CN106029672B - 丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂 - Google Patents

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂 Download PDF

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Abstract

具有式I的化合物是ERK激酶的抑制剂，其中R1、X1、X2、X3及X4如本文中所定义。还公开了用于治疗过度增殖性病症的组合物和方法。

Description

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂
相关申请
本申请要求2013年12月6日提交的美国临时申请号61/912,905的优先权权益，其以引用的方式整体并入本文。
发明领域
本发明涉及抑制丝氨酸/苏氨酸激酶并适用于通过抑制通常在癌组织中过度活化或过度表达的信号转导通路治疗过度增殖性和肿瘤疾病的化合物。本发明化合物是ERK(细胞外信号调节激酶)的选择性抑制剂。本发明还涉及用本发明范围内的化合物治疗癌症或过度增殖性疾病的方法。
发明背景
涉及肿瘤生长、进展及转移的过程是通过在癌细胞中被激活的信号通路介导。ERK通路通过传递来自配体结合的细胞表面受体酪氨酸激酶(RTK’s)如erbB家族、PDGF、FGF及VEGF受体酪氨酸激酶的细胞外信号在调节哺乳动物细胞生长中起着重要作用。RTK的激活诱发从Ras激活开始的磷酸化事件的级联。Ras的激活导致Raf(一种丝氨酸-苏氨酸激酶)的募集和激活。激活的Raf接着使MEK1/2磷酸化并将其激活，这随后又使ERK1/2磷酸化并将其激活。当激活时，ERK1/2使包括细胞骨架改变和转录激活在内的众多细胞事件中所涉及的若干下游靶点磷酸化。ERK/MAPK通路是细胞增殖的最重要的通路之一，并且据信ERK/MAPK通路经常在许多肿瘤中被激活。作为ERK1/2上游的Ras基因在包括结肠直肠肿瘤、黑色素瘤、乳腺肿瘤及胰腺肿瘤的若干癌症中突变。在许多人类肿瘤中高Ras活性伴随着升高的ERK活性。另外，BRAF(Raf家族的一种丝氨酸-苏氨酸激酶)的突变与增加的激酶活性有关。已经在黑色素瘤(60％)、甲状腺癌(大于40％)及结肠直肠癌中鉴别到BRAF的突变。这些观察结果表明ERK1/2信号通路是在广谱的人类肿瘤中的抗癌疗法的有吸引力的通路。(M.Hohno和J.Pouyssegur,Prog.in Cell Cycle Res.2003 5:219)
因此，ERK活性(即ERK1和/或ERK2活性)的小分子抑制剂将适用于治疗广谱的癌症，例如像黑色素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌及卵巢癌。本发明提供了这种贡献。
发明详述
在本发明的一方面中，提供一种根据式I的化合物或其药用盐，其中：
X1为N或CH；
X2为NRa、O或S；
X3为(CR4 2)1-3、CH2NRb、C(＝O)、C(＝O)NRb或C(＝O)O，前提条件是：
当X3为CH2NRb时，(I)的三环部分为6,7,8,9-四氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环，
当X3为C(＝O)NRb时，(I)的三环部分为8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮，
当X3为CH2C(＝O)时，(I)的三环部分为8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮，并且
当X3为C(＝O)O时，(I)的三环部分为6H-8-氧杂-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(9H)-酮；
X4为CR2R3或NR3，前提条件是当X4为NR3时，X2为NRa且X3为C(＝O)；
R1为(i)4至7元饱和或部分不饱和的杂环基部分或，(ii)任选取代的5或6元杂芳基部分；
R2选自由以下组成的组：
(a)C1-10烷基，
(b)C1-10烯基，
(c)C1-10卤代烷基，
(d)C3-7环烷基或C3-7环烷基-C1-6烷基，
(e)C3-7卤代环烷基或C3-7卤代环烷基-C1-6烷基，
(f)C1-10羟基烷基或C1-10二羟基烷基，
(g)C1-3烷氧基-C1-6烷基，
(h)C1-3烷硫基-C1-6烷基，
(i)C1-10氰基烷基，
(j)苯基、苯基-C1-3烷基、苯氧基或苄氧基-C1-3烷基，
(k)杂芳基、杂芳基-C1-3烷基或杂芳氧基，其中所述杂芳基部分选自由以下组成的组：吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、吡啶-2(1H)-酮以及1-烷基吡啶-2(1H)-酮并且每个所述杂芳基独立地任选地被一个或多个选自由以下组成的组的基团取代：卤素、羟基、氧化物、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基、C3-6环烷基以及C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选地独立地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素、氧代基、羟基或C1-6烷氧基；以及，
(l)苯硫基或苯硫基-C1-6烷基；
R3和R4在每次出现时独立地为氢或C1-3烷基；
Ra和Rb独立地为氢或C1-3烷基；
其中任何苯基部分任选被一个或多个卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C1-6烷基取代，其中所述C1-6烷基任选地独立地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素、氧代基、羟基或C1-6烷氧基；并且，
其中每个环烷基独立地任选地被1至3个以下基团取代：卤素、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基。
本发明还涉及一种通过向有此需要的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物来治疗过度增殖性病症的方法。式I化合物可单独施用或与至少一种其它抗过度增殖性或化学治疗性化合物共施用。
本发明还涉及一种抑制细胞中的ERK蛋白激酶活性的方法，所述方法包括用有效削弱或消除ERK激酶活性的量的根据式I的化合物处理细胞。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还涉及式I化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗癌症或过度增殖性疾病的药剂中的用途。
本发明还涉及根据式1的化合物，其中所述化合物选自：
4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
3-苄基-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,1,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮；
9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(S)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及药物组合物，其包含根据式1的化合物，其中所述化合物选自：
4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
3-苄基-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,1,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮；
9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(S)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐；以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
发明详述
如本文所用的短语“一个/种(a/an)”是指一个或多个/种那个实体；例如，化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。因而，术语“一个/种”、“一个或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可互换使用。
短语“如上文所定义”是指如发明详述或最宽的权利要求中所提供的各基团的最宽定义。在下文提供的所有其它实施方案中，在每一项实施方案中存在的并且未明确定义的取代基保留在发明详述中提供的最宽定义。
如本说明书中所用，无论是在过渡性短语还是在权利要求主体中所用的术语“包括(comprise(s))”和“包括(comprising)”应被解释为具有开放式含义。也就是说，该术语应当解释为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的上下文中使用时，术语“包括”意指该方法至少包括所述的步骤，但是还可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语“包含”意指该化合物或组合物至少包含所述的特征或组分，但是还可以包含另外的特征或组分。
本文使用术语“独立地”指示变量是在不考虑在同一化合物内具有相同或不同定义的变量的存在或不存在的任何一种情况下应用。因此，在其中R"出现两次并被定义为“独立地碳或氮”的化合物中，两个R"可都为碳，两个R"可都为氮，或者一个R"可为碳且另一个为氮。
当任何变量(例如，R1、R4a、Ar、X1或Het)在描绘或描述本发明中所用或要求保护的化合物的任何部分或式中出现一次以上时，其定义在每次出现时独立于其每次另外出现时的定义。并且，取代基和/或变量的组合只有当这种化合物产生稳定的化合物时才是允许的。
在价键末端处的符号“*”或绘制穿过价键的各自指官能团或其它化学部分与包括其作为一部分的分子的剩余部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4其中
被绘制进入环***(与在不同顶点处所连接的相对)的价键表明该价键可以连接到任何合适的环原子。
如本文所用，术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可以但不必出现，并且描述内容包括一种事件或情况出现的场合以及事件或情况没有出现的场合。例如，“任选取代的”意指任选取代的部分可并入氢或取代基。
术语“约”在本文中用于指代大约、左右、大致或约。当术语“约”与数值范围联合使用时，它通过将边界扩展到所述数值以上和以下来修饰该范围。通常而言，术语“约”在本文中用于以20％的差异在所示数值之上和之下改变数值。
本文所用的对变量数值范围的描述用以表述可以使用等同于该范围内的任意数值的变量实施本发明。因此，对于本质上离散的变量，该变量可以等同于该数值范围内的任何整数值，包括该范围的端值。类似地，对于本质上连续的变量，该变量可以等同于该数值范围内的任何实数值，包括该范围的端值。作为一个实例，被描述成具有0与2之间的值的变量，对于本质上离散的变量，可以是0、1或2，对于本质上连续的变量，则可以是0.0、0.1、0.01、0.001或任何其它实数值。
式I化合物展现互变异构现象。互变异构化合物可以两种或更多种相互可以转变的种类存在。质子移变的互变异构体是由在两个原子之间移动共价键合的氢原子而得到。互变异构体通常以平衡形式存在，并且试图分离单独的互变异构体通常产生化学和物理性质与该化合物的混合物相一致的混合物。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在许多的脂族醛和酮，如乙醛中，酮形式占优势；而在酚中，烯醇形式占优势。常见的质子移变的互变异构体包括酮/烯醇 酰胺/亚胺酸和脒互变异构体。后两个在杂芳基和杂环中特别常见并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。
式I化合物可含有酸性或碱性中心并且合适的盐是由可形成无毒盐的酸或碱形成，这些无毒盐具有类似的抗病毒活性。无机酸的盐的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐。有机酸盐的实例包括乙酸盐、富马酸盐、双羟萘酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、右旋樟脑磺酸、D和L-乳酸盐、D和L-酒石酸盐、乙磺酸盐、甲磺酸盐、丙二酸盐、乳清酸盐、葡庚糖酸盐、甲基硫酸盐、硬脂酸盐、葡糖醛酸盐、2-萘磺酸盐、甲苯磺酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、烟酸盐、羟乙基磺酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、糖酸盐、苯甲酸盐、乙磺酸盐以及双羟萘酸盐。对于合适的盐的综述，参见Berge等人,J.Pharm.Sci.,1977 66:1-19和G.S.Paulekuhn等人J.Med.Chem.2007 50:6665。
在本发明的一个实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文中所定义。在下文提供的所有其它实施方案中，在每一项实施方案中存在的并且未明确定义的取代基保留在发明详述中提供的最宽定义。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为CH2并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为CH2NRb并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)CH2并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)NRb并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为CH2并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为NR3。在一个亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为N。在另一亚实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X1为CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在一个亚实施方案中，X2为NRa，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，其中X2为NRa，X3为CH2NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在以上任一亚实施方案中，X1可为N或CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中R2为任选取代的杂芳基-C1-3烷基且R3为氢。在一个亚实施方案中，X2为NRa，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，其中X2为NRa，X3为CH2NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在以上任一亚实施方案中，X1可为N或CH。
在另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中R2是任选取代的苯氧基或杂芳氧基并且R3是氢。在一个亚实施方案中，X2为NRa，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，其中X2为NRa，X3为CH2NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为NRa，X3为C(＝O)NRb并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为CH2并且X4为CR2R3。在另一亚实施方案中，X2为O，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。在以上任一亚实施方案中，X1可为N或CH。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中CR2R3呈(S)构型。在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中CR2R3呈(R)构型。在本发明的又一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中存在相等部分的(R)和(S)异构体(即外消旋混合物)。在本发明的又一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中富含(R)或(S)异构体。在本发明的又一实施方案中，R2取代基呈β-构型。在本发明的又一实施方案中，R2取代基呈α-构型。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为CH2或(CH2)2并且R1为四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基或任选取代的吡唑基。在一个亚实施方案中，R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为取代的杂芳基-甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苯氧基或杂芳氧基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苯氧基且R3为氢。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2是O，X3是(CH2)2并且R1是任选取代的吡唑基。在一个亚实施方案中，R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为取代的杂芳基-甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基或杂芳氧基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基且R3为氢。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为CH2并且R1为任选取代的吡唑基。在一个亚实施方案中，R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为取代的杂芳基-甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基或杂芳氧基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基且R3为氢。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为CH2并且R1为1-甲基-1H-吡唑-5-基)。在一个亚实施方案中，R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为取代的杂芳基-甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苯氧基或杂芳氧基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苯氧基且R3为氢。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据式I的化合物，其中X2为O，X3为(CH2)2并且R1为1-甲基-1H-吡唑-5-基)。在一个亚实施方案中，R2为任选取代的苯基-C1-3烷基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为苄基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为取代的杂芳基-甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为任选取代的(1H-吡唑-1-基)甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2为(4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基或杂芳氧基且R3为氢。在另一亚实施方案中，R2是任选取代的苯氧基且R3为氢。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据权利要求1所述的化合物，其选自表1中的化合物I-1至I-109。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的过度增殖性病症的严重性的方法，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义，所述化合物被用作药剂。
在本发明的另一实施方案中，提供一种根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义，所述化合物被用于疗法中。
在本发明的另一实施方案中，提供一种用于治疗过度增殖性疾病的药物组合物，其含有根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种抑制细胞中的ERK蛋白激酶活性的方法，所述方法包括用根据式的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂处理所述细胞，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种抑制有此需要的患者中的ERK蛋白激酶活性的方法，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的过度增殖性病症的严重性的方法，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的选自由以下组成的组的过度增殖性病症的严重性的方法：腺瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、表皮癌、滤泡型癌、泌尿生殖道癌、成胶质细胞瘤、霍奇金氏(Hodgkin's)病、头颈癌、肝细胞瘤、角化棘皮瘤、肾癌、大细胞癌、白血病、肺腺癌、肺癌、淋巴病症、黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌、脊髓发育不良综合征、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、***状癌、胰腺癌、***癌、直肠癌、肉瘤、小细胞癌、睾丸癌、畸胎癌、甲状腺癌以及未分化癌，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的选自由以下组成的组的过度增殖性病症的严重性的方法：黑色素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌及卵巢癌，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的选自由以下组成的组的过度增殖性病症的严重性的方法：急性髓性白血病、慢性单核细胞性白血病、慢性髓性白血病、多发性骨髓瘤及骨髓性白血病，所述方法包括向所述患者施用根据式I的化合物以及至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在本发明的另一实施方案中，提供一种治疗或改善有此需要的患者中的过度增殖性病症的严重性的方法，所述方法包括向所述患者共施用根据式I的化合物和至少一种所用的其它化疗剂，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
本发明的另一实施方案提供式I化合物在制造用于治疗过度增殖性疾病的药剂中的用途，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
本发明的另一实施方案提供一种用于治疗过度增殖性疾病的药物组合物，其包含根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，式I化合物的用途，其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4、Ra及Rb如上文所定义。
在另一实施方案中，R1选自任选取代的杂芳基或杂芳基-C1-6烷基，其中所述杂芳基选自由以下组成的组：异噁唑、吡啶基、吡啶酮、嘧啶基、吡嗪基、吡唑、噻唑基、***基、N-C1-6烷基-吡唑基及N-C1-6烷基***基或杂环基，其中所述杂环基选自由以下组成的组：四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基及N-C1-6烷基哌啶基。在一个亚实施方案中，R1选自1-甲基-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、2-乙基-2H-吡唑-3-基、2-甲基-2H-吡唑-3-基、2-异丙基-2H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、1-乙基-1H-吡唑-5-基、4-甲基噻唑-2-基、1-甲基-1H-[1,2,4]***-3-基、2-甲基-2H-[1,2,3]-***-4-基、1-甲基-1H-[1,2,4]-***-5-基、1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基、1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、2-甲基-2H-四唑-5-基、5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基、氧杂环丁烷-3-基、3-甲基氧杂环丁烷-3-基、四氢吡喃-4-基、四氢-2H-吡喃-4-基、四氢吡喃-3-基、2-甲基-四氢吡喃-4-基、2,2-二甲基-四氢吡喃-4-基、2-羟基甲基四氢吡喃-4-基、3-氟四氢吡喃-4-基以及四氢呋喃-3-基。在另一亚实施方案中，R1选自氧杂环丁烷-3-基、四氢吡喃-4-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、2-甲基-2H-1,2,3-***-4-基以及1-甲基-1H-1,2,4-***-5-基。在又一亚实施方案中，R1选自1-甲基-1H-吡唑-5-基和1-甲基-1H-吡唑-4-基。
