CN108018328A - 一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 - Google Patents
一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108018328A CN108018328A CN201610954032.4A CN201610954032A CN108018328A CN 108018328 A CN108018328 A CN 108018328A CN 201610954032 A CN201610954032 A CN 201610954032A CN 108018328 A CN108018328 A CN 108018328A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- content
- culture medium
- culture
- powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P29/00—Preparation of compounds containing a naphthacene ring system, e.g. tetracycline
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法。该发酵培养基包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、α‑淀粉酶、植物油和水,所述碳源的含量为9‑13%,所述氮源的含量为2.8‑4.0%。本发明通过调整碳源和氮源的含量,尤其是氮源的替代和微量元素的添加,提高去甲基金霉素的发酵产量。提供的去甲基金霉素的发酵生产方法,大幅提高了去甲基金霉素的发酵单位,适用于去甲基金霉素的规模化生产。
Description
技术领域
本发明属于工业微生物技术领域,特别涉及一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法。
背景技术
去甲基金霉素是一个较好的广谱抗生素,对大多数细菌的抗菌活性约为四环素的两倍,人体吸收比四环素好,在体内保留时间长。以它为主要原料合成的二甲氨基四环素具有高效、速效、长效等特点,毒性低,副作用小,被认为是现有四环素类抗生素中最好的品种之一。目前主要利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素,其中发酵所用培养基的组分的选择及其含量的确定,是影响发酵产量的重要因素。在公开号为CN104404120A的专利申请中,去甲基金霉素的发酵培养基成分主要包括碳源、氮源、无机盐和氨基酸,其中:碳源浓度为50g/L;氮源浓度为28g/L;无机盐的组分分别是硝酸钠0.5-2g/L,磷酸氢二钾0.01-0.1g/L,氯化铜1-3g/L;氨基酸为L-赖氨酸。发酵周期120h,发酵效价为7000μg/mL以上。该培养基存在以下问题:首先该培养基采用的硝酸钠和氯化铜具有一定的毒性,易给实验操作人员带来危害,硝酸钠也有助燃的特性,对储存条件要求较高;其次该培养基中采用的氨基酸为L-赖氨酸,L-赖氨酸是碱性氨基酸,导致消前pH偏高,由于金霉素链霉菌发酵前期适宜的pH为6.8-7.0,因此,需要使用较多的酸来维持较为适宜的pH环境,另一方面,酸会中和培养基中用于缓冲作用的碳酸钙,从而导致培养基成分的浪费。
周丽等(周丽,朱小容,李永丽,等.去甲基金霉素高产菌株选育及发酵工艺优化[J].内蒙古石油化工,2014,40(24):18-20)虽然多采用玉米淀粉、黄豆粉、棉籽粉等适用工业化生产的农副产品等作为培养基,但是其发酵效价最高只达6600μg/mL,该培养基配方离产业化大生产还有一定的距离。
李士杭等(李士杭,叶蕊芳,吕和平,等.去甲金霉素发酵培养基的优化及机制分析[J].中国医药工业杂志,2012,43(11):896-902)通过PLackett-Burman实验、最陡爬坡实验和响应面优化,对金色链霉菌的发酵培养基进行优化,最终确定的优化培养基配方为玉米淀粉110g/L,生黄豆粉43g/L,碳酸钙7g/L,L-赖氨酸盐8g/L,氯化钠4g/L,硫酸铵3g/L,玉米浆4g/L,豆油12mL/L,α-淀粉酶0.1%,pH自然。采用优化的发酵培养基平均化学效价只达5435μg/mL,该培养基配方离产业化大生产还有一定的距离。
发明内容
因此,本发明要解决的技术问题是针对现有的利用金霉素链霉菌发酵生产获得的去甲基金霉素的发酵液中有毒害物质残留以及发酵效价低的不足,提供一种新的用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法,其可以提高去甲基金霉素的发酵单位,提高生产效率。
本发明解决上述技术问题所采用的方案之一是:一种用于发酵生产去甲基金霉素的培养基,包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、α-淀粉酶、植物油和水,其特征在于,所述碳源的含量为9-13%,所述氮源的含量为2.8-4.0%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的氮源为本领域常规,较佳地包括黄豆粉和玉米浆,所述黄豆粉的含量为2-3%,所述玉米浆的含量为0.1-0.5%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。更佳地,所述氮源还包括选自鱼粉、棉籽粉、花生粉、羽毛粉、麸质粉和奶粉中的一种或多种,较佳地为棉籽粉和/或羽毛粉。所述棉籽粉和羽毛粉的含量均为1.5%以下,较佳地均为0.3-1.0%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的培养基包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、α-淀粉酶、植物油和水。较佳地,还含有微量元素。所述微量元素为本领域常规,较佳地为选自氯化钴、乙酸锌、硫酸镍、硫酸亚铁、硫酸铜和硫酸锰中一种或者多种,更佳地为乙酸锌,所述微量元素的含量为0.001-0.005%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的碳源为本领域常规,较佳地,所述碳源选自葡萄糖、玉米淀粉、蔗糖、乳糖、糊精、麦芽糖、果糖和玉米粉中的一种或多种,较佳地为玉米淀粉。
