min，并温热至室温。然后真空浓缩反应混合物，残余物用EtOAc萃取。水相用柠檬酸水溶液(pH2)酸化至pH3，然后用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到灰白色固体产物(153mg,50％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.17min，m/z223.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.09(s,1H),8.91(s,1H),8.55(d,J＝3.3Hz,1H),7.67(d,J＝7.3Hz,1H),6.80(dd,J＝7.4,2.4Hz,1H),4.69(s,2H).
步骤3：2-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸
Figure BDA0003170052860001761
在-78℃、N2下，滴加LiHMDS(1M在THF中,1.65mL,1.65mmol)来处理2-氟-4-碘苯胺(155mg,0.655mmol)的干燥的THF(2mL)溶液。反应混合物在-78℃下搅拌10min，然后加入2-(8-氟-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸(153mg，0.689mmol)的干燥的THF(3mL)悬浮液。将反应混合物继续搅拌，并使其温热至室温。2.5h后，将反应混合物重新冷却至-78℃，并通过滴加另一份LiHMDS(1M在THF中，2×0.8mL，1.60mmol)处理。将反应混合物继续搅拌18h并使其温热至室温。在0℃,反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，用EtOAc萃取。水相用柠檬酸水溶液(pH2)酸化至pH3，然后用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗物质，通过制备型HPLC纯化，得到黄色固体产物(32mg,11％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.01min，m/z 440.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 13.16(s,1H),10.56(s,1H),8.39(s,1H),8.30(d,J＝1.2Hz,1H),7.75(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.60(d,J＝7.3Hz,1H),7.58–7.53(m,1H),7.49(t,J＝8.5Hz,1H),6.73(d,J＝7.3Hz,1H),4.70(s,2H).
实施例107：2-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸甲酯
Figure BDA0003170052860001762
2-(8-(2-氟-4-碘苯胺基)-1-氧代-2,6-萘啶-2(1H)-基)乙酸(200mg，0.46mmol)的MeOH(1mL)溶液在0℃搅拌，滴加SOCl2(0.12mL，1.61mmol)进行处理。将反应混合物搅拌18h，并使其温热至室温。真空浓缩反应混合物，得到粗品，经制备型HPLC纯化，得到产物(11mg，8％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.14min，m/z 454.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.46(s,1H),8.39(s,1H),8.30(d,J＝1.3Hz,1H),7.75(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.61(d,J＝7.3Hz,1H),7.59–7.53(m,1H),7.48(t,J＝8.5Hz,1H),6.76(d,J＝7.3Hz,1H),4.82(s,2H),3.71(s,3H).
实施例108：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-羟基-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001763
步骤1：8-氟-2-羟基-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001771
用Et3N(0.59mL，4.24mmol)处理盐酸羟胺(0.29g，4.24mmol)的MeOH(5mL)悬浮液，并将所得溶液加入到8-氟-1H-吡喃并[4,3-c]吡啶-1-酮盐酸盐(0.50g，2.48mmol)的MeOH(17mL)溶液中，其中溶液添加有
Figure BDA0003170052860001772
分子筛。反应混合物在80℃下加热18h,然后在室温下加热72h。真空浓缩反应混合物，粗残余物用EtOAc处理，收集的有机相真空浓缩，得到产物(0.26g，58％)，未经进一步纯化用于下一步。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.17min，m/z181.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.75(s,1H),8.52(d,J＝0.9Hz,1H),8.49(s,1H),7.42(t,J＝5.3Hz,1H),6.76(t,J＝5.2Hz,1H).