在另一实施方案中，R2为(a)C1-10烷基，例如选自甲基、乙基、2-甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2-乙基丁基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、异戊基、新戊基、异丁基、3,3-二甲基丁基、丁基、丙基、三氟甲基、4-甲基戊基、3-甲基丁-2-基；(b)C1-10烯基；(c)C1-10卤烷基，例如2-氟丁基、4,4,4-三氟-2-甲基丁基、3,3,3-三氟-2-甲基丙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、2-氟-2-甲基丙基、3,3,3-三氟-2-(三氟甲基)丙基、1,1-二氟丙基、3-氟-3-甲基丁基、2,2-二氟丙基、2-(三氟甲基)丁基、3-氟-2-(氟甲基)丙基；(d)C3-7环烷基或C3-7环烷基-C1-6烷基，例如环丙基、环己基、环己基甲基、(1-(1-(三氟甲基)环丙基)甲基、(1-异丙基环丙基)甲基、(1-乙基环丙基)甲基、(环戊基甲基、环己基甲基、(1-(三氟甲基)环丁基)甲基、环丙基甲基、环丁基甲基及环己基乙基；(e)C3-7卤代环烷基或C3-7卤代环烷基-C1-6烷基，例如(2,2-二氟环丙基)甲基、(3,3-二氟环丁基)甲基、(4,4-二氟环己基)甲基；(f)C1-10羟烷基或C1-10二羟烷基，例如1-羟基-3-甲基丁基、1-羟基-2-甲基丙基、2-羟基-2-甲基丙基、2-羟基乙基、1-羟基-2-甲基丁基、2-羟基-3-甲基丁基、2-羟基丁基、3-羟基-2-甲基丙基、1-羟基-2-甲基丙基、1-羟基-2-甲基丙基、2-羟基-2-甲基丙基、2-羟基乙基、1-羟基-2-甲基丁基、2-羟基-3-甲基丁基、2-羟基丁基及1-羟基丁基；(g)C1-3烷氧基-C1-6烷基，例如2-甲氧基-3-甲基丁基、2-乙氧基丁基、3-甲氧基-2-甲基丙基、3,3,3-三氟-2-甲氧基丙基、2-乙氧基乙基、叔丁氧基甲基、异丙氧基甲基、2-甲氧基乙基、异丁氧基甲基、甲氧基甲基、1-甲氧基-2-甲基丙基、2-甲氧基丁基、2-甲氧基丙基、3-羟基-2-甲基丙基、2-甲氧基-2-甲基丙基、2-(2-氟乙氧基)丙基、2-(环丙基甲氧基)丙基、苄氧基甲基；(h)C1-3烷硫基-C1-6烷基，例如，1,2-(甲硫基)丁基、2-(甲硫基)乙基、2-(甲硫基)丙基、(异丙硫基)甲基、(叔丁硫基)甲基及(异丁硫基)甲基；(j)C1-10氰基烷基，例如，2-氰基-2-甲基丙基及2-丁腈(j)苯基、苯基-C1-3烷基、苯氧基或苄氧基-C1-3烷基，例如，4-氯苯基、3-氯苯基、2-氯苯基、4-氟苯基、3-氟苯基、2-氯苯基、4-甲氧基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、4-氯-3-氟苯基、苄基、2-氟苄基、2-氯苄基、2-甲氧苄基、2-(三氟甲基)苄基、2-甲基苄基、3-溴苄基、3-氯苄基、3-氟苄基、3-环丙基苄基、3-环丁基苄基、3-(三氟甲基)苄基、3-甲氧苄基、3-(二氟甲氧基)苄基、3-(三氟甲氧基)苄基、3-氰基苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、4-(三氟甲基)苄基、4-甲氧苄基、4-(二氟甲氧基)苄基、4-(甲硫基)苄基、4-甲基苄基、4-(三氟甲氧基)苄基、4-乙氧基苄基、2,3-二氟苄基、2,3-二氯苄基、2-氟-4-甲氧苄基、2-氯-4-氟苄基、2,4-二氯苄基、2,4-二氟苄基、2-氟-4-(三氟甲基)苄基、2,5-二氟苄基、2-氯-6-氟苄基、2,6-二氟苄基、3-氟-4-甲氧苄基、3-氟-4-(三氟甲氧基)苄基、3,4-二氟苄基、3-氯-4-氟苄基、3-氯-4-甲氧苄基、3-氯-5-氟苄基、3-氟-5-(三氟甲基)苄基、3,5-二氟苄基、3,5-二氟苄基、4-氯-2-氟苄基、4-(二氟甲氧基)-2-氟苄基、4-氯-3-氟苄基、4-氟-3-甲氧苄基、2,3-二氟-4-甲氧苄基、2,3,4-三氟苄基、2,4,5-三氟苄基、3,5-二氟-4-甲氧苄基、4-乙氧基-2,3-二氟苄基、苯乙基、3-氯苯乙基、4-氯苯乙基、1-(4-氯苯基)乙基、1-甲氧基-2-苯基乙基、1-(4-氯苯基)-2-甲基丙基、1-苯基乙基、2-(4-氯苯基)丙-2-基、(4-氯苯基)二氟甲基、1-甲氧基-1-苯基乙基、二氟(3-氟-4-甲氧基苯基)甲基、3-氟-4-甲氧基苯乙基、2-氯苯乙基、2-(4-氟苯基)-2-甲基丙基、2-(4-甲氧基苯基)-2-甲基丙基、2-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)乙基、3,3,3-三氟-2-(4-甲氧基苯基)丙基、3,3,3-三氟-2-(4-氟苯基)丙基、2-(4-氯苯基)-2-甲氧基乙基、2-(4-氯苯基)-2-羟基乙基、3,3,3-三氟-2-(4-甲氧基苯基)丙基、2-羟基-2-(4-甲氧基苯基)乙基、苯氧基、2-氟-苯氧基、3-氟苯氧基、4-氟苯氧基、3,4-二氟苯氧基及3-甲基苯氧基；(k)杂芳基、杂芳基-C1-3烷基或杂芳基氧基、1H-吡唑-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、1-(C1-3烷基)-1H-吡唑-3-基，例如1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-(C1-3烷基)-1H-吡唑-4-基，例如1-甲基-1H-吡唑-4-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、异噻唑-3-基、异噻唑-4-基、异噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、(噻唑-2-基)-C1-3烷基、(噻唑-4-基)-C1-3烷基、(噻唑-5-基)-C1-3烷基、(异噻唑-3-基)-C1-3烷基、(异噻唑-4-基)-C1-3烷基、(异噻唑-5-基)-C1-3烷基、(噁唑-2-基)-C1-3烷基、(噁唑-4-基)-C1-3烷基、(噁唑-5-基)-C1-3烷基、(异噁唑-3-基)-C1-3烷基、(异噁唑-4-基)-C1-3烷基、(异噁唑-5-基)-C1-3烷基1H-咪唑-2-基、(1H-咪唑-2-基)-C1-3烷基、(1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-2-基)-C1-3烷基、1H-咪唑-5-基、1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-5-基及(1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-5-基)-C1-3烷基；噻吩-2-基甲基、噻唑-2-基甲基、(1-甲基吡唑-3-基)甲基、(1-甲基吡唑-4-基)甲基、(1-甲基咪唑-2-基)甲基、(1-环丙基-3,5-二甲基吡唑-4-基)甲基、(1,3-二甲基吡唑-5-基)甲基、(3-环丙基吡唑-1-基)甲基、(4-甲基噻唑-2-基)甲基、(5-甲基噻唑-2-基)甲基、(5-氯噻吩-2-基)甲基、(5-环丙基噻吩-2-基)甲基、(5-氰基噻吩-2-基)甲基、2-(1,2,4-***-5-基)乙基、2-(4-(三氟甲基)吡唑-1-基)乙基，吡啶基，如吡啶-2-基、吡啶-3-基吡啶-4-基、1-(吡啶-2(1H)-酮)、(1-甲基-2-氧代基-1,2-二氢吡啶-4-基)甲基、吡啶-4-基甲基、5-氯吡啶-2-基)甲基、(2-甲氧基吡啶-3-基)甲基、(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基、(6-甲氧基吡啶-2-基)甲基或5-(吡啶-2(1H)-酮)、(5-氟-3-吡啶基)氧基、(5-氯-3-吡啶基)氧基；以及(1)苯硫基或苯硫基-C1-6烷基。
在一个亚实施方案中，R2为苄基、2-氟苄基、2-氯苄基、2-甲氧苄基、2-(三氟甲基)苄基、2-甲基苄基、3-溴苄基、3-氯苄基、3-氟苄基、3-环丙基苄基、3-(三氟甲基)苄基、3-甲氧苄基、3-(二氟甲氧基)苄基、3-(三氟甲氧基)苄基、3-氰基苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、4-(三氟甲基)苄基、4-甲氧苄基、4-(二氟甲氧基)苄基、4-(甲硫基)苄基、4-甲基苄基、4-(三氟甲氧基)苄基、4-乙氧基苄基、2,3-二氟苄基、2,3-二氯苄基、2-氟-4-甲氧苄基、2-氯-4-氟苄基、2,4-二氯苄基、2,4-二氟苄基、2-氟-4-(三氟甲基)苄基、2,5-二氟苄基、2-氯-6-氟苄基、2,6-二氟苄基、3-氟-4-甲氧苄基、3-氟-4-(三氟甲氧基)苄基、3,4-二氟苄基、3-氯-4-氟苄基、3-氯-4-甲氧苄基、3-氯-5-氟苄基、3-氟-5-(三氟甲基)苄基、3,5-二氟苄基、3,5-二氟苄基、4-氯-2-氟苄基、4-(二氟甲氧基)-2-氟苄基、4-氯-3-氟苄基、4-氟-3-甲氧苄基、2,3-二氟-4-甲氧苄基、2,3,4-三氟苄基、2,4,5-三氟苄基、3,5-二氟-4-甲氧苄基、4-乙氧基-2,3-二氟苄基。在另一亚实施方案中，苄型亚甲基上的一个或两个氢原子被氘置换。
在另一亚实施方案中，R2为苄基、3-氟-4-氯苯基、4-氟苄基、4-甲氧苄基、3-氟-4-甲氧苄基、4-氯-3-氟苯基、3,4-二氟苄基、2-氟-4-甲氧苄基、2-氯苄基。
在另一亚实施方案中，R2为1-(C1-3烷基)-1H-吡唑-3-基，例如1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-(C1-3烷基)-1H-吡唑-4-基，例如1-甲基-1H-吡唑-4-基、(噻唑-2-基)-C1-3烷基、(噻唑-4-基)-C1-3烷基、(噻唑-5-基)-C1-3烷基、(异噻唑-3-基)-C1-3烷基、(异噻唑-4-基)-C1-3烷基、(异噻唑-5-基)-C1-3烷基、(噁唑-2-基)-C1-3烷基、(噁唑-4-基)-C1-3烷基、(噁唑-5-基)-C1-3烷基、(异噁唑-3-基)-C1-3烷基、(异噁唑-4-基)-C1-3烷基、(异噁唑-5-基)-C1-3烷基(1H-咪唑-2-基)-C1-3烷基、(1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-2-基)-C1-3烷基、1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-5-基和(1-(C1-3烷基)-1H-咪唑-5-y)-C1-3烷基、噻吩-2-基甲基、噻唑-2-基甲基、(1-甲基吡唑-3-基)甲基、(1-甲基吡唑-4-基)甲基、(1-甲基咪唑-2-基)甲基、(1-环丙基-3,5-二甲基吡唑-4-基)甲基、(1,3-二甲基吡唑-5-基)甲基、(3-环丙基吡唑-1-基)甲基、(4-甲基噻唑-2-基)甲基、(5-甲基噻唑-2-基)甲基、(5-氯噻吩-2-基)甲基、(5-氰基噻吩-2-基)甲基、2-(1,2,4-***-5-基)乙基、2-(4-(三氟甲基)吡唑-1-基)乙基、(3-甲基异噁唑-5-基)甲基、(异噁唑-5-基)甲基、(异噁唑-4-基)甲基、(异噁唑-3-基)甲基、(噁唑-2-基)甲基、(噁唑-4-基)甲基、(噁唑-5-基)甲基。
在一个亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基、(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基、(4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基、(4-甲基噻唑-2-基)甲基、(3-甲基异噁唑-5-基)甲基以及(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基。
在另一亚实施方案中，R2为苯氧基、2-氟-苯氧基、3-氟苯氧基、4-氟苯氧基、3,4-二氟苯氧基和3-甲基苯氧基、(5-氯-3-吡啶基)氧基、(5-氟-3-吡啶基)氧基、(1-甲基吡唑-4-基)氧基。
在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基、(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基、(4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基。
在另一亚实施方案中，R2为2-丁腈、正丙基、异丙基、异丁基、2-甲基丁基环丙基甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基。
在本发明的一个实施方案中，提供一种式Ia的化合物
其中X1为N，n为1且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ia的化合物，其中X1为C，n为1且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ia的化合物，其中X1为N，n为2且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ia的化合物，其中X1为C，n为2且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的一个实施方案中，提供一种式Ib的化合物
其中X1为N，n为1且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为C，n为1且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为N，n为2且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为C，n为2且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的一个实施方案中，提供一种式Ic的化合物
其中X1为N且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为C且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为N且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
在本发明的另一实施方案中，提供一种式Ib的化合物，其中X1为C且R2为任选取代的苄基。在一个亚实施方案中，R2为苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3,4-二氟苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-4-氯苄基。在另一亚实施方案中，R2为3-氟-3-甲氧苄基。在另一亚实施方案中，R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(3-甲基异噁唑-5-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为(4-甲基噻唑-2-基)甲基。在另一亚实施方案中，R2为苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为2-氯-苯氧基。在另一亚实施方案中，R2为4-氟-苯氧基。
如本文所用的术语“烷基”单独或与其它基团组合时表示含有1至10个碳原子的非支链或支链、饱和、单价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文所用的“C1-6烷基”是指由1至6个碳构成的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、新戊基、己基及辛基。
如本文所用的术语“烯基”表示具有2至10个碳原子且具有一个或两个烯属双键的未取代的烃链基团。如本文所用的“C2-10烯基”是指由2至10个碳构成的烯基。实例为乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)或2-丁烯基(巴豆基)。
术语“环烷基”表示具有3至10个环碳原子的单价饱和单环或双环烃基。稠合环烷基可具有一个(即螺环)、两个(即双环)或更多个(即多环)共有的碳原子。具体的环烷基是单环的。如本文所用的“C3-7环烷基”是指在碳环中由3至7个碳构成的环烷基。单环环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。双环环烷基的实例为双环[2.2.1]庚基或双环[2.2.2]辛基。
如本文所用的术语“环烷基烷基”是指基团R'R"-，其中R'为如本文所定义的环烷基，且R"为如本文所定义的亚烷基，应理解的是环烷基烷基部分的连接点将在亚烷基上。环烷基烷基的实例包括但不限于环丙基甲基、环己基甲基、环戊基乙基。C3-7环烷基-C1-3烷基是指基团R'R"，其中R'为如本文所定义的C3-7环烷基且R"为如本文所定义的C1-3亚烷基。
除非另有陈述，否则如本文所用的术语“亚烷基”表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)。“C0-4亚烷基”是指包含1-4个碳原子的直链或支链饱和二价烃基或在C0的情况下，省略亚烷基。“(CH2)0-4”是指包含0-4个碳原子的直链饱和二价烃基或在C0的情况下，省略亚烷基。亚甲基的情况除外，亚烷基的开放价键不连接至同一原子上。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1,1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文所用的术语“卤烷基”表示如上所定义的烷基，其中至少一个氢原子被卤素取代。实例为1-氟甲基、1-氯甲基、1-溴甲基、1-碘甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、1-氟乙基、1-氯乙基、2-氟乙基、2-氯乙基、2-溴乙基、2,2-二氯乙基、3-溴丙基或2,2,2-三氟乙基。
如本文所用的术语“烷氧基”意指-O-烷基，其中烷基如上所定义，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文所用的“低级烷氧基”表示具有如先前所定义的“低级烷基”的烷氧基。如本文所用的“C1-10烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基为C1-10。
如本文所用的术语“卤烷氧基”是指基团-OR，其中R为如本文所定义的卤烷基。如本文所用的术语“卤烷硫基”是指基团-SR，其中R为如本文所定义的卤烷基。
如本文所用的术语“羟烷基”和“烷氧基烷基”表示如本文所定义的烷基，其中不同碳原子上的1至3个氢原子分别被羟基或烷氧基取代。C1-3烷氧基-C1-6烷基部分是指C1-6烷基取代基，其中1至3个氢原子被C1-3烷氧基取代且烷氧基的连接点为氧原子。
术语“烷硫基”或“烷基硫烷基”意指-S-烷基，其中烷基如上所定义，如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、己硫基，包括它们的异构体。如本文所用的“低级烷硫基”或“低级硫代烷基”表示具有如先前所定义的“低级烷基”的烷硫基。如本文所用的“C1-10烷硫基”是指-S-烷基，其中烷基为C1-10。“芳硫基”意指-S-芳基，其中芳基如本文所定义。“苯硫基”为“芳硫基”部分，其中芳基为苯基。如本文所用的术语“烷硫基烷基”或“苯硫基烷基”表示基团R'R"，其中R'分别为烷硫基或苯硫基且R"为如本文所定义的亚烷基，并且烷硫基烷基的连接点将在亚烷基上。C1-3烷硫基-C1-6烷基表示以下基团，其中烷基部分由1-6个碳原子构成且烷硫基为1-3个碳。
术语“氰基烷基”是指如本文所定义的烷基，其中一个或多个氢原子被氰基置换。
如本文所用的术语“卤素”或“卤基”意指氟、氯、溴或碘。术语“卤基”、“卤素”以及“卤化物”在本文中可互换使用并且表示氟、氯、溴或碘。
如本文所用的术语“氧化物”是指杂芳基N-氧化物。
如本文所用的术语“卤代环烷基”表示如上所定义的环烷基，其中至少一个氢原子被卤素取代。实例为3,3-二氟环戊基、4,4-二氟环己基。
如本文所用的术语“卤代环烷基烷基”是指基团R'R"-，其中R'为如本文所定义的卤代环烷基，且R"为如本文所定义的亚烷基，应理解的是卤代环烷基烷基部分的连接点将在亚烷基上。环烷基烷基的实例包括但不限于2-氟环丙基、4,4-二氟环己基甲基。C3-7卤代环烷基-C1-3烷基是指基团R'R"，其中R'为C3-7卤代环烷基且R"为如本文所定义的C1-3亚烷基。
术语“杂环”和“杂环的”包括含有一个、两个或三个选自由以下组成的组的杂原子的四至七元饱和或部分不饱和的环：O、N、S、S(＝O)及S(＝O)2。这些术语包括二环，如2-氧杂二环[2.2.1]庚烷。在某些情况下，这些术语可具体地进一步被限制，如“五至六元杂环”仅包括五元和六元环。
术语“杂环烷基”(或“杂环基烷基”)表示式R'R”的基团，其中R'为如本文所定义的杂环基且R"为如本文所定义的亚烷基，并且杂环烷基的连接点将在亚烷基上。杂环烷基的实例包括但不限于1-哌嗪基甲基、2-吗啉代甲基等等。
如本文所用的术语“芳基”表示含有6至15个碳原子的单价芳族碳环基团，其是由一个单独的环或一个或多个稠环组成，其中至少一个环在本质上是芳族的。芳基可任选地被一个或多个、优选地1个至3个取代基取代。或者，芳环的两个邻近原子可被亚甲二氧基或亚乙二氧基取代。芳基的实例包括苯基、萘基、茚满基、3,4-亚甲二氧基苯基、1,2,3,4-四氢喹啉-7-基、1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基等等。
如本文所用的术语“芳氧基”表示O-芳基，其中芳基如上所定义。芳氧基可未取代或被一个或三个合适的取代基取代。术语“苯氧基”是指其中芳基部分是苯基环的芳氧基。术语“苄氧基”是指基团PhCH2O-并且“或苄氧基-C1-3烷基”是指其中一个氢被苄氧基取代的C1至C3烷基。
如本文所用的术语杂芳氧基意指-O-(杂芳基)基团，其通过氧原子连接至分子的其余部分。例如，(吡啶基)氧基可连接在吡啶的2、3或4位置处。
术语“杂芳基”包括含有1、2、3或4个选自由以下组成的组的杂原子的五至六元芳族环：O、N及S。在某些情况下，这些术语可具体地进一步被限制，如五至六元杂芳基，其中杂芳基含有一个或两个氮杂原子。如本领域技术人员所熟知，杂芳环的芳香性比它们相应的全碳环小。因此，出于本发明的目的，杂芳基仅需要具有一定程度的芳香性。
术语“杂芳基烷基”或“杂芳烷基”意指式R'R"的基团，其中R'为如本文所定义的任选取代的杂芳基且R"为如本文所定义的亚烷基，应理解的是杂芳基的连接点将在亚烷基上且该连接可在杂芳环上的任何位置处。杂芳基烷基的实例包括但不限于2-咪唑基甲基、3-吡咯基乙基、4-吡啶基甲基及5-嘧啶基甲基。
如本文所用的术语杂芳氧基意指-O-(杂芳基)基团，其通过氧原子连接至分子的其余部分。(吡啶基)氧基为杂芳氧基，其中杂芳基部分2-、3-或4-吡啶基。
如本文所用的术语“氧代基”是指双键键合的氧，如“C＝O”(即羰基，当氧代基连接至碳上时)，其中应当理解这等价于两个羟基连接至同一碳上是等价的
术语“6,7,8,9-四氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环”(i)、8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(ii)、6H-8-氧杂-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(9H)-酮(iii)和3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊(iv)及8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(v)是用ChemBioDraw Ultra 12.0生成且表示以下：
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性治疗，其中目标是减慢(减轻)不希望有的生理变化或病症，如癌症的扩散。对于本发明的目的，有益的或所需的临床结果包括但不限于症状减轻、疾病程度限制、疾病状态稳定(即不恶化)、疾病进展延迟或减缓、疾病状态改善或减轻、以及缓解(无论部分或全部)，无论可检测或是不可检测的。“治疗”也可指与不接受治疗的预期存活相比延长的存活。
短语“治疗有效量”意指本发明化合物满足以下条件的量：(i)治疗特定疾病、病状或病症，(ii)削弱、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可减少癌细胞的数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即在某种程度上减缓且优选地终止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即在某种程度上减缓且优选地终止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上减轻与癌症有关的一种或多种症状。如果药物可以阻止现有癌细胞的生长和/或杀死现有癌细胞，则该药物可能具有细胞抑制性和/或细胞毒性。对于癌症疗法，疗效可以例如通过估计疾病进展时间(TTP)和/或测定反应率(RR)来确定。
术语“癌症”和“癌的”是指或描述哺乳动物中通常特征为细胞生长失控的生理状况。“肿瘤”包含一个或多个癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、以及白血病或淋巴恶性肿瘤。这种癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌及肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric/stomach cancer)(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子***、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney/renal cancer)、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、***癌、***癌以及头颈癌。
“化疗剂”为适用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括埃罗替尼(Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐米(Millennium Pharm.)、氟维司群(AstraZeneca)、舒尼替尼(Pfizer/Sugen)、来曲唑(Novartis)、甲磺酸伊马替尼(Novartis)、菲那舒那(finasunate)(Novartis)、奥沙利铂(Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲酰四氢叶酸、雷帕霉素(西罗莫司，Wyeth)、拉帕替尼(GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(Lonafamib)(SCH 66336)、索拉非尼(Bayer Labs)、吉非替尼(AstraZeneca)、AG1478、烷化剂如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺；烷基磺酸酯类如白消安、英丙舒凡及保释芬；氮丙啶如本多帕(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多帕(meturedopa)及优多帕(uredopa)；亚乙亚胺和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺及三羟甲蜜胺；多聚乙酰(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮)；喜树碱(包括合成的类似物拓扑替康)；苔藓抑素；凯利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新及比折来新合成类似物)；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司它汀；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189及CB1-TM1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥如苯丁酸氮芥、氯玛法辛(chlomaphazine)、氯磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素如烯二炔抗生素(例如卡奇霉素(calicheamicin)，特别是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.199433:183-186)；达内霉素、包括达内霉素A；双膦酸盐、诸如氯屈膦酸盐；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡拉比星、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素D、道诺霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代基-L-正亮氨酸、(多柔比星)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、波福霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他汀、佐柔比星；抗代谢剂如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如环胞苷、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素如二***、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺剂如胺鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如弗罗林酸(frolinic acid)；乙酰葡醛酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶；安吖啶；倍曲布西(bestrabucil)；比生群；依达曲沙；地佛法明(defofamine)；地美可辛；地吖醌；伊佛米新(elfomithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；洛尼代宁(lonidainine)；美登木素(maytansinoid)如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹达洛(mopidamnol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他汀；苯来美特(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；足叶草酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2″-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)(特别是T-2毒素、维拉库林A(verracurin A)、杆孢菌素A及蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞图辛(gacytosine)；***糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如TAXOL(太平洋紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、(不含聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor))、太平洋紫杉醇的白蛋白-工程改造的纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和(多西他赛(docetaxel/doxetaxel)；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥；(吉西他滨)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春花碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；(长春瑞滨)；诺凡特龙(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素如视黄酸；及以上任一种的药学上可接受的盐、酸及衍生物。
