CN110591949A - 一种利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基和培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基和培养方法,培养基包括种子培养基和发酵培养基。利用本发明中提供的培养基配方和培养方法,能够提高替考拉宁发酵单位,缩短发酵周期,降低发酵成本,并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响,保证其供应充足,实现替考拉宁稳定、高效的生产。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵技术领域,特别是涉及一种利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基和培养方法。
背景技术
替考拉宁为游动放线菌属发酵产生的一种杀菌性糖肤类抗生素,通过抑制细菌细胞壁的合成而抑制细菌的生长,主要对G+菌及厌氧球菌有效。替考拉宁和万古霉素同属糖肽类抗生素,但替考拉宁半衰期比万古霉素长(47小时对l1小时),对肾功能的损害小于万古霉素,而治疗效果则更为明显,且很少引起糖肽类抗生素所致的过敏反应,优势显著。
目前,国内替考拉宁的发酵生产采用二级发酵模式,该方式存在的主要问题有以下几点:
1、替考拉宁发酵水平较低,其发酵单位不超过9000u/ml。
2、替考拉宁发酵生产成本较高,影响了产品国际市场竞争力。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷,提供一种有效提高替考拉宁发酵单位,发酵工艺简单,同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响,降低生产成本,且原辅料来源不受环境影响,保证其供应充足,实现替考拉宁稳定、高效生产的利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基;
本发明的另一目的是提供利用上述培养基发酵生产替考拉宁的培养方法。
为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基,其特征在于包括种子培养基和发酵培养基,其中,
所述种子培养基组成为:母液47~51ml/L、棉籽蛋白胨12~16g/L、大米蛋白粉4~8g/L、三虫粉2~6g/L、硫酸铵0.3~0.7g/L、轻质碳酸钙1~5g/L;
所述发酵培养基组成为:母液62~66ml/L、棉籽蛋白胨15~19g/L、大米蛋白粉10~14g/L、三虫粉5~9g/L、硫酸铵0.5~0.9g/L、轻质碳酸钙1~5g/L;磷酸二氢钾0.03~0.07g/L、硫酸镁0.02~0.06g/L、硫酸亚铁0.02~0.06g/L,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.02~0.06ml/L;
所述母液为:将提纯的甘蔗汁或甜菜汁压榨后,经提取、蒸发至带有晶体的糖膏,用离心机进行固液分离所得到的液体,总糖含量为30~40%。
一种利用上述培养基发酵生产替考拉宁的培养方法,其特征在于工艺步骤为:
1) 种子培养:首先将种子培养基灭菌、冷却至20℃~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液按照10~15L/m3的接种量接入种子培养基中进行种子培养,至菌体浓度14~18%、pH6.5~6.9、培养时间42~46h移种;
2) 发酵培养:先将发酵培养基灭菌、冷却至20℃~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养,至发酵周期180~220h,化学效价>11000u/ml终止发酵。
所述培养好的游动放线菌母瓶发酵液质量要求为:菌体浓度20~30%,镜检无杂菌,pH6~7。
所述种子培养条件为:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:30~50m3/h;搅拌转速60~80r/min。
所述发酵培养条件为:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6~7;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在100-120r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:200~300m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
所述发酵过程中采用流加法进行补料,补料包括补糖、补水、补硫酸铵和pH控制,其中
a 补糖工艺控制:
发酵时间60~100h,当总糖含量低于5%时,补入母液,控制发酵液中总糖含量在5~6%,
发酵时间101~180h,当总糖含量低于2%时,补入母液,控制发酵液中总糖含量在2~3%,
b补水工艺控制:
发酵前60h不用进行补水,
发酵时间在61~100h,当菌体浓度高于25%,加入灭菌水,要求控制发酵液菌体浓度在20~25%,每隔6~8h检测发酵液菌体浓度,
发酵时间在101h~发酵结束,当菌体浓度高于20%,加入灭菌水,要求控制发酵液菌体浓度在15~20%,每隔6~8h检测发酵液菌体浓度;
c 发酵过程pH控制工艺:
发酵前60h,pH不进行控制,
发酵时间在61~120h,若pH<6.0,采用流加法加入10~20%的氢氧化钠,调节pH至6~7,若pH>7,采用流加法加入30%的硫酸溶液,调节pH至6~7,
d 补硫酸铵:
在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液,其用量控制在发酵液体积的0.01~0.03%。
本发明的技术优势体现在:
本发明明确了种子培养、发酵培养的配方及原材料的配伍比例。其中碳源选用母液,该母液在替考拉宁生化合成过程中不仅提供给细胞生命活动所需的能量,而且是合成产物替考拉宁的碳架;棉籽蛋白胨、大米蛋白粉和三虫粉作为氮源,其中酪氨酸、精氨酸和缬氨酸含量较高,作为生化合成替考拉宁的前体,可保证替考拉宁的有效合成。