步骤2：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-羟基-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001773
在-78℃、N2下，滴加LiHMDS(1M在THF中,1.00mL,1.00mmol)来处理2-氟-4-碘苯胺(95mg,0.40mmol)的干燥的THF(2mL)溶液。反应混合物在-78℃下搅拌10min，然后加入8-氟-2-羟基-2,6-萘啶-1(2H)-酮(76mg，0.42mmol)的干燥的THF(1mL)溶液。反应混合物在-78℃下继续搅拌15min，然后温热至室温。30min后，将反应混合物重新冷却至-78℃，并通过滴加另一份LiHMDS(1M在THF中，1.00mL，1.00mmol)处理。继续搅拌反应混合物，并使其温热至室温，然后在0℃用饱和的NH4Cl水溶液淬灭。水相用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并室温真空浓缩，得到粗物质，通过制备型HPLC纯化，得到黄色固体产物(9.5mg,6％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.00min，m/z 398.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 11.98(br s,1H),10.70(br s,1H),8.43(s,1H),8.30(s,1H),7.84(d,J＝7.5Hz,1H),7.75(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.59–7.46(m,2H),6.72(d,J＝7.5Hz,1H).
实施例109：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-(2-羟乙氧基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001774
步骤1：2-(2-(叔丁基二苯基甲硅氧基)乙氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘 啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001781
将邻-(2-(叔丁基-二苯基硅烷氧基)乙基)羟胺(0.70g，2.22mmol)、Et3N(0.31mL，2.22mmol)和HCl(4N在二氧六环中，1.1mL，4.44mmol)的二氧六环(5mL)溶液在室温下搅拌15min，向其中加入3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(0.50g，2.22mmol)。反应混合物在50℃下搅拌18h。将反应混合物冷却至室温，滴加LiHMDS(1M在THF中，7.1mL，7.10mmol)处理并搅拌30min。然后向反应混合物中加入2-氟-4-碘苯胺(0.53g，2.22mmol)，随后滴加LiHMDS(1M在THF中，2.7mL，2.66mmol)，并在室温下继续搅拌。45min后，再加入一部分LiHMDS(1M在THF中，1.3mL，1.33mmol)，将反应混合物搅拌30min。然后用饱和的NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗物质，通过快速柱色谱纯化(二氧化硅，0-30％EtOAc的己烷溶液+1％Et3N)，得到黄色玻璃状产物(250mg，16％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.61min，m/z 680.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.45(s,1H),8.42(s,1H),8.30(d,J＝1.3Hz,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.77(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.65–7.50(m,5H),7.50–7.33(m,7H),6.74(d,J＝7.7Hz,1H),4.49–4.34(m,2H),3.97(t,J＝4.3Hz,2H),0.93(s,9H).
步骤2：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-(2-羟乙氧基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001782
在室温搅拌下，向2-(2-(叔丁基二苯基硅氧基)乙氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(250mg，0.368mmol)的THF(5mL)溶液中加入TBAF(1M在THF中，0.37mL，0.368mmol)。30min后，反应完成，加入饱和NaHCO3水溶液。混合物用EtOAc萃取两次，有机相用H2O和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。一半粗物质料通过制备型HPLC纯化，然后SFC纯化，得到产物(30mg，64％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.03min，m/z 442.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.42(s,1H),8.42(s,1H),8.29(d,J＝1.3Hz,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.76(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.60–7.53(m,1H),7.49(t,J＝8.5Hz,1H),6.74(d,J＝7.7Hz,1H),4.97(t,J＝5.5Hz,1H),4.28(dd,J＝5.2,4.1Hz,2H),3.68(q,J＝5.1Hz,2H).
实施例110：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-异丙氧基-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001791
步骤1：3-氟-5-(2-(异丙氧亚氨基)乙基)异烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001792
将邻-异丙基羟胺盐酸盐(495mg,4.44mmol)、Et3N(0.62mL,4.44mmol)和HCl(4N在二氧六环中,1.1mL,4.44mmol)的二氧六环(8mL)溶液置于压力管中，加入3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(1.0g，4.44mmol)的二氧六环(2mL)溶液。将反应混合物密封并在50℃下搅拌18h。备注：在过程中，反应混合物为形成的NH4Cl盐的浓悬浮液的形式，应有效搅拌以获得最佳结果。然后真空浓缩反应混合物。将粗物质在硅藻土上干燥装载，并通过快速柱层析纯化(40g二氧化硅，0-15％EtOAc的己烷溶液，添加有1％Et3N)，得到淡油状产物(795mg，70％，两种异构体的混合物)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.07min，m/z 255.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.66(dd,J＝4.0,1.1Hz,2H),8.53(s,1H),8.49(s,1H),7.47(t,J＝5.4Hz,1H),6.84(t,J＝5.1Hz,1H),4.27(p,J＝6.2Hz,1H),4.15(p,J＝6.2Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.72(d,J＝5.1Hz,2H),3.68(d,J＝5.4Hz,2H),1.17(d,J＝6.2Hz,6H),1.11(d,J＝6.2Hz,6H).
