EA046422B1 - Антитела против рецептора фолата 1 и их применения - Google Patents
Антитела против рецептора фолата 1 и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA046422B1 EA046422B1 EA202092125 EA046422B1 EA 046422 B1 EA046422 B1 EA 046422B1 EA 202092125 EA202092125 EA 202092125 EA 046422 B1 EA046422 B1 EA 046422B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- chain variable
- variable region
- polypeptide sequence
- light chain
- Prior art date
Links
- 229940014144 folate Drugs 0.000 title description 3
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 title description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 title description 3
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 338
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 336
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 335
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 162
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 162
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 162
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 150
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 19
- 101001023230 Homo sapiens Folate receptor alpha Proteins 0.000 claims description 17
- 102000053180 human FOLR1 Human genes 0.000 claims description 16
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100035139 Folate receptor alpha Human genes 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 description 77
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 description 77
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 description 46
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 39
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 34
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 23
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 12
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- -1 imidomerea Chemical compound 0.000 description 5
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 4
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 101001039269 Rattus norvegicus Glycine N-methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N levomefolic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 ZNOVTXRBGFNYRX-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 3
- 235000007635 levomefolic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011578 levomefolic acid Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000018746 Apelin Human genes 0.000 description 2
- 108010052412 Apelin Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100036221 Tax1-binding protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 101710193790 Tax1-binding protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N apelin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(O)=O)CCC1 BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 208000023747 urothelial carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N (S)-chlorphenesin Chemical compound OC[C@H](O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035437 1,3-propanediol Drugs 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 240000008564 Boehmeria nivea Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 1
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102100036466 Delta-like protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 229920003115 HPC-SL Polymers 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000928513 Homo sapiens Delta-like protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940126528 Immuno-Oncology Drug Drugs 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002463 Sveinsson chorioretinal atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039127 Tyrosine-protein kinase receptor TYRO3 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(=[NH2+])C1=CC=CC=C1 LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- 229960003993 chlorphenesin Drugs 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940127276 delta-like ligand 3 Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M ethylmercurithiosalicylic acid Chemical compound CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C(O)=O HXQVQGWHFRNKMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- OJTDGPLHRSZIAV-UHFFFAOYSA-N propane-1,2-diol Chemical compound CC(O)CO.CC(O)CO OJTDGPLHRSZIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000011524 similarity measure Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000006076 specific stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 229920003176 water-insoluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет Предварительной патентной заявки США No. 62/642213, поданной 13 марта 2018 г., полное содержание описания которой приведено в настоящем документе в качестве ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам против рецептора фолата 1 (FOLR1), к нуклеиновым кислотам и экспрессирующим векторам, кодирующим антитела, к рекомбинантным клеткам, содержащим векторы, и к композициям, содержащим антитела. Настоящее изобретение относится также к способам получения антител и к способам применения антител для лечения заболеваний, включая злокачественные опухоли.
Ссылка на список последовательностей, принятый в электронной форме
Настоящая заявка содержит список последовательностей, принятый в электронной форме через EFS-Web как список последовательностей в формате ASCII с наименованием файла 689204-11WO Sequence Listing и датой создания 6 марта 2019 г. и имеющий размер 64 кБ. Список последовательностей, принятый через EFS-Web, составляет часть описания, и его полное содержание приведено в настоящем описании в качестве ссылки.
Уровень техники для изобретения
Рецептор фолата 1 (FOLR1), также известный как рецептор фолата α (FRa) или связывающий фолат белок (FBP), представляет собой заякоренный гликофосфатидилинозитолом (GPI) мембранный белок на клеточной поверхности, который имеет высокую аффинность для активной формы фолата, 5метилтетрагидрофолата (5-MTF), и транспортирует ее и ее производные в клетки (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007; 26:141-52). FOLR1 стал мишенью в онкологии, поскольку он имеет сверхэкспрессию на конкретных солидных опухолях, например, яичника, легкого и молочной железы (Toffoli et al., Int J Cancer 1997; 74:193-198 и Boogerd et al., Oncotarget 2016; 7:17442-17454), но его экспрессия находится на низких уровнях в ограниченном количестве нормальных тканей человека (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). В соответствии с этим наблюдением, клинические исследования фазы 1, проведенные до настоящего времени с нацеленными на FOLR1 малыми и крупными молекулами, выявили хорошую переносимость лекарственного средства (Cheung et al., Oncotarget 2016; 7:52553-52574). Таким образом, FOLR1 является опухолеассоциированным/опухолеспецифическим антигеном, и моноклональные антитела (rnAb) против FOLR1 можно использовать в качестве потенциальных противораковых терапевтических средств.
Краткое изложение сущности изобретения
В одном общем аспекте, изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связывают FOLR1.
Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; или
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, содержащим определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; или
h) SEQ ID NO: 83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
- 1 046422
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12; или
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным. В конкретных вариантах осуществления, гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
- 2 046422 (9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.
В конкретных вариантах осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает FOLR1 и является способным индуцировать опосредованный эффекто
- 3 046422 рами лизис клеток опухоли.
Настоящее изобретение относится также к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.
Настоящее изобретение относится также к векторам, содержащим выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.
Настоящее изобретение относится также к клеткам-хозяевам, содержащим векторы, содержащие выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению.
В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение относится также к способам лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающим введение субъекту фармацевтической композиции по изобретению. Злокачественная опухоль может представлять собой любую жидкую или солидную злокачественную опухоль, например, она может быть выбрана, но без ограничения, из рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, печеночноклеточной карциномы, почечноклеточной карциномы, уротелиальной карциномы мочевого пузыря, метастазирующей меланомы, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, глиомы, глиобластомы и других солидных опухолей, и неходжскинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелогенного лейкоза (CML), множественной миеломы (ММ), острого миелоидного лейкоза (AML) и других жидких опухолей.
Настоящее изобретение относится также к способам получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению.
Способы включают культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры.
Настоящее изобретение относится также к способам получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Способы включают объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.
Настоящее изобретение относится также к способам определения уровня FOLR1 у субъекта.
Способы включают (а) получение образца от субъекта; (b) приведение образца в контакт с выделенным моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по изобретению; и (с) определение уровня FOLR1 у субъекта.
Образец может, например, представлять собой образец ткани или образец крови. Образец ткани может, например, представлять собой образец ткани злокачественной опухоли.
Краткое описание чертежей
Приведенное выше краткое изложение сущности изобретения, так же как следующее подробное описание предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения, станет лучше понятным при чтении в сочетании с прилагаемыми чертежами. Следует понимать, однако, что изобретение не ограничено точными вариантами осуществления, показанными на чертежах.
На фиг. 1А-1В показано связывание очищенных мышиных mAb против FOLR1 с клетками СНО, стабильно экспрессирующими FOLR1 человека, как показано посредством анализа FACS.
На фиг. 2А-2С показаны результаты для зависимого от дозы связывания химерных mAb против FOLR1 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.
На фиг. 3A-3D показаны результаты для зависимого от дозы связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками SK-OV-3 в анализе FACS.
На фиг. 4А-4С показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F5 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.
На фиг. 5А-5В показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F10 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.
На фиг. 6А-6В показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F17 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.
На фиг. 7A-7D показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb F20 с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в анализе ELISA.
На фиг. 8A-8J показаны результаты для зависимого от дозы связывания гуманизированных mAb с клетками SK-OV-3. Фиг. 8А, данные для гуманизированных mAb F5; фиг. 8B-8D, данные для гуманизированных mAb F10; фиг. 8Е, данные для гуманизированного mAb F17 mAb; фиг. 8F-8J, данные для гуманизированных mAb F20.
На фиг. 9 показаны результаты для активности антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) четырех гуманизированных mAb против FOLR1.
- 4 046422
Подробное описание изобретения
Различные публикации, статьи и патенты процитированы или описаны в разделе уровень техники и на протяжении описания; полное содержание каждой из этих ссылок приведено в настоящем описании в качестве ссылки. Обсуждение документов, актов, материалов, устройств, изделий или т.п., которое включено в настоящее описание, приведено с целью предоставления контекста по изобретению. Такое обсуждение не является признанием того, что любой или все из этих объектов составляют часть предшествующего уровня техники, применительно к любым описанным или заявленным изобретениям.
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое является общепринятым для специалиста в области, к которой относится настоящее изобретение. В ином случае, конкретные термины, используемые в настоящем описании, имеют значения, как указано в описании.
Следует отметить, что, как используют в настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают объекты ссылки множественного числа, если контекст явно не требует иного.
Если не указано иное, любые числовые значения, такие как концентрация или диапазон концентраций, описанные в настоящем описании, следует понимать, как модифицированные во всех случаях термином приблизительно. Таким образом, числовое значение, как правило, включает ±10% от указанного значения. Например, концентрация 1 мг/мл включает 0,9-1,1 мг/мл. Подобным образом, диапазон концентраций 1-10% (мас./об.) включает 0,9-11% (мас./об.). В рамках изобретения, использование числового значения явно включает все возможные поддиапазоны, все индивидуальные числовые значения в пределах этого диапазона, включая целые числа в пределах таких диапазонов и дроби значений, если контекст явно не указывает на иное.
Если не указано иное, термин по меньшей мере, предшествующий сериям элементов, следует понимать как относящийся к каждому элементу в сериях. Специалисту в данной области известно, или он является способным определить с использованием не более, чем общепринятых экспериментов, множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных в настоящем описании. Такие эквиваленты предназначены для включения в изобретение.