在“化疗剂”的定义中还包括：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，如抗***和选择性***受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那斯酮以及(柠檬酸托瑞米芬)；(ii)抑制调节肾上腺中的***产生的芳香酶的芳香酶抑制剂，例如像4(5)-咪唑、胺鲁米特、(乙酸甲地孕酮)、(依西美坦；Pfizer)、福美司坦(formestanie)、法倔唑、(伏氯唑)、(来曲唑；Novartis)以及(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林及戈舍瑞林；以及曲沙他滨(一种1,3-二氧环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制涉及异常的细胞增殖的信号传导通路中的基因表达的那些，例如像PKC-α、Raf及H-Ras；(vii)核糖酶，如VEGF表达抑制剂(例如)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，如基因疗法疫苗，例如及rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，如 rmRH；(ix)抗血管生成剂，如贝伐单抗Genentech)；以及(x)以上任一种的药学上可接受的盐、酸及衍生物。
通常使用的缩写包括：乙酰基(Ac)、水溶液(aq.)、气氛(Atm)、叔丁氧羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或Boc酸酐(BOC2O)、苄基(Bn)、六氟磷酸苯并***-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻(BOP)、丁基(Bu)、苯甲酰基(Bz)、化学文摘登记号(CASRN)、苄氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、二亚苄基丙酮(DBA)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)、二异丙基偶氮二羧酸酯(DIAD)、二异丁基氢化铝(DIBAL或DIBAL-H)、二异丙基乙胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、1,1'-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、乙基(Et)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-羧酸乙酯(EEDQ)、***(Et2O)、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐乙酸(HATU)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并***(HOBt)、高压液相色谱(HPLC)、异丙醇(IPA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO2-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间氯过苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、石油醚(石油醚(petether)，即烃类)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅/平方英寸(psi)、溴代-三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、吡啶(pyr)、室温(rt或RT)、satd.(饱和)、叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS)、三乙胺(TEA或Et3N)、三氟甲磺酸盐或CF3SO2-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、O-苯并***-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、薄层色谱(TLC)、四氢呋喃(THF)、四甲基乙二胺(TMEDA)、三甲基甲硅烷基或Me3Si(TMS)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)、对甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)、N-聚氨酯-N-羧基酸酐(UNCA)。包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-或-t)及新(neo-)的常规命名当与烷基部分一起使用时具有它们惯用的含义。(J.Rigaudy和D.P.Klesney,Nomenclature in Organic Chemistry,IUPAC 1979Pergamon Press,Oxford.)。
化合物和制备
在本发明范围内的代表性化合物的实例提供于下表中。提供以下的这些实施例和制备以使本领域技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。它们不应当被认为是对本发明范围的限制，而仅仅是对其的解释和示例。
另外，如果某结构或某结构一部分的立体化学未用(例如)黑体或虚线表示，则该结构或该结构一部分应被理解为包括其所有立体异构体。以下编号***在本文中使用。
本发明化合物可通过如下所示和所述的说明性合成反应方案中所描绘的多种方法来制备。用于制备这些化合物的起始材料和试剂一般可从商业供应商获得，如AldrichChemical Co.，或者通过本领域技术人员已知的方法根据在以下参考文献中列出的程序来制备：如Fieser和Fieser’s Reagents for Organic Synthesis；Wiley&Sons:New York,第1-21卷；R.C.LaRock,Comprehensive Organic Transformations,第2版Wiley-VCH,NewYork 1999；Comprehensive Organic Synthesis,B.Trost和I.Fleming(编著)第1-9卷Pergamon,Oxford,1991；Comprehensive Heterocyclic Chemistry,A.R.Katritzky和C.W.Rees(编著)Pergamon,Oxford 1984,第1-9卷；Comprehensive HeterocyclicChemistry II,A.R.Katritzky和C.W.Rees(编著)Pergamon,Oxford 1996,第1-11卷；以及Organic Reactions,Wiley&Sons：New York,1991,第1-40卷。以下的合成反应方案仅仅是对一些可用于合成本发明化合物的方法的举例说明，并且可以对这些合成反应方案进行各种修改，且在参考本申请所包含的公开内容后，本领域技术人员可获知对这些修改的启示。
如果需要的话，使用包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等传统技术分离并纯化合成反应方案的起始材料和中间体。这种材料可使用包括物理常数和光谱数据的传统方法来表征。
除非相反地规定，否则本文所述的反应优选在惰性气氛下，在大气压力下，在约-78℃至约150℃范围内的反应温度下、更优选地在约0℃至约125℃且最优选并适宜地在约室温(或周围温度)下或约20℃下进行。
在以下方案中的一些化合物是用概括的取代基来描述；然而，本领域技术人员将立即明白R基团的性质可以变化以得到本发明所预期的各种化合物。此外，反应条件是示例性的且可选条件是众所周知的。在以下实施例中的反应顺序不意在限制权利要求书中所阐述的本发明的范围。
3-取代的3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊衍生物(A-8a)和8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环)(A-8b)可通过在缩合催化剂存在下用适当保护的β-或γ-羟基酸缩合4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)嘧啶-2-胺衍生物(A-4b)来制备。虽然HATU是方便的，但用于缩合胺和羧酸的方案已被广泛优化用于肽合成且其它等效程序将为本领域技术人员所熟知。
***并吡啶的常规合成涉及使用回流三氯氧磷、浓HCl或回流HOAc使2-酰肼吡啶脱水，它们是与许多官能团不相容的相对苛刻的条件。改良的Mitsunobu条件已成功地应用于合成***并吡啶和***并嘧啶(J.Y.Roberge等人,Arkivoc 2007(xii)：132-147)。已经报道了用Cl2PPh3的环化以良好的产率得到[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(H.Warmhoff和M.Zahran,Synthesis 1987 876；J.M.Cid等人,J.Med.Chem.2012 55:8770)。在此使用二溴化三苯基膦的原位形成以驱动酰基肼中间体的脱水环化，从而得到A-6。伯醇的脱甲硅烷基化和用碱的处理导致氟化物的置换，从而得到氧杂-三氮杂苊A-8。
如方案B中所公开制备羟基酸。必需的β-羟基酸可通过用苄基卤化物、烷基卤化物等来烷基化丙二酸二乙酯以得到取代的丙二酸二酯而容易地获得。选择性水解得到半酯，其是用LiBH4还原以得到α取代的β-羟基酸B-3。必需的γ-羟基酸是通过丁内酯的烷基化及后续的皂化和甲硅烷基化释放的羟基来制备。或者，2-溴丁内酯可转化为(2-氧代基-四氢-呋喃-3-基)-膦酸二乙酯并且用必需的醛缩合以得到烯烃，其可被氢化得到B-5。3-芳氧基和2-杂芳氧基-4-羟基-丁酸是通过使用2-溴丁内酯和适当的苯酚进行威廉逊(Williamson)醚合成来制备。
A-7b的分子内环化的变型(方案C)利用2步法，包括将伯醇转化成相应的溴化物(或其它离去基团)并且添加二价亲核试剂如Na2S以置换溴化物和氟化物原子并引入新环。
形成三环ε-内酰胺的两步法包括用取代的丙酸侧链合成5-氟***并吡啶，接着用氨或伯胺置换氟化物，然后用侧基羧酸缩合胺方案D。必需的起始材料D-1是通过方案A中所描绘的类似工艺顺序来制备，其中N保护的β-或γ-氨基酸被2-取代的琥珀酸4-叔丁酯置换。通过氨或伯胺置换氟化物得到D-2a(R″′分别＝H或Me)。水解叔丁酯并且所得的氨基酸D-2b被环化成D-3。本领域技术人员应知道相应的δ-内酰胺可类似地从取代的丙二酸来制备。
3,5-二氢-1,2,3,5,8b-五氮杂-苊-4-酮(E-5)和8,9-二氢-6H-1,2,6,8,9b-五氮杂-苯并[cd]甘菊环-7-酮(E-6)如方案E中所描绘来制备。六元脲是通过用异氰酸酯缩合肼A-4b以得到E-2来制备，E-2被环化以便得到***并吡啶E-3，用氨或伯胺处理***并吡啶E-3以得到E-4。用羰基二咪唑进行环化得到脲。该顺序允许将取代基选择性引入到脲的每个氮上。七元脲E-8是通过以下操作来制备：用N保护的α-氨基酸进行缩合，经历用肼的缩合并环化以得到E-6，通过如上所述的氟化物的置换将E-6转化成脲。当需要其中R″为甲基的化合物时，必需的N-甲基N-Boc-α-氨基酸可商购获得或容易地制备。
含有氧杂环庚三烯的三环核心可从相应的γ-羟基羧基酸获得。含有1-吡唑基或1-咪唑基键的化合物可通过迈克尔加成亲核试剂到3-亚甲基二氢呋喃-2(3H)-酮上来制备(方案F，步骤1)。用烷基卤化物或苄基卤化物对γ-丁内酯进行烷基化得到有用的2-取代的4-羟基丁酸中间体。或者，2-溴-γ-丁内酯可用苯酚置换(方案G，步骤1)以得到类似物，其中在C-9处的取代基与醚键连接。本领域技术人员将迅速地理解乙醇或苯酚加成到3-亚甲基二氢呋喃-2(3H)-酮上将得到含有侧链的醚(表I，I-29)在羟基的保护、用腙进行的缩合、环化以形成[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶核心之后，如上所述进行脱保护并最终置换氟化物以引入氧杂环庚三烯。
9-芳氧基-或杂芳氧基-)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基类似物是如方案G中所描绘从任选取代的2-芳氧基-3-羟基丁酸衍生物或任选取代的2-杂芳氧基-3-羟基丁酸衍生物来制备。
生物活性
可能通过许多直接和间接的检测方法测定式I化合物的ERK活性的活性。就它们的ERK抑制测定对本文所述的某些示例性化合物进行测定(生物实施例1)。ERK结合活性的范围为小于1nM(纳摩尔)至约10μM(微摩尔)。使用基于细胞的功能测定(生物实施例2)通过测定P90RSK的磷酸化来确定ERK抑制剂对下游信号传导的影响。
式I示例性化合物的细胞毒性或细胞抑制活性是通过以下操作来测量：在细胞培养基中建立增殖哺乳动物肿瘤细胞系，添加式I化合物，培养细胞约6h至约5d的时间；以及测量细胞活力(生物实施例2)。基于细胞的体外测定被用于测量活力，即增殖(IC50)、细胞毒性(EC50)。
剂量和施用
本发明提供含有本发明化合物和至少一种治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药剂以及使用本发明化合物制备这种组合物和药剂的方法。在一个实施例中，具有所需纯度的式I化合物可通过在周围温度和适当的pH下与生理上可接受的载体(即在所用的剂量和浓度下对接受者无毒的载体)混合来配制成剂型。制剂的pH主要取决于化合物具体的用途和浓度，但通常在约3至约8范围内。在一个实施例中，式I化合物是在乙酸盐缓冲液中在pH 5下配制。在另一实施方案中，式I化合物是无菌的。化合物可例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液来储存。
组合物可根据与良好医疗实践一致的方式配制、定量和施用。在本上下文中考虑的因素包括治疗的具体病症、病症的严重性、治疗的具体患者、患者个体的临床状况、病因、试剂递送的部位、施用方法、施用的时间安排以及执业医生已知的其它因素。有待施用的化合物的“有效量”将由这些因素所决定，并且为抑制ERK活性所必需的最小量。通常，该量可以低于对正常细胞、或对患者整体有毒性的量。
供施用的药物组合物(或制剂)可以多种方式包装，这取决于用于施用药物的方法。一般而言，用于分配的物品包括其中已存放适宜形式的药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员公知的并且包括材料如瓶(塑料和玻璃)、小药囊、安瓿、塑料袋、金属圆筒等。该容器中还可以包括防干扰组成部分以防止轻易接触包装内含物。另外，该容器上贴有说明该容器的内容物的标签。该标签还可以包括适当的警告。
可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有式I化合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈成型物品的形式，例如膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)、或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸与γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射的微球体)、以及聚-D-(-)-3-羟丁酸。
治疗人患者的剂量可在约0.1mg至约1000mg式I化合物的范围内。典型的剂量可为约1mg至约300mg化合物。剂量可每天施用一次(QD)、每天施用两次(BID)或更频繁，这取决于药代动力学和药效学性质，包括特定化合物的吸收、分布、代谢及***。另外，毒性因素可影响剂量和施用方案。当经口施用时，丸剂、胶囊或片剂可每天或以更低的频率摄取持续一段特定的时间。该方案可重复多个治疗周期。
本发明化合物可以通过任意适合的手段施用，包括口服、局部(包括口颊和舌下)、直肠、***、经皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内、硬膜外及鼻内，并且如果需要局部治疗的话还有病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。
本发明化合物可以任何方便的施用形式施用，例如片剂、粉剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等。这种组合物可含有药物制剂中常规的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂以及其它活性剂。
典型的制剂通过将本发明化合物与载体或赋形剂混合来制备。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员公知的并且详细描述于例如Ansel,H.C.等人,Ansel’sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；以及Rowe,R.C.,Handbook of Pharmaceutical Excipients,Chicago,Pharmaceutical Press,2005中。所述制剂还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稀释剂及其它已知的添加剂以提供药物(即本发明化合物或其药物组合物)的精巧形式或有助于制造药物产品(即药剂)。
对于口服施用，可采用含有各种赋形剂如柠檬酸连同各种崩解剂如淀粉、海藻酸及某些复合硅酸盐以及粘合剂如蔗糖、明胶及***胶的片剂。另外，润滑剂如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠及滑石常适用于片剂目的。相似类型的固体组合物也可用于软和硬填充的明胶胶囊中。因此，优选材料包括乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)和高分子量聚乙二醇。当需要水性悬浮液或酏剂用于口服施用时，其中的活性化合物可与以下各物组合：各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料并且如果需要的话乳化剂或悬浮剂，以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合。
合适的口服剂型的一个实例为含有约25mg、50mg、100mg、250mg或500mg本发明化合物的片剂，本发明化合物与约90-30mg无水乳糖、约5-40mg交联羧甲基纤维素钠、约5-30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30以及约1-10mg硬脂酸镁混合。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP溶液混合。可将所得的组合物干燥，粒化，与硬脂酸镁混合并且使用常规设备压缩成片剂形式。气溶胶制剂的实例可通过将例如5-400mg本发明化合物溶解于合适的缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲液)中，如果需要的话添加张力调节剂(例如盐，如氯化钠)来制备。溶液可例如使用0.2微米过滤器过滤以除去杂质和污染物。
在一个实施方案中，所述药物组合物还包括至少一种额外的抗增殖剂。
因此，一个实施方案包括一种药物组合物，其包含式I化合物、或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。另一实施方案包括一种药物组合物，其包含式I化合物、或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体或赋形剂。
因此，本发明进一步提供兽医用组合物，其包含至少一种如上所定义的活性成分以及兽医用载体。兽医用载体为适用于施用组合物目的的材料并且可以是固体、液体或气态材料，其另外是惰性的或兽医领域中可接受的并且与活性成分相容。这些兽医用组合物可肠胃外、经口或通过任何其它所需途径施用。
组合疗法
式I化合物可单独或以与其它治疗剂组合的形式采用以便治疗本文所述的疾病或病症，如过度增殖性病症(例如癌症)。在某些实施方案中，式I化合物在药物组合制剂中或作为组合疗法的给药方案中与具有抗过度增殖性质的第二化合物组合，该第二化合物适用于治疗过度增殖性病症(例如癌症)。药物组合制剂或给药方案的第二化合物优选地具有与式I化合物互补的活性以使得它们不会不利地彼此影响。组合疗法可提供“协同作用”并且经证明是“协同的”，即当活性成分一起使用时实现的效果大于单独使用这些化合物所达成的效果总和。
组合疗法可作为同时或连续方案来施用。当连续施用时，所述组合可以两次或更多次施用来施用。组合施用包括使用单独的制剂或单个药物制剂的共施用，和以任一顺序的连续施用，其中优选有一段时间两种(或所有)活性剂同时发挥它们的生物活性。
任何上述共施用试剂的合适剂量就是目前使用的剂量，并且由于新近鉴别的试剂和其它化疗剂或治疗的联合作用(协同作用)而可以略低。
根据本发明的组合疗法因此包括施用至少一种式I化合物、或立体异构体、几何异构体、互变异构体或药学上可接受的盐以及使用至少一种其它癌症治疗方法。式I化合物和另一种或多种药物活性化疗剂的量以及施用的相对时机将被选出以便实现所需的联合治疗效果。
制造物品
在本发明的另一实施方案中，提供一种制造物品或“试剂盒”，其含有适用于治疗如上所述的疾病和病症的材料。在一个实施方案中，所述试剂盒包括包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的容器。所述试剂盒可进一步包括在容器上或与容器有关的标签或包装插页。术语“包装插页”用来指治疗产物商品包装中通常包含的说明书，其包含关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌症的信息和/或关于使用这种治疗性产品的警告。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。该容器可由多种材料如玻璃或塑料形成。该容器可容纳对于治疗病状有效的式I化合物或其制剂并且可具有无菌入口(例如，该容器可以是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂为式I化合物。或者或另外，制造物品可进一步包括第二容器，其包含药物稀释剂，如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(Ringer's)溶液及葡萄糖溶液。其可进一步包括具有商业需要以及符合用户需要的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针及注射器。
在另一实施方案中，所述试剂盒适用于式I化合物的固体口服形式的递送，如片剂或胶囊。这种试剂盒可包括许多单位剂量。这种试剂盒的一个实例为“泡罩包装”。泡罩包装是包装工业中公知的并且广泛用于包装药物单位剂型。
根据一个实施方案，试剂盒可包括(a)第一容器，其中容纳有式I化合物；和任选地(b)第二容器，其中容纳有第二药物制剂，其中第二药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。或者或另外，所述试剂盒可进一步包括第三个容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液及葡萄糖溶液。其可进一步包括具有商业需要以及符合用户需要的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针及注射器。
以下实施例示出了在本发明范围内的化合物的制备和生物学评价。提供接下来的这些实施例和制备以使得本领域技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。它们不应当被认为是对本发明范围的限制，而仅仅是解释和示例本发明。随后的参考实施例示出了制备组装本发明所涵盖的ERK抑制剂所需的胺的程序。
以下色谱方法方案被用于拆分外消旋混合物。分析色谱是在Waters Inc.UPC2SFC(超临界流体色谱法)上进行。样品浓度通常为约0.2mg/mL并且2μL样品被注射到ChiralTechnologies Inc.Chiralpak AS-H 5微米(2.1×50mm)柱上。用CO2/MeOH(含有0.1％NH3水溶液)梯度(5至60％MeOH，经2min)在4mL/min的流速下洗脱样品。柱温维持在40℃下并且背压为120巴。将峰用UV二极管阵列检测器检测并用Single Quad质谱检测器(SQD)表征。
用Waters Inc.-Thar 350SFC进行制备SCF。样品浓度通常为约30mg/mL在MeOH中并且1500μL样品被注射到Chiral Technologies Inc.Chiralpak AS-H 5微米(30×250mm)上。用含有70％CO2和30％MeOH(含有0.1％NH3水溶液)梯度的等度洗脱液在150mL/min的流速下洗脱样品。柱温维持在20℃下并且背压为100巴。用UV检测器在240nm下检测峰。
参考实施例1
4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺
步骤1：向2,6-二氟吡啶(100g，0.869mol)于MTBE(1.0L)中的混合物中添加双(频哪醇)二硼(250g，0.984mol)、双(1,5-环辛二烯)二-μ-甲氧基二铱(I)(5.00g)及1,10-菲咯啉(5.00g)。在氮气下将混合物在70℃下搅拌4h。蒸发混合物以得到棕色固体，将其溶于石油醚中，过滤并蒸发溶剂。通过用石油醚洗脱的SiO2色谱法纯化粗产物以得到呈白色固体状的2,6-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(80.0g，38.3％)。1H NMR：CDCl3 400MHz:δ7.09(s,2H),1.28(s,12H)。
步骤2：将4-溴-2-氟吡啶(210g，1.2mol)、1-甲基-1H-吡唑-5-基胺(140g，1.44mol)及叔丁醇钠(230g，2.4mol)在DMSO(4L)中的溶液加热至125℃过夜。反应物用水淬灭并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。通过用EtOAc/石油醚梯度(用50％EtOAc洗脱产物)洗脱的SiO2色谱法纯化粗产物以得到190g呈黄色固体状的4-溴-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺。1H NMR CDCl3 400MHz；δ7.90(d,J＝5.2Hz,1H),7.40-7.50(m,1H),6.87(dd,J＝5.2,1.6Hz,1H),6.56(d,J＝0.8Hz,1H),6.09(d,J＝1.6Hz,1H),3.61-3.77(m,3H).
步骤3：对4-溴-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺(120g，0.476mol)、2,6-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(1.5当量，172g，0.714mol)、碳酸铯(310g，0.952mol)及(dppf)Pd(II)Cl2(0.10当量，172g，0.0476mol)在MeCN(1L)和水(500mL)中的溶液进行脱气。将反应混合物在95℃下加热4h。经由硅藻土过滤反应物。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(用10％MeOH洗脱产物)洗脱的SiO2色谱法纯化以得到74g呈黄色固体状的4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺。1H NMR CDCl3400MHz；δ8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),6.96(dd,J＝5.2,2.0Hz,1H),6.66(s,1H),6.94(s,2H),6.63(d,J＝0.8Hz,1H),6.20(d,J＝2Hz,1H),3.79(s,3H).