步骤2：8-氟-2-异丙氧基-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001793
向在室温N2流中搅拌的3-氟-5-(2-(异丙氧亚氨基)乙基)异烟酸甲酯(400mg，
1.575mmol)的甲醇(4mL)溶液(，带有至含漂白剂溶液的德雷切尔瓶的出口)一次性加入1M NaOH、NaCNBH3(297mg,4.724mmol)，然后滴加1M HCl水溶液(1.57mL,1.575mmol)。反应混合物在室温下搅拌5天。反应用H2O(50mL)淬灭，用EtOAc(6×25mL)萃取。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到白色软固体产物(275mg，78％)用于下一步，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.78min，m/z 225.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.56(d,J＝3.0Hz,1H),8.48(s,1H),4.33(p,J＝6.2Hz,1H),3.82(t,J＝6.6Hz,2H),3.19(t,J＝6.6Hz,2H),1.22(d,J＝6.2Hz,6H).
步骤3：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-异丙氧基-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001801
在-78℃ N2下，滴加的LiHMDS(1M在THF中，0.45mL，0.45mmol)来处理2-氟-4-碘苯胺(106mg,0.45mmol)的干燥THF(1mL)溶液,，并将反应混合物搅拌15min。然后加入2-(环丙基甲氧基)-8-氟-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮(100mg，0.45mmol)的干燥THF(1mL)溶液，并继续搅拌反应混合物，温热至室温。18h后，将反应混合物重新冷却至-78℃，滴加LiHMDS(1M在THF中，0.45mL，0.45mmol)，并继续搅拌反应混合物，温热至室温。18h后，反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(15mL)淬灭，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-60％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到橙色胶状产物(61mg，31％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 1.21min，m/z 442.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.13(s,1H),8.34(d,J＝1.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.73(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),7.53(dt,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.36(t,J＝8.6Hz,1H),4.36(p,J＝6.2Hz,1H),3.82(t,J＝6.7Hz,2H),3.12(t,J＝6.6Hz,2H),1.24(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例111：2-(环丙基甲氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001802
步骤1：3-(2-(环丙基甲氧亚氨基)乙基)-5-氟异烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001803
将邻-(环丙基甲基)羟胺盐酸盐(546mg,4.44mmol)、Et3N(0.62mL,4.44mmol)和HCl(4N在二氧六环中,1.1mL,4.44mmol)的二氧六环(8mL)溶液置于压力管中，加入3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(1.0g，4.44mmol)的二氧六环(2mL)中的溶液。将反应混合物密封并在50℃下搅拌18h。备注：在过程中，反应混合物为形成的NH4Cl盐的浓悬浮液的形式，应有效搅拌以获得最佳结果。另一部分Et3N(0.62mL，4.44mmol)、HCl(4N在二氧六环中，1.1mL，4.44mmol)和邻-(环丙基甲基)羟胺盐酸盐(273mg,2.22mmol)加入到反应混合物中,在50℃下再搅拌30h。然后真空浓缩反应混合物。将粗物质在硅藻土上干燥装载，并通过快速柱层析纯化(45g二氧化硅，0-10％EtOAc的己烷溶液，添加有1％Et3N)，得到淡油状产物(791mg，67％，两种异构体的混合物)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.07min，m/z 267.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.66(dd,J＝2.4,1.0Hz,2H),8.54(s,1H),8.50(s,1H),7.52(t,J＝5.4Hz,1H),6.85(t,J＝5.2Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,3H),3.86(d,J＝7.1Hz,2H),3.76(d,J＝5.2Hz,2H),3.72(d,J＝7.1Hz,2H),3.68(d,J＝5.4Hz,2H),1.14–0.91(m,2H),0.57–0.38(m,4H),0.23(dt,J＝6.1,4.3Hz,2H),0.18(dt,J＝6.1,4.3Hz,2H).
