CN111289674A - 一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 - Google Patents
一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111289674A CN111289674A CN202010163717.3A CN202010163717A CN111289674A CN 111289674 A CN111289674 A CN 111289674A CN 202010163717 A CN202010163717 A CN 202010163717A CN 111289674 A CN111289674 A CN 111289674A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- selenium
- solution
- sample
- standard
- mug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 92
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 64
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 125000003748 selenium group Chemical group *[Se]* 0.000 title claims abstract description 19
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001402 ion-exchange chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 48
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 36
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 20
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 18
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical compound C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 16
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Natural products C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229940065287 selenium compound Drugs 0.000 claims description 16
- 150000003343 selenium compounds Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 16
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 14
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 14
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 14
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 claims description 14
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 claims description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 11
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 claims description 10
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 claims description 8
- 125000003130 L-selenocysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])[Se][H] 0.000 claims description 7
- JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N seleno-DL-cystine Natural products OC(=O)C(N)C[Se][Se]CC(N)C(O)=O JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 claims description 6
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000007872 degassing Methods 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 claims description 4
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 229940000207 selenious acid Drugs 0.000 claims description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 3
- BWKOZPVPARTQIV-UHFFFAOYSA-N azanium;hydron;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [NH4+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O BWKOZPVPARTQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 abstract description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 6
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 6
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N selenous acid Chemical compound O[Se](O)=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- 238000012421 spiking Methods 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150011375 Tab2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000000120 microwave digestion Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/38—Flow patterns
