CN110721244A - 裸花紫珠萃取物、制备方法及其抗***的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药提取领域，具体涉及裸花紫珠萃取物、其制备方法及其抗***的应用，所述裸花紫珠萃取物为裸花紫珠正丁醇萃取物，其制备方法简单易行，成本低廉，且该所述裸花紫珠萃取物具有较强的抗***活性，且能明显修复***病变组织。

Description

裸花紫珠萃取物、制备方法及其抗***的应用
技术领域
本发明涉及中药提取领域，具体涉及裸花紫珠萃取物的制备方法及其抗***的应用。
背景技术
世界卫生组织对中国妇女的调查表明：我国育龄女性中约41％的女性患有不同程度的妇科炎性疾病，已婚女性发病率更高达70％。据统计，***约占妇产科门诊总数的40-50％，居妇科疾病之首，其中慢性***占门诊病人的10％～25％，因此疗效确切的抗宫炎制剂的研制是广大患者的迫切要求。
裸花紫珠为马鞭草科紫珠属植物的干燥叶，本属植物来源于马鞭草科，《中药大辞典》记载紫珠为紫珠属植物杜虹花、华紫珠，具有解毒疗疮和收敛止血以及驱风祛湿的功效,可用于治疗烫伤、烧伤及外伤出血等。
现有研究表明裸花紫珠萃取物具有促进止血、抑制血栓形成、抑制细菌和细胞毒活性、抵抗炎症、加强免疫等药理活性。
以裸花紫珠为主药的裸花紫珠栓、裸花紫珠片及裸花紫珠胶囊广泛应用于妇科疾病及皮肤科疾病的治疗上，效果显著。尽管裸花紫珠作为复方用药疗效确切，但是还没有关于其单个用药在治疗***方面的研究，因此本发明以裸花紫珠为研究对象，研究其抗炎、止血及其对苯酚致***大鼠模型的作用，揭示裸花紫珠抗***的作用机理。
发明内容
本发明提供了裸花紫珠中正丁醇萃取物及其制备方法，并研究其单个用药在抗***中的应用，揭示裸花紫珠抗***的作用机理。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
本发明的目的之一是提供一种裸花紫珠萃取物，所述萃取物为裸花紫珠正丁醇萃取物，所述裸花紫珠正丁醇萃取物由正丁醇溶液从裸花紫珠中提取得到。
本发明的目的之二是通过如上所述的裸花紫珠萃取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又用90％乙醇进行洗涤。
(2)取裸花紫珠叶粉末，首次配置质量分数为90％的乙醇溶液并浸泡24h，洗涤后陆续加入90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液A旋转蒸发，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液依次用有机溶剂C、有机溶剂D、有机溶剂E分级萃取，将最末次萃取得到的萃取液浓缩至浸膏状。
优选地，包括以下步骤：
(1)取一定量的裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入4000-6000mL质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置3000mL90％乙醇，开始洗涤(要求液面不能低于药渣)。
(2)取一定量的裸花紫珠叶粉末，首次配置5000ml 90％乙醇浸泡24h，洗涤后陆续加入8000mL 90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液B旋转蒸发，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液依次用有机溶剂C、有机溶剂D、有机溶剂E分级萃取，将最末次萃取得到的萃取液浓缩至浸膏状。
优选地，所述有机溶剂D为石油醚，所述有机溶剂E为乙酸乙酯，所述有机溶剂F为正丁醇。
优选地，所述裸花紫珠萃取液B在40-45℃条件下旋转蒸发，所述浸膏状物体C无醇味。
本发明的目的之三是研究如上所述的裸花紫珠萃取物的抗***的应用，所述裸花紫珠萃取物用于降低肿瘤坏死因子、***素、提高白细胞介素的作用。
优选地，所述裸花紫珠萃取物用于修复***大鼠宫颈组织的作用。
本发明提供的裸花紫珠中正丁醇萃取物、制备方法及其在抗***的应用，具备以下有益效果：
(1)本发明首次提取裸花紫珠的正丁醇部位，且对裸花紫珠正丁醇萃取物单独用于***进行了研究，显示裸花紫珠正丁醇萃取物可以明显降低TNF-ɑ、PGE2、提高IL-1指标，具有较强的抗***活性，且能明显修复***病变组织。
(2)本发明中的裸花紫珠正丁醇萃取物的制备方法简单易行，成本低廉。
附图说明
图1为本发明雌性SD大鼠病理组织学检查流程图。
图2为空白组大鼠宫颈组织病理切片图。
图3为模型组大鼠宫颈组织病理切片图。
图4为裸花紫珠正丁醇低浓度组(即A1组)大鼠宫颈组织病理切片图。
图5为裸花紫珠正丁醇中浓度组(即A2组)大鼠宫颈组织病理切片图。
