CN115039633B - 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 - Google Patents
一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115039633B CN115039633B CN202110255942.4A CN202110255942A CN115039633B CN 115039633 B CN115039633 B CN 115039633B CN 202110255942 A CN202110255942 A CN 202110255942A CN 115039633 B CN115039633 B CN 115039633B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- culture medium
- seed
- cultivation
- japonica
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001248592 Isaria japonica Species 0.000 title claims abstract description 33
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title abstract description 11
- 244000077995 Coix lacryma jobi Species 0.000 claims abstract description 39
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 28
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 claims abstract description 18
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 17
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 17
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 59
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 30
- 241000609458 Corynespora Species 0.000 claims description 30
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 claims description 30
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 29
- 208000012788 shakes Diseases 0.000 claims description 21
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 20
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 20
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 19
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 18
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 18
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 18
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 18
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 18
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 14
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 13
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 13
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 claims description 12
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 claims description 12
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 11
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 11
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 10
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 10
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 6
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 6
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 5
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 3
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 4
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 15
- DNVPQKQSNYMLRS-APGDWVJJSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-APGDWVJJSA-N 0.000 description 14
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 4
- 241001625026 Cordyceps cicadae Species 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000193160 Isaria tenuipes Species 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241001264174 Cordyceps militaris Species 0.000 description 2
- 235000002723 Dioscorea alata Nutrition 0.000 description 2
- 235000007056 Dioscorea composita Nutrition 0.000 description 2
- 235000009723 Dioscorea convolvulacea Nutrition 0.000 description 2
- 235000005362 Dioscorea floribunda Nutrition 0.000 description 2
- 235000004868 Dioscorea macrostachya Nutrition 0.000 description 2
- 235000005361 Dioscorea nummularia Nutrition 0.000 description 2
- 235000005360 Dioscorea spiculiflora Nutrition 0.000 description 2
- 244000281702 Dioscorea villosa Species 0.000 description 2
- 235000006350 Ipomoea batatas var. batatas Nutrition 0.000 description 2
- 241001248590 Isaria Species 0.000 description 2
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001661641 Verrucosa Species 0.000 description 2
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 235000004879 dioscorea Nutrition 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 2
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 2
- MYKOKMFESWKQRX-UHFFFAOYSA-N 10h-anthracen-9-one;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 MYKOKMFESWKQRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000219357 Cactaceae Species 0.000 description 1
- 241000221955 Chaetomium Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000190633 Cordyceps Species 0.000 description 1
- 241001362614 Crassa Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000334160 Isatis Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 241000357401 Tolypocladium japonicum Species 0.000 description 1
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 150000002137 ergosterols Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
- A01G18/20—Culture media, e.g. compost
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明提供了一种日本棒束孢的子实体人工培养方法，通过在子实体的栽培料中添加薏仁，并进一步优化薏仁的添加比例，大幅提高日本棒束孢的子实体产量，工艺简单，显著降低人工栽培日本棒束孢子实体的生产成本，能够满足规模化周期性生产的要求；制备出的日本棒束孢的子实体营养更丰富，具有大孢虫花独有的功效特性，甘露醇、麦角甾醇等多糖含量更高，具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体而言，涉及一种虫生药用菌培养方法，尤其涉及一种日本棒束孢的子实体人工培养方法。
背景技术
虫生真菌具有很高的药用价值。菌类作物的氨基酸组成全面，利用率高，在国际上被公认是“十分好的蛋白质来源”。菌类也是天然食品维生素的重要来源，其中人体较易缺乏的维生素B含量丰富，比一般蔬菜高，维生素B2含量比肉类和奶酪高，能防止恶性贫血，改善神经功能并有效降低血脂。食用菌中矿物质含量是蔬菜的2倍，高于牛羊肉。食用菌不含淀粉，脂肪含量少，是糖尿病人和肥胖症患者的理想食品。食用菌还含有丰富的甾类、三萜类、香豆精苷、挥发油、生物碱、有机锗和多糖等药效成分，对调节人体机能、提高免疫力、降低血压和胆固醇、抗病抗肿瘤以及延缓衰老等具有显著的医疗保健功效。
随着人们生活水平的提高、保健意识的增强，以药用真菌为原料生产的保健产品越来越受到大众的青睐。目前市场上的药用虫生菌类保健产品仍以蛹虫草和冬虫夏草消费为主，产品过于单一。例如，我国的以冬虫夏草为原料的极草、同仁堂冬虫夏草等，所采用的生产方式都是以真菌子实体干、鲜品为原料，经过浸汁或研磨后，得到含有部分有效成分的汁液，再经过稀释、加入一些调味辅料，最后制成胶囊或冲剂。而这种传统的药用菌生产工艺存在工艺复杂、生产成本高、原料资源短缺等问题，无法适应规模化周期性生产。且这种虫生真菌在市场上鲜有闻之。