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/64—Electrical detectors
- G01N30/68—Flame ionisation detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法，属于食品领域。首先，将样品在‑40℃以下冷冻干燥，充分使植物细胞破壁，保持水果中硒形态不发生变化，硒的不同形态能够被充分提取；其次，建立以0.2％柠檬酸为提取剂，50℃水浴振荡提取4h的提取方法；最后，建立以0.1％柠檬酸‑氨水为流动相体系(pH＝5),离子色谱‑电感耦合等离子体质谱法联用(IC‑ICP‑MS)同时测定富硒水果中5种硒形态的检测方法。本发明对富硒水果中硒元素的来源，及在水果中的富集、转换和迁移有重要意义，目前国家标准尚无针对具体硒形态的检测技术标准。另外，本发明具有试剂用量少、操作简单、提取率高、分析时间短、检出限低、稳定性好、检测准确等特点，解决和弥补现有检测方法的不足。
Description
技术领域
本发明属于食品领域，涉及一种测定富硒水果中五种硒的检测方法。
背景技术
目前硒的检测国家标准主要有GB 5009.93-2017《食品中硒的测定》，该方法是对食品中总硒的测定，不能对硒的形态进行分析，从而不能正确的了解和评价富硒水果中硒的形态分布，以及对人体健康的作用。
本发明建立了以柠檬酸(2g/L)为提取试剂，恒温水域振荡法作为提取方法，样品溶液经离子色谱(IC)分离后，用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定，方法简单快速，可以测定富硒水果中两种无机硒和三种有机硒。
发明内容
由于水果中硒含量较低，硒形态难以提取。针对现有技术存在的问题，本发明提供一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法，解决了富硒水果中硒形态的提取和检测的技术问题，将方法检出限提高了近10倍，提取率也有了较大提升。
为了达到上述目的，本发明采用检测步骤如下：
一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法，包括以下步骤：
(1)配制溶液
①2g/L柠檬酸溶液：称取2g柠檬酸，用水稀释至1000mL；
②1g/L柠檬酸溶液：称取1g柠檬酸，用水稀释至1000mL。
(2)配制标准溶液
①五种硒的标准品：纯度＞99％的硒代氨基酸标准品，包括硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、硒代蛋氨酸[SeMet]。浓度为1000mg/L的***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]；
②混合标准中间液：分别准确称取***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]和硒代氨基酸标准品适量，配置成浓度为1mg/L的硒混合标准储备液(以硒计)；
③基质匹配混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液各0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、4mL于50mL容量瓶中，用1g/L柠檬酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为系列基质匹配标准工作溶液，硒标准溶液浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L。
(3)样品的前处理方法(制备样品溶液)
①样品预处理：将富硒水果样品清洗干净，粉碎后在-40℃冷冻干燥机冷冻干燥，干燥后的样品研磨成粉后备用。
②样品溶液的制备：称取干燥后的样品0.5g于刻度离心管中，加入20mL柠檬酸(2g/L)混匀，置于50℃恒温水浴中振荡提取4h后，取出后定容至25mL，于10000r/min下离心10min，收集上清液5mL加入正己烷1mL涡旋混合，收集水相试液过0.22μm水膜后备用。
(4)离子色谱-电感耦合等离子体质谱分析参考条件
①离子色谱分离条件
流动相：称取1.0g柠檬酸溶于1000mL水中，用氨水调pH至5.0，再加入10mL甲醇，于水浴中超声脱气10min，备用。色谱柱：阴离子交换柱Hamilton PRP X100(250mm×4mm)。流速：1.0mL/min。进样体积：50μL。
②电感耦合等离子体质谱仪器条件
射频功率：1550W；采样深度：9mm；采集质量数：Se78；载气流速：0.7L/min；辅助气流速：0.48L/min；积分时间：0.5s。
(5)定性分析
按照离子色谱-电感耦合等离子体质谱仪器条件测定步骤(2)配制的基质匹配混合标准工作溶液和步骤(3)制备的样品溶液，记录标准工作溶液和样品溶液中各化合物的色谱保留时间，当样品溶液中检出与标准溶液中五种硒色谱保留时间一致的色谱图，可以确定样品中检出对应的化合物。部分样品色谱保留时间可能会发生较小的偏移，从而难以通过保留时间来定性是哪种硒化合物，这种情况下可通过样品中加入该种硒化合物标准溶液进行上机测定，如果样品未知色谱峰与已知的硒化合物标准溶液色谱峰重合在一起，可定性为该种硒化合物。
(6)定量测定
①将基质匹配混合标准工作溶液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以保留时间T/min为横坐标，响应色谱峰面积I/cps为纵坐标，绘制标准曲线，以样品溶液色谱图中对应的峰面积通过标准曲线计算各硒形态的含量。
样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法定量，计算公式如下：
式中：X—样品中各硒化合物的含量，mg/kg；
C—样品溶液中各硒化合物的浓度，μg/L；
V—样品溶液定容体积，mL；
m—样品称样质量，g；
K—稀释倍数。
计算结果保留三位有效数字。
②本方法五种硒的线性范围为5～100μg/L；硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、***根[Se(IV)]、硒代蛋氨酸[SeMet]、硒酸根[Se(VI)]的检出限分别为：0.5μg/L、0.8μg/L、0.6μg/L、1.2μg/L、0.6μg/L。
本发明的有益效果为:
(1)采用离子色谱(IC)与电感耦合等离子质谱(ICP-MS)联用进行分析和检测，五种硒形态的硒在15分钟内能够同时被定性和定量分析，较现有方法分析时间短；
(2)前处理采用冷冻干燥技术，能够充分的破坏植物的细胞壁，提升了提取效率，同时还能防止硒的形态发生迁移和转化，将检出限提高了近10倍，解决了水果中硒含量过低难以检测的问题；
(3)采用柠檬酸-氨水缓冲盐流动相体系，能够保证硒形态稳定，同时采用柠檬酸(2g/L)，50℃水浴振荡体系提取，在保证硒形态稳定的前提下，能够最大的提升提取率，改善了硒代蛋氨酸SeMet再超声波提取下结构易发生断裂，回收率低的问题；
(4)本发明具有试剂用量少、操作简单、提取率高、检出限低、稳定性好、检测准确等特点，解决和弥补现有检测方法的不足，达到痕量元素形态分析的要求。
