CN110771424A - 一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：在桑黄子实体生长过程中，使子实体表面与含有锌和钙的水溶液相接触。采用本公开的栽培方法，能够使得桑黄子实体有效积累抗肿瘤的有效成分。

Description

一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法

技术领域

本公开涉及一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

桑黄属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、针层孔菌属(Phellinus)，别名桑臣、树鸡、胡孙眼、桑黄菰、桑黄菇、针层孔菌、梅树菌。现代医学研究发现桑黄有多种药理作用，在抗菌、免疫调节、抑制汗腺分泌、抗肿瘤、抗纤维化、消炎、镇痛、抗氧化等方面有显著疗效。其中，桑黄多糖是桑黄的一种有效活性成分，经过相关的研究报道，桑黄中起主要抗肿瘤作用的正是桑黄多糖，这些研究发现，桑黄多糖能够有效的抑制肿瘤细胞的生长，而且还能防止肿瘤细胞的转移。

随着人们经济水平和保健意识的增强，桑黄的需要量较大，而野生桑黄资源供不应求，因此，桑黄人工栽培技术应运而生。

近年来，关于桑黄人工栽培的文献报道主要集中在子实体形成速度、子实体大小的均一性、污染率等方面，而少见一种专门的累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法。

发明内容

针对以上背景技术，本公开提供一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法能够快速有效的使子实体积累多糖等抗肿瘤有效成分。

具体的，本公开采用以下技术方案：

本公开提供一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，包括以下步骤：

在桑黄子实体生长过程中，使子实体表面与含有锌离子和钙离子的水溶液相接触。

进一步的，所述抗肿瘤的有效成分是桑黄多糖。

与本发明人知晓的相关技术相比，本公开其中的一个技术方案具有如下有益效果：

(1)采用本公开的栽培方法，能够使得桑黄子实体有效积累抗肿瘤的有效成分。

(2)采用本公开的栽培方法，桑黄产量和品质均较好。

(3)采用本公开的栽培方法，桑黄子实体的生长周期较常规方法相对缩短。

(4)本公开的栽培方法，操作方便，可靠有效。

附图说明

构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。

图1是本公开实施例1中的原种菌种。

图2是本公开实施例1中待采收的桑黄子实体。

图3是本公开实施例1中不同生长时期桑黄子实体的干重(每袋)和粗多糖含量的变化曲线。

图4是本公开实施例1中不同生长时期桑黄子实体的干重(每袋)与粗多糖含量的变化曲线。

图5是本公开实验例1中不同生长时期桑黄子实体的干重(每袋)和粗多糖含量的变化曲线。

图6是本公开实验例3中粗多糖的含量变化。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的，目前缺少一种专门的累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，为了解决如上的技术问题，在本公开的一个典型的实施方式中，提供一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：

在桑黄子实体生长过程中，使子实体表面与含有锌和钙的水溶液相接触。

在本公开的一个或多个具体的实施方式中，使子实体与含有锌和钙的水溶液相接触的具体步骤为：将含有锌和钙的水溶液以喷雾的形式施加在子实体表面上。

桑黄的整个生长过程基本包括：发菌阶段、子实体发育阶段。而子实体发育阶段基本包括：菇蕾原基分化、桑黄柄、桑黄开伞、成熟子实体等。本发明人经过长期的实践和大量的实验发现，在桑黄开伞初期(开口后的第20～25天)多糖含量最高，随着子实体的生长，多糖含量骤减。虽然开伞初期多糖含量最高，但是由于此时期的子实体较小，重量较低，若是此时期直接采收的话，实际获取的桑黄多糖产量并不高，经济效益较低。针对此，发明人从糖代谢的角度入手，以期通过特定手段刺激合成多糖的糖代谢酶，使子实体部分的糖代谢酶可以较长时间的保持高酶活性，从而促进桑黄多糖的合成。经过发明人长期不懈的努力和锐意的研究，发现在桑黄子实体特定生长时期，使子实体与含有锌离子和钙离子的水溶液相接触，能够使子实体内的多糖含量保持较高的水平，从而使多糖含量下降较慢，而且能够使子实体的生长速度相对较快，随着子实体的生长，污染率已经较低，这样在特定时期获取子实体就可获取较多的桑黄多糖，经济效益高。

在试验过程中，本发明人还试验了多种离子的水溶液，比如只含锌离子的水溶液、只含钙离子的水溶液、含有铁离子的水溶液、含有镁离子的水溶液、含有钼离子的水溶液、含有铜离子的水溶液等，但是发现只有锌离子和钙离子同时存在时，效果较为优异，能够较明显的促进多糖的合成。