日本棒束孢又名大孢虫花、日本冬虫夏草。迄今的研究工作表明，寄生昆虫的不少拟青霉和棒束孢能产生多种重要的生物活性物质。我国拟青霉和棒束孢资源十分丰富，对其中一些种已进行了研究开发，如CN102676396B公开的细脚拟青霉菌株，它们也已涉及国民经济和人民生活的诸多方面。日本棒束孢和细脚拟青霉菌属于不同菌系，研究表明：日本棒束孢的提取物具有更好的抗肿瘤、免疫调节作用，增强肺、肾功能，防止动脉硬化，预防贫血，增加小鼠常压耐缺氧，镇静、镇痛，抗菌等功效。
目前针对日本棒束孢人工培养过程，CN97113190.2公开了蛹虫草等虫草的人工培养方法，提出可以采用蚕蛹进行日本棒束孢的培养；本申请的发明人首次实现了日本棒束孢的人工培植，并于2014年发表文献《大孢虫花生物学特性及驯化栽培》(菌物研究，第12卷第4期，2014)，但其子实体产出量仍然较低，且培养出的子实体中营养成分含量不高，导致生产成本偏高，难以实现大规模生产。
因此急需找到如何提高日本棒束孢子实体产量的人工培养方法，降低成本，从而帮助实现日本棒束孢子实体的产业化生产。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种日本棒束孢的子实体的培养方法，通过在子实体的栽培料中添加薏仁，并进一步优化薏仁的添加比例，大幅提高日本棒束孢的子实体产量，工艺简单，显著降低人工栽培日本棒束孢子实体的生产成本，能够满足规模化周期性生产的要求；制备出的日本棒束孢的子实体营养更丰富，具有大孢虫花独有的功效特性，甘露醇、麦角甾醇等多糖含量更高，具有广阔的市场前景。
本发明所述的日本棒束孢由发明人于辽宁省庄河市仙人洞国家级自然保护区采集获得，经吉林农业大学根据其形态特征及显微结构鉴定为大孢虫花(日本棒束孢，Isariajaponica)，发明人首次实现了日本棒束孢的人工培植，并经过长期的传代、筛选和驯化，优选出更健壮、子实体产量和质量更高、营样成分含量更高的日本棒束孢菌种ZQY001，并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO： 11610，保藏名称为日本棒束孢(Isaria japonica)，保藏日期为2015年11月27日，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
一方面，本发明提供了一种日本棒束孢的子实体培养的栽培料，所述栽培料中含有薏仁。
本研究小组经过大量实验证明，薏仁可以显著提升日本棒束孢的子实体产量，并且制备出的日本棒束孢的子实体营养更丰富，甘露醇、麦角甾醇等多糖含量更高。
薏仁是我国传统的药食两用的保健食品。薏仁具有利水消肿、健脾祛湿、清热排脓、抗炎镇痛、增强免疫力等功效。薏仁多糖含量丰富，具有降血糖的作用，含有85％以上的不饱和脂肪酸，本研究小组令人惊喜地发现，薏仁的营养成分更容易被日本棒束孢利用，能显著提升日本棒束孢子实体的产量和质量。
进一步地，按质量份数计算，栽培料中薏仁的添加量为10-20％。研究证明薏仁的添加量为10-20％时，能明显提升日本棒束孢子实体的产量。
进一步地，按质量份数计算，栽培料中薏仁的添加量为15-16％。
进一步地，按质量份数计算，所述栽培料包含：葡萄糖2％、蛋白胨0.5％、硝酸铵0.3％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.05％、琼脂2％、加薏仁15-16％，其余为蒸馏水。
另一方面，本发明提供了一种日本棒束孢的子实体的培养方法，采用如上所述的栽培料进行日本棒束孢的子实体培养。
进一步地，将栽培料分装至培养容器中，装量为培养容器容量的1/4，120℃高压灭菌 90min，接入1％种子液，培养温度为28℃--35℃，培养湿度为70％-85％，培养时间为10-15 天。
进一步地，所述培养容器为保鲜盒或是培养瓶，其中保鲜盒通过盖子紧闭进行栽培，培养瓶通过塑料布封口栽培。
进一步地，所述培养方法还包括菌种活化和种子液培养，所述种子液培养包括一级药瓶种子液培养、二级药瓶种子液培养和种子罐发酵培养。
进一步地，所述培养方法包括以下步骤：
(1)菌种活化
将日本棒束孢菌种接种到试管母体培养基中，于23～25℃恒温培养箱中培养5～7天，获得活化的日本棒束孢菌种；
所述母体培养基的配制方法是：称取马铃薯200克，洗净、切成小块后加蒸馏水，沸水煮30分钟，取其煮汁以及葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、琼脂20克，加蒸馏水定容至1000毫升，pH自然，120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
(2)一级摇瓶种子培养
从活化的日本棒束孢菌种培养基上挑取3～4块大小为2mm的无培养基的菌丝块，转接至装有一级摇瓶培养基的锥形瓶中，静置培养3天，然后置于摇床上，于23～25℃、90～120转/分钟震荡培养2～3天，得到二级摇瓶菌种液；
所述的一级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸4克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至 1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
(3)二级摇瓶种子培养
将二级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中，接种量为10～20％，接种后置于摇床上，于23～25℃、120转/分钟震荡培养2～3天，得到种子罐菌种液；
所述的二级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至 1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
(4)种子罐发酵培养
将种子罐菌种液接种至装有种子罐发酵培养基的种子罐中，接种量为10～20％，接种后于23～25℃、罐压50～70千帕、通气量以V/V·min比为0.5:1的条件下发酵培养3～4天，得到发酵罐菌种液；
所述的种子罐发酵培养基配制方法是：称取蔗糖25克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸7克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
(5)子实体的培养
用移液器抽取10毫升发酵罐菌种液，接种到装有栽培料的保鲜盒或是培养瓶，其中保鲜盒通过盖子紧闭进行栽培，培养瓶通过塑料布封口栽培；放入恒温箱内在28℃--35℃，空气相对湿度70％-85％，培养10～15天，出瓶，分离子实体与培养基质；
