CN108444985B - 一种肾***icp-ms鉴别方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及动物结石类中药的鉴别方法，具体涉及一种肾***ICP‑MS鉴别的方法及应用；将已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的样品进行湿法消解并进行ICP‑MS测定，得到Li、Na、Mg、Al、P、S、K、Ca、Ti、V、Mn、Co、Ni、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素的数据；然后将测得的数据导入SPSS 22.0软件中进行聚类分析，采用了“组间连接”聚类法生成树状聚类图，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***是否属于同一种属；或是将数据数据导入SIMCA‑P 14.1软件中进行PCA分析得到PCA散点图，同时根据散点图中的聚集程度判定待测的不同批次的肾***的均一稳定性；从无机元素组成方面鉴定肾***的种属来源，还可用于不同批次的肾***的均一稳定性的鉴定，方法简单快捷。
Description
技术领域
本发明涉及动物结石类中药的鉴别方法，具体涉及一种肾***ICP-MS鉴别的方法及应用。
背景技术
中药制剂质量均一性问题一直是个热点问题，中药制剂质量的均一性直接影响到临床用药安全性和有效性，也关系到患者的健康和安全。然而，影响中药制剂质量均一的因素众多，其中，中药材来源的多样化、“一药多基原”以及不同批次的中药材的均一稳定性均会对使用其作为原辅料而制备的中药制剂的均一性产生影响。
肾***系牛科动物黄牛Bos taurus domesticus Gmelin、水牛Bubalus bubalisLinnaeus或猪科动物猪Sus scrofa domestica Brisson的膀胱结石，全国各地均有分布。据文献记载，肾***有利水消肿之效，中医临床用于治疗“癃闭”，在印会河教授“疏肝散结方”中提到肾***单味药使用也具有奇效，但目前肾***尚未有质量标准，肾***药材市场混乱，良莠不齐，缺乏有效可靠的质量监控手段，不利于药材质量控制。对于不同批次的肾***的均一稳定性以及肾***的种属来源尚未有一种有效的鉴定方法及监控手段。
发明内容
本发明的目的之一为解决肾***的种属来源缺乏有效的鉴定方法的技术问题，提供一种肾***ICP-MS鉴别方法及应用。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种肾***ICP-MS鉴别的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的样品进行湿法消解；
（2）将上述已知基原肾***和待测的不同批次的肾***消解后稀释进行ICP-MS测定，得到Li、 Na 、Mg、Al、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Mn 、Co 、Ni 、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素的数据；
（3）将步骤（2）测得的数据导入SPSS 22.0软件中进行聚类分析，采用了“组间连接”聚类法生成树状聚类图，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***是否属于同一种属；
（4）将步骤（2）测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析得到 PCA散点图，由于不同品种肾***有明显分开的趋势，各品种肾***化学成分存在一定差异，各自均有不同的组成结构倾向，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***是否属于同一种属。
本发明的另一目的，在于针对不同批次的肾***的均一稳定性，缺乏有效的鉴定方法的问题，提供一种鉴定方法，包括进行上述步骤（1）和（2）之后，将步骤（2）测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析得到 PCA散点图，同时根据散点图中的聚集程度判定待测的不同批次的肾***的均一稳定性。
上述步骤中，ICP-MS测定指的是电感耦合等离子体质谱测定。步骤（2）中之所以选择测定Li、 Na 、Mg、Al、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Mn 、Co 、Ni 、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素的数据，是因为经过统计后分析后确定肾***中无机元素强度高于10000的是这18种元素。其中，SPSS 22.0软件和SIMCA-P 14.1软件为现有的公知的分析软件。
