CN112189505A - 一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食用菌人工栽培技术领域，具体涉及一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物，并进一步公开其制备方法。本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物，选取的桑黄子实体原料，采用人工袋料进行高效栽培，基于传统人工袋料式培养方试进行桑黄子实体的栽培，以桑黄子实体为原料进行乙醇提取所得，所得提取物具有较好的降尿酸功效，可用于痛风的治疗。

Description

一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物及其制备方法

技术领域

本发明属于食用菌人工栽培技术领域，具体涉及一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物，并进一步公开其制备方法。

背景技术

桑黄(Phellinus igniarius)属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、锈革孔菌科(Hymenochaeyaceae)、针层孔菌属(Phellinu)，是火木层孔菌(P.igniarius)、鲍氏针层孔菌(P.baumii)和裂蹄针层孔菌(P.linteus)的商品名，通常生于杨、桑、柳、白桦、榉树、桃等阔叶树的枯立木及立木树干上。桑黄是近几年开发的一种多年生的珍贵药用真菌，有“森林黄金”之美称。据《中药大辞典》记载，桑黄可以治血崩、血淋、带下、闭经等妇科疾病；现代医学研究也表明，桑黄具有抗肿瘤、抗菌、抗纤维化、抗氧化及提高人体免疫力等显著效果，是目前国际公认的生物抗肿瘤效果第一的珍稀药用真菌，广泛应用于医药、食品、日用化工、保健品等行业。

目前，由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约，桑黄在自然界中形成子实体较为困难，造成天然的桑黄数量非常稀少，自然界中可供药用的资源有限，加之国内外市场对桑黄的需求量越来越大，致使国内各产地药农掠夺性采集，子实体无法大量形成，难以成为稳定的工业产品来源，对桑黄产业的发展十分不利，因此，通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。但是，桑黄人工栽培极其困难，存在着培养条件苛刻、生长周期长的问题。

目前，人工栽培桑黄的方法主要有两种，其一种是以桑树、杨树、栎树的段木栽培为主，但段木栽培需要大量的木材资源，资源浪费比较严重，难以规模化栽培；另一种则是袋料栽培，但是存在培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题。

如中国专利CN1720785A公开的桑黄人工高产栽培方法，该方案即采用袋料栽培，为了解决培养基营养供给不充分，子实体发育较小、易染杂菌等问题，通过在培养基中添加了生长素，但是，生长素的添加没有从根本上解决培养基的问题，而且生长素的添加对桑黄的品质有影响，同时不利于桑黄的天然生长。又如中国专利CN102786333A公开的桑黄袋料栽培培养基及采用该培养基栽培桑黄子实体的方法，该方法充分利用桑枝、桑叶等资源，能够有效减少段木资源的浪费，并可快速、规模化栽培桑黄子实体，近似野生桑黄，且质量稳定；但却依然存在培养时间较长的问题。

痛风系属代谢性疾病范畴，是生物机体内嘌呤类物质代谢紊乱或肾脏尿酸***减少从而导致尿酸盐沉积引起的一系列炎症反应。当血清中尿酸升高至超饱和状态时则由细胞外液沉积于关节、关节周围组织及器官，引起一组痛风综合征(包括痛风石、尿酸性肾结石、痛风性关节炎和痛风肾病)。据统计，全球痛风的总发病率为0.06‰-2.68‰。在我国，痛风已成为仅次于糖尿病的第二大类疾病，且发病年龄出现低龄化趋势。目前，对痛风的治疗途径主要通过抑制尿酸过量生成、促进尿酸***来降低高尿酸血症的发病几率，以及抑制炎症细胞因子等方面。临床治疗痛风的化学药物起效虽快，但不良反应发生较多，如非布司他、苯溴马隆、秋水仙碱等均有不同程度的毒副作用，包括肾脏损伤和中枢神经***毒性等，并且发生几率高。现有技术中已开发出基于桑黄提取物治疗痛风病症的治疗方案，但受限于野生桑黄量较少以及人工桑黄质量不稳定等问题，使其后续药物的开发受到影响。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物，所述提取物的有效成分更高，治疗效果更优；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括人工栽培桑黄子实体的步骤，以及，对所述桑黄子实体进行提取的步骤，具体包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20-30重量份、酿酒废渣30-50重量份、糖蜜10-30重量份、活性污泥颗粒3-8重量份、生石灰1-5重量份、KH₂PO₄0.2-0.5重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入桑黄母种，并将接种后的栽培袋料进行恒温培养，至所述栽培袋料长满菌丝体；

