CN111836644A - 抗密蛋白18.2抗体及其用途 - Google Patents

抗密蛋白18.2抗体及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明描述了抗CLDN18.2抗体及其抗原结合片段。本发明还描述了编码所述抗体的核酸、包含所述抗体的组合物、制备所述抗体的方法以及使用所述抗体治疗或预防疾病，例如癌症和/或炎性疾病的方法。

Description

抗密蛋白18.2抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年3月8日提交的美国临时申请62/640,288；以及2018年8月3日提交的美国临时申请62/714,254的优先权。每个公开内容通过引用整体并入本文。
发明领域
本发明涉及抗密蛋白(claudin)18.2(CLDN18.2)单克隆抗体、编码该抗体的核酸和表达载体、包含该载体的重组细胞以及包含该抗体的组合物。本发明还提供了制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗疾病，包括癌症和炎性疾病，和/或相关并发症的方法。
电子提交的序列表的引用
本申请包含序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“689204.9WO序列表”，创建日期为2019年2月26日，大小为74kb。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，其全文通过引用并入本文。
发明背景
密蛋白18.2(CLDN18.2)，也称为密蛋白-18a2.1，属于人类中至少27个亚型的密蛋白(claudin，CLDN)跨膜蛋白家族。密蛋白是上皮细胞之间紧密连接的主要结构成分，并起离子孔的作用调节阳离子和阴离子的旁细胞通透性(Sahin等，Physiol Rev.2013；93：525-569)。CLDN18的表达通常限于肺和胃组织。CLDN18有两个剪接变体。CLDN18.1是肺特异性变体，而CLDN18.2是胃特异性变体。由于第一个外显子的可变剪接，剪接变体在其69个氨基酸残基的N端处有所不同(Niimi等，Mol Cell Biol.2001；21:7380-7390)。对CLDN18.2敲除小鼠的研究表明，CLDN18.2在防止胃酸泄漏到胃腔中起着关键作(Hayash等，肠胃病学2012；142：292-304)。
在许多癌症中都检测到密蛋白的表达失调，并且可能导致肿瘤发生和癌症侵袭(Singh等，J Oncology 2010；2010：541957)。在胰腺导管腺癌(PDAC)(Tanaka等，JHistochem Cytochem 2011；59：942-952)、食道肿瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌(Sahin等，Hu Cancer Biol 2008；14：7624-7634)、胆管腺癌(Keira等，Virchows Arch 2015；466：265-277)和胆管癌(Shinozaki等，Virchows Arch 2011；459:73-80)中，CLDN18.2的表达升高。CLDN18.2是精确导向的抗CLDN18.2阳性肿瘤生物制剂的理想靶标，因为CLDN18.2在除分化的胃上皮细胞外的任何正常组织中均不表达，这是静脉内施用的大分子化合物无法达到的。
发明概述
在一个总体方面，本发明涉及特异性结合密蛋白18.2(CLDN18.2)的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下多肽序列：
(1)SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65；
(2)SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53；
(3)SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56；
(4)SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59；
(5)SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62；
(6)SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68；
(7)SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71；
(8)SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74；
(9)SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77；或
(10)SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其多肽序列为：
(1)分别为SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125；
(2)分别为SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113；
(3)分别为SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116；
(4)分别为SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119；
(5)分别为SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122；
(6)分别为SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128；
(7)分别为SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131；
(8)分别为SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134；
(9)分别为SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137；或
(10)分别为SEQ ID NO：分别为108、109、110、138、139和140；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其多肽序列具有与SEQ ID NO：9、1、3、5、7、11、13、15、17或19至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性；或包含轻链可变区，其多肽序列具有与SEQ ID NO：10、2、4、6、8、12、14、16、18或20至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的同一性。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；或
(j)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段结合CLDN18.2，并能够通过抗体依赖的细胞毒性(ADCC)、和/或补体依赖的细胞毒性(CDC)，从而诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解，和/或介导偶联药物的募集，和/或与具有抗癌效应的另一种单克隆抗体或其抗原结合片段形成双特异性抗体。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
在某些实施方式中，人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
t.具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
u.具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
本发明还提供了分离的核酸，其编码本发明所公开的单克隆抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了载体，包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
本发明还提供了含有载体的宿主细胞，所述载体包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
在某些实施方式中，提供了药物组合物，其包含本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。
本发明还提供了特异性靶向有此需要的受试者的癌细胞表面上的CLDN18.2而非CLDN18.1的方法，该方法包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了治疗有此需要的受试者的癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。癌症可以是任何液体或实体癌，例如，其可以选自但不限于肺癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子***、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤、以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗炎性疾病的方法，其包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，以及从所述细胞或培养物中回收抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了制备包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，所述方法包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合以获得所述药物组合物。
本发明还提供了确定受试者中CLDN18.2水平的方法。该方法包括(a)从受试者获得样品；(b)使样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者中CLDN18.2的水平。在某些实施方式中，样品是组织样品。所述组织样品可以是，例如癌组织样品。在某些实施方式中，样品是血液样品。
附图的简要说明
当结合附图阅读时，将能更好地理解本发明的前述概述以及以下对本申请的优选实施例的详细描述。然而，应理解，本申请不限于附图中所示的明确实施例。
图1A-1D显示了通过FACS分析，纯化嵌合抗CLDN18.2 mAb(小鼠mAb的VH和VL区分别融合至人IgG1重链和κ轻链的恒定区)与稳定转染了全长人CLDN18.2的HEK293细胞库的剂量依赖结合作用。
图2A-2E显示了与CLDN18.1相比，嵌合抗CLDN18.2mAb与CLDN18.2的选择结合作用。实验所用HEK293细胞库分别被全长人CLDN18.2和CLDN18.1稳定转染。灰色阴影峰代表仅与第二抗体一起孵育的实验组，黑色空心峰代表与第一嵌合mAb和第二抗体一起孵育的实验组。
图3A-3C显示了通过FACS分析，嵌合抗CLDN18.2mAb与HEK293-CLDN18.2稳定细胞系的剂量依赖结合作用。
图4A-4J显示了嵌合抗CLDN18.2mAb与HEK293-CLDN18.2稳定细胞系结合作用的直方图。灰色阴影峰代表仅与第二抗体一起孵育的实验组，黑色空心峰代表与第一嵌合mAb和第二抗体一起孵育的实验组。
图5A-5G显示了通过FACS分析，人源化抗CLDN18.2mAb与HEK293-CLDN18.2稳定库的剂量依赖结合作用。
图6A-6E显示了通过FACS分析，人源化抗CLDN18.2mAb与HEK293-CLDN18.2稳定细胞系的剂量依赖结合作用。
图7显示了通过FACS分析，在685nM的mAb浓度下，人源化抗CLDN18.2mAb与癌细胞系NUGC-4的结合作用。
图8A-8B显示了五种人源化抗CLDN18.2 mAb和一种嵌合抗CLDN18.2 mAb的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性的结果。
发明详述
背景技术和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献各自通过引用整体并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、物品等的讨论是为了提供本发明的背景。对于所公开或要求保护的任何发明内容，这种讨论并非承认所有这些或任何这些事项构成现有技术的一部分。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。否则，本文中使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
必须注意的是，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文另外明确指出。
