CN108175040B - 一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及发酵生产技术领域，公开一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，本发明通过培养牛樟芝液体发酵菌种、培养小米燕麦牛樟芝菌质、制备小米燕麦牛樟芝谷菌粉的过程得到了小米燕麦桑牛樟芝谷菌粉，再测定小米燕麦桑牛樟芝谷菌粉中核黄素和三萜物质的含量，目的在于提供一种利用常温谷物固体发酵的方法，发酵获得大量的核黄素和牛樟芝三萜物质，该方法不依赖于子实体的发生，可以在常温条件下短时间快速获得大量核黄素和三萜功效成分，在短时间内获得的核黄素含量是食物含量的10‑50倍，三萜的含量远高于其他谷物发酵获得的含量，可在未来医学领域应用推广。

Description

一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法
技术领域
本发明涉及发酵生产技术领域，尤其涉及一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法。
背景技术
牛樟芝(Antrodia Camphorata)又名牛樟菇，隶属于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌属、多年生蕈菌类，是1995年才被生化界发表的新种。其生长区域为中国台湾山区海拔450-2000米山林间，只生长在中国台湾特有百年以上的牛樟树树干腐朽之心材内壁，樟树木材潮湿表面，因其采集不易，野生牛樟木近年已被列为国宝级生物之一。
牛樟芝气芳香味辛苦、平。有祛风行气、化淤活血、温中消结、解毒消肿、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升机体免疫力之效；对于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有独特功能。牛樟芝是有许多的生理活性成分，如多糖体、三萜类化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、维生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、固醉累、纤维素、血压稳定物质等。牛樟芝的有效成分中以三萜类化合物为最特别，高达200种以上，是其他菇菌无法相比的，200多种三萜类化合物使牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。由于樟芝在中国台湾被视为独特而珍贵的药用真菌，因此具有极高的研究和商业价值，也是目前中国台湾最昂贵的野生真菌，在港澳被称为“神芝”，中国台湾民间称之为“森林中的红宝石”。
核黄素(Riboflavin)又称维生素B2(Vitamin B2)，是人体和动物所必需的水溶性维生素，它以黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸的形式存在，直接参与碳水化合物、蛋白质、脂肪的生物氧化作用，在生物体内具有多种生理功能。主要作用是维持皮肤、口腔和眼的健康，如果缺乏，常发生口角溃疡、舌炎、唇炎等病。食物中以猪肝、鸡肝、鹌鹑蛋、菠菜和杏仁中居多，谷类中含量不多。目前国内外广泛采用微生物发酵法工业生产维生素B2。能够产生维生素B2的微生物有细菌、真菌和霉菌，工业生产中主要以阿舒假囊酵母(Eremotherecium Ashbyii)为生产菌种。维生素B2的工业发酵一般为二级发酵，发酵液先沉淀再氧化进行分离提纯。人体每日大约需要量1-2毫克核黄素，日常食物中该物质的含量极少，所以日常补充核黄素摄取是必要的。
经检索，该技术领域陈财宝的“牛樟芝的培育方法(专利申请号20140671665.5)以及徐芳的“一种牛樟芝皿式培养法”(专利申请号201310239084.X)他们仅对牛樟芝的栽培模式进行了探讨；相似专利余养朝等的“牛樟芝固体发酵菌种的制作方法”(专利申请号：201210126366.3)和郭震宇等的“一种牛樟芝深层发酵复方制品及其制备方法”(专利申请号：201410791469.1)仅对制作方法进行了描述，无功效成分的分析比较。
