CN113063867A - 一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 - Google Patents
一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113063867A CN113063867A CN202110301769.7A CN202110301769A CN113063867A CN 113063867 A CN113063867 A CN 113063867A CN 202110301769 A CN202110301769 A CN 202110301769A CN 113063867 A CN113063867 A CN 113063867A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bitter
- metabolites
- medlar
- wild
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 244000241872 Lycium chinense Species 0.000 title claims abstract description 10
- 235000015468 Lycium chinense Nutrition 0.000 title claims abstract description 10
- 235000017784 Mespilus germanica Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 244000182216 Mimusops elengi Species 0.000 claims abstract description 25
- 235000000560 Mimusops elengi Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 235000007837 Vangueria infausta Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 19
- 244000241838 Lycium barbarum Species 0.000 claims description 17
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 claims description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 14
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 11
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 11
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 229930003352 steroid alkaloid Natural products 0.000 claims description 8
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 4
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 4
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000010959 steel Substances 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 16
- QCTMYNGDIBTNSK-XEAAVONHSA-N α-Solamarine Chemical compound O([C@H]1[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]([C@]1(NC[C@H](C)CC1)O5)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QCTMYNGDIBTNSK-XEAAVONHSA-N 0.000 description 10
- KNLOWJPFLKGYGQ-UHFFFAOYSA-N Solasodine 3-O-??-L-rhamnopyranosyl (1‘Â∆2)-O-[??-D-glucopyranosyl (1‘Â∆4)]-??-D-glucopyranoside Natural products O1C2(NCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C(C1O)OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)OC(CO)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O KNLOWJPFLKGYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QCTMYNGDIBTNSK-UHFFFAOYSA-N Solasonin Natural products O1C2(NCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QCTMYNGDIBTNSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QCTMYNGDIBTNSK-QCNFCIKQSA-N Solasonine Natural products O([C@@H]1[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)[C@@H](O[C@@H]2CC=3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@H]5[C@@](C)([C@H]6[C@@H](C)[C@@]7(O[C@H]6C5)NC[C@H](C)CC7)CC4)CC=3)CC2)O[C@@H](CO)[C@@H]1O)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 QCTMYNGDIBTNSK-QCNFCIKQSA-N 0.000 description 7