步骤2：2-(环丙基甲氧基)-8-氟-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001811
向在室温N2流中搅拌的3-(2-(环丙基甲氧亚氨基)乙基)-5-氟异烟酸甲酯(600mg，2.253mmol)的甲醇(4mL)溶液(带有至含漂白剂溶液的德雷切尔瓶的出口)一次性加入1M NaOH、NaCNBH3(425mg,6.760mmol)，然后滴加1M HCl水溶液(2.25mL,2.253mmol)。反应混合物在室温下搅拌5天。反应用H2O(50mL)淬灭，用EtOAc(6×25mL)萃取。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到淡黄色油状产物(582mg，96％)用于下一步，无需进一步纯化。UPLC-MS(酸性法,2min):rt 0.81min,m/z 237.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.56(d,J＝2.9Hz,1H),8.47(s,1H),3.90(t,J＝6.6Hz,2H),3.82(d,J＝7.3Hz,2H),3.19(t,J＝6.6Hz,2H),1.19–1.03(m,1H),0.55(dd,J＝8.1,1.9Hz,2H),0.30(dd,J＝4.7,1.7Hz,2H).
步骤3：2-(环丙基甲氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001812
2-氟-4-碘苯胺(201mg，0.85mmol)的干燥THF(2mL)溶液在-78℃ N2下搅拌，滴加LiHMDS(1M在THF中，0.85mL，0.85mmol)处理，并将反应混合物搅拌15min。然后加入2-(环丙基甲氧基)-8-氟-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮(200mg，0.85mmol)的干燥THF(2mL)溶液，将反应混合物继续搅拌，然后温至室温。18h后，将反应混合物重新冷却至-78℃，滴加LiHMDS(1M在THF中，0.21mL，0.21mmol)，并继续搅拌反应混合物，温热至室温。18h后，反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)淬灭，并用EtOAc(3×15mL)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，0-60％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到橙色胶状产物(132mg，34％)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 1.22min，m/z 454.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.11(s,1H),8.34(s,1H),7.98(s,1H),7.73(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),7.53(dt,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.36(t,J＝8.6Hz,1H),3.90(t,J＝6.8Hz,2H),3.84(d,J＝7.3Hz,2H),3.11(t,J＝6.7Hz,2H),1.20–1.09(m,1H),0.64–0.50(m,2H),0.41–0.23(m,2H).
实施例112：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-(2-羟基乙氧基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001821
步骤1：3-(9,9-二甲基-8,8-二苯基-4,7-二氧杂-3-氮杂-8-硅杂癸-2-烯基)-5- 氟异烟酸甲酯
Figure BDA0003170052860001822
将3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟异烟酸甲酯(1.0g,4.44mmol)的二氧六环(10mL)溶液用HCl(4N的二氧六环溶液,2.2mL,8.88mmol中)处理,并在45℃下搅拌18h。然后将反应混合物冷却至室温，加入邻-(2-(叔丁基-二苯基硅烷氧基)乙基)羟胺(1.75g，5.55mmol)和Et3N(0.62mL，4.44mmol)的二氧六环(2mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3天，然后真空浓缩。将粗物质在硅藻土上干装载，并通过快速柱层析纯化(80g二氧化硅，0-10％MeOH的DCM溶液)得到淡黄色油状产物(760mg，35％，两种异构体的混合物)。UPLC-MS(酸性法，4min)：rt 2.65,2.67min(两种异构体1:1)，m/z 495.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.66(dd,J＝2.4,1.0Hz,2H),8.50(d,J＝0.9Hz,1H),8.46(d,J＝0.8Hz,1H),7.68–7.57(m,8H),7.54(t,J＝5.5Hz,1H),7.49–7.33(m,12H),6.90(t,J＝5.2Hz,1H),4.21–4.14(m,2H),4.06–4.00(m,2H),3.85(s,3H),3.88–3.84(m,2H),3.83(s,3H),3.81–3.77(m,2H),3.76(d,J＝5.1Hz,2H),3.66(d,J＝5.5Hz,2H),0.99(s,9H),0.96(s,9H).
