CN109071447A

CN109071447A - 四环吡啶酮化合物作为抗病毒剂

Info

Publication number: CN109071447A
Application number: CN201780024193.6A
Authority: CN
Inventors: 傅继平; 金仙明; P·李; 路培超; J·M·杨
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2016-02-19
Filing date: 2017-02-16
Publication date: 2018-12-21
Anticipated expiration: 2037-02-16
Also published as: AU2017219216A1; KR20180110131A; ECSP18069924A; CO2018008589A2; TW201804995A; US10093673B2; IL261158B; ES2897913T3; US20200270265A1; PH12018501736A1; JOP20170045B1; UY37128A; SG11201806863WA; EP3416946B1; US20180030053A1; CA3014369A1; BR112018016842A2; JP2019509276A; IL261158A; US9845325B2

Abstract

本发明提供如本文所述的式(I)化合物，

Description

四环吡啶酮化合物作为抗病毒剂

技术领域

本发明涉及作为肝炎病毒复制抑制剂的新型四环吡啶酮化合物，因此可用于治疗病毒感染，特别是乙型肝炎病毒(HBV)。本发明提供了本文公开的新型四环吡啶酮化合物，含有这些化合物的药物组合物，以及使用这些化合物和组合物治疗和预防HBV感染的方法。

技术背景

在全球范围内，超过2.4亿人长期感染乙型肝炎病毒(HBV)，仅在美国就有200多万人。在那些慢性感染的患者中，高达40％的患者最终会出现自肝硬化或肝细胞癌(HCC)进展成肝功能衰竭的并发症。乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)，是通过RNA中间体逆转录复制的一组小型嗜肝DNA病毒。病毒颗粒中的3.2kb HBV基因组呈圆形，部分为双链DNA构象(松弛环状DNA或rcDNA)。HBV基因组由四个重叠的开放阅读框(ORF)组成，其编码核心、聚合酶(Pol)、包膜和X蛋白。rcDNA是转录惰性的，必须在感染细胞的细胞核中转化为共价闭合环状DNA(cccDNA)，然后才能转录病毒RNA。cccDNA是HBV转录的唯一模板，由于HBV RNA是基因组逆转录的模板，其持续是持续感染所必需的。

HBV的包膜包含表面抗原蛋白(HBsAg)的混合物。HBsAg外壳是三种重叠蛋白质的混合物：三者共有一个共同区域，对应于三种蛋白质中最小的蛋白质(SHBsAg)。该混合物主要由SHBsAg组成，但也包括含SHBsAg加上另外的多肽片段的中HBsAg，和含M HBsAg加上另一个添加的多肽片段的大HBsAg。除了形成感染性病毒体颗粒之外，S、M和L HBsAg蛋白还组装成亚病毒颗粒，称为22-nm颗粒，其不具有感染性，但含有包裹感染性病毒颗粒的相同蛋白质。实际上，这些亚病毒非感染性颗粒已被用作疫苗，因为它们含有与包裹感染性HBV病毒体相同的抗原表面蛋白，并因此引发识别感染试剂的抗体。有趣的是，这些亚病毒颗粒数目大大超过了感染性病毒体，并且被认为可以保护感染性病毒粒子免受感染宿主的免疫***的侵害。凭借数量的优势，它们可能充当诱饵，分散感染性病毒颗粒的免疫反应，但另外据报道它们会抑制免疫细胞(单核细胞、树突细胞和自然杀伤细胞)的功能，从而可能损害对HBV的免疫反应。因为这些亚病毒颗粒保护感染性HBV免受宿主免疫***的影响，所以降低亚病毒颗粒的水平已被认为是可行的治疗方法。参见例如WO2015/113990。

慢性HBV的关键诊断症状之一是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的高血清水平。近年来的临床数据表明，持续的病毒学应答通常与早在第8周的治疗早期的治疗期间HBsAg下降有关，而持续接触HBsAg和其他病毒抗原可能导致HBV特异性免疫耐受。经历血清HBsAg水平更大和更快降低的慢性HB患者获得显著更高的持续病毒学应答率(～40％)，如治疗后持续病毒对照所定义。

目前用于HBV的治疗选择包括干扰素疗法和病毒DNA聚合酶的核苷/核苷酸抑制剂，例如恩替卡韦和替诺福韦。这些聚焦于降低病毒血症水平和肝功能障碍的耐受性，并且可能具有不良副作用，并且还在长期治疗期间选择耐药病毒变体。更重要的是，这些疗法无法根除慢性乙型肝炎患者的肝内HBV cccDNA库或限制从已有的cccDNA转录HBsAg，也不会影响合成HBsAg分泌到患者血液中以抵消宿主先天免疫反应。因此，这些HBV治疗在大多数情况下是终身治疗，停药常常导致病毒复发。据报道，一些化合物可降低血清HBsAg水平，但迄今尚未产生新的获批治疗药物。参见例如WO2015/113990、WO2015/173164、WO2016/023877、WO2016/071215和WO2016/128335。

因此，仍然需要更有效针对HBV尤其是针对慢性HBV感染的治疗。本发明提供了被认为通过抑制含有HBsAg的22nm亚病毒颗粒的分泌而起作用的化合物。这些化合物可用于治疗HBV感染并减少由HBV感染引起的严重肝脏疾病的发生率。相对于具有相似生物活性的现有技术化合物，它们还表现出改进的性质，例如在缓冲水性体系中改善的溶解性和对某些不利影响的较低预测倾向。

发明内容

本发明提供了新的化合物，其抑制乙型肝炎病毒感染细胞中HBsAg的分泌，从而减少慢性HBV感染患者的病毒载量和病毒复制。除了非常有效地抑制HBsAg水平，本发明的一些化合物相对于本领域已知的类似化合物也显示出改善的安全性，例如减少钠离子通道抑制(其可以指示潜在的心脏毒性)、减少药物-药物相互作用、降低时间依赖性细胞色素(CYP)抑制的风险。因此，本发明化合物适用于治疗HBV患者。本发明还提供含有该新化合物的药物组合物以及使用该化合物和组合物抑制乙型肝炎病毒复制和治疗与HBV相关或由HBV引起的疾病的方法。在以下说明书和实施例中描述了本发明的其他目的。

在一个方面，本发明提供了式(I)化合物：

其中：

R¹是H、卤素或C₁-C₃烷基；

R²是H、卤素、CN、C₁-C₃烷基或C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基；

R³是OH、卤素、CN、C₁-C₃烷基、C₃-C₆环烷基、C₁-C₃卤代烷基、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₃卤代烷氧基；

R⁴选自R¹¹、–OR¹¹、-SR¹¹和–NRR¹¹；

R¹¹是C₁-C₄烷基、C₃-C₆环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或四氢吡喃基，其各自可选被至多三个选自卤素、CN、-OR、C₁-C₃卤代烷氧基和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的4-7元杂环基团取代，所述杂环基团可选被一个或两个选自卤素、氧代、CN、R、–OR和-NR₂的基团取代；

R在每次出现时独立地选自H以及可选被1-3个选自卤素、–OH、C₁-C₃烷氧基、氧代、CN、-NH₂、-NH(C₁-C₃烷基)、–N(C₁-C₃烷基)₂和环丙基的基团取代的C₁-C₃烷基；

并且两个直接连接到单个原子上的R基团可选一起形成3-6元环，其可选含有选自N、O和S的杂原子作为环成员，并且可以被最多两个选自–OH、氧代、C₁-C₃烷基和C₁-C₃烷氧基的基团取代；

R⁵是H、卤素、CN、C₁-C₃烷基或C₁-C₃卤代烷基；

R⁶是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁷是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁸是H或C₁-C₆烷基；

R⁹与选自R⁶、R⁷和R⁸中的一个基团一起形成3-7元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代；

W是–COOR¹⁰、-C(O)NH-SO₂R、-C(O)NH-SO₂NR₂、5-四唑基或1,2,4-恶二唑-3-基-5(4H)-酮；

R¹⁰是H或可选被一个或两个选自卤素、–OR、氧代、CN、-NR₂、COOR和CONR₂的基团取代的C₁-C₆烷基；

或其药学上可接受的盐。

发明详述

出于解释本说明书的目的将应用以下定义，并且在适当时，以单数使用的术语也将包括复数。

除非上下文另有明确说明，否则本说明书中使用的术语具有以下含义：

本文所用术语“对象”是指动物。在某些方面，动物是哺乳动物。对象还指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，对象是人。如本文所用的“患者”是指人类对象。

如本文所用，术语“抑制”是指减少或抑制给定的病症、症状或紊乱或疾病，或者显著降低生物活动或过程的基线活性。

如本文所用，任何疾病或紊乱的术语“治疗”或“处理”在一个实施方式中指改善所述疾病或紊乱(即减缓或阻滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方式中，“治疗”或“处理”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括那些患者可能无法识别的身体参数。在另一个实施方式中，“治疗”或“处理”是指在身体上(例如稳定可辨别的症状)、生理上(例如稳定身体参数)或两方面调节疾病或紊乱。在另一种实施方式中，“治疗”或“处理”是指预防或延迟疾病或紊乱的发作或发展或进展。

如本文所使用的，在本发明语境(特别是在权利要求语境)中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或与语境明显矛盾。

本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或另外明显与语境相矛盾。本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不是对本发明另行要求保护的范围进行限制。

“可选被取代的”是指所提及的基团可以在一个或多个位置被其后列出基团的任何一个或任何组合取代。取代基的数量、位置和选择应理解为仅包括熟练化学家所期望合理稳定的那些取代；因此，“氧代”不是芳基或杂芳基环上的取代基，以及例如单个碳原子不具有三个羟基或氨基取代基。除非另有说明，否则可选的取代基通常最多有四个选自卤素、氧代、CN、氨基、羟基、-C_1-3烷基、-OR*、-NR*₂、-SR*、-SO₂R*,-COOR*和-CONR*₂的基团，其中每个R*独立地为H或C_1-3烷基。

除非另有说明，本文所用的“芳基”是指苯基或萘基。除非另有说明，否则芳基可选被最多四个选自卤素、CN、氨基、羟基、C_1-3烷基、-OR*、-NR*₂、-SR*、-SO₂R*、-COOR*和-CONR*₂的基团取代,其中每个R*独立地为H或C_1-3烷基。

如本文所用，“卤”或“卤素”可以是氟、氯、溴或碘。

如本文所用，“C_1-6烷基”或“C₁-C₆烷基”表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。如果指定了不同数量的碳原子，例如C₄或C₃，则相应地修改定义，例如“C_1-4烷基”将代表甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

如本文所用，“C_1-6亚烷基”或“C₁-C₆亚烷基”表示具有1-6个碳原子以及两个用于连接至另两个基团的开放化合价的直链或支链亚烷基。如果指定了不同数量的碳原子，例如C₄或C₃，则相应地修改定义，例如“C_1-4亚烷基”将代表亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、直链或支链亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-或–CH₂-CHMe-CH₂-)等。

如本文所用，“C_1-6烷氧基”表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(-O-烷基)。如果指定了不同数量的碳原子，例如C₄或C₃，则相应地修改定义，例如“C_1-4烷氧基”将代表甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。

本文所用的“C_1-4卤代烷基”或“C₁-C₄卤代烷基”表示具有1-4个碳原子的直链或支链烷基，其中至少一个氢被卤素取代。卤素取代的数量可以是一个至未取代烷基上的氢原子数。如果指定了不同数量的碳原子，例如C₆或C₃，则应相应地修改定义。因此，“C_1-4卤代烷基”将代表至少一个氢被卤素取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基，例如其中卤素是氟：CF₃CF₂-、(CF₃)₂CH-、CH₃-CF₂-、CF₃CF₂-、CF₃、CF₂H-、CF₃CF₂CH(CF₃)-或CF₃CF₂CF₂CF₂-。

如本文所用的“C_3-8环烷基”是指具有3至8个碳原子的饱和单环烃环。这类基团的示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。如果指定了不同数量的碳原子，例如C₃-C₆，则应相应地修改定义。

“4-至8-元杂环基”、“5-至6-元杂环基”、“3-至10-元杂环基”、“3-至14-元杂环基”、“4-至14-元杂环基”和“5-至14-元杂环基”分别指4-至8-元、5-至6-元、3-至10-元、3-至14-元、4-至14-元和5-至14-元杂环；除非另有说明，否则这种环含有1至7、1至5或1至3个选自氮、氧和硫的杂原子作为环成员，且环可以是饱和的，或部分饱和的但不是芳族的。杂环基可以与氮或碳原子上的另一基团连接。术语“杂环基”包括单环基团、稠环基团和桥连基团。该杂环基的示例包括但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷酮、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢噻喃、四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,4-氧硫杂环己烷、8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、氮杂环丁烷、乙烯二氧、氧杂环丁烷或噻唑。在某些实施方式中，如果没有另外说明，杂环基团具有1-2个选自N、O和S的杂原子作为环成员，以及4-7个环原子，并且可选被至多四个选自卤素、氧代、CN、氨基、羟基、C_1-3烷基、-OR*、-NR*₂、-SR*、-SO₂R*、-COOR*和-CONR*₂的基团取代,其中每个R*独立地为H或C_1-3烷基。特别地，含硫原子的杂环基团在硫上可选被一个或两个氧代基团取代。

“杂芳基”是完全不饱和的(芳香族)环。术语“杂芳基”是指5-14元单环或双环或三环芳族环系，具有1至8个选自N、O或S的杂原子。通常，杂芳基是5-10元环或环***(例如，5-7元单环基团或8-10元双环基团)，通常是含有至多四个选自N、O的杂原子的5-6元环，虽然通常杂芳基环在环中含有不超过一个二价O或S。典型的杂芳基包括呋喃，异噻唑，噻二唑，恶二唑，吲唑，吲哚，喹啉，2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-异噻唑基，2-、4-或5-恶唑基，3-、4-或5-异恶唑基，3-或5-(1,2,4-***基)，4-或5-(1,2,3-***基)，四唑基，三嗪，嘧啶，2-、3-或4-吡啶基，3-或4-哒嗪基，3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基。杂芳基可选被最多四个选自卤素、CN、氨基、羟基、C_1-3烷基、-OR*、-NR*₂、-SR*、-SO₂R*、-COOR*和-CONR*₂的基团取代,其中每个R*独立地为H或C_1-3烷基。

