CN112410355B - 一种酰基辅酶a氧化酶2基因rkacox2及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；该基因是从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235中分离得到，将该基因转入到红冬孢酵母YM25235中，实验结果显示RKACOX2基因的过表达会引起细胞内这个基因的转录水平在一定程度上的提高，同时RKACOX2基因的过表达能够促进总类胡萝卜素以及类胡萝卜素各组分的合成；本发明通过基因工程手段对微生物进行改造，可提高微生物类胡萝卜素的产量，为大规模商业化生产类胡萝卜素奠定基础。

Description

一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域和遗传工程领域，涉及一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2及其应用；具体涉及从酵母---红冬孢酵母（Rhodosporidiumkratochvilovae）YM25235中克隆该基因，将其与载体连接后转入到酵母细胞中，提高该基因的表达水平并最终促进类胡萝卜素的合成。

背景技术

类胡萝卜素（Carotenoid）是以类异戊二烯为基本单元构成的类萜化合物及其衍生物的总称。迄今为止，人类在自然界已发现超过600种天然类胡萝卜素；研究表明，大部分类胡萝卜素是含有四十个碳的化合物，其主链由4个异戊二烯单位构成，根据构成分子结构的元素不同分为两大类：分子结构中仅含有碳氢两种元素，例如β-胡萝卜素、番茄红素等为第一类，称之为胡萝卜素家族；分子结构中除了碳氢两种元素外，还含有一个或者多个氧原子构成羟基、甲氧基、羧基和环氧化合物等，例如虾青素、叶黄素、玉米黄质和斑鳌黄素等为第二类，称之为叶黄素家族。

类胡萝卜素具有多种生理功能，目前已证实类胡萝卜素具有预防癌症、延缓癌变进程、调节细胞生长以及抗氧化等功能。类胡萝卜素分子中存在大量的双键，能够淬灭单线态氧，清除自由基，增强人体对疾病的抵抗力、促进细胞间联接交流、减少慢性疾病的发生和延缓衰老；然而人体自身不能合成类胡萝卜素，只能通过外源摄取。因此，类胡萝卜素在医药、保健、食品等领域受到极大关注。

此外，类胡萝卜素作为一种饲料添加剂也有着广泛应用。研究表明在动物饲料中添加一定量的类胡萝卜素，有利于改善动物体色和羽毛颜色，增加观赏性；也有利于提高动物的生产性能、机体免疫力、繁殖效率等，对增加养殖业的经济效益具有一定的推动作用。

常见的类胡萝卜素生产工艺有微生物合成法、植物提取法和化学合成法。植物提取法工艺复杂，生产成本高。同时，植物提取法的发展也受多种因素（地域、气候和运输条件等）的限制，规模化生产仍然存在较大难度。化学合成法生产能力较强，相对植物提取法生产成本也较低。但因合成产物活性低，产品一般有溶剂和原料残留，可能存在安全性问题，因此使用上受到一定限制；并且化学合成的类胡萝卜素的生理功能较天然类胡萝卜素差，不易被人体吸收；生物合成法提取类胡萝卜素是目前最具发展潜力的一种提取方法。微生物发酵生产类胡萝卜素只需要低成本天然底物作为碳源，并且工艺简单、生产效率高、生物活性与天然植物提取物一致。此外，微生物发酵生产类胡萝卜素不受地域、气候等环境因素影响。

发明内容

本发明目的是提供一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2，该基因是从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235中分离得到；该基因核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或该核苷酸序列的片段，或与SEQ ID NO:1互补的核苷酸序列，该基因序列长为2220bp（碱基），该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的多肽或其片段。

本发明另一目的是提供一种含有酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2的重组表达载体，是将SEQ ID NO:1所示基因直接与不同表达载体（质粒、病毒或运载体）连接构建重组载体；可用本领域的技术人员熟知的方法来构建含酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2的核苷酸序列和合适的转录/翻译调控元件的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2的核苷酸序列可有效连接到表达载体的恰当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体的PL启动子；真核启动子包括CMV早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其它一些已知的可控制基因在原核细胞或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子等。在载体中***增强子序列将会使其在高等真核细胞中的转录得到增强。增强子是DNA表达的顺式作用因子，通常大约有10-300bp，作用于启动子以增强基因的转录，如腺病毒增强子。

