CN108287245B - 测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白测定试剂盒,该试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包含胶乳、双缓冲液、表面活性剂；试剂R2包含糖化血红蛋白单克隆抗体、双表面活性剂、缓冲液，该试剂盒测定准确度高、成本低、稳定性好。
Description
技术领域
本发明属于糖化血红蛋白检测技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白检测试剂盒。
背景技术
糖化血红蛋白(HbAlc)是血红蛋白与血液中葡萄糖结合而成的产物，其数值与血糖浓度成正比，且为不可逆的结合，随红细胞消亡而消失(红细胞的生命期120天左右)。由于糖化血红蛋白与红细胞寿命和平均血糖水平相关，其是评价糖尿病患者长期血糖控制较理想的指标，可反映过去2～3个月的平均血糖水平，不受每天血糖波动的影响。与微血管和大血管并发症的***密切。糖化血红蛋白水平升高，糖尿病视网膜病变、肾脏病变、神经病变、心血管事件发生风险均相应增加。糖化血红蛋白对糖尿病发生有较好的预测能力。
目前，临床上测定HbA1c的方法有很多，较常用的是HPLC、胶乳免疫比浊法、酶法等。HPLC法是测定HbA1c的金标准，该法快速、准确、简便，但需要特殊的仪器且仪器、试剂昂贵，测试成本较高，很难在基层医院实验室开展。亲和层析法耗时前处理较为麻烦，耗时较长；酶法检测精密度较差；胶乳免疫比浊法不需要特殊仪器，可在生化仪上与其他生化项目一同检测，单位时间内通量大，且测试成本比HPLC法低，适用于批量检测。
目前市面上胶乳试剂是传统的三试剂，试剂1为空白胶乳颗粒，试剂2为糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体，试剂3为对应二抗羊抗鼠IgG抗体。因为单抗和二抗形成的免疫复合物长期保存稳定性较差，逐渐失活导致测定信号下降，所以在使用前操作人员需将试剂2和试剂3混合，操作繁琐，且混合后的试剂稳定效期较短。
同时，由于胶乳免疫比浊法测定结果是测定HbA1c占总Hb蛋白的含量，因此在检测中重度贫血样本时易受影响，使检测结果偏低。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒及其制备方法，来取代传统的包含三种试剂的检测试剂盒。本发明解决了前述操作繁琐和试剂不稳定的问题，以及中重度贫血样本测值偏低的问题。
具体而言，本发明提供了一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，其包含试剂R1及试剂R2，其中所述试剂R1包含胶乳，缓冲液A，及表面活性剂A；且其中所述所述试剂R2包含糖化血红蛋白抗体，表面活性剂B，及缓冲剂B。
在一些实施方案中，缓冲液A包含选自下组的任意二种组分：甘氨酸，硼酸盐，Tris，磷酸盐。
优选地，缓冲液A所含组分选自下组：甘氨酸+硼酸盐、甘氨酸+Tris、或甘氨酸+磷酸盐；最优选地，缓冲液A所含组分为甘氨酸+硼酸盐。在一些实施方案中，试剂R1中的甘氨酸浓度为2mM-200mM，优选为50-150mM，最优选为100mM。在一些实施方案中，试剂R1中的硼酸盐浓度为1mM-50mM，优选为10-30mM，最优选为20mM。
在一些实施方案中，试剂R1中的胶乳粒径为50nm-200nm。在一个优选实施方案中，所述胶乳的粒径为80nm-150nm，最优选为106nm。在一些实施方案中，所述胶乳的浓度范围为0.2g/L-10g/L，优选地，所述胶乳的浓度范围为0.5g/L-2g/L，最优选为1g/L。
在一些实施方案中，试剂R1中的表面活性剂A为吐温系列表面活性剂，优选为吐温20(Tween-20)。优选地，表面活性剂A的浓度为0.01ml/L-1ml/L，优选为0.01ml/L-0.1ml/L，最优选为0.05ml/L。
在一些实施方案中，试剂R1进一步包含防腐剂。优选地，试剂R1中的防腐剂可以是Proclin系列防腐剂(例如PC150、PC200、PC300、PC950)、CAA(2-氯乙酰胺)、NaN3、苯酚、IZU(咪唑烷基脲)，优选为Proclin系列防腐剂或NaN3，最优选为PC950。在一些实施方案中，试剂R1中的防腐剂浓度为0.01ml/L-5ml/L，优选为0.2ml/L-2ml/L，最优选为1ml/L。