除非另有说明，否则任何数值，例如本文所述的浓度或浓度范围，在任何情况下均应理解为由术语“约”修饰。因此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样的，1％至10％(w/v)的浓度范围包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。如本文所使用的，数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围，该范围内的所有单个数值，包括该范围内的整数和分数，除非上下文另外明确指出。
除非另有说明，否则一系列元素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个元素。仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的本发明的特定实施方式的多种等同方案。本发明旨在涵盖这样的等同方案。
如本文所用，术语“包含”、“包含有”、“包括”、“包括有”、“具有”、“有”、“含有”或“含有”或其任何其他变型将被理解为隐含地包括陈述的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组，并且是非排他性的或开放式的。例如，包含一系列元素的组合物、混合物、步骤、方法、物品或设备不一定仅限于那些元素，而是可以包括此组合物、混合物、步骤、方法、物品或设备中未明确列出或固有的其他元素。此外，除非明确指出相反的意思，否则“或”是指包含性的“或”而不是排他性的“或”。例如，以下任一条件都满足条件A或B：A为真(或存在)并且B为假(或不存在)、A为假(或不存在)并且B为真(或存在)，以及A和B均为真(或存在)。
如本文所用，多个述及的元素之间的连接术语“和/或”应理解为包括单独的和组合的选择。例如，在两个元素由“和/或”连接的情况下，第一个选项是指适用第一个元素而没有第二个元素。第二个选项是指适用第二个元素而没有第一个元素。第三个选项是指第一和第二元素一起适用。这些选项中的任何一个都应理解为落入该含义内，并因此满足本文所用术语“和/或”的要求。不止一个选项的并行适用也应理解为在其含义之内，因此满足术语“和/或”的要求。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“由……组成”或诸如“由……构成”或“由……所组成”等变体表示包括任何所述整数或整数组，但是指定的方法、结构或组合物中不能增加其他的整数或整数组。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“基本上由...组成”或诸如“基本上由...构成”或“基本上由...所组成”等变体表示包括任何所述的整数或整数组，并且可选地包含不会实质上改变指定的方法、结构或组合物的基本或新颖性质的任何所述整数或整数组。参见M.P.E.P.§2111.03。
如本文所用，“受试者”是指任何动物，优选为哺乳动物，最优选为人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴、人等，但更优选人。
词语“右”，“左”，“下”和“上”表示附图中的参考方向。
还应当理解，当提及优选发明的部件的尺寸或特性时，如本文所用的术语“大约”、“约”、“通常”、“基本上”以及类似术语表示所描述的尺寸/特性不是严格的边界或参数，并且不排除其在功能上相同或相似的微小变化，如本领域普通技术人员所理解的那样。至少，包括数字参数的此类引用将包括使用本领域公认的数学和工业原理(例如，四舍五入、测量或其他***误差、制造公差等)不会改变最小有效位数的变化。
在两个或多个核酸或多肽序列(例如，抗CLDN18.2抗体和编码它们的多核苷酸，CLDN18.2多肽和编码它们的CLDN18.2多核苷酸)的上下文中，当使用以下序列比较算法之一或通过目视检查进行比较和比对以获得最大对应性时，术语“同一的”或百分比“同一性”指两个或多个序列或子序列是相同的或具有特定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同。
为了进行序列比较，通常将一个序列用作参比序列，将测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参比序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数，计算测试序列相对于参比序列的序列同一性百分比。
用于比较的序列的最佳比对可以例如通过如下算法进行，例如通过Smith和Waterman，高等应用数学，2：482(1981)的局部同源算法进行，通过Needleman和Wunsch，分子生物学杂志，48：443(1970)的同源性比对算法进行，通过Pearson和Lipman，美国国家科学院学报，85：2444(1988)的相似性搜索方法进行，通过这些算法的计算机化实现(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，位于威斯康星州的575科学Madison博士的遗传学计算机组的遗传学软件包中)，或通过目视检查实现(通常参见，分子生物学实验室指南，F.M.Ausubel等编辑，实验室指南，格林出版联合公司(Greene Publishing Associates,Inc.)和约翰威利父子公司(John Wiley&Sons,Inc.)的合资企业(1995年副刊)(Ausubel))。
适于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST2.0算法，这些算法在Altschul等(1990)，分子生物学杂志，215：403-410和Altschul等(1997)，核酸研究，25：3389-3402中分别进行了描述。可通过国家生物技术信息中心的公开途径获得进行BLAST分析的软件。该算法涉及首先通过识别查询序列中长度为W的短序列来识别高分序列对(HSP)，这些短序列在与数据库序列中相同长度的序列对齐时匹配或满足某个正值阈值T。T被称为邻近序列分数阈值(Altschul等，同上)。这些最初的邻近序列的命中充当启动搜索以查找包含它们的较长HSP的种子。然后沿着两个方向将序列的命中在每个序列延伸至累积比对得分不再增加。
对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的加分；始终>0)和N(错配残基的罚分；始终<0)来计算累积得分。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。在以下情况下，将停止序列的命中在每个方向上的延伸：累积比对得分比其最大获得值降低数值X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或到达任一序列的末尾。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4，以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长(W)为3、期望值(E)为10和BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff和Henikoff，美国国家科学院学报，89：10915(1989))。
除了计算序列同一性百分比外，BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见，例如，Karlin和Altschul，美国国家科学院学报，90：5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性测量是最小总和概率(P(N))，它提供了偶然发生两个核苷酸或氨基酸序列匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参比核酸的比较中，最小总和概率小于约0.1，更优选地小于约0.01，最优选地小于约0.001，则认为该核酸与参比序列相似。
如下所述，若由第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽在免疫学上交叉反应，则进一步指示两个核酸序列或多肽基本上相同。因此，例如，当两条多肽中仅通过保守取代而不同，则通常认为其中一条多肽与第二多肽基本相同。两个核酸序列基本相同的另一个指示是两个分子在严格条件下彼此杂交。
抗体
本发明总体上涉及分离的抗CLDN18.2抗体，编码该抗体的核酸和表达载体，包含该载体的重组细胞以及包含该抗体的组合物。本发明还提供了制备抗体的方法以及使用该抗体治疗包括癌症和炎性疾病在内的疾病的方法。本发明的抗体具有一种或多种期望的功能特性，包括但不限于与CLDN18.2的高亲和力结合、对CLDN18.2的高特异性、刺激针对表达CLDN18.2细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性吞噬作用(ADPC)和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的能力，以及在受试者和动物模型中单独或与其他抗癌疗法联合使用时具有抑制肿瘤生长的能力。
在总体方面，本发明涉及结合CLDN18.2的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”以广义使用，并且包括免疫球蛋白或抗体分子，所述抗体分子包括单克隆或多克隆的人、人源化、复合和嵌合抗体以及抗体片段。通常，抗体是对特定抗原表现出结合特异性的蛋白或肽链。抗体结构是众所周知的。根据重链恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五个主要类别(即，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。因此，本发明的抗体可以是五个主要类别或相应的亚类别中的任何一个。优选地，本发明的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。脊椎动物物种的抗体轻链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列被指定为两种明显不同的类型之一，即κ和λ。因此，本发明的抗体可以包含κ或λ轻链恒定结构域。根据特定的实施方式，本发明的抗体包括来自大鼠或人抗体的重链和/或轻链恒定区。除重链和轻链恒定结构域外，抗体还包含由轻链可变区和重链可变区组成的抗原结合区，两者均包含三个结构域(即互补决定区1-3；(CDR1、CDR2和CDR3))。所述轻链可变区结构域可替代地称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述重链可变区结构域可替代地称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合CLDN18.2的分离的抗体基本上不含不结合CLDN18.2的抗体)。另外，分离的抗体基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即除了可能少量存在的天然的突变以外，包含种群的单个抗体是同一的。本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术或重组DNA方法来制备。例如，所述单克隆抗体可以由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括获自具有人源重链转基因和轻链转基因的基因组的转基因非人动物(如转基因小鼠或大鼠)的B细胞。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，例如双抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双抗体(ds双抗体)、单链抗体分子(scFv)、单域抗体(sdab)、scFv二聚体(双价双抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼源单域抗体、纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体，或任何其他与抗原结合但不包含完整的抗体结构的抗体片段。抗原结合片段能够与亲本抗体或亲本抗体片段结合的相同抗原结合。根据特定的实施方式，所述抗原结合片段包含轻链可变区、轻链恒定区和重链的Fd区段。根据其他特定的实施方式，所述抗原结合片段包含Fab和F(ab')。
如本文所用，术语“单链抗体”是指本领域中常规的单链抗体，其包含通过约15至约20个氨基酸的短肽连接的重链可变区和轻链可变区。如本文所用，术语“单域抗体”是指本领域中常规的单域抗体，其包含重链可变区和重链恒定区，或仅包含重链可变区。