本发明另一目的是提供一种含有酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2或上述重组表达载体的宿主细胞。

本发明另一目的是将上述酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2应用促进微生物生产类胡萝卜素中的应用。

所述酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2是红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235脂肪酸代谢过程中的重要基因，其编码的酶负责支链脂肪酸的降解，能够调控脂肪酸代谢，进而影响红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235菌株类胡萝卜素的合成。

所述红冬孢酵母(Rhodosporidium kratochvilovae) YM25235具有生产周期短、遗传稳定、生产安全等优点。

本发明从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235的总RNA基因中分离得到酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2，该基因全长2220bp；将该基因转入到红冬孢酵母YM25235中，实验结果显示RKACOX2基因的过表达会引起细胞内这个基因的转录水平在一定程度上的提高，说明外源基因在菌体内发生转录；RKACOX2基因的过表达能够促进总类胡萝卜素以及类胡萝卜素各组分的合成；本研究结果为揭示微生物提高类胡萝卜素产量机制提供了参考，将有助于通过基因工程手段对其进行改造来提高类胡萝卜素含量，对类胡萝卜素的工业化生产提供有良好的应用前景和经济效益，为大规模商业化生产类胡萝卜素奠定基础。

附图说明

图1为本发明的红冬孢酵母YM25235的RKACOX2基因PCR扩增图；

图2为重组质粒pRHRKACOX2的质粒图谱；

图3为重组质粒pRHRKACOX2转化YM25235菌株的PCR鉴定，图中1. DNA 分子标量DL5000；2.以YM25235基因组为模版，引物RKACOX2-F和RKACOX2-R 的PCR产物；3.以质粒pRHRKACOX2为模版，引物RKACOX2-F和RKACOX2-R 的PCR产物；4.以YM25235/pRHRKACOX2菌株基因组为模版，引物RKACOX2-F和RKACOX2-R 的PCR产物；

图4为过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2与对照菌株YM25235/pRH2034的总类胡萝卜素含量比较；

图5为过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2与对照菌株YM25235/pRH2034的类胡萝卜素各组分含量比较；

图6为过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2与对照菌株YM25235/pRH2034类胡萝卜素合成相关基因相对定量分析。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容，实施例中使用的试剂和方法，如无特殊说明，均采用常规试剂和使用常规方法。

实施例1：从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235中分离酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2的核苷酸序列及其过表达载体pRHRKACOX2的构建

采用生工生物工程（上海）股份有限公司的UNlQ-10 柱式 Trizol 总RNA抽提试剂盒（产品编号: SK1321）提红冬孢酵母YM25235的总RNA ，然后按照TaKaRa公司试剂盒PrimeScript ®RT reagent Kit With gDNA Eraser(Perfect Real Time)进行反转录合成cDNA，取0.5μL为模板进行聚合酶链式反应，根据转录组测序中发现的RKACOX2序列，设计特异性引物RKACOX2-F和RKACOX2-R（引物1和引物2），以上述得到的cDNA模板在PCR仪（BIOER公司）上进行PCR扩增，反应所用引物、组分和扩增条件如下：

