CN108132309B - 一种测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的方法，在铁皮石斛样品中加入硫化钠溶液，噻菌铜衍生转化成代谢产物噻二唑，乙腈提取后加酸调节pH值，再加入乙酸乙酯液液分配，取有机相用旋转蒸发器浓缩至干，利用固相萃取法去除提取液中干扰物质，最后采用超高效液相色谱‑质谱/质谱联用仪检测。本发明方法可以有效避免样品的基质干扰，获得良好的效果。本发明方法具有较高的准确度，精密度和灵敏度，回收率高，杂质干扰小可以有效的测定噻菌铜在铁皮石斛中的含量。

Description

一种测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法
技术领域
本发明属于农药残留量的测定技术领域，特别是涉及铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法。
背景技术
噻菌铜是浙江龙湾化工有限公司开发的专利产品，化学名称2-氨基-5-巯基-1、3、4-噻二唑铜络合物，主要代谢产物为噻二唑，是一种高效广谱的内吸性杀菌剂。杀菌机理独特，既有噻唑基团对细菌的独特防效，又有铜离子对真菌、细菌的防治作用，可广泛用于20余种作物60多种细菌和真菌性病害的防治。目前已应用于大白菜、番茄、柑橘、黄瓜、水稻、西瓜、烟草等作物上的软腐病、叶斑病、白叶枯病等病害防治。此药高效、低毒、安全，防治作物细菌性、真菌性病害高效，防治铁皮石斛软腐病效果明显。
目前，关于噻菌铜残留的检测方法，还没有相应的国家及行业标准。近年来有国内文献报道采用高效液相法测定在西瓜、土壤和烟草中的噻菌铜残留量。由于铁皮石斛基质复杂，采用高效液相法检测，净化效果不理想，基质干扰严重，灵敏度偏低，无法使用液相法准确测量铁皮石斛中的噻菌铜残留量，需要开发出更有效的检测方法。
发明内容
为了评价噻菌铜在铁皮石斛中使用后的安全性，本发明建立了使用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪（UPLC/MS/MS）法测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的方法。具体是在铁皮石斛样品中加入硫化钠溶液，噻菌铜衍生转化成代谢产物噻二唑，乙腈提取后加酸调节pH值，再加入乙酸乙酯液液分配，取有机相用旋转蒸发器浓缩至干，利用固相萃取法去除提取液中干扰物质，最后采用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪（UPLC/MS/MS）检测。结果表明：本发明方法线性范围0.05~5.0 mg/L，最低检测浓度0.050 mg/kg，平均回收率92%～96%。本发明提供如下的技术方案：
测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法，其特征在于按如下的步骤进行：
（1）衍生：称取样品5-10g，置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液20-60mL，加热至30-60℃振荡30 分钟；
（2）提取：再加20-60 mL乙腈，室温振荡1-2小时，振荡结束后抽滤，滤液使用1mol/L H2SO4调节pH至4-5；
（3）萃取：将上述溶液转移至分液漏斗中，加入50-100 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，加入2.0 mL石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）溶解，待净化；
（4）净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）洗脱，收集淋洗液，减压浓缩尽干，氮气吹干后用甲醇定容，经滤膜过滤待测；
（5）测定：采用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪检测。
本发明测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的具体方法如下：
1、试验材料
试剂与材料：硫化钠、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、丙酮、石油醚均为分析纯，甲醇（色谱纯，德国Merck），纯水（Millipore公司），弗洛里硅土固相柱（北京振翔科技有限公司）
标准品：噻菌铜标准品（纯度99.1%，由浙江龙湾化工有限公司提供）
仪器：岛津LCMS8050高效液相色谱串联质谱联用仪；上海申胜R-201型旋转蒸发器；上海申胜W201B型数控恒温浴锅；SHZ-D(III)型循环水式真空泵；SPS202F型电子天平；瑞士METTLER TOLEDO万分之一天平等。
2、试验方法
