CN108085273A - 一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用 - Google Patents

一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用。该菌株名为Streptomyces antibioticus 2017‑09，于2017年10月25日保藏在位于中国广东广州的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60257；该菌株为具有抗白色念珠菌活性的链霉菌。本发明还提供了所述的链霉菌的发酵产物及活性代谢产物的制备方法，所述的制备方法简单易行，成本低。所制得的活性代谢产物及由该活性代谢产物纯化得到的活性化合物可采用各种药物剂型应用于真菌感染的治疗，也可作为前体物用于抗真菌衍生物的合成等，在制备治疗真菌感染疾病药物领域具有良好的应用前景。

Description

一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用
技术领域
本发明属于抗真菌抗生素领域，特别涉及一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用。
背景技术
红树林区域具有独特的热带区海浪间生态***，是至今世界上少数几个物种最多样化的生态***之一。红树林底泥放线菌既不同于同地区陆地放线菌，又不完全相同于深海区放线菌；因潮汐作用而周期性受海水浸泡，生长在具有高盐度、低氧气、低光照和高于大气压力等特殊环境下；因此，红树林底泥放线菌在遗传物质、生物学特征、代谢产物结构类型上存在一定的特异性。
真菌感染是最为常见、难治的疾病。在我国，对抗真菌活性物质的化学研究少见报道。目前使用的抗真菌药两性霉素、唑类对用药人有严重毒性，棘白菌素类抗真菌谱有限，另一些抗真菌药也出现了耐药性。因此，寻找新一代广谱、高效、低毒的抗真菌药物已成为当前抗真菌药物研究的一个关键。
微生物次生代谢产物是：具有抗真菌等多种生物活性天然产物的主要来源之一；也一直是药物的主要来源之一；其另外一个优势是可通过大量发酵提供重复需要的原料。
因此，开展我国红树林区域来源海洋放线菌抗真菌次生代谢产物研究很有必要，具菌株资源特色，其研究成果将具有理论意义和实际应用价值。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株抗真菌链霉菌。
本发明的又一目的在于提供所述抗真菌链霉菌的代谢物。
本发明的再一目的在于提供所述的代谢物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供所述的抗真菌链霉菌和/或其代谢物的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一株抗真菌链霉菌，命名为Streptomyces antibioticus 2017-09，保藏编号为GDMCC No.60257，于2017年10月25日保藏在位于中国广东广州的广东省微生物菌种保藏中心。所述的链霉菌具有抗白色念珠菌活性。
所述的链霉菌在高氏一号培养基上生长良好，基内菌丝颜色Ш76′咖啡色，气丝量多色灰。在光学显微镜下观察，基丝不断裂、气生菌丝形成孢子丝，孢子丝直。在扫描电镜下观察，孢子丝为短圆柱形；孢子表面光滑、不带刺、无疣、链生。
所述的链霉菌的形态特征为：在高氏一号培养基上生长良好，基内菌丝颜色Ш76′咖啡色，气丝量多色灰；在光学显微镜下观察；基丝不断裂、气生菌丝形成孢子丝，孢子丝直；在扫描电镜下观察，孢子丝为短圆柱形；孢子表面光滑、不带刺、无疣、链生。
所述的链霉菌的培养特征为：
所述的链霉菌的生理生化特征为：该菌株能使明胶较慢液化，水解淀粉能力强，在纤维素上不生长，不能使牛奶胨化，不产黑色素，能利用葡萄糖、甘露醇、鼠李糖、蔗糖、棉子糖、肌醇、***糖、果糖和木糖等碳源。
所述的链霉菌的16S rDNA基因特征：其16S rDNA序列如SEQ ID No.1的核苷酸序列所示，序列长度为1390bp。
所述的链霉菌的发酵产物的制备方法，包括如下步骤：
(1)菌株的培养
使用改良的高氏一号培养基制备斜面培养，于28～30℃在斜面培养基上培养所述的链霉菌，直至菌丝和孢子生长成熟；
所述的改良放的高氏一号培养基，其具体组成如下：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO4 0.5g，海水晶3g，FeSO4 0.01g，MgSO4·7H2O 0.05g，琼脂15g，调pH7.2～7.4，水1000mL，于115～121℃灭菌30分钟；
(2)菌株的发酵
种子液的制备：将步骤(1)斜面上的菌丝和孢子接种入发酵培养基，27～33℃下160～180rpm培养24～36h，得到抗白色念珠菌链霉菌种子液；再接种于发酵培养基上发酵：将抗白色念珠菌链霉菌种子液以体积百分比8～10％的接种量接至发酵培养基中发酵，即得发酵液。