附图说明
图1为五种硒的色谱图，从左到右色谱峰依次为硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、***根[Se(IV)]、硒代蛋氨酸[SeMet]、硒酸根[Se(VI)]；
图2为硒代胱氨酸[SeCys2]标准曲线，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
图3为硒代半胱氨酸[SeCys]标准曲线，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
图4为***根[Se(IV)]标准曲线，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
图5为硒代蛋氨酸[SeMet]标准曲线，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
图6为硒酸根[Se(VI)]标准曲线，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
图7为不含五种硒的空白苹果样品色谱图；
图8为富硒苹果样品的色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实例1富硒苹果中五种硒形态的测定
(1)样品前处理
①样品预处理：将富硒苹果样品清洗干净，粉碎后在-40℃冷冻干燥机冷冻干燥，干燥后的样品研磨成粉后备用。
②样品溶液的制备：称取干燥后的样品0.5g于刻度离心管中，加入20mL柠檬酸(2g/L)混匀，置于50℃恒温水浴中振荡提取4h后，取出后定容至25mL，于10000r/min下离心10min，收集上清液5mL加入正己烷1mL涡旋混合，收集水相试液过0.22μm水膜后备用。
(2)离子色谱-串联质谱分析参考条件
①离子色谱分离条件
流动相：称取1.0g柠檬酸溶于1000mL水中，用氨水调pH至5.0，再加入10mL甲醇，于水浴中超声脱气10min，备用。色谱柱：阴离子交换柱Hamilton PRP X100(250mm×4mm)。流速：1.0mL/min。进样体积：50μL。
②电感耦合等离子体质谱仪器条件
射频功率：1550W；采样深度：9mm；采集质量数：78(Se)；载气流速：0.7L/min；辅助气流速：0.48L/min；积分时间：0.5s。
(3)标准溶液的配制
①五种硒的标准品：纯度＞99％的硒代氨基酸标准品，包括硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、硒代蛋氨酸[SeMet]。浓度为1000mg/L的***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]；
②混合标准中间液：分别准确称取***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]和硒代氨基酸标准品适量，配置成浓度为1mg/L的硒混合标准储备液(以硒计)；
③基质匹配混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液各0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、4mL于50mL容量瓶中，用1g/L柠檬酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为系列基质匹配标准工作溶液，硒标准溶液浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L。
(4)定量测定
将基质匹配混合标准工作溶液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以保留时间T/min为横坐标，响应色谱峰面积I/cps为纵坐标，绘制标准曲线，以以样品溶液色谱图中对应的峰面积通过标准曲线计算各硒形态的含量。
样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法定量，计算公式如下：
式中：X—样品中各硒化合物的含量，mg/kg；
C—样品溶液中各硒化合物的浓度，μg/L；
V—样品溶液定容体积，mL；
m—样品称样质量，g；
K—稀释倍数。
计算结果保留三位有效数字。
(5)加标回收率和重复性
分别在对照空白(不富硒的样品)中加入5μg/L、20μg/L、50μg/L三个浓度水平进行加标回收试验(n＝3)。
表2加标回收实验
Tab2 Addition recovery test
表2表明，三个加标水平的平均回收率在82％以上，相对标准偏差小于7％，实验数据表明本实例方法回收率与重复性均符合检测方法要求。
实例2富硒樱桃中无机硒和有机硒的测定
(1)样品前处理
①样品预处理：将富硒樱桃样品清洗干净，粉碎后在-40℃冷冻干燥机冷冻干燥，干燥后的样品研磨成粉后备用。
②样品溶液的制备：称取干燥后的样品0.5g于刻度离心管中，加入20mL柠檬酸(2g/L)混匀，置于50℃恒温水浴中振荡提取4h后，取出后定容至25mL，于10000r/min下离心10min，收集上清液5mL加入正己烷1mL涡旋混合，收集水相试液过0.22μm水膜后备用。
(2)离子色谱-串联质谱分析参考条件
①离子色谱分离条件
流动相：称取1.0g柠檬酸溶于1000mL水中，用氨水调pH至5.0，再加入10mL甲醇，于水浴中超声脱气10min，备用。色谱柱：阴离子交换柱Hamilton PRP X100(250mm×4mm)。流速：1.0mL/min。进样体积：50μL。
②电感耦合等离子体质谱仪器条件
射频功率：1550W；采样深度：9mm；采集质量数：78(Se)；载气流速：0.7L/min；辅助气流速：0.48L/min；积分时间：0.5s。
(3)标准溶液的配制
①硒标准品：浓度为1000mg/L的***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]；
②混合标准中间液：分别准确称取***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]标准溶液适量，配置成浓度为1mg/L的硒混合标准储备液(以硒计)；
③基质匹配混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液各0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、4mL于50mL容量瓶中，用1g/L柠檬酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为系列基质匹配标准工作溶液，浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L。
(4)无机硒(***根[Se(IV)]、硒酸根[Se(VI)])定量测定
将基质匹配混合标准工作溶液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以保留时间T/min为横坐标，响应色谱峰面积I/cps为纵坐标，绘制标准曲线，以样品溶液色谱图中对应的峰面积通过标准曲线计算各硒形态的含量。
样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法定量，计算公式如下：
