一种别嘌醇的纯度检测方法
技术领域
本发明属于别嘌醇质量检测领域,具体地说是一种别嘌醇的纯度检测方法。
背景技术
别嘌醇又名别嘌呤醇,其是一种治疗痛风及相关疾病的常见的药物中间体,其可以起到可抑制黄嘌呤氧化酶,使次黄嘌呤及黄嘌呤不能转化为尿酸,即尿酸合成减少,进而降低血中尿酸浓度,减少尿酸盐在骨、关节及肾脏的沉着,能抑制尿酸合成的药物。目前2010版《药典》中详细记录了别嘌醇的功效以及检测方法,但是其中只给出了别嘌醇的含量液相色谱检测方法,但是没有给出别嘌醇的纯度检测方法,含量和纯度是医药中间体最重要的两个检测指标,由于没有统一的规范化操作,目前在检测别嘌醇的纯度时不同公司都尝试使用各种方法进行检测,但有些操作相对复杂,有些有检测时间较长,且很多方法杂质峰与产品峰未能有效分离,导致检测出的纯度存在较大误差,而产品纯度存在误差可能会导致买家退货、信誉受损等一系列影响。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题,本申请提供了一种别嘌醇的纯度检测方法。本发明操作简单,进样检测时间短,结果准确性高。
本发明的技术方案如下:
一种别嘌醇的纯度检测方法,包括如下步骤:
步骤一:配置标准品溶液:准确称取40-50mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的乙酸钠溶液溶解后,用乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解标准品的乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的标准品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤二:配置样品溶液:准确称取30-40mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的乙酸钠溶液溶解后,用乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解样品的乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的样品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤三:冲洗色谱柱:色谱柱与自动进样液相色谱仪连接后,用流动相冲洗以1.5-2.5ml/min的速度冲洗色谱柱,并观察基线,当基线平稳后流速降低至1.0ml/min,基线平稳后准备进样;
步骤四:确定别嘌醇峰的位置:将步骤一中盛有标准品溶液的液相检测瓶放入Agilent 1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,连续进样2次,若出峰位置一致,则为别嘌醇出峰位置,若不一致继续进样,直至出峰位置有至少两次结果位置相同则定位别嘌醇出峰位置;
步骤五:样品检测:将步骤二中盛有样品溶液的液相检测瓶放入Agilent1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,连续进样2次,若两次所得纯度误差在0.1%以内,则取两次纯度的平均值记为本批次样品纯度,若两次所得纯度误差在0.1%以上继续进样,直至有至少两次纯度误差在0.1%以内,取误差在0.1%内的纯度的平均值记为本样品纯度。
如上所述的一种别嘌醇的纯度检测方法,步骤四和步骤五中所述的色谱检测条件为:波长:235nm;流动相:采用甲醇-乙酸-甲酸(73:14:13)的溶液作为流动相;色谱柱:安捷伦公司的Agilent ZORBAX StableBond系列的SB-C18色谱柱;柱温:40℃;进样量:10μL;检测时间:15min;流速:1ml/min。
如上所述的一种别嘌醇的纯度检测方法,步骤一和步骤二中所述的乙酸钠溶液溶的浓度为0.1-0.3mol/L。
如上所述的一种别嘌醇的纯度检测方法,步骤一和步骤二中所述的乙酸钠溶液溶的浓度为0.2mol/L。
如上所述的一种别嘌醇的纯度检测方法,步骤五中所述的样品纯度在进样六次以上仍呈现离散分布,则重新配置样品溶液并对色谱柱以及液相仪器进行检修。
如上所述的一种别嘌醇的纯度检测方法,步骤三中所述的流动相冲洗色谱柱的流速为2ml/min。
本发明的优点是:本发明提供一种别嘌醇的纯度检测方法,其操作简单,进样检测时间短,杂质峰能有效的与产品峰进行分离,从而确保所得纯度的准确性,避免因纯度误差导致买家退货或者要求补偿等经济损失和信誉损失。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例1的检测图谱;
图2是实施例2的检测图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
步骤一:配置标准品溶液:准确称取45mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.2mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.2mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解标准品的0.2mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的标准品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤二:配置样品溶液:准确称取30-40mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.2mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.2mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解样品的浓度为0.2mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的样品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤三:冲洗色谱柱:色谱柱与自动进样液相色谱仪连接后,用流动相冲洗以2ml/min的速度冲洗色谱柱,并观察基线,当基线平稳后流速降低至1.0ml/min,基线平稳后准备进样;
步骤四:确定别嘌醇峰的位置:将步骤一中盛有标准品溶液的液相检测瓶放入Agilent 1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱检测条件为:波长:235nm;流动相:采用甲醇-乙酸-甲酸(73:14:13)的溶液作为流动相;色谱柱:安捷伦公司的Agilent ZORBAX StableBond系列的SB-C18色谱柱;柱温:40℃;进样量:10μL;检测时间:15min;流速:1ml/min,连续进样2次,若出峰位置一致,则为别嘌醇出峰位置,若不一致继续进样,直至出峰位置有至少两次结果位置相同则定位别嘌醇出峰位置;
步骤五:样品检测:将步骤二中盛有样品溶液的液相检测瓶放入Agilent1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱条件与步骤四一致,连续进样2次,若两次所得纯度误差在0.1%以内,则取两次纯度的平均值记为本批次样品纯度,若两次所得纯度误差在0.1%以上继续进样,直至有至少两次纯度误差在0.1%以内,取误差在0.1%内的纯度的平均值记为本样品纯度,所述的样品纯度在进样六次以上仍呈现离散分布,则重新配置样品溶液并对色谱柱以及液相仪器进行检修。检测结果如图1所示。
实施例2
步骤一:配置标准品溶液:准确称取40mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.1mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.1mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解标准品的0.1mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的标准品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤二:配置样品溶液:准确称取30-40mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.1mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.1mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解样品的浓度为0.1mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的样品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤三:冲洗色谱柱:色谱柱与自动进样液相色谱仪连接后,用流动相冲洗以1.5ml/min的速度冲洗色谱柱,并观察基线,当基线平稳后流速降低至1.0ml/min,基线平稳后准备进样;
步骤四:确定别嘌醇峰的位置:将步骤一中盛有标准品溶液的液相检测瓶放入Agilent 1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱检测条件为:波长:235nm;流动相:采用甲醇-乙酸-甲酸(73:14:13)的溶液作为流动相;色谱柱:安捷伦公司的Agilent ZORBAX StableBond系列的SB-C18色谱柱;柱温:40℃;进样量:10μL;检测时间:15min;流速:1ml/min,连续进样2次,若出峰位置一致,则为别嘌醇出峰位置,若不一致继续进样,直至出峰位置有至少两次结果位置相同则定位别嘌醇出峰位置;
步骤五:样品检测:将步骤二中盛有样品溶液的液相检测瓶放入Agilent1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱条件与步骤四一致,连续进样2次,若两次所得纯度误差在0.1%以内,则取两次纯度的平均值记为本批次样品纯度,若两次所得纯度误差在0.1%以上继续进样,直至有至少两次纯度误差在0.1%以内,取误差在0.1%内的纯度的平均值记为本样品纯度,所述的样品纯度在进样六次以上仍呈现离散分布,则重新配置样品溶液并对色谱柱以及液相仪器进行检修。检测结果如图2所示。
实施例3
步骤一:配置标准品溶液:准确称取40-50mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.3mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.3mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解标准品的0.3mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的标准品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤二:配置样品溶液:准确称取30-40mg的标准品,放入100ml的容量瓶中加入50ml的浓度为0.3mol/L乙酸钠溶液溶解后,用浓度为0.3mol/L乙酸钠溶液定容,准确移取1ml溶解样品的浓度为0.3mol/L乙酸钠溶液置于50ml容量瓶中用流动相定容,将流动相稀释后的样品溶液转入液相检测瓶中拧紧瓶盖备用;
步骤三:冲洗色谱柱:色谱柱与自动进样液相色谱仪连接后,用流动相冲洗以2.5ml/min的速度冲洗色谱柱,并观察基线,当基线平稳后流速降低至1.0ml/min,基线平稳后准备进样;
步骤四:确定别嘌醇峰的位置:将步骤一中盛有标准品溶液的液相检测瓶放入Agilent 1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱检测条件为:波长:235nm;流动相:采用甲醇-乙酸-甲酸(73:14:13)的溶液作为流动相;色谱柱:安捷伦公司的Agilent ZORBAX StableBond系列的SB-C18色谱柱;柱温:40℃;进样量:10μL;检测时间:15min;流速:1ml/min,连续进样2次,若出峰位置一致,则为别嘌醇出峰位置,若不一致继续进样,直至出峰位置有至少两次结果位置相同则定位别嘌醇出峰位置;
步骤五:样品检测:将步骤二中盛有样品溶液的液相检测瓶放入Agilent1200型全自动进样液相仪的试验盘中进行液相分析,色谱条件与步骤四一致,连续进样2次,若两次所得纯度误差在0.1%以内,则取两次纯度的平均值记为本批次样品纯度,若两次所得纯度误差在0.1%以上继续进样,直至有至少两次纯度误差在0.1%以内,取误差在0.1%内的纯度的平均值记为本样品纯度,所述的样品纯度在进样六次以上仍呈现离散分布,则重新配置样品溶液并对色谱柱以及液相仪器进行检修。
根据最终的检测图谱显示,杂质峰与产品峰分离良好,从而确保所得纯度的准确性。
最后应说明的是以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。