步骤4：向4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺(640mg，2.228mmol)在EtOH(2700mg，3.4mL，58mmol)中的溶液中添加肼(0.196mL，197.7mg，65％水溶液)。将反应物在70℃下加热6h。过滤反应沉淀以得到468mg 4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺，将其在不进一步纯化的情况下使用。
参考实施例2
4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺
方法A
步骤1：在小瓶中装入在MeCN(14mL)和H2O(6mL)中的2,4-二氯嘧啶(1.4当量，1312.6mg，8.8106mmol)、(2,6-二氟-4-吡啶基)硼酸(1g，6.29mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.07当量，325.60mg，0.44053mmol)及Cs2CO3(1.4当量，2870.7mg，0.697mL，8.81mmol)，用N2脱气，密封并且在95℃下加热3h。将溶液冷却，用水稀释并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将产物通过用EtOAc/庚烷梯度(0至30％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 24g柱)纯化以得到905mg呈灰白色固体状的2-氯-4-(2,6-二氟吡啶-4-基)嘧啶。
步骤2：在小瓶中装入在二噁烷(12mL)中的2-氯-4-(2,6-二氟-4-吡啶基)嘧啶(905mg，3.9763mmol)、2-甲基吡唑-3-胺(1.1当量，424.8mg，4.3739mmol)、Cs2CO3(1.5当量，1943.4mg，5.9644mmol)、Xantphos(0.20当量，460.16mg，0.79525mmol)及Pd2(dba)3(0.10当量，364.12mg，0.39763mmol)，用N2脱气，密封并且在℃下加热2h。添加额外的Pd2(dba)3(180mg)和Xantphos(230mg)并且继续加热2h。将溶液经由硅藻土过滤，在水(100mL)与EtOAc(2×50mL)之间分配。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤，在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用EtOAc/庚烷梯度(0至50％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 24g柱)纯化以得到455mg呈黄色固体状的4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺，将其在不另外纯化的情况下使用。
步骤3：向4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(455mg，1.263mmol)于EtOH(10mL)中的悬浮液中逐滴添加肼(3.0当量，0.123mL，3.788mmol)。在70℃下加热所得的深色混合物8h。冷却溶液并且在真空中浓缩。将所得的固体用H2O研磨并干燥以得到254mg 4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。
方法B
步骤1：将2-甲基硫烷基-1H-嘧啶-6-酮(143mg，1.0058mmol)和2-甲基吡唑-3-胺(2.0当量，2.0115mmol)在150℃下加热24h。将熔融物溶于DCM中并加载到用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的SiO2柱(12g)上以得到100mg 2-(2-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-3H-嘧啶-4-酮。
步骤2：将2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-1H-嘧啶-6-酮(1g，5.2304mmol)和POCl3(10mL，106.2mmol)在MeCN(10mL)中的混合物在配有冷凝器的开口烧瓶中在100℃下加热2h。在真空中浓缩混合物，将残余物在EtOAc与NaHCO3饱和水溶液之间分配。将有机萃取物用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物在用EtOAc/庚烷梯度(0至50％EtOAc)洗脱的SiO2柱(24g)上纯化以得到720mg(4-氯-嘧啶-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。1HNMR：CDCl3 400MHz；δ8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.48(d,J＝1.6Hz,1H),7.10(brs,1H),6.82(d,J＝5.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.2Hz,1H),3.79(s,3H)。
步骤3：在小瓶中装入在MeCN(22mL)中的(2,6-二氟-4-吡啶基)硼酸(1.20当量，9.16mmol)、4-氯-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(1.60g，7.63mmol)、(dppf)PdCl2(0.08当量，0.611mmol)及1M Cs2CO3水溶液(1.50当量，11.4mmol，1.0mol/L)，脱气，密封并在95℃下加热1.5h。将混合物在EtOAc与H2O之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物干燥，加载到40g SiO2柱上并用0-100％庚烷中的EtOAc洗脱以得到1.742g 4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺。1H NMR:CDCl3 400MHz；δ8.62(d,J＝5.6Hz,1H),755(d,J＝1.6Hz,1H),.7.43(s,2H),7.23(d,J＝5.6Hz,1H),6.95(brs,1H),6.36(d,J＝2.0Hz,1H),3.84(s,3H)；LCMS:(M+H+)：289.0
步骤4：向4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(455mg，455mg，1.263mmol)在EtOH(10mL)中的悬浮液中逐滴添加肼(3.0当量，123.9mg，0.123mL，3.788mmol)。在70℃下加热所得的深色混合物8h。将反应混合物冷却，在真空中浓缩并且用水研磨。将固体通过过滤收集，用少量的EtOH洗涤，干燥以得到254mg4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。
参考实施例3
3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)丙酸
步骤1：向4-甲基噻唑-2-甲醛1.8g，14.2mmol)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加3-(三苯基亚正膦基)二氢呋喃-2(3H)-酮(9.8g，28.4mmol，CASRN 34372-07-5)。将混合物在约26℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩并且通过用石油醚/EtOAc梯度(5至13％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法纯化以得到呈白色固体状的(Z)-3-((4-甲基噻唑-2-基)亚甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(1.35g，产率50％)。
步骤2：向化合物(Z)-3-((4-甲基噻唑-2-基)亚甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(1.35g，6.9mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，100mg)。将混合物在约26℃下在H2(30psi)下搅拌16h。滤掉催化剂并且浓缩滤液以得到呈微黄色油状的化合物3-((4-甲基噻唑-2-基)甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮(1.3g，产率95％)。
内酯环可在碱性条件下水解并且所得的羟基酸的羟基可如实验1中所述用叔丁基二甲基氯硅烷来甲硅烷基化。
实施例1
(R)-4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-15)
将在DCM(20mL)中的2-苄基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酸-叔丁基二甲基氯硅烷(4.4g，2.5当量，28.5mmol)逐滴添加至2-苄基-3-羟基-丙酸(2.419g，11.41mmol，CASRN 6811-98-9)和咪唑(9.0g，57.05mmol，5.0当量)在DMF(25mL)中的冷却至0至5℃的混合物中。搅拌混合物24h，在真空中浓缩并且将残余物在水与Et2O之间分配。将有机萃取物用水、1％柠檬酸水溶液、水连续洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到4.09g油状残余物，其在不纯化的情况下用于下一程序中。
将残余物添加到K2CO3(3.5g，2.5当量，25mmol)在水(50mL)和MeOH(100mL)中的混合物中。搅拌混合物24h，在真空中浓缩，用水(120mL)稀释并用Et2O萃取两次。丢弃有机萃取物并且用柠檬酸将水溶液酸化至pH 4。然后用Et2O萃取混合物，将有机层用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到10.23g 2-苄基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酸。MS:m/z 295
步骤5(方案A)：将HATU(224mg，1.15当量，0.5783mmol)逐份添加到6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙(151mg，0.5028mmol)、2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸(163mg，1.10当量，0.5531mmol)及TEA(0.21mL，3.0当量，1.508mmol)在DMF(3mL)中的混合物中。搅拌混合物1h。在真空中浓缩反应混合物，将残余物在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用水、1％柠檬酸水溶液、NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩以得到粗产物2-苄基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N'-(6-氟-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-亚基)丙烷酰肼(329mg，96％)，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS:m/z 577。
步骤6-将三苯基膦二溴化物(460mg，1.055mmol，2.5当量)添加到2-苄基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N'-(6-氟-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-亚基)丙烷酰肼(242mg，0.42mmol)和DIPEA(0.46mL，2.635mmol，6.25当量)在MeCN(6mL)中的混合物中并在密封小瓶中在60-80℃下加热溶液1h。将混合物冷却至RT，然后用水(5mL)搅拌20min。将混合物浓缩至较小体积，并且在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用1％柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用EtOAc/庚烷梯度(0至100％EtOAc)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到212mg(90％)4-(3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-苯基丙-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。MS：m/z 559。
步骤7：将BF3.Et2O(0.18mL，1.43mmol，8.0当量)添加到4-(3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-苯基丙-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(100mg，0.18mmol)在DCM(6mL)中的溶液中。搅拌混合物4h，在真空中浓缩并且将残余物在NaHCO3水溶液与EtOAc之间分配。将有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物用己烷/Et2O混合物(2:1)研磨并过滤以得到64mg(80％)2-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-3-苯基丙-1-醇。MS:m/z 445。
步骤8：方法A：将氢化钠(288mg，7.2mmol，20当量，60％矿物油分散体)逐份添加到2-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-3-苯基丙-1-醇(160mg，0.36mmol)在THF(20mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物20min，然后在密封小瓶中在85℃下加热2h。将混合物冷却至RT，用NH4Cl饱和水溶液淬灭并用MeTHF萃取。将有机萃取物用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到40mg(26％)外消旋4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-17)。
步骤8：方法B：在80℃下将在THF(1M，0.11mL，0.11mmol)中的双-(三甲基甲硅烷基)氨基钠一次加入2-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-3-苯基丙-1-醇(22mg，0.05mmol)在DMF(1.0mL)中的剧烈搅拌的溶液中。在添加之后即刻用5％KHSO4水溶液淬灭混合物，随后在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物在用MeOH/DCM梯度(0-8％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上纯化以得到9.3mg(44％)外消旋4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。MS:m/z425
通过手性载体上的SFC色谱法来拆分40mg外消旋混合物。
(R)-4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((R)-I-15：8.3mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.63-7.58(m,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.33-7.30(m,,4H),7.27–7.21(m,1H),6.95(d,J＝1.1Hz,1H),6.29(d,J＝2.0Hz,1H),4.56(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.42(dd,J＝11.0,6.2Hz,1H),4.08–3.99(m,1H),3.71(s,3H),3.35(dd,J＝14.0,6.1Hz,1H),3.03(dd,J＝14.0,8.3Hz,1H)；MS:m/z 425；并且
(S)-4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((S)-I-15)：8.7mg 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.2Hz,1H),7.66–7.60(m,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.35-7.30(m,4H),7.28–7.22(m,1H),6.95(d,J＝1.1Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.56(dd,J＝11.0,4.5Hz,1H),4.42(dd,J＝11.0,6.1Hz,1H),4.07–3.99(m,1H),3.71(s,3H),3.35(dd,J＝14.1,6.2Hz,1H),3.03(dd,J＝14.0,8.3Hz,1H)；MS：m/z 425.
可类似地制备4-(3-苄基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-38)，例外的是在步骤5中，用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-41)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-44)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氟-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(3-氟-4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-46)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氟-4-甲氧基-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-48)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备4-(3-(3-氟-4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-49)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氟-4-甲氧基-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-(2-甲基丁基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)嘧啶-2-胺(I-52)，例外的是在步骤5中，用2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-甲基己酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-55)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)2-(4-氯苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺
可类似地制备4-(3-(3-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-81)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-甲氧苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(3-氯-4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-82)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氯-4-氟苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(3-氯-4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-83)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氯-4-氟苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺
可类似地制备4-(3-(3-氯苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-88)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氯-苄基)-丙酸代替3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-苯基-丙酸。
可类似地制备4-(3-环丙基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-95)，例外的是在步骤5中，用3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-环丙基丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
可类似地制备4-(3-(3-氯苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-96)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-氯-苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备4-(3-(3-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-97)，例外的是在步骤5中，用3-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-甲氧苄基)-丙酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸并且用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-丙基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)嘧啶-2-胺(I-101)，例外的是在步骤5中，用2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-戊酸代替2-苄基-3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-丙酸。
实施例2
4-(3-(4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-44)
步骤1：向2-(4-氟苄基)丙二酸二甲酯(1g，4.037mmol)在THF(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH(106.36mg 4.44mmol)并且在RT下搅拌所得溶液过夜。用水稀释溶液并用EtOAc(30mL)洗涤。将水相用1N HCl酸化，用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到818mg(89.5％)呈澄清油状的单酯，其在不额外纯化的情况下使用：MS m/z 226。
步骤2：在N2下向2-[(4-氟苯基)甲基]-3-甲氧基-3-氧代基-丙酸(818mg，3.61mmol)在IPA(10mL)中的冰***液中逐滴添加在THF中的LiBH4(2M，3.61mL，7.23mmol)并且在0℃下搅拌所得溶液5h。通过逐滴添加1N HCl淬灭该溶液，伴随冷却(气体逸出！)直到溶液呈酸性。在真空中除去有机溶剂。用EtOAc(3×30mL)萃取含水残余物。将合并的萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩，以得到740mg(100％)呈澄清胶状的2-[(4-氟苯基)甲基]-3-羟基-丙酸，其在进一步纯化的情况下使用：MS m/z 198。
步骤3：将2-[(4-氟苯基)甲基]-3-羟基-丙酸(748mg，3.77mmol)、叔丁基-氯-二甲基-硅烷(3.41g，22.64mmol)及咪唑(3.08g，45.29mmol)在DMF(10mL)中的混合物在RT下搅拌过夜。将其用水稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用EtOAc/庚烷梯度(0至50％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法(ISCO24g柱)纯化以得到516mg(43.7％)呈澄清糖浆状的2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-(4-氟苯基)丙酸：MS m/z 312。
HATU介导2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-(4-氟苯基)丙酸和6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼(步骤4)的缩合，Ph3P.Br2介导酰基肼的环化(步骤5)并且醇的BF3.OEt2脱甲硅烷基化(步骤6)是根据实施例1的步骤5、6及7来进行。
步骤7：向2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-(4-氟苯基)丙-1-醇(93mg，0.20mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加DBU(0.45mL，3.01mmol)并且在RT下搅拌所得溶液15min，然后在75℃下加热4h。添加额外的DBU(0.45mL)并且在65℃下加热溶液过夜。在硅藻土上浓缩溶液。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 12g柱)纯化以得到32.5mg(36.5％)呈黄色固体状的I-44。
通过手性柱上的SFC色谱法拆分外消旋产物以得到：
(R)-4-(3-(4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.63(d,J＝5.3Hz,1H),7.43–7.29(m,3H),7.19–7.08(m,2H),6.95(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.58(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.43(dd,J＝11.0,6.0Hz,1H),4.08–3.97(m,1H),3.71(s,3H),3.36–3.21(m,1H),3.05(dd,J＝14.0,7.9Hz,1H)；MS:m/z 442.
(S)-4-(3-(4-氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.43–7.29(m,3H),7.19–7.08(m,2H),6.95(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.58(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.43(dd,J＝11.0,6.1Hz,1H),4.08–3.97(m,1H),3.71(s,3H),3.36–3.25(m,1H),3.05(dd,J＝14.1,7.9Hz,1H)；MS：m/z 442.
类似地制备4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-50)，例外的是用2-(4-甲氧苄基)丙二酸二甲酯代替2-(4-氟苄基)丙二酸二甲酯
(R)-4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.1Hz,1H),8.17(d,J＝1.2Hz,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.27–7.18(m,2H),6.95(d,J＝1.1Hz,1H),6.92–6.84(m,2H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.55(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.40(dd,J＝11.0,6.1Hz,1H),4.03–3.92(m,1H),3.72(d,J＝11.5Hz,6H),3.34–3.23(m,1H),2.97(dd,J＝14.1,8.4Hz,1H)；MS:m/z 454.
(S)-4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.27–7.18(m,2H),6.95(d,J＝1.1Hz,1H),6.92–6.84(m,2H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.55(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.40(dd,J＝11.0,6.1Hz,1H),4.03–3.92(m,1H),3.72(d,J＝11.5Hz,6H),3.35–3.23(m,1H),2.97(dd,J＝14.1,8.4Hz,1H)；MS:m/z 454.
类似地制备4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-53)，例外的是用2-(3,4-二氟苄基)丙二酸二甲酯代替2-(4-氟苄基)丙二酸二甲酯。
(R)-4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.64(d,J＝5.2Hz,1H),7.49–7.30(m,3H),7.18–7.11(m,1H),6.97(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.61(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.45(dd,J＝11.0,6.0Hz,1H),4.12–4.00(m,1H),3.71(s,3H),3.27(d,J＝7.4Hz,1H),3.08(dd,J＝14.1,7.4Hz,1H)；MS:m/z 460.
(S)-4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.2Hz,1H),7.64(d,J＝5.2Hz,1H),7.49–7.30(m,3H),7.19–7.10(m,1H),6.97(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.61(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.45(dd,J＝11.0,6.0Hz,1H),4.12–4.00(m,1H),3.71(s,3H),3.27(q,J＝13.4,9.1Hz,3H),3.08(dd,J＝14.1,7.4Hz,1H)；MS:m/z 460.
类似地制备4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-54)，例外的是在步骤1中，用2-(3,4-二氟苄基)丙二酸二甲酯代替2-(4-氟苄基)丙二酸二甲酯且在步骤4中，用2'-氟-6'-肼基-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-[4,4'-联吡啶]-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
(R)-4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.1Hz,1H),7.64(d,J＝5.2Hz,1H),7.49–7.30(m,3H),7.18–7.11(m,1H),6.97(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.61(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.45(dd,J＝11.0,6.0Hz,1H),4.12–4.00(m,1H),3.71(s,3H),3.27(d,J＝7.4Hz,1H),3.08(dd,J＝14.1,7.4Hz,1H)；MS:m/z 459.
(S)-4-(3-(3,4-二氟苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.17(d,J＝1.2Hz,1H),7.64(d,J＝5.2Hz,1H),7.49–7.30(m,3H),7.19–7.10(m,1H),6.97(d,J＝1.2Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.61(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.45(dd,J＝11.0,6.0Hz,1H),4.12–4.00(m,1H),3.71(s,3H),3.27(q,J＝13.4,9.1Hz,3H),3.08(dd,J＝14.1,7.4Hz,1H)；MS：m/z 459.
类似地制备4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺，例外的是在步骤1中，用2-(4-甲氧苄基)丙二酸二甲酯代替2-(4-氟苄基)丙二酸二甲酯且在步骤4中，用2'-氟-6'-肼基-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-[4,4'-联吡啶]-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
(R)-4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.21(d,J＝5.3Hz,1H),7.66(d,J＝1.2Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.26–7.13(m,3H),7.09–7.03(m,1H),6.93–6.84(m,2H),6.59(d,J＝1.2Hz,1H),6.28(d,J＝1.9Hz,1H),4.55(dd,J＝11.0,4.4Hz,1H),4.40(dd,J＝11.0,6.2Hz,1H),4.02–3.91(m,1H),3.71(d,J＝18.6Hz,6H),3.35–3.22(m,1H),2.97(dd,J＝14.1,8.4Hz,1H)；MS：m/z 453.
(S)-4-(3-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.21(d,J＝5.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.35(s,1H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),7.17(d,J＝5.3Hz,1H),7.06(s,1H),6.88(d,J＝8.0Hz,2H),6.59(s,1H),6.28(s,1H),4.54(d,J＝4.4Hz,1H),4.40(t,J＝5.4Hz,1H),3.96(s,1H),3.71(d,J＝18.7Hz,6H),3.01–2.93(m,1H)；MS：m/z 453.
实施例3
4-(3-异丁基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-10)
步骤5(方案A)：将HATU(338mg，0.88mmol)添加到6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙(218mg，0.72mmol)、2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸(218mg，0.88mmol)及TEA(0.36mL，2.54mmol)在DMF(6mL)中的混合物中。搅拌混合物2h，在真空中浓缩并且将残余物在水与EtOAc之间分配。将合并的有机萃取物用水、1％柠檬酸水溶液、NaHCO3饱和水溶液、水、盐水连续洗涤，随后干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用EtOAc/庚烷梯度(0至90％EtOAc)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到217mg(52％)N-[2-[[(Z)-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]氨基]氨基甲酰基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯。MS：m/z 577。
步骤6：将N-[2-[[(Z)-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]氨基]氨基甲酰基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯(217mg，0.38mmol)、DIPEA(0.57mL，3.26mmol)及Ph3P.Br2(611mg，1.45mmol)在MeCN(5mL)中的混合物在80℃下在密封小瓶中加热30min。将混合物冷却至RT，与水(5mL)混合并搅拌20min。然后将混合物在EtOAc与水之间分配。将有机萃取物用NaHCO3饱和水溶液、1％柠檬酸水溶液、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至7％MeOH)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到130mg(70％)(2-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-甲基戊基)氨基甲酸叔丁酯。MS:m/z 510。
步骤7：将N-[2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.26mmol)在TFA(3mL，39.68mmol)和DCM(3mL)中的混合物搅拌1h。在真空中浓缩混合物，用Et2O研磨残余物并且倾析出Et2O。半固体残余物4-(3-(1-氨基-4-甲基戊-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺双-三氟乙酸盐(168mg)在不进一步纯化的情况下使用。MS:m/z 410。
步骤8：将4-(3-(1-氨基-4-甲基戊-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺双-三氟乙酸盐(168mg，0.26mmol)在吡啶(8mL)中的混合物在110℃下加热30min。在真空中浓缩混合物并且将残余物从EtOAc/MeOH混合物中再结晶以得到86mg(87％)外消旋4-(3-异丁基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-10)。MS：m/z 390。
通过手性色谱法拆分外消旋混合物以得到：
(S)-4-(3-异丁基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(S)-I-10，34mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),7.83(d,J＝2.1Hz,1H),7.66(d,J＝1.2Hz,1H),7.48(d,J＝5.3Hz,1H),7.38(d,J＝1.9Hz,1H),6.53(d,J＝1.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.62(ddd,J＝11.8,5.0,2.4Hz,1H),3.49(dd,J＝7.0,5.0Hz,1H),3.22(ddd,J＝11.9,6.7,1.8Hz,1H),1.95(dq,J＝13.4,6.7Hz,1H),1.81(dt,J＝14.2,7.2Hz,1H),1.49(dt,J＝13.6,7.2Hz,1H),1.02(d,J＝6.5Hz,3H),0.96(d,J＝6.6Hz,3H).MS：m/z 390.