本发明的发酵培养基中,所述的氨基酸为本领域常规,较佳地,所述氨基酸选自L-赖氨酸、L-赖氨酸盐酸盐,亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸和L-天冬酰胺中的一种或多种,更佳地为L-赖氨酸盐酸盐,所述氨基酸的含量为0.7-1.2%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的无机盐为本领域常规,较佳地,所述无机盐选自硫酸铵、硫酸镁、氯化钠、氯化钾、氯化铵,碳酸钙、柠檬酸、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠和磷酸氢二铵中的一种或多种,所述无机盐的含量为0.85-3.3%。所述无机盐更佳地为硫酸铵、氯化钠和碳酸钙三种的组合,0.8-2.8%;所述碳酸钙的含量为0.5-2.0%,所述氯化钠的含量为0.2-0.5%,所述硫酸铵为0.1-0.3%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述α-淀粉酶为本领域常规使用的α-淀粉酶,所述淀粉酶的含量为0.001-0.01%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的植物油为本领域常规,较佳地,所述植物油选自葵花油、豆油、玉米油和棉籽油中的一种或者多种,更佳地为豆油,所述植物油的含量为0.5-2.0%,较佳地为0.8-1.6%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
本发明的发酵培养基中,所述的水为本领域常规,较佳地,所述水选自自来水、去离子水和蒸馏水中的一种,较佳地为去离子水。
本发明解决上述技术问题所采用的方案之二是:一种去甲基金霉素的发酵方法,包括步骤:
(1)将金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)的种子液接种于所述培养基中进行液体发酵培养,得到发酵液,所述的发酵培养基是权利要求1-11任一项所述的发酵培养基;
(2)从发酵液中分离出去甲基金霉素。
本发明中,所述的金霉素链霉菌可以是现有的各种金霉素链霉菌,较佳地为金霉素链霉菌NRRL3203。
在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于:
和现有多种培养基相比,本发明的氮源主要使用一些农副产品,价格低廉,适用于工业化生产且化学性质稳定,来源丰富,运输和储存方便,同时农副产品的使用使发酵液中无有毒害物质残留,能够达到降低污染,提高发酵产量,降低成本的目的,为后期发酵液的处理提供了有利的条件。同时,本发明对碳源和氮源含量的调整,尤其是氮源的调整:确保碳源和氮源的含量在规定范围内的情况下,调整黄豆粉和玉米浆的含量在合适的范围,可以将发酵效价提高到7000μg/mL以上;在确保黄豆粉含量、玉米浆含量以及氮源的总含量在规定范围内的情况下,用其他种类的氮源对黄豆粉进行一定比例的等量替代,可以将发酵效价提高到7500μg/mL以上;对培养基同时进行氮源替代和微量元素的添加的处理可以将发酵效价提高到8000μg/mL以上。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
发酵液中含量测定:发酵结束时发酵液草酸调酸pH1.8-2.0,取适量发酵液超声30min,用于高压液相色谱检测。色谱条件:色谱柱:AgiLent EcLipse PLus C18(4.6mm×250mm,5μm);流速:0.8mL/min;波长:355nm;柱温30℃;进样量:5μL。
下列实施例中的材料来源为:
葡萄糖、淀粉、蔗糖、麦芽糖、乳糖、麦芽糊精等碳源购自西王糖业有限公司。
玉米浆、黄豆粉、羽毛粉、花生粉、棉籽粉等氮源购自青岛科瑞培养基有限公司。
脱脂奶粉购自光明乳业销售有限公司。
轻质碳酸钙购自上海泗联化工厂有限公司。
豆油购自上海良友海狮实业有限公司。
α-淀粉酶购自邢台万达生物工程有限公司。
NaOH、NaCl、K2HPO3、KH2PO3、(NH4)2SO4和二合草酸购自国药集团化学试剂有限公司。
乙腈和甲醇购自默克化工技术(上海)有限公司。
实施例1
在无菌条件下,取一株金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)NRRL3203(购自美国农业研究菌种保藏中心)接种到斜面培养基。28℃斜面培养2天后可以看到培养基表面浅黄褐色菌体;3天或4天后,培养基颜色加深,少量白色孢子生成;7-8天后可以看到培养基表面产生大量白色孢子,培养基基体本身由于金霉素链霉菌色素的产生变成深褐色。在无菌条件下,用灭菌接种铲轻轻划破长有孢子的斜面培养基,挖取尽量薄的0.8cm×1.5cm左右的长满孢子的斜面培养基,接种到已经灭好的种子培养基中,于28℃,240rpm的旋转式摇床培养40-46h,可以观察到摇瓶中培养物颜色由浅黄色变成橘红色,种子成熟,摇动培养物有流动感,粘度偏大,贴壁均匀滑下。镜检菌丝成团状,向四周发散,菌丝较长,无杂菌,pH6.1-6.3。将制得的发酵种子留做备用。其中所用的斜面培养基组成:葡萄糖1%、牛肉膏0.2%、L-天冬酰胺0.025%,磷酸二氢钾0.04%和琼脂2.5%,去离子水配制,调pH6.8-7.0。