如本文所用，术语“人抗体”是指由人产生的抗体或使用本领域已知的任何技术制备的具有与由人产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的该定义包括完整或全长抗体、其片段，和/或包含至少一种人重链和/或轻链多肽的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指进行修饰以增加与人抗体的序列同源性，从而保留了抗体的抗原结合特性，但降低了其在人体中的抗原性的非人抗体。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自两个或更多个物种的抗体。轻链和重链的可变区通常对应于衍生自一种哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的具有期望的特异性、亲和力和性能的抗体的可变区，而恒定区对应于衍生自另一种哺乳动物(例如人)的抗体的序列，以避免引起该物种的免疫应答。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含多个免疫球蛋白可变结构域序列的抗体，所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在同一抗原上，例如，在同一蛋白(或多聚蛋白的亚基)上。在一个实施方式中，所述第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一个实施方式中，所述第一和第二表位不重叠或基本不重叠。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在不同抗原上，例如，在不同的蛋白(或多聚体蛋白的不同亚基)上。在一个实施方式中，多特异性抗体包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体分子、三特异性抗体，或四特异性抗体分子。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合不超过两个表位或两个抗原的多特异性抗体。双特异性抗体的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变域序列。在一个实施方式中，第一和第二表位在同一抗原，例如，同一蛋白(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一个实施方式中，第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位在不同的抗原上，例如，在不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列表位。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方式中，第一表位位于CLDN18.2上，第二表位位于PD-1、PD-L1、TIM-3、LAG-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD3、CD73、CD47、TIP-1、爱帕琳肽(apelin)、DLL3、叶酸受体α和/或其他与肿瘤相关的免疫抑制剂或表面抗原上。
如本文所用，术语“CLDN18.2”是指密蛋白18变体2，密蛋白-18.2或密蛋白-18a2.1，其属于跨膜蛋白的密蛋白家族。CLDN18.2在胃上皮细胞表面特异性表达(Niimi等，Mol Cell Biol.2001；21：7380-7390)，并成为上皮细胞之间紧密连接的主要结构成分之一(Sahin等，Physiol Rev.2013；93：525-569)。术语“人CLDN18.2”是指源自人的CLDN18.2。人CLDN18.2的示例性氨基酸序列在GenBank登录号AAL15637.1(SEQ ID NO：141)中显示。
如本文所用，“特异性结合CLDN18.2”的抗体是指与CLDN18.2，优选人CLDN18.2结合的抗体，其KD值为1×10-7M或更低，优选1×10-8M或更低，或更优选5×10-9M或更低、1×10-9M或更低、5×10-10M或更低、1×10-10M或更低。术语“KD”是指解离常数，其是从Kd与Ka之比(即，Kd/Ka)获得的，并被表示为摩尔浓度(M)。鉴于本公开，可以使用本领域的方法测定抗体的KD值。例如，抗体的KD可以通过使用表面等离子体共振来确定，例如通过使用生物传感器***，例如
Figure BDA0002672460460000131
***。或者通过使用生物层干涉技术，例如Octet RED96***。
抗体的KD值越小，抗体与靶抗原结合的亲和力越高。
根据一个特定的方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、HCDR2、HCDR3，分别具有以下多肽序列：
(1)SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65；
(2)SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53；
(3)SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56；
(4)SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59；
(5)SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62；
(6)SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68；
(7)SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71；
(8)SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74；
(9)SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77；或
(10)SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
根据一个特定的方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下多肽序列：
(1)SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125；
(2)SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113；
(3)SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116；
(4)SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119；
(5)SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122；
(6)SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128；
(7)SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131；
(8)SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134；
(9)SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137；或
(10)SEQ ID NO：108、109、110、138、139和140；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合CLDN18.2，优选人CLDN18.2。
根据另一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含含有与SEQ ID NO：9、1、3、5、7、11、13、15、17或19具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQID NO：10、2、4、6、8、12、14、16、18或20具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。根据一个优选的实施方式，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段分别地包含含有与SEQ ID NO：9、1、3、5、7、11、13、15、17或19具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的重链可变区，和含有与SEQ ID NO：10、2、4、6、8、12、14、16、18或20具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个特定方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括：
a.具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：1具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的重链可变区，和与SEQ ID NO：2具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：3具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：4具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：5具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：6具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：7具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：8具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：9具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：10具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：11具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：12具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：13具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：14具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：15具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：16具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：17具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：18具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：19具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：20具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：1具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：2具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：3具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：4具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：5具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：6具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：7具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：8具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：9具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：10具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：11具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：12具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：13具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：14具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：15具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：16具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：17具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：18具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有为SEQ ID NO：108、109、110、138、139和140所示的多肽序列。在另一个实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：19具有至少85％，优选地90％，更优选地95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列重链可变区，以及与SEQ ID NO：20具有至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％的同一性的多肽序列的轻链可变区。优选地，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个具体方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