在本公开的一个或多个实施方式中，所述抗肿瘤的有效成分是桑黄多糖。

不同种类的桑黄其有效成分和生长情况有一定的差异。在本公开的一个或多个实施方式中，所述桑黄的种类为桑黄火木层孔菌Phellinus igniarius。

在本公开的一个或多个实施方式中，所述桑黄子实体生长过程是指在菌袋开口的第18～22天中的任一时间点或时间段内。在菌袋开口的第18～22天属于桑黄开伞之前的时期，经过试验验证，在该时期，喷施含有锌离子和钙离子的水溶液，可以使后期的子实体内的多糖含量保持较高的水平，从而使多糖含量下降较慢，而且能够使子实体的生长速度相对较快。

在本公开的一个或多个实施方式中，在菌袋开口的第32～38天，采收桑黄子实体。虽然桑黄子实体中粗多糖的含量在第25天左右是最高的，但是此时的子实体重量较小，总的多糖含量并不高。而在第32～38天期间，子实体的重量增加较快，综合考虑，宜在第32～38天期间进行采收。

在本公开的一个或多个实施方式中，所述水溶液中，锌离子或者钙离子的质量浓度为0.01～0.1w/w％。经过试验验证，锌离子或者钙离子的质量浓度为0.02w/w％时，效果更佳。进一步的，所述锌离子的添加形式为硫酸锌、氯化锌、硝酸锌等的一种或多种，钙离子的添加形式为氯化钙、硝酸钙、磷酸二氢钙等的一种或多种。

在本公开的一个或多个实施方式中，所述方法包括以下步骤：

(1)栽培种的培养：将栽培种培养基装入菌袋之中，接种原种后进行暗培养，待菌种长满菌袋，即发菌结束；

(2)出菇培养：

发菌结束后继续暗培养，待菌袋内菌丝由浅黄色全部变成深黄色后，在菌袋两侧开口，并控制出菇的环境条件。

步骤(1)中，所述原种是通过以下方法制备得到的：

A、母种活化：

将母种接种至PDA综合培养基上进行活化，25～28℃恒温暗培养8～12天；

所述PDA综合培养基为：马铃薯(去皮)200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B18g，琼脂20g，水1000mL，自然pH；

B、原种培养：

将原种培养基装入菌袋中，封口，高压灭菌后，将活化后的菌种接种至原种培养基，25～28℃恒温下进行暗培养，25～40天后菌种长满菌袋，将长满菌种(即原种)的菌袋4℃冷藏备用或立即使用。

本公开以在较短的时间内得到的原种菌丝粗壮为目标筛选和优化原种培养基配方，经过大量的试验，最终得到的原种培养基是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20～25％，玉米芯20～25％，石膏2～3％，葡萄糖4～6％，磷酸氢钾0.4～0.6％，硫酸镁0.4～0.6％，剩余为桑木屑。加水，使培养基水含量为55～65w/w％。

步骤(1)中，所述栽培种培养基，是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20～25％，玉米芯20～25％，蔗糖3～5％，石膏2～3％，肉桂废弃物0.5～1％，剩余为桑木屑。加水，使培养基水含量为60～70w/w％。

其中，所述肉桂废弃物是指桂油生产之后产生的桂皮渣、桂皮叶等废弃物。经过试验验证，在栽培培养基中加入少量的肉桂废弃物，能够有效降低菌袋和桑黄子实体的污染率。其使用量为0.5～1％，试验发现，由于其含芳香油类物质和烯萜类，对桑黄的生长有一定的抑制作用，含量不宜较高。

而桑木屑、大豆秸秆和玉米芯的配合使用，能够满足桑黄快速生长的需要。栽培培养基中的固体物(桑木屑、大豆秸秆、玉米芯和肉桂废弃物)的粒度为0.1～2cm。经过试验验证，该栽培种培养基在为桑黄提供充足营养素的前体下，能够明显降低菌袋和桑黄子实体的污染率。

步骤(1)中，暗培养温度为25～28℃，培养时为28～35天。

本发明人研究了温度、湿度和光照等环境条件对桑黄子实体中多糖的影响，经过试验研究发现，特定的昼夜温差更加有利于桑黄子实体中多糖的形成和积累。故在步骤(2)中，出菇的环境条件选择为：昼温(6:00～18:00)为28～32℃，夜温(18:00～第二天6:00)为22～26℃，温差为5～6℃，湿度85～95％，散射光照射，一日通风两次，每次0.5～1h。

关于本公开涉及的桑黄培养容器，采用菌袋，所述菌袋的材质可以是聚乙烯或聚丙烯。

关于本公开涉及的接种操作，应严格按照无菌操作，防止杂菌污染。

关于本公开涉及的接种量，每100g培养料用种1.0-1.2g，若是接种量较少的话，进入的杂菌可能在培养料快速繁殖。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。