总之,本发明中阐述的种子培养基中的碳源和氮源不仅保证了发酵培养基中菌种的数量,有利于提高其产素能力,而且避免了从摇瓶培养基直接转到发酵培养基因环境变化太大,相关合成生物酶难以适应周围发酵环境,导致发酵时间延长,而且会出现各种不利发酵情况,如菌种生长缓慢,易染菌,生长过程不易控制等等因素,保证了发酵正常进行,提高了发酵效价,缩短发酵周期,同时降低发酵成本,并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响,保证其供应充足,实现替考拉宁稳定、高效的生产。
实验证明,采用本发明的培养基配方和培养方法生产替考拉宁,最终使得发酵单位达到11000u/ml以上,生产周期控制在220h以内,同国内技术相比,发酵单位提高了30%以上,生产周期减少了5h以上,同时降低了能耗和生产成本,提高了产品市场竞争力。
具体实施方法
下面用实例予以说明本发明,应该理解的是,实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
下述实施例的菌种选用游动放线菌:生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量要求为:pH6~7;菌体浓度20~30%;镜检无杂菌;发酵单位8000~9000u/ml。
实施例中使用的消泡剂由常州顺华化工有限公司提供。
实施例中的母液的来源于将提纯的甘蔗汁或甜菜汁压榨后,经提取、蒸发至带有晶体的糖膏,用离心机进行固液分离,得到的液体是母液,总糖含量为30-40%。
实施例1
1、种子培养
种子培养基组成:母液47L、棉籽蛋白胨12kg、大米蛋白粉4kg、三虫粉2kg、硫酸铵0.3kg、轻质碳酸钙1kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液10L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌摇瓶发酵液菌体浓度20%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:30m3/h;搅拌转速60r/min。种子培养结束,菌体浓度14%、pH6.9、培养时间42h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液620L、棉籽蛋白胨150kg、大米蛋白粉100kg、三虫粉50kg、硫酸铵5kg、轻质碳酸钙10kg;磷酸二氢钾0.3kg、硫酸镁0.2kg、硫酸亚铁0.2kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.2L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在7;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在100r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:200m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价11057u/ml,发酵周期180h。
实施例2
1、种子培养
种子培养基组成:母液48L、棉籽蛋白胨16kg、大米蛋白粉7kg、三虫粉5kg、硫酸铵0.7kg、轻质碳酸钙2kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液11L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌摇瓶发酵液菌体浓度27%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:30m3/h;搅拌转速60r/min。种子培养结束,菌体浓度18%、pH6.8、培养时间43h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液630L、棉籽蛋白胨190kg、大米蛋白粉130kg、三虫粉70kg、硫酸铵6kg、轻质碳酸钙43kg;磷酸二氢钾0.5kg、硫酸镁0.3kg、硫酸亚铁0.4kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.6L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在7;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在100r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:200m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价11083u/ml,发酵周期180h。
实施例3
1、种子培养
种子培养基组成:母液50L、棉籽蛋白胨12kg、大米蛋白粉5kg、三虫粉2kg、硫酸铵0.5kg、轻质碳酸钙4kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液15L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌摇瓶发酵液菌体浓度24%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:40m3/h;搅拌转速75r/min。种子培养结束,菌体浓度16%、pH6.7、培养时间42h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液650L、棉籽蛋白胨174kg、大米蛋白粉123kg、三虫粉57kg、硫酸铵5.9kg、轻质碳酸钙19kg;磷酸二氢钾0.4kg、硫酸镁0.5kg、硫酸亚铁0.4kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.4L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在7;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在100r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:200m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价11070u/ml,发酵周期180h。
实施例4
1、种子培养
种子培养基组成: 母液51L、棉籽蛋白胨14kg、大米蛋白粉4kg、三虫粉2kg、硫酸铵0.7kg、轻质碳酸钙4kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液13L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌母瓶发酵液菌体浓度28%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:40m3/h;搅拌转速70r/min。种子培养结束,菌体浓度17%、pH6.8、培养时间45h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液650L、棉籽蛋白胨180kg、大米蛋白粉130kg、三虫粉70kg、硫酸铵8kg、轻质碳酸钙45kg;磷酸二氢钾0.6kg、硫酸镁0.5kg、硫酸亚铁0.4kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.5L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6.8;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在105r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:220m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价12003u/ml,发酵周期190h。
实施例5
1、种子培养
种子培养基组成:母液49L、棉籽蛋白胨14kg、大米蛋白粉6kg、三虫粉4kg、硫酸铵0.5kg、轻质碳酸钙3kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌母瓶发酵液13L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌摇瓶发酵液菌体浓度25%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:40m3/h;搅拌转速70r/min。种子培养结束,菌体浓度16%、pH6.5、培养时间44h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液640L、棉籽蛋白胨170kg、大米蛋白粉120kg、三虫粉70kg、硫酸铵7kg、轻质碳酸钙12kg;磷酸二氢钾0.5kg、硫酸镁0.4kg、硫酸亚铁0.4kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.4L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6.5;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在110r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:250m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价12462u/ml,发酵周期200h。
实施例6
1、种子培养
种子培养基组成: 母液50L、棉籽蛋白胨15kg、大米蛋白粉7kg、三虫粉5kg、硫酸铵0.6kg、轻质碳酸钙4kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液14L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌摇瓶发酵液菌体浓度27%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:45m3/h;搅拌转速75r/min。种子培养结束,菌体浓度17%、pH6.3、培养时间45h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液650L、棉籽蛋白胨180kg、大米蛋白粉130kg、三虫粉80kg、硫酸铵8kg、轻质碳酸钙13kg;磷酸二氢钾0.6kg、硫酸镁0.5kg、硫酸亚铁0.5kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.5L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6.3;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在115r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:270m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价12307u/ml,发酵周期210h。
实施例7
1、种子培养
种子培养基组成:母液51L、棉籽蛋白胨16kg、大米蛋白粉8kg、三虫粉6kg、硫酸铵0.7kg、轻质碳酸钙5kg;加入一次水,种子液有效体积为1m3。
首先将种子培养基灭菌并冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液15L的接种量接入种子培养基中进行种子培养。游动放线菌母瓶发酵液菌体浓度30%;镜检无杂菌。
种子培养条件:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:50m3/h;搅拌转速80r/min。种子培养结束,菌体浓度18%、pH6.3、培养时间46h。
、发酵培养
发酵酵培养基组成:母液660L、棉籽蛋白胨1890kg、大米蛋白粉140kg、三虫粉90kg、硫酸铵9kg、轻质碳酸钙14kg;磷酸二氢钾0.7kg、硫酸镁0.6kg、硫酸亚铁0.6kg,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.6L。加入一次水,发酵液有效体积为10m3。
先将发酵培养基灭菌,冷却至20~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。
发酵培养工艺:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6.0;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在120r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:300m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
发酵过程中,按照补料工艺要求及时补料。
发酵培养结束,化学效价12194u/ml,发酵周期220h。
对比实施例1
种子培养:种子液有效体积为1m3。
种子培养基组成:葡萄糖12kg、黄豆饼粉20kg、花生饼粉10kg、酵母粉8kg、蛋白胨2kg、硫酸铵0.5kg、轻质碳酸钙1kg。
发酵培养:发酵液有效体积为10m3。
发酵培养基组成:葡萄糖140kg、黄豆饼粉250kg、花生饼粉120kg、酵母粉90kg、蛋白胨23kg、硫酸铵6kg、轻质碳酸钙10kg、磷酸二氢钾6.5kg、硫酸镁0.4kg、硫酸亚铁2.5kg、硅油消泡剂3kg。
采用上述阐述的种子和发酵培养工艺,发酵培养周期为220h,效价8064u/ml。
对比实施例2
种子培养:种子液有效体积为1m3。
种子培养基组成:淀粉4kg、棉籽饼粉12kg、酵母浸膏8kg、玉米浆9L、玉米蛋白粉5kg、硫酸铵0.9kg、轻质碳酸钙1kg、淀粉酶0.05kg。
发酵培养:发酵液有效体积为10m3。
发酵培养基组成:淀粉43kg、棉籽饼粉90kg、酵母浸膏92kg、玉米浆94L、硫酸铵10kg、轻质碳酸钙10kg、磷酸二氢钾7kg、氯化钠3kg、硫酸镁0.3kg、硫酸亚铁0.3kg、硅油4kg、淀粉酶0.45kg。
采用上述阐述的发酵培养工艺,培养周期为220h,效价8491u/ml。
Claims (6)
1.一种利用游动放线菌生产替考拉宁的培养基,其特征在于包括种子培养基和发酵培养基,其中,
所述种子培养基组成为:母液47~51ml/L、棉籽蛋白胨12~16g/L、大米蛋白粉4~8g/L、三虫粉2~6g/L、硫酸铵0.3~0.7g/L、轻质碳酸钙1~5g/L;
所述发酵培养基组成为:母液62~66ml/L、棉籽蛋白胨15~19g/L、大米蛋白粉10~14g/L、三虫粉5~9g/L、硫酸铵0.5~0.9g/L、轻质碳酸钙1~5g/L;磷酸二氢钾0.03~0.07g/L、硫酸镁0.02~0.06g/L、硫酸亚铁0.02~0.06g/L,XPJ-S530 水性有机硅消泡剂0.02~0.06ml/L;
所述母液为:将提纯的甘蔗汁或甜菜汁压榨后,经提取、蒸发至带有晶体的糖膏,用离心机进行固液分离所得到的液体,总糖含量为30~40%。
2.一种利用权利要求1所述培养基发酵生产替考拉宁的培养方法,其特征在于工艺步骤为:
1) 种子培养:首先将种子培养基灭菌、冷却至20℃~25℃,并用无菌空气保压,然后在火焰保护下,将已经培养好的游动放线菌摇瓶发酵液按照10~15L/m3的接种量接入种子培养基中进行种子培养,至菌体浓度14~18%、pH6.5~6.9、培养时间42~46h移种;
2) 发酵培养:先将发酵培养基灭菌、冷却至20℃~25℃,并用无菌空气保压,然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养,至发酵周期180~220h,化学效价>11000u/ml终止发酵。
3.按照权利要求2所述的培养方法,其特征在于所述培养好的游动放线菌母瓶发酵液质量要求为:菌体浓度20~30%,镜检无杂菌,pH6~7。
4.按照权利要求1所述的培养方法,其特征在于所述种子培养条件为:罐压0.03~0.06MPa;罐温27~28℃;空气流量:30~50m3/h;搅拌转速60~80r/min。
5.按照权利要求1所述的培养方法,其特征在于所述发酵培养条件为:
a 培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6~7;
b 温度:培养温度27~28℃,
c 搅拌转速:转速控制在100-120r/min,
d 压力控制:罐压0.05~0.06MPa;
e pH控制:发酵过程中pH控制在6~7;
f 空气流量:200~300m3/h,
h 溶氧控制:
发酵前30h内,不控制溶氧,
发酵31~140h,溶氧控制在30%以上,
发酵141~发酵结束:溶氧控制在40%以上。
6.按照权利要求3所述的培养方法,其特征在于所述发酵过程中采用流加法进行补料,补料包括补糖、补水、补硫酸铵和pH控制,其中
a 补糖工艺控制:
发酵时间60~100h,当总糖含量低于5%时,补入母液,控制发酵液中总糖含量在5~6%,
发酵时间101~180h,当总糖含量低于2%时,补入母液,控制发酵液中总糖含量在2~3%,
b补水工艺控制:
发酵前60h不用进行补水,
发酵时间在61~100h,当菌体浓度高于25%,加入灭菌水,要求控制发酵液菌体浓度在20~25%,每隔6~8h检测发酵液菌体浓度,
发酵时间在101h~发酵结束,当菌体浓度高于20%,加入灭菌水,要求控制发酵液菌体浓度在15~20%,每隔6~8h检测发酵液菌体浓度;
c 发酵过程pH控制工艺:
发酵前60h,pH不进行控制,
发酵时间在61~120h,若pH<6.0,采用流加法加入10~20%的氢氧化钠,调节pH至6~7,若pH>7,采用流加法加入30%的硫酸溶液,调节pH至6~7,
d 补硫酸铵:
在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液,其用量控制在发酵液体积的0.01~0.03%。
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