CN113079941A - 一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法及提取方法 - Google Patents
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- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
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Abstract
本发明属于食用菌人工栽培技术领域，具体涉及一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法及提取方法。本发明所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，是在人工袋料栽培基础上进行高含量黄酮类物质桑黄子实体的优化开发，以桑枝木屑为栽培基质，添加果皮渣、红薯藤、魔芋粉、金钱木和蜂胶为营养原料，不仅可以满足桑黄培养的营养需求，同时有效诱导提高了培养的桑黄子实体中黄酮类物质的含量，有效提高了桑黄的营养寄应用价值。
Description
技术领域
本发明属于食用菌人工栽培技术领域，具体涉及一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法及提取方法。
背景技术
桑黄(Phellinus igniarius)属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、锈革孔菌科(Hymenochaeyaceae)、针层孔菌属(Phellinu)，是火木层孔菌(P.igniarius)、鲍氏针层孔菌(P.baumii)和裂蹄针层孔菌(P.linteus)的商品名，通常生于杨、桑、柳、白桦、榉树、桃等阔叶树的枯立木及立木树干上。桑黄是近几年开发的一种多年生的珍贵药用真菌，有“森林黄金”之美称。据《中药大辞典》记载，桑黄可以治血崩、血淋、带下、闭经等妇科疾病；现代医学研究也表明，桑黄具有抗肿瘤、抗菌、抗纤维化、抗氧化及提高人体免疫力等显著效果，是目前国际公认的生物抗肿瘤效果第一的珍稀药用真菌，广泛应用于医药、食品、日用化工、保健品等行业。
目前，由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，桑黄在自然界中形成子实体较为困难，造成天然的桑黄数量非常稀少，自然界中可供药用的资源有限，加之国内外市场对桑黄的需求量越来越大，致使国内各产地药农掠夺性采集，子实体无法大量形成，难以成为稳定的工业产品来源，对桑黄产业的发展十分不利，因此，通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。但是，桑黄人工栽培极其困难，存在着培养条件苛刻、生长周期长的问题。
目前，人工栽培桑黄的方法主要有两种，其一种是以桑树、杨树、栎树的段木栽培为主，但段木栽培需要大量的木材资源，资源浪费比较严重，难以规模化栽培；另一种则是袋料栽培，但是存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题，尤其是活性物质的含量并不理想。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，以解决现有技术中人工袋料栽培桑黄子实体中黄酮类活性物质的含量较低的问题；
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种桑黄子实体中黄酮类活性物质的提取方法。
为解决上述技术问题，本发明所述的一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，包括如下步骤：
(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20-30重量份、果皮渣10-20重量份、红薯藤3-8重量份、魔芋粉5-12重量份、金钱木3-8重量份、蜂胶1-3重量份、生石灰1-5重量份、KH2PO4 0.3-0.8重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；
(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入桑黄母种，并将接种后的栽培袋料进行恒温培养，至所述栽培袋料长满菌丝体；
(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续进行恒温培养，至子实体成熟并采收。
具体的，所述步骤(1)中，所述栽培袋料包括如下成分：桑枝木屑25重量份、果皮渣15重量份、红薯藤5重量份、魔芋粉8重量份、金钱木5重量份、蜂胶2重量份、生石灰3重量份、KH2PO4 0.5重量份。
具体的，所述步骤(1)中，所述果皮渣包括苹果皮渣、橘子皮渣和/或梨皮渣。
具体的，所述步骤(1)中，所述栽培基质与水的质量比为40-50％：50-60％。
具体的，所述步骤(2)中，所述桑黄母种的接种量为所述栽培基质量的5-20wt％。
具体的，所述步骤(2)中，所述菌丝体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为20-28℃，空气湿度50-70％，光照强度10-20lux。
具体的，所述步骤(3)中，所述子实体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为20-28℃，空气湿度50-70％，光照强度20-80lux。
本发明还公开了由所述方法栽培得到的桑黄子实体。
本发明还公开了一种桑黄子实体中黄酮类物质的提取方法，包括以所述的桑黄子实体为原料进行醇提的步骤。
具体的，所述醇提步骤为以浓度50-70v/v％的乙醇水溶液进行提取。
本发明所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，是在人工袋料栽培基础上进行高含量黄酮类物质桑黄子实体的优化开发，以桑枝木屑为栽培基质，添加果皮渣、红薯藤、魔芋粉、金钱木和蜂胶为营养原料，不仅可以满足桑黄培养的营养需求，同时有效诱导提高了培养的桑黄子实体中黄酮类物质的含量，有效提高了桑黄的营养及应用价值。
具体实施方式
本发明下述实施例中，所述桑黄母种是采用常规方法分离纯化得到桑黄菌株，以常规PDA平板培养基进行活化后，接种到常规PD母种培养基中培养，进而获得桑黄母种。
实施例1
本实施例所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，包括如下步骤：
(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20重量份、苹果皮渣20重量份、红薯藤(粉碎)3重量份、魔芋块粉12重量份、金钱木3重量份、蜂胶3重量份、生石灰1重量份、KH2PO4 0.8重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质按照50％：50％的质量比加入水充分混匀，装袋，备用；
(2)菌丝体培养：按照10％的接种量向步骤(1)得到的所述栽培袋料中接入桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度25℃进行恒温培养，控制空气湿度为60％、光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的培养情况，至所述栽培袋料长满菌丝体；
(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度25℃、空气湿度60％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收。
实施例2
本实施例所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，包括如下步骤：
(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑30重量份、橘子皮渣10重量份、红薯藤(粉碎)8重量份、魔芋块粉5重量份、金钱木8重量份、蜂胶1重量份、生石灰5重量份、KH2PO4 0.3重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质按照50％：50％的质量比加入水充分混匀，装袋，备用；