所述的发酵培养基组成为：8.0％蔗糖，4.0％酵母粉，0.5％碳酸钙，调pH7.0～7.4，水定容至1000mL，于115～121℃灭菌30分钟。
步骤(2)所述的发酵的具体步骤为：于27～33℃以300～400rpm的转速、10～15L/min的空气通量进行发酵110～130小时。
所述的链霉菌具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将发酵液离心，获得菌丝体和上清液；
(2)将所述的菌丝体用乙醇溶液浸泡12小时以上，过滤，浸提，将滤液合并减压浓缩至无醇味，得到浸提物；
(3)浸提物用水溶解，再用石油醚、氯仿各萃取至少3次，取萃取液，减压浓缩得到粗提物Ⅰ、粗提物Ⅱ；
(4)将粗提物Ⅱ加入溶剂溶解后进行凝胶柱层析进行分离，由极性由小到大进行梯度洗脱，每梯度洗脱体积为1.5L，流速为1mL/min，每75mL为一收集单位，取第8～20收集单位，即为馏分群S1；
(5)将馏分群S1进行硅胶柱层析(300～400目)，丙酮溶解，用其重量比为2～3倍量的层析硅胶(100～200目)拌均，摊开待溶剂至尽，并将其加到样品量20～30倍的层析硅胶(300～400目)柱上，并用石油醚/丙酮梯度***，收集各流份，用硅胶板鉴定并合并具荧光斑点的流分，挥去溶剂，得无色针状结晶，即为具有抗白色念珠菌活性的代谢产物。
步骤(1)中所述的活性追踪方法优选为通过纸片法测抗白色念珠菌活性。
步骤(2)中所述的乙醇溶液优选为体积百分比为95％的乙醇溶液；所述的乙醇溶液的加入量优选为菌丝体体积的3～5倍。
步骤(2)中所述的浸泡的时间优选为12小时。
步骤(2)中所述的浸提的次数优选为至少3次；进一步优选为3次。
步骤(3)中所述的活性追踪方法优选为通过纸片法测抗白色念珠菌活性。
步骤(3)中所述的水的用量优选为与所述的浸提物按质量-体积比为3倍进行配比。
步骤(3)中所述的石油醚或氯仿的用量优选为所述的水的体积的3倍。
步骤(4)中溶解粗提物Ⅱ的溶剂优选为正己烷:二氯甲烷的体积比为1:4的混合溶剂。
步骤(4)中所述的凝胶柱优选为sephadex LH-20凝胶柱。
步骤(4)中所述的梯度洗脱的梯度洗脱***优选为体积比为1:4的正己烷/二氯甲烷，体积比为3:2的二氯甲烷/丙酮和体积比为1:4的二氯甲烷/丙酮。
步骤(5)中所述的代谢产物结晶条件优选为石油醚:丙酮(10:1)。
步骤(5)中所述的硅胶板优选为硅胶GF254板。
提供一种上述培养条件及代谢物制备方法，大量获得抗生素，成分分子量范围在400～600范围的组分。
一种具有抗白色念珠菌活性的代谢产物，通过所述的制备方法制备得到。
所述的链霉菌和/或其代谢产物在制备治疗真菌感染疾病药物中的应用。
所述的真菌为白色念珠菌。
所述的真菌感染疾病优选为脚气、灰指甲或牛皮癣。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明所述链霉菌在所述最优发酵培养基及发酵培养条件下能够大量产生抗真菌抗生素；
(2)本发明所述的结晶条件下，代谢物可形成大量无色柱状结晶；
(3)本发明所述抗白色念珠菌链霉菌发酵物中的活性代谢物具有对白色念珠菌等多种真菌抑制作用或杀灭活性。
(4)本发明所述的抗白色念珠菌链霉菌发酵物制备方法简单、成本低，易于操作；
(5)本发明所述的抗白色念珠菌链霉菌发酵物定性检测方法简单、方便且可靠。
附图说明
图1是本发明的抗白色念珠菌链霉菌的孢子形态扫描电镜图。
图2是本发明的抗白色念珠菌链霉菌在电子显微镜下孢子丝形态图。
图3是本发明的具抗白色念珠菌活性的代谢物的制备流程图。
图4是本发明的具抗白色念珠菌活性的代谢物的HPLC图谱。
图5是本发明的具抗白色念珠菌活性的代谢物的1H NMR谱图及所示特征峰。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1菌株的分离与鉴定
从近浅海海泥中分离，并经抑菌圈法筛选得到对白色念珠菌有明显抑制作用的链霉菌，对该菌株进行分类鉴定，具体如下：
(1)形态观察
将菌株抗白色念珠菌链霉菌作插片培养，观察并记录生长情况、基内菌丝、气生菌丝和可溶性色素的颜色，同时取出插片，用光学显微镜观察气丝、基丝形态以及是否有横隔、断裂、膨大等特征。分别在第3d、6d、10d、20d、30d取样制片，用光学显微镜和扫描电子显微镜观察。
所述的链霉菌在高氏一号培养基上生长良好，基内菌丝颜色Ш76′咖啡色，气丝量多色灰。如图1所示，在扫描电镜下观察，其孢子丝为短圆柱形；孢子表面光滑、不带刺、无疣、链生。如图2所示，在光学显微镜下观察，基丝不断裂、气生菌丝形成孢子丝，孢子丝直。
(2)培养特征
将菌株抗白色念珠菌链霉菌接种在高氏合成一号、察氏、克氏、淀粉琼脂、克氏、葡萄糖天门冬素和马铃薯块等固体培养基上，于28℃培养，分别在第3d、5d、10d、20d、30d观察菌株在各培养基上的特征、生长情况及颜色变化，取成熟期的颜色作为定种依据，结果如表1所示。
表1菌株抗白色念珠菌链霉菌的培养特征
注:+++、++、+分别表示生长的强弱程度。其中，“+++”表示生长很好，“++”表示生长良好，“+”表示可以生长。颜色对比放线菌鉴定手册彩图。
(3)菌株的生化特征