由于野生端木栽培牛樟芝，时间周期长、能耗高等问题，牛樟芝椴木栽培的方法无法实现大批量的产业化生产，结合实验室已有的研究技术，小米和燕麦谷物配比固体发酵牛樟芝获得了富含有核黄素和三萜两种功效成分的保健食品，目前在该领域技术上牛樟芝仿野生栽培周期长成本高，而在直接用食品原料固体发酵制备牛樟芝菌质，用于制备健康食品的方法尚未见。
发明内容
本发明针对现有技术中牛樟芝仿野生栽培周期长成本高，且在没有直接用食品原料固体发酵制备牛樟芝菌质的方法的缺点，提供了一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：
一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，包括如下步骤：
(1)牛樟芝液体发酵菌种的培养：将牛樟芝斜面活化母种接种到PDA培养基上，活化培养，培养温度为23-28℃，培养13-15d，得到牛樟芝菌块，取边缘横截面为直径1cm的牛樟芝菌块接种到装有50ml-100ml PD液体培养基的培养瓶中进行静置发酵培养，培养温度为23-28℃，培养16-20d，得到牛樟芝液体发酵菌种；
(2)小米燕麦牛樟芝菌质的培养：将牛樟芝液体发酵菌种用匀浆仪进行菌丝破碎，每破碎3-5s静置30-50s，连续重复操作2-4次得到菌丝体匀浆液，随后菌丝体匀浆液按照1:8-1:12的接种量接种到添加了0.5％-1％食品级碳酸钙的小米燕麦固体培养基内，于培养瓶内进行恒温培养，培养温度为23-28℃，培养30-35d，得到小米燕麦牛樟芝菌质；
(3)小米燕麦牛樟芝谷菌粉的制备：将小米燕麦牛樟芝菌质于50-60℃烘箱中烘干，将烘干后的小米燕麦牛樟芝菌质粉碎，粉碎后得到的粉末过100-200目筛，获得小米燕麦桑牛樟芝谷菌粉。
作为优选，在步骤(2)中恒温培养30-35d后，将培养完后的培养瓶开盖透气培养14d以内，得到小米燕麦牛樟芝菌质。
作为优选，步骤(1)中牛樟芝斜面活化母种采用牛樟芝保藏菌种接种到PDA培养基活化培养，培养温度为23-28℃，培养13-15d，直至菌丝长满斜面，得到牛樟芝斜面活化母种，置于4-10℃下保存。
作为优选，步骤(1)中所述的PDA培养基内含有200g/L的去皮马铃薯、20g/L的葡萄糖、20g/L的琼脂和蒸馏水。
作为优选，步骤(1)中所述的PD液体培养基内含有去皮马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L和蒸馏水。
作为优选，步骤(2)中所述的小米燕麦固体培养基通过小米和燕麦按干重8：1-10:1的重量比混合，冷水洗净后在沸水中浸泡25-35min，水分被小米燕麦吸收，并在筛篮里静置1-2h，然后将未被小米和燕麦米吸收的水分沥干；得到小米燕麦固体培养基的水分含量为45％-50％，将130-150g小米燕麦固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌1.5-2h。固体培养基的水分含量需要严格控制，因为水分含量过高会产生厌气发酵而使得培养基变酸，造成栽培失败，水分含量过低也同样会影响发酵的进行。
本发明由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：产品具有特殊香味，含有丰富的活性成分，营养丰富，可用于未来功能食品的加工和生产；工艺操作简单﹑稳定﹑安全可靠，适合工业化大规模生产。培养基配方中的各组分对生理皆无副作用，可以随牛樟芝菌丝制成产品；本发明获得的核黄素含量远大于日常食物中的含量，同时获得的牛樟芝三萜产量远高于其他文献专利所记录的水平，差异显著。利用常温谷物固体发酵的方法，发酵获得大量的核黄素和牛樟芝三萜物质，不依赖于子实体的发生，可以在常温条件下短时间快速获得大量核黄素(5mg/100牛樟芝菌质)和三萜(3.0％)功效成分，在短时间内获得的核黄素含量是食物含量的10-50倍，三萜的含量远高于其他谷物发酵获得的含量，可在未来医学领域应用推广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，包括如下步骤：