进一步的，步骤（1）中进行湿法消解时，分别精密称取已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的粉末0.1g于烧杯中，分别加入65%硝酸10 mL、高氯酸1mL，盖玻璃皿静置过夜后置于电热板180℃湿法消解，消解至液体澄清透明后于电热板上赶酸至液体剩余1mL，加超纯水定容至50mL比色管中。
进一步的，步骤（1）中湿法消解的肾***在步骤（2）中进行ICP-MS测定时前要稀释20倍；步骤（2）中ICP-MS测定条件为：测试样品前调谐仪器灵敏度，并测试调谐液定位；采用KED模式，氩气纯度为99.99%，氦气纯度为99.99%，雾化器流速为1.0386L/min，冷却器流速为14.00 L/min，辅助气0.8 L/min，采样深度为5mm，等离子体功率为1550W，泵速为40rpm。
进一步的，猪源和牛源两种肾***之间的差异物为Li、 Na 、Mg、P 、S、K 、Ca 、Ti、V 、Zn、In、U。
本发明的另一目的，就是将一种肾***ICP-MS鉴别方法应用在不同批次的肾***的均一稳定性以及肾***的种属来源的鉴定中。
与现有技术相比本发明具有以下有益效果：
本发明肾***ICP-MS鉴别方法，能同时表征18种无机元素，包括Na 、Mg、P 、S、K等主要元素，能全面反映肾***化学成分和质量特征，从无机元素组成方面鉴定肾***的种属来源，还可用于不同批次的肾***的均一稳定性的鉴定，方法简单快捷。
附图说明
图1为实施例1中不同品种肾***树状聚类图。
图2为实施例1不同品种肾***PCA散点图。
图3为实施例1不同品种肾***OPLS-DA散点图。
图4为实施例1不同品种肾***OPLS-DA拟合图。
图5为实施例1不同品种肾***VIP值图。
图6为实施例1不同品种肾***S-plots图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明肾***ICP-MS鉴别方法的构建过程。
收集市售2个不同品种肾***共12个批次（每个品种各6批，其中1-6为牛源性(N)；7-12为猪源性(Z)）
一、对上述不同品种肾***共12个批次肾***无机元素谱的测定。
（1）分别精密称取上述肾***粉末0.1g于烧杯中，分别加入65%硝酸10 mL、高氯酸1mL，盖玻璃皿静置过夜后置于电热板180℃湿法消解，消解至液体澄清透明后于电热板上赶酸至液体剩余1mL左右，加超纯水定容至50mL比色管中。
（2）测试前将试样稀释20倍，用电感耦合等离子体质谱仪进行测试，得到肾***ICP-MS各元素数据。
（3）测试条件：测试样品前调谐仪器灵敏度，并测试调谐液定位。采用KED模式，氩气纯度为99.99%，氦气纯度为99.99%，雾化器流速为1.0386L/min，冷却器流速为14.00 L/min，辅助气0.8 L/min，采样深度为5mm，等离子体功率为1550W，泵速为40rpm。
（4）对肾***ICP-MS数据进行统计分析，确定肾***中无机元素强度高于10000的元素有：Li、 Na 、Mg、Al 、Si 、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Mn 、Co 、Ni 、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素。
（5）将数据导入SPSS 22.0软件中进行聚类分析。采用了“组间连接”聚类法生成树状聚类图，由图1可知，样品1-6为第一类，样品7-12为第二类。
二、对测定得到的不同品种肾***共12个批次肾***无机元素比较。
将上述所测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析。由不同品种肾***PCA散点图(附图2)可见，不同品种肾***有明显分开的趋势，说明各品种肾***化学成分存在一定差异，各自均有不同的组成结构倾向，证明该方法可以很好区分两种不同基原肾***；其中猪源性肾***与牛源性肾***组内聚集程度均较好，说明该品种肾***质量均一稳定。
对不同品种肾***无机元素谱进行比较分析，由不同品种肾***OPLS-DA散点图(附图3)可见，各品种肾***组间关系分明，说明各品种肾***化学成分存在一定差异，模型拟合成立(附图4)，将VIP值(附图5)与t-Test检验P＜0.05的数据相结合得出两种肾***间差异物为Li、 Na 、Mg、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Zn、In、U(附图6)。由此可以看出，ICP-MS无机元素谱用于肾***质量控制，能够对其无机元素含量及均一性进行比较。
实施例2
一种肾***ICP-MS鉴别的方法，包括以下步骤：