(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续进行恒温培养，至子实体成熟并采收；

(4)将所述桑黄子实体进行粉碎得到粉体，加入乙醇水溶液进行浸渍回流提取，收集提取液减压浓缩至无乙醇味，真空干燥即得所需人工栽培桑黄子实体提取物。

具体的，所述步骤(1)中，所述活性污泥颗粒为好氧活性污泥颗粒。

具体的，所述步骤(1)中，所述栽培基质与水的质量比为40-50％：50-60％。

具体的，所述步骤(1)中，所述栽培基质中还包括加入食用菌提取物作为功能活性诱导剂的步骤。

具体的，所述食用菌提取物包括茶树菇提取物，优选为茶树菇乙醇提取物，优选所述茶树菇提取物的加入量为3-8重量份。

具体的，所述步骤(2)中，所述桑黄母种的接种量为所述栽培基质量的5-10wt％。

具体的，所述步骤(2)中，所述菌丝体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度50-80％，光照强度10-20lux。

具体的，所述步骤(3)中，所述子实体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度70-80％，光照强度30-100lux。

具体的，所述步骤(4)中：

所述乙醇水溶液的体积百分含量为60-80v/v％；

所述桑黄子实体粉体与所述乙醇水溶液的用量比为10g：200-300mL。

本发明还公开了由所述方法提取得到的治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物。

本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物，以桑黄子实体为原料进行乙醇提取所得，所得提取物具有较好的降尿酸功效，可用于痛风的治疗。本发明所述提取物选取的桑黄子实体原料，采用人工袋料进行高效栽培，基于传统人工袋料式培养方试进行桑黄子实体的栽培，精选桑枝木屑、酿酒废渣和糖蜜为主要栽培原料，在满足桑黄栽培营养成分的情况下实现了对酿酒废渣和糖蜜等工业废弃料的再利用；而进一步添加的活性污泥颗粒，则依赖其含有的微生物及有机质等成分，大幅促进了栽培原料营养成分的吸收和桑黄菌丝体及子实体的成型，不仅大幅缩短了桑黄的栽培周期，且有效提升了桑黄子实体的栽培效率，为桑黄的下游应用提供了产量和质量保证。

本发明所述提取物选取的桑黄子实体原料，进一步在桑黄子实体栽培过程中，通过添加茶树菇提取物进行有效成分的诱导沉积，所得桑黄子实体提取物的降尿酸效果更佳，推测是所述桑黄子实体中用于降尿酸的有效成分得到高效累积所致，所述桑黄子实体的药用价值更优。

具体实施方式

本发明下述实施例中，所述桑黄母种是采用常规方法分离纯化得到桑黄菌株，以常规PDA平板培养基进行活化后，接种到常规PD母种培养基中培养，进而获得桑黄母种。

本发明下述实施例中，所述好氧活性污泥颗粒为现有技术中市售的常规性产品即可。

本发明下述实施例中，所述酿酒废渣为一般性白酒酿酒工艺产生的废渣，如一般性高粱酒的酿造工艺获得的废渣，例如，包括如下步骤：

(1)取高粱90kg粉碎至高粱4-8瓣/粒，混合均匀后、并添加55kg的水(75℃)进行润糁18h，再进行装甑蒸料80min，得到粮糟；

(2)将步骤S1中所述粮糟出甑，并加入28kg的冷水进行扬冷处理，扬冷后加入10kg的大曲和0.03kg的生香活性干酵母，得到大渣，并于12℃入池进行大渣发酵28天；