(R)-4-(3-异丁基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(R)-I-10：34mg。MS：m/z 390。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-苯基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)嘧啶-2-胺(I-1)，例外的是在步骤5中，用3-((叔丁氧羰基)氨基)-2-苯基丙酸(CASRN 67098-56-0)代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
(R)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-苯基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)嘧啶-2-胺((R)I-1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.51(s,1H),8.57(d,J＝5.2Hz,1H),7.99(s,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.52(d,J＝5.3Hz,1H),7.38–7.23(m,6H),6.61(d,J＝1.2Hz,1H),6.31(d,J＝2.0Hz,1H),4.84(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),3.81(dd,J＝10.3,5.4Hz,1H),3.72(s,3H),3.59–3.49(m,1H).MS：m/z 410
(S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-苯基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)嘧啶-2-胺((S)I-1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.99(d,J＝2.5Hz,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.52(d,J＝5.3Hz,1H),7.39–7.25(m,6H),6.61(d,J＝1.3Hz,1H),6.31(d,J＝1.9Hz,1H),4.84(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),3.81(dd,J＝10.4,5.2,1H),3.72(s,3H),3.59–3.50(m,1H).MS:m/z 410.
可类似地制备4-(3-苄基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-2)，例外的是在步骤5中，用N-Boc 3-氨基-2-苄基丙酸(CASRN67098-56-0)代替2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
(R)-4-(3-苄基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((R)I-2)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),7.78(d,J＝2.1Hz,1H),7.70(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝1.9Hz,1H),7.36–7.31(m,4H),7.29–7.22(m,1H),6.54(d,J＝1.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),3.77(ddd,J＝9.6,4.9,2.0Hz,1H),3.71(s,2H),3.46–3.35(m,2H),3.24–3.16(m,1H),2.91(dd,J＝13.8,9.5Hz,1H).MS:424.
(S)-4-(3-苄基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((S)I-2)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),7.78(d,J＝2.4Hz,1H),7.70(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝1.9Hz,1H),7.34(d,J＝4.4Hz,3H),7.28-7.22(m,1H),6.54(d,J＝1.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),3.77(ddd,J＝9.5,4.8,2.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.47–3.35(m,2H),3.24–3.16(m,1H),2.91(dd,J＝13.8,9.5Hz,1H).MS:m/z424.
可类似地制备(S)-4-(3-异丙基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-3)，例外的是在步骤5中，用(2S)-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲基-丁酸(CASRN1233517-91-3)代替2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(s,1H),8.61(d,J＝5.1Hz,1H),8.33(s,1H),7.65(d,J＝1.2Hz,1H),7.53(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),6.76(d,J＝1.1Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),3.72(s,3H),3.64(ddd,J＝12.3,5.3,2.3Hz,1H),2.21(dq,J＝13.4,6.7Hz,1H),1.11–1.03(m,6H).MS:m/z 376.
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-5)，例外的是在步骤5中，用2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(4-氯-苯基)丙酸代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-甲氧苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-11)，例外的是在步骤5中，用2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(4-甲氧基苯基)丙酸(CASRN683218-95-3)代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(3-氟-4-甲氧苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-12)，例外的是在步骤5中，用2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙酸代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氯-3-氟苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-14)，例外的是在步骤5中，用2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸(CASRN1001179-21-0)代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氟苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-21)，例外的是在步骤5中，用2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(4-氟-苯基)丙酸(CASRN1255099-58-1)代替(R,S)-2-异丁基-3-(Boc-氨基)丙酸。
实施例4
4-(3-苄基-3,4-二氢-5-硫杂-1,1,2a1-三氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-16)
(方案C)步骤1：将2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-苯基-丙-1-醇(85mg，0.1912mmol)、Ph3P.Br2(282.5mg，3.5当量，0.6693mmol)及DIPEA(0.267mL，8.0当量，1.530mmol)在MeCN(15mL)中的混合物在80℃下在密封小瓶中加热3h。将混合物在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用水、柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至7％MeOH)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到62mg 4-[3-(1-苄基-2-溴-乙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺。
步骤2：将4-[3-(1-苄基-2-溴-ethyl)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(62mg，0.1222mmol)和磺酰基钠水合物(45.7mg，5.0当量，0.6110mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌1h。在真空中浓缩混合物，将残余物在饱和NaHCO3与MeTHF之间分配。将有机萃取物用水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至7％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上纯化以得到40mg I-16。通过手性柱上的SFC色谱法来拆分外消旋产物。
用仲胺对溴乙基衍生物进行分子内环化同样得到在三环中用叔胺制备类似物的程序。
外消旋4-(3-苄基-5-乙基-4,5-二氢-3H-1,1,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-17)
将4-[3-(1-苄基-2-溴-乙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(47mg，0.093mmol)和EtNH2(0.12mL，1.86mmol)在THF中的混合物在75℃下在密封小瓶中加热3h。将混合物在真空中浓缩并且将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上纯化以得到28mg呈黄色泡沫状的外消旋4-(3-苄基-5-乙基-4,5-二氢-3H-1,1,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。MS:m/z 452。通过手性SFC色谱法拆分外消旋产物。
(S)-4-(3-苄基-5-乙基-4,5-二氢-3H-1,1,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(11mg)((S)I-17)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.76(s,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝1.9Hz,1H),7.33(m,4H),7.29–7.22(m,1H),6.59(s,1H),6.31(d,J＝1.9Hz,1H),3.87(dq,J＝10.6,5.7Hz,1H),3.71(s,3H),3.58–3.30(m,5H),2.93(dd,J＝13.9,9.1Hz,1H),1.18(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:m/z 452.
(R)-4-(3-苄基-5-乙基-4,5-二氢-3H-1,1,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(11mg)((R)I-17)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),8.57(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(d,J＝1.1Hz,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝1.9Hz,1H),7.35–7.30(m,4H),7.28–7.21(m,1H),6.59(d,J＝1.1Hz,1H),6.31(d,J＝1.9Hz,1H),3.87(dq,J＝10.8,5.7Hz,1H),3.71(s,3H),3.58–3.30(m,5H),2.93(dd,J＝13.9,9.1Hz,1H),1.18(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:m/z 452
实施例5
4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-36)
将2-[(4-氯苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯(330mg，1.055mmol)在DCM(4.0mL)和TFA(2.0mL)中的溶液在RT下搅拌18h。浓缩反应物并且在水中稀释，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。粗产物3-[(4-氯苯基)甲基]-4-甲氧基-4-氧代基-丁酸在不进一步纯化的情况下用于下一步中。
步骤2：在0℃下向3-[(4-氯苯基)甲基]-4-甲氧基-4-氧代基-丁酸(270mg，1.0519mmol)在THF(9.0mL)中的溶液中添加BH3.SMe2(1400mg，1.6mL，3.165mmol)。在RT下搅拌反应混合物18h。反应物用水淬灭并用EtOAc萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到2-[(4-氯苯基)甲基]-4-羟基-丁酸甲酯。粗产物在进一步纯化的情况下使用。
步骤3：将2-[(4-氯苯基)甲基]-4-羟基-丁酸甲酯(256mg，1.0548mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(655.7mg，4.220mmol)及咪唑(574.6mg，0.558mL，8.440mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在RT下搅拌18h。反应物用水淬灭并用EtOAc萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过用EtOAc/庚烷梯度(产物用10％EtOAc洗脱)洗脱的SiO2色谱纯化。
步骤4：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]丁酸甲酯(376mg，1.053mmol)在THF(4.0mL)和水(4.0mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(86mg，2.0mmol)。将反应混合物在RT下搅拌过夜。浓缩反应物，然后用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。粗产物在进一步纯化的情况下使用。
步骤5：向4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸(1.2当量，313.5mg，0.9990mmol)、HATU(1.2当量，387.6mg，0.9990mmol)及DIPEA(2当量，215.2mg，0.290mL，1.665mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(250mg，0.8325mmol)。在RT下搅拌所得的深色混合物3h。将反应物用1N NaHCO3淬灭，用更多的水稀释并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO,12g柱)纯化以得到283mg呈黄色固体状的4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-N'-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]丁烷酰肼。
步骤6：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-N'-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]丁烷酰肼(198mg，0.3167mmol)在MeCN(12.0mL)中的溶液中添加DIPEA(372.1mg，0.501mL，2.850mmol)和Ph3P.Cl2(323.0mg，0.9501mmol)。在RT下搅拌反应物1h。反应物用水淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(产物用5％MeOH洗脱)洗脱的SiO2色谱法纯化。
步骤7：向4-[3-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-[(4-氯苯基)甲基]丙基]-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(110mg，0.1812mmol)在DCM(10.0mL)中的溶液中添加BF3.OEt2(123.6mg，0.1102mL，0.8709mmol)。在RT下搅拌反应物18h。将粗产物浓缩并且通过用MeOH/DCM梯度(产物用10％MeOH洗脱)洗脱的SiO2色谱法纯化。
步骤8：向4-(4-氯苯基)-3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁-1-醇(70mg，0.1420mmol)在THF(15.0mL)中的溶液中添加NaH(34.08mg，0.8521mmol，60％矿物油分散体)。在RT下搅拌反应物20min，然后加热至60℃持续1h。反应物用水淬灭并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(产物用5％MeOH洗脱)洗脱的SiO2色谱法纯化并最终通过手性SFC拆分。
(S)I-36：1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.58–9.47(s,1H),8.63–8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.29–8.19(d,J＝1.4Hz,1H),7.69–7.59(d,J＝5.3Hz,1H),7.43–7.27(m,5H),7.07–6.98(d,J＝1.5Hz,1H),6.34–6.23(d,J＝1.9Hz,1H),4.67–4.56(ddd,J＝12.2,6.6,4.0Hz,1H),4.53–4.39(ddd,J＝12.1,7.9,3.9Hz,1H),3.95–3.80(tt,J＝9.9,5.3Hz,1H),3.74–3.67(s,3H),3.66–3.57(dd,J＝13.7,5.2Hz,1H),3.19–3.07(dd,J＝13.8,8.9Hz,1H),2.28–2.14(dt,J＝15.6,5.3Hz,1H),2.12–1.95(ddd,J＝18.9,9.4,4.3Hz,1H).
(R)I-36：1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.59–9.46(s,1H),8.62–8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.28–8.19(d,J＝1.5Hz,1H),7.67–7.60(d,J＝5.2Hz,1H),7.43–7.26(m,5H),7.05–6.96(d,J＝1.5Hz,1H),6.33–6.20(d,J＝1.9Hz,1H),4.67–4.56(ddd,J＝12.4,6.7,4.0Hz,1H),4.52–4.41(ddd,J＝12.0,7.8,3.8Hz,1H),3.95–3.81(tt,J＝9.7,5.3Hz,1H),3.75–3.67(s,3H),3.66–3.57(dd,J＝13.8,5.3Hz,1H),3.17–3.08(dd,J＝13.8,8.9Hz,1H),2.28–2.14(m,1H),2.13–1.95(m,1H).
可类似地制备4-(9-(4-氟苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,1,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-58)，例外的是在步骤1中，用2-[(4-氟苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯代替2-[(4-氯苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯。
可类似地制备4-(9-(3-氟-4-甲氧苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,1,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-59)，例外的是在步骤1中，用2-[(3-氟-4-甲氧基-苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯代替2-[(4-氯苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯。
可类似地制备4-(9-((苄氧基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-29)，例外的是在步骤1中，用2-苄氧基甲基-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-丁酸代替2-[(4-氯苯基)甲基]丁二酸O4-叔丁酯O1-甲酯。
可类似地制备4-(9-(2-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-30)，例外的是在步骤5中，用4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(2-氯-苄基)-丁酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸并用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-(3,3,3-三氟丙基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-102)，例外的是在步骤5中，用2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-5,5,5-三氟-戊酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-丙基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺(I-103)，例外的是在步骤5中，用2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-戊酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸并用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-氟-6-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-丙基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-104)，例外的是在步骤5中，用2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基甲基)-戊酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-(2,2,2-三氟乙基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-106)，例外的是在步骤5中，用2-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙基]-4,4,4-三氟-丁酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸。
可类似地制备4-(9-异丁基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-107)，例外的是在步骤5中，用2-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙基]-4-甲基-戊酸代替4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-氯-苄基)-丁酸。
实施例6
N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(3-苯基-4,5-二氢-3H-1,1,2a1,5-四氮杂苊-7-基)吡啶-2-胺(I-4)
步骤1：向4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺(参考实施例1，128mg，0.4277mmol)在DMF(6.0mL)中的溶液中添加DIPEA(111.7mg，0.150mL，0.8553mmol)、3-叔丁氧羰基氨基-2-苯基丙酸(151mg，0.5560mmol)及HATU(234.7mg，0.5987mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。反应物用水淬灭并用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(产物用10％MeOH洗脱)洗脱的SiO2色谱法纯化以得到203mg N-[3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-4-吡啶基]-2-吡啶基]肼基]-3-氧代基-2-苯基-丙基]氨基甲酸叔丁酯。
步骤2：向N-[3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-4-吡啶基]-2-吡啶基]肼基]-3-氧代基-2-苯基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(203mg，0.3714mmol)、Ph3P(147.6mg，0.5571mmol)及TMSN3(45.04mg，0.0521mL，0.3714mmol)在THF(3.5mL)中的混合物中添加DEAD(114.1mg，0.10mL，0.5571mmol)。搅拌反应物15min，然后浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(用7％MeOH洗脱)洗脱的SiO2纯化以得到87mg N-[2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-4-吡啶基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯。
步骤3：向N-[2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-4-吡啶基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(86mg，0.1627mmol)在DCM(1.5mL)中的溶液中添加TFA(0.3mL)。搅拌反应物30min。将反应物浓缩并用醚洗涤。粗产物在不进一步纯化的情况下使用。
步骤4：将4-[3-(2-氨基-1-苯基-乙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺(70mg，0.1634mmol)在吡啶(6.0mL)中的溶液在100℃下加热30min。将反应物浓缩并通过反相HPLC纯化并且通过手性色谱法拆分外消旋混合物。
峰1(S)I-4：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91–8.85(s,1H),8.23–8.18(d,J＝5.3Hz,1H),7.96–7.89(t,J＝2.1Hz,1H),7.39–7.24(m,6H),7.15–7.10(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.04–6.99(d,J＝1.4Hz,1H),6.30–6.25(d,J＝1.9Hz,1H),6.16–6.11(d,J＝1.3Hz,1H),4.87–4.79(dd,J＝6.6,5.0Hz,1H),3.85–3.77(ddd,J＝11.8,5.0,2.2Hz,1H),3.73–3.67(s,3H),3.60–3.52(ddd,J＝12.0,6.7,2.0Hz,1H).
峰2(R)-I-4：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90–8.86(s,1H),8.22–8.18(d,J＝5.4Hz,1H),7.95–7.89(t,J＝2.2Hz,1H),7.39–7.23(m,6H),7.14–7.11(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.04–7.00(d,J＝1.5Hz,1H),6.29–6.25(d,J＝1.9Hz,1H),6.15–6.11(d,J＝1.3Hz,1H),4.86–4.80(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),3.85–3.78(ddd,J＝12.0,5.0,2.3Hz,1H),3.73–3.67(s,3H),3.60–3.52(ddd,J＝12.0,6.7,2.0Hz,1H).
可类似地制备4-(3-苄基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-7)3-叔丁氧羰基氨基-2-苯基丙酸，例外的是在步骤1中，用α-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]甲基]-苄基-3-丙酸(CASRN 26250-90-8)代替3-叔丁氧羰基氨基-2-苯基丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-8)，例外的是在步骤1中，用2-(B0c-氨基甲基)-3-(4-氯苯基)-丙酸(CASRN 626220-65-3)代替3-叔丁氧羰基氨基-2-苯基丙酸。
实施例7
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-42)
步骤1(方案F)：将4-氯吡唑(2.66g，24.6mmol)、3-亚甲基二氢-2(3H)-呋喃酮(2.16g，22mmol)及1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(335mg，2.2mmol)在MeCN(30mL)中的混合物搅拌过夜。在真空中浓缩混合物。将残余物在***与1％柠檬酸水溶液之间分配。将有机萃取物用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩以得到4.9g粗产物3-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS:m/z 201
步骤2：将3-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]四氢呋喃-2-酮(4.9g，22mmol)和LiOH水溶液(1.0M，44mL，44mmol)在THF(10mL)中的混合物在50℃下在密封小瓶中搅拌2h。将混合物冷却至RT，用4N HCl水溶液(11mL，44mmol)中和，调节至pH 4并在高真空中浓缩至干燥以得到2-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-羟基丁酸与氯化锂的混合物，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS:m/z 219
步骤3：将在DCM(20mL)中的叔丁基-氯-二甲基-硅烷(11.61g，77mmol)逐滴添加到来自步骤2的2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]-4-羟基-丁酸与LiCl的粗混合物中，然后添加在DMF(30mL)中的咪唑(13.480g，198mmol)。搅拌混合物36h，然后在真空中浓缩。将残余物在EtOAc/Et2O混合物与水之间分配。将有机萃取物用1％柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩以得到呈油状的残余物4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)丁酸(5.01g，68％)，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS：m/z 333。
步骤4：将HATU(2.52g，6.49mmol)添加到4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]丁酸(2.0g，5.41mmol)、[4-(2-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺(1.52g，5.41mmol)及TEA(1.13mL，8.11mmol)在DMF(20mL)中的混合物中。搅拌混合物30min，在真空中浓缩并且将残余物在EtOAc与水之间分配。将合并的有机萃取物用水、NaHCO3水溶液、1％柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用EtOAc/庚烷梯度(0至70％EtOAc)洗脱的40g SiO2柱上纯化以得到2.457g(74％)4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-N'-(6-氟-2'-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)-[4,4'-联吡啶]-2(1H)-亚基)丁烷酰肼。MS：m/z614
步骤5：在惰性气氛下将Ph3P.Br2(5.07g，12mmol)逐份添加到4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]-n-[(z)-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]-4-吡啶基]-1h-吡啶-2-亚基]氨基]丁酰胺(2457mg，4mmol)和DIPEA(5.60mL，32mmol)在MeCN(20mL)中的混合物中。在RT下搅拌混合物2h。添加水(5mL)到以上混合物中并且在搅拌20min之后，在真空中浓缩混合物。将残余物在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用水、1％柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩以得到4-(3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-1H-吡唑-1-基)丁-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺与三苯基膦氧化物的混合物，其在不分离的情况下用于下一步中。MS:m/z 596
步骤6&7：向4-(3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-1H-吡唑-1-基)丁-2-基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(4.0mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加在THF中的TBAF(1M，10mL，10mmol)。搅拌混合物3h，浓缩并且将残余物在MeTHF与水之间分配。将有机萃取物用水、盐水洗涤3次，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的80g SiO2柱上纯化以得到1.40g(76％)呈黄色泡沫状的外消旋4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-42)。MS：m/z 462通过手性SFC色谱法拆分外消旋产物。
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((R)I-42)：35mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.25(d,J＝1.4Hz,1H),8.03(s,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.03(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.69–4.58(m,2H),4.50(ddd,J＝12.0,8.0,3.5Hz,1H),4.12(tt,J＝8.4,5.5Hz,1H),3.72(s,3H),2.25–2.03(m,2H).MS:m/z463.
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((S)I-42)：39mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.56(s,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.03(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.8Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.69–4.56(m,2H),4.50(ddd,J＝12.1,8.0,3.5Hz,1H),4.12(tt,J＝8.3,5.5Hz,1H),3.71(s,3H),2.24–2.02(m,2H).MS：m/z463.