- RCTKRNCKOYYRIO-UHFFFAOYSA-N alpha-Solamarine Natural products O1C2(NCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C1O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(C)C(O)C(O)C1O RCTKRNCKOYYRIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 5
- BNSCASRSSGJHQH-DEFKTLOSSA-N quercetin 3,7-di-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BNSCASRSSGJHQH-DEFKTLOSSA-N 0.000 description 4
- 241001106041 Lycium Species 0.000 description 3
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 3
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- UQEJQKNQBYROBG-UHFFFAOYSA-N quercetin 3,7-O-diglucoside Natural products COC1OC(Oc2cc(O)c3C(=O)C(=C(Oc3c2)c4ccc(O)c(O)c4)OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C(O)C(O)C1O UQEJQKNQBYROBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BNSCASRSSGJHQH-UHFFFAOYSA-N quercetinyl-3-O-alpha-galactosyl-7-O-alpha-glucoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BNSCASRSSGJHQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 241000207763 Solanum Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- -1 flavonoid compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 description 1
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
- G01N2030/324—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed speed, flow rate
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法。一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,包括以下步骤：(1)、枸杞样品制备；(2)将步骤(1)得到的待测样品放入超高效液相色谱仪和质谱仪进行测定；(3)通过质谱中分子离子峰和碎片离子峰的分子量进行匹配；(4)结合紫外吸收光谱特征，对照标准值，鉴定色谱峰的主要化学成分。本发明可对枸杞苦味代谢物进行准确定量研究，该方法具有良好的稳定性、准确性和精密度，为野生苦味枸杞资源的进一步开发利用提供了科学依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法。
背景技术
枸杞属(Lycium L.)植物为茄科(Solanaceae)茄族(solaneae Reichb.)枸杞亚族(Lyciinae Wettst.)植物，有80多个种，是一个世界分布属，多分布于暖温带地区，多数种分布南、北美洲，以美国亚利桑那州和阿根廷形成2个分布中心，并以南美洲的种类最为丰富。其中，欧洲3种，亚洲7～8种，澳大利亚1种，美洲约45种，南非6种。我国多数种类分布于西北和华北。
野生苦味枸杞中苦味代谢物质主要为甾体生物碱类、黄酮类，其相关的成为具有抗癌、抗病毒、抗心脑血管病等药用或保健功能，而其中那些野生苦味成分还未有方法去鉴定。
现在关于甾体生物碱类、黄酮类的分析主要有分光光度法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等，但现有的检测方法存在检测结果不稳定，差异性大，不准确的问题。
发明内容
发明目的：基于以上问题，本发明提供一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法，该方法具有良好的稳定性、准确性和精密度，可对主要苦味代谢产物进行分类，并对主要化合物进行准确定量，野生苦味枸杞中代谢物质的提取鉴定和深度开发利用提供了技术基础和支持
技术方案：一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,包括以下步骤：
(1)、枸杞样品制备：
(11)取野生红果苦味枸杞成熟果实，加液氮冷冻后置真空冷冻干燥器干燥，研成细粉，