术语“羟基”指基团–OH。

本文描述了本发明的各种实施方式。将认识到，每个实施方式中给定的特征可以与其他给定特征组合以提供进一步的实施方式。以下列举的实施方式代表本发明：

1.式(I)的化合物：

其中：

R¹是H、卤素或C₁-C₃烷基；

R⁴选自R¹¹、–OR¹¹、-SR¹¹和–NRR¹¹；

R¹¹是C₁-C₄烷基、C₃-C₆环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或四氢吡喃基，其各自可选被至多三个选自卤素、CN、-OR、C₁-C₃卤代烷氧基、-NR₂和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的4-7元杂环基团取代，所述杂环基团可选被一个或两个选自卤素、氧代、CN、R、–OR和-NR₂的基团取代；

并且两个直接连接到相同原子(可为C或N)上的R基团可选一起形成3-6元环，其可选含有选自N、O和S的另外杂原子作为环成员，并且可以被最多两个选自–OH、氧代、C₁-C₃烷基和C₁-C₃烷氧基的基团取代；

R⁵是H、卤素、CN、C₁-C₃烷基或C₁-C₃卤代烷基；

R⁶是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁷是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁸是H或C₁-C₆烷基；

或其药学上可接受的盐。

实施方式1中W的优选选择是-COOH。

2.如实施方式1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是H。或者，实施方式1的化合物，其中R¹是F或Cl。

3.如实施方式1或实施方式2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²为H或卤素。

4.如实施方式1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³为C₁-C₃烷氧基或卤素。

5.如前述实施方式中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴为-OR¹¹。

6.如前述实施方式中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵是H或卤素。

7.如前述实施方式中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其具有式：

其中R⁹与R⁷一起形成3-7元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代；或其药学上可接受的盐。

在该实施方式的优选化合物中，由R⁹和R⁷形成的环一起顺式稠合到三环核上。在该实施方式的某些化合物中，R⁸是H。在该实施方式中特别感兴趣的化合物包括具有该绝对立体化学的化合物：

8.如实施方式1-6所述化合物，其具有式：

其中R⁹与R⁸一起形成3-7元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代；或其药学上可接受的盐。

9.如前述实施方式中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹¹是C₁-C₄烷基，可选被至多两个选自卤素、CN、-OR、C₁-C₃卤代烷氧基和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的4-7元杂环基团的基团取代，所述杂环基团可选被一个或两个选自卤素、氧代、CN、R、-OR和-NR₂的基团取代。

10.如实施方式1-9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹¹选自–CH₂CH₂OMe、-CH₂CH₂CH₂OMe、-CH₂-OEt、-CH₂CH₂-Q和–CH₂CH₂CH₂-Q，其中Q选自

11.如前述任一实施方式的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R⁹与选自R⁶、R⁷和R⁸中的一个基团一起形成4-6元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的5-6元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代。

12.如实施方式1的化合物，其选自：

和这些化学物的对映异构体；

或其药学上可接受的盐。实施方式1的其他化合物包括以下化合物及其药学上可接受的盐：

13.任何实施例的化合物或其药学上可接受的盐。该实施方式的具体化合物包括以下任何或所有化合物：

以及这些的药学上可接受盐。

14.一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的载体混合的前述任一实施方式的化合物。

15.一种治疗乙型肝炎感染的方法，包括向患有乙型肝炎感染的患者施用实施方式1-13中任一项的化合物或实施方式14的药物组合物。

16.如实施方式15的方法，其中权利要求1-13中任一项的化合物或权利要求14的药物组合物与附加治疗剂组合使用，所述附加治疗剂选自干扰素或聚乙二醇干扰素、HBV聚合酶抑制剂、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装抑制剂、HBV核心调节剂、逆转录酶抑制剂、TLR激动剂或免疫调节剂。

17.一种抑制乙型肝炎病毒复制的方法，包括体外或体内使乙型肝炎病毒与实施方式1-13中任一项的化合物接触。

18.实施方式1-11中任一项的化合物，其中R¹为F。

本发明的另一个实施方式提供如上所述的化合物或其药学上可接受的盐作为药物。

同样在本发明范围内的是式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防人类病毒性疾病和/或感染的药物中的用途，所述病毒包括HBV。

在本发明的范围内，包括含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体，且可选地还包括另外的药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

根据该实施方式的另一方面，根据本发明的药物组合物还包含治疗有效量的至少一种其他抗病毒剂。

本发明还提供如上所述的药物组合物用于治疗患有或有风险患有感染的人的HBV感染的用途。

本发明还提供如上所述的药物组合物用于治疗患有或有风险患有疾病的人的HBV感染的用途。

本发明的另一方面涉及通过向人施用抗病毒有效量的本发明化合物、其药学上可接受的盐或如上所述的组合物，来治疗或预防人类乙型肝炎病毒疾病和/或感染的方法，该施用是单独或联合至少一种其它抗病毒剂一起或分开施用。

本发明的另一方面涉及一种制品，其包含有效治疗乙型肝炎病毒疾病和/或感染的组合物；包含标签的包装材料，该标签表明该组合物可用于治疗乙型肝炎病毒引起的疾病和/或感染；其中所述组合物包含根据本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一方面涉及抑制HBV复制的方法，包括在抑制病毒复制的条件下将病毒暴露于有效量的式(I)化合物或其盐。该方法可以在体外或体内实施。

进一步包括在本发明范围内的是式(I)化合物或其盐用于抑制HBV复制的用途。

在一些实施方式中，式(I)化合物与至少一种附加治疗剂共同施用或组合使用，所述附加治疗剂选自：干扰素或聚乙二醇干扰素、HBV聚合酶抑制剂、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装抑制剂、HBV核心调节剂、逆转录酶抑制剂、TLR激动剂或免疫调节剂。可以与本发明化合物组合使用的一些特定治疗剂包括本文所述的免疫调节剂、干扰素α2a、干扰素α-2b、聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b、TLR-7和TLR-9激动剂、恩替卡韦、替诺福韦、西多福韦、替比夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、阿立他滨、阿替韦拉平、利巴韦林、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、阿德福韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉韦嗪和依曲韦林。合适的核心调节剂公开在WO2013/096744中；合适的HBV衣壳抑制剂描述于US2015/0252057中。

这些附加试剂可以与本发明的化合物组合以产生单一的药物剂型。或者，这些附加药剂可以作为多剂型的一部分单独施用于患者，例如使用试剂盒。这些附加药剂可以在施用本发明化合物或其药学上可接受的盐之前、同时或之后施用于患者。或者，在本发明化合物和附加治疗剂同时用于治疗HBV感染或由HBV感染引起或并发的疾病的条件下，这些附加治疗剂可以与本发明化合物分开施用，以及可选通过不同的给药途径和不同的给药方案施用。

每天适用的本发明化合物的剂量范围通常为0.01至100mg/kg体重，优选0.1至50mg/kg体重。在一些实施方式中，总日剂量为1-25mg，并且可以单剂量或在不同时间以分剂量施用以维持合适的血浆浓度。每个剂量单位可以方便地含有5％至95％的活性化合物(w/w)。优选地，此类制剂含有20％至80％的活性化合物，其通常与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合。

实际的药学有效量或治疗剂量当然将取决于本领域技术人员已知的因素，例如患者的年龄和体重、给药途径和疾病的严重程度。在任何情况下，所述组合将以允许基于患者的独特条件递送药学有效量的剂量和方式施用。

当本发明的组合物包含本发明化合物与一种或多种附加治疗剂或预防剂的组合时，化合物和附加药剂可以以比单剂治疗时通常用于单个化合物时更低的剂量使用。因此，在一些实施方式中，每种组分可以以通常在单一疗法方案中施用剂量的约10至100％、更优选约10至80％的剂量水平存在。

预期本发明的化合物可以与其他治疗剂组合使用，正如治疗剂的组合目前用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染一样。因此，本发明化合物可以与不同的抗HBV治疗剂如核苷或免疫调节剂组合使用。这些组合疗法提供了抑制HBV的互补机制，因此它们的组合使用应该增强功效并且还降低耐药性发展的频率。

预期用于这种组合疗法的抗病毒剂包括有效抑制病毒在人体内形成和/或复制的药剂(化合物或生物制剂)，包括但不限于干扰在人体内形成和/或复制病毒所必须的宿主或病毒机制的药剂。这些药剂可选自恩替卡韦、替诺福韦、西多福韦、替比夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、阿立他滨、阿替韦拉平、利巴韦林、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、阿德福韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉韦嗪和依曲韦林以及本文所述的免疫调节剂包括干扰素和聚乙二醇化干扰素、TLR-7激动剂和TLR-9激动剂。已知目前的HBV治疗可抑制但不能消除HBV，包括免疫调节剂，例如干扰素-α和聚乙二醇化干扰素-α，以及口服核苷/核苷酸类似物(NA)，包括拉米夫定、阿德福韦、替比夫定、恩替卡韦和替诺福韦。J.Antimicrob.Chemother.2011,vol.66(12),2715-25,因此，这些治疗剂可以与本发明的化合物组合使用。

本发明的许多化合物含有一个或多个手性中心。这些化合物可以制成单独的异构体或异构体的混合物使用。本领域已知分离异构体(包括非对映异构体和对映异构体)的方法，且本文描述了合适方法的实施例。在某些实施方式中，本发明的化合物以单一的基本上纯的异构体使用，意指至少90％的化合物样品是指定的异构体，并且小于10％的样品是任何其他异构体或异构体的混合物。优选地，至少95％的样品是单一异构体。合适异构体的选择在普通技术水平内，因为在本文所述的用于测量HBV活性的体内或体外测定中，一种异构体通常更具活性，且将是优选的异构体。当异构体之间的体外活性差异相对较小时，例如如果小于约4倍时，可以基于抗细胞培养物中病毒复制的活性水平选择优选异构体，使用如本文所述的方法：具有较低MIC(最小抑制浓度)或EC-50的异构体是优选的。

本发明化合物可以通过下面说明的一般合成路线合成，其具体实例在实施例中更详细地描述。

术语“光学异构体”或“立体异构体”是指对于给定的本发明化合物可存在的各种立体异构构型中的任一种，并且包括几何异构体。应该理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心。术语“手性”是指具有不可重叠在其镜像伴侣上的性质的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像伴侣上的分子。因此，本发明包括该化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是一对彼此不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋”混合物。该术语在适当时用于指定外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但其不是彼此的镜像。根据Cahn-lngold-Prelog R-S***确定绝对立体化学。当化合物为纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以由R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物可以根据它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)命名为(+)或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。

根据起始原料和过程的选择，这些化合物能以可能的异构体之一的形式或作为其混合物存在，例如作为纯的光学异构体，或作为异构体混合物，例如外消旋体和非对映异构体混合物，取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有的互变异构形式也意在包括在内。

任何得到的异构体混合物可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶，分离成纯的或基本纯的几何或光学异构体或非对映异构体。

可通过已知方法将最终产物或中间体的任何得到的外消旋体拆分成光学对映异构体，例如通过分离用光学活性酸或碱获得的其非对映异构体盐，并释放光学活性的酸性或碱性化合物。具体地，碱性部分可由此被用来将本发明的化合物拆分成它们的光学对映异构体，例如通过用光学活性酸例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O，O'-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸所形成盐的分级结晶。外消旋产物也可以通过手性色谱法拆分，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱(HPLC)。

此外，本发明的化合物，包括它们的盐，也可以以其水合物的形式获得，或者包括用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可以固有地或经设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明意在包括溶剂合和非溶剂合两种形式。术语“溶剂合物”是指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是药物领域中常用的那些，已知其对接受者无害，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。

本发明的化合物，包括它们的盐、水合物和溶剂合物，可以固有地或经设计形成多晶型物。

如本文所用，术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学可接受的盐”。术语“药学可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质并且通常不是生物学上或其他方面不合需要的盐。在许多情况下，本发明化合物能由于存在氨基和/或羧基或类似基团而形成酸和/或碱盐。

药学可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

可由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学上可接受的碱加成盐可以与无机和有机碱形成。

可以衍生盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方式中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。

本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由碱性或酸性部分合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当碱(例如Na、Ca、Mg或K氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的合适的酸反应。这样的反应通常在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，使用非水介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是理想的。其他合适盐的列表可见例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第20版，MackPublishing Company，Easton，Pa.(1985)和Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties，Selection,andUse”。

本文给出的任何化学式旨在表示未标记的形式以及具有至多三个具有非天然同位素分布原子的本发明化合物的同位素标记形式，例如富集氘或¹³C或¹⁵N的位点。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有除天然丰度质量分布之外的选定原子质量或质量数的原子代替。可以有效地过量掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。本发明包括各种同位素标记的本发明化合物，例如其中放射性同位素如³H和¹⁴C，或其中非放射性同位素如²H和¹³C以实质上高于正常同位素分布的水平存在的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如用¹⁴C)、反应动力学研究(用例如²H或³H)、检测或成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。具体地，¹⁸F标记的本发明化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。同位素标记的本发明化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于所附实施例和制备中所述的方法使用适当的同位素标记试剂代替通常使用的未标记试剂来制备。标记的样品可能具有非常低的同位素掺入就可用，例如在使用放射性标记来检测痕量化合物的情况下。

此外，用较重同位素特别是氘(即²H或D)进行更广泛的取代可以提供由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求或改善的治疗指数。应理解，在本文中氘被认为是本发明化合物的取代基，并且通常具有氘作为取代基的化合物样品在标记位置具有至少50％的氘掺入。这种较重同位素特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基被表示为氘，则这种化合物对于指定的各氘原子具有的氘同位素富集因子至少3500(在每个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)，至少4000(60％的氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％的氘掺入)，至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。

根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D₂O、d⁶-丙酮、d⁶-DMSO。

含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物可以能够与合适的共晶形成物形成共晶。这些共晶可以由本发明化合物通过已知的共晶形成过程制备。此类过程包括研磨、加热、共升华、共熔融或在结晶条件下于溶液中使本发明化合物与共晶形成物接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成物包括在WO 2004/078163中描述的那些。因此，本发明进一步提供了包含本发明化合物的共晶。

使用方法

本发明化合物可通过已知方法施用，包括口服、肠胃外、吸入等。在某些实施方式中，本发明化合物以丸剂、锭剂、糖锭剂、胶囊剂、溶液剂或混悬剂口服施用。在其他实施方式中，通过注射或输注施用本发明的化合物。输注通常通过静脉内进行，通常在约15分钟至4小时的时间段内进行。在其他实施方式中，鼻内或通过吸入施用本发明化合物；吸入方法特别适用于治疗呼吸道感染。本发明化合物具有口服生物利用度，因此有时优选口服施用。