根据另一个具体方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
根据另一个具体方面，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的人源化抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
t.具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
u.具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
在另一个总体方面，本发明涉及一种编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。本领域技术人员可以理解，蛋白质的编码序列可以在不改变蛋白质的氨基酸序列的情况下被改变(例如替换、删除、***等)。因此，本领域技术人员能够理解，可以在不改变蛋白质的氨基酸序列的情况下，改变编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
在另一个总体方面，本发明涉及一种载体，其包含编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。鉴于本公开，可以使用本领域技术人员已知的任何载体，例如质粒，粘粒，噬菌体载体或病毒载体。在一些实施方式中，所述载体是重组表达载体，如质粒。所述载体可以包括用于构建表达载体的常规功能的任何元件，例如启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起点。启动子可以是组成型、诱导型或抑制型启动子。本领域已知，许多表达载体能够将核酸递送至细胞，其可以在本发明中使用，用于在细胞中产生抗体或其抗原结合片段。根据本发明的实施方式，可以利用常规克隆技术或人工基因合成生产重组表达载体。
在另一个总体方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包含编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。鉴于本公开内容，本领域技术人员已知的任何宿主细胞可用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，宿主细胞是大肠杆菌TG1或BL21细胞(用于表达例如scFv或Fab抗体)、CHO-DG44或CHO-K1细胞或HEK293细胞(用于表达例如全长IgG抗体)。根据具体的实施方式，通过常规方法例如化学转染、热休克或电穿孔将重组表达载体转化到宿主细胞中，其被稳定整合到宿主细胞基因组中，使得重组核酸得到有效表达。
在另一个总体方面，本发明涉及制备本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段条件下培养包含编码单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或细胞培养物(如从上清液中)中回收抗体或其抗原结合片段。可以从细胞中收获表达的抗体或其抗原结合片段，并根据本领域已知的和本文所述的常规技术进行纯化。
药物组合物
在另一个总体方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含分离的本发明单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。如本文所用，术语“药物组合物”是指包含本发明的抗体和药学上可接受的运载体的产品。本发明的抗体和包含它们的组合物也可用于制备药物，所述药物用于本发明提及的治疗性应用。
如本文所用，术语“运载体”是指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、脂质、含脂质的囊泡、微球体、脂质包封体、或本领域已知的用于药物制剂的其他物质。应当理解，运载体、赋形剂或稀释剂的特性取决于具体应用的给药途径。如本文所用，术语“药学上可接受的运载体”是指不干扰本发明所述组合物的有效性或本发明所述组合物的生物活性的无毒物质。根据具体实施方式，鉴于本公开内容，适用于抗体药物组合物的任何药学上可接受的运载体均可用于本发明。
用药学上可接受的运载体进行药学活性成分的配制是本领域已知的，例如《雷明顿：药学的科学与实践》(例如，第21版(2005年)以及任何更高版本)。其他成分的非限制性实例包括：缓冲剂、稀释剂、溶剂、张度调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。一种或多种药学上可接受的运载体可以用于配制本发明的药物组合物。
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物是液体制剂。液体制剂的优选实例是水性制剂，即包含水的制剂。液体制剂可以包含溶液、悬浮液、乳液、微乳液、凝胶等。水性制剂通常包含至少50％w/w的水，或至少60％、70％、75％、80％、85％、90％或至少95％w/w的水。
在一种实施方式中，所述药物组合物可以配制成可以，例如通过注射装置(例如，注射器或输液泵)注射的注射剂。例如，可以皮下、肌肉内、腹膜内、玻璃体内或静脉内递送注射剂。
在另一种实施方式中，所述药物组合物是固体制剂，例如冷冻干燥或喷雾干燥的组合物，其可以原样使用，或在使用前由医师或患者向其添加溶剂和/或稀释剂。固体剂型可包括片剂，例如压制片剂和/或包衣片剂，以及胶囊剂(例如，硬或软明胶胶囊)。所述药物组合物也可以是例如小包装、糖衣丸、粉末、颗粒、锭剂或用于重构的粉末的形式。
剂型可以是立即释放的，在这种情况下，它们可以包含水溶性或分散性载体，或者可以是延迟释放，持续释放或调节释放，在这种情况下，它们可以包含调节剂型在胃肠道或皮肤下的溶解速率的水不溶性聚合物。
在其他实施方式中，所述药物组合物可以通过鼻内、颊内或舌下递送。
水性制剂中的pH可以在pH 3至pH 10之间。在本发明的一种实施方式中，制剂的pH为约7.0至约9.5。在本发明的另一种实施方式中，制剂的pH为约3.0至约7.0。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例包括：精氨酸、天冬氨酸、二甘氨酸、柠檬酸盐、磷酸氢二钠、富马酸、甘氨酸、双甘氨肽、组氨酸、赖氨酸、马来酸、苹果酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、琥珀酸、酒石酸、三甲基甘氨酸和三(羟甲基)-氨基甲烷及其混合物。缓冲剂可以约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定缓冲剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括：苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、溴硝醇、4-羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、氯甲酚、氯己定、氯苯甘醚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、4-羟基苯甲酸乙酯、咪唑烷脲、4-羟基苯甲酸甲酯、苯酚、2-苯氧基乙醇、2-苯基乙醇、4-羟基苯甲酸丙酯、脱氢乙酸钠、硫柳汞及其混合物。防腐剂可以约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定防腐剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含等渗剂。该实施方式的非限制性实例包括盐(例如氯化钠)、氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸和苏氨酸)、糖醇(例如丙三醇、1,2-丙二醇(丙二醇)、1,3-丙二醇和1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。等渗剂的另一个实例包括糖。糖的非限制性实例可以是单糖、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、α和β-HPCD、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素钠。等渗剂的另一个实例是糖醇，其中术语“糖醇”定义为具有至少一个-OH基团的C(4-8)烃。糖醇的非限制性实例包括甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、卫矛醇、木糖醇和***糖醇。等渗剂可以约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定等渗剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含螯合剂。螯合剂的非限制性实例包括柠檬酸、天冬氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)盐及其混合物。螯合剂可以约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定螯合剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂。稳定剂的非限制性实例包括一种或多种聚集抑制剂，一种或多种氧化抑制剂，一种或多种表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂，其中所述稳定剂是羧基-/羟基纤维素及其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、2-甲硫基乙醇、聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、盐(例如氯化钠)、含硫物质(例如硫代甘油)或巯基乙酸。稳定剂可以约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定稳定剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的其他实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种表面活性剂，优选一种表面活性剂、至少一种表面活性剂、或两种不同的表面活性剂。术语“表面活性剂”是指由水溶性(亲水)部分和脂溶性(亲脂)部分组成的任何分子或离子。表面活性剂可以例如选自下组：阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂。表面活性剂可以约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定表面活性剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，例如EDTA和/或盐酸(HCl)苯甲脒。蛋白酶抑制剂可以约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度单独或组合存在。包含这些特定蛋白酶抑制剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在另一个总体方面，本发明涉及制备包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合以获得所述药物组合物。
使用方法
在另一个总体方面，本发明涉及一种靶向受试者的癌细胞表面的CLDN18.2以实现细胞杀伤的方法，该方法包括向受试者施用与CLDN18.2特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，或包含分离的本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物。CLDN18.2单克隆抗体或抗原结合片段与CLDN18.2的结合可介导补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性吞噬作用(ADPC)和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，或导致靶标癌细胞死亡的其他作用。单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如用于募集偶联的药物，和/或与另一种单克隆抗体形成双特异性抗体，以介导靶标癌细胞的死亡。