在一些实施方案中，试剂R1的pH值为5-9，例如5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，或9.0。优选地，试剂R1的pH值为8-8.5，最优选为8.1。
在一些实施方案中，试剂R2中所述表面活性剂B为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂。在一些实施方案中，所述吐温系列表面活性剂选自下组：吐温20(Tween-20)、吐温21(Tween-21)、吐温40(Tween-40)、吐温60(Tween-60)、吐温61(Tween-61)、吐温80(Tween-80)、吐温81(Tween-81)、吐温85(Tween-85)。在一些优选实施方案中，所述吐温系列表面活性剂是Tween-20或Tween-80，优选为Tween-20。
在一些实施方案中，所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂可以是聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、或二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚；优选为二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚。
在一些实施方案中，试剂R2中所述吐温系列表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L，最优选为0.5ml/L。在一些实施方案中，试剂R2中所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L；最优选为0.5ml/L。
在一些实施方案中，试剂R2中所述糖化血红蛋白抗体为糖化血红蛋白单克隆抗体(例如多聚单克隆抗体)。在一些实施方案中，所述糖化血红蛋白单克隆抗体可以是鼠抗人或兔抗人单克隆抗体。在一些实施方案中，试剂R2中所述糖化血红蛋白抗体的浓度为0.01-1mg/ml，优选为0.03-0.2mg/ml，最优选为0.1mg/ml。
在一些实施方案中，试剂R2中的缓冲液B可以是2-吗啉乙磺酸(MES)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、甘氨酸、硼酸盐、或磷酸盐等。在一个优选实施方案中，缓冲液B是磷酸盐缓冲液。更优选地，所述磷酸盐的浓度为10-200mM，优选为20-80mM，最优选为50mM。
在一些实施方案中，试剂R2还包含保护剂。优选地，所述保护剂选自下组：甘露醇、蔗糖、山梨醇、和海藻糖。更优选地，所述保护剂为甘露醇。在一些实施方案中，试剂R2中的保护剂浓度为2ml/L-50ml/L，更优选为5ml/L-30ml/L，最优选为20ml/L。
在一些实施方案中，试剂R2还包含蛋白稳定剂。优选地，所述蛋白稳定剂为BSA。在一些实施方案中，试剂R2中的蛋白稳定剂浓度为1g/L-50g/L，优选为1g/L-10g/L，最优选为5g/L。
在一些实施方案中，试剂R2还包含无机盐。优选地，所述无机盐为钠盐或钾盐，最优选为NaCl或KCl。在一些实施方案中，试剂R2中的无机盐浓度为1g/L-30g/L，优选为5g/L-15g/L，最优选为9g/L。
在一些实施方案中，试剂R2还包含防腐剂。优选地，试剂R2中的防腐剂可以是Proclin系列防腐剂(例如PC150、PC200、PC300、PC950)、CAA、NaN3、苯酚、IZU，优选为IZU。在一些实施方案中，试剂R2中的防腐剂浓度为0.5-5g/L，优选为2-4g/L，最优选为3g/L。
在一些实施方案中，试剂R2还包含螯合剂。在一些实施方案中，所述螯合剂选自下组：EDTA.2Na、EDTA.2K、EDTA.4Na，优选为EDTA.2Na。在一些实施方案中，试剂R2中的螯合剂浓度为0.01g/L-4g/L，优选为0.1g/L-1g/L，最优选为0.5g/L。
在一些实施方案中，试剂R2的pH值为4-9，例如4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，或9.0。优选地，试剂R2的pH值为5.5-6.5，最优选为6。
在一些优选实施方案中，本发明提供了一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，所述试剂盒包含R1和试剂R2，其包含如下组分：
试剂R1：
试剂R2：