（1）将已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的样品进行湿法消解：分别精密称取已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的粉末0.1g于烧杯中，分别加入65%硝酸10 mL、高氯酸1mL，盖玻璃皿静置过夜后置于电热板180℃湿法消解，消解至液体澄清透明后于电热板上赶酸至液体剩余1mL，加超纯水定容至50mL比色管中。
（2）将上述已知基原肾***和待测的不同批次的肾***消解后稀释20倍进行ICP-MS测定，得到Li、 Na 、Mg、Al、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Mn 、Co 、Ni 、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素的数据；具体测定条件为测试样品前调谐仪器灵敏度，并测试调谐液定位；采用KED模式，氩气纯度为99.99%，氦气纯度为99.99%，雾化器流速为1.0386L/min，冷却器流速为14.00L/min，辅助气0.8 L/min，采样深度为5mm，等离子体功率为1550W，泵速为40rpm。
（3）将步骤（2）测得的数据导入SPSS 22.0软件中进行聚类分析，采用了“组间连接”聚类法生成树状聚类图，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***是否属于同一种属。
（4）将步骤（2）测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析得到 PCA散点图，由于不同品种肾***有明显分开的趋势，各品种肾***化学成分存在一定差异，各自均有不同的组成结构倾向，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***是否属于同一种属，同时根据散点图中的聚集程度判定待测的不同批次的肾***的均一稳定性。
Claims (5)
1.一种肾***ICP-MS鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的样品分别进行湿法消解；
（2）将上述已知基原肾***和待测的不同批次的肾***消解后稀释进行ICP-MS测定，得到Li、 Na 、Mg、Al、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Mn 、Co 、Ni 、Cu、Zn、In、Ba、U共18种元素的数据；
（3）将步骤（2）测得的数据导入SPSS 22.0软件中进行聚类分析，采用了“组间连接”聚类法生成树状聚类图，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***属于同一种属；
（4）或将步骤（2）测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析得到 PCA散点图，由于不同品种肾***有明显分开的趋势，各品种肾***化学成分存在一定差异，各自均有不同的组成结构倾向，从而区分待测的肾***是否与已知基原肾***属于同一种属；
将步骤（2）测得的数据导入SIMCA-P 14.1软件中进行PCA分析得到 PCA散点图，同时根据散点图中的聚集程度判定待测的不同批次的肾***的均一稳定性。
2.根据权利要求1所述的一种肾***ICP-MS鉴别方法，其特征在于，步骤（1）中进行湿法消解时，分别精密称取已知基原肾***和待测的不同批次的肾***的粉末0.1g于烧杯中，分别加入65%硝酸10 mL、高氯酸1mL，盖玻璃皿静置过夜后置于电热板180℃湿法消解，消解至液体澄清透明后于电热板上赶酸至液体剩余1mL，加超纯水定容至50mL比色管中。
3.根据权利要求1所述的一种肾***ICP-MS鉴别方法，其特征在于， 步骤（1）中湿法消解的肾***在步骤（2）中进行ICP-MS测定时前要稀释20倍；步骤（2）中ICP-MS测定条件为：测试样品前调谐仪器灵敏度，并测试调谐液定位；采用KED模式，氩气纯度为99.99%，氦气纯度为99.99%，雾化器流速为1.0386L/min，冷却器流速为14.00 L/min，辅助气0.8 L/min，采样深度为5mm，等离子体功率为1550W，泵速为40rpm。
4.根据权利要求1所述的一种肾***ICP-MS鉴别方法，其特征在于，猪源和牛源两种肾***之间的差异物为Li、 Na 、Mg、P 、S、K 、Ca 、Ti 、V 、Zn、In、U。
5.根据权利要求1所述的一种肾***ICP-MS鉴别方法的应用，其特征在于，在鉴定不同批次的肾***的均一稳定性以及肾***的种属来源的应用。
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| CN108444985A (zh) | 2018-08-24 |
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