结合CLDN18.2的抗体及其抗原结合片段的功能活性可以通过本领域已知的和本文所述的方法来表征。表征结合CLDN18.2的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于亲和力和特异性测定，包括Biacore，ELISA和OctetRed分析，以及通过FACS在细胞上检测抗体和抗原结合片段与CLDN18.2的结合(用CLDN18.2转染的细胞或自然表达CLDN18.2的细胞)。根据特定的实施方式，与CLDN18.2结合的抗体及其抗原结合片段的表征方法包括以下描述的那些。
在另一个总体方面，本发明涉及一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向该受试者施用本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或药物组合物，该单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合CLDN18.2。癌症可以例如选自但不限于肺癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子***、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤、以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
在另一个总体方面，本发明涉及一种在有需要的受试者中治疗炎性疾病的方法，该方法包括向该受试者施用本发明的与CLDN18.2特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
根据本发明的实施方式，药物组合物包含治疗有效量的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“治疗有效量”是指在受试者中引起期望的生物学或医学反应的活性成分或组分的量。相对于所述目的，可以凭经验和以常规方式确定治疗有效量。
如本文中针对抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段所使用的，治疗有效量是指在需要的受试者中调节免疫应答的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的量。另外，如本文所用，对于抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，治疗有效量是指治疗疾病、病症或症状；预防或减缓疾病、病症或症状发展；或减轻或完全减轻与疾病、病症或症状有关的症状的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的量。
根据特定的实施方式，要治疗的疾病、病症或症状是癌症，优选选自以下的癌症：肺癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子***、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤、以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。根据其它特定的实施方式，要治疗的疾病、病症或症状是炎性疾病。
根据具体的实施方式，治疗有效量是指足以实现以下1、2、3、4或更多种效果的治疗量：(i)减轻或改善待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的严重程度；(ii)减少待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的持续时间；(iii)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状发展；(iv)使待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状退化；(v)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的发展或发作；(vi)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的复发；(vii)减少患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的住院治疗；(viii)减少患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的住院时间；(ix)增加患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的存活率；(xi)抑制或减轻受试者中待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状；和/或(xii)增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。
治疗有效量或剂量可根据各种因素而变化，例如待治疗的疾病、病症或症状、给药方式、靶位点、受试者的生理状态(包括，例如年龄、体重、健康状况)、受试者是人还是动物、施用的其他药物、以及该处理是预防还是治疗。优化滴定治疗剂量，以优化安全性和有效性。
根据具体的实施方式，配制本文所述的组合物，以使其适合向受试者施用的预期途径。例如，本文所述的组合物可以配制成适合于静脉内、皮下或肌肉内施用的形式。
如本文所用，术语“治疗”、“治疗的”和“疗法”均旨在指改善或逆转与下述疾病有关的至少一种可测量的生理参数：癌症和/或炎性疾病、病症或病状，其在受试者中不必须可辨别，但在受试者中可辨别。术语“治疗”、“治疗的”和“疗法”还可指使得疾病、病症或症状消退、阻碍其进展、或至少减缓其进展。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指减轻，预防与疾病、病症或症状(例如肿瘤，更优选地为癌症)相关的一种或多种症状的发展或发作，或减少其持续时间。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指预防疾病、病症或症状的复发。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指增加患有疾病、病症或症状的受试者的存活率。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指治愈受试者的疾病、病症或症状。
根据特定的实施方式，提供了用于治疗癌症和/或炎性疾病，病症或病状的组合物。对于癌症治疗，可以将提供的组合物与其他治疗方法结合使用，包括但不限于：化学疗法、抗CD20 mAb、抗TIM-3mAb、抗LAG-3mAb、抗EGFR mAb、抗HER-2单克隆抗体、抗CD19 mAb、抗CD33 mAb、抗CD47 mAb、抗CD73 mAb、抗DLL-3mAb、抗爱帕琳肽(apelin)mAb、抗TIP-1mAb、抗FOLR1 mAb、抗CTLA-4mAb、抗PD-L1 mAb、抗PD-1mAb、其他免疫肿瘤药物、抗血管生成剂、放射疗法、抗体-药物偶联物(ADC)、靶向疗法或其他抗癌药物。抗CLDN18.2抗体可与针对以下靶点的伴侣mAb共同构建双特异性抗体以治疗表达CLDN18.2和特定肿瘤相关抗原癌症/肿瘤：PD-1、PD-L1、LAG3、TIM-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD73、CD47的伴侣mAb的双特异性抗体、CD3、爱帕琳肽(apelin)、DLL-3、TIP-1、叶酸受体α(FOLR1)和/或其他肿瘤表面抗原。
如本文所用，向受试者施用两种或更多种疗法的上下文中，术语“联合”是指使用多于一种的疗法。使用的术语“联合”不限制向受试者施用的治疗的顺序。例如，向受试者施用第一种疗法(例如，本文所述的组合物)可以在施用第二种疗法之前(例如，提前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)，同时，或之后(例如，延后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)。
在另一个总体方面，本发明涉及确定受试者中CLDN18.2水平的方法。该方法包括(a)从受试者获得样品；(b)使样品与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者中CLDN18.2的水平。
如本文所用，“样品”是指从受试者分离的生物样品，可以包括但不限于全血、血清、血浆、血细胞、内皮细胞、活检组织(例如，癌组织、肝组织等)、淋巴液、腹水、组织液、骨髓、脑脊液、唾液、粘液、痰、汗液、尿液或任何其他分泌物、***物或其他体液。“血液样品”是指全血或其任何部分，包括血细胞、血清和血浆。
在某些实施方式中，可以使用选自但不限于Western印迹测定，免疫组织化学(IHC)和ELISA测定的测定来确定受试者中CLDN18.2的水平。相对蛋白水平可以通过蛋白质印迹分析和IHC来确定，绝对蛋白水平可以通过ELISA分析来确定。当确定CLDN18.2的相对水平时，可以确定至少两个样品之间的CLDN18.2水平，例如，在不同时间点来自同一受试者的样品之间，来自同一受试者的不同组织的样品之间和/或来自不同受试者的样本之间。可替代地，当例如通过ELISA测定法确定CLDN18.2的绝对水平时，可以通过在测试样品之前为ELISA测定法创建标准来确定样品中CLDN18.2的绝对水平。本领域技术人员将理解，利用本发明的抗体或其抗原结合片段，使用哪种分析技术确定来自受试者的样品中CLDN18.2的水平。
利用确定受试者样品中CLDN18.2水平的方法可诊断疾病中CLDN18.2水平异常(升高、降低或不足)，并做出适当的治疗决策。此类疾病可以选自但不限于癌症和炎性疾病。另外，通过监测受试者中CLDN18.2的水平，可以基于对特定疾病中和/或在特定疾病进展期间的CLDN18.2水平的了解，确定发生上述疾病的风险。
实施方式
本发明还提供以下非限制性实施方式。
实施方式1是分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下所述多肽序列：
(1)SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65；
(2)SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53；
(3)SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56；
(4)SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59；
(5)SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62；
(6)SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68；
(7)SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71；
(8)SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74；
(9)SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77；或
(10)SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合密蛋白18.2(CLDN18.2)，优选特异性结合人CLDN18.2。
实施方式2是分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下所述多肽序列：
(1)SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125；
(2)SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113；
(3)SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116；
(4)SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119；
(5)SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122；
(6)SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128；
(7)SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131；
(8)SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134；
(9)SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137；或
(10)SEQ ID NO：108、109、110、138、139和140；
其中抗体或其抗原结合片段特异性结合密蛋白18.2(CLDN18.2)，优选特异性结合人CLDN18.2。