В рамках изобретения, термины содержит, содержащий, включает, включая, имеет, имеющий, содержит или содержащий, или любые другие их варианты, понимают как подразумевающие включение указанного целого или группы целых, но не как исключение любого другого целого или группы целых, и они предназначены, чтобы является неисключительными или неограничивающими. Например, композиция, смесь, процесс, способ, изделие или устройство, которые включают список элементов, не обязательно ограничены только этими элементами, но могут включать другие элементы, явно не перечисленные или не присущие таким композиции, смеси, процессу, способу, изделию или устройству. Кроме того, если явно не указано обратное, или относится к включительному или, а не к исключительному или. Например, условие А или В удовлетворено посредством любого из следующего: А является истинным (или присутствует) и В является ложным (или не присутствует), А является ложным (или не присутствует) и В является истинным (или присутствует), и А и В оба являются истинными (или присутствуют).
В рамках изобретения, соединительный термин и/или между множеством перечисленных элементов понимают как включающий как индивидуальные, так и объединенные варианты. Например, когда два элемента соединены посредством и/или, первый вариант относится к применимости первого элемента в отсутствие второго. Второй вариант относится к применимости второго элемента в отсутствие первого. Третий вариант относится к применимости первого и второго элементов совместно. Любой из этих вариантов понимают как включенный в значение, и таким образом, удовлетворяющий требованию термина и/или, в рамках изобретения. Одновременную применимость более одного из вариантов также понимают как включенную в значение, и таким образом, удовлетворяющую требованию термина и/или.
В рамках изобретения, термин состоит из или его варианты, такие как состоят из или состоящий из, как используют на протяжении описания и формулы изобретения, указывает на включение любого из указанного целого или группы целых, однако на то, что никакие дополнительные целое или группа целых не могут быть добавлены к указанному способу, структуре или композиции.
В рамках изобретения, термин в основном состоит из или варианты, такие как в основном состоят из или в основном состоящий из, как используют на протяжении описания и формулы изобретения, указывает на включение любого из указанного целого или группы целых, и необязательное включение любого из указанного целого или группы целых, которые существенно не изменяют основные или новые свойства указанного способа, структуры или композиции. См. М.Р.Е.Р. § 2111.03.
В рамках изобретения, субъект обозначает любое животное, предпочтительно, млекопитающее, наиболее предпочтительно, человека. Термин млекопитающее, в рамках изобретения, включает любое млекопитающее. Примеры млекопитающих включают, но без ограничения, коров, лошадей, овец, свиней, кошек, собак, мышей, крыс, кроликов, морских свинок, обезьян, человека и т.д., более предпочтительно, человека.
- 5 046422
Термины справа, слева, ниже и выше обозначают направления на чертежах, на которые сделана ссылка.
Следует также понимать, что термины приблизительно, около, как правило, по существу и подобные термины, используемые в настоящем описании, применительно к измерению или характеристике компонента предпочтительного изобретения, указывают на то, что описанное измерение/характеристика не является точной границей или параметром, и не исключают незначительных отклонений от них, которые являются функционально одинаковыми или сходными, как понятно специалисту в данной области. Как минимум, такие ссылки, включающие числовой параметр, включают отклонения, которые, с использованием математических и промышленных принципов, принятых в данной области (например, округления, ошибок измерения или других систематических ошибок, технологических допусков и т.д.), не изменяют наименьшую значащую цифру.
Термины идентичный или процент идентичности, в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей (например, антитела против FOLR1 и кодирующие их полинуклеотиды, полипептиды FOLR1 и кодирующие их полинуклеотиды FOLR1), относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют указанный процент аминокислотных остатков или нуклеотидов, которые являются одинаковыми, при сравнении и выравнивании для максимального соответствия, как измерено с использованием одного из следующих алгоритмов сравнения последовательностей, или посредством визуальной проверки.
Для сравнения последовательностей, как правило, одна последовательность служит в качестве эталонной последовательности, с которой сравнивают тестируемые последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей, тестируемые и эталонные последовательности вводят в компьютер, назначают координаты подпоследовательности, при необходимости, и назначают параметры алгоритма программы сравнения последовательностей. Затем алгоритм сравнения последовательностей рассчитывает процентную идентичность последовательностей для тестируемой последовательности(последовательностей), относительно эталонной последовательности, на основании назначенных параметров программы.
Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, посредством алгоритма локальной гомологии Смита и Уотермана, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), посредством алгоритма выравнивания областей гомологии Нидлмана и Вунша, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), посредством способа поиска сходства Пирсона и Липмана, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), посредством компьютеризированных осуществлений этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI) или посредством визуальной проверки (см., в общем, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)).
Примерами алгоритмов, пригодных для определения процентной идентичности последовательностей и сходства последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, описанные в Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, соответственно. Программное обеспечение для проведения анализов BLAST является публично доступным через Национальный центр биотехнологической информации. Этот алгоритм включает сначала идентификацию пар последовательностей с высоким показателем сходства (HSP) посредством идентификации коротких слов длиной W в запрашиваемой последовательности, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому положительному пороговому показателю Т при выравнивании со словом такой же длины в последовательности из базы данных. Т обозначает пороговую оценку сходства соседних слов (Altschul et al, выше). Эти исходные попадания в соседнее слово действуют в качестве затравок для инициации поисков с целью найти более длинные HSP, содержащие их. Попадания в слова затем расширяют в обоих направлениях вдоль каждой последовательности, пока кумулятивный показатель выравнивания может увеличиваться.
Кумулятивные показатели рассчитывают с использованием, для нуклеотидных последовательностей, параметров М (показатель вознаграждения за пару совпадающих остатков; всегда >0) и N (показатель штрафа за несовпадающие остатки; всегда <0). Для аминокислотных последовательностей, оценочную матрицу используют для расчета кумулятивного показателя. Расширение попадания в слова в каждом направлении прекращают, когда: кумулятивный показатель выравнивания уменьшается на значение X от его максимально достигнутого значения; кумулятивный показатель стремится к нулю или ниже, изза накопления одного или нескольких отрицательно оцениваемых выравниваний остатков; или достигнут конец какой-либо из последовательностей. Параметры алгоритма BLAST W, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) используют по умолчанию длину слова (W) 11, ожидание (Е) 10, М=5, N=-4 и сравнение обеих цепей. Для аминокислотных последовательностей, в программе BLASTP используют по умолчанию длину слова (W) 3 и ожидание (Е) 10, и оценочную матрицу BLOSUM62 (см. Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)).
- 6 046422
В дополнение к расчету процента идентичности последовательностей, алгоритм BLAST осуществляет также статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). Одним из измерений сходства, предоставленных алгоритмом BLAST, является наименьшая сумма вероятностей (P(N)), которая указывает на вероятность, с которой совпадение двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей может происходить случайно. Например, нуклеиновую кислоту считают сходной с эталонной последовательностью, если наименьшая сумма вероятностей при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет менее приблизительно 0,1, более предпочтительно, менее приблизительно 0,01 и наиболее предпочтительно, менее приблизительно 0,001.
Дополнительным указанием на то, что две последовательности нуклеиновой кислоты или два полипептида являются в основном идентичными, является то, что полипептид, кодируемый первой нуклеиновой кислотой, обладает иммунологической перекрестной реакционной способностью по отношению к антителам, образованным против полипептида, кодированного второй нуклеиновой кислотой, как описано ниже. Таким образом, полипептид, как правило, является в основном идентичным второму полипептиду, например, когда два пептида отличаются только консервативными заменами. Другим указанием на то, что две последовательности нуклеиновой кислоты являются в основном идентичными, является то, что эти две молекулы гибридизуются друг с другом в строгих условиях.
Антитела.
Изобретение, в общем, относится к выделенным антителам против FOLR1, нуклеиновым кислотам и экспрессирующим векторам, кодирующим антитела, к рекомбинантным клеткам, содержащим векторы, и к композициям, содержащим антитела. Изобретение также относится к способам получения антител и способам применения антител для лечения заболеваний, включая злокачественную опухоль. Антитела по изобретению обладают одним или несколькими желательными функциональными свойствами, включая, но без ограничения, высоко аффинное связывание с FOLR1, высокую специфичность для FOLR1 и способность ингибировать рост опухоли у нуждающихся в этом субъектов и в моделях на животных, при введении отдельно или в комбинации с другими видами противораковой терапии.
В общем аспекте, изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связывают FOLR1.
В рамках изобретения, термин антитело используют в широком смысле, и он включает молекулы иммуноглобулина или антитела, включая человеческие, гуманизированные, композитные и химерные антитела и фрагменты антител, которые являются моноклональными или поликлональными. Как правило, антитела представляют собой белковые или пептидные цепи, имеющие специфичность связывания для специфического антигена. Структуры антител хорошо известны. Иммуноглобулины можно приписать к пяти главным классам (т.е. IgA, IgD, IgE, IgG и IgM), в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелой цепи. IgA и IgG далее подклассифицируют как изотипы IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Соответственно, антитела по изобретению могут принадлежать к любому из пяти главных классов или соответствующих подклассов. Предпочтительно, антитела по изобретению представляют собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Легкие цепи антител из видов позвоночных можно приписать к одному из двух явно отличающихся типов, а именно каппа и лямбда, на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов. Соответственно, антитела по изобретению могут содержать константный домен легкой цепи каппа или лямбда. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, антитела по изобретению включают константные области тяжелой и/или легкой цепи из крысиных или человеческих антител. В дополнение к тяжелым и легким константным доменам, антитела содержит антигенсвязывающую область, состоящую из вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, каждая из которых содержит три домена (т.е. определяющие комплементарность области 1-3; CDR1, CDR2 и CDR3). Домены вариабельной области легкой цепи, альтернативно обозначены как LCDR1, LCDR2 и LCDR3, и домены вариабельной области тяжелой цепи альтернативно обозначены как HCDR1, HCDR2 и HCDR3.
