CN113945644A - 一种分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的uplc-ms/ms方法 - Google Patents

一种分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的uplc-ms/ms方法 Download PDF

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Abstract

一种分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的UPLC‑MS/MS方法，其特征在于：采用稀释的方法代替QuEChERS方法净化，既消除了基质效应又解决了QuEChERS净化导致氯氟醚菌唑回收率低的问题，样品经乙腈提取，提取液盐析，取上层有机相用0.1％甲酸稀释，超高效液相色谱‑串联质谱仪(UPLC‑MS/MS)检测。本发明方法可用于葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的残留分析，具有简单、快速、成本低等优势，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。

Description

一种分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的UPLC-MS/MS 方法
技术领域：
本发明属于农产品中农药残留的测定技术领域，涉及葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的残留测定方法。
背景技术：
氯氟醚菌唑(mefentrifluconazole)是由巴斯夫公司开发的新型***类杀菌剂，开发代号BAS750F。该品种是继丙硫菌唑之后10多年来上市的第1个***类杀菌剂，分子中独特的异丙醇基团，使其能够非常灵活地从游离态自由旋转与靶标结合成为结合态，很好地抑制壳针孢菌的转移，减少病菌突变，延缓抗性的产生和发展。具有内吸传导性，兼具保护和治疗作用，相对于其他唑类杀菌剂，氯氟醚菌唑不仅活性更高；而且拥有较好的环境特性，其对哺乳动物、蜜蜂等毒性较低，安全性较高。适用作物范围广，对一系列难防病害具有优异的活性，可用于玉米、谷物、大豆等大田作物以及辣椒、葡萄等经济作物，防治由壳针孢菌引起的病害以及锈病等。
吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是一种新型甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，对几乎所有真菌类(子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌类)病害都显示出很好的活性；具有保护、治疗、叶片渗透传导作用，广泛用于防治水果、蔬菜、谷物等作物中的白粉病、锈病、霜霉病等病害。
巴斯夫公司计划未来在50多个国家上市氯氟醚菌唑单剂及和吡唑醚菌酯的复配制剂，包括亚洲地区，预计2019年上市。但是，目前国内外尚无氯氟醚菌唑的残留分析方法报道，也未制定限量标准。已报道的黄瓜、西瓜、大白菜、烟叶、柑橘、土壤等样品基质中吡唑醚菌酯的残留分析方法以液相色谱法和液相色谱-串联质谱法为主，前处理多采用C18、N-丙基乙二胺(PSA)或石墨化碳为填料的固相萃取或QuEChERS方法净化。固相萃取方法耗时，成本高，QuEChERS方法操作简单，但是氯氟醚菌唑由于结构中含有Cl、F原子，易被PSA和NH2吸附，导致回收率较低。
本研究对前处理方法做了改进，采用稀释的方法代替QuEChERS方法净化，超高效液相色谱-串联质谱法检测，可同时检测葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留量。该方法具有高效、快速、成本低、操作简便、净化效果好，灵敏度高等优势，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求，可为其他农产品中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的残留分析提供技术支持。
发明内容：
本发明的目的在于公开一种采用改进的QuEChERS方法处理样品，分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的UPLC-MS/MS方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的，本发明所述的葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的测定方法，包括以下步骤：
a、准确称取匀浆好的样品5.00g(精确至0.01g)于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入20mL乙腈，于垂直振荡器上震荡5min，再加入2.0g氯化钠，于垂直振荡器上震荡5min，4000转/min，离心5min，盐析分层。
b、取1mL上清液于10mL聚丙烯塑料离心管中，加1mL0.1％甲酸，涡旋混匀，过0.22μm有机滤膜于进样小瓶，待测。
c、准备标准工作溶液：分别称取氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯标准品适量，用甲醇溶解并定容，配制成浓度约为200μg/mL的标准储备液，于4℃条件下保存，可使用六个月。分别吸取2种农药标准储备液适量，用甲醇稀释，分别配制成浓度为10μg/mL的单个标准溶液和浓度为10μg/mL、1μg/mL混合标准工作液，现用现配。
d、准备基质匹配标准溶液：将空白葡萄样品按相同前处理方法处理，定容得到空白样品基质溶液。分别取适量混合标准工作溶液，用空白样品基质溶液稀释，配制浓度为0.0001μg/mL、0.001μg/mL、0.005μg/mL、0.0125μg/mL、0.05μg/mL的系列基质匹配标准溶液。
e、采用UPLC-MS/MS法对基质匹配标准溶液和供试样品进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标农药的残留量。
在UPLC-MS/MS测定时采用的色谱条件为：色谱柱：Acquity UPLC HSS T3柱(2.1mm×100mm，1.8μm)；流动相：乙腈-0.1％甲酸，体积比90:10等度洗脱。流速：0.2mL/min；进样量：2μL；柱温：40℃。
