CN112285263A - 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法 - Google Patents

一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112285263A
CN112285263A CN202011149572.8A CN202011149572A CN112285263A CN 112285263 A CN112285263 A CN 112285263A CN 202011149572 A CN202011149572 A CN 202011149572A CN 112285263 A CN112285263 A CN 112285263A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
standard
solution
methanol
organic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011149572.8A
Other languages
English (en)
Inventor
汤晓东
苏燕
陈晓水
蒋佳磊
张丽娜
杨君
朱书秀
陆明华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Tobacco Zhejiang Industrial Co Ltd
Original Assignee
China Tobacco Zhejiang Industrial Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Tobacco Zhejiang Industrial Co Ltd filed Critical China Tobacco Zhejiang Industrial Co Ltd
Priority to CN202011149572.8A priority Critical patent/CN112285263A/zh
Publication of CN112285263A publication Critical patent/CN112285263A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明提供一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法，具体说是一种将烟用添加剂样品经一定浓度硫酸甲醇溶液衍生化后，经二氯甲烷萃取、离心分离，取下层清液过膜，利用GC/MS选择离子模式进行测定的方法。

Description

一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法
技术领域
本发明属于烟用添加剂(香精和料液)中有机酸分析检测技术领域，主要涉及烟用添加剂(香精和料液)中非挥发性有机酸的测定技术，具体说是一种将烟用添加剂样品经一定浓度硫酸甲醇溶液衍生化后，经二氯甲烷萃取、离心分离，取下层清液过膜，利用GC/MS选择离子模式进行测定的方法。
背景技术
烟用香精、料液是一类重要的烟用添加剂，卷烟企业通过添加不同的香精、料液以改善卷烟的吸味。烟用香精、料液成分复杂，主要有醇类、酯类和酸类等物质。各类物质对烟草香气产生不同的影响。有机酸分为挥发性有机酸、半挥发性有机酸和非挥发性有机酸。非挥发性有机酸是影响烟草吸食品质的主要化学成分之一，其在卷烟燃烧过程中分解产生的酸性片段可调节烟气中质子化和游离态烟碱的比例，具有平衡烟气的酸碱度、减轻烤烟的刺激性、增加烟气浓度的作用，对烤烟的抽吸品质具有重要的影响。因此烟用香精和料液中非挥发性有机酸的测定对其品质控制具有重要作用。
目前烟用香精香料中有机酸的测定方法鲜见报道。王军等在论文《烟用香精中非挥发性有机酸成分剖析》中采用10％硫酸甲醇溶液于80℃条件下加热回流样品，使其中的多元酸与甲醇充分反应生成相应的甲酯，然后用二氯甲烷进行萃取，萃取液经无水硫酸钠干燥后，通过气相色谱检测分析。经过前期研究发现，该方法存在以下几个问题：1.对于部分香精和料液而言，采用80℃加热回流的方式衍生化处理后，经二氯甲烷萃取会出现分层不明显或者难以分层的现象，不利于后期的仪器分析检测；2.由于香精和料液基体成分复杂多样，采用气相色谱-火焰离子化检测器进行分析，有时候会出现“假阳性”的数据，数据的准确性有待考证。3.不同香精和料液中有机酸含量差别很大，部分样品差异达到上百乃至千倍，单一标准曲线的线性范围难以满足准确测定的需求。4.对于大批量的样品分析，加热回流衍生化的方法效率太低。因此开发一种简便的、灵敏的、适合于批量分析的且能够准确测定烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法对于其品质控制具有重要的实际价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种适用于烟用香精和料液中非挥发性有机酸定量分析的气相色谱质谱方法，克服现有检测技术分析测定时存在的干扰因素多、效率低、准确度和灵敏度不足等缺点。该方法操作简便、重复性好、适合于批量分析且能够准确分析检测香精和料液中非挥发性有机酸含量，对于烟用香精和料液的品质控制具有重要的实际价值。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
a、内标溶液的配制：配制己二酸浓度为10mg/mL的甲醇溶液；
b、称取样品：称取1.0g香精或料液于50mL离心管中；