步骤2：2-(2-(叔丁基二苯基硅氧基)乙氧基)-8-氟-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)- 酮
Figure BDA0003170052860001823
向在室温N2流中搅拌的3-(9,9-二甲基-8,8-二苯基-4,7-二氧杂-3-氮杂-8-硅杂癸-2-烯基)-5-氟异烟酸甲酯(2.82g，5.71mmol)的MeOH(28mL)溶液(带有至含漂白剂溶液的德雷切尔瓶的出口)一次性加入1M NaOH、NaCNBH3(1.07g,17.1mmol)，然后滴加1M HCl水溶液(2.86mL,2.86mmol)。7H后，加入另一部分1M HCl水溶液(1.43mL，1.43mmol)，将反应混合物继续搅拌3天。反应用1M NaOH水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。有机相用H2O和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗原料通过快速柱层析(二氧化硅，20-50％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到淡黄色固体产物(1.90g，72％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.37min，m/z 465.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.56(d,J＝2.9Hz,1H),8.46(s,1H),7.71–7.60(m,4H),7.51-7.33(m,6H),4.15(dd,J＝5.5,4.0Hz,2H),3.93–3.83(m,4H),3.16(t,J＝6.6Hz,2H),1.00(s,9H).
步骤3：2-(2-(叔丁基二苯基硅氧基)乙氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢- 2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001831
2-氟-4-碘苯胺(512mg，2.16mmol)的THF(2.5mL)溶液在室温下搅拌，向其中加入LiHMDS(1M在THF中，2.6mL，2.59mmol)。将混合物搅拌15min，然后滴加到2-(2-(叔丁基二苯基硅氧基)乙氧基)-8-氟-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮536mg，1.08mmol)的THF(2.5mL)溶液中，在室温下搅拌。反应混合物在室温下搅拌18h。然后用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应，并用EtOAc萃取两次。有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗物质通过快速柱层析(二氧化硅，10-40％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到产物(316mg，43％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.58min，m/z 682.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.10(s,1H),8.35(d,J＝1.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.73(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H),7.68–7.62(m,4H),7.53(ddd,J＝8.4,2.0,0.9Hz,1H),7.49–7.39(m,6H),7.35(t,J＝8.6Hz,1H),4.21–4.13(m,2H),3.95–3.85(m,4H),3.09(t,J＝6.7Hz,2H),1.00(s,9H).
步骤4：8-(2-氟-4-碘苯胺基)-2-(2-羟基乙氧基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001832
在室温搅拌下，向2-(2-(叔丁基二苯基硅氧基)乙氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮(360mg，0.530mmol)的THF(4mL)溶液中加入TBAF(1M在THF中，0.37mL，0.530mmol)。10min后，反应完成，加入饱和NaHCO3水溶液。混合物用EtOAc萃取两次，有机相用H2O和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备HPLC纯化一半粗物质(200mg)，得到黄色固体产物(75.8mg,64％)。UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 0.99min，m/z444.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 10.07(s,1H),8.34(d,J＝1.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.73(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),7.54(dt,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.36(t,J＝8.6Hz,1H),4.80(t,J＝5.5Hz,1H),4.05(dd,J＝5.8,3.9Hz,2H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.63(q,J＝5.1Hz,2H),3.12(t,J＝6.7Hz,2H).