参考Lechevalie(1980)的方法测定菌株抗白色念珠菌链霉菌的生理生化特征，包括明胶液化、淀粉水解、牛奶的凝固与胨化、纤维素水解、碳源利用等特征。
菌株抗白色念珠菌链霉菌能使明胶较慢液化，水解淀粉能力强，在纤维素上不生长，不能使牛奶胨化，不产黑色素，能利用9种碳源，具体情况见下表2。
表2抗白色念珠菌链霉菌与抗生链霉菌和灰红链霉菌碳源利用比较
注：+表示能利用该碳源，-表示不能利用该碳源。
(4)16S rDNA序列测定及其相似性分析
以PA、PB为引物，PCR扩增得到菌株抗白色念珠菌链霉菌的16S rDNA。
菌株抗白色念珠菌链霉菌的16S rDNA序列核苷酸全序列总长为1390bp，序列如下所示：
GCAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATGAGCTGCCCAGGCATCTGGGTGGCTGTAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAGAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCGCGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGCTT
根据***发育树及形态特征比较分析，鉴定该菌株为抗生链霉菌(Streptomycesantibioticus)。
将所述菌株命名为抗白色念珠菌链霉菌(Streptomyces antibioticus)2017-09，该菌株已于2017年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.60257。
实施例2对白色念珠菌有抑制作用的抗生链霉菌的代谢物的制备
(1)抗生链霉菌的培养
使用高氏一号培养基制备斜面培养，于28～30℃在斜面培养基上培养该菌株，直至菌丝和孢子生长成熟；
所述的改良高氏一号培养基，其具体组成如下：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO40.5g，海水晶3g，FeSO4 0.01g，MgSO4·7H2O 0.05g，琼脂15g，调pH7.2～7.4，水定容至1000mL，于115～121℃灭菌30分钟；
(2)抗生链霉菌的发酵：
种子液的制备：将斜面上的菌丝和孢子接种入发酵培养基，28～32℃下160～180rpm培养24～36h，得到抗白色念珠菌链霉菌种子液；
发酵培养：将抗白色念珠菌链霉菌种子液以体积百分比8～10％的接种量接至发酵培养基中，于27～33℃以300～400rpm的转速、10～15L/min的空气通量进行发酵110～130小时，得到发酵液；
所述的发酵培养基组成为：8.0％蔗糖，4.0％酵母粉，0.5％碳酸钙，1L H2O，pH7.0～7.4，水定容至1L，同时配制40瓶，于115～121℃灭菌30分钟；
(3)对白色念珠菌有显著抑制作用的抗生链霉菌的代谢物的制备，制备流程如图3所示：
A、将40L发酵液离心，获得菌丝体和上清液；在纸片法测抗白色念珠菌活性方法追踪下，得到活性部位为菌丝体；
B、菌丝体用体积百分比为95％的乙醇溶液浸泡12小时，体积百分比为95％乙醇溶液的加入量为菌丝体体积的3～5倍，过滤，浸提3次，将滤液合并减压浓缩至无醇味，得到浸提物；
C、用质量-体积比为3倍的水溶解，每次分别用水3倍体积的石油醚、氯仿各萃取三次，减压浓缩得到粗提物Ⅰ、粗提物Ⅱ；在纸片法测抗白色念珠菌活性方法追踪下，得到活性部位为粗提物Ⅱ；
D、得到活性粗提物Ⅱ29.2g，用正己烷：二氯甲烷(1:4)溶解后进行凝胶柱(LH-20)层析，梯度洗脱***极性由小到大为正己烷：二氯甲烷(1:4)，二氯甲烷：丙酮(3:2)和二氯甲烷：丙酮(1:4)，每梯度洗脱体积为1.5L，流速为1mL/min，每75mL为一收集单位，共收集了58单位。通过活性追踪和GF254薄层检查得到两个活性馏分群S1(8～20)。
E、将馏分群S1 2.99g进行硅胶柱层析(300～400目)，丙酮溶解，用其重量比为3倍量的层析硅胶(100～200目)拌均，摊开待溶剂至尽，并将其加到样品量20～30倍的层析硅胶(300～400目)柱上，并用石油醚/丙酮梯度***洗脱，收集各流份，以硅胶GF254薄层检查合并具荧光斑点的流分，挥去溶剂，即得具抗白色念珠菌活性的代谢物(无色针状结晶)1.57g。
实施例3活性代谢物的定性检识
(1)取实施例2步骤(3)E中制得的具抗白色念珠菌活性的代谢物0.5mg，与干燥无水的KBr共碾充分至均匀后压片，将此KBr片置于JASCO FT/IR-480plus光谱仪上测定，见3745.1cm-1、3615.7cm-1、2955.4cm-1、2921.7cm-1、2848.3cm-1、2367.4cm-1、1743.5cm-1、1542.4cm-1、1456.6cm-1、421.3cm-1等处有吸收带。
(2)取实施例2步骤(3)E中制得的具抗白色念珠菌活性的代谢物0.5mg，用色谱纯甲醇溶解后，置于JASCO V-550UV/VIS紫外可见光谱仪上测定，见在242.8nm处有最大吸收峰。