В рамках изобретения, термин выделенное антитело относится к антителу, которое является в основном свободным от других антител, имеющих другую антигенную специфичность (например, выделенное антитело, которое специфически связывает FOLR1, является в основном свободным от антител, которые не связывают FOLR1). Кроме того, выделенное антитело является в основном свободным от другого клеточного материала и/или химических веществ.
В рамках изобретения, термин моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела по изобретению можно получать посредством способа гибридомы, технологии фагового дисплея, технологии клонирования генов из отдельных лимфоцитов или способов рекомбинантной ДНК. Например, моноклональные антитела можно получать посредством гибридомы, включающей В-клетку, полученную из трансгенного не относящегося к человеку животного, такого как трансгенная мышь или крыса, имеющего геном, содержащий человеческий трансген тяжелой цепи и трансген легкой цепи.
- 7 046422
В рамках изобретения, термин антигенсвязывающий фрагмент относится к фрагменту антитела, например, такому как диатело, Fab, Fab', F(ab')2, фрагмент Fv, стабилизированный дисульфидным мостиком фрагмент Fv (dsFv), (dsFv)2, биспецифический dsFv (dsFv-dsFv'), стабилизированное дисульфидным мостиком диатело (ds диатело), одноцепочечная молекула антитела (scFv), однодоменное антитело (sdab), димер scFv (двухвалентное диатело), мультиспецифическое антитело, образованное из части антитела, содержащей одну или несколько CDR, камелизированное однодоменное антитело, наноантитело, доменное антитело, двухвалентное доменное антитело, или любой другой фрагмент антитела, который связывается с антигеном, но не содержит полную структуру антитела. Антигенсвязывающий фрагмент является способным связываться с тем же самым антигеном, с которым связывается исходное антитело или фрагмент исходного антитела. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, константную область легкой цепи и фрагмент Fd тяжелой цепи. В соответствии с другими конкретными вариантами осуществления, антигенсвязывающий фрагмент содержит Fab и F(ab').
В рамках изобретения, термин одноцепочечное антитело относится к общепринятому в данной области одноцепочечному антителу, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соединенные коротким пептидом из от приблизительно 15 до приблизительно 20 аминокислот. В рамках изобретения, термин однодоменное антитело относится к общепринятому в данной области однодоменному антителу, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, или которое содержит только вариабельную область тяжелой цепи.
В рамках изобретения, термин человеческое антитело относится к антителу, продуцируемому человеком, или к антителу, имеющему аминокислотную последовательность, соответствующую антителу, продуцируемому человеком, полученному с использованием любого способа, известного в данной области. Это определение человеческого антитела включает интактные или полноразмерные антитела, их фрагменты и/или антитела, содержащие по меньшей мере один полипептид человеческой тяжелой и/или легкой цепи.
В рамках изобретения, термин гуманизированное антитело относится к не относящемуся к человеку антителу, модифицированному для увеличения гомологии последовательности с последовательностью человеческого антитела, таким образом, чтобы антигенсвязывающие свойства антитела сохранялись, но его антигенность в организме человека уменьшалась.
В рамках изобретения, термин химерное антитело относится к антителу, где аминокислотная последовательность молекулы иммуноглобулина происходит из двух или более видов. Вариабельная область как легкой, так и тяжелой цепей, часто соответствует вариабельной области антитела, происходящего из одного вида млекопитающего (например, мыши, крысы, кролика и т.д.), имеющего желательную специфичность, аффинность и емкость, в то время как константные области соответствуют последовательностям антитела, происходящим из другого вида животного (например, человека), чтобы исключить вызов иммунного ответа у этого вида.
В рамках изобретения, термин мультиспецифическое антитело относится к антителу, содержащему множество последовательностей вариабельного домена иммуноглобулина, где последовательность первого вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательность второго вариабельного домена иммуноглобулина из множества имеет специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на одном и том же антигене, например, на одном и том же белке (или субъединице мультимерного белка). В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы перекрываются или в основном перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы не перекрываются или в основном не перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на различных антигенах, например, на различных белках (или на различных субъединицах мультимерного белка). В одном варианте осуществления, мультиспецифическое антитело содержит третий, четвертый или пятый вариабельный домен иммуноглобулина. В одном варианте осуществления, мультиспецифическое антитело представляет собой молекулу биспецифического антитела, молекулу триспецифического антитела, или молекулу тетраспецифического антитела.
В рамках изобретения, термин биспецифическое антитело относится к мультиспецифическому антителу, связывающему не более двух эпитопов или двух антигенов. Биспецифическое антитело характеризуется последовательностью первого вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательностью второго вариабельного домена иммуноглобулина, имеющего специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на одном и том же антигене, например, на одном и том же белке (или субъединице мультимерного белка). В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы перекрываются или в основном перекрываются. В одном варианте осуществления, первый и второй эпитопы находятся на различных антигенах, например, на различных белках (или на различных субъединицах мультимерного белка). В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена лег
- 8 046422 кой цепи, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и последовательность вариабельного домена тяжелой цепи и последовательность вариабельного домена легкой цепи, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит полуантитело или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и полуантитело или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, биспецифическое антитело содержит scFv или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для первого эпитопа, и scFv или его фрагмент, имеющие специфичность связывания для второго эпитопа. В одном варианте осуществления, первый эпитоп локализован на FOLR1, и второй эпитоп локализован на PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD47, CD73, апелине, DLL3, клаудине 18.2, TIP-1, CD3 и/или других опухолеассоциированных иммуносупрессорах или поверхностных антигенах.
Как применяют в настоящем документе, термин FOLR1 относится к рецептору фолата 1 (FOLR1), также известному как рецептор фолата α (FRa) или связывающий фолат белок (FBP), представляющий собой заякоренный гликофосфатидилинозитолом (GPI) мембранный белок на клеточной поверхности, который имеет высокую аффинность для активной формы фолата, 5-метилтетрагидрофолата (5-MTF), и транспортирует ее и ее производные в клетки (Salazar and Ratnam, Cancer Metastasis Rev 2007; 26:141-52). FOLR1 стал мишенью в онкологии, поскольку он имеет сверхэкспрессию на конкретных солидных опухолях, например, яичника, легкого и молочной железы (Toffoli et al., Int J Cancer 1997; 74:193-198 и Boogerd et al., Oncotarget 2016; 7:17442-17454), но его экспрессия находится на низких уровнях в ограниченном количестве нормальных тканей человека (Weitman, et al., Cancer Res 1992; 52:3396-3401). В соответствии с этим наблюдением, клинические исследования фазы 1, проведенные до настоящего времени с нацеленными на FOLR1 малыми и крупными молекулами, выявили хорошую переносимость лекарственного средства (Cheung et al., Oncotarget 2016; 7:52553-52574). Таким образом, FOLR1 является опухолеассоциированным/опухолеспецифическим антигеном, и моноклональные антитела (mAb) против FOLR1 могут являться потенциальными противораковыми терапевтическими средствами. Кроме того, FOLR1 можно использовать для специфического нацеливания терапевтических молекул на клетки злокачественных опухолей. Иллюстративная аминокислотная последовательность FOLR1 человека представлена посредством No. доступа в GenBank NP_057937 (SEQ ID NO:135).
В рамках изобретения, антитело, которое специфически связывает FOLR1 относится к антителу, которое связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека, с KD 1 х 10-7 М или менее, предпочтительно, 1х 10-8 М или менее, более предпочтительно, 5х10-9 М или менее, 1х10-9 М или менее, 5х10-10 М или менее или 1х 10-10 М или менее. Термин KD относится к константе диссоциации, которая получена из отношения Kd к Ка (т.е. Kd/Ka) и выражена как молярная концентрация (М). Значения KD для антитела можно определять с использованием принятых в данной области способов, в свете настоящего описания. Например, KD антитела можно определять с использованием поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием системы биосенсора, например, системы Biacore®, или с использованием технологии интерферометрии биослоя, например, системы Octet RED96.
Чем меньше значение KD антитела, тем выше аффинность, с которой антитело связывается с антигеном-мишенью.
В соответствии с конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; или
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
В соответствии с конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;
- 9 046422
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; или
h) SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную одной из SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную одной из SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14. В соответствии с одним предпочтительным вариантом осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14, соответственно.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту по изобретению, содержащему:
a) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12; или
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и
- 10 046422
LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:2. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO: 1; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:4. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:6. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:8. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:10. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID
- 11 046422
NO:10.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:12. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:14. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO: 86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:16. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO: 65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:2. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID
- 12 046422
NO:4. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:6. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:8. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:10. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:12. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:11; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:12.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно. В другом варианте осуществления, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или
- 13 046422 более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 85%, предпочтительно, на 90%, более предпочтительно, на 95% или более, например, на 95, 96, 97, 98 или 99%, идентичную SEQ ID NO:14. Предпочтительно, выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:13; и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:14.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.
В соответствии с другим конкретным аспектом, изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным.
В соответствии с другим конкретным аспектом, гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID
- 14 046422
NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.
В другом общем аспекте, изобретение относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Специалисту в данной области понятно, что кодирующую последовательность белка можно изменять (например, заменять, делетировать, вставлять и т.д.) без изменения аминокислотной последовательности белка. Соответственно, специалисту в данной области понятно, что последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты по изобретению, можно изменять без изменения аминокислотных последовательностей белков.