(2)菌丝体培养：按照10％的接种量向步骤(1)得到的所述栽培袋料中接入桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度25℃进行恒温培养，控制空气湿度为60％、光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的培养情况，至所述栽培袋料长满菌丝体；
(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度25℃、空气湿度60％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收。
实施例3
本实施例所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，包括如下步骤：
(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑25重量份、苹果皮渣10重量份、橘子皮渣5重量份、红薯藤(粉碎)5重量份、魔芋块粉8重量份、金钱木5重量份、蜂胶2重量份、生石灰3重量份、KH2PO4 0.5重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质按照50％：50％的质量比加入水充分混匀，装袋，备用；
(2)菌丝体培养：按照10％的接种量向步骤(1)得到的所述栽培袋料中接入桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度25℃进行恒温培养，控制空气湿度为60％、光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的培养情况，至所述栽培袋料长满菌丝体；
(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度25℃、空气湿度60％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收。
对比例1
本对比例所述桑黄栽培方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培袋料中不添加金钱木。
对比例2
本对比例所述桑黄栽培方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培袋料中，以等量的蔗糖代替所述果皮渣。
对比例3
本对比例所述桑黄栽培方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培袋料中不添加所述红薯藤。
对比例4
本对比例所述桑黄栽培方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培袋料中不添加所述魔芋粉。
实验例
1、桑黄子实体重量及质量
分别记录上述实施例3及对比例1-4中采收的桑黄子实体的重量及质量情况，记录结果见下表1。
表1桑黄子实体培养情况
| 编号 | 子实体重量/g | 子实体质量及形态 |
| 实施例3 | 41g | 较好，接近野生 |
| 对比例1 | 40g | 较好，接近野生 |
| 对比例2 | 36g | 较好，接近野生 |
| 对比例3 | 40g | 较好，接近野生 |
| 对比例4 | 38g | 较好，接近野生 |
2、桑黄子实体中黄酮含量
分别取上述实施例3及对比例1-4中采收的桑黄子实体洗净，干燥后粉碎，向粉碎后的桑黄料中加入3倍量的乙醇水溶液(70v/v％)进行提取8h，共计提取2次，收集并合并提取液，浓缩后检测提取液中的黄酮类物质的含量，同时以市售野生桑黄子实体作为对照进行黄酮含量的检测，检测结果记录于下表2。
本实验例中，黄酮含量的测定以芦丁标样进行总黄酮含量的测定，按照现有技术中一般方法测定即可，具体包括：称取0.010g芦丁，用30％乙醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，制成0.1mg/ml的芦丁标准溶液；分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml置于6个50ml的容量瓶中，依次编号0-5，用30％乙醇补至10ml后，加入0.8ml的5％的NaNO2摇匀，静置6分钟再加入0.8ml的10％的硝酸铝摇匀，静置6min，加入10ml的1mol/l的氢氧化钠，摇匀15min后显色置于510nm处分光光度计测吸光度。并在此条件下测定提取液中黄酮的吸光度，在标准曲线上，读出黄酮含量就是芦丁含量。
表2桑黄料中黄酮类物质含量
从上表结果可知，本发明通过对桑黄人工栽培袋料中营养成分的调整，不仅提高了桑黄子实体的质量，同时有效诱导提高了桑黄子实体中黄酮类物质的含量，提高了其营养及药用价值。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20-30重量份、果皮渣10-20重量份、红薯藤3-8重量份、魔芋粉5-12重量份、金钱木3-8重量份、蜂胶1-3重量份、生石灰1-5重量份、KH2PO4 0.3-0.8重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；
(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入桑黄母种，并将接种后的栽培袋料进行恒温培养，至所述栽培袋料长满菌丝体；
(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续进行恒温培养，至子实体成熟并采收。
2.根据权利要求1所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述栽培袋料包括如下成分：桑枝木屑25重量份、果皮渣15重量份、红薯藤5重量份、魔芋粉8重量份、金钱木5重量份、蜂胶2重量份、生石灰3重量份、KH2PO4 0.5重量份。
3.根据权利要求1或2所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述果皮渣包括苹果皮渣、橘子皮渣和/或梨皮渣。
4.根据权利要求1-3任一项所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述栽培基质与水的质量比为40-50％：50-60％。
5.根据权利要求1-4任一项所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述桑黄母种的接种量为所述栽培基质量的5-20wt％。
6.根据权利要求1-5任一项所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述菌丝体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为20-28℃，空气湿度50-70％，光照强度10-20lux。
7.根据权利要求1-6任一项所述提高桑黄子实体中黄酮类含量的栽培方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述子实体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为20-28℃，空气湿度50-70％，光照强度20-80lux。
8.由权利要求1-7任一项所述方法栽培得到的桑黄子实体。
9.一种桑黄子实体中黄酮类物质的提取方法，其特征在于，包括以权利要求8所述的桑黄子实体为原料进行醇提的步骤。
10.根据权利要求9所述的桑黄子实体中黄酮类物质的提取方法，其特征在于，所述醇提步骤为以浓度50-70v/v％的乙醇水溶液进行提取。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN116391568A (zh) * | 2023-05-19 | 2023-07-07 | 吉林农业科技学院 | 一种桑黄菌株培养基质及其制备方法 |
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| CN107455142A (zh) * | 2017-08-29 | 2017-12-12 | 田林县群英农业有限公司 | 一种提高灵芝品质的种植方法 |
| CN112189505A (zh) * | 2020-08-28 | 2021-01-08 | 徐州工程学院 | 一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物及其制备方法 |
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