在本发明的某些实施方式中，本发明化合物与第二种抗病毒剂(例如本文所述的那些)组合使用。

术语“组合”是指一个剂量单位形式的固定组合，作为适合同时或依次一起使用的单独剂型，或作为本发明化合物和组合伴侣联合施用的试剂盒，其中本发明组合物和组合伴侣可以同时独立施用或在特别能使组合伴侣显示出合作(例如协同)作用的时间间隔内单独施用，或其任何组合。

第二种抗病毒剂可以与本发明的化合物联合施用，其中第二种抗病毒剂在本发明的化合物或化合物之前、同时或之后施用。当需要同时施用本发明化合物和第二种药剂并且给药途径相同时，可以将本发明化合物与第二种药剂一起配制成相同的剂型。含有本发明化合物和第二种药剂的剂型的示例是片剂或胶囊剂。

在一些实施方式中，本发明化合物和第二抗病毒剂的组合可提供协同活性。本发明化合物和第二抗病毒剂可以一起施用、分开但同时施用或依次施用。

化合物的“有效量”是治疗或预防本文所述的病毒感染和/或疾病或病症所必需或足够的量。在一个实施例中，有效量的式I化合物是足以治疗患者中的病毒感染的量。在另一个实施例中，有效量是足以在需要这种治疗的患者中治疗HBV的量。有效量可以根据诸如患者的体积和体重、疾病类型或本发明的特定化合物等因素而变化。例如，本发明化合物的选择可以影响什么构成“有效量”。本领域普通技术人员将能够研究本文包含的因素，并且无需过度实验就可以确定本发明化合物的有效量。

给药方案可以影响什么构成“有效量”。本发明化合物可在病毒感染发作之前或之后施用于患者。此外，可以每天或依次施用几种分开的剂量以及交错剂量，或者可以连续输注剂量，或者可以是推注注射。此外，如治疗或预防情况的紧急情况所指示，本发明化合物的剂量可按比例增加或减少。

本发明化合物可用于治疗本文所述的状态、病症或疾病，或用于制造用于治疗这些疾病的药物组合物。本发明提供了本发明化合物在治疗这些疾病中的用途或制备含有本发明化合物的药物组合物用于治疗这些疾病的方法。

术语“药物组合物”包括适合施用于哺乳动物例如人的制剂。当本发明化合物作为药物施用于哺乳动物例如人时，它们本身可以给药或作为药物组合物给药，所述药物组合物含有例如0.1至99.5％(更优选0.5至90％)的至少一种式(I)或其任何子式的化合物作为活性成分连同药学上可接受的载体或可选的两种或多种药学上可接受的载体。

短语“药学上可接受的载体”是本领域公认的，并且包括适于将本发明化合物施用于哺乳动物的药学上可接受的材料、组合物或载体。载体包括液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料，涉及将受试试剂从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一个器官或身体的一部分。在与制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；辅料，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲液；和药物制剂中使用的其他无毒相容物质。通常，药学上可接受的载体是灭菌的和/或基本上无热原的。

润湿剂，乳化剂和润滑剂，例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，包衣剂，甜味剂，调味剂和芳香剂，防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的示例包括：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

本发明的制剂包括适用于口服、鼻腔、吸入、局部、透皮、口腔、舌下、直肠、***和/或肠胃外施用的制剂。制剂可以作为单位剂型方便地提供，且可通过药学领域熟知的方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的化合物的量。通常，在百分之一百里，该量的范围为活性成分的约1％至约99％，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。

制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明化合物与载体和可选的一种或多种辅助成分结合的步骤。一般而言，制剂可如下制备：使本发明化合物与液体载剂、细分固体载剂或其两者均一且密切地相联合，然后，如果需要，使该产物成型。

适于口服施用的本发明制剂可以是胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味的碱，例如通常是蔗糖和***胶或黄蓍胶)、粉末、颗粒，或作为溶液或者水性或非水性液体中的悬剂，或作为水包油或油包水液体乳液，或作为酏剂或糖浆，或作为锭剂(使用惰性碱，如明胶和甘油，或蔗糖和***胶)和/或作为漱口剂等，其各自含有预定量的本发明化合物作为活性成分。本发明化合物还可以以大丸剂、药糖剂或糊剂形式施用。

在用于口服施用本发明的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉末、颗粒等)中，活性成分与一种或多种药学上可接受的载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或或以下任何一种：填充剂或延迟剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或***胶；保湿剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；溶液缓凝剂，如石蜡；吸收促进剂，如季铵化合物；润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；吸收剂，如高岭土和膨润土；润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物；以及着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可包含缓冲剂。使用诸如乳糖等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等，类似类型的固体组合物也可用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

片剂可以通过压缩或模塑制备，可选含有一种或多种辅助成分。可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压缩片剂。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备。

本发明药物组合物的片剂和其它固体剂型，例如糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂，可选被刻痕或制备有涂层和外壳、例如肠溶衣和药物中熟知的其它涂层。它们也可以配制成使其中的活性成分缓慢或受控释放，例如，使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供所需的释放曲线、其它聚合物基质、脂质体和/或微球。它们可以通过例如通过细菌截留过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述灭菌剂可以在使用前即溶在无菌水或一些其它无菌可注射介质中。这些组合物还可选含有遮光剂，并且可以是仅在或优先在胃肠道的某一部分，任选以延迟的方式，释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的示例包括聚合物质和蜡。如果合适，活性成分也可以具有一种或多种上述赋形剂的微胶囊形式。

用于口服施用本发明化合物的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性成分外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。

除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除活性化合物外，悬浮液可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，以及其混合物。

本发明药物组合物用于直肠或***施用的制剂可以栓剂形式提供，其可以通过将一种或多种本发明化合物与一种或多种合适的无刺激性赋形剂或载体混合来制备，所述赋形剂或载体包括例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸盐，其在室温下为固体，但在体温下为液体，从而在直肠或***腔内融化并释放出活性化合物。

适用于***施用的本发明制剂还包括含有本领域已知的适当载体的子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂。

用于局部或透皮施用本发明化合物的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体混合，并与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

在本发明的活性化合物之外，软膏、糊剂、乳膏和凝胶还可以含有赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅树脂、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或其混合物。

除本发明化合物外，粉剂和喷雾剂还可含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有常规推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃，例如丁烷和丙烷。

透皮贴剂具有向体内提供本发明化合物的受控递送的附加优点。这些剂型可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中来制备。吸收促进剂也可用于增加化合物在皮肤上的通量。可以通过提供速率控制膜或将活性化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制该通量的速率。

眼部制剂、眼用软膏、粉末、溶液等也包括在本发明的范围内。

适用于肠胃外施用的本发明药物组合物可包含一种或多种本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体，例如无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液，或临用前可重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。

可用于本发明药物组合物中的合适的水性和非水性载体的示例包括水、乙醇、乙二醇醚、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)以及其合适的混合物、植物油例如橄榄油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。可以保持适当的流动性，例如，通过使用包衣材料如卵磷脂，在分散体的情况下通过保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂。

这些组合物还可含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，可以确保防止微生物的作用。还可能需要在组合物中包含等渗剂，例如糖，氯化钠等。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶来延长可注射药物形式的吸收。

在某些情况下，为了延长药物的作用，希望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。然后，药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和晶形。或者，通过将药物溶解或悬浮在油性载体中来实现胃肠外施用的药物形式的延迟吸收。

通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成主题化合物的微囊基质来制备可注射的储库形式。根据药物与聚合物的比例，以及所用特定聚合物的性质，可以控制药物释放速率。其他可生物降解聚合物的示例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库可注射制剂。

本发明的制剂可以口服、胃肠外、局部或直肠给药。它们当然是由适合每种给药途径的形式给出的。例如，它们以片剂或胶囊形式，通过注射、吸入、眼用乳液、软膏、栓剂等施用，通过注射、输注或吸入施用；通过乳液或软膏外用；以及通过栓剂直肠来施用。

本文所用的短语“肠胃外施用”和“胃肠外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。有时静脉内输注是本发明化合物的优选递送方法。输注可用于递送单个日剂量或多个剂量。在一些实施方式中，本发明化合物通过输注施用15分钟至4小时，通常0.5至3小时。该输注可以每天使用一次、每天使用两次或每天使用多达三次。

本文所用的短语“全身施用”、“外周施用”是指施用化合物、药物或其他物质并非直接进入中枢神经***，而使其进入患者体内，并因此可以进行新陈代谢和其他类似过程，例如皮下施用。

这些化合物可以通过任何合适的给药途径施用于人和其他动物用于治疗，包括口服、鼻腔例如通过喷雾、直肠、***内、肠胃外、脑池内和局部如通过粉末、软膏或滴剂包括口腔和舌下。

无论选择何种给药途径，可以通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明化合物(可以以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。

可以改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得针对特定患者、组合物和给药途径有效实现所需治疗反应的活性成分的量，而不会对患者有毒。

选择的剂量水平取决于多种因素，包括所用本发明特定化合物、或其酯、盐或酰胺的活性，给药途径，给药时间，所用化合物的特定排出速率，治疗的持续时间，与所用特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史等医学领域众所周知的因素。

具有本领域普通技能的医生或兽医可以容易地确定且处方出所需药物组合物的有效量。例如，医生或兽医可以以低于实现所需治疗效果所需的水平开始药物组合物中使用的本发明化合物的剂量，并逐渐增加剂量直至达到所需效果。

通常，本发明化合物的合适日剂量是有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。这种有效剂量通常取决于上述因素。通常，当用于所示效果时，本发明化合物用于患者静脉内和皮下剂量的范围为每千克体重每天约0.0001至约100mg，更优选每天每千克约0.01至约50mg，更优选每天每千克约0.1至约20毫克。有效量是预防或治疗病毒感染例如HBV的量。

若需要，活性化合物的有效日剂量可以每天以单剂量施用，或者作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量在一天中以适当的间隔分开施用，可选以单位剂型施用。口服或通过吸入递送的化合物通常以每天一至四剂施用。通过注射递送的化合物通常每天施用一次，或每隔一天施用一次。通过吸入输注递送的化合物通常以每天一至三剂施用。当在一天内施用多个剂量时，剂量可以约4小时、约6小时、约8小时或约12小时的间隔施用。

虽然本发明化合物可以单独施用，但优选将化合物作为药物组合物例如本文所述的那些来施用。因此，使用本发明化合物的方法包括施用化合物作为药物组合物，其中在施用前将至少一种本发明化合物与药学上可接受的载体混合。

本发明化合物与免疫调节剂组合的用途

本文所述的化合物和组合物的使用或施用可以联合一种或多种充当免疫调节剂的治疗剂，例如共刺激分子的激活剂，或免疫抑制分子的抑制剂，或疫苗。程序性死亡1(PD-1)蛋白是扩展的CD28/CTLA4家族T细胞调节因子的抑制成员(Okazaki等，(2002)Curr OpinImmunol 14:391779-82；Bennett等(2003)J.Immunol.170:711-8)。PD-1在活化的B细胞、T细胞和单核细胞上表达。PD-1是负调节TCR信号的免疫抑制蛋白(Ishida，Y.等(1992)EMBOJ.11：3887-3895；Blank，C.等(Epub 2006年12月29日)Immunol.Immunother.56(5)：739-745)，并且在慢性感染中上调。PD-1和PD-L1之间的相互作用可以充当免疫检查点，其可以导致例如浸润的淋巴细胞的减少、T细胞受体介导的增殖的减少和/或癌细胞或感染的细胞的免疫逃避(Dong等(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blank等(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307-314；Konishi等(2004)Clin.Cancer Res.10:5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用可以逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，效果是相加的(Iwai等(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 99:12293-7；Brown等(2003)J.Immunol.170:1257-66)。免疫调节可以通过结合免疫抑制蛋白(例如PD-1)或结合调节抑制蛋白的结合蛋白(例如PD-L1，PD-L2)来实现。

在一个实施方式中，本发明的组合疗法包括免疫调节剂，其是免疫检查点分子的抑制分子的抑制剂或拮抗剂。在另一个实施方式中，免疫调节剂结合天然抑制免疫抑制性检查点分子的蛋白质。当与抗病毒化合物组合使用时，这些免疫调节剂可以增强抗病毒反应，从而相对于单独使用抗病毒化合物的治疗增强功效。

术语“免疫检查点”是指CD4和CD8T细胞的细胞表面上的一组分子。这些分子可以有效地充当“制动器”以下调或抑制适应性免疫应答。免疫检查点分子包括但不限于程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40和LAG3，其直接抑制免疫细胞。可作为用于本发明方法的免疫检查点抑制剂的免疫治疗剂包括但不限于PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ的抑制剂。抑制性分子的抑制可以通过DNA、RNA或蛋白质水平的抑制来进行。在一些实施方式中，抑制性核酸(例如，dsRNA，siRNA或shRNA)可用于抑制抑制性分子的表达。在其他实施方式中，抑制信号的抑制剂是与抑制性分子结合的多肽，例如可溶性配体或抗体或其抗原结合片段。

“与……组合”并不意味着治疗法或治疗剂必须同时施用和/或配制以用于一起递送，尽管这些递送方法在本文所述的范围内。免疫调节剂可以与一种或多种本发明化合物，以及任选的一种或多种另外的疗法或治疗剂同时、之前或之后施用。组合中的治疗剂可以任何顺序施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表施用。还应理解，该组合中使用的治疗剂可以在单一组合物中一起施用或在不同组合物中分开施用。通常，预期组合中使用的每种治疗剂的使用水平不超过它们单独使用的水平。在一些实施方式中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。

在某些实施方式中，本文所述的抗病毒化合物与一种或多种免疫调节剂组合施用，所述免疫调节剂是PD-1、PD-L1和/或PD-L2的抑制剂。每种该抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。此类免疫调节剂的示例是本领域已知的。

在一些实施方式中，免疫调节剂是选自MDX-1106、Merck 3475或CT-011的抗PD-1抗体。

在一些实施方式中，免疫调节剂是免疫粘附素(例如，免疫粘附素，其包含PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分融合至恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)。

在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-1抑制剂，例如AMP-224。

在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-L1抑制剂，例如抗PD-L1抗体。

在一些实施方式中，免疫调节剂是选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的抗PD-L1结合拮抗剂。MDX-1105，也称为BMS-936559，是WO2007/005874中描述的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70是WO2010/077634中描述的抗PD-L1。

在一些实施方式中，免疫调节剂是纳武单抗(nivolumab)(CAS登记号：946414-94-4)。纳武单抗的替代名称包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。纳武单抗是一种完全人IgG4单克隆抗体，可特异性阻断PD-1。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD-1的其他人单克隆抗体公开于US 8,008,449、EP2161336和WO2006/121168中。