图6为裸花紫珠正丁醇高浓度组(即A3组)大鼠宫颈组织病理切片图。
图7为妇炎洁组的大鼠宫颈组织病理切片图。
图8为正丁醇组的大鼠宫颈组织病理切片图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明中所使用的仪器和材料情况如下：
KQ-250DE型数控超声波清洗器；PH07-9076A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；SHB-ⅢA循环水式多用真空泵；WB-200长城水浴锅和R-1002N长城旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司)。
SD大鼠48只，雌性，体重180～220g，由河南省动物实验中心提供，合格证号(SCXK2016-0001)。实验室温度21～25℃，空气流通，相对湿度55％～60％，12h光暗交替光照，自由进食饮水。
正丁醇：上海吉至生化科技有限公司，产品编号N15270，分析纯；
苯酚：上海吉至生化科技有限公司，产品编号P33740，分析纯；
妇炎洁植物本草抑菌洗液：江西仁和药业有限公司；
裸花紫珠为购自亳州市承辉药业销售有限公司的干燥地上部分。
一、如下实施例为裸花紫珠萃取物的制备方法，该裸花紫珠萃取物为裸花紫珠正丁醇部位的萃取物。
实施例1：裸花紫珠萃取物的制备方法：
(1)取裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置3000mL90％乙醇，开始洗涤(要求液面不能低于药渣)。
(2)取裸花紫珠叶粉末，首次配置质量分数为90％的乙醇溶液并浸泡24h，洗涤后陆续加入8000mL 90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液A旋转蒸发，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液分成等体积的两份，每份依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分级萃取，分别得到石油醚部分萃取液、乙酸乙酯部分萃取液、正丁醇部分萃取液，每份分散液分别萃取3次，各次萃取得到的正丁醇部分萃取液集中收集，旋转蒸发，温度至55℃～60℃，浓缩至无正丁醇的味道，得到裸花紫珠正丁醇萃取物浸膏，用三角瓶盛放，冰箱内储存。
实施例2：裸花紫珠萃取物的制备方法：
(1)取1081g的裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入4000mL质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置2500mL质量分数为90％的乙醇溶液，开始洗涤(要求液面不能低于药渣)。
(2)取1000g的裸花紫珠叶粉末，首次配置4000ml质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，洗涤后陆续加入7000ml的90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液A采用旋转蒸发仪在40-45℃条件下进行浓缩，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液分成等体积的两份，每份依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分级萃取，分别得到石油醚部分萃取液、乙酸乙酯部分萃取液、正丁醇部分萃取液，每份分散液分别萃取3次，各次萃取得到的正丁醇部分萃取液集中收集，旋转蒸发，温度至55℃～60℃，浓缩至无正丁醇的味道，得到裸花紫珠正丁醇萃取物浸膏，用三角瓶盛放，冰箱内储存。
实施例3：裸花紫珠萃取物的制备方法：
(1)取1081g的裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入6000mL质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置3500mL质量分数为90％的乙醇溶液，开始洗涤(要求液面不能低于药渣)。
(2)取1000g的裸花紫珠叶粉末，首次配置6000ml质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，洗涤后陆续加入9000ml的90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液A采用旋转蒸发仪在40-45℃条件下进行浓缩，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液分成等体积的两份，每份依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分级萃取，分别得到石油醚部分萃取液、乙酸乙酯部分萃取液、正丁醇部分萃取液，每份分散液分别萃取3次，各次萃取得到的正丁醇部分萃取液集中收集，旋转蒸发，温度至55℃～60℃，浓缩至无正丁醇的味道，得到裸花紫珠正丁醇萃取物浸膏，用三角瓶盛放，冰箱内储存。