(12)、取0.5mg步骤(1)得到的细粉，加1.5mL甲醇后超声提取，离心，取上清液，合并上清液，氮气吹干，加0.5mL甲醇溶解，经过孔径为0.45μm有机微孔滤膜过滤，制成干样的待测样品；
(2)将步骤(1)得到的待测样品放入超高效液相色谱仪和质谱仪进行测定，液相色谱和质谱的条件如下：
枸杞代谢物质液相色谱条件：
色谱柱，流动相A相-0.1％甲酸水溶液；
流动相B相-甲醇，流速：0.5mL·min-1，进样量：5μL，柱温：36℃，DAD检测波长：370,280,254,230,210nm；
流动相A与流动相B的梯度洗脱比例体积分数为：0min 5％B，60min 100％B，70min100％B；
枸杞代谢物质质谱条件电喷雾离子源(ESI)，正离子模式(100-3200m/z)，雾化器压力：50psi，
干燥气流速(Drying Gas Flow)：10mL·min-1，干燥气温度(Drying Gas Temp)：350℃，毛细管电压(Capillary Voltage)：4000V，碎裂(Fragmentor)电压：170V，MS/MS碰撞能量(Collision Energy)：30V。
(3)通过质谱中分子离子峰和碎片离子峰的分子量进行匹配；
(4)结合紫外吸收光谱特征，对照标准值，鉴定色谱峰的主要化学成分。
进一步地，步骤(4)中的主要化学成分包括甾体生物碱类物质。
进一步地，步骤(4)中的主要化学成分包括黄酮类物质。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明可对枸杞苦味代谢物进行准确定量研究，该方法具有良好的稳定性、准确性和精密度，为野生苦味枸杞资源的进一步开发利用提供了科学依据。
附图说明
图1为枸杞样品液质总离子流图，其中：
L-1)宁夏银川栽培甜枸杞品种宁杞7号、L-2)宁夏海源野生苦味枸杞、L-3)宁夏西吉野生苦味紫枸杞、L-4)陕西岐山野生苦味枸杞。注：样品浓度为每0.4g干样制成1mL样品溶液。标记39,40分别代表化合物澳洲茄碱、5,6-二氢澳洲茄碱对应的色谱峰。
图2不同枸杞中甾体生物碱类成分相对含量比较图。
图3不同枸杞中黄酮类成分相对含量比较图。
具体实施方式：
下面对本发明的具体实施方式详细说明。
实施例1：
一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,包括以下步骤：
(1)、枸杞样品制备：
(11)取野生红果苦味枸杞成熟果实2g，加液氮冷冻后置真
空冷冻干燥器干燥，研成细粉；
(12)取0.5mg细粉，加1.5mL甲醇后超声提取，离心，取上清液，合并上清液，氮气吹干，加0.5mL甲醇溶解，经0.45μm有机微孔滤膜过滤，制成含量0.5g干样的待测样品；
(2)将步骤(1)得到的待测样品放入超高效液相色谱仪和质谱仪进行测定，
液相色谱条件：色谱柱，流动相A相-0.1％甲酸水溶液；流动相B相-甲醇，流速：0.5mL·min-1，进样量：5μL，柱温：36℃，DAD检测波长：370,280,254,230,210nm。
流动相A与流动相B的梯度洗脱比例体积分数为：0min 5％B，60min 100％B，70min100％B。
质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式(100-3200m/z)，雾化器压力(Nebulizer pressure)：50psi，干燥气流速(Drying Gas Flow)：10mL·min-1，干燥气温度(Drying Gas Temp)：350℃，毛细管电压(Capillary Voltage)：4000V，Fragmentor电压：170V，MS/MS碰撞能量(Collision Energy)：30V。
(3)通过质谱中分子离子峰和碎片离子峰的分子量进行匹配。
(4)结合紫外吸收光谱特征，对照标准值，鉴定色谱峰的主要化学成分。
进一步，在总离子流图(如图1所示)中，澳洲茄碱(39)和5,6-二氢澳洲茄碱(40)波峰处在宁杞7号缺少的、三种野生苦味枸杞共同具有的波谱区段，是野生枸杞与甜枸杞与栽培甜枸杞含量差异最大的成分。
进一步，甾体生物碱类检测
根据分子量、碎片离子和紫外(UV)吸收谱等信息鉴定得到甾体生物碱类成分澳洲茄碱(39)和5,6-二氢澳洲茄碱(40)，如下表1。如图2所示，野生苦枸杞中甾体生物碱类成分澳洲茄碱是宁夏银川栽培甜枸杞品种宁杞7号缺失的化合物；5,6-二氢澳洲茄碱含量明显高于宁夏银川栽培甜枸杞品种宁杞7号。澳洲茄碱、5,6-二氢澳洲茄碱均具有苦味。因此，推测野生苦枸杞甾体生物碱类成分含量高是其苦味主要来源之一。
表1.UPLC-Q/TOF-MS鉴定不同产地枸杞中甾体生物碱类成分
进一步，黄酮类检测
根据分子量、碎片离子和紫外(UV)吸收谱等信息鉴定黄酮类成分4个(32-35)，分别为槲皮素-3,7-O-二葡萄糖苷(32)及其异构体(33)、芦丁(34)、山柰酚-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(35)，如下表2、图3。其中化合物32-34于检测图谱中呈现可辨的单一峰。比较四种枸杞中检测出的化合物32-34峰面积(代表含量)，黄酮类化合物槲皮素-3,7-O-二葡萄糖苷(32)及其异构体(33)是栽培枸杞宁杞7号所缺失的成分。因此，苦味枸杞中上述黄酮类化合物含量高是其苦味的一个原因。
表2.UPLC-Q/TOF-MS鉴定不同产地枸杞中黄酮类成分
本发明可对枸杞苦味代谢物进行准确定量研究，该方法具有良好的稳定性、准确性和精密度，为野生苦味枸杞资源的进一步开发利用提供了科学依据。
实施例2
一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,包括以下步骤：
(1)、枸杞样品制备：
(11)取野生红果苦味枸杞成熟果实，加液氮冷冻后置真空冷冻干燥器干燥，研成细粉，
(12)、取0.5mg步骤(1)得到的细粉，加1.5mL甲醇后超声提取，离心，取上清液，合并上清液，氮气吹干，加0.5mL甲醇溶解，经过孔径为0.45μm有机微孔滤膜过滤，制成干样的待测样品；
(2)将步骤(1)得到的待测样品放入超高效液相色谱仪和质谱仪进行测定，液相色谱和质谱的条件如下：