式中：X—样品中各硒化合物的含量，mg/kg；
C—样品溶液中各硒化合物的浓度，μg/L；
V—样品溶液定容体积，mL；
m—样品称样质量，g；
K—稀释倍数。
计算结果保留三位有效数字，测得该样品无机硒含量(以干基计)为0.122mg/kg。
(5)总硒的测定：称取冻干后的樱桃样品0.3g置于消解罐中，加入5mL硝酸和2mL双氧水，进行微波消解。消解完成后在电热板赶酸至1mL，然后转移至50mL的容量瓶中采用电感耦合等离子体质谱直接测定，测得樱桃样品总硒(以干基计)含量为0.367mg/kg。
(6)有机硒的含量：有机硒的含量为总硒含量减去无机硒含量，0.367mg/kg-0.122mg/kg＝0.245mg/kg，因此，测得樱桃中有机硒的含量(以干基计)为0.245mg/kg，该樱桃有机硒占总硒比为66.8％。
以上所述实施例仅表达本发明的实施方式，但并不能因此而理解为对本发明专利的范围的限制，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制溶液
①2g/L柠檬酸溶液；
②1g/L柠檬酸溶液；
(2)配制标准溶液
①五种硒的标准品：纯度＞99％的硒代氨基酸标准品，包括硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、硒代蛋氨酸[SeMet]；浓度为1000mg/L的***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]；
②混合标准中间液：分别准确称取***根标准溶液[Se(IV)]、硒酸根标准溶液[Se(VI)]和硒代氨基酸标准品适量，配置成硒浓度为1mg/L的硒混合标准储备液；
③基质匹配混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液各0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、4mL于50mL容量瓶中，用1g/L柠檬酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为系列基质匹配标准工作溶液，硒标准溶液浓度依次为5μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L、80μg/L；
(3)样品的前处理方法
①样品预处理：将富硒水果样品清洗干净，粉碎后在-40℃冷冻干燥机冷冻干燥，干燥后的样品研磨成粉后备用；
②样品溶液的制备：称取干燥后的样品0.5g于离心管中，加入2g/L的柠檬酸混匀，置于50℃恒温水浴中振荡提取4h后，于10000r/min下离心10min，收集上清液5mL加入正己烷1mL涡旋混合，收集水相试液过0.22μm水膜后备用；
(4)离子色谱-电感耦合等离子体质谱分析参考条件
①离子色谱分离条件
流动相：称取1.0g柠檬酸溶于1000mL水中，用氨水调pH至5.0，再加入10mL甲醇，于水浴中超声脱气10min，备用；色谱柱：阴离子交换柱Hamilton PRP X100(250mm×4mm)；流速：1.0mL/min；进样体积：50μL；
②电感耦合等离子体质谱仪器条件
射频功率：1550W；采样深度：9mm；采集质量数：Se78；载气流速：0.7L/min；辅助气流速：0.48L/min；积分时间：0.5s；
(5)定性分析
按照离子色谱-电感耦合等离子体质谱仪器条件测定步骤(2)配制的基质匹配混合标准工作溶液和步骤(3)制备的样品溶液，记录标准工作溶液和样品溶液中各化合物的色谱保留时间，当样品溶液中检出与标准溶液中五种硒色谱保留时间一致的色谱图，能够确定样品中检出对应的化合物；当部分样品色谱保留时间发生偏移时，通过样品中加入该种硒化合物标准溶液进行上机测定，如果样品未知色谱峰与已知的硒化合物标准溶液色谱峰重合在一起，则定性为该种硒化合物；
(6)定量测定
①将基质匹配混合标准工作溶液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以保留时间T/min为横坐标，响应色谱峰面积I/cps为纵坐标，绘制标准曲线，以样品溶液色谱图中对应的峰面积通过标准曲线计算各硒形态的含量；
样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法定量，计算公式如下：
式中：X—样品中各硒化合物的含量，mg/kg；
C—样品溶液中各硒化合物的浓度，μg/L；
V—样品溶液定容体积，mL；
m—样品称样质量，g；
K—稀释倍数；
计算结果保留三位有效数字；
②五种硒的线性范围为5～100μg/L；硒代胱氨酸[SeCys2]、硒代半胱氨酸[SeCys]、***根[Se(IV)]、硒代蛋氨酸[SeMet]、硒酸根[Se(VI)]的检出限分别为：0.5μg/L、0.8μg/L、0.6μg/L、1.2μg/L、0.6μg/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010163717.3A CN111289674A (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010163717.3A CN111289674A (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111289674A true CN111289674A (zh) | 2020-06-16 |
Family
ID=71023825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010163717.3A Pending CN111289674A (zh) | 2020-03-10 | 2020-03-10 | 一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111289674A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112649552A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-04-13 | 南京恒宝田功能农业产业研究院有限公司 | 一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法 |
| CN114924001A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-08-19 | 中国计量科学研究院 | 一种基于独立校准的含磷或含硒化合物标准溶液定值方法 |
| CN114137134B (zh) * | 2022-01-04 | 2023-10-24 | 杭州市农业科学研究院 | 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱分离硒形态的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102721779A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-10 | 浙江农林大学 | 植物硒形态的检测方法 |
| CN106324075A (zh) * | 2016-10-20 | 2017-01-11 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | 电感耦合等离子体质谱法测定富硒蔬菜中有机硒含量的方法 |