В другом общем аспекте, изобретение относится к вектору, содержащему выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Можно использовать любой вектор, известный специалисту в данной области в свете настоящего описания, такой как плазмида, космида, фаговый вектор или вирусный вектор. В некоторых вариантах осуществления, вектор представляет собой рекомбинантный экспрессирующий вектор, такой как плазмида. Вектор может включать любой элемент для осуществления общепринятой функции экспрессирующего вектора, например, промотор, элемент для связывания рибосомы, терминатор, энхансер, селективный маркер и точку начала репликации. Промотор может представлять собой конститутивный, индуцируемый или репрессируемый промотор. Ряд экспрессирующих векторов, способных к доставке нуклеиновых кислот в клетку, известны в данной области и могут быть использованы в настоящем описании для продукции антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в клетке. Общепринятые способы клонирования или искусственный синтез генов можно использовать для получения рекомбинантного экспрессирующего вектора в соответствии с вариантами осуществления изобретения. Такие способы хорошо известны специалисту в данной области в свете настоящего описания.
В другом общем аспекте, изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению. Любую клетку-хозяина, известную специалисту в данной области в свете настоящего описания, можно использовать для рекомбинантной экспрессии антител или их антигенсвязывающих фраг
- 15 046422 ментов по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, клетки-хозяева представляют собой клетки Е. coli TGI или BL21 (для экспрессии, например, scFv или Fab антитела), клетки CHO-DG44 или СНО-К1, или НЕК293 (для экспрессии, например, полноразмерного антитела IgG). В соответствии с конкретными вариантами осуществления, рекомбинантным экспрессирующим вектором трансформируют клетки-хозяева общепринятыми способами, такими как химическая трансфекция, тепловой шок или электропорация, где он стабильно интегрирует в геном клетки-хозяина, таким образом, чтобы рекомбинантная нуклеиновая кислота эффективно экспрессировалась.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, включающему культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры клеток (например, из супернатанта). Экспрессированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно собирать из клеток и очищать в соответствии с общепринятыми способами, известными в данной области, и как описано в настоящем описании.
Фармацевтические композиции.
В другом общем аспекте, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Термин фармацевтическая композиция, в рамках изобретения обозначает продукт, содержащий антитело по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Антитела по изобретению и содержащие их композиции также можно использовать в изготовлении лекарственного средства для терапевтических применений, упомянутых в настоящем описании.
В рамках изобретения, термин носитель относится к любому расширителю, разбавителю, наполнителю, соли, буферу, стабилизатору, солюбилизатору, маслу, липиду, содержащей липид везикуле, микросфере, липосомной инкапсуляции или другому материалу, хорошо известному в данной области для использования в фармацевтических составах. Понятно, что характеристики носителя, наполнителя или разбавителя могут зависеть от способа введения для конкретного применения. В рамках изобретения, термин фармацевтически приемлемый носитель относится к нетоксичному материалу, который не создает помех для эффективности композиции по изобретению или для биологической активности композиции по изобретению. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, в свете настоящего описания, любой фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для использования в фармацевтической композиции антитела, можно использовать по изобретению.
Получение состава фармацевтически активных ингредиентов с фармацевтически приемлемыми носителями известно в данной области, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (например, 21st edition (2005), и любые более поздние издания). Неограничивающие примеры дополнительных ингредиентов включают: буферы, разбавители, растворители, регулирующие тоничность средства, консерванты, стабилизаторы и хелатирующие агенты. Один или несколько фармацевтически приемлемых носителей можно использовать в составлении фармацевтических композиций по изобретению.
В одном варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция представляет собой жидкий состав. Предпочтительным примером жидкого состава является водный состав, т.е. состав, содержащий воду. Жидкий состав может содержать раствор, суспензию, эмульсию, микроэмульсию, гель и т.п. Водный состав, как правило, содержит по меньшей мере 50% мас./мас. воды или по меньшей мере 60, 70, 75, 80, 85, 90, или по меньшей мере 95% мас./мас. воды.
В одном варианте осуществления, фармацевтическую композицию можно составлять в инъецируемой форме, которую можно инъецировать, например, посредством устройства для инъекции (например, шприца или инфузионного насоса). Инъекцию можно вводить, например, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, в стекловидное тело или внутривенно.
В другом варианте осуществления, фармацевтическая композиция представляет собой твердый состав, например, лиофилизированную или высушенную распылением композицию, которую можно использовать как есть, или в которую терапевт или пациент добавляет растворители и/или разбавители перед использованием. Твердые лекарственные формы могут включать таблетки, такие как прессованные таблетки, и/или покрытые таблетки, и капсулы (например, твердые или мягкие желатиновые капсулы). Фармацевтическая композиция может также находиться в форме, например, саше, драже, порошков, гранул, пастилок или порошков для разведения.
Лекарственные формы могут иметь немедленное высвобождение, в этом случае, они могут содержать водорастворимый или диспергируемый носитель, или они могут иметь отсроченное высвобождение, замедленное высвобождение или модифицированное высвобождение, в этом случае, они могут содержать нерастворимые в воде полимеры, которые регулируют скорость растворения лекарственной формы в желудочно-кишечном тракте или под кожей.
В других вариантах осуществления, фармацевтическую композицию можно доставлять интраназально, интрабуккально или подъязычно.
рН в водном составе может составлять между рН 3 и рН 10. В одном варианте осуществления изо
- 16 046422 бретения, рН состава составляет от приблизительно 7,0 до приблизительно 9,5. В другом варианте осуществления изобретения, рН состава составляет от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит буфер. Неограничивающие примеры буферов включают: аргинин, аспарагиновую кислоту, бицин, цитрат, гидрофосфат динатрия, фумаровую кислоту, глицин, глицилглицин, гистидин, лизин, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, ацетат натрия, карбонат натрия, дигидрофосфат натрия, фосфат натрия, сукцинат, виннокаменную кислоту, трицин и трис(гидроксиметил)аминометан, и их смеси. Буфер может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных буферов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит консервант. Неограничивающие примеры консервантов включают: хлорид бензэтония, бензойную кислоту, бензиловый спирт, бронопол, бутил-4-гидроксибензоат, хлорбутанол, хлоркрезол, хлоргексидин, хлорфенезин, о-крезол, м-крезол, п-крезол, этил-4-гидроксибензоат, имидомочевину, метил-4гидроксибензоат, фенол, 2-феноксиэтанол, 2-фенилэтанол, пропил-4-гидроксибензоат, дегидроацетат натрия, тиомеросал и их смеси. Консервант может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных консервантов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит изотоническое средство. Неограничивающие примеры варианта осуществления включают соль (такую как хлорид натрия), аминокислоту (такую как глицин, гистидин, аргинин, лизин, изолейцин, аспарагиновая кислота, триптофан и треонин), альдит (такой как глицерин, 1,2-пропандиол пропиленгликоль), 1,3пропандиол и 1,3-бутандиол), полиэтиленгликоль (например, PEG400) и их смеси. Другой пример изотонического средства включает сахар. Неограничивающие примеры сахаров могут представлять собой моно-, ди- или полисахариды, или водорастворимые глюканы, включая, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, альфа и бета-HPCD, растворимый крахмал, гидроксиэтилкрахмал и карбоксиметилцеллюлозу натрия. Другим примером изотонического средства является сахарный спирт, где термин сахарный спирт определяют как С(4-8)углеводород, имеющий по меньшей мере одну -ОН-группу. Неограничивающие примеры сахарных спиртов включают маннит, сорбит, инозитол, галактит, дульцит, ксилит и арабит. Изотоническое средство может быть представлено индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждое из этих конкретных изотонических средств, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит хелатирующий агент. Неограничивающие примеры хелатирующих агентов включают лимонную кислоту, аспарагиновую кислоту, соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и их смеси. Хелатирующий агент может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных хелатирующих агентов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит стабилизатор. Неограничивающие примеры стабилизаторов включают один или несколько ингибиторов агрегации, один или несколько ингибиторов окисления, одно или несколько поверхностно-активных веществ, и/или один или несколько ингибиторов протеаз.
В другом варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит стабилизатор, где указанный стабилизатор представляет собой карбокси-/гидроксицеллюлозу и ее производные (такие как НРС, HPC-SL, HPC-L и НРМС), циклодекстрины, 2-метилтиоэтанол, полиэтиленгликоль (такие как PEG 3350), поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон, соли (такие как хлорид натрия), содержащие серу вещества, такие как монотиоглицерин) или тиогликолевая кислота. Стабилизатор может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл, например, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных стабилизаторов, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В следующих вариантах осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит одно или несколько поверхностно-активных веществ, предпочтительно, поверхностно-активное вещество, по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество или два различных поверхностно-активных вещества. Термин поверхностно-активное вещество относится к любым молекулам или ионам, состоящим из водорастворимой (гидрофильной) части и жирорастворимой (липофильной) части. Поверхностноактивное вещество может, например, быть выбрано из группы, состоящей из анионных поверхностно
- 17 046422 активных веществ, катионных поверхностно-активных веществ, неионных поверхностно-активных веществ и/или цвиттерионных поверхностно-активных веществ. Поверхностно-активное вещество может быть представлено индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждое из этих конкретных поверхностно-активных веществ, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В следующем варианте осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит один или несколько ингибиторов протеаз, например, таких как ЭДТА и/или соль бензамидина и соляной кислоты (HCl). Ингибитор протеазы может быть представлен индивидуально или в комбинации, в концентрации от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл. Фармацевтические композиции, содержащие каждый из этих конкретных ингибиторов протеаз, составляют альтернативные варианты осуществления изобретения.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению, включающему объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.