若无特殊说明，以下实施例均采用以下试验材料和试验方法。

试验材料：

(1)菌种来源：本公开所使用的桑黄种类为火木层孔菌(桑黄)Phellinusigniarius，编号BNCC231138，保存在PDA斜面培养基上，该菌种可通过常规商业途径得到。

(2)原种活化培养基(PDA综合培养基)：马铃薯(去皮)200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B18g，琼脂20g，水1000mL，自然pH。该培养基主要用于菌种活化。

(3)原种培养基，是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20％，玉米芯20％，石膏2％，、葡萄糖4％、磷酸氢钾0.6％，硫酸镁0.6％，剩余为桑木屑。加水，使培养基水含量为60％。

(4)栽培种培养基，是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20％，玉米芯20％，蔗糖4％，石膏2％，肉桂废弃物0.5％，剩余为桑木屑。加水，使培养基水含量为60％。

(5)本公开的粗多糖含量的测定参考中华人民共和国农业行业标准NY/T676—2008。

实施例1

一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：

(1)保存菌种的活化：

2018年5月10日，将保存的斜面菌种(即母种)BNCC231138接种至PDA综合培养基上进行活化，25℃恒温暗培养8天；

(2)原种培养：

菌袋采用15×40cm的聚乙烯袋，2018年5月18日将原种培养基装入菌袋中，边装边压实，然后进行封口，高压灭菌后，将活化后的菌种接种至原种培养基，25℃恒温下进行暗培养，30天后菌种长满菌袋，如图1所示，将长满菌种(即原种)的菌袋4℃冷藏备用。

(3)栽培种的培养：

发菌阶段：菌袋采用15×40cm的聚乙烯袋，2018年6月1日将栽培种培养基装入菌袋中，边装边压实，然后进行封口，高压灭菌后，将原种接种至栽培种培养基，25℃恒温下进行暗培养，培养室内湿度65％，2018年6月30日(30天后)菌种长满菌袋。

(4)出菇培养：

继续在25℃下恒温暗培养，并观察菌袋内菌丝的颜色变化，菌袋内的菌丝由之前的浅黄色基本全部变成深黄色时，在菌袋两侧开长方形口(尺寸：约3～4×1～2cm)，并控制出菇培养室环境条件，昼温(6:00～18:00)为30℃，夜温(18:00～第二天6:00)为25℃，湿度90％左右，散射光照射，一日通风两次，每次0.5h。并定期对出菇培养室消毒，防止感染。

其中，在开口后的第20天，采用喷雾器将含有硫酸锌和硝酸钙的水溶液喷施至出菇处的子实体，硫酸锌和硝酸钙的质量浓度均为0.02w/w％，要求喷施均匀一致，喷施量：子实体表面出现水雾状小滴即可，不以多喷，否则容易引起子实体发霉腐烂。

在菌袋开口后的第35天，即可采收子实体，如图2所示。

实施例2

一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：

与实施例1的区别在于，在开口后的第22天，采用喷雾器将含有硫酸锌和硝酸钙的水溶液喷施至出菇处的子实体，硫酸锌和硝酸钙的质量浓度均为0.04w/w％，要求喷施均匀一致。

在菌袋开口后的第38天，即可采收子实体。

其他方法和条件相同。

实施例3

一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：

与实施例1的区别在于，在开口后的第20天，采用喷雾器将含有硫酸锌和硝酸钙的水溶液喷施至出菇处的子实体，硫酸锌和硝酸钙的质量浓度均为0.04w/w％，要求喷施均匀一致。

在菌袋开口后的第36天，即可采收子实体。

其他方法和条件相同。

实施例4

一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，该方法包括以下步骤：

(1)保存菌种的活化：

2018年5月10日，将保存的斜面菌种(即母种)BNCC231138接种至PDA综合培养基上进行活化，25℃恒温暗培养8天；

(2)原种培养：

菌袋采用15×40cm的聚乙烯袋，2018年5月18日将原种培养基装入菌袋中，封口，高压灭菌后，将活化后的菌种接种至原种培养基，25℃恒温下进行暗培养，30天后菌种长满菌袋，如图1所示，将长满菌种(即原种)的菌袋4℃冷藏备用。

(3)栽培种的培养：

发菌阶段：菌袋采用15×40cm的聚乙烯袋，将栽培种培养基装入菌袋中，封口，高压灭菌后，将原种接种至栽培种培养基，28℃恒温下进行暗培养，30天后菌种长满菌袋。

(4)出菇培养：

28℃下继续恒温暗培养，并观察菌袋内菌丝的颜色变化，待菌袋内的菌丝由之前的浅黄色基本全部变成深黄色，在菌袋两侧开长方形口(尺寸：约2×1cm)，并控制出菇培养室环境条件，昼温(6:00～18:00)为32℃，夜温(18:00～第二天6:00)为28℃，湿度95％左右，散射光照射，一日通风两次，每次0.5h。并且定期对出菇培养室消毒，防止感染。