c、样品衍生化和萃取：准确加入50μL己二酸内标溶液和5mL10％硫酸甲醇溶液于离心管中，涡旋振荡后，静置24h；然后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心；
d、过膜：取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
e、准备标准工作溶液：称取一定质量的不同有机酸标准品，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解配制标准储备液，然后继续用甲醇稀释，最终配制具有不同浓度梯度的有机酸标准工作溶液；
f、标准工作溶液衍生化和萃取：准确移取一定体积的具有不同浓度梯度的有机酸标准工作溶液，氮气吹干后，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液，涡旋振荡后，静置24h；反应后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
g、有机酸测定结果的计算：以内标法进行各有机酸目标物的定量分析，即以各目标物定量离子峰面积与内标峰定量离子峰面积之比为纵坐标，各目标物浓度与内标浓度之比为横坐标，得到线性回归方程；对提取后的样品进行测定，测得检出目标物定量离子峰面积和内标的定量离子峰面积比，代入线性回归方程，求得样品中各有机酸的含量。
在一些实施方式中，所述步骤e和f具体包括如下步骤：
步骤1)分别准确移取100mg草酸、50mg丙二酸、50mg琥珀酸、400mg苹果酸、50mg棕榈酸、100mg柠檬酸、50mg硬脂酸、300mg油酸、300mg亚油酸和100mg亚麻酸于10mL容量瓶中，精确至0.1mg，用甲醇定容，配制成10种有机酸的单一标准品储备液；在0℃～4℃条件下密封避光贮存；
步骤2)分别准确移取100μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液1；分别准确移取2000μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液2；
步骤3)标准工作曲线1：分别准确移取10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL混合标准溶液1于50mL离心试管中，氮气吹干后，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液(10mg/mL)，振荡摇匀后，静置24h。反应后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心n，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
标准工作曲线2：分别准确移取500μL混合标准溶液1、100μL、250μL、500μL和1000μL混合标准溶液2于50mL离心试管中，其余处理过程同标准工作曲线1。
在一些实施方式中，在GC/MS测定时，采用的色谱条件：HP-INNOWAX色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美国安捷伦公司)；进样口温度：240℃；分流比：10：1；载气：He；流量：1.0mL/min；升温程序：起始温度50℃，保持2min，以4℃/min升温至240℃，保持15min。
本发明的方法操作简便，并能提供更准确更稳定的测定结果。
与现有技术相比，本发明方法具有如下有益效果：
1.本发明方法对比分析了二氯甲烷和正己烷两种萃取剂的萃取效果：采用正己烷作为萃取剂，分层良好；采用二氯甲烷萃取会发生乳化现象，需要加水或盐才能良好分层，但是萃取效率较正己烷显著提高，即测定灵敏度得到了显著提高。
二氯甲烷作为萃取剂萃取某些加热回流方式衍生化的样品时，会出现分层效果不理想或不能分层的现象(即使在加水或盐的情况下)，因此加热回流的衍生化方法对某些香精和料液中有机酸的分析效果不佳。本发明方法样品前处理采用室温下硫酸甲醇静置衍生化的方法，可以有效避免这种现象的产生，减少杂质对定量分析的干扰及仪器污染，有利于方法在香精和料液中推广和应用。
2.本发明方法采用HP-INNOWAX色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美国安捷伦公司)对样品进行分析，得到的色谱峰分析效果良好，能够实现10种有机酸的分析检测。
3.本发明方法采用了高灵敏度和强抗干扰能力的GC-MS进行检测，并以选择离子监视方式(SIM)扫描，因此具有操作准确、灵敏度高及重复性好的优点，有效规避“假阳性”，使有机酸的定性定量更加准确，同时提高了灵敏度。
4.发明方法建立了两条标准曲线，增加了线性范围，使不同香精和料液中有机酸含量的定量分析更加准确，并可以减少部分因超出线性范围带来的重复分析的工作。
5.相较加热回流的方式，本发明方法虽然衍生化时间较长，但操作简单方便，很大程度上解放了操作人员，同时该方法更加适用于批量样品的分析检测，提高了效率。
6.本发明方法的检测限：以3倍信噪比(S/N＝3)计算检测限(LOD)，10倍信噪比(S/N＝10)计算定量限(LOQ)检测限，如图6所示。
7.本发明方法的重复性和加标回收率：在高、中、低3个不同浓度水平进行加标回收率实验，每个添加水平下平行测定6次，计算样品中各有机酸的回收率和RSD，结果见表5。可知，10种有机酸在不同浓度水平下的加标平均加标回收率在83.06％～110.29％之间，相对标准偏差在1.01％～6.50％之间，说明本发明方法的回收率高，重复性好。
附图说明
图1为前处理流程图；
图2为10种有机酸标准溶液的分离色谱图；
图3为HP-INNOWAX色谱柱对有机酸标准溶液的分离色谱图；