在一些实施方式中，免疫调节剂是抗PD-1抗体派姆单抗(Pembrolizumab)。派姆单抗(也称为兰利珠单抗、MK-3475、MK03475、SCH-900475或默克)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体公开于Hamid，O等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2)：134-44，US 8,354,509、WO2009/114335和WO2013/079174。

在一些实施方式中，免疫调节剂是皮地珠单抗(CT-011；Cure Tech)，一种结合PD1的人源化IgG1k单克隆抗体。皮地珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体公开在WO2009/101611中。

可作为免疫调节剂用于本文所公开方法的其它抗PD1抗体包括AMP 514(Amplimmune)和US8,609,089、US2010028330和/或US20120114649中公开的抗PD1抗体。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体是MSB0010718C。MSB0010718C(也称为A09-246-2；默克雪兰诺)是与PD-L1结合的单克隆抗体。

在一些实施方式中，免疫调节剂是MDPL3280A(基因泰克/罗氏)，其是结合PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和PD-L1的其他人单克隆抗体公开于U.S.专利号:7,943,743和U.S.公开号:20120039906。可供本发明方法用作免疫调节剂的其它抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO2010/077634)、MDX-1105(也称为BMS-936559)和在WO2007/005874中公开的抗PD-L1结合剂。

在一些实施方式中，免疫调节剂是AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，在WO2010/027827和WO2011/066342中公开)，是阻断PD1和B7-H1之间相互作用的PD-L2Fc融合可溶性受体。

在一些实施方式中，免疫调节剂是抗LAG-3抗体，例如BMS-986016。BMS-986016(也称为BMS986016)是结合LAG-3的单克隆抗体。BMS-986016和其他人源化抗LAG-3抗体公开于US 2011/0150892、WO2010/019570和WO2014/008218中。

在某些实施方式中，本文公开的组合疗法包括共刺激分子或抑制分子的调节剂，例如共抑制配体或受体。

在一个实施方式中，共刺激分子的共刺激调节剂(例如激动剂)选自OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体的激动剂(例如，激动剂抗体或其抗原结合片段，或可溶性融合物)。

在另一个实施方式中，本文公开的组合疗法包括免疫调节剂，其为共刺激分子，例如与阳性信号相关的激动剂，包括CD28、CD27、ICOS和/或GITR的共刺激结构域。

示例性GITR激动剂包括例如GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如二价抗GITR抗体)，例如描述于以下中的GITR融合蛋白：US专利号：6,111,090,欧洲专利号:090505B1,U.S专利号:8,586,023,PCT公开号:WO 2010/003118和2011/090754,或例如描述于以下的抗GITR抗体：U.S.专利号:7,025,962,欧洲专利号:1947183B1,U.S.专利号:7,812,135,U.S.专利号:8,388,967,U.S.专利号:8,591,886,欧洲专利号:EP 1866339,PCT公开号:WO 2011/028683,PCT公开号:WO 2013/039954,PCT公开号:WO2005/007190,PCT公开号:WO 2007/133822,PCT公开号:WO2005/055808,PCT公开号:WO 99/40196,PCT公开号:WO 2001/03720,PCT公开号:WO99/20758,PCT公开号:WO2006/083289,PCT公开号:WO 2005/115451,U.S.专利号:7,618,632,和PCT公开号:WO 2011/051726。

在一个实施方式中，使用的免疫调节剂是结合PD-L1、PD-L2或CTLA4的可溶性配体(例如，CTLA-4-Ig)或者抗体或抗体片段。例如，抗PD-1抗体分子可以与抗-CTLA-4抗体组合施用，例如伊匹单抗(ipilimumab)。示例性的抗-CTLA4抗体包括曲美木单抗(Tremelimumab)(可从Pfizer获得的IgG2单克隆抗体，以前称为替西木单抗(ticilimumab)、CP-675,206)；和伊匹单抗(CTLA-4抗体，也称为MDX-010，CAS号477202-00-9)。

在一个实施方式中，在用本文所述的本发明化合物治疗后施用抗PD-1抗体分子。

在另一个实施方式中，抗PD-1或PD-L1抗体分子与抗LAG-3抗体或其抗原结合片段组合施用。在另一个实施方式中，抗PD-1或PD-L1抗体分子与抗TIM-3抗体或其抗原结合片段组合施用。在其他实施方式中，抗PD-1或PD-L1抗体分子与抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体或其抗原结合片段组合施用。本文所述抗体的组合可以例如作为单独的抗体分开施用，或者例如作为双特异性或三特异性抗体分子相连施用。在一个实施方式中，施用包含抗PD-1或PD-L1抗体分子和抗TIM-3或抗LAG-3抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体。在某些实施方式中，本文所述的抗体组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如实体瘤)。可以在本领域已知的动物模型中测试上述组合的功效。例如，用于测试抗PD-1和抗LAG-3的协同效应的动物模型描述于例如Woo等(2012)Cancer Res.72(4)：917-27。

可用于组合疗法的示例性免疫调节剂包括但不限于例如afutuzumab(可从获得)、培非格司亭来那度胺(CC-5013，)、沙利度胺泊利度胺(CC4047)和细胞因子，例如IL-21或IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白细胞介素1、白细胞介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。

可与本发明的抗病毒化合物组合使用的此类免疫调节剂的示例性剂量包括约1至10mg/kg、例如3mg/kg的剂量的抗PD-1抗体分子，以及约3mg/kg剂量的抗-CTLA-4抗体，例如伊匹单抗。

将本发明的抗病毒化合物与免疫调节剂组合使用的方法的实施方式的示例包括以下这些，其可以与本文公开的式I化合物或其任何亚属或子式一起使用：

I.一种治疗对象中病毒感染的方法，包括向对象施用如本文所述的式(I)化合物和免疫调节剂。

ii.实施方式i的方法，其中所述免疫调节剂是共刺激分子的激活剂或免疫检查点分子的抑制剂。

iii.实施方式i和ii中任一项的方法，其中所述共刺激分子的活化剂是OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3和CD83配体中一种或多种的激动剂。

iv.以上实施方式i-iii中任一项的方法，其中所述免疫检查点分子的抑制剂选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFRβ。

v.以上实施方式i-iii中任一项的方法，其中所述免疫检查点分子的抑制剂选自PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4，或其任意组合。

vi.实施方式i-v中任一项的方法，其中所述免疫检查点分子的抑制剂是与免疫检查点分子结合的可溶性配体或者抗体或其抗原结合片段。

vii.实施方式i-vi中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段来自IgG1或IgG4(例如，人IgG1或IgG4)。

viii.实施方式i-vii中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段被改变例如突变，以增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。

ix.实施方式i-viii中任一项的方法，其中所述抗体分子是双特异性或多特异性抗体分子，其对PD-1或PD-L1具有第一结合特异性，并且对TIM-3、LAG-3或PD-L2具有第二结合特异性。

x.实施方式i-ix中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是选自纳武单抗、派姆单抗或皮地珠单抗的抗PD-1抗体。

xi.实施方式i-x中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的抗PD-L1抗体。

xii.实施方式i-x中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是抗LAG-3抗体分子。

xiii.实施方式xii的方法，其中所述抗LAG-3抗体分子是BMS-986016。

xiv.实施方式i-x中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是抗PD-1抗体分子，通过注射(例如皮下或静脉内)如下剂量：约1至30mg/kg、例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg或约3mg/kg而施用，例如每周一次至每2、3或4周一次。

xv.实施方式xiv的方法，其中所述抗PD-1抗体分子以每隔一周约10至20mg/kg的剂量施用。

xvi.实施方式xv的方法，其中所述抗PD-1抗体分子例如纳武单抗，以约1mg/kg至3mg/kg的剂量静脉内施用，例如每两周一次约1mg/kg、2mg/kg或3mg/kg。

xvii.实施方式xv的方法，其中所述抗PD-1抗体分子例如纳武单抗以约2mg/kg的剂量以3周的间隔静脉内施用。

本发明化合物与据报道具有与本发明化合物相同效用的化合物都具有某些结构特征。例如，WO2015/113990中的实施例132具有以下结构：

和类似于本发明化合物的生物活性。如本文所示，当与用于预测发育适合性的常见筛选中的参考实施例相比时，本发明的某些化合物具有改善的溶解度和安全性。

本文所述的化合物可以通过下面的一般合成路线合成，其具体实例在实施例中更详细地描述。

一般合成步骤

用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购获得或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法(Houben-Weyl第4版1952，Methods of Organic Synthesis，Thieme，第21卷)制得。用于合成本发明化合物的一般方法通过以下实施例和公开的PCT申请WO2015/113990和WO2015/173164中公开的方法说明。

缩略语表

Ac 乙酰基

ACN 乙腈

AcOEt/EtOAc 乙酸乙酯

AcOH 乙酸

aq 水溶液

Bn 苄基

Bu 丁基(nBu＝正丁基,tBu＝叔丁基)

CDI 羰基二咪唑

DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]-十一碳-7-烯

Boc2O 二碳酸二叔丁酯

DCE 1,2-二氯乙烷

DCM 二氯甲烷

DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯

DiBAl-H 二异丁基氢化铝

DIPEA N-乙基二异丙基胺

DMA N,N-二甲基乙酰胺

DMAP 二甲氨基吡啶

DMF N,N’-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

EI 电喷射离子化

Et₂O ***

Et₃N 三乙胺

Ether ***

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

FA 甲酸

FC 快速色谱

h 小时

HCl 盐酸

HOBt 1-羟基苯并三氮唑

HPLC 高效液相色谱

H₂O 水

IPA 异丙醇

L 升

LC-MS 液相色谱质谱

LiHMDS 双(三甲基硅基)氨基锂

Me 甲基

MeI 碘甲烷

MeOH 甲醇

mg 毫克

min 分钟

mL 毫升

MS 质谱

Pd/C 钯炭

PG 保护基团

Ph 苯基

Ph₃P 三苯基膦

Prep 制备

Rf 比移值

RP 反相

Rt 保留时间

rt 室温

SFC 超临界流体色谱法

SiO₂ 硅胶

丙基磷酸酐

TBAF 四丁基氟化铵

TBDMS 叔丁基二甲基硅基

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TLC 薄板层析

TsCl 甲苯磺酰氯

在本文的范围内，除非上下文另有说明，本身不是本发明化合物的特定所需最终产物的组分的易于除去的基团被称为“保护基团”。这些保护基团对官能团的保护、保护基团本身及其裂解反应描述于例如标准参考文献中，例如《合成科学：Houben-Weyl分子转化方法》(Science of Synthesis:Houben-Weyl Methods of Molecular Transformation)Georg Thieme Verlag,德国斯图加特.2005.41627pp.(URL:http://www.science-of-synthesis.com(电子版,48卷))；J.F.W.McOmie,《有机化学中的保护基团》("ProtectiveGroups in Organic Chemistry"),普莱纽姆出版社,伦敦和纽约，1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,《有机化学中的保护基团》("Protective Groups in Organic Synthesis"),第三版,Wiley,纽约，1999；《肽》("The Peptides")；卷3(编者:E.Gross和J.Meienhofer),学术出版社,伦敦和纽约，1981；《有机化学方法》("Methodender organischen Chemie"),Houben Weyl,第四版,卷15/I,Georg Thieme Verlag,斯图加特，1974；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit,《氨基酸、肽、蛋白》("Peptide,Proteine"),Verlag Chemie,Weinheim,迪尔菲尔德比奇和巴塞尔，1982；和Jochen Lehmann,《碳水化合物的化学：单糖和衍生物》("Chemie der Kohlenhydrate:Monosaccharide und Derivate"),GeorgThieme Verlag,斯图加特，1974。保护基团的特征是它们可以容易地除去(即未发生不希望的副反应)，例如通过溶剂分解、还原、光解或者在可替代地在生理条件下(例如通过酶促裂解)。

具有至少一个成盐基团的本发明化合物的盐可以以本身已知的方式制备。例如，可以形成具有酸基团的本发明化合物的盐，例如，优选用化学计量或仅使用少量过量的成盐试剂，通过如下处理化合物：用金属化合物例如合适有机羧酸的碱金属盐，如2-乙基己酸的钠盐；用有机碱金属或碱土金属化合物，如相应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，如氢氧化钠或钾、碳酸钠或钾或碳酸氢钠或钾；用相应的钙化合物或用氨或合适的有机胺。本发明化合物的酸加成盐以常规方式获得，例如通过用酸或合适的阴离子交换试剂处理化合物。含有酸和碱性成盐基团(例如游离羧基和游离氨基)的本发明化合物的内盐可以通过例如将盐(例如酸加成盐)中和到等电点而形成，例如用弱碱或用离子交换剂处理。

盐可以以常规方式转化为游离化合物；金属盐和铵盐可以例如通过用合适的酸处理来转化，酸加成盐例如通过用合适的碱性试剂处理来转化。

根据本发明可获得的异构体混合物可以以本身已知的方式分离成单独的异构体；非对映异构体可以分离，例如通过在多相溶剂混合物之间分配、重结晶和/或色谱分离，例如在硅胶上或通过例如在反相柱上的中压液相色谱；且外消旋体可以分离，例如通过与光学纯的成盐试剂形成盐并分离由此可得的非对映异构体的混合物，例如通过分级结晶，或通过光学活性柱材料上的色谱法可以得到。

中间体和最终产物可以根据标准方法进行后处理和/或纯化，例如使用色谱方法、分配方法、(重)结晶等。

实施例

通过以下实施例说明本发明，这些实施例不应解释为限制性的。整个实施例中使用的测定方法在本领域中已经建立：在这些测定方法中证明功效通常被认为对对象中功效有预测性。

一般条件：

使用电喷雾电离在LC-MS***上运行质谱。这些是WATERS Acquity Single QuardDetector。[M+H]⁺指单同位素分子量。

NMR谱在开放式Varian 400或Varian 500NMR谱仪上进行。在298K下测量谱并使用溶剂峰作为参照。¹H NMR的化学位移以百万分率(ppm)报告。

质谱在LC-MS***上运行，具有以下条件之一：

1.Waters Acquity UPLC-H级***配备SQD检测器。

柱:ACQUITY UPLC HSS C18(50*2.1)mm,1.8u.

柱温:环境。

流动相：A)溶于水的0.1％FA+5mM乙酸铵

B)溶于乙腈的0.1％FA

梯度：5-5％溶剂B 0.40分钟,5-35％溶剂B 0.80分钟,35-55％溶剂B 1.2分钟,

55-100％溶剂B 2.5分钟。

流速：0.55mL/分钟.