，（双下划线部分为同源臂）；

RKACOX2-R：

，（下划线部分为EcoR V位点，双下划线部分为同源臂）；

扩增条件：95℃预变性5 min，再用95℃变性30 s，62℃退火30s，72℃延伸2min30s，进行30个循环，最后72℃彻底延伸10min，反应完后取产物2μL，然后在浓度为1%的琼脂糖凝胶中进行电泳分析，结果如图1所示，扩增得到大小约2200bp的片段，用乙醇沉淀法回收，使用无缝克隆试剂盒（Vazyme ClonExpress II One Step Cloning Kit，南京诺唯赞生物科技有限公司）把回收片段连接到载体pRH2034中，获得重组载体；将重组载体转化到用CaCl₂法处理的大肠杆菌DH5α，在含壮观霉素（100 µg/mL）的LB固体平板上过夜培养，挑取平板上生长的白色菌落，通过菌落PCR验证阳性克隆；将验证阳性的克隆子接入LB液体培养基（含100 µg/mL壮观霉素）中过夜培养，提取质粒（OMEGA Plasmid Mini Kit I，美国OMEGA公司）测序（昆明擎科生物科技有限公司），结果显示所扩增得到的片段大小为2220bp，命名为RKACOX2，序列组成如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；重组载体即为pRHRKACOX2（图2）。

实施例2：RKACOX2基因与红冬孢酵母中类胡萝卜素合成关系的分析

1、转化红冬孢酵母YM25235

利用PEG介导的原生质体法将重组载体pRHRKACOX2转化至红冬孢酵母YM25235中，以含潮霉素B（Hygromycin B）终浓度为150 µg/mL的 YPD 培养基筛选转化子，然后按照上海生工生物工程股份有限公司DNA 提取试剂盒说明书中步骤提取酵母转化子的基因组DNA，后进行PCR验证，结果如图3所示。

2、RKACOX2基因与红冬孢酵母总类胡萝卜素含量变化的分析

将含pRHRKACOX2的过表达菌株在28℃条件下培养，提取类胡萝卜素，并以转入空质粒pRH2034的红冬孢酵母菌株为对照，利用紫外-可见分光光度计在445nm下测定总类胡萝卜素的含量（mg/g干菌体），结果如图4所示；由图可看出，其中过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2的总类胡萝卜素合成量比含空质粒pRH2034的对照菌株有明显提高，含空质粒pRH2034的对照菌株的类胡萝卜素合成量为5.68mg/g，而过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2类胡萝卜素合成量为7.59mg/g，即过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2类胡萝卜素合成量是对照菌的1.34倍，结果表明RKACOX2基因能够促进总类胡萝卜素的合成。

3、RKACOX2基因与红冬孢酵母类胡萝卜素各组分含量变化的分析

将含pRHRKACOX2的过表达菌株在28℃条件下培养168h后，提取类胡萝卜素，并以原始的红冬孢酵母YM25235菌株为对照，进行高效液相色谱分析，结果如图5所示，由图可看出，过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2的类胡萝卜素各组分含量对比原始菌株均有不同程度的提高；其中，过表达菌株YM25235/pRHRKACOX2 红酵母红素（torularhodin）的含量提升了6.5%，β-胡萝卜素（β-carotene）的含量提升了60.7%，圆酵母素（torulene）的含量提升了164.6%，γ-胡萝卜素（γ-carotene）的含量提升了176.4%；结果表明RKACOX2基因能够促进类胡萝卜素各组分的合成。

实施例3：RKACOX2基因与红冬孢酵母中类胡萝卜素合成相关基因的关系分析

将转基因菌株YM25235/pRHRKACOX2及对照菌株YM25235/pRH2304在30℃、220rpm恒温摇床上振荡培养120h后采用生工生物工程（上海）股份有限公司的UNlQ-10 柱式Trizol 总RNA抽提试剂盒（产品编号: SK1321）提红冬孢酵母YM25235的总RNA ，然后按照TaKaRa公司试剂盒PrimeScript ®RT reagent Kit With gDNA Eraser(Perfect RealTime)进行反转录合成cDNA，对转基因菌株YM25235/pRHRKACOX2及对照菌株YM25235/pRH2304类胡萝卜素合成相关基因RkCrtI、RkCrtYB的转录水平进行分析。以红冬孢酵母YM25235的5.8S rRNA作为内参基因，以类胡萝卜素合成相关基因RkCrtI、RkCrtYB作为靶基因，以对照菌株YM25235/pRH2304相应基因的转录水平作为对照，其2-△△CT值为1；相对定量（Bestar® SybrGreen qPCR MasterMix 试剂盒，德国 DBI 公司）分析结果如图6所示，由图可知，转基因菌株YM25235/pRHRKACOX2 RKCrtYB基因的转录水平是对照菌株YM25235/pRH2304 RKCrtYB基因转录水平的1.9倍。转基因菌株YM25235/pRHRKACOX2 RKCrtI基因的转录水平是对照菌株YM25235/pRH2304 RKCrtI基因转录水平的10.1倍。这些结果表明，RKACOX2基因在红冬孢酵母YM25235中过表达会引起细胞内与类胡萝卜素合成相关基因mRNA转录水平的提高。