图4为不同温度下二氯甲烷萃取样品后的实物图片(a.室温；b.40℃；c.60℃；d.80℃)；
图5为实际样品的色谱图；
图6为10种有机酸的线性参数、检出限和定量限。
具体实施方式
本发明以下结合实例做进一步描述，但并不是限制本发明。
实施例1
1.仪器与试剂：
10种有机酸：草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、棕榈酸、柠檬酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸，内标：己二酸，均为标准品；甲醇、二氯甲烷为色谱纯；浓硫酸为分析纯；纯水，符合GB/T 6682中一级水的要求。
7890A/5977A型气质联用仪(GC/MS)；瑞士Mettler Toledo XP205电子天平(感量：0.0001g)；TBOYS涡旋振荡器；德国SIGMA 4-16K离心机。
2.样品处理与GC/MS分析：
请参阅图1，准确称取1.0g烟用香精香料样品，置于50mL离心试管中，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液(10mg/mL)，振荡摇匀后，静置24h。然后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以2000rpm涡旋振荡10min后，离心5min，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析。
3.准备标准工作溶液：
(1)内标溶液和单一标准品储备液
准确称取己二酸1000mg(精确至0.1mg)加入100ml容量瓶中，用甲醇定容，配制成浓度为10mg/mL的内标溶液。分别准确移取100mg草酸、50mg丙二酸、50mg琥珀酸、400mg苹果酸、50mg棕榈酸、100mg柠檬酸、50mg硬脂酸、300mg油酸、300mg亚油酸和100mg亚麻酸于10mL容量瓶中，精确至0.1mg，用甲醇定容，配制成10种有机酸的单一标准品储备液；在0℃～4℃条件下密封避光贮存。
(2)混合标准溶液
分别准确移取100μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液1；
分别准确移取2000μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液2。
(3)标准工作曲线
标准工作曲线1：分别准确移取10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL混合标准溶液1于50mL离心试管中，氮气吹干后，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液(10mg/mL)，振荡摇匀后，静置24h。反应后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以2000rpm涡旋振荡10min后，离心5min，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析。
标准工作曲线2：分别准确移取500μL混合标准溶液1、100μL、250μL、500μL和1000μL混合标准溶液2于50mL离心试管中，其余处理过程同标准工作曲线1。
典型标准曲线色谱图如图2(10种有机酸标准溶液的分离色谱图)所示。
4.条件筛选试验
4.1定性与定量分析
将有机酸的衍生物(有机酸甲酯化产物)进行GC-MS分析，采用NIST谱库检索并结合标样及目标物的特征离子进行定性(结果见表1)，采用特征离子和内标法进行定量。
在GC/MS测定时，采用的色谱条件：HP-INNOWAX色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美国安捷伦公司)；进样口温度：240℃；分流比：10：1；载气：He；流量：1.0mL/min；升温程序：起始温度50℃，保持2min，以4℃/min升温至240℃，保持15min。
MS条件：溶剂延迟5min；电子碰撞能量70eV；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度240℃。采用选择离子监视方式(SIM)扫描。各定量离子及定性离子如下表1所示
表1有机酸的保留时间及特征离子
Figure BDA0002740771290000051
注：*标记为内标
4.2色谱柱的选择
对于有机酸甲酯的定量分析，常用的色谱柱是DB-5MS和HP-INNOWAX色谱柱。本研究对比分析了这两种色谱柱对10种有机酸分离的效果。实验发现非极性的DB-5MS色谱柱能有效分离8种有机酸，但不能将油酸和亚麻酸分离；强极性的HP-INNOWAX色谱柱可以将10有机酸完全分离，且峰形尖锐、对称、无拖尾(图3)。因此选择HP-INNOWAX色谱柱用于分离10种有机酸。
4.3衍生化条件的选择
甲酯化反应的体系通常选BF3-甲醇、浓硫酸-甲醇或碱-甲醇，由于BF3-毒性较大，故研究考察浓硫酸-甲醇溶液和NaOH-甲醇溶液对脂肪酸甲酯化的影响。一般游离型和甘油三酯型的脂肪酸都可采用酸处理法，而碱催化甲酯化法不太适合游离型脂肪酸甲酯的制备。因此本文选择浓硫酸-甲醇体系对有机酸进行衍生化。有机酸定量分析是否准确，关键在于衍生化的完全程度及样品处理的准确性。本文以各有机酸衍生物峰面积与内标衍生物峰面积的比值定量，考察了衍生化温度、时间和衍生化试剂浓度对有机酸甲酯化程度的影响。
4.3.1衍生化温度的影响