可类似地制备(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺((R)I-47)，例外的是在步骤4中，用(2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替[4-(2-肼基-吡啶-4-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺。通过手性SFC色谱法拆分外消旋混合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(s,1H),8.21(d,J＝5.3Hz,1H),8.04(d,J＝0.7Hz,1H),7.79(d,J＝1.5Hz,1H),7.56(d,J＝0.7Hz,1H),7.35(d,J＝1.8Hz,1H),7.21(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.10(d,J＝2.1Hz,1H),6.66(d,J＝1.5Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.3Hz,1H),4.63(ddt,J＝9.6,8.3,4.1Hz,2H),4.50(ddd,J＝12.1,8.1,3.5Hz,1H),4.11(tt,J＝8.6,5.5Hz,1H),3.69(s,3H),2.24–2.03(m,2H)；MS:m/z 462.
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-73)，例外的是在步骤1中，用4-三氟甲基吡唑代替4-氯吡唑以得到外消旋I-73，通过手性载体上的色谱法对其进行拆分。
(S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺((S)I-73)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.46(s,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.91(s,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.03(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),5.01(dd,J＝13.8,5.5Hz,1H),4.76–4.60(m,2H),4.51(ddd,J＝12.0,7.8,3.8Hz,1H),4.18(tt,J＝8.5,5.7Hz,1H),3.71(s,3H,2.26–2.08(m,2H).MS:m/z497.
(R)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺((R)I-73)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.46(s,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.91(s,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.03(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),5.01(dd,J＝13.8,5.5Hz,1H),4.75–4.60(m,2H),4.51(ddd,J＝12.1,7.8,3.8Hz,1H),4.19(tt,J＝8.5,5.6Hz,1H),3.71(s,3H),2.25–2.08(m,2H).MS:m/z497.
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺(I-89)，例外的是在步骤1中，用4-三氟甲基吡唑代替4-氯吡唑并且在步骤4中用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。
(R)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺((R)I-89)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),8.46(s,1H),8.21(d,J＝5.3Hz,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝1.5Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.21(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.09(d,J＝1.6Hz,1H),6.66(d,J＝1.5Hz,1H),6.28(d,J＝1.8Hz,1H),5.01(dd,J＝13.8,5.5Hz,1H),4.76–4.60(m,2H),4.52(ddd,J＝12.1,7.9,3.8Hz,1H),4.23–4.11(m,1H),3.69(s,3H),2.28–2.04(m,2H).MS:m/z 496
(S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺((S)I-89)1H NMR(400MHz,DMSO d6)δ8.84(s,1H),8.45(s,1H),8.21(d,J＝5.3Hz,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝1.5Hz,1H),7.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.21(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.09(d,J＝1.6Hz,1H),6.66(d,J＝1.5Hz,1H),6.28(d,J＝1.8Hz,1H),5.01(dd,J＝13.8,5.5Hz,1H),4.78–4.59(m,2H),4.52(ddd,J＝12.1,7.9,3.8Hz,1H),4.17(tt,J＝8.6,5.7Hz,1H),3.69(s,3H),2.28-205(m,2H).MS:m/z 496
可类似地制备4-(9-((4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-56)，例外的是在步骤1中，用4-环丙基-吡唑代替4-氯吡唑以得到外消旋I-56，通过手性载体上的色谱法对其进行拆分。
(R)-4-(9-((4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((R)I-56)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.51(t,J＝0.6Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.24(d,J＝0.8Hz,1H),7.02(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.85(dd,J＝13.8,4.9Hz,1H),4.68–4.41(m,3H),4.07(tt,J＝8.8,5.3Hz,1H),3.71(s,3H),2.22–1.96(m,2H),1.66(tt,J＝8.4,5.1Hz,1H),0.86–0.71(m,2H),0.50–0.36(m,2H)..MS：m/z 496MS:m/z 469
(S)-4-(9-((4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺((S)I-56)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.59(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.51(t,J＝0.6Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.24(d,J＝0.8Hz,1H),7.02(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.85(dd,J＝13.8,4.9Hz,1H),4.68–4.41(m,3H),4.07(tt,J＝8.8,5.3Hz,1H),3.71(s,3H),2.22–1.96(m,2H),1.66(tt,J＝8.4,5.1Hz,1H),0.86–0.71(m,2H),0.50–0.36(m,2H).MS:m/z 469.
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-92)，例外的是在步骤4中，用4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-甲基-异噁唑-5-基甲基)-丁酸代替4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]丁酸。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((3-甲基异噁唑-5-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-93)，例外的是在步骤4中，用4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(3-甲基-异噁唑-5-基甲基)-丁酸代替4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]丁酸。
可类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-((4-甲基噻唑-2-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-109)，例外的是在步骤4中，用4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-2-(4-甲基-噻唑-2-基甲基)-丁酸代替4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]丁酸。
实施例8
4-(3-(4-氯-3-氟苄基)-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-32)
步骤1向2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸(268mg，0.8077mmol)在THF(6mL)中的在冰浴中冷却的溶液中添加MeI(10当量，1.146g，0.5030mL，8.077mmol)，然后逐份添加NaH(4当量，129.2mg，3.231mmol，60％矿物油分散体)。将所得混合物在RT下搅拌过夜。将反应物用饱和NaHCO3淬灭，用水(10mL)稀释并且用EtOAc洗涤。将水层用1N HCl酸化，用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。粗产物在不进一步纯化的情况下使用。
步骤2：向2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸(1.3当量，149.7mg，0.4329mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(1.5当量，193.8mg，0.4995mmol)和4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(100mg，0.3330mmol)，然后添加DIPEA(2当量，86.08mg，0.116mL，0.6660mmol)并且在RT下搅拌所得溶液2h。将溶液用水稀释，用EtOAc(2×15mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤，在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO,12g柱)纯化以得到194mg呈黄色固体状的N-[2-[(4-氯-3-氟-苯基)甲基]-3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]肼基]-3-氧代基-丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯，其在不进一步纯化的情况下使用。
步骤3：向N-[2-[(4-氯-3-氟-苯基)甲基]-3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]肼基]-3-氧代基-丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.3025mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加Ph3.Br2(3当量，390.9mg，0.9075mmol)，然后添加DIPEA(5当量，0.264mL，1.512mmol)并且在70℃下加热反应物2h。将反应混合物用水稀释，用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的EtOAc萃取物用0.5％柠檬酸洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO,12g柱)纯化以得到200mg呈黄色油状的N-[3-(4-氯-3-氟-苯基)-2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯。
步骤4：向N-[3-(4-氯-3-氟-苯基)-2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(200mg，200mg，0.3278mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.8mL)并且在RT下搅拌溶液45min。将反应混合物在真空中浓缩并且在不进一步纯化的情况下使用。
步骤5：将4-[3-[1-[(4-氯-3-氟-苯基)甲基]-2-(甲基氨基)乙基]-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(170mg，0.3334mmol)在吡啶(4mL)中的溶液在100℃下加热1h，冷却并在真空中浓缩以得到I-32。将产物通过rHPLC纯化并在手性SFC柱上拆分。
可类似地制备4-(3-苄基-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-9)，例外的是省略步骤1并且在步骤2中，用N-Boc-N-甲基-苯丙氨酸(CASRN 64623-83-8)代替2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氯苄基)-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-13)，例外的是在步骤1中，用2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-苯基)丙酸代替2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸。
峰1(R)I-13 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89–8.82(s,1H),8.23–8.14(d,J＝5.3Hz,1H),7.42–7.31(m,5H),7.27–7.23(s,1H),7.19–7.14(dd,J＝5.4,1.5Hz,1H),7.12–7.07(s,1H),6.31–6.24(d,J＝1.8Hz,1H),6.14–6.07(s,1H),3.94–3.83(m,1H),3.73–3.66(s,3H),3.51–3.44(dd,J＝11.9,5.1Hz,1H),3.43–3.33(dd,J＝13.8,5.6Hz,1H),3.11–3.04(s,3H),3.02–2.93(dd,J＝13.9,8.6Hz,1H).
峰2(S)I-13 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89–8.82(s,1H),8.23–8.16(dd,J＝5.2,0.7Hz,1H),7.42–7.31(m,5H),7.28–7.23(d,J＝1.1Hz,1H),7.20–7.13(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.13–7.07(dd,J＝1.6,0.8Hz,1H),6.30–6.25(d,J＝1.9Hz,1H),6.14–6.06(d,J＝1.2Hz,1H),3.93–3.83(tt,J＝7.6,5.5Hz,1H),3.72–3.67(s,3H),3.51–3.44(dd,J＝11.9,5.1Hz,1H),3.42–3.35(dd,J＝13.9,5.6Hz,1H),3.10–3.03(s,3H),3.02–2.93(dd,J＝13.9,8.6Hz,1H).
可类似地制备4-(3-(4-甲氧苄基)-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-18)，例外的是在步骤1中，用2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-甲氧基-苯基)丙酸代替2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸并且在步骤2中，用(2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺。
可类似地制备4-(3-异丁基-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-20)，例外的是省略步骤1并且在步骤2中，用N-Boc-N-甲基亮氨酸(CASRN 13734-32-2)代替2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸。
可类似地制备4-(3-(4-氟苄基)-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-I-42吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-31))，例外的是在步骤1中，用2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氟-苯基)丙酸代替2-[[叔丁氧羰基(甲基)氨基]甲基]-3-(4-氯-3-氟-苯基)丙酸。
实施例9
4-(9-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-91)
(方案G)步骤1：向5-氟吡啶-3-醇(1.02g，9.00mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加K2CO3(1.25当量)并且在RT下搅拌溶液5min。逐滴添加α-溴-γ-内酯(1.35g，1350mg，0.775mL，8.18mmol)并且在RT下搅拌整个周末。将溶液用水(100mL)稀释，用EtOAc(3×80mL)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过在用EtOAc/DCM梯度(0至20％EtOAc)洗脱的40g ISCO柱上的SiO2色谱法纯化以得到0.795g呈白色固体状的3-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]四氢呋喃-2-酮。
步骤2：向3-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]四氢呋喃-2-酮(795mg，4.0323mmol)在MeOH(12mL)和THF(4mL)中的溶液中添加1M LiOH(1.2当量，4.84mL，4.8387mmol，1.00M)并且在RT下搅拌溶液过夜。将溶液在真空中浓缩，用水稀释，用1N HCl酸化并用EtOAc(3×30mL)萃取。将盐添加到水相中并且用10％MeOH/EtOAc(2×30mL)萃取盐水溶液。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到0.47g呈灰白色固体状的2-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]-4-羟基-丁酸。
步骤3.向2-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]-4-羟基-丁酸(0.47g，470mg，2.2mmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加在H2O中的叔丁基氯二甲基硅烷(3当量，1000mg，6.6mmol)和咪唑(5当量，760mg，11mmol)并且在RT下搅拌溶液过夜。将溶液用水稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到1.04g呈澄清糖浆状的4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(5-氯-3-吡啶基)氧基]丁酸，其在不进一步纯化的情况下使用。
步骤4：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(5-氯-3-吡啶基)氧基]丁酸(1.5当量，863.9mg，2.498mmol)在DMF(10mL)中的溶液中以所述顺序添加HATU(1.5当量，969.0mg，2.498mmol)、4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(500mg，1.665mmol)及DIPEA(2当量，0.581mL，3.330mmol)并且在RT下搅拌所得溶液2h。将溶液用水稀释，用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物在用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的24g ISCO SiO2柱上纯化以得到637mg呈淡黄色固体状的4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-N'-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]-2-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丁烷酰肼。
步骤5：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-N'-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]-2-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丁烷酰肼(444mg，0.7258mmol)在MeCN(12mL)中的溶液中添加Ph3P.Br2(3当量，937.9mg，2.178mmol)和DIPEA(4当量，0.506mL，2.903mmol)。在RT下搅拌所得溶液1.5h。将其用水稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在硅藻土上浓缩并且在用MeOH/DCM梯度洗脱的24g ISCO SiO2柱上纯化以得到311mg黄色固体状的3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丙-1-醇。
步骤6：向4-[3-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丙基]-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(310mg，0.5221mmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加BF3.Et2O(6当量，444.6mg，0.3963mL，3.133mmol)并且在RT下搅拌所得溶液过夜。将反应物用饱和的NaHCO3淬灭，分离各相并且用EtOAc(2×20mL)萃取水溶液。将合并的萃取物干燥，过滤，在真空中浓缩以得到198mg黄色固体状的3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丙-1-醇
步骤7：向3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-[(5-氟-3-吡啶基)氧基]丙-1-醇(198mg，0.4130mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加NaH(8当量，132.2mg，3.304mmol，60％矿物油分散体)并且在RT下搅拌所得溶液15min，然后在65℃下加热1h。添加额外两当量的NaH并且在70℃下加热1h，由此产生完全转化。将反应用几滴水淬灭，在硅藻土上浓缩并且在用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的12g ISCO柱上纯化以得到68mg黄色固体，将其在手性SFC柱上拆分以得到26.8mg(S)I-91和25.6mg(R)I-91。
(S)I-91：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(d,J＝4.0Hz,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.34–8.21(m,3H),7.76(dt,J＝11.0,2.0Hz,1H),7.68(d,J＝5.6Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.16(s,1H),6.50(t,J＝4.3Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.88(ddd,J＝12.6,6.9,3.8Hz,1H),4.65(ddd,J＝12.6,6.9,3.7Hz,1H),3.71(s,3H),2.78(qdt,J＝11.6,7.1,4.1Hz,2H)；MS:m/z 459.
(R)I-91：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.35–8.21(m,3H),7.82–7.73(m,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.17(s,1H),6.51(t,J＝4.3Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.88(ddd,J＝12.3,6.9,3.8Hz,1H),4.65(ddd,J＝12.6,7.0,3.7Hz,1H),3.71(s,3H),2.78(dddd,J＝22.4,18.3,9.0,4.9Hz,2H)；MS:m/z 459.
可类似地制备4-(9-(4-氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-66)，例外的是在步骤1中，用4-氟-苯酚代替5-氟吡啶-3-醇。
可类似地制备4-(9-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,1,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-77)，例外的是在步骤1中，用3-氯-5-羟基吡啶代替5-氟吡啶-3-醇。
(S)I-77 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.38–8.24(m,3H),7.94(t,J＝2.2Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.16(d,J＝1.5Hz,1H),6.52(t,J＝4.3Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.88(ddd,J＝12.6,7.1,3.7Hz,1H),4.65(ddd,J＝12.6,7.0,3.7Hz,1H),3.71(s,3H),2.78(dtdt,J＝19.6,11.6,7.3,3.9Hz,2H)；MS:m/z 475.
(R)I-77 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),8.61(d,J＝5.1Hz,1H),8.38–8.24(m,3H),7.94(t,J＝2.3Hz,1H),7.68(d,J＝5.1Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.16(d,J＝1.5Hz,1H),6.52(t,J＝4.3Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),4.88(ddd,J＝12.7,7.1,3.9Hz,1H),4.65(ddd,J＝12.7,7.0,3.6Hz,1H),3.71(s,3H),2.77(qdt,J＝15.8,7.9,4.1Hz,2H)；MS：m/z 475.
可类似地制备4-(9-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,1,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺(I-78)，例外的是在步骤1中，用3-氯-5-羟基吡啶代替5-氟吡啶-3-醇并且在步骤4中用(6'-氟-2'-肼基-[4,4']联吡啶基-2-基)-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-胺代替4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺。
可类似地制备4-(9-(4-氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-108)，例外的是在步骤1中，用4-氟苯酚代替5-氟吡啶-3-醇。
可类似地制备-4-(9-(3-氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺，例外的是在步骤1中，用3-氟苯酚代替5-氟吡啶-3-醇。
(S)-4-(9-(3-氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝1.5Hz,1H),7.68(d,J＝5.3Hz,1H),7.43–7.27(m,2H),7.18–7.05(m,2H),6.97(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.82(td,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.39(t,J＝4.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),4.85(ddd,J＝12.6,6.7,4.2Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.7,6.9,3.9Hz,1H),3.71(s,3H),2.74(tdd,J＝15.3,7.8,4.1Hz,2H)；MS:m/z 458.
(R)-4-(9-(3-氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝1.5Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.43–7.27(m,2H),7.18–7.05(m,2H),6.97(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.82(td,J＝8.5,2.4Hz,1H),6.39(t,J＝4.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.9Hz,1H),4.85(ddd,J＝12.6,6.7,4.1Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.5,7.0,4.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.28(d,J＝1.4Hz,1H),2.74(dqt,J＝15.0,7.4,3.6Hz,2H)；MS:m/z 458.
可类似地制备4-(3-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(3,4-二氟苯氧基)丙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺，例外的是在步骤1中，用3,4-二氟苯酚代替5-氟吡啶-3醇并且在最后一步中脱甲硅烷基化是用氟化四丁基铵(TBAF)完成，TBAF导致醇的自发环化。
替代步骤6：向4-[3-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-(3,4-二氟苯氧基)丙基]-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(250mg，0.40mmol)在THF(4mL)中的溶液中逐滴添加在THF中的氟化四丁基铵(1.0M，1.0mL，1.02mmol)并且在RT下搅拌反应2h。将其用水稀释，用EtOAc(3×30ml)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将产物通过用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 12g柱)纯化以得到60mg(31％)呈浅棕色固体状的4-(3-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(3,4-二氟苯氧基)丙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。
(S)-4-(9-(3,4-二氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-112a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(24.5mg)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.1Hz,1H),8.31(d,J＝1.4Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.43–7.27(m,3H),7.15(d,J＝1.5Hz,1H),6.95(dtd,J＝8.8,3.4,1.7Hz,1H),6.36–6.27(m,2H),4.85(ddd,J＝12.6,6.8,4.1Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.5,6.9,3.9Hz,1H),3.71(s,3H),2.74(dddd,J＝15.7,13.4,7.7,4.3Hz,2H)；MS:m/z 476.
(R)-4-(9-(3,4-二氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(24.0mg)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,J＝1.4Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.43–7.27(m,3H),7.15(d,J＝1.6Hz,1H),6.95(dtd,J＝8.8,3.3,1.7Hz,1H),6.36–6.27(m,2H),4.85(ddd,J＝12.4,6.7,4.1Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.5,6.8,3.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.35–3.25(m,1H),2.81–2.65(m,2H)；MS:m/z 476.
可类似地制备4-(9-(3,4-二氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺，例外的是在步骤4中，用2'-氟-6'-肼基-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-[4,4'-联吡啶]-2-胺代替4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺。将外消旋产物通过在手性柱上的SFC色谱法纯化。
(S)-4-(9-(3,4-二氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.22(dd,J＝5.3,0.7Hz,1H),7.86(d,J＝1.5Hz,1H),7.42–7.15(m,4H),7.11(dd,J＝1.6,0.7Hz,1H),6.95(dtd,J＝9.2,3.4,1.7Hz,1H),6.80(d,J＝1.5Hz,1H),6.36–6.26(m,2H),4.85(ddd,J＝12.5,6.7,4.2Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.5,6.8,4.0Hz,1H),3.69(s,3H),2.73(ddd,J＝11.5,7.3,4.2Hz,2H)；MS：m/z 475.
(R)-4-(9-(3,4-二氟苯氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.22(d,J＝5.3Hz,1H),7.85(d,J＝1.5Hz,1H),7.42–7.26(m,3H),7.23(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H),7.14–7.08(m,1H),7.00–6.91(m,1H),6.80(d,J＝1.5Hz,1H),6.36–6.26(m,2H),4.85(ddd,J＝12.5,6.7,4.2Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.5,6.8,4.0Hz,1H),3.69(s,3H),3.39–3.24(m,2H),2.81–2.65(m,2H)；MS:m/z 475.
可类似地制备(S)-4-(9-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺，例外的是在步骤1中，用1-甲基-1H-吡唑-4-醇代替5-氟吡啶-3-醇。
(S)-4-(9-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,J＝1.4Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.53(d,J＝0.9Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.14(d,J＝1.5Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),5.81(t,J＝4.0Hz,1H),4.81(ddd,J＝12.5,6.5,4.2Hz,1H),4.60(ddd,J＝12.5,7.1,4.1Hz,1H),3.72(d,J＝4.8Hz,6H),2.77–2.61(m,2H)；MS:m/z444.
(R)-4-(9-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氧基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,J＝1.4Hz,1H),7.68(d,J＝5.2Hz,1H),7.53(d,J＝0.9Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.14(d,J＝1.4Hz,1H),6.29(d,J＝1.9Hz,1H),5.81(t,J＝4.0Hz,1H),4.81(ddd,J＝12.5,6.6,4.3Hz,1H),4.60(ddd,J＝12.5,7.1,4.1Hz,1H),3.72(d,J＝4.8Hz,6H),2.79–2.58(m,2H)；MS:m/z444.