在一些优选实施方案中，本发明提供了一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，所述试剂盒包含R1和试剂R2，其包含如下组分：
试剂R1：
试剂R2：
有益效果
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明在试剂R1中所采用的双缓冲液能够保持PH值稳定，可以消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化导致胶乳凝集和物理吸附能力发生变化，使试剂稳定性更好。而试剂2中的双表面活性剂作为助悬剂，保持抗体的结构稳定，同时可以进一步消除胶乳保存过程中胶乳电荷的变化对物理吸附的影响，同时使抗体不被吸附在胶乳上，促进抗原抗体的特异性反应。因此，本发明的试剂可以使胶乳物理吸附非特异性吸附血红蛋白和糖化血红蛋白的能力维持在一个合适的水平，使固相化的蛋白量到达恒定，因为样本中血红蛋白和糖化血红蛋白含量远远过量，受总血红蛋白量影响小，可以消除个体差异的影响，在测定中重度贫血样本更具优势。
具体实施方式
为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合下面结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例1.本发明糖化血红蛋白检测试剂盒的检测原理及使用
检测原理：样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与试剂1中胶乳有相同的非特异性吸附而固相化，当加入鼠抗人糖化血红蛋白抗体后形成糖化血红蛋白抗原抗体免疫复合物，凝集量因胶乳表面固相化的糖化血红蛋白量的不同而不同。通过测定其吸光度并与糖化血红蛋白百分浓度的标准曲线比较，可求出样本中的糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分含量。当总血红蛋白的量能够满足胶乳吸附量时，检测结果不受影响，但当总血红蛋白量降低不足满足胶乳吸附量时，与试剂2中的抗糖化血红蛋白抗体形成的免疫复合物减少，导致检测结果降低，同时抗体会被吸附在胶乳上，不利于抗原抗体的特异性反应。在临床应用上，由于个体差异，部分病人样本总血红蛋白含量不一样，当血红蛋白浓度减少时，则会影响试剂盒检测，如贫血病人样本，临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。依据我国的标准：正常人Hb含量在110-160g/L，轻度贫血(90g/L-109g/L)，中度贫血(60-89g/L)、重度贫血(30-59g/L)。
在此，给出了一个示例性的本发明试剂盒的使用方法：
1.按照上文所述实施方案任一项所述的组分及含量配制本发明的试剂盒；
2.取采集的全血样本，采用纯化水进行50倍稀释，溶血后将其与试剂1结合，样本中血红蛋白和糖化血红蛋白与胶乳有相同的非特异性吸附而固相化；
3.与试剂R2混合，试剂2中糖化血红蛋白单克隆抗体与其充分反应，结合形成糖化血红蛋白抗原抗体免疫复合物，凝集量因胶乳表面固相化的糖化血红蛋白量的不同而不同；
4.用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
5.根据吸光度变化值计算出样本中HbA1c的百分含量。
应当理解，本发明的试剂盒的使用方式不局限于本文提供的示例，其步骤、用量及其他参数可以在不违背发明主旨的基础上进行修改，只要能达到本发明的效果即可。
实施例2.本发明糖化血红蛋白检测试剂盒对于降低个体差异影响及提高稳定性
的效果
(1)本发明试剂盒的制备：按照下表1所述组分及含量分别配制实验组1及实验组2的试剂盒。
表1.实验组1和2试剂盒的制备
注：a Emulgen A90即表面活性剂二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚，为花王株式会社Emulgen系列产品。
(2)效果验证方法：
a.个体差异验证：测定10例HbA1c浓度一样的样本，差别在于血红蛋白(Hb)浓度不同。10例样本HbA1c值均为5.2％，采用国际公认的IFCC质谱方法测定，该方法具有高度的特异性，数值能反映其真实含量。10例样本Hb浓度分别为32g/L、45g/L、55g/L、65g/L、98g/L、110g/L、122g/L、125g/L、130g/L、155g/L，为希森美康血球仪测定值，Hb浓度呈梯度分布，可以反映不同个体差异。其中：1-5#样本属于贫血样本，Hb值越低说明贫血越明显，6-10#样本为常规样本。采用试验试剂盒市售厂家试剂分别测试这10例样本，根据市售试剂测定值可以进行判定HbA1c检测受个体差异影响，试验试剂检测结果优于市售试剂测定值，则说明试验试剂可以有消除个体差异影响的效果。