取4份烟用香精样品，每份1g，各加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50L己二酸内标溶液(10mg.mL-1)，分别于室温，40℃、60℃、80℃水浴条件下衍生化2h，冰浴快速冷却至室温后，加入10mL水和5mL二氯甲烷进行萃取分析。图4为某些香精样品在不同温度下采用二氯甲烷萃取分层时出现的现象。由图4可见，部分香精样品在室温和40℃条件衍生后二氯甲烷萃取分层良好，而60℃和80℃条件衍生后二氯甲烷萃取出现了乳化现象，影响香精的成分分析定量的准确性。因此为了方法适用性更广，主要分析比对了室温和40℃条件下各有机酸的衍生化效率，结果见表2。结果表明：相较室温，除柠檬酸(三元酸)之外，大多数有机酸在40℃条件下的衍生化效率变化不大。因此考虑到易操作性和安全性，试验选择室温作为衍生化条件。
表2衍生化温度对有机酸衍生化效率*的影响％
Figure BDA0002740771290000061
注：*衍生化效率＝(各温度下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值/室温下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值)x100％。
4.3.2衍生化时间的影响
在室温条件下，考察了衍生化时间(1、5、9、15、18、21、24、27h)对各有机酸的衍生化效率的影响，结果见表3。随着衍生化时间的增加，各有机酸衍生化效率逐渐提高；衍生化时间为21h时，各有机酸已经基本衍生化完全；继续增加衍生化时间，各衍生化物质色谱峰基本保持稳定。为了确保衍生化完全，同时方便实验操作，试验选择衍生化时间为24h。
表3衍生化时间对有机酸衍生化效率*的影响％
Figure BDA0002740771290000062
Figure BDA0002740771290000071
注：*衍生化效率＝(各衍生化时间下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值/24h下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值)x100％。
4.3.3衍生化试剂浓度的选择
文献报道衍生化试剂浓度对脂肪酸甲酯化有极显著影响。在优化后的温度和时间条件下，对比2％、5％、10％、15％和20％硫酸甲醇溶液对各有机酸衍生化效率的影响，结果见表4。由表4可见，硫酸甲醇体积比对柠檬酸的衍生化效率影响最大，而体积比为10：90时，各有机酸甲酯化效果均较好。因此选择硫酸甲醇体积比为10：90作为衍生化条件。
表4浓硫酸-甲醇浓度对有机酸衍生化效率*的影响％
Figure BDA0002740771290000072
注：*衍生化效率＝(各浓硫酸-甲醇浓度下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值/10％浓硫酸-甲醇浓度下的衍生化产物峰面积与内标峰面积的比值)x100％。
4.3.4衍生化产物的稳定性
取一有机酸混合标准溶液按优化条件进行衍生化，进行GC/MS分析；进样后立即4℃冷藏，然后分别放置8、24、48、72h再进一次样，每次进样前取出，室温下放置30min。结果显示各有机酸衍生物的峰面积与内标衍生物峰面积的比值的RSD均小于5.75％。说明这些有机酸的甲酯化产物稳定，适合定量分析。
4.4方法学考察
4.4.1标准曲线、检出限和定量限
分别对配制的系列标准工作溶液按照优化后的衍生化条件进行衍生，并以目标化合物与内标峰的定量离子峰面积比对浓度比进行回归分析，得到各有机酸的线性回归方程及其相关系数。本文根据实际样品分析需要，建立了两条标准曲线。以3倍信噪比(S/N＝3)计算检测限(LOD)，10倍信噪比(S/N＝10)计算定量限(LOQ)检测限。由图6所示，10种有机酸在各自线性范围内线性关系良好(回归方程的R2均大于0.998)，10种有机酸的检出限和定量限分别在0.004～0.080mg.kg-1和0.013～0.267mg.kg-1之间，可以满足各自目标物的定量分析要求。
4.4.2方法的回收率和精密度
在高、中、低3个不同浓度水平进行加标回收率实验，每个添加水平下平行测定6次，计算样品中各有机酸的回收率和RSD，结果见表5，可知，10种有机酸在不同浓度水平下的加标回收率在83.06％～110.29％之间，相对标准偏差在1.01％～6.50％之间，说明本发明方法的回收率高，重复性好。
表5 10种有机酸的回收率和重复性(n＝6)
Figure BDA0002740771290000081
Figure BDA0002740771290000091
5.计算方法
将配制好的不同浓度的标准工作溶液注入GC/MS，以内标法进行各种有机酸的定量分析，即以各有机酸与内标的定量离子峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对提取后的样品进行测定，测得检出各有机酸与内标的定量离子峰面积比，代入标准曲线，求得料液A中的各有机酸的含量见表6；料液A色谱图如图6所示。
表6料液A中10种有机酸的检测结果(mg/kg)
Figure BDA0002740771290000092
实施例2
如实施例1所述，选择另一料液B，测得样品中10种有机酸的含量见表7。
表7料液B中10种有机酸的检测结果(mg/kg)
Figure BDA0002740771290000093
实施例3
如实施例1所述，选择另一香精A，测得样品中10种有机酸的含量见表7。
表7香精A中10种有机酸的检测结果(mg/kg)
Figure BDA0002740771290000094

Claims (3)

1.一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
a、内标溶液的配制：配制己二酸浓度为10mg/mL的甲醇溶液；