实施例113：2-乙氧基-8-(2-氟-4-碘苯基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
化合物5.011可以通过如实施例108所述制备，将步骤1中的邻-异丙羟胺盐酸盐替换为适当邻-乙羟胺，其为市售的或使用本领域普通技术人员已知的条件制备的。
Figure BDA0003170052860001841
实施例114：8-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮
Figure BDA0003170052860001842
将2-乙氧基-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1H)-酮(40mg，93.6μmol)的干燥THF(1.1mL)溶液在N2下室温搅拌，向其中滴加SmI2(0.1M在THF中，3.74mL，0.374mmol)进行处理，将反应混合物搅拌5min。然后用饱和Na2S2O4水溶液(10mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过制备HPLC纯化粗物质(31.4mg)，得到黄色固体产物(8.1mg，23％)。
或者，将2-(环丙基甲氧基)-8-(2-氟-4-碘苯胺基)-3,4-二氢-2,6-萘啶-1(2H)-酮(40mg，88.2μmol)的干燥THF(1.1mL)溶液在N2下室温搅拌，向其中滴加SmI2(0.1M在THF中，3.74mL，0.374mmol)进行处理，将反应混合物搅拌5min。然后用饱和Na2S2O4水溶液(10mL)淬灭反应混合物,并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过制备HPLC纯化粗物质(31.6mg)，得到黄色固体产物(14.6mg，43％)。
UPLC-MS(酸性法，2min)：rt 1.00min，m/z 383.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.30(s,1H),8.50(br s,1H),8.40(s,1H),8.00(s,1H),7.71(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),7.51(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.37(t,J＝8.6Hz,1H),3.41(td,J＝6.6,2.8Hz,2H),2.87(t,J＝6.6Hz,2H).
尽管为了清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求的范围内进行某些改变和修改。另外，本文提供的每篇参考文献通过引用整体并入，其程度如同每篇参考文献通过引用单独并入。在本申请与本文提供的参考文献之间存在冲突的情况下，以本申请为准。

Claims (76)

1.一种治疗或预防皮肤癌的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的化合物，所述化合物选自下组：式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)
Figure FDA0003170052850000011
或其N-氧化物、立体异构体、立体异构体的混合物和/或其药学上可接受的盐，
其中：
X1为–CR13b或N；X2为C1-C6烷基；X3为S或O；
下标n为0到2的整数；
键“a”为单键或双键；
R1为-OR4、-NR5R5a、-N(OR5b)R5a或未取代或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基；
R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R2a为卤素或C1-6烷基；
R4、R5和R5b各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中各C3-C8环烷基和杂环烷基未取代的或被1-6个R6取代的；
R5a为氢或C1-6烷基；
各R6独立地为卤素、羟基、氧代基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6-羟烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基或二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基；
R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基、C1-C6烷基氨基、二-(C1-C6烷基)氨基、羟氨基或N-C1-C6烷基羟氨基；
R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；
R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷氧基；
R43为氰基、-C(O)NR48R48a或-C(O)R46；
R43a为氢、卤素、C1-C6烷基；或
R43和R43a一起形成-CH2CH2C(O)-或-CH2CH2CH2C(O)-，它们各自为未被取代的或被一个或两个R49取代的；
R46为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C8环烷基或杂环烷基；
R48和R48a各自独立地为氢或C1-C6烷基；和
各R49独立地为C1-C6烷基、C3-C8环烷基或C3-C8环烷基-C1-C6烷基；
R51为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基、R7-C(O)-C1-C6烷基或–OR54，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的；
各R53独立地为卤素或C1-C6烷基；
R53a和R53b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；和