通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。

2.Waters LCMS***配备ZQ 2000检测器。

柱:X-BRIDGE C18(50*4.6)mm,3.5u.

柱温:环境。

流动相：A)溶于水的0.1％NH₃

B)溶于乙腈的0.1％NH₃

梯度：5-95％溶剂B 5.00分钟.

流速：1.0mL/分钟.

通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。

3.Waters ACQUITY UPLC***并配备ZQ 2000MS***。

柱:Phenomenex的Kinetex,2.6um,2.1x 50mm

柱温:50℃

梯度：2-88％(或00-45％,或65-95％)溶剂B用时1.29分钟

流速：1.2mL/分钟.

通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。

实施例1：合成外消旋10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[rac-1]

步骤1：5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮[1.1a]

Pd(OAc)₂(8.16mg,0.036mmol)、叔丁醇钠(0.454g,4.72mmol)、二环己基(2'-甲基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(32mg)、2,2-二甲基环戊酮(0.547ml,4.36mmol)和4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(1g,3.63mmol)的甲苯(4.0mL)溶液的混合物在密闭小瓶中50℃加热18小时。混合物用EtOAc稀释并过滤。浓缩滤液，剩余的油状物通过硅胶柱色谱法纯化，EtOAc/庚烷5至50％，得到产物(500mg，45％收率)。LC-MS(m/z):307.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):7.72–7.28(m,1H),6.94–6.61(m,2H),4.10(m,2H),3.91–3.77(m,4H),3.65–3.49(m,2H),3.41–3.27(m,3H),2.36(d,J＝4.2Hz,1H),2.19–1.88(m,4H),1.88–1.71(m,1H),1.21–1.11(m,3H),1.07(s,3H)

步骤2：5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺[1.1b]

向5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮(320mg,1.0mmol)的MeOH(3mL)溶液混合物中加入乙酸铵盐(1.6g,20.9mmol)和氰基硼氢化钠(656mg,10.4mmol)。将混合物在80℃下搅拌8小时，然后减压浓缩。将剩余物质用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。粗物质不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS(m/z):308.0[M+H]⁺.

步骤3：N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2二甲基环戊基)甲酰胺[1.1c]

向5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺(320 mg,1.041mmol)的二氧六环(3ml)溶液混合物中加入甲酸(0.160mL,4.16mmol)。混合物在100℃搅拌6小时。浓缩混合物，得到粗产物，其不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):336.2[M+H]⁺.

步骤4：7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c]异喹啉[1.1d-I]和[1.1d-II]

向N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊基)甲酰胺(349mg,1.04mmol)的乙腈(1.8ml)溶液混合物中加入POCl₃(140μl,1.50 mmol)。混合物在85℃下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶解在EtOAc中并通过加入氢氧化铵溶液碱化。分离各相，有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。剩余物质通过硅胶色谱法纯化，丙酮/庚烷5至50％，得到产物rac-1.1d-I和rac-1.1d-II。

反式异构体rac-1.1d-II:(70mg,产率21％)。LCMS(m/z):318.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):8.22(s,1H),6.93-6.83(m,1H),6.70(s,1H),4.16(t,J＝6.4Hz,2H),3.94-3.83(m,3H),3.57(q,J＝4.7Hz,2H),3.35(d,J＝1.5Hz,4H),2.84(s,2H),2.21-1.98(m,4H),1.84-1.70(m,3H),1.68-1.53(m,3H),1.22(s,4H),1.06(s,4H)

顺式异构体rac-1.1d-I:(54mg,产率16％)。LCMS(m/z):318.3[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,CDCl₃):8.17(s,1H),6.75(s,1H),6.67(s,1H),4.14(t,J＝6.2Hz,3H),3.92-3.83(m,3H),3.77(d,J＝10.3Hz,1H),3.57(t,J＝5.4Hz,3H),3.35(d,J＝1.6Hz,3H),3.25(q,J＝9.4Hz,1H),2.42-2.21(m,2H),2.19-2.01(m,3H),1.64(dd,J＝20.6,7.8Hz,4H),1.45(t,J＝8.0Hz,2H),1.24(d,J＝6.1Hz,4H),0.89(s,4H).

rac-1.1d-I和rac-1.1d-II的相对构型通过奥氏核效应(nOe)实验证实。

步骤5：10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,8,8a,12b-八氢环戊[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[rac-1.1e]

向7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c]异喹啉(顺式异构体,外消旋-1.1d-I)(51mg,0.161mmol)的EtOH(0.6ml)溶液混合物中加入(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(90mg,0.482mmol)。混合物在110℃搅拌16小时。冷却后，浓缩混合物，粗产物不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):458.0[M+H]⁺.

步骤6：10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸乙酯[rac-1.1f]

向10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,8,8a,12b-八氢环戊[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯(73.7mg,0.161mmol)的DME(0.3ml)溶液混合物中加入四氯苯醌(39.6mg,0.161mmol)。混合物在110℃搅拌2小时。冷却至室温后，过滤混合物，用冷DME洗涤固体。干燥后，所需产物(28mg，38％收率)为浅黄色固体。LCMS(m/z):456.0[M+H]⁺.

步骤7：外消旋10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[rac-1.1f]

向10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯(28mg,0.061mmol)在THF(0.4ml)、MeOH(0.4ml)和水(0.4ml)的溶液混合物中加入LiOH(4.42mg,0.184mmol)。在室温下搅拌2小时后，浓缩混合物，然后通过加入3.0N HCl水溶液酸化。向混合物加入EtOAc。将有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。通过反相HPLC纯化粗残余物，得到产物(5mg，19％收率)。LCMS(m/z):428.2[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,CD₃CN):8.41(s,1H),7.33(d,J＝22.5Hz,2H),6.97(s,1H),4.38(d,J＝8.5Hz,1H),4.17(dtd,J＝13.1,9.6,4.8Hz,2H),3.91(s,3H),3.80(t,J＝8.9Hz,1H),3.53(t,J＝6.2Hz,3H),3.32(s,3H),2.32(q,J＝7.7Hz,4H),2.13-2.00(m,3H),1.65(dt,J＝13.2,6.8Hz,2H),1.45(dt,J＝12.9,7.9Hz,1H),1.22(s,3H),0.48(s,3H).

手性分离：(3aS,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[1.1]和(3aR,12bS)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[1.2]

化合物rac-1(40mg,0.090mmol)通过手性HPLC分离(柱：AD21x250mm，庚烷/IPA＝30/70，流速20ml/min)，得到两种对映异构体1.1和1.2。

化合物1.1:tR 9.55分钟；8mg产率20％。LCMS(m/z):428.2[M+H]⁺.1HNMR(400MHz,CD₃CN):8.41(s,1H),7.33(d,J＝22.5Hz,2H),6.97(s,1H),4.38(d,J＝8.5Hz,1H),4.17(dtd,J＝13.1,9.6,4.8Hz,2H),3.91(s,3H),3.80(t,J＝8.9Hz,1H),3.53(t,J＝6.2Hz,3H),3.32(s,3H),2.32(q,J＝7.7Hz,4H),2.13-2.00(m,3H),1.65(dt,J＝13.2,6.8Hz,2H),1.45(dt,J＝12.9,7.9Hz,1H),1.22(s,3H),0.48(s,3H).

化合物1:2tR 18.90分钟；8mg，产率20％。LCMS(m/z):428.2[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,CD₃CN):8.41(s,1H),7.33(d,J＝22.5Hz,2H),6.97(s,1H),4.38(d,J＝8.5Hz,1H),4.17(dtd,J＝13.1,9.6,4.8Hz,2H),3.91(s,3H),3.80(t,J＝8.9Hz,1H),3.53(t,J＝6.2Hz,3H),3.32(s,3H),2.32(q,J＝7.7Hz,4H),2.13-2.00(m,3H),1.65(dt,J＝13.2,6.8Hz,2H),1.45(dt,J＝12.9,7.9Hz,1H),1.22(s,3H),0.48(s,3H).

实施例2：合成外消旋10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[rac-2]

使用实施例1步骤4的反式稠合异构体，通过与制备实施例1相同的方法制备标题化合物。LCMS(m/z):428.2[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,CD₃CN):δ8.72(s,1H),7.34(s,1H),7.23(s,1H),6.84(s,1H),4.17(q,J＝6.4Hz,2H),3.90(s,3H),3.74(d,J＝13.5Hz,1H),3.60-3.42(m,4H),3.32(s,4H),2.31(dq,J＝17.6,7.9,6.3Hz,2H),2.10-2.00(m,3H),1.52(s,4H),1.29(s,4H)

实施例3.1：合成(3aS,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸.

步骤1：(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二氟-3-((三甲基硅基)氧基)丁-3-烯酸乙酯[3.1a]

在氩气氛下，用超声辐射处理Mg(3.69g,152mmol)和TMSCl(19.43mL,152mmol)的混合物15分钟。在氩气氛下，在50℃向混合物中滴加DMF(30mL))和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(4.56g,19mmol)。将反应混合物在50℃下另外搅拌3分钟。在真空中除去过量的TMSCl后，过滤粗混合物，滤液(含有3.1a和DMF)不经进一步纯化用于下一步。

步骤2：8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸乙酯[3.1b-1]和[3.1b-2]

在50℃下，向ZnI₂(920mg,2.88mmol)和1.1d-I(915mg,2.88mmol)在无水MeCN(10mL)中的悬液中滴加粗3.1a(5091mg,17.30mmol)的无水DMF(30mL)溶液，并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入10％HCl中并用DCM萃取。用盐水洗涤有机层并用MgSO₄干燥。过滤后，浓缩有机层，通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/EtOAc)纯化粗油，得到外消旋-3.1b(1.2g，2.53mmol，88％产率)，为浅黄色固体。然后通过手性SFC(AD柱，流速100ml/min，CO₂/EtOH＝70/30,256bar)纯化该材料以提供产物3.1b-1(tR 2.4分钟)和3.1b-2(tR 4.4分钟,280mg)。LC-MS(m/z):474.2[M+H]⁺.

步骤3：(3aS,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[3.1]

向3.1b-2(330mg,0.697mmol)的THF(1mL)溶液中加入NaOH(1.394mL,1.394mmol)。将反应混合物搅拌2小时，然后将反应用1.5ml 1N HCl酸化并用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层并用MgSO₄干燥。过滤并浓缩后，所得固体用热EtOH/水(5ml；5ml)重结晶，真空过滤收集固体。将该物质进而从MeCN和水中冻干，得到产物(230mg，0.511mmol，73.3％)，为褐色固体。LC-MS(m/z):446.4[M+H]⁺.¹H NMR(500MHz,DMSO-d⁶)δ8.82(s,1H),7.56(s,1H),7.20(s,1H),4.52(d,J＝5.5Hz,1H),4.20-4.06(m,2H),3.82(s,3H),3.31(dd,J＝15.9,4.8Hz,2H),3.26(s,3H),3.18(d,J＝15.9Hz,1H),2.01(p,J＝6.3Hz,2H),1.57-1.50(m,1H),0.87(d,J＝6.6Hz,3H),0.73(d,J＝6.7Hz,3H).

按照步骤3的过程，自3.1b-1合成化合物3.2。LC-MS(m/z):446.2[M+H]⁺.

实施例4.1：合成(3aR,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸。

步骤1：4-(苄氧基)-1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-酮.

向烘箱干燥的250mL圆底烧瓶中加入4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(6.7g,24.35mmol)、XPhos(0.348g,0.731mmol)、Pd(OAc)₂(0.082g,0.365mmol)，并用氮气吹扫。加入二氧六环(体积:32.5ml)，搅拌混合物直至均匀。加入LiHMDS(1.0M的THF溶液,70.6ml,70.6mmol)。缓慢加入4-(苄氧基)-3,3-二甲基丁-2-酮(10.05g,48.7mmol)的4mL二氧六环溶液。将烧瓶配备氮气吹扫的回流冷凝器，然后加热至71℃保持90分钟。冷却后，将混合物倒入水中，用4N HCl将pH调至3。将水层用EtOAc萃取三次，将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，然后浓缩到16g硅藻土上。将该物质在120g SiO₂Combiflash柱(0->50％EtOAc的庚烷溶液)上纯化。浓缩主要UV活性峰，得到4.1a(8.8g，21.97mmol，90％产率)，为黄色油状物。LC-MS(m/z):401.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):7.28-7.36(m,5H),6.79(d,J＝8.2Hz,1H)6.6-6.7(m,2H),4.51(s,2H),4.04(t,J＝6.5Hz),2H),3.83(s,3H),3.75(s,2H),3.55(t,J＝6.2Hz,2H),3.51(s,2H),3.34(s,3H),2.07(quint,J＝6.3Hz,2H),1.20(s,6H).

步骤2：4-(苄氧基)-1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-胺[4.1b].

向圆底烧瓶中加入4.1a(600.mg，1.498mmol)和甲醇(1.5mL)。加入乙酸铵(1.732g,22.47mmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入氰基硼氢化钠(471mg,7.49mmol)。混合物在60℃加热18小时，直至反应完全。通过加入6N NaOH淬灭反应并搅拌30分钟。将混合物用2-Me-THF萃取两次，将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，然后过滤并浓缩，得到粗4.1b(602mg，1.498mmol，100％产率)，其不经进一步纯化而使用。LC-MS(m/z):402.4[M+H]⁺.

步骤3：N-(4-(苄氧基)-1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-基)甲酰胺[4.1c]

将4.1b(600mg,1.494mmol)溶于DMF(2.3ml)中并冷却至0℃。加入三乙胺(1.04mL,7.5mmol),然后加入EDC(573mg,2.99mmol)和甲酸(229μl,5.98mmol)。混合物室温搅拌2小时。加入水，混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用1.0H HCl水溶液、盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥并浓缩。通过硅胶(0->70％丙酮的庚烷溶液)纯化粗物质，得到4.1c(520mg，1.211mmol，81％产率)，为黄色油状物。LC-MS(m/z):430.3[M+H]⁺.