衍生提取：称取铁皮石斛样品5.0g置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液20 mL，加热至30 ℃，振荡30分钟，再加20.0 mL乙腈继续振荡1小时，振荡结束后抽滤，抽滤，滤液使用1 mol/L H2SO4调节pH至4-5，将上述溶液转移至分液漏斗中，加入50 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，用2.0 mL石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）溶解，待净化。
净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）洗脱，收集淋洗液，于40℃恒温水浴下减压浓缩尽干，氮气吹干后用色谱甲醇定容，过0.22μm滤膜，待测。
3、仪器分析条件
3.1液相条件
色谱柱：waters acquity UPLCTM BEH C18（1.7µm，2.1×100 mm）；
柱温：40℃；
流速：0.20 mL/ 分钟；
流动相：乙腈：0.1%甲酸水溶液=20:80（v/v）
进样量：1 µL；
外标法定量。
3.2 质谱条件
质谱仪器条件：毛细管电压为4.0 kV，DL温度250℃，雾化气流量3.0 L/分钟，Interface 温度300℃，加热器流量10 L/分钟，电离方式：ESI+，检测方式为多反应监测扫描模式（MRM），见表1。
表1 质谱条件
母离子 子离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V)
133.90 75.00 -14 -17 -16
133.90 42.95 -24 -31 -17
4、方法的线性关系
用二甲基甲酰胺溶解标样，配制得到100 mg/L噻菌铜标准储备溶液。用二甲基甲酰胺稀释得到噻菌铜系列标准工作溶液，浓度分别为0.05，0.10，0.20，0.50，1.0，2.0，5.0mg/L。在空白水中，添加噻菌铜进样浓度为0.05，0.10，0.20，0.50，1.0，2.0，5.0 mg/L系列工作液，按上述方法的处理步骤和仪器条件进样，以浓度-峰面积绘制噻菌铜标准曲线，其回归方程为y = 287604x-5164，R²= 0.9995，其中y为噻菌铜峰面积，x为标准溶液浓度。
5、方法回收率和相对标准偏差
在空白铁皮石斛样品中，分别添加3档浓度（0.050，0.50，10 mg/kg）的噻菌铜标准溶液，每档重复5次，同时在空白水溶液中添加3档浓度的噻菌铜标准溶液作为标液处理，按上述的处理步骤和仪器方法进样，测定回收率，结果见表2，回收率曲线如图2所示。试验表明，回收率符合农药残留检测要求，证明了该方法有较好的回收率和重复性。
表2 噻菌铜添加回收率试验
Figure DEST_PATH_IMAGE002
6、方法的最低检出浓度
应用上述方法操作，在铁皮石斛中噻菌铜的最低添加浓度0.050 mg/kg，其样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，因此得出：噻菌铜在铁皮石斛中的最低检测浓度为0.050 mg/kg。
7、最小检出量
在上述分析条件下，仪器对噻菌铜的最小检出量为5.0×10-11 g。以仪器3倍信号噪音比为仪器检出限，最小检出量（g）=检出限（mg/L）×进样体积（µL）×10-9。
本发明测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法的积极效果在于：本发明方法可以有效避免样品的基质干扰，获得良好的效果。本发明方法具有较高的准确度，精密度和灵敏度，回收率高，杂质干扰小可以有效的测定噻菌铜在铁皮石斛中的含量。
附图说明
图1 未含噻菌铜的空白铁皮石斛样品色谱图。
图2 空白铁皮石斛样品中添加0.50 mg/kg噻菌铜时的色谱图。
具体实施方式
为了更充分的解释本发明的实施，提供铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法的实施实例。这些实施例仅仅是解释而不是限制本发明的范围。其中所有原料均有市售。
实施例1
（1）衍生：称取铁皮石斛样品5g，置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液20mL，加热至30℃，振荡30 分钟；
（2）提取：再加20 mL乙腈，室温振荡1小时，振荡结束后抽滤，滤液使用1 mol/LH2SO4调节pH至4-5；
（3）萃取：将上述溶液转移至分液漏斗中，加入50 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，加入2.0 mL石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）溶解，待净化；