b.稳定性验证：在2～8℃贮存条件下，分别在0月、3月对该项目的质控进测定，观察试剂的稳定性。
(3)实验结果：
将实验组1和2的试剂盒与传统试剂盒(即市售试剂1和市售试剂2)进行了对比试验，其个体差异验证结果及长期稳定些验证结果如下表2和3所示：
表2.实验组1和2的个体差异样本实验结果(#1-#10分别代表病理样本1-10，HbA1c值单位为％)
| 全血样本 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 7# | 8# | 9# | 10# |
| Hb(g/L) | 32 | 45 | 55 | 65 | 98 | 110 | 125 | 122 | 130 | 155 |
| 质谱测定(对照) | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 |
| 市售试剂1 | 1.02 | 2.36 | 3.69 | 3.96 | 5.02 | 5.12 | 5.36 | 5.25 | 5.36 | 5.36 |
| 市售试剂2 | 1.53 | 2.93 | 3.54 | 3.87 | 4.89 | 5.13 | 5.42 | 5.27 | 5.29 | 5.26 |
| 实验组1 | 4.11 | 4.48 | 4.62 | 4.88 | 5.10 | 5.21 | 5.22 | 5.25 | 5.24 | 5.30 |
| 实验组2 | 4.12 | 4.43 | 4.63 | 4.96 | 5.15 | 5.15 | 5.23 | 5.23 | 5.26 | 5.29 |
以上结果表明：传统试剂盒测定HbA1c在Hb＞110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果。
与市售试剂测定结果相比，本发明试剂盒的测定值更接近真实值，说明其可以消除个体差异在糖化血红蛋白；优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
而实验组1和2的HbA1c检测结果相较传统试剂盒更接近真实值，则说明在消除个体差异样本对HbA1c测值影响上效果更佳。优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
表3.实验组1和2的长期稳定性实验结果
由表3的稳定性数据可以看出：3个月的质控测定数据与0个月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下稳定性高。
实施例3.不同浓度值的本发明糖化血红蛋白检测试剂盒的效果测试
(1)试剂盒的制备：按照下表4所述组分及含量分别配制实验组3-7的试剂盒。
表4.实验组3-7的组分表
(2)效果验证方法：
个体差异验证及稳定性效果验证方法与实施例2相同。
(3)实验结果：
将实验组3-7的试剂盒与传统试剂盒(即市售试剂1和市售试剂2)进行了对比试验，其个体差异验证结果及长期稳定些验证结果如下表5和6所示：
表5.实验组3-7的个体差异样本实验结果(#1-#10分别代表病理样本1-10，HbA1c值单位为％)
以上结果表明：传统试剂盒在测定HbA1c在Hb>110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果。
与市售试剂测定结果相比，本发明试剂盒的测定值更接近真实值，说明其可以消除个体差异在糖化血红蛋白；优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
而实验组3-7的试剂盒对HbA1c的检测结果相较市售试剂更接近真实值，尤其是当Hb＜110g/L时其测值明显优于传统试剂盒，说明其在消除个体差异样本对HbA1c测值影响方面的效果有了显著提升。由结果可见，实验组3-6测定结果已经显著好于传统试剂盒，接近于真实值。而实验组7的检测结果与真实值基本无差异，说明其能完全消除个体差异的影响。
表6.实验组3-7的长期稳定性实验结果
由表6的稳定性数据可以看出：3个月的质控测定数据与0个月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下可稳定。且实验组5-6结果优于实验组3-4，最优选的配方为实验组7。