b、称取样品：称取1.0g香精或料液于50mL离心管中；
c、样品衍生化和萃取：准确加入50μL己二酸内标溶液和5mL10％硫酸甲醇溶液于离心管中，涡旋振荡后，静置24h；然后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心；
d、过膜：取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
e、准备标准工作溶液：称取一定质量的不同有机酸标准品，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解配制标准储备液，然后继续用甲醇稀释，最终配制具有不同浓度梯度的有机酸标准工作溶液；
f、标准工作溶液衍生化和萃取：准确移取一定体积的具有不同浓度梯度的有机酸标准工作溶液，氮气吹干后，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液，涡旋振荡后，静置24h；反应后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
g、有机酸测定结果的计算：以内标法进行各有机酸目标物的定量分析，即以各目标物定量离子峰面积与内标峰定量离子峰面积之比为纵坐标，各目标物浓度与内标浓度之比为横坐标，得到线性回归方程；对提取后的样品进行测定，测得检出目标物定量离子峰面积和内标的定量离子峰面积比，代入线性回归方程，求得样品中各有机酸的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤e和f具体包括如下步骤：
步骤1)分别准确移取100mg草酸、50mg丙二酸、50mg琥珀酸、400mg苹果酸、50mg棕榈酸、100mg柠檬酸、50mg硬脂酸、300mg油酸、300mg亚油酸和100mg亚麻酸于10mL容量瓶中，精确至0.1mg，用甲醇定容，配制成10种有机酸的单一标准品储备液；在0℃～4℃条件下密封避光贮存；
步骤2)分别准确移取100μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液1；分别准确移取2000μL上述单一标准储备液到10mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配制成混合标准溶液2；
步骤3)标准工作曲线1：分别准确移取10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL混合标准溶液1于50mL离心试管中，氮气吹干后，加入5mL10％硫酸甲醇溶液和50μL己二酸内标溶液(10mg/mL)，振荡摇匀后，静置24h。反应后加入10mL水和5mL二氯甲烷，旋紧旋盖，以涡旋振荡后，离心n，取下层有机相过滤后进行GC/MS分析；
标准工作曲线2：分别准确移取500μL混合标准溶液1、100μL、250μL、500μL和1000μL混合标准溶液2于50mL离心试管中，其余处理过程同标准工作曲线1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在GC/MS测定时，采用的色谱条件：HP-INNOWAX色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美国安捷伦公司)；进样口温度：240℃；分流比：10∶1；载气：He；流量：1.0mL/min；升温程序：起始温度50℃，保持2min，以4℃/min升温至240℃，保持15min。
CN202011149572.8A 2020-10-23 2020-10-23 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法 Pending CN112285263A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011149572.8A CN112285263A (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011149572.8A CN112285263A (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112285263A true CN112285263A (zh) 2021-01-29

Family

ID=74424095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011149572.8A Pending CN112285263A (zh) 2020-10-23 2020-10-23 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112285263A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115343384A (zh) * 2022-07-20 2022-11-15 红塔烟草(集团)有限责任公司 一种基于接装纸酸味剂衰减行为预测卷烟保质期的方法
NL2036103A (en) * 2023-05-19 2023-11-23 Yunnan Tobacco Quality Supervision And Testing Station Method for analyzing and detecting organic acid in tobacco

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104345099A (zh) * 2013-08-05 2015-02-11 红塔辽宁烟草有限责任公司 一种测定烟草中非挥发性有机酸的方法