采用的质谱条件为：电离模式：电喷雾正离子ESI(+)；毛细管电压：3.0Kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450-500℃；脱溶剂气流速：900-1000L/hr；锥孔反吹气流速：150L/hr；雾化气流速：7bar。检测方式：多反应监测扫描(MRM)；2种农药的保留时间及质谱采集参数见表1。
本发明方法可用于检测葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留量，具有高效、快速、操作简便、成本低、净化效果好、灵敏度高等优势，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。与现有技术相比本发明方法具有以下优良效果：
(1)本发明方法公开了一种分析葡萄中氯氟醚菌唑残留的UPLC-MS/MS方法，目前尚无氯氟醚菌唑残留分析方法的文献报道。
(2)本发明方法采用稀释的方法代替QuEChERS方法净化，解决了氯氟醚菌唑因被PSA或NH2吸附导致回收率降低的问题，同时消除了基质效应。
(3)本发明方法可用于氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的同步分析，具有操作简便、快速、成本低、净化效果好、灵敏度高等优势。
本发明方法的灵敏度：
以信噪比为3计算方法的检出限，以最小添加浓度为定量限，同时满足信噪比大于等于10的要求。氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的检测限为0.00008mg/kg。氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的定量限为0.001mg/kg。
本发明方法的线性：
为了消除基质效应，采用基质匹配标准工作溶液绘制标准曲线。以农药的浓度为横坐标，定量离子的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程和相关系数见表2。氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯在0.0001～0.05μg/mL浓度范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系，相关系数均大于0.999。
本发明方法的准确度和精密度：
在三个浓度水平做加标回收试验，每个浓度水平做5个平行样品，分别进行样品前处理和UPLC-MS/MS分析，并按照加标量和测定值计算回收率。葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的平均回收率和相对标准偏差(RSD)见表3。由表3可以看出，2种农药在葡萄中的回收率在77.5％和98.6％之间，相对标准偏差在1.9％和6.1％之间，符合残留分析的要求。
表1氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的保留时间和质谱采集参数
Figure BDA0002587260140000041
表2氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的标准曲线、相关系数和灵敏度
Figure BDA0002587260140000042
表3葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯的加标回收率及相对标准偏差(n＝5)
Figure BDA0002587260140000043
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
400克/升氯氟醚菌唑·吡唑醚菌酯悬浮剂，制剂稀释1500倍，施药3次，施药间隔7天，以末次施药后7天采集的葡萄样品为样本，采用本发明方法进行样品前处理，超高效液相色谱-串联质谱法测定。制备方法如下：
1、仪器与试剂：
美国Waters AcquityTM UPLC I-Class超高效液相色谱仪，Xevo TQ-S三重四极杆质谱仪；瑞士Mettler电子天平(感量0.00001g和0.01g)；托摩根高通量组织研磨仪；旋涡混合器；台式高速离心机；美国Milli-Q超纯水仪。
氯氟醚菌唑标准品纯度为99.7％，吡唑醚菌酯标准品纯度99.9％；乙腈、甲酸为色谱纯，氯化钠为分析纯，水为超纯水。
2、样品前处理方法：
准确称取匀浆好的葡萄样品5g(精确至0.01g)，于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入20mL乙腈，于组织研磨仪上振荡5min，再加入氯化钠2g，于组织研磨仪上振荡5min，4000转/min离心5min。取上层乙腈相1mL于10mL聚丙烯塑料离心管中，加入1mL0.1％甲酸，涡旋混匀，过0.22μm有机滤膜至进样小瓶，待测。
3、准备标准工作溶液：
分别吸取氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯标准储备液适量，用甲醇稀释，配制浓度为10μg/mL、1μg/mL混合标准工作液，现用现配。
4、准备基质匹配标准溶液：
对空白葡萄样品按相同前处理方式处理(参照步骤2“样品前处理方法”)，得到空白样品基质溶液。分别取适量混合标准工作溶液，用空白样品基质溶液配制浓度为0.0001μg/mL、0.001μg/mL、0.005μg/mL、0.0125μg/mL、0.05μg/mL的系列基质匹配标准溶液。
5、测定方法
对系列浓度的基质匹配标准溶液进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。然后对供试葡萄样品进行测定，得到农药的定量离子的峰面积，代入标准曲线，计算得2种农药的残留量见表4。
在用UPLC-MS/MS法测定时采用的色谱条件为：色谱柱：Acquity UPLC HSS T3柱(2.1mm×100mm，1.8μm)；流动相：乙腈-0.1％甲酸，体积比90:10等度洗脱。流速：0.2mL/min；进样量：2μL；柱温：40℃。
采用的质谱条件为：电离模式：电喷雾正离子ESI(+)；毛细管电压：3.0Kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450-500℃；脱溶剂气流速：900-1000L/hr；锥孔反吹气流速：150L/hr；雾化气流速：7bar。检测方式：多反应监测扫描(MRM)；2种农药的保留时间及质谱采集参数见表1。
表4实测样品中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留量结果
Figure BDA0002587260140000051
Figure BDA0002587260140000061