实施例4：裸花紫珠萃取物的制备方法：
(1)取1081g的裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入5000mL质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置3000mL质量分数为90％的乙醇溶液，开始洗涤(要求液面不能低于药渣)。
(2)取1000g的裸花紫珠叶粉末，首次配置5000ml质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，洗涤后陆续加入8000ml的90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A。
(3)将裸花紫珠萃取液A采用旋转蒸发仪在40-45℃条件下进行浓缩，得到浸膏状物体B。
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液分成等体积的两份，每份依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行分级萃取，分别得到石油醚部分萃取液、乙酸乙酯部分萃取液、正丁醇部分萃取液，每份分散液分别萃取3次，各次萃取得到的正丁醇部分萃取液集中收集，旋转蒸发，温度至55℃～60℃，浓缩至无正丁醇的味道，得到裸花紫珠正丁醇萃取物浸膏，用三角瓶盛放，冰箱内储存。
二、裸花紫珠正丁醇萃取物在抗***中的应用
1、大鼠***模型的建立
(1)苯酚胶浆的配制：精密称取苯酚5g、***树胶粉15g，混合，加入蒸馏水至20mL，即到质量分数为20％的苯酚胶浆。
(2)用容积为l mL的注射器接灌胃针头，***大鼠***深处约0.9-1.1cm处，注入(1)中的20％的苯酚胶浆0.2-0.3mL，每天注射1次，连续注射7天。在造模过程中注意观察大鼠***有无白色分泌物，有无红肿和充血现象。
2、裸花紫珠正丁醇萃取物的抗大鼠***的活性测试
(1)注射观察：将***大鼠分为6组：
药物组：***给予裸花紫珠正丁醇萃取物的为药物组，根据给予的裸花紫珠正丁醇萃取物的浓度不同又分为A1、A2、A3组，其中A1组给予裸花紫珠正丁醇萃取物浓度较低，A2组给予裸花紫珠正丁醇萃取物浓度中等，A3给予裸花紫珠正丁醇萃取物浓度较高；
模型组：未给予裸花紫珠正丁醇萃取物的为模型组；
妇炎洁组：***给予妇炎洁植物本草抑菌洗液的为妇炎洁组；
正丁醇组：***给予正丁醇赋型剂的为正丁醇组；
另外还设有空白组，空白组为正常的、没有***的大鼠一组。
药物组：在萘酚至***的大鼠的***分别给予浓度为0.9998g/kg、1.9748g/kg、4.4g/kg的裸花紫珠正丁醇萃取物，得到低浓度组(即A1组)、中浓度组(即A2组)、高浓度组(即A3组)，
妇炎洁组：往妇炎洁组的大鼠***内注入质量分数为3％的妇炎洁植物本草抑菌洗液2.5ml，连续给药14d，观察该组大鼠的各项变化。
正丁醇组：往正丁醇组的大鼠***内注入正丁醇0.02g/kg(大鼠皮肤刺激量)，连续给药14d，观察该组大鼠的各项变化。
(2)测定指标：测定各组大鼠血浆中的肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)、白细胞介素(IL-1)、***素(PGE2)的含量，具体做法为在给各组大鼠末次给药后的次日，处死动物，心脏采血约4ml，置于枸橼酸钠抗凝管中，3000rpm离心15min，分离血清，采用酶联反应吸附法测定各项指标。
(3)测定结果：统计学处理，所有数据均采用SPSS 13.0统计学软件处理，以
Figure BDA0002286355240000053
表示。各组样本采用单因素方差分析，方差齐性采用LSD检验，取P＜0.05为差异有统计学意义。
表1裸花紫珠正丁醇萃取物对***大鼠TNF-ɑ、IL-1、PGE2的影响
Figure BDA0002286355240000051
n＝6
Figure BDA0002286355240000052
*：模型组与空白组相比，p<0.05；**：模型组与空白组相比，p<0.01。
#：药物组与空白组相比，p<0.05；##：药物组与空白组相比，p<0.01。
△：药物组与妇炎洁组相比，p<0.05；△△：药物组与妇炎洁组相比，p<0.01。
裸花紫珠正丁醇萃取物对***大鼠TNF-ɑ、IL-1、PGE2的影响由表1可见，模型组的TNF-ɑ和PGE2与空白组比较，水平明显增高，有显著性差异(P<0.01)，模型组的IL-1水平与空白组相比，水平降低，P<0.05，有统计学差异，表明大鼠***模型建立成功。
裸花紫珠正丁醇萃取物的三个浓度组的TNF-ɑ和PGE2与模型组相比，均有显著下降(P<0.05)；裸花紫珠正丁醇萃取物的中、高浓度组(即A2组、A3组)的IL-1水平与模型组相比，水平降低，P<0.05，具有统计学差异，表明裸花紫球正丁醇萃取物具有抗炎作用。妇炎洁组与模型组相比，TNF-ɑ、IL-1和PGE2水平稍低，P<0.05，具有统计学差异。模型组与正丁醇组相比，TNF-ɑ、IL-1、PGE2水平接近，P>0.05，不具有统计学意义。
3、裸花紫珠正丁醇萃取物对于***大鼠的宫颈组织的影响
(1)病理组织学检查：雌性SD大鼠病理组织学检查过程如附图1所示
(2)研究结果：图2-图8分别为各组的大鼠宫颈组织病理切片图，
从图2可见，空白组大鼠的宫颈黏膜组织结构清晰完整，鳞柱状上皮移行处结构正常，宫颈黏膜及黏膜下组织内偶见散在的淋巴细胞及嗜酸性白细胞。
从图3可见，模型组的大鼠宫颈黏膜上皮明显变性坏死，部分脱落，腺体破坏，宫颈黏膜及间质内可见大量淋巴细胞及中性粒细胞浸润，并见间质纤维组织增生，宫腔内可见大量炎性渗出物。
图4可见，药物组低浓度组的大鼠病变程度较模型组有所减轻，但不明显，从黏膜至间质仍有较多量炎性细胞如嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润，宫腔炎性渗出物及坏死组织明显减少，部分宫颈黏膜己接近正常。
图5可见，药物组的中浓度组的大鼠的宫颈组织病变较模型组明显减轻，宫颈黏膜上皮尚未恢复正常，但无明显鳞状上皮增生及变性坏死，从黏膜到间质偶见少许炎细胞浸润，宫腔未见明显的炎性渗出物。
图6可见，药物组的高浓度组的大鼠的宫颈黏膜上皮已经基本修复，部分宫颈黏膜已接近正常，从黏膜至间质偶见少量炎性细胞浸润，腔内未见炎性渗出物。
图7可见，妇炎洁组的大鼠的宫颈组织病变较模型组有所减轻，宫颈黏膜上皮尚未完全修复，部分接近正常，从黏膜至间质偶见少量炎性细胞浸润，宫腔内未见炎性渗出物及坏死组织。
图8可见，正丁醇组的大鼠宫颈组织病变较模型组有所减轻。
由此可见，裸花紫珠正丁醇萃取物对于修复宫颈组织具有明显的积极效果。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.裸花紫珠萃取物，其特征在于：所述萃取物为裸花紫珠正丁醇萃取物，所述裸花紫珠正丁醇萃取物由正丁醇溶液从裸花紫珠中提取得到。
2.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又用90％乙醇进行洗涤；
(2)取裸花紫珠叶粉末，首次配置质量分数为90％的乙醇溶液并浸泡24h，洗涤后陆续加入90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A；
(3)将裸花紫珠萃取液A旋转蒸发，得到浸膏状物体B；
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液依次用有机溶剂C、有机溶剂D、有机溶剂E分级萃取，将最末次萃取得到的萃取液浓缩至浸膏状。
3.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取一定量的裸花紫珠叶进行粉碎，之后加入龙头瓶中，首次加入4000-6000mL质量分数为90％的乙醇溶液，浸泡24h，收集萃取液同时又配置3000mL90％乙醇，开始洗涤；
(2)取一定量的裸花紫珠叶粉末，首次配置5000ml 90％乙醇浸泡24h，洗涤后陆续加入8000mL 90％乙醇，获得裸花紫珠萃取液A；
(3)将裸花紫珠萃取液B旋转蒸发，得到浸膏状物体B；
(4)往浸膏状物体B中加入超纯水，超声震荡得到分散液，将所述分散液依次用有机溶剂C、有机溶剂D、有机溶剂E分级萃取，将最末次萃取得到的萃取液浓缩至浸膏状。
4.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂D为石油醚，所述有机溶剂E为乙酸乙酯，所述有机溶剂F为正丁醇。
5.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物的制备方法，其特征在于：所述裸花紫珠萃取液B在40-45℃条件下旋转蒸发，所述浸膏状物体C无醇味。
6.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物抗***的应用，其特征在于：所述裸花紫珠萃取物用于降低肿瘤坏死因子、***素、提高白细胞介素的作用。
7.如权利要求1所述的裸花紫珠萃取物抗***的应用，其特征在于：所述裸花紫珠萃取物用于修复***大鼠宫颈组织的作用。
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