序列表

<110> 昆明理工大学

<120> 一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2220

<212> DNA

<213> 红冬孢酵母YM25235(Rhodosporidium kratochvilovae YM25235)

<400> 1

atgccgacgc ccgtcgatgc ccagccccgc ccgccagccc cgcgcgagac gatggccgca 60

gagcgtgcga gcgcagaggg cgcgttcgac ctcgagcgga tgtgcaacgc catgggcgga 120

ggcgagtaca acgtcaagct gaagcgcaag ttcatgttcg agctcgagcg cgacccgctc 180

ttcaagctct ccgacattca cgacctcacc aaggccgaga ttcgcgagcg gaccatggcc 240

aagtttgcgt cgatggtcca ctacgtcacg aacgagccta tcgcccagtt ccagcagcgc 300

atgaacgtcg tttctaccgc cgacccggct ttctggacgc gatatggagt gcactatggc 360

ctgttcctcg gcgcgctccg ctctggcgca acgcccaacc agatgagcta ctggatgtcg 420

cgcggcgtca tcaccctgca gggcatggtc ggctgcttcg cgatgactga gctcgctcac 480

ggttcgaacg tcgcgggcct cgagacgacc gcaaccttcg acgagacggc ggaccagttc 540

gtcatccaca cgccgtccgt ctcggcgacc aagtggtgga tcggcggcgc ggcgcactcg 600

gcgacgcaca gcgccgtctt tgcccgcctt atcgtcaagg ggatggacta cgggaccaag 660

acgttcgtcg tcccgcttcg caaccccaag acgtacgagc tcctgcccgg catcgcaatc 720

ggcgacattg gcaagaagat ggggcgcgac ggcatcgaca acggctggat ccagttcacc 780

aacgtccgca tcccgcgcgc atacatgctc atgaagcaca ccaaggtgac gcgcgagggc 840

gaggtgcgcg agccgccgct cgcgcagctg acatacggcg cgctgctgca aggccgcacg 900

gcgatggtcg ccgacgcggc gtcgacggcg aagaaggcgc tgacgatcgc gctccggtac 960

gcggcggtgc ggcggcagtt caagacgggc gacaacgcgc tcgagacgca gctcctcgac 1020

tacccgatcc accagcgccg gctgctcccc ctcctcgcgc aggccgtcgc gatgggtttc 1080

acgtcgttcc gcatgacggc gctcttcgag gagatgagcg aggagctcga gtcgctcggg 1140

agcgactcgg acgccgacga gaccaagtcg gtcctcgaga agctcaagga gacgcacgcg 1200

acgagcgcag gcctcaaggc cttctgcacg tggaacgcgc tcgagacgat cgagaagtgc 1260

cgtgcgagcc tcggtgggca cggctactcg gcgtactcgg cgctgccgag catgtacaac 1320

gaccaggccg tccagtgcac ctgggagggc gacaacacga tcctcacgct ccagtcgggt 1380

cgctcgctcg tctcgtccta cgccgacgcg gtcaagggcg cgaagctccc gggcgggacg 1440

gcgtacctca acgcgctccc ctccgtgctc acgacgtcct gcccgtcgga cgcggcgacg 1500

ctcgagctcg acacgctcca ggccgcgtgg gactgcgtct cggcgaacgt ggtcaagcag 1560

gcgcacgaca agttcgaggg cgcgctcaag agcggcgagg ccaagggccg cgaggaggcg 1620

ctcgagatgt gctcgcagga gcggttcatc gccgccaagg tgcacactgc cggctacctc 1680

ttccgcatgt tccgcgaggc gctcgtcgag ctcgccaaga ctgagccggc ggacaacggc 1740

gtcgtcgcga cgctggagca gatctgcacg ctgtacgggt gctgggcgat cgaggagaac 1800

gcgcagcact tcctcaagta ccggttcttc accccgagcc agatggacgc catcacggcc 1860

gaggtgacgc gcctgtgcgc cgtcctccgc aagtctgcgg tgctcctcac cgatagcttt 1920

gacctctcgg accacatcat caactcgccg ctcggacggt acgacggcga catctacaac 1980

cactactttg cgcacgtcaa ggccgcgaac ccgcacgagc cggtcgcgcc gtactttgcg 2040

cgggtgatca agccgctgat tgagcgcgag gacctctcgt tcgacgacgc ggacgagatc 2100

gacctcgatg ccgagctgca ggagctcgag gaggaggagg cggacgacga agaggtcgag 2160

gacgaggcgg acaagacggc gcaggccgag aaggaactcg agaagccggc gaaggagtag 2220

<210> 2

<211> 739

<212> PRT

<213> 红冬孢酵母YM25235(Rhodosporidium kratochvilovae YM25235)