| CN106596704A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-04-26 | 山东省食品药品检验研究院 | 碰撞池‑电感耦合等离子体质谱仪测定蔬菜中硒含量的方法 |
| CN107703220A (zh) * | 2017-08-14 | 2018-02-16 | 温州大学 | 一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法 |
-
2020
- 2020-03-10 CN CN202010163717.3A patent/CN111289674A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102721779A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-10-10 | 浙江农林大学 | 植物硒形态的检测方法 |
| CN106324075A (zh) * | 2016-10-20 | 2017-01-11 | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 | 电感耦合等离子体质谱法测定富硒蔬菜中有机硒含量的方法 |
| CN106596704A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-04-26 | 山东省食品药品检验研究院 | 碰撞池‑电感耦合等离子体质谱仪测定蔬菜中硒含量的方法 |
| CN107703220A (zh) * | 2017-08-14 | 2018-02-16 | 温州大学 | 一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 姚真真 等: "高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法检测富硒苹果中5种硒形态", 《食品安全质量检测学报》 * |
| 林立 等: "离子色谱-电感耦合等离子体质谱法测定奶粉中的硒形态", 《理化检验(化学分册)》 * |
| 王丙涛 等: "高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用检测食品中的五种硒形态", 《色谱》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112649552A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-04-13 | 南京恒宝田功能农业产业研究院有限公司 | 一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法 |
| CN114137134B (zh) * | 2022-01-04 | 2023-10-24 | 杭州市农业科学研究院 | 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱分离硒形态的方法 |
| CN114924001A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-08-19 | 中国计量科学研究院 | 一种基于独立校准的含磷或含硒化合物标准溶液定值方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111289674A (zh) | 一种同时测定富硒水果中五种硒形态的检测方法 | |
| CN107976481B (zh) | 一种中药材中钪含量的检测方法 | |
| CN114137134A (zh) | 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱分离硒形态的方法 | |
| RU2738166C1 (ru) | Способ измерений массовых концентраций мышьяка, кадмия, свинца, ртути в мясных и мясосодержащих продуктах методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой | |
| CN102128835B (zh) | 基于aa3型流动注射分析仪的土壤全氮含量测定方法 | |
| CN113533548B (zh) | 一种化工产品中1-乙烯基咪唑的检测方法 | |
| CN107677744B (zh) | 一种动物组织细胞中形态汞的检测方法 | |
| AU2019100873A4 (en) | Analytical method for simultaneously determining content of harmful heavy metals in edible fungi cultivation matrix by using combined digestion | |
| CN102830183B (zh) | 一种用于hplc测定丝瓜种子内源激素含量的样品前处理方法 | |
| CN107703220A (zh) | 一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法 | |
| CN103969323A (zh) | 一种利用75AS16O+测定烟草及烟草制品中As的方法 | |
| CN108444985B (zh) | 一种肾***icp-ms鉴别方法及应用 | |
| CN104165947B (zh) | 一种定量测定植物中生长素与脱落酸含量的方法 | |
| CN107941968B (zh) | 一种从大规模鳍藻培养藻液中制备扇贝毒素-2标准样品的方法 | |
| CN110333307A (zh) | Hplc-icp-ms联用测定土壤中砷形态的方法 | |
| CN108387575A (zh) | 一种应用连续流动分析仪测定植物全氮的方法 | |
| CN112557560A (zh) | 一种hplc-icp-ms测定土壤中硒酸盐、***盐的检测方法 | |
| CN114295770A (zh) | 离子色谱法测定磷肥中磷含量的方法与流程 | |
| CN112540113A (zh) | 可用于氨气同位素自然丰度测定的酸性溶液吸收方法 | |
| CN111855352A (zh) | 沸石粉中总砷含量的测定方法 | |
| CN112345620A (zh) | 一种电感耦合等离子体质谱法定量检测血清元素的方法 | |
| CN116642979A (zh) | 一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法 | |
| CN117214327B (zh) | 一种蜂蜜中正己醇、正庚醇和雪松醇的检测方法及其应用 | |
| CN112964803A (zh) | 一种富硒茶树中硒形态测定的方法及应用 | |
| CN114460197A (zh) | 一种定量检测农产品中有机硒含量的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200616 |