CN111167152A (zh) * 2019-12-25 2020-05-19 云南中烟工业有限责任公司 微型萃取分离-气相色谱法测定烟草中的非挥发有机酸和脂肪酸的方法
CN111679009A (zh) * 2020-06-20 2020-09-18 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种同时检测烟用香精香料中挥发及半挥发酸、醇、酚的gc-ms-ms方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104345099A (zh) * 2013-08-05 2015-02-11 红塔辽宁烟草有限责任公司 一种测定烟草中非挥发性有机酸的方法
CN111167152A (zh) * 2019-12-25 2020-05-19 云南中烟工业有限责任公司 微型萃取分离-气相色谱法测定烟草中的非挥发有机酸和脂肪酸的方法
CN111679009A (zh) * 2020-06-20 2020-09-18 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种同时检测烟用香精香料中挥发及半挥发酸、醇、酚的gc-ms-ms方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAOXING WANG等: "Simultaneous determination of non-volatile, semi-volatile, and volatile organic acids in tobacco by SIM–Scan mode GC–MS", 《GAS CHROMATOGRAPHY》 *
穆童等: "不同部位烤烟非挥发性有机酸含量与品质指标的关系分析", 《南方农业学报》 *
都述虎等编: "《药物分析》", 31 January 2020, 华中科技大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115343384A (zh) * 2022-07-20 2022-11-15 红塔烟草(集团)有限责任公司 一种基于接装纸酸味剂衰减行为预测卷烟保质期的方法
NL2036103A (en) * 2023-05-19 2023-11-23 Yunnan Tobacco Quality Supervision And Testing Station Method for analyzing and detecting organic acid in tobacco

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107764917B (zh) 一种卷烟爆珠中关键挥发性成分的测定方法
CN110133156B (zh) 一种高通量测定电子烟烟液中超多靶标香味成分的分析方法
CN104569197B (zh) 同时测定烟草中的糖、1,2-丙二醇和甘油的硅烷化gc/ms检测方法
CN110487924B (zh) 一种基于外加标记物的卷烟加香均匀性的检测方法
CN105784912B (zh) 一种量化分析细支卷烟主流烟气中内酯类香味物质的方法
CN108760924B (zh) 一种滤棒香线和爆珠特征成分的提取检测方法
CN112285263A (zh) 一种定量分析烟用香精和料液中非挥发性有机酸的方法
CN109061017B (zh) 一种卷烟加香均匀性的评价方法
CN111707740A (zh) 一种测定大曲中风味物质的方法
CN108426952B (zh) 一种烟用香精香料中柠檬酸酯类增塑剂含量的检测方法
CN112881569A (zh) 烟草及烟草制品中挥发性、半挥发性有机酸的测定方法
CN103713066B (zh) 一种奶粉中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的提取和检测方法
CN104792895B (zh) 一种烟用香精香料中薄荷醇的测定方法
CN109187831B (zh) 采用gc-ms同时快速测定酒精中9种醇类化合物含量的方法
CN109580832B (zh) 一种烟用爆珠内含物闪蒸-gc/ms快速检测方法
CN107688062A (zh) 一种测定电子烟烟液中痕量烟碱的方法
CN107422053B (zh) 一种液质联用检测化妆品中三氯乙酸的方法
CN110568101B (zh) 基于hs-spme-gc-ms/ms对烟丝中挥发性、半挥发性成分测定方法
CN115684371A (zh) 一种酸枣仁水提物中皂苷的快速液质联用定量方法
CN110221010B (zh) 一种测定酱香型白酒大曲中吡喃酮类化合物的方法
CN110333306B (zh) 一种烟用爆珠溶剂中辛癸酸甘油酯的定量测定方法
CN109613141B (zh) 一种烟用滤嘴爆珠液中γ-内酯和δ-内酯类化合物的检测方法
CN111983087A (zh) 一种爆珠或胶囊中苯、甲苯、乙苯、苯乙烯及二甲苯的测定方法
CN110927269A (zh) 定量检测酒中dl-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法
CN109061005A (zh) 一种烟叶中挥发性脂肪酸的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210129

RJ01 Rejection of invention patent application after publication