其中，在开口后的第20天，采用喷雾器将含有硫酸锌和硝酸钙的水溶液喷施至出菇处的子实体，硫酸锌和硝酸钙的质量浓度均为0.02w/w％，要求喷施均匀一致。

在菌袋开口后的第35天，即可采收子实体。

实验例1

与实施例1的区别是：在开口后的第20天，只是喷水对照，没有喷施含有硫酸锌和硝酸钙的水溶液。

其他方法和条件与实施例1相同。

实验例2

研究子实体不同的生长时期其总多糖的含量:

分别在实施例1和实验例1菌袋开口后的第5天、第10天、第15天、第25天、第35天、第45天、第55天、第65天采集全部子实体，测定子实体干重和粗多糖含量。

如图3所示，采用实施例1的方法培养得到的子实体的干重随着培养时间的延长不断增加，而子实体中粗多糖的含量随着培养时间的延长先升高后降低，在25天左右(开伞初期)粗多糖含量达到最高，在25天～35天下降比较平缓，第35天以后骤减。发明人选择在35天进行采收，能够获得最大粗多糖量，如图4所示。

如图5所示，采用实验例1的方法培养得到的子实体的干重和粗多糖的含量在同一时间天数均比实施例1的低。而且粗多糖的含量在下降时没有平缓期，粗多糖下降速度非常快。

实验例3

与实施例1的区别是：其中，在开口后的第20天，采用喷雾器将含有硫酸镁和硝酸钙的水溶液喷施至出菇处的子实体，硫酸镁和硝酸钙的质量浓度均为0.02w/w％，要求喷施均匀一致。

其他方法和条件与实施例1相同。

在袋开口后的第5天、第10天、第15天、第25天、第35天、第45天、第55天、第65天采集全部子实体，测定子实体粗多糖含量。

试验结果如图6所示，在菌袋开口的第25天，桑黄子实体的粗多糖的含量仅为9.2％，与实施例1相比较低，并且25天之后，粗多糖含量下降速度较快。

上述实施例为本公开较佳的实施方式，但本公开的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本公开的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本公开的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种累积抗肿瘤有效成分的桑黄栽培方法，其特征是，该方法包括以下步骤：

在桑黄子实体生长过程中，使子实体表面与含有锌和钙的水溶液相接触。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述抗肿瘤的有效成分是桑黄多糖。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述桑黄的种类为桑黄火木层孔菌Phellinusigniarius。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述桑黄子实体生长过程是指在菌袋开口的第12～18天中的任一时间点或时间段内；

进一步的，所述桑黄子实体生长过程是指在菌袋开口的第18～22天中的任一时间点或时间段内。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述水溶液中，锌离子或者钙离子的质量浓度为0.01～0.1w/w％；进一步的，所述锌离子的添加形式为硫酸锌、氯化锌、硝酸锌的一种或多种，钙离子的添加形式为氯化钙、硝酸钙、磷酸二氢钙的一种或多种。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述方法具体包括以下步骤：

(1)栽培种的培养：将栽培种培养基装入菌袋之中，接种原种后进行暗培养，待菌种长满菌袋，即发菌结束；

(2)出菇培养：

发菌结束后继续暗培养，待菌袋内菌丝由浅黄色全部变成深黄色后，在菌袋两侧开口，并控制出菇的环境条件；

其中在桑黄子实体生长过程中，使子实体表面与含有锌和钙的水溶液相接触。

7.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤(1)中，所述原种的制备过程包括以下步骤：

A、母种活化：

将母种接种至PDA综合培养基上进行活化，25～28℃恒温暗培养8～12天；

B、原种培养：

将原种培养基装入菌袋中，封口，灭菌后，将活化后的菌种接种至原种培养基，25～28℃恒温下进行暗培养，25～40天后菌种长满菌袋，将长满菌种的菌袋4℃冷藏备用或立即使用；

进一步的，所述原种培养基是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20～25％，玉米芯20～25％，石膏2～3％，葡萄糖4～6％，磷酸氢钾0.4～0.6％，硫酸镁0.4～0.6％，剩余为桑木屑；加水，使培养基水含量为55～65w/w％。

8.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤(1)中，所述栽培种培养基，是由以下质量百分比的原料组成：大豆秸秆20～25％，玉米芯20～25％，蔗糖3～5％，石膏2～3％，肉桂废弃物0.5～1％，剩余为桑木屑；加水，使培养基水含量为60～70w/w％。

9.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤(1)中，暗培养温度为25～28℃，培养时间为28～35天。

10.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤(2)中，出菇的环境条件：昼温(6:00～18:00)为28～32℃，夜温(18:00～第二天6:00)为22～26℃，湿度80～90％，散射光照射，一日通风两次，每次0.5～1h。

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