Способы применения.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу нацеливания на FOLR1 на поверхности клетки злокачественной опухоли у субъекта, включающему введение субъекту выделенного моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающего FOLR1, или фармацевтической композиции по изобретению. Связывание моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с FOLR1 может опосредовать комплементзависимую цитотоксичность (CDC), антителозависимый фагоцитоз (ADPC) и/или антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), или другие эффекты, приводящие к гибели подвергаемой нацеливанию клетки злокачественной опухоли. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может, например, служить для привлечения конъюгированных лекарственных средств и/или может формировать биспецифическое антитело с другим моноклональным антителом, чтобы опосредовать гибель подвергаемой нацеливанию клетки злокачественной опухоли.
Функциональную активность антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, можно характеризовать посредством способов, известных в данной области, и как описано в настоящем описании. Способы характеризации антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, включают, но без ограничения, анализы аффинности и специфичности, включая анализы Biacore, ELISA и OctetRed; анализы связывания для детекции связывания антител с FOLR1 на клетках злокачественных опухолей или клетках, рекомбинантным способом экспрессирующих FOLR1, посредством FACS. В соответствии с конкретными вариантами осуществления, способы характеризации антител и их антигенсвязывающих фрагментов, связывающих FOLR1, включают способы, описанные ниже.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающему введение субъекту выделенного моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающего FOLR1, или фармацевтической композиции по изобретению. Злокачественная опухоль может, например, быть выбрана, но без ограничения, из рака легкого, рака желудка, рака ободочной кишки, печеночноклеточной карциномы, почечноклеточной карциномы, уротелиальной карциномы мочевого пузыря, метастазирующей меланомы, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, глиомы, глиобластомы и других солидных опухолей, и неходжскинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелогенного лейкоза (CML), множественной миеломы (ММ), острого миелоидного лейкоза (AML) и других жидких опухолей.
В соответствии с вариантами осуществления изобретения, фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество антитела против FOLR1 или его антигенсвязывающего фрагмента. В рамках изобретения, термин терапевтически эффективное количество относится к количеству активного ингредиента или компонента, вызывающему желательный биологический или медицинский ответ у субъекта. Терапевтически эффективное количество можно определять эмпирически и общепринятым образом, применительно к поставленной цели.
В рамках изобретения, применительно к антителам против FOLR1 или их антигенсвязывающим фрагментам, терапевтически эффективное количество обозначает количество антитела против FOLR1 или его антигенсвязывающего фрагмента, модулирующее иммунный ответ у нуждающегося в этом субъекта.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, терапевтически эффективное количество относится к количеству лекарственного средства, которое является достаточным для достижения одного, двух, трех, четырех или более из следующих эффектов: (i) уменьшение или облегчение тяжести заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (ii) уменьшение длительности заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (iii) предотвращение прогрессирования заболевания, нарушения или со
- 18 046422 стояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (iv) вызов регрессии заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (v) предотвращение развития или начала заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (vi) предотвращение рецидива заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома; (vii) уменьшение случаев госпитализации субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, или ассоциированный с ним симптом; (viii) уменьшение длительности госпитализации субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, или ассоциированный с ним симптом; (ix) увеличение выживаемости субъекта с заболеванием, нарушением или состоянием, подлежащим лечению, или ассоциированным с ним симптомом; (xi) ингибирование или уменьшение заболевания, нарушения или состояния, подлежащего лечению, или ассоциированного с ним симптома у субъекта; и/или (xii) усиление или улучшение профилактического или терапевтического эффекта(эффектов) другой терапии.
Терапевтически эффективное количество или дозу можно менять, в соответствии с различными факторами, такими как заболевание, нарушение или состояние, подлежащее лечению, способы введения, участок-мишень, физиологическое состояние субъекта (включая, например, возраст, массу тела, общее состояние здоровья), является ли субъект человеком или животным, другие вводимые лекарственные средства, и то, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Дозы для лечения оптимально титруют для оптимизации безопасности и эффективности.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, композиции, описанные в настоящем описании, составляют, чтобы они являлись пригодными для намеченного способа введения субъекту. Например, композиции, описанные в настоящем описании, можно составлять, чтобы они являлись пригодными для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения.
В рамках изобретения, термины лечить, лечение и обработка все предназначены для обозначения облегчения или обращения по меньшей мере одного поддающегося измерению физического параметра, относящегося к злокачественной опухоли, который, необязательно, является различимым у субъекта, но может являться различимым у субъекта. Термины лечить, лечение и обработка, могут также относится к вызову регрессии, предотвращению прогрессирования или по меньшей мере замедлению прогрессирования заболевания, нарушения или состояния. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к облегчению, предотвращению развития или начала, или уменьшению длительности одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием, нарушением или состоянием, таким как опухоль или более предпочтительно, злокачественная опухоль. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к предотвращению заболевания, нарушения или состояния. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к увеличению выживаемости субъекта, имеющего заболевание, нарушение или состояние. В конкретном варианте осуществления, лечить, лечение и обработка относятся к прекращению заболевания, нарушения или состояния у субъекта.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления, настоящее изобретение относится к композициям, используемым для лечения злокачественной опухоли. Для терапии злокачественной опухоли, представленные композиции можно использовать в комбинации с другим лечением, включая, но без ограничения, химиотерапию, mAb против CD20, mAb против CD47, mAb против TIM-3, mAb против LAG-3, mAb против CD73, mAb против апелина, mAb против CTLA-4, mAb против PD-L1, mAb против PD-1, терапию PD-1/PD-L1, другие иммуноонкологические лекарственные средства, антиангиогенное средство, радиотерапию, конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), направленную терапию или другие противораковые лекарственные средства. Антитела против FOLR1 можно использовать для конструирования биспецифических антител с партнерами - mAb против PD-1, PD-L1, LAG3, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, CD47, CD3, апелина, DLL-3, TIP-1, CLDN18.2 и/или других антигенов поверхности опухолей, для лечения злокачественных опухолей/опухолей, экспрессирующих как FOLR1, так и специфический опухолеассоциированный антиген.
В рамках изобретения, термин в комбинации, в контексте введения двух или более терапевтических средств субъекту, относится к использованию более одного терапевтического средства. Использование термина в комбинации не ограничивает порядок, в котором терапевтические средства вводят субъекту. Например, первое терапевтическое средство (например, композицию, описанную в настоящем описании) можно вводить до (например, за 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель до), одновременно или после (например, через 5, 15, 30, 45 мин, 1, 2, 4, 6, 12, 16, 24, 48, 72, 96 ч, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 или 12 недель после) введения второго терапевтического средства субъекту.
В другом общем аспекте, изобретение относится к способу определения уровня FOLR1 у субъекта. Способы включают (а) получение образца от субъекта; (b) приведение образца в контакт с моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по изобретению; и (с) определение уровня FOLR1 у субъекта.
В рамках изобретения, образец относится к биологическому образцу, выделенному от субъекта, и может включать, но без ограничения, цельную кровь, сыворотку, плазму, клетки крови, эндотелиальные клетки, биоптаты ткани (например, ткани злокачественной опухоли), лимфатическую жидкость, асцит
- 19 046422 ную жидкость, интерстициальную жидкость, костный мозг, спинномозговую жидкость, слюну, слизь, мокроту, пот, мочу или любой другой продукт секреции, экскреции, или другие физиологические жидкости. Образец крови относится к цельной крови или любой ее фракции, включая клетки крови, сыворотку и плазму.
В конкретных вариантах осуществления, уровень FOLR1 у субъекта можно определять с использованием анализов, выбранных, но без ограничения, из анализа Вестерн-блоттинга, анализа ELISA и/или иммуногистохимии (IHC). Относительные уровни белка можно определять с использованием анализа Вестерн-блоттинга и иммуногистохимии (IHC), и абсолютные уровни белка можно определять с использованием анализа ELISA. При определении относительных уровней FOLR1, уровни FOLR1 можно определять в сравнении между по меньшей мере двумя образцами, например, между образцами от одного и того же субъекта в различных временных точках, между образцами из различных тканей одного и того же субъекта и/или между образцами от различных субъектов. Альтернативно, при определении абсолютных уровней FOLR1, например, посредством анализа ELISA, абсолютный уровень FOLR1 в образце можно определять посредством получения стандарта для анализа ELISA до тестирования образца. Специалисту в данной области понятно, какие аналитические способы использовать для определения уровня FOLR1 в образце от субъекта с использованием антител или их антигенсвязывающих фрагментов по изобретению.
Использование способов определения уровня FOLR1 в образце от субъекта может приводить к диагностике аномальных (увеличенных, уменьшенных или недостаточных) уровней FOLR1 при заболевании и к принятию соответствующих терапевтических решений. Такое заболевание может включать, например, злокачественную опухоль. Кроме того, посредством мониторирования уровней FOLR1 у субъекта, риск развития заболевания, как указано выше, можно определять на основании знаний об уровне FOLR1 при конкретном заболевании и/или в ходе прогрессирования конкретного заболевания.
Варианты осуществления
Это изобретение относится к следующим неограничивающим вариантам осуществления.