实施例10
3-苄基-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,1,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮(I-28)
(方案E)步骤1：向6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙(500mg，1.665mmol)在DMF(12mL)中的溶液中分两份添加异氰酸苄酯(0.0268mL，1.00当量，1.665mmol)。搅拌混合物30min，然后在真空中浓缩。将残余物用Et2O研磨并且所得的固体1-苄基-3-[(Z)-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]氨基]脲在不进一步纯化的情况下用于下一步中。
步骤2：向1-苄基-3-[(Z)-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]氨基]脲(701mg，1.617mmol)和DIPEA(2.82mL，16.17mmol，10.0当量)在MeCN(30mL)中的溶液中添加PPh3.Br2(3.483g，8.087mmol，5.0当量)。将混合物在70℃下加热2h。将混合物冷却，用水稀释，搅拌30min，然后在真空中浓缩。将残余物用MeTHF萃取并且用水、1％柠檬酸水溶液及水连续洗涤合并的有机萃取物。将所得溶液干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至9％MeOH)洗脱的SiO2色谱法纯化以得到522mg N-苄基-5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-胺。
步骤3：将N-苄基-5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-胺(132mg，0.3178mmol)和甲胺的8M乙醇溶液(8mol/L)在EtOH(5mL，40mmol)中的混合物在RT下搅拌2h。在真空中浓缩混合物，并且将残余物在MeTHF与水之间分配。通过小心添加1％柠檬酸水溶液将水相的pH调节至约5。将水相用MeTHF萃取并且将合并的萃取物用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物在不进一步纯化的情况下用于下一步中。
步骤4：将N3-苄基-N5-甲基-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3,5-二胺(130mg，0.3048mmol)和1,1'-羰基二咪唑(0.2471g，1.524mmol)的混合物在80℃下加热4h。冷却反应物，并且在水与MeTHF之间分配。将合并的有机萃取物用1％柠檬酸水溶液、水、盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。在静置2d之后，收集所得的沉淀，用冷MeOH洗涤。将粗产物(72mg)溶于DMF中并且送去进行RPHPLC纯化，得到42mg I-28。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.56(d,J＝5.3Hz,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,2H),7.40–7.25(m,4H),6.36(s,1H),6.27(d,J＝1.9Hz,1H),4.99(s,2H),3.70(s,3H),3.20(s,3H).
可类似地制备3-(4-氯苄基)-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,2,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮(I-98)，例外的是在步骤1中，用异氰酸4-氯苄酯代替异氰酸苄酯。
可类似地制备3-(3,5-二氟苄基)-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,2,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮(I-99)，例外的是在步骤1中，用异氰酸3,5-二氟苄酯代替异氰酸苄酯。
可类似地制备3-(3-氯苄基)-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,2,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮(I-100)，例外的是在步骤1中，用异氰酸4-氯苄酯代替异氰酸苄酯。
实施例11
(S)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-22)
步骤1：向4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸(165.3mg，0.5531mmol)、6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙(151mg，0.5028mmol)及TEA(0.168mL，2.4当量，1.207mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(2.10mg，0.5531mmol)。搅拌混合物2h。将混合物在真空中浓缩并且将残余物在EtOAc与水之间分配。将有机萃取物用水、柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到338mg 3-[(4-氯苯基)甲基]-4-[(2Z)-2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]肼基]-4-氧代基-丁酸叔丁酯，其在不进一步纯化的情况下使用。
步骤2：向3-[(4-氯苯基)甲基]-4-[(2Z)-2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-亚基]肼基]-4-氧代基-丁酸叔丁酯(338mg，0.4945mmol)和DIPEA(9.0当量，4.450mmol)在MeCN中的混合物中逐份添加Ph3P.Br2(4.0当量，1.978mmol)。将混合物在80℃下加热2h，由此得到两种新化合物的混合物。添加水并且搅拌混合物15min，然后用EtOAc萃取。将有机萃取物用水、柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。将残余物在用EtOAc/庚烷梯度(0至100％EtOAc)洗脱的40g SiO2柱上纯化以得到177mg4-(4-氯苯基)-3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸叔丁酯。
步骤3(步骤3至5对应于方案D中所述的步骤1至3：将4-(4-氯苯基)-3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸叔丁酯和MeNH2在THF(2M，3mL，6mmol)中的混合物在80℃下在密封小瓶中加热4h。浓缩混合物，将残余物在EtOAc与5％柠檬酸水溶液之间分配。将有机萃取物用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到138mg 4-(4-氯苯基)-3-[5-(甲基氨基)-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸叔丁酯，其在不另外纯化的情况下使用。
步骤4：将4-(4-氯苯基)-3-[5-(甲基氨基)-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸叔丁酯(138mg，0.2404mmol)、DCM(2mL)及TFA(8mL)的溶液搅拌2h。在真空中浓缩混合物，将残余物溶于MeCN中并再次浓缩。所得的吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸是红色油状物，其在不进一步处理的情况下使用。
步骤5：向来自步骤4的粗产物(0.24mmol)、TEA及DMF(4mL)的溶液中一次性加入HATU(110mg，0.2893mmol)并且搅拌混合物1h。在真空中浓缩混合物，并且将残余物在EtOAc与水之间分配。将合并的有机萃取物用水、柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上纯化以得到84mg I-22，将其在手性SFC柱上拆分以得到30mg(S)-I-22和30mg(R)-I-22。
可类似地制备9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-40)，例外的是在步骤1中，用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-苄基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-61)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-(4-甲氧苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-62)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-(4-甲氧苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-63)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-9-丙基-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-64)，例外的是用2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)戊酸代替-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-环丙基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-65)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-(环丙基)-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-苄基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-67)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-异丁基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-68)，例外的是在步骤1中，用2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-4-甲基戊酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-异丙基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-69)，例外的是在步骤1中，用4-(叔丁氧基)-2-异丙基-4-氧代丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备(S)-9-(4-氟苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-70)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(4-氟苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-71)，例外的是在步骤1中，用2-((叔丁氧羰基)氨基)-4,4,4-三氟丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-(2-氟-4-甲氧苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-74)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(2-氟-4-甲氧基苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-异丁基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-75)，例外的是在步骤1中，用2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-4-甲基戊酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-(4-氟苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-79)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(4-氟苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-(3-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-80)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(3-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-84)，例外的是在步骤1中，用4-(叔丁氧基)-2-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-4氧代丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备9-(2-氟-4-甲氧苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-85)，例外的是在步骤1中，用4-叔丁氧基-2-[(2-氟4-甲氧基苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸。
可类似地制备6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-86)，例外的是在步骤1中，用2-((叔丁氧羰基)氨基)-4,4,4-三氟丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-异丙基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-87)，例外的是在步骤1中，用4-(叔丁氧基)-2-异丙基-4-氧代丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
可类似地制备9-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-94)，例外的是在步骤1中，用4-(叔丁氧基)-2-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-4-氧代丁酸代替4-叔丁氧基-2-[(4-氯苯基)甲基]-4-氧代基-丁酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮肼。
实施例12
9-(4-氯苄基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-34)
步骤1：使氨通过4-(4-氯苯基)-3-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁酸双-TFA盐(90mg，0.1224mmol)在DMSO(2mL)中的溶液持续30min。将小瓶密封并保持过夜。将混合物与水混合并浓缩以除去氨。将残余溶液用水稀释并用1N HCl酸化至pH 4。收集沉淀，用水洗涤并且在高真空中干燥以得到45mg 3-[5-氨基-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-4-(4-氯苯基)丁酸。
步骤2：向3-[5-氨基-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-4-(4-氯苯基)丁酸(45mg，0.08930mmol)和DIPEA(2.0当量，0.1786mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(33.65mg，1.05当量，0.09377mmol)。搅拌混合物过夜，在真空中浓缩并将残余物在水与MeTHF之间分配。将有机萃取物用水、NaHCO3饱和水溶液、柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物干燥加载到用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上以得到33mg含有杂质的物质。将产物在反相HPLC柱上再次纯化以得到13.5mg产物，将其在手性SFC柱上拆分。
实施例13
4-(3-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-24)
步骤1：向6-甲氧基吡啶-3-甲醛(1g，7.28mmol)和氰基乙酸甲酯(1.2当量，867mg，8.75mmol)在MeOH中的溶液中逐滴添加哌啶(1.08mL，931mg，1.5当量)。在RT下搅拌所得反应物过夜。将沉淀过滤，用少量EtOAc/庚烷(约1:5)洗涤并干燥以得到1.54g呈白色结晶固体状的(Z)-2-氰基-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙烯酸甲酯。
步骤2：向(E)-2-氰基-3-(6-甲氧基-2-吡啶基)丙-2-烯酸酯(710mg，3.254mmol)在MeOH(20mL)和THF(10mL)中的溶液中添加Co(II)Cl2(871.1mg，6.507mmol，2当量)并且搅拌所得溶液若干分钟。将溶液在冰浴中冷却并且分次加入NaBH4(738.6mg 19.522mmol，6当量)。在RT下搅拌混合物4h，然后用1N HCl酸化。在真空中除去挥发性溶剂并且用EtOAc萃取水相两次。用NaHCO3饱和水溶液使水相变为碱性，用NaCl盐渍并在真空中浓缩以得到呈灰色固体状的2-(氨基甲基)-3-(6-甲氧基-2-吡啶基)丙酸甲酯，其在不另外纯化的情况下使用。
步骤3：向2-(氨基甲基)-3-(6-甲氧基-2-吡啶基)丙酸甲酯(287mg，1.28mmol)在THF(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加NaHCO3(169.75mg 1.92mmol，1.5当量)，接着添加叔丁氧羰基叔丁基碳酸酯(279.31mg，1.28mmol)。在RT下搅拌所得溶液1h。用EtOAc(20mL)稀释溶液并且将有机相用饱和NH4Cl洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到408mg 2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙酸甲酯，其在不另外纯化的情况下使用。
步骤4：向2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙酸甲酯(406mg，1.258mmol)在THF(7mL)和水(2mL)中的溶液中添加LiOH(1.3当量，0.282mL，0.635mmol)并且在RT下搅拌反应物过夜。添加额外的20mg LiOH并且再继续搅拌4h。在真空中除去溶剂并且在不另外纯化的情况下使用所得的2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙酸。
步骤5：向2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙酸(310mg，0-999mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU 387.6mg 0.999mmol)和4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(200mg，0.666mmol)，然后添加DIPEA(172.2mg0.232mL，1.332mmol)。在RT下搅拌所得溶液2.5h。将溶液用水稀释并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法纯化以得到137mg呈黄色固体状的N-[3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]肼基]-2-[(6-甲氧基-3-吡啶基)甲基]-3-氧代基-丙基]氨基甲酸叔丁酯。
步骤6：向N-[3-[2-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]肼基]-2-[(6-甲氧基-3-吡啶基)甲基]-3-氧代基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(135mg，0.2278mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加Ph3P.Br2(294.4mg，0.6834mmol)，然后缓慢添加DIPEA(0.199mL，147.2mg，1.139mmol)。将所得混合物在70℃下加热1.5h。将反应物用水稀释并用EtOAc(2×15mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 12g柱)纯化以得到83mg N-[2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙基]氨基甲酸叔丁酯
标题化合物可利用实施例3的步骤3和4中的程序从N-[2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]-3-(6-甲氧基-3-吡啶基)丙基]氨基甲酸叔丁酯制备。
可类似地制备4-(3-((6-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-27)，例外的是在步骤1中，用6-甲氧基吡啶-2-甲醛代替6-甲氧基吡啶-3-甲醛。
可类似地制备(S)-4-(3-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5-甲基-4,5-二氢-3H-1,2,2a1,5-四氮杂苊-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺(I-43)，例外的是在步骤1中，用2-甲氧基吡啶-3-甲醛代替6-甲氧基吡啶-3-甲醛。
实施例14
(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-6)
步骤1：将HATU(153mg，0.40mmol)添加到6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙(104mg，0.33mmol)、(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(125mg，0.4mmol)及TEA(0.138mL，1.0mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中。将混合物搅拌2h并且在水与EtOAc之间分配。将有机萃取物用水、NaHCO3水溶液、1％柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩以得到195mg(89％)(R)-(3-(4-氯苯基)-1-(2-(6-氟-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-亚基)肼基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS:m/z582。
步骤2：将(R)-(2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(195mg，0.3mmol)、Ph3P.Br2(506mg 1.2mmol)及DIPEA(0.46mL，2.644mmol)在MeCN(5mL)中的混合物在80℃下在密封小瓶中加热40min。将混合物冷却至RT，与水(1mL)混合并搅拌20min。将混合物在EtOAc与H2O之间分配，将有机萃取物用NaHCO3水溶液、1％柠檬酸水溶液、水及盐水连续洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至7％MeOH)洗脱的12g SiO2柱上纯化以得到120mg(72％)呈黄色泡沫状的(R)-(2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。MS:m/z 564。
步骤6(方案E)：将N-[(2S)-3-(4-氯苯基)-2-[5-氟-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丙基]氨基甲酸叔丁酯(44mg，0.078mmol)和MeNH2(2M,3.0mL，66.0mmol)在THF中的混合物在RT下搅拌30min。在真空中浓缩混合物，将残余物溶于含有MeOH的TEA中并浓缩。将残余物用己烷和Et2O(2:1)的混合物研磨并过滤以得到43mg(99％)(R)-(2-(4-氯苯基)-1-(7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-5-(甲基氨基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。MS：m/z 575
步骤7：向HCl在二噁烷(4mL)中的溶液中添加(R)-(2-(4-氯苯基)-1-(7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-5-(甲基氨基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(43mg，0.075mmol)在DCM(6mL)中的溶液。搅拌混合物4h，并在真空中浓缩。将残余物用Et2O研磨并过滤以得到(R)-3-(1-氨基-2-(4-氯苯基)乙基)-N-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺四盐酸盐，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS:m/z 475。
步骤8：将1,1'-羰基二咪唑(65mg，0.4mmol)添加到在MeCN(3mL)中的3-[(1R)-1-氨基-2-(4-氯苯基)乙基]-N-甲基-7-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-5-胺四盐酸盐(46mg，0.074mmol)中。将混合物在140℃下在微波中照射2h。将混合物浓缩冷却并在真空中浓缩。将残余物在用MeOH/DCM梯度(0至7％MeOH)洗脱的4g SiO2柱上纯化以得到12mg呈黄色泡沫状的(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-6)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.59(s,1H),8.62(d,J＝5.2Hz,1H),8.38(d,J＝5.8Hz,1H),8.21(d,J＝1.2Hz,1H),7.71(d,J＝5.2Hz,1H),7.44–7.33(m,5H),7.06(d,J＝1.2Hz,1H),6.31(d,J＝1.9Hz,1H),5.22(dt,J＝9.1,5.7Hz,1H),3.72(s,3H),3.51–3.45(m,2H),3.21(s,3H).MS:m/z 501.
可类似地制备(R)-9-异丁基-6,8-二甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-19)，例外的是在步骤1中，用2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-4-甲基-戊酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸。MS:m/z 447。
可类似地制备(R)-9-异丁基-8-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-23)，例外的是在步骤1中，用2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-4-甲基-戊酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸并且在步骤5中用氨代替甲胺。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.54(s,1H),8.60(d,J＝5.2Hz,1H),8.02(d,J＝1.3Hz,1H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(d,J＝1.9Hz,1H),7.04(d,J＝1.4Hz,1H),6.35(d,J＝1.9Hz,1H),5.01(dd,J＝9.2,6.8Hz,1H),3.73(s,3H),3.06(s,3H),1.96(dt,J＝13.4,7.3Hz,1H),1.83(ddd,J＝13.4,9.2,5.8Hz,1H),1.41(dt,J＝13.5,6.7Hz,1H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H),0.85(d,J＝6.6Hz,3H).MS:m/z433
可类似地制备9-异丁基-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-25)，例外的是在步骤1中，用2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-甲基戊酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸。
可类似地制备(R)-9-(4-甲氧苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)吡啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-26)，例外的是在步骤1中，用(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸并且用4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)吡啶-2-胺代替6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-1H-吡啶-2-酮腙。
可类似地制备(R)-9-(4-氟苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-35)，例外的是在步骤1中，用(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氟苯基)丙酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸。
可类似地制备(R)-9-(3-氟苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-39)，例外的是在步骤1中，用(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸。
可类似地制备(R)-9-(环丙基甲基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮(I-51)，例外的是在步骤1中，用(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-环丙基丙酸代替(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸。
实施例15
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)嘧啶-2-胺(I-110)
步骤1：将4-氯-2-(甲基硫烷基)嘧啶(2g，12.45mmol)、(2,6-二氟-4-吡啶基)硼酸(3.95g，24.90mmol)、Cs2CO3(8.11g，24.90mmol)及(dppf)PdCl2.DCM(1.07g，1.24mmol)在水(15mL)和MeCN(45mL)中的混合物用N2脱气，在玻璃反应管(150mL)中加盖，在95℃下加热2.5h。冷却之后，将其经由硅藻土短垫过滤，用水稀释，用EtOAc(2×80mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用EtOAc/庚烷梯度(0至15％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 40g柱)纯化以得到2.66g(89％)呈白色固体状的4-(2,6-二氟吡啶-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶。MS:m/z 239。
步骤2：向4-(2,6-二氟-4-吡啶基)-2-甲基硫烷基-嘧啶(2.66g，11.1mmol)在EtOH(70mL)中的悬浮液中添加肼(1.11mL，33.4mmol)并且在70℃下加热5.5h。冷却之后，将溶液在真空中浓缩并用水研磨。将固体通过过滤收集，用水洗涤，在高真空下干燥以得到2.69g(96％)呈灰白色固体状的4-(2-氟-6-肼基吡啶-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶(15-1b)。MS：m/z251。
步骤3：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]丁酸(1.34g，4.04mmol)在DMF(20mL)中的溶液中以所述顺序添加HATU(1.70g，4.37mmol)、[6-氟-4-(2-甲基硫烷基嘧啶-4-基)-2-吡啶基]肼(0.845g，3.36mmol)及DIPEA(0.88mL，5.04mmol)并且在RT下搅拌所得混合物2.5h。将溶液用水稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸、盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过SiO2色谱法(ISCO 24g柱)纯化并用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱以得到1.37g(72％)呈棕色固体状的4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-N'-(6-氟-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2-基)丁烷酰肼(15-2)。MS:m/z 566。
步骤4：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-[(4-氯吡唑-1-基)甲基]-N'-[6-氟-4-(2-甲基硫烷基嘧啶-4-基)-2-吡啶基]丁烷酰肼(2.04g，3.60mmol)在MeCN(30mL)和DIPEA(3.14mL，18.0mmol)中的溶液中分次添加Ph3P.Br2(4.56g，10.8mmol)并且在RT下搅拌溶液1h。将溶液用水稀释，用EtOAc(3×80mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 40g柱)纯化以得到1.38g(70％)呈红棕色胶状的3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-1H-吡唑-1-基)丁-2-基)-5-氟-7-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(15-3)。MS：m/z 548。
步骤5：向叔丁基-[4-(4-氯吡唑-1-基)-3-[5-氟-7-(2-甲基硫烷基嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基]丁氧基]-二甲基-硅烷(658mg，1.20mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加在THF中的氟化四丁基铵((1.0M，3mL，2.96mmol)。在RT下搅拌所得溶液1.5h，用水稀释并用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO12g柱)纯化以得到278mg(56％)黄色固体状的15-4a。MS:m/z 413.
步骤6：向9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环(278mg，0.67mmol)在DCM(7mL)中的在冰浴中冷却的溶液中分次添加mCPBA(451.6mg，2.01mmol)并且在RT下搅拌1.5h。将其用Na2S2O3饱和水溶液、饱和的NaHCO3洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩以得到279mg(93％)棕色固体状的15-4b，其在不进一步纯化的情况下用于下一步中。MS：m/z 445。
步骤7：向9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环(279mg，0.62mmol)在DMSO(2.5mL)中的溶液中添加4-氨基四氢吡喃(0.40mL，3.75mmol)和DIPEA(0.65mL，3.75mmol)。将溶液在80℃下加热1h，用水稀释并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO，12g柱)纯化以得到187mg(64％)呈黄色固体状的外消旋I-110。MS:m/z 466。
通过手性载体上的SFC色谱法来拆分外消旋混合物：
(R)I-110(38.7mg)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.22(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(d,J＝0.8Hz,1H),7.56(d,J＝1.0Hz,1H),7.32(t,J＝6.4Hz,2H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.3Hz,1H),4.69–4.57(m,2H),4.50(ddd,J＝12.1,8.0,3.6Hz,1H),4.12(tt,J＝8.6,5.6Hz,1H),4.03(s,1H),3.89(dt,J＝11.3,3.4Hz,2H),3.43(t,J＝11.4Hz,2H),2.25–2.02(m,2H),1.88(d,J＝12.5Hz,2H),1.55(qd,J＝11.6,4.3Hz,2H)；MS：m/z 466.
(S)I-110(38.2mg)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.22(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.56(s,1H),7.38–7.28(m,2H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.69–4.57(m,2H),4.50(ddd,J＝12.1,8.0,3.6Hz,1H),4.12(tt,J＝8.6,5.6Hz,1H),4.03(s,1H),3.89(dt,J＝11.3,3.4Hz,2H),3.43(t,J＝11.3Hz,2H),2.25–2.02(m,2H),1.88(d,J＝12.3Hz,2H),1.63–1.48(m,2H)；MS:m/z 466.