所述的栽培料的配制方法是称取称取葡萄糖20克、蛋白胨5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克、琼脂20g，加薏仁150-160g，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于玻璃瓶中，装料量为玻璃瓶容量的1/4，用牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
进一步地，所述种子罐的培养基装料系数为60～70％，通入气体为经灭菌、除尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。
再一方面，本发明提供了薏仁在用于制备日本棒束孢的子实体培养栽培料中的用途。
本发明的有益效果为：
1、通过在日本棒束孢的子实体培养的栽培料中添加薏仁，大幅提高日本棒束孢的子实体产量，工艺简单，显著降低人工栽培日本棒束孢子实体的生产成本，能够满足规模化周期性生产的要求；
2、制备出的日本棒束孢的子实体营养更丰富，具有大孢虫花独有的功效特性，甘露醇、麦角甾醇等多糖含量更高。
附图说明
图1为实施例3提供的薏仁加量与日本棒束孢子实体的产出量的关系示意图
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。本实施例中使用的试剂、物料均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1日本棒束孢子实体的人工培养
本实施例采用日本棒束孢菌种ZQY001，子实体的人工培养过程包括以下步骤：
(1)菌种活化
切取1～2块大小为2mm日本棒束孢菌种ZQY001的菌块接种到试管母体培养基中进行菌种活化培养，于23～25℃恒温培养箱中培养5～7天，见到白色大孢虫花菌体，获得活化的日本棒束孢菌种。
所述母体培养基的配制方法是：称取马铃薯200克，洗净、切成小块后加蒸馏水，沸水煮30分钟，取其煮汁以及葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、琼脂20克，加蒸馏水定容至1000毫升，pH自然，120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
(2)一级摇瓶种子培养
从活化的日本棒束孢菌种培养基上挑取3～4块大小为2mm的无培养基的菌丝块，转接至装有一级摇瓶培养基的锥形瓶中，静置培养3天，然后置于摇床上，于23～25℃、90～120转/分钟震荡培养2～3天，得到含有大量菌丝体的二级摇瓶菌种液。
所述的一级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸4克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至 1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
(3)二级摇瓶种子培养
将二级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中，接种量为20％，接种后置于摇床上，于23～25℃、120转/分钟震荡培养2～3天，得到含有大量菌丝体的种子罐菌种液。
所述的二级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至 1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
(4)种子罐发酵培养
将种子罐菌种液接种至装有种子罐发酵培养基(培养基装料系数为65％)的种子罐中，接种量为15％，接种后于23～25℃、罐压50～70千帕、通气量以V/V·min比为0.5:1的条件下发酵培养3～4天，得到含有大量菌丝体的发酵罐菌种液；所通入的气体为经过灭菌、除尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。
所述的种子罐发酵培养基配制方法是：称取蔗糖25克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸7克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
(5)子实体的培养
用移液器抽取10毫升发酵罐菌种液，接种到装有栽培料的保鲜盒或是培养瓶，其中保鲜盒通过盖子紧闭进行栽培，培养瓶通过塑料布封口栽培；放入恒温箱内在28℃--35℃，空气相对湿度70％-85％，培养10～15天，出瓶，分离子实体与培养基质；
所述的栽培料的配制方法是称取称取葡萄糖20克、蛋白胨5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克、琼脂20g，加薏仁160g，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于玻璃瓶中，装料量为玻璃瓶容量的1/4，用牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
实施例2薏仁对日本棒束孢子实体培养的影响
本实施例采用实施例1提供的日本棒束孢子实体的培养方法进行培养，并同时进行多组对比例的培养，对比例与其区别是子实体培养的栽培料中不加薏仁，并分别采用小麦、大米、大豆、蚕蛹、玉米、山药、马铃薯进行替代，考察不同栽培料的日本棒束子实体产出量，以及子实体中的多糖、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量。
其中多糖含量的检测方法为：以7％的接种量将浓度为107个/ml的孢子悬液接入装液量为20％的液体培养基中，于pH7、27℃和转速150r/min的条件下发酵7d，再用硫酸-蒽酮法测定多糖含量。
甘露醇含量的检测方法为：取供试品约1g，精密称定，精密加入水25mL，称定重量，50℃超声处理60min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，离心，取续滤液10mL 至蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用流动相溶解并定容至10mL量瓶中，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液进行HPLC分析。