枸杞代谢物质液相色谱条件：
色谱柱，流动相A相-0.1％甲酸水溶液；
流动相B相-甲醇，流速：0.5mL·min-1，进样量：5μL，柱温：36℃，DAD检测波长：370,280,254,230,210nm；
流动相A与流动相B的梯度洗脱比例体积分数为：0min 5％B，60min 100％B，70min100％B；
枸杞代谢物质质谱条件电喷雾离子源(ESI)，正离子模式(100-3200m/z)，雾化器压力：50psi，
干燥气流速(Drying Gas Flow)：10mL·min-1，干燥气温度(Drying Gas Temp)：350℃，毛细管电压(Capillary Voltage)：4000V，碎裂(Fragmentor)电压：170V，MS/MS碰撞能量(Collision Energy)：30V。
(3)通过质谱中分子离子峰和碎片离子峰的分子量进行匹配；
(4)结合紫外吸收光谱特征，对照标准值，鉴定色谱峰的主要化学成分。
进一步地，步骤(4)中的主要化学成分包括甾体生物碱类物质。
进一步地，步骤(4)中的主要化学成分包括黄酮类物质。
上面对本发明的实施方式做了详细说明。但是本发明并不限于上述实施方式，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。
Claims (3)
1.一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,其特征在于，包括以下步骤：
(1)、枸杞样品制备：
(11)取野生红果苦味枸杞成熟果实，加液氮冷冻后置真空冷冻干燥器干燥，研成细粉，
(12)、取0.5mg步骤(1)得到的细粉，加1.5mL甲醇后超声提取，离心，取上清液，合并上清液，氮气吹干，加0.5mL甲醇溶解，经过孔径为0.45μm有机微孔滤膜过滤，制成干样的待测样品；
(2)将步骤(1)得到的待测样品放入超高效液相色谱仪和质谱仪进行测定，液相色谱和质谱的条件如下：
枸杞代谢物质液相色谱条件：
色谱柱，流动相A相-0.1％甲酸水溶液；
流动相B相-甲醇，流速：0.5mL·min-1，进样量：5μL，柱温：36℃，DAD检测波长：370,280,254,230,210nm；
流动相A与流动相B的梯度洗脱比例体积分数为：0min 5％B，60min 100％B，70min100％B；
枸杞代谢物质质谱条件电喷雾离子源，正离子模式，雾化器压力：50psi，
干燥气流速：10mL·min-1，干燥气温度：350℃，毛细管电压：4000V，碎裂电压：170V，MS/MS碰撞能量：30V；
(3)通过质谱中分子离子峰和碎片离子峰的分子量进行匹配；
(4)结合紫外吸收光谱特征，对照标准值，鉴定色谱峰的主要化学成分。
2.如权利要求1所述的一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,其特征在于，步骤(4)中的主要化学成分包括甾体生物碱类物质。
3.如权利要求1所述的一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法,其特征在于，步骤(4)中的主要化学成分包括黄酮类物质。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110301769.7A CN113063867A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | 一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110301769.7A CN113063867A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | 一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113063867A true CN113063867A (zh) | 2021-07-02 |
Family
ID=76563271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110301769.7A Pending CN113063867A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | 一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113063867A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117871740A (zh) * | 2024-03-11 | 2024-04-12 | 炉霍雪域俄色有限责任公司 | 俄色果原浆液相色谱品质检测方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016063121A1 (zh) * | 2014-10-22 | 2016-04-28 | 可口可乐公司 | 制备具有不同味道的茶叶提取物的方法 |
-
2021
- 2021-03-22 CN CN202110301769.7A patent/CN113063867A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016063121A1 (zh) * | 2014-10-22 | 2016-04-28 | 可口可乐公司 | 制备具有不同味道的茶叶提取物的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| XIAO XIAO等: "Comparative Study of the Chemical Constituents and Bioactivities of the Extracts from Fruits, Leaves and Root Barks of Lycium barbarum", 《MOLECULES》 * |