（4）净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）洗脱，收集淋洗液，减压浓缩尽干，氮气吹干后用甲醇定容，经滤膜过滤待测；
（5）测定：采用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪检测；
（6）测量结果：通过以上步骤测定铁皮石斛中噻菌铜的含量低于0.050 mg/kg。
实施例2
（1）衍生：称取铁皮石斛样品10g，置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液60mL，加热至60℃，振荡30分钟；
（2）提取：再加60 mL乙腈，室温振荡2小时，振荡结束后抽滤，滤液使用1 mol/LH2SO4调节pH至4-5；
（3）萃取：将上述溶液转移至分液漏斗中，加入100 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，加入2.0 mL石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）溶解，待净化；
（4）净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）洗脱，收集淋洗液，减压浓缩尽干，氮气吹干后用甲醇定容，经滤膜过滤待测；
（5）测定：采用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪检测；
（6）测量结果：通过以上步骤测定铁皮石斛中噻菌铜的含量为0.081 mg/kg。
实施例3
（1）衍生：称取铁皮石斛样品7.5 g，置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液20-60 mL，加热至40℃振荡30 分钟；
（2）提取：再加40 mL乙腈，室温振荡1.5小时，振荡结束后抽滤，滤液使用1 mol/LH2SO4调节pH至4-5；
（3）萃取：将上述溶液转移至分液漏斗中，加入70 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，加入2.0 mL石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）溶解，待净化；
（4）净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮（1∶1，v：v）洗脱，收集淋洗液，减压浓缩尽干，氮气吹干后用甲醇定容，经滤膜过滤待测；
（5）测定：采用超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪检测；
（6）测量结果：通过以上步骤测定铁皮石斛中噻菌铜的含量低于0.050 mg/kg。
在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明不受说明书中所举实例实施方式的限制。

Claims (1)

1.一种测定铁皮石斛中噻菌铜残留量的分析方法，其特征在于按如下的步骤进行：
（1）衍生：称取铁皮石斛样品5-10g，置于具塞锥形瓶中，加入0.1mol/L硫化钠溶液20-60 mL，加热至30-60℃，振荡30 min；
（2）提取：再加20-60 mL乙腈，室温振荡1-2小时，振荡结束后抽滤，滤液使用1 mol/LH2SO4调节pH至4-5；
（3）萃取：将上述溶液转移至分液漏斗中，加入50-100 mL乙酸乙酯萃取，取上层有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液于40 ℃恒温水浴下减压浓缩近干，加入2.0 mL石油醚∶丙酮，v：v=1∶1，溶解，待净化；
（4）净化：取弗罗里硅土固相柱，石油醚活化，取上述待净化提取液上样，石油醚∶丙酮，v：v=1∶1，洗脱，收集淋洗液，减压浓缩尽干，氮气吹干后用甲醇定容，经滤膜过滤待测；
（5）测定：采用液相色谱质谱联用仪进行检测，测定的条件为：色谱柱：waters acquityUPLCTM BEH C18，1.7µm，2.1×100 mm；柱温：40℃；流速：0.20 mL/ min；流动相：乙腈：0.1%甲酸水溶液=20:80，v/v；进样量：1 µL；外标法定量；质谱条件：毛细管电压为4.0 kV，DL温度250℃，雾化气流量3.0 L/min，Interface 温度300℃，加热器流量10 L/min；电离方式：ESI+，检测方式为多反应监测扫描模式，定量定性离子对为133.90>75.00*，定量 Q1-17V；CE -17V；Q3 -16V，133.90>42.95，定性 Q1 -24V；CE -31V；Q3 -17V。
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