麦角甾醇含量的检测方法为：精密称取1g样品置于10mL容量瓶加入1mol/L的NaOH、 50％甲醇液超声波中混匀后于60℃水浴1hr，然后14000r/min离心20min，取上清液5mL 加5mLCHCl3进行萃取，取2mL萃取液，氮气吹干后用1mL甲醇溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液供HPLC分析用，以三氯甲烷为溶剂配制系列浓度的麦角甾醇标准品溶液。
天冬氨酸含量的检测方法为：准确称取一定量均匀性好的的试样，放入水解管中，在水解管内加入6mol/L盐酸10-15mL，含水量高的试样加入等体积的盐酸，加入新蒸馏的苯酚3-4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3-5min,再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近0Pa)，然后充入高纯度氮气，再抽真空充氮气，反复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110℃的恒温箱，水解22h后，取出冷却；打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50mL容量瓶内用去离子水定容；吸取绿叶1mL于5mL容量瓶内，用真空干燥器在40-50℃干燥，残留物用 1-2mL水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mLpH2.2的缓冲液溶解；准确取 0.2mL混合氨基酸溶液，用pH2.2的缓冲液稀释到5mL；用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样测定氨基酸含量。
具体考察结果如表1所示。
表1、不同栽培料对日本棒束孢子实体培养的影响
由表1可以看出，与第2组的空白对照相比，当栽培料中添加薏仁时，日本棒束孢的子实体产出量由8.1g/50g培养基提高至25.3g/50g，同时子实体中的多糖、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸都得到明显提升；与第3-9组相比，添加小麦、大米、大豆、蚕蛹、玉米、山药、马铃薯时，对日本棒束孢的子实体的培养虽然也稍有效果，但效果都不如薏仁，这可能是因为薏仁的油脂含量较低，且其中的膳食纤维和脂肪酸更容易被日本棒束孢所利用；而大米、小麦等的多糖纤维含量高，难以被日本棒束孢分解利用；大豆、蚕蛹等油脂含量高，且脂肪酸种类不利于日本棒束孢的培养。
实施例3薏仁的不同加量对子实体培养的影响
本实施例采用实施例1提供的日本棒束孢子实体的培养方法进行培养，其中的薏仁添加比例分别为10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％，即每50g栽培料中，薏仁的添加量分别为5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g、 10g，考察了薏仁的不同添加比例对日本棒束的子实体产出量，以及子实体中的多糖、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量。其中多糖含量、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量的检测方法如实施例2所述。具体考察结果如表2所示，日本棒束孢子实体的产出量与薏仁加量的关系示意图见图1。
表2、栽培料中薏仁的不同加量对日本棒束孢子实体培养的影响
由表1可以看出，薏仁的不同加量，对日本棒束孢子实体的培养存在一定的影响，当薏仁加量从10％增加到16％时，日本棒束孢子实体产出量由11.2g/50g培养基，提高到25.3g/50g培养基，子实体中的多糖含量、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量也都分别有了一定程度的提升，但随着薏仁的添加量继续上升，从16％继续增加到20％时，日本棒束孢子实体产出量却开始出现下降趋势，而且子实体中的多糖含量、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量也都出现一定程度的下降。可见薏仁的最佳添加比例应为15-16％，最优选为16％，即8g薏仁/50g栽培料。
实施例4日本棒束孢子实体与天然蝉花虫草营养成分对比
本实施例采用实施例1获得的日本棒束孢与天然蝉花虫草(购自)进行多糖、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量对比，中多糖含量、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量的检测方法如实施例2所述。具体考察结果如表3所示。
表3、本棒束孢子实体与天然蝉花虫草营养成分对比
| 序号 | 品种 | 多糖(mg/g) | 甘露醇(mg/g) | 麦角甾醇(mg/g) | 天冬氨酸(％) |
| 1 | 日本棒束孢 | 34.56±0.75 | 81.9±1.12 | 0.6256±0.0309 | 0.04 |
| 2 | 天然蝉花虫草 | 28.5±0.95 | 53.6±1.16 | 0.5743±0.018 | 0.02 |
由表3可见，本发明通过人工培养获得的日本棒束孢与天然蝉花虫草相比，其中的多糖、甘露醇、麦角甾醇、天冬氨酸含量都明显更高，功效成分含量更多，也将更俱保健功能，市场前景广阔。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (5)
1.一种提高日本棒束孢的子实体中的多糖、甘露醇、麦角甾醇和天冬氨酸含量的方法，其特征在于，由混合物制备栽培料进行培养，所述混合物由薏仁、葡萄糖、蛋白胨、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、碳酸钙、琼脂组成，所述栽培料为：葡萄糖2%、蛋白胨0.5%、硝酸铵0.3%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、碳酸钙0.05%、琼脂2%、加薏仁15-16%，其余为蒸馏水；所述日本棒束孢的保藏编号为CGMCC NO：11610；所述栽培料进行日本棒束孢的子实体培养方法为：将栽培料分装至培养容器中，装量为培养容器容量的1/4，120℃高压灭菌90min，接入1%种子液，培养温度为28℃--35℃，培养湿度为70%-85%，培养时间为10-15天；所述日本棒束孢的子实体中的多糖含量达到34.56±0.75mg/g，甘露醇含量达到81.9±1.12mg/g，麦角甾醇含量达到0.6256±0.0309mg/g，天冬氨酸含量达到0.04mg/g。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养容器为保鲜盒或是培养瓶，其中保鲜盒通过盖子紧闭进行栽培，培养瓶通过塑料布封口栽培。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养方法还包括菌种活化和种子液培养，所述种子液培养包括一级药瓶种子液培养、二级药瓶种子液培养和种子罐发酵培养。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养方法由以下步骤组成：