实施例4.本发明糖化血红蛋白检测试剂盒的浓度边界测试
实施例3显示了本发明试剂盒各组分的适用浓度范围，本实施例则测试了适用范围外的其他浓度对于个体差异及稳定性效果的影响。
(1)试剂盒的制备：按照下表7所述组分及含量分别配制实验组8-9的试剂盒。
表7.实验组8-9的组分表
(2)实验结果：
实验组8实验组校准曲线较差，低端灵敏度较差，高端无梯度，校准不通过。实验组9实验组灵敏度较好，但高端信号值超限，也导致校准失败，效果较差。
实施例5.替换试剂R1中的双缓冲液组分、试剂R2中双表面活性剂组分的效果测试
(1)试剂盒的制备：按照下表8所述组分及含量分别配制实验组3-7的试剂盒。
表8.实验组10-12的组分表
(2)效果验证方法：
个体差异验证及稳定性效果验证方法与实施例2相同。
(3)实验结果：
将实验组10-12的试剂盒与传统试剂盒(即市售试剂1和市售试剂2)进行了对比试验，其个体差异验证结果及长期稳定些验证结果如下表9和10所示：
表9.实验组10-12的个体差异样本实验结果(#1-#10分别代表病理样本1-10，HbA1c值单位为％)
| 全血样本 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 7# | 8# | 9# | 10# |
| Hb(g/L) | 32 | 45 | 55 | 65 | 98 | 110 | 125 | 122 | 130 | 155 |
| 质谱测定(对照) | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 |
| 实验组10 | 2.52 | 2.92 | 4.12 | 4.55 | 5.12 | 4.89 | 5.11 | 4.98 | 4.78 | 4.96 |
| 实验组11 | 2.53 | 2.92 | 4.13 | 4.50 | 5.25 | 4.78 | 5.33 | 4.85 | 5.06 | 5.06 |
| 实验组12 | 2.56 | 2.63 | 4.26 | 4.53 | 5.36 | 4.93 | 5.36 | 4.96 | 5.13 | 4.76 |
| 市售试剂1 | 1.02 | 2.36 | 3.69 | 3.96 | 5.02 | 5.12 | 5.36 | 5.25 | 5.36 | 5.36 |
| 市售试剂2 | 1.53 | 2.93 | 3.54 | 3.87 | 4.89 | 5.13 | 5.42 | 5.27 | 5.29 | 5.26 |
试验结果表明：市售试剂1和市售试剂2测定HbA1c在Hb＞110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果。
在进行了如上所述的试剂替换后，三组试验试剂盒的HbA1c对于样本1#-5#(Hb＜110g/L时)的检测结果与真实值有较大差异，说明测值不够准确。
表10.实验组10-12的长期稳定性实验结果
稳定性数据表明：0个月的质控测定数据，偏差均较大，3个月质控测定均不在要求范围(±7％)内，说明试剂2-8℃稳定性不好。
实施例6.可替换试组分的效果测试
本实施例则测试了试剂R1和R2中一些可替换组分对效果的影响。
(1)试剂盒的制备：按照下表11所述组分及含量分别配制实验组13-14的试剂盒。
表11.实验组13-14的个体差异样本实验结果(#1-#10分别代表病理样本1-10，HbA1c值单位为％)
(2)效果验证方法：
个体差异验证及稳定性效果验证方法与实施例2相同。
(3)实验结果：
将实验组13-14的试剂盒与传统试剂盒(即市售试剂1和市售试剂2)进行了对比试验，其个体差异验证结果及长期稳定些验证结果如下表12和13所示：
表12.实验组13-14的个体差异样本实验结果(#1-#10分别代表病理样本1-10，HbA1c值单位为％)
| 全血样本 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 7# | 8# | 9# | 10# |
| Hb(g/L) | 32 | 45 | 55 | 65 | 98 | 110 | 125 | 122 | 130 | 155 |
| 质谱测定(对照) | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 | 5.2 |