(3)取上述发酵后的所述大渣，加入15kg的稻壳混合均匀后，装甑进行蒸馏50min，得到大渣酒和粮糟，备用；

(4)将步骤S3得到的所述粮糟出甑，加30kg的水，扬冷后加入8kg的大曲和0.02kg的生香活性干酵母，得到二渣，于15℃入缸进行二渣发酵28天；

(5)取发酵后的所述二渣，加入占所述二渣重量10wt％的稻壳混合均匀后装甑，进行蒸馏50min，得到二渣酒；

(6)将得到的所述大渣酒和所述二渣酒按45:55的质量比进行勾兑，混合勾兑后降到54度，即得所述酒。

取上述各个步骤中固液分离产生的废渣混合，即为通常酿酒工艺的酿酒废渣，将所述酿酒废渣经固液分离及干燥处理至含水率低于10％。

本发明下述实施例中，所述食用菌提取物为茶树菇乙醇提取物，具体步骤包括：取茶树菇子实体粉碎后，加入3倍量的体积浓度75v/v％的乙醇水溶液进行常温下回流提取3h，收集提取液经减压浓缩至无乙醇味，真空干燥即得所需茶树菇提取物。

实施例1

本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20重量份、酿酒废渣50重量份、糖蜜10重量份、好氧活性污泥颗粒8重量份、生石灰1重量份、KH₂PO₄ 0.5重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；

(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；

(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500mL浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并收集滤液，以70v/v％乙醇洗涤滤渣，合并滤液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。

实施例2

本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑30重量份、酿酒废渣30重量份、糖蜜30重量份、好氧活性污泥颗粒3重量份、生石灰5重量份、KH₂PO₄ 0.2重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；

(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；

(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500mL浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并收集滤液，以70v/v％乙醇洗涤滤渣，合并滤液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。

实施例3

本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑25重量份、酿酒废渣40重量份、糖蜜20重量份、活性污泥颗粒5重量份、生石灰3重量份、KH₂PO₄ 0.3重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；

(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；

(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500mL浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并收集滤液，以70v/v％乙醇洗涤滤渣，合并滤液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。

实施例4

本发明所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑25重量份、酿酒废渣40重量份、糖蜜20重量份、活性污泥颗粒5重量份、生石灰3重量份、KH₂PO₄ 0.3重量份、茶树菇提取物5重量份，混匀即得所需栽培基质；按照50％：50％的质量比取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入占所述栽培基质量10wt％的桑黄母种液料，并将接种后的栽培袋料置于温度26-27℃、空气湿度60-65％的培养空间进行恒温培养，期间控制培养间光照条件为15lux，并保持培养间间隔性通风状态；随时观察袋料的培养情况，并记录所述栽培袋料长满菌丝体的培养时间；

(3)子实体培养：在上述长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续控制温度27-28℃、空气湿度70-75％、光照强度50lux进行恒温培养，并保持培养间间隔性通风状态，随时观察袋料的出菇情况，并及时采收，同时记录所述子实体成熟的时间；

(4)取上述采收的桑黄子实体置摇摆式粉碎机中粉碎成中粉并充分混匀；另取20g粉体，置于圆底烧瓶中，加入体积含量70v/v％的乙醇水溶液500mL浸泡1h，并进行回流提取2h，滤过并收集滤液，以70v/v％乙醇洗涤滤渣，合并滤液，置于旋转蒸发器中回收乙醇至无醇味，经真空干燥得到所需桑黄子实体提取物。

对比例1

本对比例所述人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法同实施例3，其区别仅在于，所述栽培基质中不添加所述好氧活性污泥颗粒。