（1）菌种活化
将日本棒束孢菌种接种到试管母体培养基中，于23～25℃中恒温培养箱培养5～7天，获得活化的日本棒束孢菌种；
所述母体培养基的配制方法是：称取马铃薯200克，洗净、切成小块后加蒸馏水，沸水煮30分钟，取其煮汁以及葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、琼脂20克，加蒸馏水定容至1000毫升，pH自然，120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
（2）一级摇瓶种子培养
从活化的日本棒束孢菌种培养基上挑取3～4块大小为2mm的无培养基的菌丝块，转接至装有一级摇瓶培养基的锥形瓶中，静置培养3天，然后置于摇床上，于23～25℃、90～120转/分钟震荡培养2～3天，得到二级摇瓶菌种液；
所述的一级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸4克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
（3）二级摇瓶种子培养
将二级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中，接种量为10～20%，接种后置于摇床上，于23～25℃、120转/分钟震荡培养2～3天，得到种子罐菌种液；
所述的二级摇瓶培养基配制方法是：称取蔗糖20克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
（4）种子罐发酵培养
将种子罐菌种液接种至装有种子罐发酵培养基的种子罐中，接种量为10～20%，接种后于23～25℃、罐压50～70千帕、通气量以V/V·min比为0.5: 1的条件下发酵培养3～4天，得到发酵罐菌种液；
所述的种子罐发酵培养基配制方法是：称取蔗糖25克、玉米粉15克、淀粉5克、谷氨酸7克、硝酸铵4克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于锥形瓶中，装料量为锥形瓶容量的1/5～2/5，用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用；
（5）子实体的培养
用移液器抽取10毫升发酵罐菌种液，接种到装有栽培料的保鲜盒或是培养瓶，其中保鲜盒通过盖子紧闭进行栽培，培养瓶通过塑料布封口栽培；放入恒温箱内在28℃--35℃，空气相对湿度70%-85%，培养10～15天，出瓶，分离子实体与培养基质；
所述的栽培料的配制方法是称取葡萄糖20克、蛋白胨5克、硝酸铵3克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、碳酸钙0.5克、琼脂20g，加薏仁150-160g，加蒸馏水定容至1000毫升，将配好的培养基分装于玻璃瓶中，装料量为玻璃瓶容量的1/4，用牛皮纸扎封瓶口，于120℃高压灭菌90分钟，待温度降至26～30℃以下后使用。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子罐的培养基装料系数为60~70%，通入气体为经灭菌、除尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110255942.4A CN115039633B (zh) | 2021-03-09 | 2021-03-09 | 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110255942.4A CN115039633B (zh) | 2021-03-09 | 2021-03-09 | 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115039633A CN115039633A (zh) | 2022-09-13 |
| CN115039633B true CN115039633B (zh) | 2024-05-31 |
Family
ID=83156765
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110255942.4A Active CN115039633B (zh) | 2021-03-09 | 2021-03-09 | 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115039633B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115044477B (zh) * | 2021-03-09 | 2023-10-13 | 张清洋 | 一种日本棒束孢菌株及其应用 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19980033558A (ko) * | 1998-04-24 | 1998-07-25 | 원종광 | 동충하초 자실체 생산방법 |
| KR20020000674A (ko) * | 2000-06-27 | 2002-01-05 | 성재모 | 붉은자루동충하초 자실체의 대량생산방법 |
| TW201200143A (en) * | 2010-06-30 | 2012-01-01 | Bio Ray Biotechnology Co Ltd | A method to improve cordycepin of Solid-state cultivation |
| CN103621308A (zh) * | 2012-08-22 | 2014-03-12 | 上海泛亚生物医药集团有限公司 | 细脚棒束孢子实体生产的培养基及工业化培养方法 |