Вариант осуществления 1 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:38, 39, 40, 62, 63 и 64, соответственно;
b) SEQ ID NO:17, 18, 19, 41, 42 и 43, соответственно;
c) SEQ ID NO:20, 21, 22, 44, 45 и 46, соответственно;
d) SEQ ID NO:23, 24, 25, 47, 48 и 49, соответственно;
e) SEQ ID NO:26, 27, 28, 50, 51 и 52, соответственно;
f) SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно;
g) SEQ ID NO:32, 33, 34, 56, 57 и 58, соответственно; или
h) SEQ ID NO:35, 36, 37, 59, 60 и 61, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
Вариант осуществления 2 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие полипептидные последовательности из:
a) SEQ ID NO:86, 87, 88, 110, 111 и 112, соответственно;
b) SEQ ID NO:65, 66, 67, 89, 90 и 91, соответственно;
c) SEQ ID NO:68, 69, 70, 92, 93 и 94, соответственно;
d) SEQ ID NO:71, 72, 73, 95, 96 и 97, соответственно;
e) SEQ ID NO:74, 75, 76, 98, 99 и 100, соответственно;
f) SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно;
g) SEQ ID NO:80, 81, 82, 104, 105 и 106, соответственно; или
h) SEQ ID NO:83, 84, 85, 107, 108 и 109, соответственно;
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывает FOLR1, предпочтительно, FOLR1 человека.
Вариант осуществления 3 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из варианта осуществления 1 или 2, содержащие вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO:15, 1, 3, 5, 7, 9, 11 или 13, или вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную SEQ ID NO: 16, 2, 4, 6, 8, 10, 12 или 14.
Вариант осуществления 4 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из вариантов осуществления 1-3, содержащие:
- 20 046422
а) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:15, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:16;
b) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:2;
c) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:3, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:4;
d) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:5, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:6;
e) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8;
f) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:9, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:10;
g) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQID
NO:11, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQID
NO:12; или
h) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQID
NO:13, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQID
NO:14.
Вариант осуществления 5 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-4, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным.
Вариант осуществления 6 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-5, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является человеческим или гуманизированным.
Вариант осуществления 7 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 6, где гуманизированное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
(1) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(2) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:113, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(3) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(4) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:114, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(5) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(6) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:115, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(7) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:117;
(8) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:116, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:118;
(9) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(10) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID
- 21 046422
NO:122;
(11) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:119, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(12) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:121;
(13) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:122;
(14) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:120, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:123;
(15) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:126;
(16) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:124, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:127;
(17) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(18) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(19) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(20) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:128, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(21) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(22) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(23) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133;
(24) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:129, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134;
(25) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:131;
(26) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:132;
(27) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:133; или (28) вариабельную область тяжелой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:130, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность из SEQ ID NO:134.
Вариант осуществления 8 представляет собой выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-7, где моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является способным связывать FOLR1 и индуцировать опосредованный эффекторами лизис клеток опухоли.
Вариант осуществления 9 представляет собой выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8.
- 22 046422
Вариант осуществления 10 представляет собой вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту из варианта осуществления 9.
Вариант осуществления 11 представляет собой клетку-хозяина, содержащую вектор из варианта осуществления 10.
Вариант осуществления 12 представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
Вариант осуществления 13 представляет собой способ лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции из варианта осуществления 12.
Вариант осуществления 14 представляет собой способ нацеливания на FOLR1 на поверхности клетки злокачественной опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции из варианта осуществления 12.
Вариант осуществления 15 представляет собой способ получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из любого из вариантов осуществления 1-8, включающий культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, в условиях для продукции моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры.
Вариант осуществления 16 представляет собой способ получения фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент из любого из вариантов осуществления 1-8, включающий объединение моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем для получения фармацевтической композиции.
Вариант осуществления 17 представляет собой способ определения уровня FOLR1 у субъекта, включающий:
a) получение образца от субъекта;
b) приведение образца в контакт с выделенным моноклональным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом из любого из вариантов осуществления 1-8; и
c) определение уровня FOLR1 у субъекта.
Вариант осуществления 18 представляет собой способ из варианта осуществления 17, где образец представляет собой образец ткани.
Вариант осуществления 19 представляет собой способ из варианта осуществления 18, где образец ткани представляет собой образец ткани злокачественной опухоли.
Вариант осуществления 20 представляет собой способ из варианта осуществления 17, где образец представляет собой образец крови.
Примеры
Пример 1: идентификация моноклональных антител против FOLR1.
Мышей иммунизировали слитым белком, содержащим FOLR1 человека (от Arg25 до Met233), слитый на С-конце с Fc человека (huFOLR1-huFc). Титр в плазме определяли посредством ELISA. После эвтаназии, лимфатические узлы и селезенку собирали для получения гибридом. Гибридомы выращивали в 96-луночных культуральных планшетах, и супернатанты из индивидуальных лунок подвергали скринингу посредством ELISA и FACS с использованием клеток СНО, стабильно экспрессирующих полноразмерный FOLR1 человека. Наилучшие положительные клоны выделяли и секвенировали.
Последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи для моноклональных антител против FOLR1 представлены в таблицах 1 и 2, и области CDR для моноклональных антител против FOLR1 представлены в таблицах 3-6.
Таблица 1
Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи для mAb против FOLR1
Клоны mAb | VH | ID |
F4 | EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEW VAFISSGSNTIYYADIVKGRFAISRDNAKNTLFLQMASLRSEDTALYYC ARLAEWDVAYWGQGTLVTVSA | 1 |
F5 | EVQLVESGGELVKPGGSLKLSCAVSGFTFSNYGMSWVRQTPDKRLEW VATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNDKNTLYLQMSSLKSEDTAMYY CSTQGSSGYVGYWGQGTTLTVSS | 3 |
F7 | EFQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYNMNWVKQSNGKSLEWI GVIDPNYGTTNYNQKFVGKATLTVDQSSITAYMQLNSLTAEDSAVYFC AIKGYGNPAAYWGQGTLVTVSA | 5 |
F8 | EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCVASGFTLSTYAMSWVRQTPEKRLEW VATISGGGGDTYHLDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYY | 7 |
- 23 046422
CARQSHYGSSYYFDNWGQGTTLTVSS | ||
F10 | QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYAFSSSWMNWVRQRPGKGLEW IGRIYPGDGYTHYNGMFKGKATLTADKSSSTGYMQLSSLTSEDSAVYF CTRHGDFPYWYFDVWGTGTTVTVSS | 9 |
F17 | DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSDFGMHWIRQAPERGLEW VAYMSYTPGTFHYADTVKDRFFISRDNAKNTLFLQMTSLRSDDTAMY YCARVHVGTVDYWGQGTSVTVSS | 11 |
F19 | EVKLDETGGGLVQPGRPMKLSCVASGFTFSDYWMNWVRQSPDKGLE WVAQIGNKFHNYETYYSDSVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNSLRVEDTG IYYCTKLGRGYYVMDYWGQGTSVTVSS | 13 |
F20 | QVQLQQSGAELVKPGASVQLSCKASGYTFASYYLYWVKQRPGQGLE WIGEINPRSGGTNFNEKFKSKATVTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYY CSRSGRLRGFYTMDYWGQGTSVTVSS | 15 |
VH: вариабельная область тяжелой цепи; ID: SEQ ID NO.
Таблица 2
Последовательности вариабельных областей легкой цепи для mAb против FOLR1
Клоны mAb | VL | ID |
F4 | DIVLTQSPATLSVTPGDRISLSCRASQNINNNLHWYQQKSHESPRLLIKF ASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLNINGVETEDFGMYFCQQIYSWPQLTFG AGTRLELK | 2 |
F5 | DIQMTQSPSSLSAFLGGKVTITCKASQDITNFIGWYQHKPGKGPRLLISY TSILESGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYYCLQYYNLWTFGGGT KLEIK | 4 |
F7 | DIQMTQSPSSLSASLGGKVTITCKASQDINKYLAWYQHEPGKGPRLLIR YTSILESGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYYCLQYYNLWTFGG GTKLEIK | 6 |
F8 | DIQMTQSPASLSASVGEIVTIICRVSENIDSYLAWYQQKQGKSPQLLVY AATNLADGVPSRFSGSGSGSQYSLKINSLQSEDVARYYCQHYYTTPPTF GGGTKLDIK | 8 |
F10 | DIQMTQSPASLSASVGESVTITCRASENIDSYLAWYQQKQGKSPQLLVY AATNLAVGVPSRFSGSGSGTQYTLKINSLQSEDVARYYCQHHYSTPPTF GGGTKLEIK | 10 |
F17 | DVVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQNINNNLHWFQQKSHESPRLLIK YASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINNVETEDFGIYFCQQSNSWPALTFG TGTKVELK | 12 |
F19 | DIQMTQTTSSLSASLGDRVTLNCRASQDITNHLNWFQQKPDGTFQLLIY YTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQQDSQHPWTF GGGTKLEIK | 14 |
F20 | NIVMTQSPKSMSVSVGERVTLSCKAGENVGSYVSWYQQKPEQSPELLI YGASNRYTGVPDRFTGSGSATDFTLTISSVQAEDLADYYCGQTYRFLT FGAGTKLELK | 16 |
VL: вариабельная область легкой цепи; ID: SEQ ID NO.
Таблица 3
Области CDR 1-3 тяжелой цепи для mAb против FOLR1
Клоны mAb | HC CDR1 | ID | HC CDR2 | ID | HC CDR3 | ID |
F4 | GFTFSDYG | 17 | ISSGSNTI | 18 | ARLAEWDVAY | 19 |
F5 | GFTFSNYG | 20 | ISSGGSYT | 21 | STQGSSGYVGY | 22 |
F7 | GYSFTDYN | 23 | IDPNYGTT | 24 | AIKGYGNPAAY | 25 |
F8 | GFTLSTYA | 26 | ISGGGGDT | 27 | ARQSHYGSSYYFDN | 28 |
F10 | GYAFSSSW | 29 | IYPGDGYT | 30 | TRHGDFPYWYFDV | 31 |
F17 | GFTFSDFG | 32 | MSYTPGTF | 33 | ARVHVGTVDY | 34 |
F19 | GFTFSDYW | 35 | IGNKFHNYET | 36 | TKLGRGYYVMDY | 37 |
F20 | GYTFASYY | 38 | INPRSGGT | 39 | SRSGRLRGFYTMDY | 40 |
НС: тяжелая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.