(3)取实施例2步骤(3)E中制得的具抗白色念珠菌活性的代谢物5mg，分别用用氘代氯仿、氘代丙酮溶解于核磁管中后，置于Bruker AV-300核磁仪上测定，得到如附图5所示核磁共振氢谱。同时，本发明的具抗白色念珠菌活性的代谢物的HPLC图谱如图4所示。
实施例4纸片抑菌圈法测定所制活性固体物的抗白色念株菌活性
供试样品制备：实施例2制得的具抗白色念珠菌活性的代谢物2mg超声溶解于1.0mL 10％甲醇水溶液中。
活性测定：采用纸片扩散法(Kirby Bauer，KB法)(Hunfeld，2001)测定样品的抑菌活性。马丁固体培养基倒平板，接种0.1mL白色念珠菌培养液，均匀涂布。用无菌镊子将以滤液浸后干燥的滤纸片(直径6mm)平整的贴在平板表面。37℃培养1d后测得抑菌直径三次重复评价为17mm，试验结果表明该菌株对白色念珠菌具有较好的抑制作用。
其中，马丁培养基组成：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母浸膏4g，K2HPO4·7H2O0.63g，MgSO4·7H2O 1.8g，琼脂15g，水1000mL。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120> 一株抗真菌链霉菌及其代谢物、代谢物制备方法与应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1390
<212> DNA
<213> 链霉菌(Streptomyces antibioticus)
<220>
<223> 链霉菌16S rDNA序列
<400> 1
gcagtcgaac gatgaaccac ttcggtgggg attagtggcg aacgggtgag taacacgtgg 60
gcaatctgcc ctgcactctg ggacaagccc tggaaacggg gtctaatacc ggatatgagc 120
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accggccaca ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat 300
attgcacaat gggcgaaagc ctgatgcagc gacgccgcgt gagggatgac ggccttcggg 360
ttgtaaacct ctttcagcag ggaagaagcg agagtgacgg tacctgcaga agaagcgccg 420
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggcgc aagcgttgtc cggaattatt 480
gggcgtaaag agctcgtagg cggcttgtcg cgtcggttgt gaaagcccgg ggcttaaccc 540
cgggtctgca gtcgatacgg gcaggctaga gttcggtagg ggagatcgga attcctggtg 600
tagcggtgaa atgcgcagat atcaggagga acaccggtgg cgaaggcgga tctctgggcc 660
gatactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc 720
cacgccgtaa acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct 780
aacgcattaa gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga 840
cgggggcccg cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta 900
ccaaggcttg acatacaccg gaaaaccctg gagacagggt cccccttgtg gtcggtgtac 960
aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 1020
gcgcaaccct tgtcccgtgt tgccagcagg cccttgtggt gctggggact cacgggagac 1080
cgccggggtc aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgtct 1140
tgggctgcac acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgataccgcg aggtggagcg 1200
aatctcaaaa agccggtctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc atgaagtcgg 1260