步骤4：3-(1-(苄氧基)-2-甲基丙烷-2-基)-7-甲氧基-6-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢异喹啉[4.1d]

向200mL圆底烧瓶中加入4.1c(4.71g，10.96mmol)并用氮气吹扫。加入乙腈(体积:43.8ml)，将烧瓶冷却至0-5℃，逐滴加入POCl₃(1.532ml,16.44mmol)。将烧瓶配备干式冷凝器，将混合物加热至70℃保持1小时。将混合物冷却至室温并在旋转蒸发仪上除去挥发物。将得到的油状物用EtOAc和水稀释，然后用饱和NH₄OH水溶液碱化直至水层达到pH 11。分层，并将水层用EtOAc萃取两次。合并有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到6g硅藻土上，并在40g SiO₂Combiflash柱(0->60％丙酮/庚烷)上纯化，得到4.1d(3.8g，84％产率)，为油。LC-MS(m/z):412.5[M+H]⁺.

步骤5：6-(1-(苄氧基)-2-甲基丙烷-2-基)-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯[4.1e]

在20毫升微波小瓶中向4.1d(3.5g,8.50mmol)的EtOH(体积:8.50ml,比例:1.000)溶液中加入(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(5.92ml,34.0mmol)。然后将混合物密封并用氮气冲洗。小瓶在110℃加热18小时。真空下将反应混合物浓缩至干。向剩余物中加入DME(体积:8.50ml,比例:1.000)和四氯苯醌(2.509g,10.21mmol)。小瓶密封并加热至100℃保持1小时。除去溶剂，将残余物加载到12g硅藻土上，并通过硅胶柱色谱法(IPA/EtOAc0->70％)纯化，得到4.1e(3.5g，75％)，为透明油状物。LC-MS(m/z):550.5[M+H]⁺.

步骤6：6-(1-羟基-2-甲基丙烷-2-基)-10-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-甲酸乙酯[4.1f]

4.1e(600mg,1.092mmol)和10％Pd/C(349mg,0.327mmol)的EtOH(体积:10mL)溶液的混合物用H₂吹扫并搅拌4小时。过滤后，将滤液浓缩至干，得到粗物质，将其通过硅胶色谱法(0-50％MeOH/EtOAc)纯化，得到4.1f(353mg，0.768mmol，70.4％产率)，为油状物。LC-MS(m/z):460.3[M+H]⁺.

步骤7：(3aR*,12bR*)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[4.1g]

向4.1f(311mg,0.677mmol)的乙腈(9mL)溶液中加入CuSO₄(108mg,0.677mmol)和K₂S₂O₈(366mg,1.354mmol)的水溶液(体积:1.9mL)。将所得混合物回流搅拌1小时。向混合物中加入100mL乙酸乙酯，用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩有机相，残余物不经进一步纯化用于下一步。将粗残余物用2mL AcOH/0.1mL H₂SO₄的混合物处理。在室温下搅拌20分钟后，向混合物中加入100ml DCM，用饱和NaHCO₃洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩有机相，通过硅胶色谱法(0-70％IPA/EA)纯化残余物，得到产物4.1g(180mg,60.4％)。

步骤8：(3aR,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[4.1]

将LiOH(3.28ml,6.56mmol)的水溶液加入到4.1g(1.2g,2.62mmol)的THF(8.74ml)溶液中，并将混合物搅拌30分钟。然后通过加入4.0N HCl酸化溶液，用水稀释，并用DCM萃取三次。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过手性色谱法(AD柱，SFC 5mL/分钟，CO₂/IPA＝70/30)纯化该物质,并被认定为4.1(1.36分钟)和4.2(1.86分钟)。从MeCN/H₂O冷冻干燥后，4.1(348mg,0.802mmol,30.6％产率)是蓬松的固体。LC-MS(m/z):430.4[M+H]⁺.¹HNMR(500MHz,DMSO-d6):8.60(s,1H),7.66(s,1H),7.56(s,1H),7.06(s,1H),5.54(d,J＝8.8Hz,1H),4.96(d,J＝8.5Hz,1H),4.11(m,2H),3.91(s,3H),3.70(d,J＝8.8Hz,1H),3.48(t,J＝6.4Hz,2H),3.37(d,J＝9.0Hz,1H),3.25(s,3H),1.99(quint,J＝6.6Hz,2H),1.25(s,3H),0.46(s,3H).

实施例5：合成10-氯-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[5.1]和[5.2]

步骤1：4-溴-1-氯-2-(3-甲氧基丙氧基)苯[5a]

室温下，向5-溴-2-氯苯酚(15g,72.3mmol)和1-溴-3-甲氧基丙烷(9.7ml,87mmol)的DMF(40ml)溶液中加入K₂CO₃(20g,145mmol),将所得混合物在50℃下搅拌16小时。然后过滤混合物，浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，EtOAc/庚烷0至30％，得到产物(18.4g，91％收率)。¹H NMR(400MHz,乙腈-d3):7.38-7.20(m,2H),7.10(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.13(t,J＝6.3Hz,2H),3.54(t,J＝6.2Hz,2H),3.31(s,3H),2.09-1.98(m,2H).

步骤2：5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮[5b]

在氮气氛下，Pd(OAc)₂(60mg,0.268mmol)、叔丁醇钠(3.35g,34.9mmol)、二环己基(2'-甲基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(230mg)、2,2-二甲基环戊酮(4.04ml,32.2mmol)和4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(7.5g,26.8mmol)的甲苯(30.0mL)溶液的混合物在密闭小瓶中50℃加热6小时。混合物用EtOAc稀释并过滤。浓缩滤液，剩余的油状物通过硅胶柱色谱法纯化，EtOAc/庚烷5至50％，得到产物(3g，36％收率)。LC-MS(m/z):311.2[M+H]⁺.

步骤3：5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺[5c]

向5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮(3g,9.65mmol)的MeOH(30mL)溶液混合物中加入乙酸铵盐(14.8g,192mmol)和氰基硼氢化钠(6.06g,97mmol)。将混合物在70℃下搅拌16小时，然后减压浓缩。将剩余物质用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。粗物质不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS(m/z):312.0[M+H]⁺.

步骤4：N-(5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2二甲基环戊基)甲酰胺[5d]

向5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺(3g,9.65mmol)的二氧六环(25ml)溶液混合物中加入甲酸(1.48mL,38.6mmol)。混合物在100℃搅拌6小时。浓缩混合物，得到粗产物，其不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):340.2[M+H]⁺.

步骤5：7-氯-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c]异喹啉[rac-5e-1和rac-5e-2]

向N-(5-(4-氯-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊基)甲酰胺(3.28g,9.65mmol)的乙腈(17ml)溶液混合物中加入POCl₃(1.35ml,14.5mmol)。混合物在85℃下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶解在EtOAc中并通过加入氢氧化铵溶液碱化。分离各相，有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。剩余物质通过硅胶色谱法纯化，丙酮/庚烷5至50％，得到产物rac-5e-1和rac-5e-2。

低极性产物:rac-5e-1反式异构体(590mg,产率19％)。LCMS(m/z):322.3[M+H]⁺.

更极性的产物：rac-5e-2顺式异构体(470mg,产率15％).LCMS(m/z):322.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.15(s,1H),7.25(s,2H),6.69(s,1H),4.14(s,3H),3.78(d,J＝10.1Hz,1H),3.60(s,3H),3.43-3.32(m,4H),3.26(q,J＝9.5,9.1Hz,2H),2.47-2.19(m,3H),2.16-2.02(m,4H),1.66(d,J＝10.1Hz,4H),1.46(t,J＝8.6Hz,3H),1.23(s,4H),1.16-1.00(m,3H),0.88(s,4H)

rac-5e-1和rac-5e-2的相对构型通过奥氏核效应(nOe)实验确认。

步骤6：10-氯-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,8,8a,12b-八氢环戊[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[rac-5f]

向7-氯-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c]异喹啉(顺式异构体,外消旋-5e-2)(470mg,1.46mmol)的EtOH(5ml)溶液混合物中加入(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(816mg,4.38mmol)。混合物在110℃搅拌16小时。冷却后，浓缩混合物，粗产物不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):462.0[M+H]⁺.

步骤7：(3aS,12bR)-10-氯-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[5g-1]和[5g-2]

向rac-5f(673.7mg,1.461mmol)的DME(3.5ml)溶液混合物中加入四氯苯醌(359.6mg,1.461mmol)，并将混合物在110℃下搅拌2小时。冷却至室温后，浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱法，MeOH/DCM 0至6％纯化残余物，得到产物(180mg)。LCMS(m/z):460.0[M+H]⁺.通过手性SFC(AD柱，流速100ml/min，CO₂/MeOH＝75/25)分离该产物，得到两种对映异构体：5g-1(tR 3.55分钟,70mg,产率11％)和5g-2(tR 4.91分钟,70mg,产率11％)。

步骤8：(3aS,12bR)-10-氯-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[5.1]

向5g-1(70mg,0.152mmol)的EtOH(1ml)溶液混合物中加入NaOH(5M,0.152ml,0.761mmol)。在室温下搅拌2小时后，浓缩混合物，然后通过加入3.0N HCl水溶液酸化。向混合物加入EtOAc。将有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法，在DCM中的MeOH 0至5％纯化粗残余物，得到产物(50mg，产率75％)。LCMS(m/z):432.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,乙腈-d3):8.40(s,1H),8.01(s,1H),7.22(s,1H),7.09(s,1H),4.39(d,J＝8.6Hz,1H),4.24(ddt,J＝15.9,9.6,4.8Hz,2H),4.08(q,J＝7.1Hz,4H),3.83(t,J＝6.8Hz,1H),3.57(t,J＝6.1Hz,2H),3.32(s,3H),2.48-2.24(m,3H),2.15(s,2H),2.07(p,J＝6.2Hz,3H),1.66(ddd,J＝13.9,8.1,6.0Hz,1H),1.56-1.40(m,1H),1.28-1.16(m,8H),0.47(s,3H).

步骤9：(3aR,12bS)-10-氯-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[5.2]

向5g-2(70mg,0.152mmol)的EtOH(1ml)溶液混合物中加入NaOH(5M,0.152ml,0.761mmol)。在室温下搅拌2小时后，浓缩混合物，然后通过加入3.0N HCl水溶液酸化。向混合物加入EtOAc。将有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法，在DCM中的MeOH 0至5％纯化粗残余物，得到产物(59mg，产率79％)。LCMS(m/z):432.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,乙腈-d3):8.40(s,1H),8.01(s,1H),7.22(s,1H),7.09(s,1H),4.39(d,J＝8.6Hz,1H),4.24(ddt,J＝15.9,9.6,4.8Hz,2H),4.08(q,J＝7.1Hz,4H),3.83(t,J＝6.8Hz,1H),3.57(t,J＝6.1Hz,2H),3.32(s,3H),2.48-2.24(m,3H),2.15(s,2H),2.07(p,J＝6.2Hz,3H),1.66(ddd,J＝13.9,8.1,6.0Hz,1H),1.56-1.40(m,1H),1.28-1.16(m,8H),0.47(s,3H).

实施例6：10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[6.1和6.2]

步骤1：2-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)环戊烷-1-酮.[6a]

在氮气氛下，室温向4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(5g,18.24mmol)的1,4-二氧六环(100.0mL)溶液中加入NaOAc(1.49g 18.24mmol)、环戊酮(4.59g,54.74mmol)、四氢吡咯(0.259g,3.64mmol)、P(O-Tol)₃(0.222g,0.72mmol)和1,1,3,3-四甲基丁基胺(0.471g,3.64mmol)。用氮气吹扫反应混合物。向上述反应混合物中加入Pd(OAc)₂(0.0817g,0.364mmol)，再次用氮气吹扫混合物，然后在110℃下加热15小时。在室温下冷却后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，将床用乙酸乙酯进一步洗涤。滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/己烷，20-30％)纯化残余物，得到产物。LCMS(m/z):279.35[M+H]⁺.

步骤2：1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-胺.[6b]

室温下将NH₄OAc(8.73g,113mmol)和NaBH₃CN(0.949g,15.1mmol)中加入6a(2.1g,7.55mmol)的MeOH(15.1mL)溶液，并将得到的混合物在室温下搅拌18小时。然后通过加入20％NaOH水溶液淬灭反应，并在室温下搅拌20分钟。反应混合物用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到产物6b(2.1g粗产品)。LCMS(m/z):281.2[M+H]⁺

步骤3：N-(1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-基)甲酰胺[6c]

在0℃下向6b(2.0g,7.16mmol)的DMF(11.9mL)溶液中加入EDC.HCl(2.73g,14.3mmol)、DIPEA(2.77g,21.5mmol),然后加入甲酸(1.31g,28.6mmol)。在室温下搅拌1小时后，将冷水加入上述反应混合物中，并将混合物用EtOAc萃取。有机层用10％NaHCO₃水溶液、10％HCl水溶液、水和盐水洗涤。将分离的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到产物6c(1.4g)。粗物质不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS(m/z):308.1[M+H]⁺.

步骤4：7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c]异喹啉.[6d-1]和[6d-2]

在0℃下，将POCl₃(0.778g,5.07mmol)加入6c(1.30g,4.23mmol)的CH₃CN(21.15mL)溶液中，并将反应混合物在80℃下加热3小时。真空浓缩反应混合物，将残余物溶于乙酸乙酯中。在搅拌下加入氨溶液(27％水溶液)直至pH＝11。然后将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的乙酸乙酯层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到两种异构体6d-1(0.425g,极性较小的产物)和6d-2(0.3g,极性更大的异构体)。

6d-1:LCMS(m/z):290.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):8.23(d,J＝3.1Hz,1H),6.92(s,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,1H),4.19(t,J＝6.5Hz,2H),3.90(s,3H),3.60(t,J＝6.0Hz,3H),3.39(d,J＝9.1Hz,4H),3.21–3.15(m,1H),2.60–2.51(m,1H),2.30–2.11(m,5H),1.98–1.90(m,2H),1.82(dt,J＝19.6,11.4Hz,2H).

6d-2:LCMS(m/z):290.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):8.16(s,1H),6.84(s,1H),6.75(s,1H),4.18(t,J＝6.4Hz,2H),3.90(s,3H),3.60(t,J＝6.0Hz,2H),3.38(s,3H),2.91(dd,J＝17.4,8.6Hz,1H),2.34(dd,J＝14.8,7.0Hz,1H),2.20–2.10(m,3H),2.08–1.95(m,3H),1.67–1.55(m,3H),1.60–1.44(m,2H),0.97–0.82(m,2H).