实施方式3是实施方式1或2的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含具有与SEQ ID NO：9、1、3、5、7、11、13、15、17或19至少95％相同的多肽序列的重链可变区，或包含具有与SEQ ID NO：10、2、4、6、8、12、14、16、18或20至少95％相同的多肽序列的轻链可变区。
实施方式4是实施方式1或2的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含
(a)具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；
(j)具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
实施方式5是实施方式1-4中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
实施方式6是实施方式1-5中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
实施方式7是实施方式1-6中任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
实施方式8是实施方式7的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的人源化抗体或其抗原结合片段包括：
(a)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(j)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(k)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(l)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(m)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(n)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(o)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(p)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(q)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(r)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(s)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(t)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(u)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
实施方式9是实施方式1-8中任一项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中所述分离的人源化抗体或其抗原结合片段能够通过抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性吞噬作用(ADPC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)、和/或介导偶联药物的募集、和/或与另一种具有抗癌作用的单克隆抗体或其抗原结合片段形成双特异性抗体，诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
实施方式10是一种分离的核酸，其编码实施方式1-9中任一项的单克隆抗体或抗原结合片段。
实施方式11是一种载体，其包含如实施方式10所述分离的核酸。
实施方式12是一种宿主细胞，其包含如实施方式11所述的载体。
实施方式13是一种药物组合物，其包含如实施方式1-9中任一项所述分离的单克隆抗体或抗原结合片段，和药学上可接受的运载体。
实施方式14是一种靶向有此需要的受试者的癌细胞表面的CLDN18.2的方法，其包括向受试者施用实施方式13所述的药物组合物。
实施方式15是一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用实施方式13的药物组合物。
实施方式16是如实施方式15所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子***、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤、以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
实施方式17是在有此需要的受试者中治疗炎性疾病的方法，其包括向受试者施用如实施方式13所述的药物组合物。
实施方式18是产生实施方式1-9中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生该单克隆抗体或抗原结合片段的条件下培养包含编码该单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
实施方式19是制备包含实施方式1-9中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合以获得所述药物组合物。
实施例20是确定受试者中CLDN18.2水平的方法，该方法包括：
a.从受试者获得样品；
b.使所述样品与实施方式1至9中所述任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和
c.确定受试者中CLDN18.2的水平。
实施方式21是实施方式20的方法，其中所述样品是组织样品。
实施方式22是实施方式21的方法，其中所述组织样品是癌组织样品。
实施方式23是实施方式20的方法，其中所述样品是血液样品。
实施例
实施例1：抗CLDN18.2单克隆抗体的鉴定
用表达外源人CLDN18.2的细胞免疫小鼠，并通过荧光激活细胞分选术(FACS)测定血浆滴度。收获脾细胞并与骨髓瘤细胞系融合以产生杂交瘤。将杂交瘤接种到384孔板中，并使用表达CLDN18.2的HEK293细胞通过FACS筛选各个孔的上清液。通过FACS，对针对HEK293细胞上表达的人CLDN18.1的阳性克隆进行反筛选。分离顶端阳性克隆并测序。
表1和2提供了抗CLDN18.2单克隆抗体的重链和轻链可变区的序列，表3-6提供了抗CLDN18.2单克隆抗体的CDR区。
表1：抗CLDN18.2 mAb的重链可变区序列
Figure BDA0002672460460000361
Figure BDA0002672460460000371
VH：重链可变区
表2：抗CLDN18.2 mAb的轻链可变区序列
Figure BDA0002672460460000372
Figure BDA0002672460460000381
VL：轻链可变区
表3：抗CLDN18.2 mAb的重链CDR区1-3
mAb克隆 HC CDR1 NO HC CDR2 NO HC CDR3 NO
2-C3 GFTFSSYG 21 ISGGGSYT 22 ARQSRGNAMDY 23
2-P8 GYSFTGYN 24 IDPYNGVT 25 ARWGGNYVDY 26
3-E21 GFTFSKYA 27 ISNGGSYT 28 ARHDKGNALDY 29
3-P21 GYSFTGYN 30 INPYFGST 31 ARGAYYGNAMDY 32
5-E22 GYSFTGYN 33 IYPGSGNT 34 ARGFPYYAMDY 35
6-J11 GFIFSSFG 36 ISSGRSTM 37 ARGGFYGNSLDY 38
8-G12 GYAFSDYW 39 IYPGYGDT 40 ARWGYYGNAMDY 41
10-J10 GYTFTRYR 42 IDPSDSET 43 ARLNYGNCFDY 44
10-K2 GYAFTSYV 45 INPYSDGT 46 TRIYYGNAMDY 47
15-D6 GYTFTSYW 48 IYPGRSST 49 SRLSRGNAMDY 50
HC：重链；CDR：互补决定区；ID：SEQ ID NO
抗CLDN18.2 mAb的重链互补决定区通过IMGT方法测定(Lefranc，M.-P.等，Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)。
表4：抗CLDN18.2 mAb的轻链CDR区1-3
Figure BDA0002672460460000382
Figure BDA0002672460460000391
LC：轻链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
抗CLDN18.2 mAb的轻链互补决定区通过IMGT方法测定(Lefranc，M.-P.等，Nucleic Acids Res.1999；27:209-212)。
表5：抗CLDN18.2 mAb的重链CDR区1-3
Figure BDA0002672460460000392
HC：重链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
抗CLDN182 mAb的重链互补决定区通过联合IMGT(Lefranc，M-P等，Nucleic AcidsRes.1999；27：209-212)和Kabat(Elvin AKabat等，具有免疫学意义的蛋白质序列，第五版(1991))的方法测定。
表6：抗CLDN182 mAb的轻链CDR区1-3
Figure BDA0002672460460000401
LC：轻链；CDR：互补决定区；NO：SEQ ID NO
抗CLDN182 mAb的轻链互补决定区通过联合IMGT(Lefranc，M-P等，Nucleic AcidsRes.1999；27：209-212)和Kabat(Elvin AKabat等，具有免疫学意义的蛋白质序列，第五版(1991))的方法测定。
实施例2：从转染的293E细胞培养基中生产和纯化mAb
为了获得重组抗CLDN182嵌合mAb，将包含小鼠可变区(VH和VL)分别与人IgG1重链和κ轻链恒定区融合的表达载体瞬时转染到293E细胞中。使用A蛋白亲和色谱法纯化在293E细胞悬液中产生的重组抗体。
实施例3：纯化的抗CLDN182抗体的FACS结合分析
HEK293细胞用全长人CLDN182稳定转染，并转移到96孔板中。将约50,000个细胞与纯化的嵌合抗CLDN182 mAb(小鼠mAb的可变区分别与人IgG1重链和κ轻链的恒定区融合)以不同浓度在冰上孵育15分钟。在某些情况下，每孔使用100,000个细胞。将细胞离心5分钟，并用FACS缓冲液(补充有01％BSA和005％叠氮化钠的HBSS)洗涤一次。将细胞与FITC标记的山羊抗人IgG多克隆抗体(Thermo Fisher，目录号：H10301)孵育，在冰上孵育15分钟。将细胞用FACS缓冲液洗涤一次，并用FACS缓冲液重悬。通过Attune NxT检测细胞，并通过AttuneNxT软件分析数据。FACS数据通过平均荧光强度(MFI)表示。
通过全长人CLDN182(稳定细胞库)稳定转染HEK293细胞，通过FACS分析其与嵌合抗CLDN182 mAb的结合作用。图1A-1D中显示了剂量依赖的结合结果。通过全长人CLDN182和CLDN181(稳定细胞库)稳定转染的HEK293细胞，通过FACS分析其与嵌合抗CLDN182 mAb的结合作用。图2A-2E中显示了剂量依赖的结合结果。实验数据表明，这些mAb特异性结合CLDN182，不结合CLDN181。
利用表达全长人CLDN182的HEK293稳定细胞系(HEK293-CLDN182)，通过FACS分析嵌合抗CLDN182 mAb。FACS分析方法如上所述，除了最终的检测步骤使用Alexa
Figure BDA0002672460460000411
488(英杰公司,目录号:H10120)标记的F(ab’)2-山羊抗人IgG Fc进行。嵌合抗CLDN182mAb与HEK293-CLDN182稳定细胞系的剂量依赖的结合结果，如图3A-3C所示。每种嵌合mAb在76nM浓度时与HEK293-CLDN182稳定细胞系结合的直方图，如图4A-4J所示。这些实验数据表明，嵌合mAb特异性结合HEK293-CLDN182稳定细胞系。
实施例4：抗CLDN182 mAb的人源化
小鼠抗CLDN182单克隆抗体2-C3、5-E22、6-J11、3-E21和3-P21通过人源化以降低用于人类患者时潜在的免疫原性。将重链和轻链可变区(VH和VL)的序列与蛋白质数据库(PDB)中的人抗体序列进行比较，并建立同源性模型。将小鼠mAb的重链和轻链中的CDR移植到人框架中，该框架最有可能保持抗原结合所需的适当结构。在必要时，还设计了从人类残基到小鼠残基的反向突变或其他突变。表7显示了人源化VH和VL区的序列。
人源化的VH和VL区分别与人IgG1重链和κ轻链的恒定区融合。与mAb序列相对应的构建物用于293E或CHO细胞中的瞬时转染，以全长人CLDN182稳定转染HEK293细胞，通过FACS分析纯化的mAb与该细胞结合的能力。表8总结了使用HEK293-CLDN182稳定库与CLDN182结合的人源化mAb的EC50值。
人源化mAb与HEK293-CLDN182稳定库的剂量依赖性结合的结果如图5A-5G所示。FACS实验中基于FITC的检测结果如表8所示；FACS实验中基于Alexa