НС CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
- 24 046422
Таблица 4
Области CDR 1-3 легкой цепи для mAb против FOLR1
Клоны mAb | LC CDR1 | ID | LC CDR2 | ID | LC CDR3 | ID |
F4 | QNINNN | 41 | FAS | 42 | QQIYSWPQLT | 43 |
F5 | QDITNF | 44 | YTS | 45 | LQYYNLWT | 46 |
F7 | QDINKY | 47 | YTS | 48 | LQYYNLWT | 49 |
F8 | ENIDSY | 50 | AAT | 51 | QHYYTTPPT | 52 |
F10 | ENIDSY | 53 | AAT | 54 | QHHYSTPPT | 55 |
F17 | QNINNN | 56 | YAS | 57 | QQSNSWPALT | 58 |
F19 | QDITNH | 59 | YTS | 60 | QQDSQHPWT | 61 |
F20 | ENVGSY | 62 | GAS | 63 | GQTYRFLT | 64 |
LC: легкая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO LC CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа IMGT (Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
Таблица 5
Области CDR 1-3 тяжелой цепи для mAb против FOLR1
Клоны mAb | HC CDR1 | ID | HC CDR2 | ID | HC CDR3 | ID |
F4 | GFTFSDYGMH | 65 | FISSGSNTIYYADIVKG | 66 | ARLAEWDVAY | 67 |
F5 | GFTFSNYGMS | 68 | TISSGGSYTYYPDSVKG | 69 | STQGSSGYVGY | 70 |
F7 | GYSFTDYNMN | 71 | VIDPNYGTTNYNQKFVG | 72 | AIKGYGNPAAY | 73 |
F8 | GFTLSTYAMS | 74 | TISGGGGDTYHLDTVKG | 75 | ARQSHYGSSYYFD N | 76 |
F10 | GYAFSSSWMN | 77 | RIYPGDGYTHYNGMFKG | 78 | FRHGDFPYWYFDV | 79 |
F17 | GFTFSDFGMH | 80 | YMSYTPGTFHYADTVKD | 81 | ARVHVGTVDY | 82 |
F19 | GFTFSDYWMN | 83 | QIGNKFHNYETYYSDSV KG | 84 | FKLGRGYYVMDY | 85 |
F20 | GYTFASYYLY | 86 | EINPRS GGTNFNEKFKS | 87 | SRSGRLRGFYTMD | 88 |
НС: тяжелая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.
НС CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).
Т аблица 6
Области CDR 1-3 легкой цепи для mAb поотив FOLR1
Клоны mAb | LC CDR1 | ID | LC CDR2 | ID | LC CDR3 | ID |
F4 | RASQNINNNLH | 89 | FASQSIS | 90 | QQIYSWPQLT | 91 |
F5 | KASQDITNFIG | 92 | YTSILES | 93 | LQYYNLWT | 94 |
F7 | KASQDINKYLA | 95 | YTSILES | 96 | LQYYNLWT | 97 |
F8 | RVSENIDSYLA | 98 | AATNLAD | 99 | QHYYTTPPT | 100 |
F10 | RASENIDSYLA | 101 | AATNLAV | 102 | QHHYSTPPT | 103 |
F17 | RASQNINNNLH | 104 | YASQSIS | 105 | QQSNSWPALT | 106 |
F19 | RASQDITNHLN | 107 | YTSRLHS | 108 | QQDSQHPWT | 109 |
F20 | KAGENVGSYVS | 110 | GASNRYT | 111 | GQTYRFLT | 112 |
LC: легкая цепь; CDR: определяющая комплементарность область; ID: SEQ ID NO.
LC CDR для mAb против FOLR1 определяли с использованием способа Kabat (Elvin A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991)).
Пример 2: продукция и очистка mAb из супернатантов гибридомы.
Мышиные mAb против FOLR1 очищали из сред/супернатантов гибридомы из положительных клонов с использованием аффинной хроматографии с белком А.
Пример 3: анализ FACS связывания очищенных мышиных антител против FOLR1.
Клетки СНО, стабильно трансфицированные полноразмерным FOLR1 человека, переносили в 96луночный планшет при 200000 клеток/лунку, промывали один раз с использованием буфера для FACS (1xPBS, pH6,8+2% FBS) и инкубировали с очищенными мышиными mAb против FOLR1 из супернатантов гибридомы в различных концентрациях в течение 15 мин на льду. Затем клетки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 мин и промывали с использованием буфера для FACS три раза. Клетки инкубировали с конъюгированными с РЕ поликлональными антителами козы против IgG мыши и инкубировали на льду в течение следующих 15 мин. Затем клетки промывали с использованием буфера для FACS три раза, и затем ресуспендировали в буфере для FACS, содержащем 0,1 мкг/мл PI (иодида пропидия) для отбора по живым/мертвым клеткам. Затем клетки обрабатывали посредством устройства FACS Caliber, и данные анализировали посредством программного обеспечения Flowjo. Результаты связывания очищенных мышиных mAb против FOLR1 с клетками СНО, стабильно экспрессирующими FOLR1 человека, показаны на фиг. 1А-1В. MFI, средняя интенсивность флуоресценции.
Пример 4: продукция и очистка химерных mAb против FOLR1 из культуральных сред от трансфицированных клеток 293Е.
Для получения рекомбинантных химерных mAb против FOLR1, экспрессирующими векторами, со
- 25 046422 держащими мышиные вариабельные области (VH и VL), слитые с константными областями тяжелой цепи IgG1 и легкой цепи каппа человека, соответственно, временно трансфицировали клетки 293Е. Рекомбинантные антитела, продуцированные в суспензии трансфицированных клеток, очищали с использованием аффинной хроматографии с белком А.
Пример 5: анализ ELISA связывания очищенных химерных mAb против FOLR1.
Очищенные химерные mAb тестировали в анализе ELISA по их способности связываться с иммобилизованным FOLR1 человека. Рекомбинантным внеклеточным доменом FOLR1 человека (Novoprotein, кат.#: С784) в карбонатном буфере для покрытия покрывали 96-луночный планшет при комнатной температуре в течение 1 ч. Планшет блокировали посредством 5% BSA в TBST в течение 1 ч при комнатной температуре. В каждой лунке индивидуального планшета, mAb в различных концентрациях инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали, и связывание с FOLR1 детектировали посредством антитела против IgG человека, конъюгированного с пероксидазой хрена (hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, кат.#: Н10007), с инкубацией в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем, после промывки, ELISA проявляли с использованием раствора для одностадийной детекции (ThermoFisher Scientific, кат.#: 34028) и измеряли как оптическую плотность при 450 нм. Результаты показаны на фиг. 2А2С.
Пример 6: анализ FACS связывания очищенных химерных mAb против FOLR1.
Для оценки связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками, как известно, экспрессирующими FOLR1, клетки SK-OV-3 (АТСС® НТВ-77™) рассевали при 80000 клеток на лунку в 96-луночный не связывающий планшет с U-образным дном (Greiner Bio-One, кат.#: 650901). В некоторых экспериментах, использовали 90000 клеток на лунку. Клетки инкубировали в 50 мкл буфера для FACS (HBSS с 0,1% BSA и 0,05% азидом натрия), содержащего mAb в различных концентрациях, на льду в течение 15 мин. После промывки, клетки инкубировали в 50 мкл буфера для FACS, содержащего 3,5 мкг/мл F(ab')2 козы против Fc IgG человека, конъюгированного с Alexa Fluor® 488 (Invitrogen, кат.#: Н10120), на льду в течение 15 мин в темноте и снова промывали. Клетки анализировали с использованием проточного цитометра Attune NxT. Результаты связывания химерных mAb против FOLR1 с клетками SK-OV-3 показаны на фиг. 3A-3D. MFI, средняя интенсивность флуоресценции.
Пример 7: анализ Biacore с использованием химерных mAb против FOLR1.
Взаимодействие химерных mAb против FOLR1 и FOLR1 измеряли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (Biacore 8k, GE Healthcare). Кратко, mAb против FOLR1 иммобилизовали на сенсорном чипе с белком A (GE Healthcare, кат.#: 29-1275-56) в буфере HBS-P (0,01 М HEPES рН 7,4, 0,15 М NaCl, 0,05% об./об. поверхностно-активное вещество Р20) со скоростью потока при инъекции 10 мкл/мл. Рекомбинантный FOLR1 (Novoprotein, кат.#: С784) при вариантах концентрации загружали при скорости потока 30 мкл/мин в буфере HBS-P. После загрузки антигена, поверхность регенерировали с использованием 10 мМ глицин-HCl (рН 1,5). Сенсограммы приводили в соответствие с моделью связывания 1:1 с использованием программного обеспечения для оценки Biacore 8k (GE Healthcare). Результаты для аффинности связывания mAb против FOLR1 показаны в таблице 7.
Таблица 7 _________Значения KD для mAb против FOLR1 из анализа Biacore_________
Химерное mAb | KD(hM) |
F4 | 0,547 |
F5 | 0,352 |
F7 | 2,33 |
F8 | 0,721 |
F10 | 0,704 |
F17 | 0,265 |
F19 | 11,8 |
F20 | 1,00 |
Пример 8: гуманизация mAb против FOLR1.