步骤5：10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[6e-1]

将6d-1(0.425g,1.45mmol)和(E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(0.810g,4.35mmol)的EtOH(9ml)溶液在110℃加热18小时。然后将混合物真空浓缩，将残余物溶于DME(20.0mL)中。加入四氯苯醌(0.426g,1.73mmol)，反应混合物加热回流2小时。真空除去挥发性溶剂后，加入***。过滤收集沉淀物，得到产物。LCMS(m/z):428.3[M+H]⁺

步骤6：10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊二烯[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[6.1]和[6.2]

室温下，向6e-1(0.075g,0.175mmol)的MeOH(6.0mL)溶液中加入LiOH.2H₂O(0.014g,0.35mmol)，然后加入水(2.0mL)。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物真空浓缩。将残余物溶于冷水中，并用稀HCl酸化至pH4-5。过滤得到的固体，用冷水和***洗涤。将固体在真空下充分干燥，得到灰白色固体，为所需产物6.1(0.029g,产率41％)。LCMS(m/z):[M+H]⁺400.0.¹H NMR(400MHz,DMSO):16.83(s,1H),8.80(s,1H),7.54(d,J＝3.3Hz,2H),7.07(s,1H),5.01–4.74(m,1H),4.29–4.00(m,2H),3.89(s,3H),3.57(s,1H),3.48(t,J＝6.2Hz,2H),3.34(s,3H),2.37(s,1H),2.23(d,J＝8.5Hz,1H),2.08(d,J＝6.6Hz,1H),2.01–1.90(m,2H),1.64(s,1H),1.49(s,2H).

按照合成6.1所述的步骤5-6，由化合物6d-2合成化合物6.2。LCMS(m/z):[M+H]⁺400.0.¹H NMR(400MHz,DMSO):16.77(s,1H),8.38(s,1H),7.52(d,J＝20.7Hz,2H),6.85(s,1H),4.13(t,J＝6.4Hz,2H),3.89(s,3H),3.48(t,J＝6.2Hz,2H),3.26(s,3H),3.09(dd,J＝19.7,12.1Hz,1H),2.38(s,1H),2.10–1.92(m,5H),1.70(s,1H).

注：异构体6.1和6.2被分离并分别测试，但异构体的立体化学从其nmr数据中不明显。

实施例7：(3aR,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[7.1]

步骤1：4-羟基-1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3,3-二甲基丁-2-酮[7.1a]

4.1a(8.8g,21.97mmol)和10％Pd/C(2.1g,1.973mmol)MeOH(110ml)溶液的混合物用真空和H₂吹扫，并搅拌2天。用真空吹扫气氛，通过硅藻土过滤混合物并用MeOH洗涤，浓缩得到灰色油状物，将其溶于EtOAc并通过小的SiO₂垫，浓缩得到7.1a(6.66g，21.46mmol，98％收率)，为黄色油状物。LC-MS(m/z):311.3[M+H]⁺.¹H NMR(500MHz,CDCl₃):6.82(d,J＝8.24Hz,1H),6.73(s,1H),6.70(d,J＝8.10Hz,1H),4.10(t,J＝6.41Hz,2H),3.84(s,3H),3.74(s,2H),3.55-3.60(m,4H),3.35(s,3H),2.36(br,1H),2.10(quin,J＝6.33Hz,2H),1.23(s,6H).

步骤2：2-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-4,4-二甲基二氢呋喃-3(2H)-酮[7.1b]

将烘箱干燥的2颈250mL圆底烧瓶安装恒压滴液漏斗，并装入7.1a(6.63g,21.36mmol)和50mL DCM。将烧瓶冷却至0℃。向滴液漏斗中加入在485mL DCM中的Br₂(1.045ml，20.29mmol)，其在约25分钟内滴加。加完后立即将混合物倒入200mL饱和Na₂S₂O₃水溶液中，并搅拌20分钟。混合物用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到13g硅藻土上。将粗物质在80g RediSep SiO 2柱(0-60％EtOAc的庚烷溶液)上纯化，得到7.1b(3.89g，12.61mmol，59.1％产率)，为来自第一主要UV-活性峰的黄色油状物。LC-MS(m/z):309.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃):6.97(s,1H),6.96(d,J＝7.96Hz,1H),6.87(br d,J＝8.12Hz,1H),4.76(s,1H),4.08-4.17(m,3H),3.96(d,J＝9.2Hz,1H),3.85(s,3H),3.57(t,J＝6.13Hz,2H),3.35(s,3H),2.10(quint,J＝6.3Hz,2H),1.20(s,3H),1.16(s,3H).

步骤3：N-(2-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-4,4-二甲基四氢呋喃-3-基)甲酰胺[7.1c]

向250mL圆底烧瓶中加入7.1b(3.7g,12.00mmol)和MeOH(30.0ml)。加入NH₄OAc(18.50g,240mmol),然后是NaBH₃CN(2.262g,36.0mmol)。将烧瓶配备冷凝器并回流过夜。在20小时时，将混合物冷却至室温并加入30mL20wt％NaOH(aq)。搅拌1小时后，用水略微稀释，用2-MeTHF萃取三次。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得到非均相混合物。将混合物溶于DCM(30.0ml)中。加入NEt₃(10.03ml,71.9mmol)，然后加入甲酸(1.840ml,48.0mmol)和EDC(9.19g,48.0mmol)。在1小时完成后，将混合物倒入20mL水、60mL EtOAc中并分层。将有机层用NaHSO₄洗涤两次，用盐水洗涤一次，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到硅藻土上。将粗物质在40g RediSep SiO2柱(0->70％丙酮的庚烷溶液)上纯化，得到7.1c(2.58g，7.65mmol，63.8％产率)，为黄色油状物。LC-MS(m/z):338.3[M+H]⁺.

步骤4：外消旋-(3aR,9bR)-7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢呋喃并[3,2-c]异喹啉[7.1d]

向200mL圆底烧瓶中加入7.1c(2.6g，7.71mmol)并用氮气吹扫。加入MeCN(30.8ml),然后是POCl₃(1.077ml,11.56mmol)。将烧瓶配备冷凝器并加热至70℃。在30分钟时，将混合物冷却至室温并减压除去挥发物。将该油状物用EtOAc和水稀释，并用饱和NH₄OH水溶液进行碱化至pH 11。分层，水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到6g硅藻土上。将粗物质在40g RediSep SiO 2柱(0->70％丙酮的庚烷溶液)中纯化。分离出最极性的UV活性峰，为7.1d(900mg，2.82mmol，36.6％产率)，通过2D NMR显示其为顺式异构体。LC-MS(m/z):320.3[M+H]⁺.¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.27(s,1H),6.98(s,1H),6.86(s,1H),4.97(d,J＝7.33Hz,1H),4.14-4.23(m,2H),3.87-3.94(m,4H),3.48-3.60(m,3H),3.39(d,J＝7.80Hz,1H),3.35(s,3H),2.12(quin,J＝6.33Hz,2H),1.37(s,3H),1.14(s,3H).

步骤5：外消旋-(3aR,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[7.1e]

在50℃下，向ZnI₂(200mg,0.626mmol)和7.1d(200mg,0.626mmol)在无水MeCN(2mL)中的悬液中滴加3.1a(553mg,1.879mmol)的无水DMF(3mL)溶液，并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入10％HCl中并用DCM萃取。用盐水洗涤有机层并用MgSO₄干燥。过滤后，将有机层浓缩到硅藻土上，并在4g RediSep SiO₂柱(0->60IPA的EtOAc溶液)上纯化，得到7.1e(90mg，0.184mmol，30.6％产率)，为棕色固体。LC-MS(m/z):476.3[M+H]⁺.

步骤6：(3aR,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-2H-呋喃并[3,2-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[7.1]

7.1g(90mg,0.189mmol)悬于THF(1.5ml)中。加入LiOH(500μl,1.000mmol)水溶液，并将混合物搅拌过夜。用4N HCl将pH调至1。混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得到淡褐色固体。通过手性SFC(AD柱，流速100ml/分钟，CO₂/MeOH＝80/20,250bar)纯化该物质，得到两种对映异构体7.1(tR 4.56,17.7mg,21％)和7.2(tR2.89分钟,17.3mg,21％)。化合物7.1:LC-MS(m/z):448.3[M+H]⁺.¹H NMR(500MHz,CDCl₃):8.36(s,1H),7.72(s,1H),7.21(s,1H),5.54(d,J＝7.6Hz,1H)4.42(d,J＝6.4Hz,1H),4.16-4.31(m,2H)3.92(s,3H),3.78(d,J＝8.5Hz,1H),3.52-3.69(m,2H),3.42(br d,J＝9.22Hz,1H),3.37(s,3H),2.10-2.22(m,2H),1.40(s,3H)0.58(s,3H)

实施例8：(3aS,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[8.1]

步骤1：3-羟基-1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-3-甲基丁-2-酮[8.1a]

向200mL圆底烧瓶中加入4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(13.0g,47.2mmol)、NaOt-Bu(13.62g,142mmol)、xantphos(0.820g,1.417mmol)、Pd₂dba₃(0.649g,0.709mmol)和THF(体积:140mL)。向混合物中加入3-羟基-3-甲基丁-2-酮(9.65g,94mmol)。将烧瓶配备回流冷凝器，并将混合物在铝芯片浴中加热至65℃，保持3.5小时。冷却后，将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc和水洗涤。将水层的pH调至2，分层，水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到6g硅藻土上。通过硅胶柱色谱法纯化物质，EtOAc/庚烷0至70％，得到产物(5.7g，19.23mmol,40.7％收率)。LC-MS(m/z):297.3[M+H]⁺.

步骤2：4-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基呋喃-3(2H)-酮[8.1b]

将8.1a(1.43g,4.83mmol)溶于甲苯(19.30ml)中。加入Bredereck试剂(1.993ml，8.69mmol)，并将烧瓶装上回流冷凝器并加热至100℃保持1小时。冷却至室温后，加入3g硅藻土并除去挥发物。通过硅胶柱色谱法用0至50％EtOAc/庚烷纯化该物质，得到产物8.1b(1.26g，85％产率)，为黄色油状物。LC-MS(m/z):307.2[M+H]⁺.¹H NMR(500MHz,氯仿-d):8.39(s,1H),7.31(d,J＝1.89Hz,1H),7.22(dd,J＝8.35,2.05Hz,1H),6.88(d,J＝8.20Hz,1H),4.16(s,2H),3.87(s,3H),3.58(s,2H),3.36(s,3H),2.13(quin,J＝6.38Hz,2H),1.46(s,6H).

步骤3：4-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基二氢呋喃-3(2H)-酮[8.1c]

将8.1b(1.26g,4.11mmol)溶于EtOH(10.28ml)和THF(10.28ml)中。将混合物冷却至0℃并加入NaBH₄(0.202g,5.35mmol)。2小时后，反应用饱和NH₄Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩得到油状物。将油状物加入100mL圆底烧瓶中并溶于DCM(32mL)中。将混合物冷却至0℃并一次性加入DMP(4104mg,9.68mmol)。2小时后，将反应混合物用DCM和饱和NaHCO₃水溶液通过硅藻土过滤。分层。将水层用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物，将其通过硅胶柱色谱法用EtOAc/庚烷0至70％纯化，得到产物8.1c(841mg，42.3％产率)。LC-MS(m/z):309.2[M+H]⁺.

步骤4：N-(4-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基四氢呋喃-3-基)甲酰胺[8.1d]

在20mL小瓶中装入8.1c(840mg,2.72mmol)和甲醇(8ml)。加入乙酸铵(3.15g,40.9mmol)，搅拌混合物直至均匀。一次性加入氰基硼氢化钠(0.342g,5.45mmol)。将黄色溶液在60℃下搅拌过夜。在20小时时，将混合物冷却至室温并用6mL 5M NaOH(20wt％)淬灭。1小时后，将混合物用EtOAc萃取两次，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物。将油状物溶于8mL小瓶中的甲酸(5.0ml,130mmol)和二氧六环(7ml)。将小瓶密封并加热至98℃保持18小时。在减压(50℃，18毫巴)下除去挥发物，并将所得油状物与30mL甲苯共沸两次，然后用MeOH和DCM将其最终浓缩到硅藻土上。通过硅胶柱色谱法用0->50％丙酮/庚烷纯化粗物质，得到产物8.1d(230mg，25.1％产率)，为白色固体。LC-MS(m/z):338.1[M+H]⁺.

步骤5：7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-1,3,3a,9b-四氢呋喃并[3,4-c]异喹啉[8.1e]

向50mL圆底烧瓶中加入8.1d(230mg,0.682mmol)并真空吹扫，用氮气回填。加入MeCN(3.41ml),然后是POCl₃(0.095ml,1.022mmol)。将烧瓶配备冷凝器并加热至70℃。在2小时时，冷却至室温并在真空下除去挥发物。将剩余的油状物用40mL EtOAc和10mL水稀释，然后用氢氧化铵溶液碱化至pH 11。分层，水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩到硅藻土上。通过硅胶柱色谱法用0->50％丙酮/庚烷纯化粗物质，得到产物8.1e(202mg，93％产率)。LC-MS(m/z):320.2[M+H]⁺.

步骤6：(3aS,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-甲酸乙酯[8.1f]

在4mL小瓶中装入8.1e(200mg,0.626mmol)的乙醇(1.5ml)溶液。加入(E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(408mg,2.192mmol)。将小瓶密封，用N₂吹扫，并加热至85℃过夜。另外加入400mg(E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯。在5小时后，在真空下除去挥发物。将油状物溶于DME(1.3mL)中并加入对氯苯胺(185mg)。混合物在100℃下加热30分钟。在室温下冷却后，在旋转蒸发仪上除去溶剂，加入5mL***并过滤固体。将黑色固体溶于MeOH中并加载到硅藻土上，然后通过硅胶柱色谱法IPA/EtOAc 0至70纯化，得到产物。通过手性HPLC(AD柱，流速1mL/分钟，庚烷/IPA＝60/40)分离立体异构体。分离峰3(tR 6.76分钟)为8.1f(13.5mg,0.030mmol,产率4.71％)。LC-MS(m/z):458.4[M+H]⁺.

步骤7：(3aS,12bR)-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-3,3a,7,12b-四氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[8.1]

向8.1f(12.5mg,0.027mmol)的THF(1mL)溶液中加入NaOH(0.022mL,0.109mmol)并搅拌过夜。然后通过加入4.0N HCl水溶液酸化溶液，并用EtOAc萃取。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥并浓缩，得到黄色油状物，将其通过HPLC(Kinetex柱，0.1％TFA的H₂O/MeCN溶液，1.2mL/分钟)纯化，得到8.1(7.8mg，52％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):8.62(s,1H),7.64(s,1H),7.57(s,1H),7.11(s,1H),5.04(br d,J＝8.75Hz,1H),4.40(br dd,J＝9.81,1.30Hz,1H),4.17-4.26(m,3H),4.11(dt,J＝9.75,6.47Hz,2H),3.94-4.00(m,1H),3.91(s,3H),3.50(br t,J＝6.27Hz,2H),3.27(s,3H),2.00(dt,J＝12.65,6.21Hz,2H),1.39(s,3H),0.64(s,3H).LC-MS(m/z):430.1[M+H]⁺.