agtcgctagt aatcgcagat cagcattgct gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1320
accgcccgtc acgtcacgaa agtcggtaac acccgaagcc ggtggcccaa ccccttgtgg 1380
gagggagctt 1390

Claims (10)

1.一株抗真菌链霉菌，其特征为：命名为Streptomyces antibioticus 2017-09，保藏编号为GDMCC No.60257，于2017年10月25日保藏在位于中国广东广州的广东省微生物菌种保藏中心。
2.权利要求1所述的抗真菌链霉菌的发酵产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)菌株的培养
使用改良的高氏一号培养基制备斜面培养，于28～30℃在斜面培养基上培养所述的链霉菌，直至菌丝和孢子生长成熟；
(2)菌株的发酵
种子液的制备：将步骤(1)斜面上的菌丝和孢子接种入发酵培养基，27～33℃下160～180rpm培养24～36h，得到所述的链霉菌种子液；再接种于发酵培养基上发酵：将所述的链霉菌种子液以体积百分比8～10％的接种量接至发酵培养基中发酵，即得发酵产物。
3.根据权利要求2所述的抗真菌链霉菌的发酵产物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的改良放的高氏一号培养基，其具体组成如下：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO4 0.5g，海水晶3g，FeSO4 0.01g，MgSO4·7H2O 0.05g，琼脂15g，调pH7.2～7.4，水1000mL，于115～121℃灭菌30分钟；
步骤(2)所述的发酵培养基组成为：8.0％蔗糖，4.0％酵母粉，0.5％碳酸钙，调pH 7.0～7.4，水定容至1000mL，于115～121℃灭菌30分钟；
步骤(2)所述的发酵的具体步骤为：于27～33℃以300～400rpm的转速、10～15L/min的空气通量进行发酵110～130小时。
4.权利要求1所述的链霉菌具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将发酵液离心，获得菌丝体和上清液；
(2)将所述的菌丝体用乙醇溶液浸泡12小时以上，过滤，浸提，将滤液合并减压浓缩至无醇味，得到浸提物；
(3)浸提物用水溶解，再用石油醚、氯仿各萃取至少3次，取萃取液，减压浓缩得到粗提物Ⅰ、粗提物Ⅱ；
(4)将粗提物Ⅱ加入溶剂溶解后进行凝胶柱层析进行分离，由极性由小到大进行梯度洗脱，每梯度洗脱体积为1.5L，流速为1mL/min，每75mL为一收集单位，取第8～20收集单位，即为馏分群S1；
(5)将馏分群S1进行硅胶柱层析(300～400目)，丙酮溶解，用其重量比为2～3倍量的层析硅胶(100～200目)拌均，摊开待溶剂至尽，并将其加到样品量20～30倍的层析硅胶(300～400目)柱上，并用石油醚/丙酮梯度***，收集各流份，用硅胶板鉴定并合并具荧光斑点的流分，挥去溶剂，得无色针状结晶，即为具有抗白色念珠菌活性的代谢产物。
5.根据权利要求4所述的链霉菌具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的制备方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的梯度洗脱的梯度洗脱***优选为体积比为1:4的正己烷/二氯甲烷，体积比为3:2的二氯甲烷/丙酮和体积比为1:4的二氯甲烷/丙酮。
6.根据权利要求4所述的链霉菌具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的乙醇溶液优选为体积百分比为95％的乙醇溶液；
步骤(2)中所述的乙醇溶液的加入量优选为菌丝体体积的3～5倍；
步骤(5)中所述的代谢产物结晶条件优选为石油醚:丙酮(10:1)。
7.一种具有抗白色念珠菌活性的代谢产物，其特征在于：
通过权利要求5所述的具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的制备方法制备得到。
8.根据权利要求7所述的具有抗白色念珠菌活性的代谢产物，其特征在于：
所述的代谢产物为分子量范围在400～600范围的组分。
9.权利要求1所述的链霉菌和/或权利要求7～8任一项所述的具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的应用，其特征在于：
所述的应用为在制备治疗真菌感染疾病药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的链霉菌和/或权利要求7～8任一项所述的具有抗白色念珠菌活性的代谢产物的应用，其特征在于：
所述的真菌为白色念珠菌。
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