<400> 2

Met Pro Thr Pro Val Asp Ala Gln Pro Arg Pro Pro Ala Pro Arg Glu

1 5 10 15

Thr Met Ala Ala Glu Arg Ala Ser Ala Glu Gly Ala Phe Asp Leu Glu

20 25 30

Arg Met Cys Asn Ala Met Gly Gly Gly Glu Tyr Asn Val Lys Leu Lys

35 40 45

Arg Lys Phe Met Phe Glu Leu Glu Arg Asp Pro Leu Phe Lys Leu Ser

50 55 60

Asp Ile His Asp Leu Thr Lys Ala Glu Ile Arg Glu Arg Thr Met Ala

65 70 75 80

Lys Phe Ala Ser Met Val His Tyr Val Thr Asn Glu Pro Ile Ala Gln

85 90 95

Phe Gln Gln Arg Met Asn Val Val Ser Thr Ala Asp Pro Ala Phe Trp

100 105 110

Thr Arg Tyr Gly Val His Tyr Gly Leu Phe Leu Gly Ala Leu Arg Ser

115 120 125

Gly Ala Thr Pro Asn Gln Met Ser Tyr Trp Met Ser Arg Gly Val Ile

130 135 140

Thr Leu Gln Gly Met Val Gly Cys Phe Ala Met Thr Glu Leu Ala His

145 150 155 160

Gly Ser Asn Val Ala Gly Leu Glu Thr Thr Ala Thr Phe Asp Glu Thr

165 170 175

Ala Asp Gln Phe Val Ile His Thr Pro Ser Val Ser Ala Thr Lys Trp

180 185 190

Trp Ile Gly Gly Ala Ala His Ser Ala Thr His Ser Ala Val Phe Ala

195 200 205

Arg Leu Ile Val Lys Gly Met Asp Tyr Gly Thr Lys Thr Phe Val Val

210 215 220

Pro Leu Arg Asn Pro Lys Thr Tyr Glu Leu Leu Pro Gly Ile Ala Ile

225 230 235 240

Gly Asp Ile Gly Lys Lys Met Gly Arg Asp Gly Ile Asp Asn Gly Trp

245 250 255

Ile Gln Phe Thr Asn Val Arg Ile Pro Arg Ala Tyr Met Leu Met Lys

260 265 270

His Thr Lys Val Thr Arg Glu Gly Glu Val Arg Glu Pro Pro Leu Ala

275 280 285

Gln Leu Thr Tyr Gly Ala Leu Leu Gln Gly Arg Thr Ala Met Val Ala

290 295 300

Asp Ala Ala Ser Thr Ala Lys Lys Ala Leu Thr Ile Ala Leu Arg Tyr

305 310 315 320

Ala Ala Val Arg Arg Gln Phe Lys Thr Gly Asp Asn Ala Leu Glu Thr

325 330 335

Gln Leu Leu Asp Tyr Pro Ile His Gln Arg Arg Leu Leu Pro Leu Leu

340 345 350

Ala Gln Ala Val Ala Met Gly Phe Thr Ser Phe Arg Met Thr Ala Leu

355 360 365

Phe Glu Glu Met Ser Glu Glu Leu Glu Ser Leu Gly Ser Asp Ser Asp

370 375 380

Ala Asp Glu Thr Lys Ser Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu Thr His Ala

385 390 395 400

Thr Ser Ala Gly Leu Lys Ala Phe Cys Thr Trp Asn Ala Leu Glu Thr

405 410 415