(1)牛樟芝液体发酵菌种的培养：将牛樟芝斜面活化母种接种到PDA培养基上，活化培养，培养温度为25℃，培养15d，得到牛樟芝菌块，取边缘横截面为直径1cm的牛樟芝菌块接种到装有50mlml PD液体培养基的培养瓶中进行静置发酵培养，培养温度为25℃，培养20d，得到牛樟芝液体发酵菌种；
(2)小米燕麦牛樟芝菌质的培养：将牛樟芝液体发酵菌种用匀浆仪进行菌丝破碎，每破碎3s静置30s，连续重复操作2次得到菌丝体匀浆液，随后菌丝体匀浆液按照1:8-1:12的接种量接种到添加了1％食品级碳酸钙的小米燕麦固体培养基内，于培养瓶内进行恒温培养，培养温度为25℃，培养30d，得到小米燕麦牛樟芝菌质；
(3)小米燕麦牛樟芝谷菌粉的制备：将小米燕麦牛樟芝菌质于50-60℃烘箱中烘干，将烘干后的小米燕麦牛樟芝菌质粉碎，粉碎后得到的粉末过200目筛，获得小米燕麦牛樟芝谷菌粉。
在步骤(2)中恒温培养30-35d后，将培养完后的培养瓶开盖透气培养14d以内，得到小米燕麦牛樟芝菌质。
步骤(1)中牛樟芝斜面活化母种采用牛樟芝保藏菌种接种到PDA培养基活化培养，培养温度为25℃，培养15d，直至菌丝长满斜面，得到牛樟芝斜面活化母种，置于4℃下保存。
步骤(1)中所述的PDA培养基内含有200g/L的去皮马铃薯、20g/L的葡萄糖、20g/L的琼脂、蒸馏水。
步骤(1)中所述的PD液体培养基内含有去皮马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、蒸馏水。
步骤(2)中所述的小米燕麦固体培养基通过小米和燕麦米按干重9:1的重量比混合，冷水洗净后在沸水中浸泡30min，水分被小米燕麦吸收，并在筛篮里静置2h，然后将未被小米和燕麦吸收的水分沥干；得到小米燕麦固体培养基的水分含量为45％，将130g小米燕麦固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌2h。
实施例2
提取与测定小米燕麦牛樟芝谷菌粉、小米基质、燕麦基质的核黄素参照国标GB/T5009.85-2003国标中荧光分光光度计方法，三萜类物质活性测定采用熊果酸为对照品，以5％的香草醛-冰醋酸和高氯酸钾为显色剂，采用分光光度计法在OD548nm下测定。
表1 小米燕麦牛樟芝谷菌粉、小米基质、燕麦基质的核黄素、三萜含量表
材料 核黄素(mg/100g) 三萜(％)
小米基质 0.01 0.10
燕麦基质 0.02 0.92
小米燕麦牛樟芝谷菌粉 5.04 2.94
实验结果：实验测定了小米燕麦牛樟芝谷菌粉、小米基质、燕麦基质的核黄素、三萜含量，小米燕麦牛樟芝谷菌粉中的核黄素、三萜含量远高于小米基质和燕麦基质，说明牛樟芝发酵产生了核黄素和三萜，核黄素和三萜不是来源于谷物。
实施例3
与实施例1相同，不同之处在于，小米燕麦固体培养基用大米固体培养基替代，大米固体培养基通过大米用冷水洗净后在沸水中浸泡30min，水分被大米吸收，并在筛篮里静置2h，然后将未被大米吸收的水分沥干；得到大米固体培养基的水分含量为45％，将130g大米固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌2h，最终得到的为大米牛樟芝谷菌粉。
实施例4
与实施例1相同，不同之处在于，小米燕麦固体培养基用玉米固体培养基替代，玉米固体培养基通过玉米用冷水洗净后在沸水中浸泡30min，水分被玉米吸收，并在筛篮里静置2h，然后将未被玉米吸收的水分沥干；得到玉米固体培养基的水分含量为45％，将130g玉米固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌2h，最终得到的为玉米牛樟芝谷菌粉。
实施例5
与实施例1相同，不同之处在于，小米燕麦固体培养基用大麦固体培养基替代，大麦固体培养基通过大麦用冷水洗净后在沸水中浸泡30min，水分被大麦吸收，并在筛篮里静置2h，然后将未被大麦吸收的水分沥干；得到大麦固体培养基的水分含量为45％，将130g大麦固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌2h，最终得到的为大麦牛樟芝谷菌粉。