Claims (3)

1.一种分析葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的UPLC-MS/MS方法，其特征在于：采用稀释的方法代替QuEChERS方法净化，既消除了基质效应又解决了QuEChERS净化导致氯氟醚菌唑回收率低的问题，样品经乙腈提取，提取液盐析，取上层有机相用0.1％甲酸稀释，超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定。具体步骤如下：
a、准确称取匀浆好的样品5.00g(精确至0.01g)于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入20mL乙腈，于垂直振荡器上震荡5min，再加入2.0g氯化钠，于垂直振荡器上震荡5min，4000转/min，离心5min，盐析分层。
b、取1mL上清液于10mL聚丙烯塑料离心管中，加1mL0.1％甲酸，涡旋混匀，过0.22μm有机滤膜于进样小瓶，待测。
c、准备标准工作溶液：分别称取氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯标准品适量，用甲醇溶解并定容，配制浓度约为200μg/mL的标准储备液，于4℃条件下保存，可使用六个月。分别吸取2种农药标准储备液适量，用甲醇稀释，分别配制成浓度为10μg/mL的单个标准溶液和浓度为10μg/mL、1μg/mL混合标准工作液，现用现配。
d、准备基质匹配标准溶液：将空白葡萄样品按相同前处理方法处理，得到空白样品基质溶液。分别取适量混合标准工作溶液，用空白样品基质溶液稀释，配制浓度为0.0001μg/mL、0.001μg/mL、0.005μg/mL、0.0125μg/mL、0.05μg/mL的系列基质匹配标准溶液。
e、采用UPLC-MS/MS法对基质匹配标准溶液和供试样品进行测定，以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标农药的残留量。
2.权利要求1所述的测定方法，其中的样品为经组织匀浆机匀浆好的葡萄样品。
3.权利要求1所述的葡萄中氯氟醚菌唑和吡唑醚菌酯残留的UPLC-MS/MS方法，其特征在于：采用的色谱条件为：HSS T3色谱柱，流动相由有机相和水相组成，有机相是乙腈，水相是0.1％甲酸水溶液，0.1％是体积比，采用等度洗脱，有机相和水相体积比为90:10，流速0.2mL/min，柱温40℃，进样体积2μL。采用的质谱条件为：电喷雾正离子电离ESI(+)，多反应监测扫描(MRM)，毛细管电压：3.0Kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450-500℃；脱溶剂气流速：900-1000L/hr；锥孔电压10-90V，碰撞能量10-90V。
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