类似地制备4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)嘧啶-2-胺，例外的是在步骤7中，用3-氨基-氧杂环丁烷代替4-氨基四氢吡喃。通过在手性柱上的SFC色谱法拆分外消旋混合物以得到：
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝5.1Hz,1H),8.24(d,J＝1.4Hz,1H),8.10–8.01(m,2H),7.56(s,1H),7.41(d,J＝5.2Hz,1H),7.06(d,J＝1.4Hz,1H),5.03(s,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.3Hz,1H),4.82(t,J＝6.7Hz,2H),4.69–4.44(m,5H),4.12(tt,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.31(d,J＝19.9Hz,1H),2.25–2.03(m,2H)；MS:m/z 438.
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝5.1Hz,1H),8.24(d,J＝1.4Hz,1H),8.10–8.01(m,2H),7.56(s,1H),7.41(d,J＝5.2Hz,1H),7.06(d,J＝1.4Hz,1H),5.03(s,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.82(t,J＝6.7Hz,2H),4.69–4.44(m,5H),4.12(tt,J＝8.5,5.6Hz,1H),3.31(d,J＝19.9Hz,1H),2.25–2.03(m,2H)；MS：m/z 438.
类似地制备4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-异丙基嘧啶-2-胺，例外的是在步骤7中，用异丙胺代替4-氨基四氢吡喃。通过在手性柱上的SFC色谱法拆分外消旋混合物以得到：
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-异丙基嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.1Hz,1H),8.21(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(d,J＝0.7Hz,1H),7.56(s,1H)7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.06(d,J＝1.4Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.3Hz,1H),4.68–4.58(m,2H),4.49(ddd,J＝12.1,8.0,3.7Hz,1H),4.12(tt,J＝8.6,5.9Hz,2H),2.23–2.04(m,2H),1.20(d,J＝6.5Hz,6H；MS:m/z 424
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-异丙基嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.1Hz,1H),8.22(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(d,J＝0.7Hz,1H),7.56(s,1H),7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.06(d,J＝1.4Hz,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.70–4.57(m,2H),4.49(ddd,J＝12.1,8.0,3.6Hz,1H),4.12(tt,J＝8.5,6.1Hz,2H),2.25–2.02(m,2H),1.20(d,J＝6.5Hz,6H)；MS:m/z 424.
实施例16
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺
向9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环(15-4b，200mg，0.44mmol)、2,5-二甲基吡唑-3-胺(149.5mg，1.34mmol)在DMSO(2mL)中的溶液中添加NaH(35.80mg，28mmol，60％矿物油分散体)。在RT下搅拌反应物45min，用水淬灭并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的萃取物用5％柠檬酸、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 12g柱)纯化以得到95mg(88.5％)呈黄色固体状的标题化合物。
通过在手性柱上的SFC色谱法拆分外消旋混合物以得到：
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(d,J＝1.4Hz,1H),8.05(d,J＝0.7Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.57(d,J＝0.7Hz,1H),7.05(d,J＝1.2Hz,1H),6.06(s,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.68–4.59(m,2H),4.50(ddd,J＝12.1,8.1,3.6Hz,1H),4.12(tt,J＝8.7,5.6Hz,1H),3.61(s,3H),2.22–2.06(m,5H)；MS:m/z 476.
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(d,J＝1.5Hz,1H),8.05(s,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),6.06(s,1H),4.91(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H),4.68–4.59(m,2H),4.50(ddd,J＝12.0,8.1,3.6Hz,1H),4.12(tt,J＝8.5,5.5Hz,1H),3.61(s,3H),2.21–2.07(m,6H)；MS:m/z 476.
实施例17
N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(I-90)
步骤1：向苯酚(1.25g，13.33mmol)在DMF(35mL)中的溶液中添加K2CO3(2.09g，15.15mmol)，搅拌10min，然后逐滴添加α-溴-γ-丁内酯(1.14mL，12.12mmol)并且在RT下搅拌所得溶液18h。将混合物用水稀释并用EtOAc(3×80mL)萃取。将合并的萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将产物通过用EtOAc/庚烷梯度(0至20％EtOAc)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 40g柱)纯化以得到1.03g(47.7％)澄清液体状的3-苯氧基四氢呋喃-2-酮。MS:m/z 178
步骤2：向3-苯氧基四氢呋喃-2-酮(1.03g，5.78mmol)在THF(20mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH(208mg，8.67mmol)并且在RT下搅拌所得溶液18h。将其用1N HCl酸化，用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩，以得到1.05g(92.6％)呈澄清糖浆状的4-羟基-2-苯氧基-丁酸，其在不另外纯化的情况下使用：MS m/z196。
步骤3：向4-羟基-2-苯氧基-丁酸(1.0g，5.1mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加叔丁基-氯-二甲基-硅烷(2.30g，15mmol)和咪唑(1.40g，20mmol)。在RT下搅拌溶液18h，然后用水稀释并用EtOAc(3×80mL)萃取。将合并的萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩，并且在高真空下干燥以得到1.38g(87％)呈澄清糖浆状的4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-苯氧基-丁酸。MS:m/z 310,
步骤4(方案G)：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-苯氧基-丁酸(672.1mg，2.16mmol)在DMF(8mL)中的溶液中以所述顺序添加HATU(969.0mg，2.49mmol)、4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(500mg，1.66mmol)及DIPEA(0.58mL，3.33mmol)并且在RT下搅拌反应2h。将其用水稀释，用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 24g柱)纯化以得到763mg(77.3％)呈黄色固体状的4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N'-(6-氟-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2-基)-2-苯氧基丁烷酰肼。MS:m/z 592
步骤5：向4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-N'-[6-氟-4-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)氨基]嘧啶-4-基]-2-吡啶基]-2-苯氧基-丁烷酰肼(763mg，1.28mmol)在MeCN(15mL)中的溶液中添加DIPEA(0.89mL，5.14mmol)，然后分小份添加Ph3P.Br2(1.63g，3.86mmol)并且在RT下搅拌溶液2h。将溶液用水稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的萃取物用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过用MeOH/DCM梯度(0至5％MeOH)洗脱的SiO2色谱法(ISCO 24g柱)纯化以得到470mg(63.5％)呈黄色固体状的4-(3-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-苯氧基丙基)-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺化合物。MS：m/z 574
步骤6：向4-[3-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-1-苯氧基-丙基]-5-氟-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-7-基]-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(470mg，0.61mmol)在DCM(15mL)中的悬浮液中添加BF3.OEt2(0.46mL，3.68mmol)并且在RT下搅拌所得溶液18h。将反应用饱和的NaHCO3淬灭，用水稀释，用DCM(2×20mL)萃取。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并在硅藻土上浓缩。将粗产物通过SiO2(ISCO12g柱)纯化并用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱以得到130mg(46％)3-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-3-苯氧基丙-1-醇。
步骤7：向3-(5-氟-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-3-苯氧基丙-1-醇(130mg，0.28mmol)在THF(10mL)中的混合物中添加NaH(90.33mg，2.25mmol，60％矿物油分散体))，搅拌15min，然后在65℃下在油浴中加热60min。将反应用几滴水淬灭，在硅藻土上浓缩。将粗产物通过SiO2色谱法(ISCO 4g柱)纯化并用MeOH/DCM梯度(0至8％MeOH)洗脱以得到61mg(49％)呈黄色固体状的N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺。MS:m/z 440
通过手性载体上的SFC色谱法来拆分外消旋混合物：
(S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(S)I-90：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.61(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(d,J＝5.2Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.35–7.25(m,2H),7.17–7.10(m,3H),7.03–6.94(m,1H),6.36–6.27(m,2H),4.91–4.81(m,1H),4.63(ddd,J＝12.7,7.0,4.3Hz,1H),3.71(d,J＝1.3Hz,4H),3.28(d,J＝2.4Hz,12H),2.73(dq,J＝6.7,4.4Hz,2H)；MS：m/z440.
(R)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)嘧啶-2-胺(R)I-90：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),8.60(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(d,J＝5.3Hz,1H),7.40(d,J＝2.0Hz,1H),7.35–7.26(m,2H),7.13(d,J＝8.6Hz,3H),6.98(t,J＝7.4Hz,1H),6.35–6.26(m,2H),4.86(ddd,J＝11.6,6.5,4.5Hz,1H),4.63(ddd,J＝12.0,6.7,4.3Hz,1H),3.71(s,3H),2.73(dq,J＝9.1,4.8Hz,2H)；MS:m/z 440.
类似地制备N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺，例外的是在步骤中用2'-氟-6'-肼基-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-[4,4'-联吡啶]-2-胺替代4-(2-氟-6-肼基-4-吡啶基)-N-(2-甲基吡唑-3-基)嘧啶-2-胺并且通过在手性柱上的SFC经由手性分离拆分外消旋产物。
(S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(s,1H),8.22(d,J＝5.3Hz,1H),7.84(t,J＝1.5Hz,1H),7.38–7.19(m,4H),7.17–7.08(m,3H),6.98(t,J＝7.3Hz,1H),6.78(t,J＝1.6Hz,1H),6.35–6.26(m,2H),4.86(dt,J＝11.8,5.5Hz,1H),4.63(dt,J＝11.7,5.5Hz,1H),3.69(d,J＝1.6Hz,3H),2.73(dt,J＝6.9,4.3Hz,2H)；MS：m/z439.
(R)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(9-苯氧基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)吡啶-2-胺：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(s,1H),8.22(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.84(t,J＝1.7Hz,1H),7.38–7.19(m,4H),7.17–7.08(m,3H),6.98(t,J＝7.3Hz,1H),6.78(t,J＝1.6Hz,1H),6.35–6.26(m,2H),4.92–4.81(m,1H),4.69–4.58(m,1H),3.69(d,J＝1.6Hz,3H),2.80–2.68(m,2H):MS m/z 439.
生物实施例1
ERK-2酶测定
使用人ERK-2(促***原活化蛋白激酶1)在酶测定中测试化合物，人ERK-2在大肠杆菌中重组表达为n-末端6-His融合蛋白并且对应于氨基酸8-360。所用的底物为荧光Omnia肽S/T17(Invitrogen of Carlsbad,CA；Cat.KNZ1171C)。在DMSO中以3倍连续稀释法在100x最终浓度下稀释测试化合物。除化合物之外，该测定还含有50mM HEPES[pH 7.3]、10mM MgCl2、2mM DTT、0.005％Triton-X100、5nM ERK-2酶、6.25μM S/T17肽底物以及25μMATP(对应于Km的观测值)，总反应体积为25μL。该测定是在白色384孔聚丙烯板(Nunc,Inc,Naperville,IL；Cat.267462)中在周围温度下进行，在Envision平板读数器(PerkinElmer,Inc.,Waltham,MA)上每50秒收集数据，持续大约30分钟；激发340nm/发射495nm。将从每个孔处收集的数据拟合成直线，并且所得比率被用于计算对照百分比。将对照百分比针对化合物浓度绘图，并且使用四参数拟合来确定IC50值。表1含有本文所公开的化合物的代表性数据。代表性数据是在表1(同上)中。
生物实施例2
细胞P90RSK(Ser380)磷酸化测定
通过以下体外细胞机制测定来确定PMA刺激的P90RSK(Ser380)磷酸化的抑制，该测定包括将细胞用化合物孵育1.5小时并在固定细胞上量化荧光pP90RSK(Ser380)信号并且针对GAPDH信号进行归一化。
材料和方法：HepG2细胞是从ATCC处获得并且在补充有10％胎牛血清的DMEM中生长。将细胞以35,000个细胞/孔涂铺在96孔板中并且允许在37℃/5％CO2下附着过夜。随后在0.5％DMSO的最终浓度下添加稀释的化合物。1.5小时化合物孵育之后，借助于添加在100ng/mL的最终浓度下的PMA(佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯)来刺激细胞；PMA刺激为在37℃/5％CO2下30分钟孵育。30分钟PMA刺激之后，将细胞用PBS洗涤并且在室温下固定于PBS中的3.7％甲醛中持续15-20分钟。此后在PBS中进行另一次洗涤，然后在室温下在100％MeOH中透化10-15分钟。在透化孵育之后，将细胞在PBS/0.05％Tween-20中洗涤，然后在Odyssey封闭缓冲液(LI-COR Biosciences)中封闭至少1小时。将针对磷酸化P90RSK(Ser380)(Cell Signaling#9335，兔单克隆)和GAPDH(Fitzgerald10R-G109a，小鼠单克隆)的抗体添加到细胞中并且在4℃下孵育过夜。在1:250稀释度下使用pP90RSK(Ser380)抗体；在1:10,000稀释度下使用GAPDH。在用PBS/0.05％Tween-20洗涤之后，将细胞用荧光标记的第二抗体(抗兔Alexa Flour680,Invitrogen目录号A21109；抗小鼠IRDye800CW,RocklandInc.目录号610-131-121)孵育1小时。在1:1000稀释度下使用两种第二抗体。随后洗涤细胞并且使用Odyssey红外成像***(LI-COR Biosciences)分析两种波长下的荧光。针对GAPDH信号对磷酸化P90RSK(Ser380)信号进行归一化。代表性数据是在表II(见下文)中。
配制实施例1
经由若干途径施用的主题化合物的药物组合物如此实施例中所述来制备。
用于口服施用的组合物(A)
将成分混合并分配到每个含有约100mg的胶囊中。
用于口服施用的组合物(B)
将成分合并并使用如甲醇的溶剂进行粒化。然后将制剂干燥并用适当的压片机成型为片剂(含有约20mg活性化合物)。
用于口服施用的组合物(C)
混合成分以形成用于口服施用的混悬液。
肠胃外制剂(D)
将活性成分溶于一部分注射用水中。随后在搅拌下添加足量的氯化钠以使溶液变为等渗的。用余下的注射用水补足溶液的重量，再通过0.2微米膜过滤器进行过滤并且在无菌条件下包装。
栓剂制剂(E)
将各成分熔化在一起并且在蒸汽浴上混合，并倒入含有2.5g总重量的模具中。
局部制剂(F)
合并除水外的所有成分并且在搅拌下加热至约60℃。然后在强烈搅拌下添加约60℃下的足量水以乳化成分，并且随后添加水补足约100g。
上述说明书或随后的权利要求书中公开、以它们的具体形式或者实施所公开功能的方式或获得所公开结果的方法或过程来表达的特征可以酌情单独地或以这类特征的任意组合来用于实现各种形式的本发明。
为了清楚和理解的目的，通过说明和实施例已经详细地描述了上述发明。对于本领域的技术人员显而易见的是，在后附权利要求的范围内可以进行改变和修改。因此，应理解的是以上描述意图为说明性的，而非限制性的。本发明的范围因此不应该参照上述说明确定，而是应该参照以下所附权利要求以及这类权利要求的等同物的完整范围来确定。
本文参照的专利、公开申请和科学文献确立了本领域技术人员的知识并在此将它们的全部内容引入本文作为参考，就如同将这些文献特别和分别引入作为参考。

Claims (43)

1.一种式I的化合物或其药用盐，其中：
X1为N或CH；
X2为NRa、O或S；
X3为CH2C(＝O)、(CR4 2)1-3、CH2NRb、C(＝O)、C(＝O)NRb或C(＝O)O，前提条件是：
当X3为CH2NRb时，(I)的三环部分为6,7,8,9-四氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环，
当X3为C(＝O)NRb时，(I)的三环部分为8,9-二氢-1,2,2a1,6,8-五氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮，
当X3为CH2C(＝O)时，(I)的三环部分为8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮，并且
当X3为C(＝O)O时，(I)的三环部分为6H-8-氧杂-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(9H)-酮；
X4为CR2R3或NR3，前提条件是当X4为NR3时，X2为NRa且X3为C(＝O)；
R1为1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基或四氢吡喃基；
R2选自由以下组成的组：
(a)C1-10烷基，
(c)C1-10卤代烷基，
(d)环丙基或环丙基甲基，
(i)2-丁腈，
(j)苯基、苄基、苯氧基或苄基氧基甲基，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代，以及
(k)杂芳基甲基或杂芳氧基，其中所述杂芳基部分选自吡唑基、异噁唑基、噻唑基或吡啶基，其可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代；
R3和R4在每次出现时独立地为氢或C1-3烷基；
Ra为氢或C1-3烷基；
其中任何苯基部分任选被一个或多个卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基或C1-6烷基取代，其中所述C1-6烷基任选地独立地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：卤素、氧代基、羟基或C1-6烷氧基；并且，
其中每个环烷基独立地任选地被1至3个以下基团取代：卤素、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为CH2并且X4为CR2R3。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为CR2R3。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为CH2NRb并且X4为CR2R3。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)CH2并且X4为CR2R3。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为NRa，X3为C(＝O)NRb并且X4为CR2R3。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为O，X3为CH2并且X4为CR2R3。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中X2为O，X3为(CH2)2并且X4为CR2R3。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中其中X2为NRa，X3为C(＝O)并且X4为NR3。
11.根据权利要求2至9中任一项所述的化合物，其中R2为苄基且R3为氢，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代。
12.根据权利要求2至9中任一项所述的化合物，其中R2是杂芳基甲基且R3为氢，其中所述杂芳基部分选自吡唑基、异噁唑基、噻唑基或吡啶基，其可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代。
13.根据权利要求2至9中任一项所述的化合物，其中R2是苯氧基或杂芳氧基且R3为氢，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代，且其中所述杂芳基部分选自吡唑基、异噁唑基、噻唑基或吡啶基，其可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中CR2R3呈(S)构型。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中CR2R3呈(R)构型。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中：
X2为O，
X3为CH2或(CH2)2，并且，
R1为四氢吡喃基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1-甲基-1H-吡唑-5-基。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中X3为(CH2)2且R1为1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基或1-甲基-1H-吡唑-5-基。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中R2为苄基，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代。
19.根据权利要求17所述的化合物，其中R2为杂芳基-甲基，其中所述杂芳基部分选自吡唑基、异噁唑基、噻唑基或吡啶基，其可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代。
20.根据权利要求17所述的化合物，其中R2为苯氧基或杂芳氧基，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代，且其中所述杂芳基部分选自吡唑基、异噁唑基、噻唑基或吡啶基，其可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的化合物，其中R1为1-甲基-1H-吡唑-5-基。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中R2为苄基，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代。
23.根据权利要求21所述的化合物，其中R2为苄基。
24.根据权利要求21所述的化合物，其中R2为(1H-吡唑-1-基)甲基，其中所述吡唑基可被卤素、甲氧基、C3环烷基、甲基、三氟甲基取代。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中R2为(4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基。
26.根据权利要求24所述的化合物，其中R2为(4-三氟甲基-1H-吡唑-1-基)甲基。
27.根据权利要求24所述的化合物，其中R2为(4-环丙基-1H-吡唑-1-基)甲基。
28.根据权利要求21所述的化合物，其中R2为苯氧基，其中所述苯基部分可被甲氧基和卤素取代。
29.化合物，其选自
或其药学上可接受的盐。
30.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
31.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制细胞中的ERK蛋白激酶活性的药物中的用途。
32.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制有此需要的患者中的ERK蛋白激酶活性的药物中的用途。
33.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或改善有此需要的患者中的通过抑制ERK激酶的过度增殖性病症的严重性的药物中的用途，其中所述过度增殖性病症选自由以下组成的组：腺瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、表皮癌、滤泡型癌、泌尿生殖道癌、成胶质细胞瘤、霍奇金氏病、头颈癌、肝细胞瘤、角化棘皮瘤、肾癌、大细胞癌、白血病、肺癌、淋巴病症、黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良综合征、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、***状癌、胰腺癌、***癌、直肠癌、肉瘤、小细胞癌、睾丸癌、畸胎癌以及甲状腺癌。
34.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或改善有此需要的患者中的通过抑制ERK激酶的癌症的严重性的药物中的用途。
35.根据权利要求33所述的用途，其中如权利要求1所述的化合物是与用于治疗或改善过度增殖性病症的至少一种其它化疗剂共施用。
36.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
3-苄基-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,1,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮；
9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(S)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
37.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(9-(4-氯苄基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
3-苄基-5-甲基-7-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-3H-1,1,2a1,3,5-五氮杂苊-4(5H)-酮；
9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(S)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
(R)-9-(4-氯苄基)-6-甲基-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-8,9-二氢-1,2,2a1,6-四氮杂苯并[cd]甘菊环-7(6H)-酮；
4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐；以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
38.化合物：
或其药学上可接受的盐。
39.根据权利要求38所述的化合物，其为：
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
40.根据权利要求38所述的化合物，其为：
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
41.一种药物组合物，其包含：
或其药学上可接受的盐；以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
42.根据权利要求41所述的药物组合物，其包含：
(R)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或其药学上可接受的盐；以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
43.根据权利要求41所述的药物组合物，其包含：
(S)-4-(9-((4-氯-1H-吡唑-1-基)甲基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-1,2,2a1-三氮杂苯并[cd]甘菊环-4-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2-胺；或其药学上可接受的盐；以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
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