实施例6
与实施例1相同，不同之处在于，小米燕麦固体培养基用荞麦固体培养基替代，荞麦固体培养基通过荞麦用冷水洗净后在沸水中浸泡30min，水分被荞麦吸收，并在筛篮里静置2h，然后将未被荞麦吸收的水分沥干；得到荞麦固体培养基的水分含量为45％，将130g荞麦固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌2h，最终得到的为荞麦牛樟芝谷菌粉。
实施例7
提取与测定小米燕麦牛樟芝谷菌粉中的核黄素，参照国标GB/T5009.85-2003国标中荧光分光光度计方法，三萜类物质活性测定采用熊果酸为对照品，以5％的香草醛-冰醋酸和高氯酸钾为显色剂，采用分光光度计法在OD548nm下测定，测定结果如下表：
表2 谷物牛樟芝谷菌粉的核黄素含量及三萜含量的测定数据表
材料 菌丝生长天数(天) 核黄素(mg/100g) 三萜(％)
小米燕麦牛樟芝谷菌粉 29 5.12 3.08
大米牛樟芝谷菌粉 55 0.20 0.55
玉米牛樟芝谷菌粉 33 0.40 0.95
大麦牛樟芝谷菌粉 36 1.27 1.53
荞麦牛樟芝谷菌粉 38 0.50 1.35
实验结果：在保证发酵时间、合适的培养条件的前提下，使用不同的谷物作为固体培养基，从培养效果上来看，最适合采用的为小米燕麦固体培养基，其培养出的小米燕麦牛樟芝谷菌粉的核黄素含量、三萜物质含量远高于其他谷物牛樟芝谷菌粉。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。

Claims (4)

1.一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）牛樟芝液体发酵菌种的培养：将牛樟芝斜面活化母种接种到PDA 培养基上，活化培养，培养温度为23-28℃，培养13-15d，得到牛樟芝菌块，取边缘横截面为直径1cm的牛樟芝菌块接种到装有50 ml-100 ml PD液体培养基的培养瓶中进行静置发酵培养，培养温度为23-28℃，培养16-20 d，得到牛樟芝液体发酵菌种；
（2）小米燕麦牛樟芝菌质的培养：将牛樟芝液体发酵菌种用匀浆仪进行菌丝破碎，每破碎3-5s静置30-50s，连续重复操作2-4次得到菌丝体匀浆液，随后菌丝体匀浆液按照1:8-1:12的接种量接种到添加了0.5%-1%食品级碳酸钙的小米燕麦固体培养基内，于培养瓶内进行恒温培养，培养温度为23-28℃，培养30-35d后，将培养完后的培养瓶开盖透气培养14d以内，得到小米燕麦牛樟芝菌质；
所述的小米燕麦固体培养基通过小米和燕麦按干重8：1-10:1的重量比混合，冷水洗净后在沸水中浸泡25-35 min，水分被小米燕麦吸收，并在筛篮里静置1-2 h，然后将未被小米和燕麦米吸收的水分沥干；得到小米燕麦固体培养基的水分含量为45%-50%，将130-150g小米燕麦固体培养基装入植物培瓶，于121℃的温度下灭菌1.5-2h；
（3）小米燕麦牛樟芝谷菌粉的制备：将小米燕麦牛樟芝菌质于50-60℃烘箱中烘干，将烘干后的小米燕麦牛樟芝菌质粉碎，粉碎后得到的粉末过100-200目筛，获得小米燕麦桑牛樟芝谷菌粉。
2.根据权利要求1所述的一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，其特征在于：步骤（1）中牛樟芝斜面活化母种采用牛樟芝保藏菌种接种到PDA 培养基活化培养，培养温度为23-28℃，培养13-15 d，直至菌丝长满斜面，得到牛樟芝斜面活化母种，置于4-10℃下保存。
3.根据权利要求1所述的一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的PDA培养基内含有 200 g/L的去皮马铃薯、20 g/L的葡萄糖 、20 g/L的琼脂和蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的PD液体培养基内含有去皮马铃薯 200 g/L、葡萄糖 20 g/L和蒸馏水。
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