R54为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基，其中，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(Ia)或(Ib)所示的结构：
Figure FDA0003170052850000021
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，R13、R13a和R13b各自独立地为氢、卤素或C1-C6烷基。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，R13为氢。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，R13a为氢。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，R13b为氢。
7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，R13b为卤素。
8.如权利要求1-5和7中任一项所述的方法，其特征在于，R13b为氟。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式(II)中X2为C1-C3烷基。
10.如权利要求1或9所述的方法，其特征在于，X2为甲基。
11.如权利要求1、9-10中任一项所述的方法，其特征在于，R23、R23a和R23b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
12.如权利要求1和9-11中任一项所述的方法，其特征在于，R23和R23b均为氢，R23a为卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
13.如权利要求1、9-11和12中任一项所述的方法，其特征在于，R23和R23b均为氢，和R23a为氟、甲基或甲氧基。
14.如权利要求1和9-11中任一项所述的方法，其特征在于，R23、R23a和R23b均为氢。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(IIIa)或(IIIb)所示的结构式：
Figure FDA0003170052850000031
16.如权利要求1或15所述的方法，其特征在于，R33、R33a和R33b各自独立地为氢、卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
17.如权利要求1和15-16中任一项所述的方法，其特征在于，R33、R33a和R33b各自独立地为氟、甲基或甲氧基。
18.如权利要求1和15-17中任一项所述的方法其特征在于，R33a和R33b均为氢，R33为氟、甲基或甲氧基。
19.如权利要求1和15-17中任一项所述的方法，其特征在于，R33和R33b均为氢，R33a为氟、甲基或甲氧基。
20.如权利要求1和15-17中任一项所述的方法，其特征在于，R33和R33a均为氢，R33b为氟、甲基或甲氧基。
21.如权利要求1和15-16中任一项所述的方法，其特征在于，R33、R33a和R33b均为氢。
22.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物具有选自下组的结构：
Figure FDA0003170052850000032
Figure FDA0003170052850000041
23.如权利要求1或22所述的方法，其特征在于，R48和R48a均为氢。
24.如权利要求1或22所述的方法，其特征在于，R46为氢、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基。
25.如权利要求1、22和24中任一项所述的方法，其特征在于，R46为C1-C6烷基。
26.如权利要求1、22和24-25中任一项所述的方法，其特征在于，R46为甲基、乙基、丙基或丁基。
27.如权利要求1和22-26中任一项所述的方法，其特征在于，R43a为氢。
28.如权利要求1和22-26中任一项所述的方法，其特征在于，R43a为卤素。
29.如权利要求1和22-26中任一项所述的方法，其特征在于，R43a为C1-C6烷基。
30.如权利要求1、22-26和29中任一项所述的方法，其特征在于，R43a为甲基。
31.如权利要求1或22所述的方法，其特征在于，各R9独立地为C1-C6烷基。
32.如权利要求1或22所述的方法，其特征在于，R9不存在。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-OR4、-NR5R5a或-N(OR5b)R5a。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-OR4；R4为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基；并且，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的；且R6各自独立地为羟基或C1-C6烷基。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其特征在于，R1选自下组：-OH、
Figure FDA0003170052850000051
36.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-NR5R5a；R5为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基；并且，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，且R6各自独立地为羟基或C1-C6烷基。
37.如权利要求中1-33和36任一项所述的方法，其特征在于，R5选自下组：氢、
Figure FDA0003170052850000052
38.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-NR5R5a，且R5为-OR5b。