实施例9：合成11-甲氧基-12-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-8-氧代-2,3,4,4a,8,13b-六氢-1H-吡啶并[1,2-f]菲啶-7-羧酸[9.1]和[9.2]

步骤1：6-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮[9.1a]

在氮气氛下，将Pd(OAc)₂(14mg,0.064mmol)、叔丁醇钠(0.795g,8.27mmol)、二环己基(2'-甲基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(58mg)、2,2-二甲基环己酮(1.056ml,7.63mmol)和4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(1.75g,6.36mmol)的甲苯(6.0mL)溶液的混合物在密闭小瓶中50℃加热18小时。混合物用EtOAc稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机层分层，用Na₂SO₄干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法用EtOAc/庚烷5至50％纯化剩余的油状物，得到产物(1g，49.1％产率)。LC-MS(m/z):321.2[M+H]⁺.

步骤2：6-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环己-1-胺[9.1b]

向5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环己酮(500mg,1.56mmol)的MeOH(5mL)溶液混合物中加入乙酸铵盐(2.4g,31.2mmol)和氰基硼氢化钠(981mg,15.4mmol)。将混合物在70℃下搅拌8小时，然后减压浓缩。将剩余物质用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。粗物质不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS(m/z):322.0[M+H]⁺.

步骤3：N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2二甲基环己基)甲酰胺[9.1c]

向5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环己胺(500mg,1.56mmol)的二氧六环(5ml)溶液混合物中加入甲酸(0.286mL,6.22mmol)。混合物在100℃搅拌6小时。浓缩混合物，得到粗产物，其不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):350.2[M+H]⁺.

步骤4：8-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-1,2,3,4,4a,10b-六氢菲啶[9.1d]

向N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环己基)甲酰胺(543mg,1.54mmol)的乙腈(3ml)溶液混合物中加入POCl₃(217μl,2.33mmol)。混合物在85℃下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶解在EtOAc中并通过氢氧化铵溶液碱化。分离各相，有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并浓缩。剩余物质通过硅胶色谱法用丙酮/庚烷5至50％纯化，得到标题产物(320mg,产率62％)。LCMS(m/z):332.3[M+H]⁺.

步骤5：(11-甲氧基-12-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-8-氧代-2,3,4,4a,8,9,9a,13b-八氢-1H-吡啶并[1,2-f]菲啶-7-甲酸乙酯[9.1e]

向8-甲氧基-9-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-1,2,3,4,4a,10b-六氢菲啶(140mg,0.422mmol)的EtOH(1.6ml)溶液混合物中加入(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(236mg,1.267mmol)。混合物在110℃搅拌16小时。冷却后，浓缩混合物，粗产物不经进一步纯化用于下一步。LCMS(m/z):472.0[M+H]⁺.

步骤6：11-甲氧基-12-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-8-氧代-2,3,4,4a,8,13b-六氢-1H-吡啶并[1,2-f]菲啶-7-甲酸乙酯[9.1f]

向9.1e(199.7mg,0.422mmol)的DME(1.0ml)溶液混合物中加入四氯苯醌(114.6mg,0.464mmol)。混合物在110℃搅拌2小时。冷却至室温后，过滤混合物，用冷DME洗涤固体。干燥后，获得所需产物(100mg，50.5％收率)为浅黄色固体。LCMS(m/z):470.0[M+H]⁺.

步骤7：11-甲氧基-12-(3-甲氧基丙氧基)-4,4-二甲基-8-氧代-2,3,4,4a,8,13b-六氢-1H-吡啶并[1,2-f]菲啶-7-羧酸[9.1]和[9.2]

向9.1f(50mg,0.106mmol)在THF(0.6ml)、MeOH(0.6ml)和水(0.6ml)的混合物中加入LiOH(7.7mg,0.319mmol)。在室温下搅拌2小时后，浓缩混合物，然后通过加入3.0N HCl水溶液酸化。向得到的混合物中加入EtOAc。将有机层用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。通过反相HPLC纯化粗残余物，得到产物(10mg，21％收率)。LCMS(m/z):442.2[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,乙腈-d3):9.15(s,1H),7.11(s,1H),6.98(s,1H),4.15(dt,J＝9.3,4.7Hz,2H),3.91(s,3H),3.71(d,J＝12.4Hz,1H),3.53(t,J＝6.2Hz,2H),3.32(s,3H),2.98(td,J＝12.2,5.2Hz,1H),2.74-2.54(m,1H),2.12-2.00(m,2H),1.96(dt,J＝4.5,2.4Hz,5H),1.46(d,J＝29.8Hz,9H).

通过奥氏核效应(NOE)实验确定产物的相对构型如下所示，但每种对映异构体的绝对立体化学尚未证实。

通过手性SFC(OD柱，流速100ml/min，CO₂/MeOH＝70/30)分离该外消旋物质，得到两种对映异构体：9.1(tR 3.93分钟)和9.2(tR 6.14分钟)。

可以使用本领域已知的起始材料通过类似方法制备以下化合物：

生物学实施例

HBV细胞系

HepG2-Clone42是一种Tet诱导型HBV表达细胞系，具有稳定整合的HBV ayw毒株的1.3mer拷贝，是基于Tet诱导型HepAD38细胞系略微修饰产生的。Ladner SK,等,Antimicrobial Agents and Chemotherapy.41(8):1715-1720(1997).HepG2-Clone42细胞在DMEM/F-12+Glutamax^TM(Life Technologies,卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)中培养,补充有10％胎牛血清(Life Technologies),最终浓度为0.5mg/mL的G-418(Corning，马纳萨斯，弗吉尼亚州，美国)和5μg/mL多西环素(Sigma，圣路易斯，密苏里州，美国)，并在37℃下保持在5％CO₂中。

HBsAg检测

将HepG2-Clone42细胞以6.0x 10⁴个细胞/孔的浓度接种到黑色透明底96孔板中。接种后24小时，用200μl/孔含有5倍系列稀释的化合物的DMSO培养基处理细胞。单独的DMSO用作无药物对照。所有孔中的最终DMSO浓度为0.5％。

使用HBsAg ELISA试剂盒(Alpha Diagnostic International，圣安东尼奥，德克萨斯州，美国，目录号4110)测定分泌的HBV sAg的水平(半定量)。按照制造商手册所述进行HBSAg ELISA测定。

步骤1：将100μL化合物或DMSO处理的样品各自吸取到HBsAg ELISA板中。密封板并在室温下孵育60分钟。

步骤2：吸出样品并用洗涤缓冲液洗涤三次。每孔加入100μ抗体-HRP缀合物。在室温下孵育30分钟。

步骤3：吸出样品并用洗涤缓冲液洗涤三次。向所有孔中加入100μL TMB底物，在室温下孵育15分钟。

步骤4：每孔加入100μL终止液。测量ELISA板在450nm处的吸光度。

剂量反应曲线

产生剂量-反应曲线并将EC₅₀值定义为与DMSO对照相比HBsAg分泌减少50％的化合物浓度。

EC₅₀值如下确定：

1.确定HBsAg分泌抑制的百分比。使用以下等式计算HBsAg分泌抑制的抑制百分比：

100x(X_C–M_B)/(M_D–M_B)

其中X_C是化合物处理过的孔的吸光度信号；M_B是柱12的平均吸光度信号(背景信号)(无细胞+HBsAg ELISA样品缓冲液)，M_D是来自DMSO处理的孔的平均吸光度信号。然后使用四参数曲线逻辑方程通过非线性回归计算EC₅₀值。

使用的曲线拟合模型是XLFit剂量反应单位点模型204：y＝(A+((B-A)/(1+(10^((C-x)*D)))))其中A是最小y值，B是最大y值，C是logEC50值，D是斜率因子。

高通量溶解度测量

1.将20μl 10mM DMSO原液转移到标记为样品板的96深孔板中，并将5μl转移到标记为化合物标准板的另一个板上。

2.将缓冲板放入Multi-Tainer MT-4容器(FTS***)中。冷冻干燥过夜以除去DMSO。

3.向缓冲板中的干燥化合物加入100μl不含Cl的PBS(pH6.8)并加95μlDMSO至标准板。

4.将缓冲板在水浴中超声处理10分钟。

5.然后将两块板置于VWR轨道振荡器上，在室温下平衡24小时。

6.将缓冲板以4000rpm离心30分钟。

7.将10μl等分的上清液从缓冲板转移至样品板并稀释5倍。

8.将化合物标准品和样品注入UPLC/UV/CLND/MS，以产生多检测器定性和定量分析数据。

9.数据用Xcalibur处理。CLND等摩尔响应用于测量DMSO溶液的化合物浓度。UV270nm或MS相对比率用于溶解度测定。

表1.HBsAg抑制

表2.所选化合物的药代动力学数据。

化合物1.1:

	小鼠<sup>a</sup>	大鼠<sup>b</sup>	犬<sup>c</sup>
				CL(mL/分钟·kg)	24.6	15.3	6.4
Vss(L/kg)	3.6	1.3	1.7
				T<sub>1/2term.</sub>(h)*	1.6	2.4	5.9
AUC(uM·h)iv	1.5	2.5	3.1
				AUC(uM·h)PO	1.7	4.5	5.7
C<sub>max</sub>(uM)PO	0.57	1.72	1.9
				T<sub>max</sub>p.o.(h)	0.5	1.33	0.22
口服BA(％F)	59	97	93

a.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

b.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

c.iv 0.5mg/kg,PO 1.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

化合物3.1:

a.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

b.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

c.iv 0.5mg/kg,PO 1.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(10％)的D5W溶液

化合物4.1:

	小鼠<sup>a</sup>	大鼠<sup>b</sup>	犬<sup>c</sup>
				CL(mL/分钟·kg)	12.7	4.9	2.7
Vss(L/kg)	1.5	0.75	1.7
				T<sub>1/2term.</sub>(h)*	1.8	1.2	12.3
AUC(uM·h)iv	2.9	8.0	6.2
				AUC(uM·h)PO	7.2	10.2	12.8
C<sub>max</sub>(uM)PO	1.9	2.6	3.3
				T<sub>max</sub> p.o.(h)	1.0	2.0	0.8
口服BA(％F)	100	65	94

a.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：含有PEG(20％)和solutol(5％)的D5W溶液

b.iv 1.0mg/kg,PO 2.0mg/kg.配方：75％PEG300和25％D5W

c.iv 0.5mg/kg,PO 1.0mg/kg.配方：D5W中含有20％PEG和10％solutol的溶液

对比数据

下表提供了使用标准溶解度筛选方法的本发明化合物在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中的溶解度的数据。它还提供了所选化合物抑制关键心脏钠离子通道的数据：抑制Nav1.5通常与心脏毒性有关，因此对这种钠通道少有或没有抑制作用的化合物比抑制Nav1.5的化合物更不可能引起副作用，并且预计更适合作为药物来开发。因此，预测实施例4.1的化合物在这方面比参考化合物更安全。

本发明的每种化合物在PBS缓冲液中显示出大于1mM的溶解度。在生物利用度标准方面，具有较高溶解度的化合物实现毒理学终点(在动物中)和口服发育途径(对于人)的风险较低。缺少所要求保护的化合物的稠环的类似结构的化合物(参考来自WO2015/113990的实施例132)的可溶性低约20倍；因此，稠环化合物为制剂和/或开发提供了改进的物理性质。

Claims

1.式(I)的化合物：

其中：

R¹是H、卤素或C₁-C₃烷基；

R²是H、卤素、CN、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤代烷基或C₁-C₃烷氧基；

R⁴选自R¹¹、–OR¹¹、-SR¹¹和–NRR¹¹；

R⁵是H、卤素、CN、C₁-C₃烷基或C₁-C₃卤代烷基；

R⁶是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁷是H、卤素、C₁-C₃烷氧基或C₁-C₆烷基；

R⁸是H或C₁-C₆烷基；

或其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是H。

3.如权利要求1或权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²为H或卤素。

4.如权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³为C₁-C₃烷氧基或卤素。

5.如前述权利要求中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴为-OR¹¹。

6.如前述权利要求中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵是H或卤素。

7.如前述权利要求中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其具有式：

R⁹与R⁷一起形成3-7元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代；或其药学上可接受的盐。

8.如权利要求1-6所述化合物，其具有式：

R⁹与R⁸一起形成3-7元环烷基环或含有N、O或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环可选被至多三个选自R、-OR、-NR₂、卤素、CN、COOR、CONR₂和氧代的基团取代；或其药学上可接受的盐。

9.如前述权利要求中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹¹是C₁-C₄烷基，可选被至多两个选自卤素、CN、-OR、C₁-C₃卤代烷氧基和含有一个或两个选自N、O和S的杂原子作为环成员的4-7元杂环基团的基团取代，所述杂环基团可选被一个或两个选自卤素、氧代、CN、R、-OR和-NR₂的基团取代。

10.如权利要求1-9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹¹选自–CH₂CH₂OMe、-CH₂CH₂CH₂OMe、-CH₂-OEt、-CH₂CH₂-Q和–CH₂CH₂CH₂-Q，其中Q选自

其中Q选自

11.如权利要求1-6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中

12.如权利要求1的化合物，其选自：

和这些化学物的对映异构体；或其药学上可接受的盐。

13.如权利要求1的化合物，其选自：

或其药学上可接受的盐。

14.如权利要求1-11中任一项的化合物，其中R¹为F。

15.一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的载体混合的前述任一权利要求的化合物。

16.一种治疗乙型肝炎感染的方法，包括向患有乙型肝炎感染的患者施用权利要求1-14中任一项的化合物或权利要求15的药物组合物。

17.如权利要求16的方法，其中权利要求1-14中任一项的化合物或权利要求15的药物组合物与另一种治疗剂组合使用，所述治疗剂选自干扰素或聚乙二醇干扰素、HBV聚合酶抑制剂、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装抑制剂、HBV核心调节剂、逆转录酶抑制剂、TLR激动剂或免疫调节剂。

18.一种抑制乙型肝炎病毒复制的方法，包括体外或体内使乙型肝炎病毒与权利要求1-14中任一项的化合物接触。