Ile Glu Lys Cys Arg Ala Ser Leu Gly Gly His Gly Tyr Ser Ala Tyr

420 425 430

Ser Ala Leu Pro Ser Met Tyr Asn Asp Gln Ala Val Gln Cys Thr Trp

435 440 445

Glu Gly Asp Asn Thr Ile Leu Thr Leu Gln Ser Gly Arg Ser Leu Val

450 455 460

Ser Ser Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly Ala Lys Leu Pro Gly Gly Thr

465 470 475 480

Ala Tyr Leu Asn Ala Leu Pro Ser Val Leu Thr Thr Ser Cys Pro Ser

485 490 495

Asp Ala Ala Thr Leu Glu Leu Asp Thr Leu Gln Ala Ala Trp Asp Cys

500 505 510

Val Ser Ala Asn Val Val Lys Gln Ala His Asp Lys Phe Glu Gly Ala

515 520 525

Leu Lys Ser Gly Glu Ala Lys Gly Arg Glu Glu Ala Leu Glu Met Cys

530 535 540

Ser Gln Glu Arg Phe Ile Ala Ala Lys Val His Thr Ala Gly Tyr Leu

545 550 555 560

Phe Arg Met Phe Arg Glu Ala Leu Val Glu Leu Ala Lys Thr Glu Pro

565 570 575

Ala Asp Asn Gly Val Val Ala Thr Leu Glu Gln Ile Cys Thr Leu Tyr

580 585 590

Gly Cys Trp Ala Ile Glu Glu Asn Ala Gln His Phe Leu Lys Tyr Arg

595 600 605

Phe Phe Thr Pro Ser Gln Met Asp Ala Ile Thr Ala Glu Val Thr Arg

610 615 620

Leu Cys Ala Val Leu Arg Lys Ser Ala Val Leu Leu Thr Asp Ser Phe

625 630 635 640

Asp Leu Ser Asp His Ile Ile Asn Ser Pro Leu Gly Arg Tyr Asp Gly

645 650 655

Asp Ile Tyr Asn His Tyr Phe Ala His Val Lys Ala Ala Asn Pro His

660 665 670

Glu Pro Val Ala Pro Tyr Phe Ala Arg Val Ile Lys Pro Leu Ile Glu

675 680 685

Arg Glu Asp Leu Ser Phe Asp Asp Ala Asp Glu Ile Asp Leu Asp Ala

690 695 700

Glu Leu Gln Glu Leu Glu Glu Glu Glu Ala Asp Asp Glu Glu Val Glu

705 710 715 720

Asp Glu Ala Asp Lys Thr Ala Gln Ala Glu Lys Glu Leu Glu Lys Pro

725 730 735

Ala Lys Glu

<210> 3

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 3

accagatcac tcaccatggc gatgccgacg cccgtcgatg 40

<210> 4

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 4

ccggtcggca tctacgatat cctactcctt cgccggctt 39

Claims (2)

1.一种酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述的酰基辅酶A氧化酶2基因RKACOX2在促进红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）生产类胡萝卜素中的应用。

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