| ZHIGANG SHI等: "Impact of Nitrogen Fertilizer Levels on Metabolite Profiling of the Lycium barbarum L. Fruit", 《MOLECULES》 * |
| 袁海静等: "宁夏野生苦味枸杞化学成分检测", 《现代农业科技》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117871740A (zh) * | 2024-03-11 | 2024-04-12 | 炉霍雪域俄色有限责任公司 | 俄色果原浆液相色谱品质检测方法 |
| CN117871740B (zh) * | 2024-03-11 | 2024-05-10 | 炉霍雪域俄色有限责任公司 | 俄色果原浆液相色谱品质检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Identification and differentiation of Panax ginseng, Panax quinquefolium, and Panax notoginseng by monitoring multiple diagnostic chemical markers | |
| CN107011308B (zh) | 从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法 | |
| Xie et al. | Chemical fingerprint and simultaneous determination of flavonoids in Flos Sophorae Immaturus by HPLC-DAD and HPLC-DAD-ESI-MS/MS combined with chemometrics analysis | |
| CN110455964B (zh) | 裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法 | |
| Shi et al. | A rapid protocol to distinguish between Citri Exocarpium Rubrum and Citri Reticulatae Pericarpium based on the characteristic fingerprint and UHPLC-Q-TOF MS methods | |
| CN113759003B (zh) | 一种基于uplc指纹图谱和化学计量法的甘草产地判别方法 | |
| Shen et al. | DART-MS: a new research tool for herbal medicine analysis | |
| CN113063867A (zh) | 一种野生苦味枸杞苦味代谢物质检测方法 | |
| CN109917066B (zh) | 一种基于uplc-qtof-ms检测伸筋草生物碱成分的方法 | |
| CN112114079B (zh) | 一种同时检测使君子中9种化学成分的方法 | |
| CN102274283B (zh) | 丹参有效部位的制备方法 | |
| CN108195949B (zh) | 一种鉴别冬虫夏草和冬虫夏草伪品的方法 | |
| CN107607654B (zh) | 一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法 | |
| CN112229931B (zh) | 一种基于茯茶代谢组学的黑毛茯茶与杜仲茯茶的区别方法 | |
| Jin et al. | Chemical profiling and total quality assessment of Isodon japonica using data-independent acquisition mode combined with superimposed multiple product ion UHPLC-Q-TOF-MS and chemometric analysis | |
| CN106526043A (zh) | 一种检测三叶青叶中多种化学成分的rrlc‑q‑tof‑ms方法 | |
| CN110824075A (zh) | 葡萄香气糖苷的提取纯化方法及其建库鉴定量化方法 | |
| CN112697931A (zh) | 三叶豆苷作为胡枝子蜜特征性标志物的应用 | |
| Wong et al. | Rapid differentiation of Xihuangcao from the three Isodon species by UPLC-ESI-QTOF-MS/MS and chemometrics analysis | |
| CN111228407A (zh) | 含有总菲类化合物的铁皮石斛提取物及其制备方法与应用 | |
| CN108659088A (zh) | 一种利用黑曲霉分离提取胆甾-3,5-二烯-7-酮的方法 | |
| CN112147254B (zh) | 利用UPC2-PDA-Q-Tof/MS快速同时测定枸杞子酒中35种有效成分的方法 | |
| Zhang et al. | Analysis of flavonoids in Rhododendron pulchrum flowers by HPLC-MS/MS. | |
| CN116818918B (zh) | 粗壮女贞的指纹图谱构建方法与高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法及其应用 | |
| CN112147252B (zh) | 一种三七酒中39种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210702 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |