CN104198472A - 一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒;由试剂R1、试剂R2和试剂R3组成,所述试剂R1的各组分为:缓冲液,糖化氨基酸氧化酶,白蛋白蛋白酶,过氧化物酶,过氧化氢酶,4-氨基安替比林,稳定剂,防腐剂;所述试剂R2各组分为:缓冲液,白蛋白蛋白酶,过氧化物酶,色原,稳定剂,防腐剂;所述试剂R3各组分为:缓冲液,溴甲酚绿,表面活性剂,防腐剂。本发明通过加入糖化氨基酸氧化酶以去除内源性糖化氨基酸对检测结果的影响,使得结果更为准确。本发明采用酶法检测糖化白蛋白的含量,是一种简单、快速、灵敏、准确的检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫体外诊断领域,具体地,涉及一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒。
背景技术
血清中葡萄糖与血清蛋白的N-末端发生非酶促的糖基化反应,生成糖化血清蛋白,而糖化白蛋白则占糖化血清蛋白的90%以上。另外,由于白蛋白在血清中含量稳定存在,而球蛋白则会由于感染等疾病因素造成波动;故准确测定糖化白蛋白对准确反应糖尿病的的血糖控制情况非常重要。
糖化白蛋白是反映过去2-3周平均血糖水平的一项指标。比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白的反映周期要短一些。因此,糖化白蛋白在治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比糖化血红蛋白具有优势。另外,在许多血红蛋白代谢异常的情况下,糖化血红蛋白的结果受到影响不能真实反映患者的血糖水平,而糖化白蛋白的结果则不受影响,如糖尿病肾病透析患者、贫血患者、妊娠期妇女的血糖检测等等。
诊断方法:早在上世纪80年代,日本学者就研发了高压液相离子交换法(HPLC法)进行糖化白蛋白测定。HPLC法测定糖化白蛋白可准确检测患者短期内血糖控制的总体水平,但当时由于其代价很高,处理样本量小,不适宜临床常规开展。
之后,随着酶联免疫技术的不断发展,间接免疫法测定糖化白蛋白的方法开始被运用。通过采用特异性单克隆抗体高度特异性地识别非糖基化的特定糖基化区域,测定此特定位置非糖化血清白蛋白含量,间接得到糖化白蛋白的含量,此方法虽成本较低,但是测定结果不够准确,操作过程中人为误差大。
发明内容
针对现有技术中的缺陷,本发明的目的是提供一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒。
本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明涉及一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,包括试剂R1、试剂R2和试剂R3;
所述试剂R1的各组分及浓度包括:
所述试剂R2各组分及浓度包括:
所述试剂R3各组分及浓度包括:
优选地,所述试剂R1中的缓冲液包括MES缓冲液、Good’s缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
优选地,所述试剂R1中的稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合剂中的一种。
优选地,所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
优选地,所述试剂R2中的缓冲液包括MES缓冲液、Good’s缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
优选地,所述试剂R2中的色原包括MEHA、TBHB、TOOS中的一种或几种。
优选地,所述试剂R2中的稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂中的一种。
优选地,所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
优选地,所述试剂R3中的缓冲液包括柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
优选地,所述试剂R3中的表面活性剂包括吐温20、Brij35、曲拉通-100中的一种或几种;所述试剂R3中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
本发明检测原理为:
(1)糖化白蛋白的测定:
在样本中,首先注入糖化氨基酸氧化酶(KAOD)发生作用将内源性糖化氨基酸变成葡萄糖酮醛、氨基酸和双氧水而除去。在处理液中,注入对白蛋白特异性的蛋白酶,发生作用从糖化白蛋白生成糖化氨基酸。其次,注入糖化氨基酸氧化酶从糖化氨基酸生成葡萄糖酮醛、氨基酸和双氧水。生成的双氧水在色原和4-氨基安替比林的共存下,过氧化物酶(POD)的作用下,定量地变化成蓝紫色色素。通过测定蓝紫色色素的吸光度而定量从糖化白蛋白生成的糖化氨基酸。
(2)白蛋白的测定:
本法即采用溴甲酚绿染料比色法,在pH4.2的条件下,样本中的白蛋白与溴甲酚绿偶合生成蓝绿色络合物,从而引起630nm处吸光度的上升。
与现有技术相比,本发明具有如下的有益效果:
1、本发明采用酶法检测糖化白蛋白的含量,是一种简单、快速、灵敏、准确的检测方法。
2、本发明通过加入糖化氨基酸氧化酶以去除内源性糖化氨基酸对检测结果的影响。使得结果更为准确。
通过本发明检测,得到的结果为糖化白蛋白和白蛋白2组数值。最终符合临床要求的检测结果为糖化白蛋白结果/白蛋白结果所得百分比。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述,本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显:
图1为根据标准品,定标GA试剂的定标曲线图,其中X轴表示GA的含量,Y轴表示吸光度。
图2为根据标准品,定标ALB试剂的定标曲线图,其中X轴表示ALB的含量,Y轴表示吸光度。
图3为分别采用本发明试剂和日本旭化成公司的GA试剂对测定值进行相关分析图,其中X轴表示的是本发明试剂测定的病人血清结果,Y轴表示的是日本旭化成公司试剂测定的病人血清结果,相关系数R2=0.9981,回归方程为y=1.0349x+0.1527。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1~3
本实施例1~3涉及稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,由试剂R1、试剂R2和试剂R3组成,所述试剂R1、R2、R3的各组分及浓度见表1所示:
表1
本发明实施例1-3描述的糖化白蛋白检测试剂盒,适用于各种类型的全自动生化仪,以日立7170全自动生化仪为例,其操作如表2、表3。
糖化白蛋白分析方法:两点终点法,即试剂R1;R2的用量分别为240ul和60ul,样本量3ul;240ul试剂R1加入3ul样本于37℃5min后读取点A1,加入60ulR2,5min后,读取点A2;检测波长分别主波长546nm、副波长700nm。
白蛋白分析方法:一点终点法,即试剂R3的用量为300ul,样本量3ul;300ul试剂R1加入3ul样本于37℃2min后读取吸光度值;检测波长分别主波长600nm、副波长700nm。
采用本试剂及上述测定方法,采用日立7170生化分析仪测得的GA和ALB标准品的曲线(如图1、图2所示),其中X轴表示GA、ALB含量(g/L);Y轴表示吸光度。
表2
糖化白蛋白的测定:
表3
白蛋白的测定:
准确度试验
本实验目的是检测试剂的稳定性。
采用实验例1试剂、对照试剂、标准品、质控品。
操作步骤:使用标准品定标,测定质控3次。
结果解析:根据检测数据,计算测试均值和与质控值的偏差。
表4结果显示,本发明试剂测定结果与质控值的偏差均小于3%,表明本发明试剂准确度非常好。
表4
试剂的相关性试验
使用本法发明试剂(具体配方同实施例1)和对照试剂旭化成公司的GA试剂,对50份人血清(包括正常和异常标本)按各自参数同时进行测定,对测定值进行相关性分析。测定结果见图3,X,Y轴均为测定值(GA的含量%),
由图3的结果看出,两种试剂的相关系为R2=0.9981,回归方程为y=1.0349x+0.1527。结果表明本试剂与进口试剂测定病人血清相关性良好,具有很好的特异性和准确性。
此外,以上实验是采用日立公司制造的7170全自动生化仪进行的,但本发明的试剂不限于上述仪器,还适用于其他全自动或半自动生化分析仪。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是,本发明并不局限于上述特定实施方式,本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改,这并不影响本发明的实质内容。
Claims (10)
1.一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,包括试剂R1、试剂R2和试剂R3;
所述试剂R1的各组分及浓度包括:
所述试剂R2各组分及浓度包括:
所述试剂R3各组分及浓度包括:
2.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中的缓冲液包括MES缓冲液、Good’s缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中的稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合剂中的一种。
4.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
5.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R2中的缓冲液包括MES缓冲液、Good’s缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
6.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R2中的色原包括MEHA、TBHB、TOOS中的一种或几种。
7.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R2中的稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂。
8.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
9.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R3中的缓冲液包括柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中的一种或几种。
10.如权利要求1所述的稳定的糖化白蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R3中的表面活性剂为吐温20、Brij35、曲拉通-100中的一种或几种;所述试剂R3中的防腐剂为叠氮钠或proclin300。
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