Figure BDA0002672460460000412
488的检测结果如5D-5G所示。
通过FACS分析，人源化的抗CLDN182 mAb与HEK293-CLDN182稳定细胞系的剂量依赖性的结合结果，如图6A-6E所示。通过FACS分析，人源化的抗CLDN182 mAb在685nM的mAb浓度下与癌细胞系NUGC-4的结合作用。人源化mAb与NUGC-4结合的结果如图7所示。基于
Figure BDA0002672460460000413
488的检测用于图6A-6E和7的实验中。
根据制造商提供的实验步骤，使用ADCC Reporter Bioassay Core试剂盒(普洛麦格公司,目录号G7010)测定单克隆抗体的抗体依赖的细胞毒性(ADCC)。简而言之，将每孔约12,500个HEK293-CLDN182细胞，与ADCC检测缓冲液中不同浓度的测试抗体在半面积96孔微孔板(康宁公司(Corning-Costar)，目录号3696)中混合。然后，每孔加入约37,500个ADCC生物测定效应细胞至最终体积375μL并混合。将孔板在37℃下不震荡孵育6小时。为了测量萤光素酶的活性，从每个孔中取出125μL的测定混合物，并加入25μL的Bio-Glo萤光素酶测定试剂。将板在室温下振荡孵育10分钟。将每孔30μL的混合物转移至白板(布兰德公司(BRAND)，目录号781621)，通过EnVision 2102多模式读板器测定其发光强度。五个人源化mAb和一个嵌合mAb的ADCC活性结果如图8A-8B所示。RLU为相对光单位。
表7：人源化抗CLDN182单克隆抗体的重链和轻链可变区的序列
Figure BDA0002672460460000421
Figure BDA0002672460460000431
表8：使用HEK293-CLDN182稳定库(测定)与CLDN182结合的人源化mAb的EC50值
Figure BDA0002672460460000432
Figure BDA0002672460460000441
2-C3-H1L1是指具有2-C3-H1重链可变区和2-C3-L1轻链可变区的mAb；表和文本中的所有其他人源化单克隆抗体均采用相同的命名规则。
本领域技术人员将认识到，可以在不脱离本发明的广泛发明构思的情况下对上述实施例进行改变。因此，应理解，本发明不限于所公开的特定实施例，而是旨在涵盖在本说明书所限定的本发明的精神和范围内的修改。
序列表
<110> 东莞凡恩世生物医药有限公司
<120> 抗密蛋白18.2抗体及其用途
<130> 689204.9WO
<150> US 62/640,288
<151> 2018-03-08
<150> US 62/714,254
<151> 2018-08-03
<160> 165
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Lys Val Ser Ser
115
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Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
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Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Arg Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Phe Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Cys Leu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Asn
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
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Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
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Asn Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
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Gly Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Lys Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Glu Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
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Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Arg Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Met Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Ser Cys Gln Asn
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Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Tyr Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Trp Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Thr Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Ala Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Arg Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
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Ala Arg Leu Asn Tyr Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Ser
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Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Phe Tyr Cys Gln Asn
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Asp Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Ser Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
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Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Arg Leu Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
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Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
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<212> PRT
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Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
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<400> 135
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<210> 141
<211> 261
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 141
Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile
1 5 10 15
Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr
20 25 30
Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly
35 40 45
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
50 55 60
Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65 70 75 80
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
85 90 95
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260
<210> 142
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Ala Asn Gln Leu Val
65 70 75 80
Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 144
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 145
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 146
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 148
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys His Ala Arg Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 151
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 152
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Arg Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 153
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Leu Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 154
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Leu Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 155
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Leu Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 156
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Lys Gly Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Asn Leu Gln Thr Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 158
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 159
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
Glu Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 161
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 162
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Lys Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Tyr Phe Gly Ser Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 163
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val