| 实验组13 | 4.02 | 4.45 | 4.72 | 4.99 | 5.11 | 5.21 | 5.22 | 5.23 | 5.27 | 5.25 |
| 实验组14 | 4.10 | 4.36 | 4.69 | 4.98 | 5.14 | 5.23 | 5.25 | 5.25 | 5.31 | 5.26 |
| 市售试剂1 | 1.02 | 2.36 | 3.69 | 3.96 | 5.02 | 5.12 | 5.36 | 5.25 | 5.36 | 5.36 |
| 市售试剂2 | 1.53 | 2.93 | 3.54 | 3.87 | 4.89 | 5.13 | 5.42 | 5.27 | 5.29 | 5.26 |
试验结果表明：传统试剂盒测定HbA1c在Hb＞110g/L时，测定结果较为准确；当Hb＜110g/L时，随着Hb值的降低，测定结果与真实值差异越来越大，说明Hb的浓度低于110g/L，影响HbA1c的检测，且Hb越低，HbA1c测值越低；说明个体差异样本影响检测HbA1c结果。
本发明试剂盒测定值比市售试剂测定结果更接近真实值，说明可以消除个体差异在糖化血红蛋白；优于市售试剂测定结果的基础上，测定结果越接近于真实值，说明效果越好。
上表结果可以看出，采用上述替换(例如用Tween-80替换Tween-20，用A-60替换A-90)，仍然能达到本发明降低个体差异影响的效果。
表13.实验组13-14的长期稳定性实验结果
稳定性数据表明：3个月的质控测定数据与0个月的相比，测得值差异很小，偏差均在质控要求范围(±7％)内，说明本发明的检测试剂盒在2～8℃贮存条件下可稳定。
上表结果可以看出，采用上述替换(例如用Tween-80替换Tween-20，用A-60替换A-90)，仍然能达到本发明的稳定性效果。
应该理解到，本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可在不悖离本发明主旨的情况下变化。还应理解本文所述的实施例仅仅是出于描述具体实施方案的目的，而非意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附的权利要求限定。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。
Claims (7)
1.一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，其包含试剂R1及试剂R2，其中所述试剂R1包含胶乳，缓冲液A，及表面活性剂A；且其中所述试剂R2包含糖化血红蛋白抗体，表面活性剂B，及缓冲液B；其中所述缓冲液A为甘氨酸和硼酸盐的组合；所述表面活性剂B为吐温系列表面活性剂+二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂；
其中所述试剂R1的pH值为5-9；
其中所述试剂R2的pH值为4-9；
所述试剂R1中胶乳的浓度为0.2g/L-10g/L；所述试剂R1中甘氨酸的浓度为2mM-200mM，硼酸盐的浓度为1mM-50mM；所述试剂R1中表面活性剂A的浓度为0.01ml/L-1ml/L；所述试剂R2中糖化血红蛋白抗体的浓度为0.01mg/ml-1mg/ml；所述试剂R2中吐温系列表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L；所述试剂R2中缓冲液B的浓度为10mM-200mM。
2.权利要求1的试剂盒，其中所述吐温系列表面活性剂选自下组：吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81、和吐温85。
3.权利要求1-2任一项的试剂盒，其中所述试剂R1中的胶乳粒径为50nm-200nm。
4.权利要求1-2任一项的试剂盒，其中所述试剂R1还包含防腐剂。
5.权利要求1-2任一项的试剂盒，其中所述试剂R2还包含如下的一种或多种：保护剂、蛋白稳定剂、无机盐、防腐剂、螯合剂。
6.一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，其各自包含如下组分：
试剂R1：
试剂R2：
7.一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，所述试剂盒包含试剂R1和试剂R2，其各自包含如下组分：
试剂R1：
试剂R2：
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