| CN106688603A (zh) * | 2015-08-11 | 2017-05-24 | 天津市庆祥农业科技有限公司 | 一种食用菌的制备方法及其加工工艺 |
| CN107475130A (zh) * | 2017-09-19 | 2017-12-15 | 广东省微生物研究所 | 细柄棒束孢新菌种及其栽培方法和用途 |
| CN109937795A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-06-28 | 广西壮仁堂生物科技有限公司 | 一种以茉莉花为基质培育虫草菌丝体的方法 |
| KR20200025135A (ko) * | 2018-08-29 | 2020-03-10 | 농업회사법인 주식회사 모이식품 | 배암차즈기 추출액을 이용한 기능성 동충하초 자실체의 재배방법 |
-
2021
- 2021-03-09 CN CN202110255942.4A patent/CN115039633B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19980033558A (ko) * | 1998-04-24 | 1998-07-25 | 원종광 | 동충하초 자실체 생산방법 |
| KR20020000674A (ko) * | 2000-06-27 | 2002-01-05 | 성재모 | 붉은자루동충하초 자실체의 대량생산방법 |
| TW201200143A (en) * | 2010-06-30 | 2012-01-01 | Bio Ray Biotechnology Co Ltd | A method to improve cordycepin of Solid-state cultivation |
| CN103621308A (zh) * | 2012-08-22 | 2014-03-12 | 上海泛亚生物医药集团有限公司 | 细脚棒束孢子实体生产的培养基及工业化培养方法 |
| CN106688603A (zh) * | 2015-08-11 | 2017-05-24 | 天津市庆祥农业科技有限公司 | 一种食用菌的制备方法及其加工工艺 |
| CN107475130A (zh) * | 2017-09-19 | 2017-12-15 | 广东省微生物研究所 | 细柄棒束孢新菌种及其栽培方法和用途 |
| KR20200025135A (ko) * | 2018-08-29 | 2020-03-10 | 농업회사법인 주식회사 모이식품 | 배암차즈기 추출액을 이용한 기능성 동충하초 자실체의 재배방법 |
| CN109937795A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-06-28 | 广西壮仁堂生物科技有限公司 | 一种以茉莉花为基质培育虫草菌丝体的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 大孢虫花生物学特性及驯化栽培;张清洋，张波，李玉;菌物研究;第12卷(第4期);226-232 * |
| 高雄山虫草的生物活性成分及药理作用研究进展;梁建东;食用菌学报;20180315;第25卷(第1期);第113-119页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115039633A (zh) | 2022-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103330258B (zh) | 一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料及其制备方法 | |
| CN104285820B (zh) | 一株富硒蛹虫草菌种及其应用 | |
| CN108504621B (zh) | 用于蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的培养基及其制备方法 | |
| CN103571756B (zh) | 一种蝉棒束孢菌株的试管筛选方法及培养基 | |
| CN103820299A (zh) | 一种虫草菌丝体发酵醋及其制备方法 | |
| CN108938949A (zh) | 一种天然原料青稞红曲饮片及制备方法和应用 | |
| KR20020069859A (ko) | 액체종균을 활용한 생육기간 단축의 버섯균사체곡물의제조방법 | |
| CN115039633B (zh) | 一种日本棒束孢的子实体人工培养方法 | |
| CN108901587B (zh) | 一种蝉花的固体培养方法 | |
| CN111607621A (zh) | 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用 | |
| CN106479899A (zh) | 一种蛹虫草菌株及其在制备虫草素中的应用 | |
| CN109762745A (zh) | 一种虎奶菇的发酵培养方法以及从培养物中提取活性成分的方法 | |
| CN106922386A (zh) | 一种蝉花的人工培养方法 | |
| CN106922387A (zh) | 一种蝉花的人工培养方法 | |
| CN1163930A (zh) | 深层发酵法生产灵芝保健饮料 | |
| CN108624509B (zh) | 一种蝉花人工培养过程中固体培养基的循环利用方法 | |
| CN115044477B (zh) | 一种日本棒束孢菌株及其应用 | |
| CN112522114B (zh) | 蛹虫草菌糠提取液和灵芝发酵产物及其制备方法和应用 | |
| CN101407767A (zh) | 一种通过发酵生产冬虫夏草的方法 | |
| CN108553487A (zh) | 一种发酵虫草菌粉Cs-4饮片的制备方法 | |
| CN104974849B (zh) | 一种发酵型烟用甜菜浸膏的制备方法 | |
| CN107156297A (zh) | 一种紫芝酸奶及其制备方法 | |
| CN106922389A (zh) | 一种蝉花的人工培养方法 | |
| CN109771452A (zh) | 虎奶菇提取物在制备***药物中的应用 | |
| CN106912293B (zh) | 一种蝉花的人工培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |