CN112269025A - 一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医疗诊断技术领域，公开了一种白介素‑6化学发光测定试剂盒及其制备方法。本发明所述试剂盒包括白介素‑6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液、酶标白介素‑6抗体B工作液和化学发光底物液。其中，所述酶标白介素‑6抗体B由经过Traut’s Reagent活化后的酶与经过Sulfo‑SMCC活化后的白介素‑6抗体B偶联获得。本发明以Traut’s Reagent和Sulfo‑SMCC为“桥梁”，将碱性磷酸酶和白介素‑6抗体进行标记，相对于常规的EDC‑NHS酶标记获得的酶标抗体，本发明方案能够显著提高白介素‑6检测试剂盒的灵敏度，可以应用于化学发光免疫分析检测试剂盒中。

Description

一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及医疗诊断技术领域，具体的说是涉及一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法。
背景技术
白细胞介素-6，简称白介素6(IL-6)，也被称为干扰素-β2、肝细胞刺激因子(BSF2)、杂交瘤生长因子等(HGF)，是一种多功能的细胞因子，属于白细胞介素的一种，主要由纤维母细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞等多种细胞产生，调节免疫应答、血细胞生成、组织损伤时的急性时相反应、炎症反应等。
连续监测重症监护病人血清或血浆中白介素-6的含量，能有效评估***性炎症反应综合征(SIRS)的严重程度、脓毒症以及脓毒血症性休克的预后情况。发生脓毒症休克到开始有效抗生素治疗的时间与死亡风险值成正相关，白介素-6能作为脓毒症的早期预警指标，在慢性炎症反应中也扮演着重要角色。
目前，临床上用于检测IL-6的试剂主要采用免疫层析法和化学发光法，相比于免疫层析法，化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽等优势，目前，进口试剂(包括罗氏、西门子和贝克曼)均采用化学发光法，但价格昂贵，因此，开发灵敏度高、检测时间短、性能优越的国产化学发光试剂十分必要。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种白介素-6化学发光测定试剂盒，使得所述试剂盒灵敏度高、检测时间短、性能优越；
本发明的另外一个目的在于提供上述试剂盒的制备方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种白介素-6化学发光测定试剂盒，包括白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液、酶标白介素-6抗体B工作液和化学发光底物液；其中，所述酶标白介素-6抗体B由经过Traut’s Reagent(2-亚氨基硫烷盐酸盐)活化后的酶与经过Sulfo-SMCC活化后的白介素-6抗体B偶联获得。
本发明所述酶标白介素-6抗体B的具体反应过程如下：
Figure BDA0002777493740000021
作为优选，所述白介素-6抗体A和白介素-6抗体B均可以使用对应的单克隆抗体；
作为优选，所述酶为碱性磷酸酶；所述化学发光底物液为APS-5，即(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐，该底物是辉光型底物，灵敏度高，可以快速达到平台期，缩短反应时间，提高灵敏度；
作为优选，所述白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒由表面带有对甲苯磺酰基的超顺磁微粒与白介素-6抗体A偶联获得。
作为优选，所述白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液包括白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒、MES、BSA和Triton X-100。在本发明具体实施方式中，所述白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液包括0.2mg/mL白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒、0.1M的MES、1％BSA、0.1％Triton X-100。
作为优选，所述酶标白介素-6抗体B工作液包括酶标白介素-6抗体B、MES、BSA、Triton X-100、ZnCl2和MgCl2。在本发明具体实施方式中，所述酶标白介素-6抗体B工作液包括2ug/mL酶标白介素-6抗体B、0.1M的MES、1％BSA、0.1％Triton X-100、0.1mMZnCl2和5mMMgCl2。
进一步地，本发明所述试剂盒还包括清洗液，其为包含Tween 20的Tris；在本发明具体实施方式中，所述清洗液为0.1M Tris和0.2％Tween 20溶液。
同时，本发明还提供了所述试剂盒的制备方法，将超顺磁微粒与白介素-6抗体A偶联，然后磁珠封闭液封闭，用缓冲液稀释，获得白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液；其中，所述超顺磁微粒表面活性基团为甲苯磺酰基；
将酶用Traut’s Reagent活化后，与用Sulfo-SMCC活化的白介素-6抗体B偶联，加入酶封闭液封闭，用缓冲液稀释，获得酶标白介素-6抗体B工作液；
白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液、酶标白介素-6抗体B工作液和化学发光底物液组成所述试剂盒。
在制备过程中，所述超顺磁微粒直径为1μm～3μm，所述磁微粒浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；所述磁珠封闭液为BSA水溶液，更具体地是10％BSA的水溶液。
在超顺磁微粒与白介素-6抗体A偶联时，需要先向10mg超顺磁微粒中加入磁珠包被液1处理，磁分离弃上清，添加900μL(＝AμL)的磁珠包被液1，涡旋混匀后加入200μg(＝BμL)的IL-6单克隆抗体A，然后添加(A+B)/2μL的磁珠包被液2反应；反应后用磁珠封闭液封闭，然后用磁珠清洗液清洗，添加缓冲液稀释为白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液；
其中，磁珠包被液1为硼酸缓冲液，具体是0.1M硼酸缓冲液，pH 9.5；磁珠包被液2为含硫酸铵的硼酸缓冲液，具体是3M硫酸铵/0.1M硼酸缓冲液，pH 9.5；磁珠清洗液为含氯化钠和吐温20的Tris-HCl，具体是25mM Tris-HCl、0.15M NaCl、0.05％Tween 20，pH 7.2。
在制备酶标白介素-6抗体B工作液时，用Traut’s Reagent活化后的酶与用Sulfo-SMCC活化的白介素-6抗体B的摩尔比为1：3～5：1，两者室温下反应；在具体实施方式中用Traut’s Reagent活化后的酶与用Sulfo-SMCC活化的白介素-6抗体B的摩尔比为2:1，并在22℃下反应60min；加入酶标封闭液封闭10min后用超滤管进行超滤以去除小分子物质，添加酶标缓冲液稀释为白介素-6抗体B偶联碱性磷酸酶的酶标工作液；
作为优选，所述酶封闭液优选为N-乙基马来酰亚胺溶液和乙醇胺溶液。
作为优选，所述缓冲液包括MES、BSA和Triton X-100，或包括MES、BSA、Triton X-100、ZnCl2和MgCl2，前者优选用于白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒的工作液配置，后者优选用于酶标抗体的工作液配置。在本发明具体实施方式中，所述缓冲液为0.1M MES、1％BSA、0.1％Triton X-100，或为0.1M MES、1％BSA、0.1％Triton X-100、0.1mM ZnCl2、5mMMgCl2。
在EDC-NHS酶标记法与本发明酶标记法灵敏度比较实验中，采用本发明酶标记法获得的酶标白介素-6抗体B，与常规EDC-NHS酶标记法获得的酶标白介素-6抗体B，均采用相同其他试剂盒成分组成试剂盒，两种试剂盒的最低检测限分别为0.6pg/mL和4.8pg/mL，表明经过本发明酶标记法制备的酶标抗体能够显著提高试剂盒的检测灵敏度。
由以上技术方案可知，本发明以Traut’s Reagent和Sulfo-SMCC为“桥梁”，将碱性磷酸酶和白介素-6抗体进行标记，相对于常规的EDC-NHS酶标记获得的酶标抗体，本发明方案能够显著提高白介素-6检测试剂盒的灵敏度，可以应用于化学发光免疫分析检测试剂盒中。
附图说明
图1所示为样本稀释后理论浓度与实测浓度的线性关系图；
图2所示为本发明试剂盒测定值与罗氏Elecsys测定值的方法学比对图。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明所述试剂及其应用和方法已通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的试剂盒及其制备方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的检测原理为：当样本中含有白介素-6时，磁珠包被抗体A、酶标抗体B与白介素-6发生免疫反应，形成磁珠包被抗体A-白介素-6抗原-酶标抗体B“三明治”夹心免疫复合物；通过磁分离和清洗后除去未反应的物质，然后加入化学发光底物液，“三明治”夹心免疫复合物上的碱性磷酸酶作用于发光底物进而发光，检测发光信号，计算样本中白介素-6浓度。
具体的检测方法包括下述步骤：
第一步，取抗体A偶联超顺磁微粒工作液、酶标记抗体B工作液与待测样本发生特异性反应，得到双抗体夹心的免疫复合物；
第二步，用清洗液清洗后加入化学发光底物液，与双抗体夹心的免疫复合物发生酶促反应，测定发光信号，获得白介素-6浓度；
所述第一步的反应温度为37℃，反应时间为10min；第二步的反应温度为37℃，反应时间为1min。
以下就本发明所提供的一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法做进一步说明。
实施例1：制备本发明试剂盒
1、各种缓冲液的配制
磁珠包被液1：0.1M硼酸缓冲液，pH 9.5；
磁珠包被液2：3M硫酸铵/0.1M硼酸缓冲液，pH 9.5；
磁珠清洗液：25mM Tris-HCl、0.15M NaCl、0.05％Tween 20，pH 7.2；
磁珠封闭液：10％BSA/H2O；
2、制备抗体偶联超顺磁微粒
移取10mg表面活性基团为对甲苯磺酰基的超顺磁微粒(直径为1μm～3μm)，置于磁分离器上磁分离除去上清液，加入1mL磁珠包被液1，涡旋混匀后磁分离弃上清，添加900μL(＝AμL)的磁珠包被液1，涡旋混匀后加入200μg(＝BμL)的IL-6单克隆抗体A，然后添加(A+B)/2μL的磁珠包被液2；涡旋混匀后置于振荡器上37℃下反应18h，然后添加10μL的磁珠封闭液，置于振荡器上37℃下反应6h以上，反应结束后，置于磁分离器上磁分离除去上清液，添加500μL磁珠清洗液并混匀后磁分离去上清，再用磁分离清洗液重复清洗3次后去上清，添加适用于后续工序的缓冲液并混匀后保存于2℃～8℃条件下直到使用。
3、制备酶标抗体
将碱性磷酸酶用Traut’s Reagent活化后用脱盐柱进行脱盐纯化，将IL-6单克隆抗体B用Sulfo-SMCC活化后用脱盐柱进行脱盐纯化，然后将活化的抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：2涡旋混匀后，22℃静置反应60min，加入N-乙基马来酰亚胺溶液和乙醇胺溶液封闭10min后用超滤管进行超滤以去除小分子物质，最后加入适用于后续工序的缓冲液并混匀后保存于2℃～8℃条件下直到使用。
4、制备试剂盒
用0.1M MES、1％牛血清白蛋白(BSA)、0.1％Triton X-100溶液将制得的抗体偶联超顺磁微粒稀释至0.1mg/mL，获得白介素-6单克隆抗体A偶联的超顺磁微粒工作液；
用0.1M MES、1％牛血清白蛋白(BSA)、0.1％Triton X-100、0.1mM ZnCl2、5mMMgCl2溶液将制得的酶标抗体稀释至2ug/mL，获得白介素-6单克隆抗体B偶联的碱性磷酸酶酶标抗体工作液；
用0.1M Tris、0.2％Tween 20溶液制得清洗液；
取200μL化学发光底物液APS-5、1600μL清洗液，与上述制得的白介素-6单克隆抗体A偶联的超顺磁微粒工作液50μL、白介素-6单克隆抗体B偶联的碱性磷酸酶酶标抗体工作液50μL进行组合，即可获得白介素-6化学发光定量检测试剂盒。
实施例2：本发明制备的试剂盒的性能评估
1、线性评估
将罗氏Elecsys***定值的IL-6浓度为5066pg/mL的临床样本用4％BSA溶液按下表1进行稀释，结果见表1，实测浓度与理论浓度的线性关系图如图1所示；
表1线性评估测试数据
Figure BDA0002777493740000061
Figure BDA0002777493740000071
由表1和图1可以看出，本发明试剂盒线性范围宽，在1.5pg/mL～5066pg/mL范围内，R2值达0.9986。
2、方法学比对评估
取40例临床样本，分别用罗氏Elecsys试剂和本发明实施例1制得的试剂进行检测，比较两种试剂盒检测结果的相关性，检测数据见表2，方法学比对图见图2。
表2：方法学比对中两种试剂盒测定的IL-6浓度值
Figure BDA0002777493740000072
Figure BDA0002777493740000081
由表2和图2可以看出，以进口试剂盒为对照标准，本发明试剂盒预期相关性较佳，性能优越。
实施例3：EDC-NHS酶标记法与本发明酶标记法灵敏度比较
用EDC和Sulfo-NHS在25℃黑暗活化ALP 1h后超滤离心，加入白介素6抗体B，25℃反应3h；封闭后超滤离心，加入本发明酶标缓冲液后获得白介素-6单克隆抗体B偶联的碱性磷酸酶酶标抗体工作液，并与实施例1中制备的其它试剂组分组合成试剂盒(试剂盒2)，与实施例1中制备的试剂盒(试剂盒1)同时测试最低检测限，检测数据见表3。
表3两种试剂盒测定的IL-6最低检测限
Figure BDA0002777493740000082
Figure BDA0002777493740000091
由表3可以看出，试剂盒1最低检测限检测结果明显低于试剂盒2最低检测限检测结果，可以得出试剂盒1具有较高的灵敏度，表明经过本发明酶标记法制备的酶标抗体能够显著提高试剂盒的检测灵敏度。
以上所述只是用于理解本发明的方法及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利的保护范围。

Claims (10)

1.一种白介素-6化学发光测定试剂盒，其特征在于，包括白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液、酶标白介素-6抗体B工作液和化学发光底物液；其中，所述酶标白介素-6抗体B由经过Traut’s Reagent活化后的酶与经过Sulfo-SMCC活化后的白介素-6抗体B偶联获得。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶。
3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液为APS-5。
4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液包括白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒、MES、BSA和Triton X-100。
5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述酶标白介素-6抗体B工作液包括酶标白介素-6抗体B、MES、BSA、Triton X-100、ZnCl2和MgCl2。
6.根据权利要求1-5任意一项所述试剂盒，其特征在于，还包括清洗液。
7.权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于，将超顺磁微粒与白介素-6抗体A偶联，然后磁珠封闭液封闭，用缓冲液稀释，获得白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液；
将酶用Traut’s Reagent活化后，与用Sulfo-SMCC活化的白介素-6抗体偶联，加入酶封闭液封闭，用缓冲液稀释，获得酶标白介素-6抗体B工作液；
白介素-6抗体A偶联的超顺磁微粒工作液、酶标白介素-6抗体B工作液和化学发光底物液组成所述试剂盒。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述磁珠封闭液为BSA水溶液。
9.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述酶封闭液为N-乙基马来酰亚胺溶液和乙醇胺溶液。
10.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述缓冲液包括MES、BSA和Triton X-100。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114113626A (zh) * 2021-10-25 2022-03-01 江苏纳迪芯生命科技研究院有限公司 一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒
CN114137203A (zh) * 2021-10-21 2022-03-04 广州万孚生物技术股份有限公司 抗原与碱性磷酸酶结合物的制备方法
CN114910641A (zh) * 2022-05-09 2022-08-16 山东中鸿特检生物科技有限公司 一种白细胞介素的检测试剂盒及其检测方法和应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102901812A (zh) * 2012-11-13 2013-01-30 江阴泽成生物技术有限公司 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN103344633A (zh) * 2013-07-17 2013-10-09 江阴泽成生物技术有限公司 一种碱性磷酸酶的化学发光底物液
CN104330551A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 南方医科大学南方医院 一种白介素6定量测定试剂盒及其制备方法
CN105392895A (zh) * 2013-03-13 2016-03-09 中尺度技术有限责任公司 改进的测定方法
CN107942047A (zh) * 2017-11-17 2018-04-20 南通伊仕生物技术股份有限公司 白细胞介素18检测试剂盒
CN108535494A (zh) * 2018-06-29 2018-09-14 湖南师范大学 一种il-6elisa检测试剂盒及其使用方法
CN109444419A (zh) * 2018-10-26 2019-03-08 成都普利泰生物科技有限公司 一种检测犬促甲状腺激素的化学发光免疫分析试剂盒
CN109596835A (zh) * 2018-11-23 2019-04-09 深圳天辰医疗科技有限公司 一种检测试剂盒及其制备方法和肌钙蛋白t的检测方法
CN111521777A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 四川携光生物技术有限公司 一种降低自身免疫抗体检测中非特异性吸附的处理方法及其试剂盒

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102901812A (zh) * 2012-11-13 2013-01-30 江阴泽成生物技术有限公司 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN105392895A (zh) * 2013-03-13 2016-03-09 中尺度技术有限责任公司 改进的测定方法
CN103344633A (zh) * 2013-07-17 2013-10-09 江阴泽成生物技术有限公司 一种碱性磷酸酶的化学发光底物液
CN104330551A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 南方医科大学南方医院 一种白介素6定量测定试剂盒及其制备方法
CN107942047A (zh) * 2017-11-17 2018-04-20 南通伊仕生物技术股份有限公司 白细胞介素18检测试剂盒
CN108535494A (zh) * 2018-06-29 2018-09-14 湖南师范大学 一种il-6elisa检测试剂盒及其使用方法
CN109444419A (zh) * 2018-10-26 2019-03-08 成都普利泰生物科技有限公司 一种检测犬促甲状腺激素的化学发光免疫分析试剂盒
CN109596835A (zh) * 2018-11-23 2019-04-09 深圳天辰医疗科技有限公司 一种检测试剂盒及其制备方法和肌钙蛋白t的检测方法
CN111521777A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 四川携光生物技术有限公司 一种降低自身免疫抗体检测中非特异性吸附的处理方法及其试剂盒

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114137203A (zh) * 2021-10-21 2022-03-04 广州万孚生物技术股份有限公司 抗原与碱性磷酸酶结合物的制备方法
CN114113626A (zh) * 2021-10-25 2022-03-01 江苏纳迪芯生命科技研究院有限公司 一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒
CN114910641A (zh) * 2022-05-09 2022-08-16 山东中鸿特检生物科技有限公司 一种白细胞介素的检测试剂盒及其检测方法和应用

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