39.如权利要求1-33和38中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-N(OR5b)R5a；R5b为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基；且各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的，且R6各自独立地为羟基或C1-C6烷基。
40.如权利要求1-33和38-39任一项所述的方法，其特征在于，-OR5b选自下组：
Figure FDA0003170052850000053
Figure FDA0003170052850000061
41.如权利要求1-33和36-40中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-NR5R5a或-N(OR5b)R5a，且R5a为氢。
42.如权利要求1-33和36-40中任一项所述的方法，其特征在于，R1为-NR5R5a或-N(OR5b)R5a，且R5a为C1-C6烷基。
43.权利要求1-32中任一项所述的方法，其特征在于，R1为未取代的或被一个或两个R6取代的N-连接的杂环烷基。
44.如权利要求1-32和43中任一项所述的方法，其特征在于，N-连接的杂环烷基为N-连接的氮杂环丁基、N-连接的吡咯烷基或N-连接的异恶唑烷基。
45.如权利要求1-32和43-44中任一项所述的方法，其特征在于，R7各自独立地为羟基、氧代基或氨基。
46.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(Va)或(Vb)所示的结构：
Figure FDA0003170052850000062
47.如权利要求1或46所述的方法，其特征在于，各R53独立地为卤素或C1-C3烷基。
48.如权利要求1或46所述的方法，其特征在于，下标n为0。
49.如权利要求1-48中任一项所述的方法，其特征在于，R53a和R53b各自独立地为氢、卤素或C1-C6烷基。
50.如权利要求1和46-49中任一项所述的方法，其特征在于，R53a为氢。
51.如权利要求1和46-50中任一项所述的方法，其特征在于，R53b为氢。
52.如权利要求1和46-50中任一项所述的方法，其特征在于，R53b为卤素。
53.如权利要求1、46-50、52中任一项所述的方法，其特征在于，R53b为氟。
54.如权利要求1和46-53中任一项所述的方法，其特征在于，R51为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基；并且，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的；R6各自独立地为羟基或C1-C6烷基。
55.如权利要求1和46-53中任一项所述的方法，其特征在于，R51为-OR54b；R54b为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、氨基-C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基、二-(C1-C6烷基)氨基-C1-C6烷基、杂环烷基-C1-C6烷基或R7-C(O)-C1-C6烷基；R7为羟基、C1-C6烷氧基、氨基或羟氨基；并且，各C3-C8环烷基和杂环烷基为未取代的或被1-6个R6取代的；且R6各自独立地为羟基或C1-C6烷基。
56.如权利要求中1和46-53中任一项所述的方法，其特征在于，R51选自下组：氢、-OH、
Figure FDA0003170052850000071
57.如权利要求1-56中任一项所述的方法，其特征在于，R2为卤素、C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基或C2-C6炔基。
58.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其特征在于，R2为卤素。
59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其特征在于，R2为碘。
60.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其特征在于，R2为C1-C6烷基。
61.权利要求1-57和60中任一项所述的方法，其特征在于，R2为CH3。
62.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其特征在于，R2为-S-C1-C6烷基。
63.如权利要求1-57和60中任一项所述的方法，其特征在于，R2为-SCH3。
64.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其特征在于，R2为C2-C6炔基。
65.如权利要求1-57和60中任一项所述的方法，其特征在于，R2为乙炔基。
66.如权利要求1-61中任一项所述的方法，其特征在于，R2a为卤素。
67.如权利要求1-66中任一项所述的方法，其特征在于，R2a为氟。
68.如权利要求1-61中任一项所述的方法，其特征在于，R2a为C1-C6烷基。
69.如权利要求1-61和68中任一项所述的方法，其特征在于，R2a为甲基。
70.如权利要求1-69中任一项所述的方法，其特征在于，所述化合物选自表1-5中的化合物。
71.如权利要求1-70中任一项的方法，其特征在于，所述化合物在药物组合物中与药学上可接受的载体一起施用。
72.如权利要求1-71中任一项所述的方法，其特征在于，所述皮肤癌为皮肤鳞状细胞癌。
73.如权利要求1-72中任一项所述的方法，其特征在于，所述皮肤癌为MEK-抑制剂应答性或MEK-介导的皮肤鳞状细胞癌。
74.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述皮肤鳞状细胞癌与p-ERK的激活相关。
75.如权利要求1-74中任一项所述的方法，其特征在于，具有式(I)至(V)中任一项的化合物或其药物组合物局部给药、皮下给药、皮内给药或病灶内给药。
76.如权利要求1-75中任一项所述的方法，其特征在于，具有式(I)至(V)中任一项的化合物或其药物组合物作为洗剂、喷雾剂、软膏、乳膏、凝胶、糊剂和贴剂给药。
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