实验例

1、桑黄子实体性状

分别记录上述实施例1-4及对比例1中培养的桑黄菌丝体和子实体的时间，并对采收的桑黄子实体的重量、质量进行检测，记录结果见下表1。

表1桑黄子实体培养情况

从上表结果可见，本发明基于人工袋料栽培桑黄子实体的方法，可有效缩短桑黄子实体的栽培时间，提高桑黄子实体的栽培质量。

2、降尿酸效果测试

取60只雄性SPF昆明小鼠(20±2g)，随机分为6组：正常对照组、高尿酸血症模型对照组、阳性对照组、试验1组、试验2组和对照试验组。

除正常对照组腹腔注射和灌胃生理盐水外，其他组按照100mg/kg/d的剂量腹腔注射氧嗪酸钾盐，同时灌胃600mg/kg/d剂量的次黄嘌呤造模。造模前一个小时禁食不禁水，造模后1小时，阳性对照组灌胃5mg/kg/d剂量的别嘌呤醇；试验1组灌胃100mg/kg/d剂量的实施例3制备的提取物；试验2组灌胃100mg/kg/d剂量的实施例4制备的提取物；对照试验组灌胃100mg/kg/d剂量的对比例1制备的提取物；正常对照组和高尿酸血症模型对照组则灌胃相同体积的生理盐水，连续7天。

第7天灌胃给药1小时后，麻醉摘眼球取血，使用离心机在3500r/min速度下离心10min分离得到血清，检测血清中尿酸浓度，结果见表2。

表2桑黄子实体提取物降尿酸效果测试结果

编号	血清尿酸浓度(μmol/L)
		正常对照组	110
高尿酸血症模型对照组	275
		阳性对照组	95
试验1组	81
		试验2组	65
对照试验组	85

从上表2中数据可以看出，本发明所述桑黄子实体提取物降尿酸效果较好，尤其是在桑黄子实体栽培过程中，通过添加茶树菇提取物进行有效成分的诱导沉积，所得桑黄子实体提取物的降尿酸效果更佳，推测是所述桑黄子实体中用于降尿酸的有效成分得到高效累积所致，所述桑黄子实体的药用价值更优。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，包括人工栽培桑黄子实体的步骤，以及，对所述桑黄子实体进行提取的步骤，具体包括如下步骤：

(1)配制栽培袋料：取桑枝木屑20-30重量份、酿酒废渣30-50重量份、糖蜜10-30重量份、活性污泥颗粒3-8重量份、生石灰1-5重量份、KH₂PO₄0.2-0.5重量份，混匀即得所需栽培基质；取所述栽培基质加水混匀，装袋，备用；

(2)菌丝体培养：向所述栽培袋料中接入桑黄母种，并将接种后的栽培袋料进行恒温培养，至所述栽培袋料长满菌丝体；

(3)子实体培养：在长满菌丝体的袋料划开切口出菇，并继续进行恒温培养，至子实体成熟并采收；

(4)将所述桑黄子实体进行粉碎得到粉体，加入乙醇水溶液进行浸渍回流提取，收集提取液减压浓缩至无乙醇味，真空干燥即得所需人工栽培桑黄子实体提取物。

2.根据权利要求1所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述活性污泥颗粒为好氧活性污泥颗粒。

3.根据权利要求1或2所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述栽培基质与水的质量比为40-50％：50-60％。

4.根据权利要求1-3任一项所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述栽培基质中还包括加入食用菌提取物作为功能活性诱导剂的步骤。

5.根据权利要求4所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述食用菌提取物包括茶树菇提取物。

6.根据权利要求1-5任一项所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述桑黄母种的接种量为所述栽培基质量的5-10wt％。

7.根据权利要求1-6任一项所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述菌丝体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度50-80％，光照强度10-20lux。

8.根据权利要求1-7任一项所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述子实体培养步骤的工艺条件包括：控制培养温度为25-30℃，空气湿度70-80％，光照强度30-100lux。

9.根据权利要求1-8任一项所述治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中：

所述乙醇水溶液的体积百分含量为60-80v/v％；

所述桑黄子实体粉体与所述乙醇水溶液的用量比为10g：200-300mL。

10.由权利要求1-9任一项所述方法提取得到的治疗痛风的人工栽培桑黄子实体提取物。