50 55 60
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85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
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100 105 110
Lys
<210> 165
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys

Claims (23)

1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下多肽序列：
a.SEQ ID NO：33、34、35、63、64和65；
b.SEQ ID NO：21、22、23、51、52和53；
c.SEQ ID NO：24、25、26、54、55和56；
d.SEQ ID NO：27、28、29、57、58和59；
e.SEQ ID NO：30、31、32、60、61和62；
f.SEQ ID NO：36、37、38、66、67和68；
g.SEQ ID NO：39、40、41、69、70和71；
h.SEQ ID NO：42、43、44、72、73和74；
i.SEQ ID NO：45、46、47、75、76和77；或
j.SEQ ID NO：48、49、50、78、79和80；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合密蛋白18.2(CLDN18.2)，优选人CLDN18.2。
2.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3，轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，分别具有以下多肽序列：
a.SEQ ID NO：93、94、95、123、124和125；
b.SEQ ID NO：81、82、83、111、112和113；
c.SEQ ID NO：84、85、86、114、115和116；
d.SEQ ID NO：87、88、89、117、118和119；
e.SEQ ID NO：90、91、92、120、121和122；
f.SEQ ID NO：96、97、98、126、127和128；
g.SEQ ID NO：99、100、101、129、130和131；
h.SEQ ID NO：102、103、104、132、133和134；
i.SEQ ID NO：105、106、107、135、136和137；或
j.SEQ ID NO：108、109、110、138、139和140；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合密蛋白18.2(CLDN18.2)，优选人CLDN18.2。
3.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区或轻链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO：9、1、3、5、7、11、13、15、17或19至少95％的同一性的多肽序列，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO：10、2、4、6、8、12、14、16、18或20至少95％的同一性的多肽序列。
4.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包含：
a.具有SEQ ID NO：9所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10所示多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：1所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2所示多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：3所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4所示多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：5所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6所示多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：7所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8所示多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：11所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12所示多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：13所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14所示多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：15所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16所示多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：17所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18所示多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：19所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20所示多肽序列的轻链可变区。
5.如权利要求1至4中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
6.如权利要求1至5中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
7.如权利要求1至6中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
8.如权利要求7所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的人源化抗体或其抗原结合片段包括：
(a)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQ ID NO：142所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：144所示多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQ ID NO：143所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：145所示多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQ ID NO：146所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：148所示多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：149所示多肽序列的轻链可变区；
(j)具有SEQ ID NO：147所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：150所示多肽序列的轻链可变区；
(k)具有SEQ ID NO：151所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(l)具有SEQ ID NO：152所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：153所示多肽序列的轻链可变区；
(m)具有SEQ ID NO：154所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(n)具有SEQ ID NO：155所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：157所示多肽序列的轻链可变区；
(o)具有SEQ ID NO：156所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：158所示多肽序列的轻链可变区；
(p)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(q)具有SEQ ID NO：159所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(r)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：163所示多肽序列的轻链可变区；
(s)具有SEQ ID NO：160所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：164所示多肽序列的轻链可变区；
(t)具有SEQ ID NO：161所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区；或
(u)具有SEQ ID NO：162所示多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：165所示多肽序列的轻链可变区。
9.如权利要求1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、依赖性吞噬作用(ADPC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)、和/或介导偶联药物的募集、和/或与另一种具有抗癌作用的单克隆抗体或其抗原结合片段形成双特异性抗体，诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解。
10.一种分离的核酸，其编码如权利要求1至9中所述任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段。
11.一种载体，包含如权利要求10所述的分离的核酸。
12.一种宿主细胞，包含如权利要求11所述的载体。
13.一种药物组合物，包含如权利要求1至9中所述任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的运载体。
14.一种靶向有此需要的受试者的癌细胞表面CLDN18.2的方法，包括向所述受试者施用如权利要求13所述的药物组合物。
15.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向所述受试者施用如权利要求13所述的药物组合物。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述癌症选自下组：肺癌、胃癌、食道癌、胆管癌、胆管癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、转移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子***、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤、以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
17.一种在有此需要的受试者中治疗炎性疾病的方法，包括向所述受试者施用如权利要求13所述的药物组合物。
18.一种制备权利要求1至9中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段的方法，包括在产生所述的单克隆抗体或抗原结合片段的条件下培养包含编码单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或培养物中回收所述的抗体或抗原结合片段。
19.一种制备包含权利要求1至9中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或抗原结合片段与药学上可接受的运载体组合，以获得所述药物组合物。
20.一种确定受试者中CLDN18.2水平的方法，该方法包括：
a.从受试者获得样品；
b.使所述样品与权利要求1至9中所述任一项的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和
c.确定受试者中CLDN18.2的水平。
21.如权利要求20所述的方法，所述样品是组织样品。
22.如权利要求21所述的方法，所述组织样品是癌组织样品。
23.如权利要求20所述的方法，所述样品是血液样品。
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