Мышиные mAb против FOLR1 гуманизировали для уменьшения потенциала иммуногенности при использовании у пациентов-людей. Последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей (VH и VL) сравнивали с последовательностями человеческого антитела в базе данных Protein Data Bank (PDB) и строили модели гомологии. CDR как в тяжелых, так и в легких цепях мышиных mAb прививали в человеческие каркасы, имеющие наивысшую возможность поддержания надлежащей структуры, вероятно, необходимой для связывания антигена. Обратные мутации от человеческих остатков до мышиного остатка или другие мутации разрабатывали при необходимости. Последовательности гуманизированных областях VH и VL показаны в табл. 8. Гуманизированные области VH и VL сливали с константными областями тяжелой цепи IgG1 и легкой цепи каппа человека, соответственно. Конструкции, соответствующие последовательностям mAb, использовали для временной трансфекции в клетках СНО, и очищенные mAb анализировали по их способности связываться с иммобилизованным внеклеточным доменом FOLR1 в ELISA. Контроль изотипа тестировали в анализах для подтверждения отсутствия неспецифиче
- 26 046422 ского связывания выше фона анализа. Результаты для гуманизированных клонов F5 показаны на фиг. 4А-4С; результаты для гуманизированных клонов F10 показаны на фиг. 5А-5В; результаты для гуманизированных клонов F17 показаны на фиг. 6А-6В; результаты для гуманизированных клонов F20 показаны на фиг. 7A-7D.
Гуманизированные mAb против FOLR1 тестировали по их способности связываться с клетками SKOV-3 с использованием анализа FACS. Данные показаны на фиг. 8A-8J.
Антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) mAb измеряли с использованием набора ADCC Reporter Bioassay Core Kit (Promega, кат. # G7010), в соответствии с протоколом, представленным производителем. Кратко, приблизительно 12500 клеток SK-OV-3 на лунку смешивали с различными концентрациями тестируемых антител в буфере для анализа ADCC в 96-луночном микропланшете с половинным объемом лунок (Corning-Costar, кат. #3696). Затем, приблизительно 37500 на лунку клеток ADCC Bioassay Effector cells добавляли до конечного объема 37,5 мкл и перемешивали. Планшет инкубировали при 37°С в течение 6 ч без встряхивания. Для измерения активности люциферазы, 12,5 мкл смеси для анализа удаляли из каждой лунки и добавляли 25 мкл реагента для анализа люциферазы BioGlo. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин с встряхиванием. 30 мкл смеси на лунку переносили в белый планшет (BRAND, кат. #781621) для измерения люминесценции в многорежимном считывателе для планшетов EnVision 2102. Результаты для активности ADCC 4 гуманизированных mAb показаны на фиг. 9. RLU, относительные световые единицы.
Таблица 8 Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи гуманизированных mAb против FOLR1
VH/VL | ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ | ID: |
F5-H1 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLEWV ATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCST QGS SGYVGYWGQGTLVTVS S | 113 |
F5-H2 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLEWV ATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCST QGS SGYVGYWGQGTLVTVS S | 114 |
F5-H3 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLEWV ATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMsSLRAEDTAVYYCSTQ GS SGYVGYWGQGTLVTVS S | 115 |
F5-H4 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLEWV ATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNDKNTLYLQMsSLRAEDTAVYYCST QGS SGYVGYWGQGTLVTVS S | 116 |
F5-L1 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQDITNFIGWYQHKPGKAPKLLISYT SILESGVPSRFSGSGSGRDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYYNLWTFGGGTK VEIL | 117 |
F5-L2 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQDITNFIGWYQHKPGKAPKLLISYT SILESGVPSRFSGSGSGtDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYYNLWTFGGGTK VEIL | 118 |
F10-H1 | E VQLVQ SGAEVKKPGS S VK VSCK ASGYAF S S S WMNWVRQ APGQGLEWI GRIYPGDGYTHYNGMFKGRASLTADKSTSTGYMELSSLRSEDTAVFFCTR HGDFPYWYFDVWGRGTLVTVSP | 119 |
F10-H2 | E VQLVQ SGAEVKKPGS SVK VSCK ASGYAF S S S WMNWVRQ APGQGLEWI GRIYPGDGYTHYNGMFKGRASLTADKSTSTGYMELSSLRSEDTAVFFCTR HGDFP YW YFD VWGRGTLVT VS S | 120 |
F10-L1 | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASENIDSYLAWYQQKPGRAPKLLVYA ATNLAVGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQSDDFATYYCQHHYSTPPTFGQG TKLEIK | 121 |
F10-L2 | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASENIDSYLAWYQQKPGRAPKLLVYA ATNLAVGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQpDDFATYYCQHHYSTPPTFGQG TKLEIK | 122 |
F10-L3 | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASENIDSYLAWYQQKPGRAPKLLVYA ATNLAVGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQSeDFATYYCQHHYSTPPTFGQG TKLEIK | 123 |
F17-H1 | EVQLVETGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSDFGMHWIRQAPGKGLEWVA YMSYTPGTFHYADTVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR VHVGT VD YWGQGTLVT VS S | 124 |
F17-H2 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDFGMHWIRQAPGKGLEWV AYMSYTPGTFHYADTVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RVHVGTVD YWGQGTLVT VS S | 125 |
F17-L1 | EVVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNINNNLHWFQQKPGQAPRLLIKYA SQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQQSNSWPALTFGQGTK VEIL | 126 |
F17-L2 | EVVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQNINNNLHWFQQKPGQAPRLLIKYA SQSISGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEtEDFAVYFCQQSNSWPALTFGQGTK | 127 |
-
Claims (6)
- VEIKF20-H1 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYYLYWVRQAPGQGLEWI GEINPRSGGTNFNEKFKSRATVTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSRS GRLRGF YTMDYWGQGTLVT VS S 128F20-H2 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYYLYWVRQAPGQGLEWI GEINPRSGGTNFNEKFKSRATVTVDaSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSRS GRLRGF YTMDYWGQGTLVT VS S 129F20-H3 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFASYYLYWVRQAPGQGLEWI GEINPRSGGTNFNEKFKSKATVTVDKSTNTAYMELS SLRSEDTAVYYC SR SGRLRGF YTMDYWGQGTLVTVS S 130F20-L1 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKAGENVGSYVSWYQQKPGQPPKLLIY GASNRYTGVPDRF SGSGS ATDFTLTIS SLQ AED VAVYYCGQTYRFLTFGQ GTKVEIK 131F20-L2 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKAGENVGSYVSWYQQKPGQsPKLLIYG ASNRYTGVPDRF SGSGS ATDFTLTIS SLQ AED VAVYYCGQTYRFLTFGQGT KVEIK 132F20-L3 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKAGENVGSYVSWYQQKPGKAPKLLIY GASNRYTGVPARFSGSGSATEFTLTISSLQPDDFATYYCGQTYRFLTFGQG TKVEVK 133F20-L4 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKAGENVGSYVSWYQQKPGKAPKLLIY GASNRYTGVPARFSGSGSATEFTLTISSLQPeDFATYYCGQTYRFLTFGQGT KVEVK 134Специалисту в данной области понятно, что изменения можно вносить в варианты осуществления, описанные выше, без отклонения от их широкого изобретательского замысла. Понятно, таким образом, что это изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами осуществления, но предназначено для включения модификаций в пределах содержания и объема настоящего изобретения, как определено посредством настоящего описания.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, с полипептидными последовательностями SEQ ID NO:29, 30, 31, 53, 54 и 55, соответственно, или SEQ ID NO:77, 78, 79, 101, 102 и 103, соответственно, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с FOLR1, предпочтительно, cFOLR1 человека.
- 2. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична SEQ ID NO:120, 9 или 119; или вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична SEQ ID NO:122, 10, 121 или 123.
- 3. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, содержащее:a) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:120; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 122;b) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:9; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:10;c) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 119; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 121;d) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 119; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 122;e) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 119; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 123;f) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:120; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 121;g) вариабельную область тяжелой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:120; и вариабельную область легкой цепи с полипептидной последовательностью SEQ ID NO: 123.
- 4. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является химерным, человеческим или гуманизированным.
- 5. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, где моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является способным связываться с FOLR1 и индуцировать опосредованный эффекторами лизис клеток опухоли.
- 6. Биспецифическое антитело, отличающееся тем, что содержит моноклональное антитело или его-
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/642,213 | 2018-03-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA046422B1 true EA046422B1 (ru) | 2024-03-13 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11555070B2 (en) | Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof | |
US11401329B2 (en) | Anti-CD47 antibodies and uses thereof | |
CN111867628A (zh) | 抗cd73抗体及其用途 | |
US12037391B2 (en) | Anti-DLL3 antibodies and uses thereof | |
US11873335B2 (en) | Anti-folate receptor 1 antibodies and uses thereof | |
US11214615B2 (en) | Anti-TIM-3 antibodies and uses thereof | |
US11306151B2 (en) | Anti-TIP-1 antibodies and uses thereof | |
EA046422B1 (ru) | Антитела против рецептора фолата 1 и их применения | |
EA041922B1 (ru) | Антитела против клаудина 18.2 и их применения | |
EA046808B1 (ru) | Антитела против dll3 и их применения | |
EA043281B1 (ru) | Анти-cd47 антитела и их применение | |
EA043284B1 (ru) | Антитела против cd73 и их применения | |
EA041205B1 (ru) | Антитела против tip-1 и их применения |