所用的种子培养基组成:淀粉3%、黄豆粉3%、蛋白胨0.5%,酵母粉0.2%,硫酸铵0.2%、磷酸二氢钾0.15%、碳酸钙1%和植物油1%。
实施例2
(1)单一碳源确定实验
以基础发酵培养基配方为基础,氮源、无机盐等成分和含量保持不变,分别加入玉米淀粉、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖、糊精、甘露醇等进行单一因素碳源实验,用量均为8%,将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养培养8天,采用高效液相测发酵效价。
基础发酵培养基组成:玉米淀粉8.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸0.8%,氯化钠0.3%,硫酸铵0.2%,碳酸钙1.0%,玉米浆0.3%,豆油0.6%,α-淀粉酶0.08%,去离子水100mL。采用基础发酵培养基进行发酵获得的发酵效价为:5639μg/mL。
碳源种类 | 玉米淀粉 | 葡萄糖 | 蔗糖 | 果糖 | 乳糖 | 麦芽糖 | 糊精 | 甘露醇 |
相对效价 | 1.00 | 0.63 | 0.74 | 0.20 | 0.31 | 0.57 | 0.61 | 0.33 |
(2)碳源组合实验
以基础培养基配方为对照,在氮源、无机盐等其他成分保持不变的条件下,采用表格中碳源进行部分替代实验,替代碳源用量均为2%,即用2%的其他碳源替代2%的玉米淀粉,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的碳源,当碳源为单一组分的玉米淀粉时,培养获得的发酵液效价最高。
碳源种类 | 玉米淀粉 | 葡萄糖 | 蔗糖 | 果糖 | 乳糖 | 麦芽糖 | 糊精 | 甘露醇 |
相对效价 | 1.00 | 0.85 | 0.98 | 0.87 | 0.82 | 0.75 | 0.83 | 0.97 |
(3)碳源加量实验
根据以上实验的结果,保留玉米淀粉为该培养基的唯一碳源,以基础培养基为对照,在氮源、无机盐等其他成分保持不变的条件下,采用进行玉米淀粉加量实验,其中加量均为1%,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。
玉米淀粉用量(%) | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
相对效价 | 1.00 | 1.05 | 1.10 | 1.19 | 1.09 | 0.99 |
实施例3
(1)氮源确定实验
根据以上实验的结果,将基础培养基中8%的玉米淀粉加量到11%,以优化培养基配方为对照,在无机盐等其他成分保持不变的条件下,采用鱼粉、棉籽粉、羽毛粉、花生粉、豆粕粉或者奶粉对黄豆粉进行全部替代,其中替代氮源用量均为3%,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的氮源,当氮源为黄豆粉时,培养获得的发酵液效价最高。
优化培养基:玉米淀粉11%,黄豆粉3.0%,碳酸钙1.0%,L-赖氨酸0.8%,氯化钠0.3%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.3%,豆油0.6%,α-淀粉酶0.1%,pH7.0。采用优化培养基进行发酵获得的发酵效价为:5944μg/mL。
替代种类 | 黄豆粉 | 鱼粉 | 棉籽粉 | 羽毛粉 | 花生粉 | 豆粕粉 | 奶粉 |
相对效价 | 1.00 | 0.18 | 0.45 | 0.52 | 0.30 | 0.11 | 0.59 |
(2)氮源组合实验
以优化培养基配方为对照,在碳源、无机盐、氨基酸、植物油、α-淀粉酶和玉米浆以及pH保持不变的条件下,采用鱼粉、棉籽粉、羽毛粉、花生粉、豆粕粉或者奶粉等氮源和黄豆粉进行组合,其中黄豆粉用量2.5%,其他替代物质用量均为0.5%,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于用其他种类的氮源,当用0.5%的棉籽粉或羽毛粉替代0.5%黄豆粉时,所得发酵液的发酵效价最高。
替代种类 | 黄豆粉 | 鱼粉 | 棉籽粉 | 羽毛粉 | 花生粉 | 豆粕粉 | 奶粉 |
相对效价 | 1.00 | 0.88 | 1.21 | 1.19 | 0.76 | 0.51 | 0.91 |
(3)玉米浆用量考察
氮源以黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%组合成为新的优化培养基配方,玉米浆0.3%,以此优化培养基配方为对照,其他成分保持不变,进行玉米浆用量的考察,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。实验可得,相同条件下,0.4%的玉米浆发酵效价最高。
用量 | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 |
相对效价 | 0.66 | 0.85 | 0.90 | 1.00 | 1.05 | 0.92 | 0.75 | 0.56 |
实施例4
(1)氨基酸确定实验
根据以上实验的结果,将在实施例3中优化的培养基中,氮源以黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%组合成为新的优化培养基配方,其他成分保持不变,以此为对照,采用L-赖氨酸、L-赖氨酸盐酸盐,亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、L-天冬酰胺进行氨基酸确定实验,用量均为0.8%,摇瓶发酵8天,采用高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的氨基酸,当氨基酸为L-赖氨酸盐酸盐时,培养获得的发酵液效价最高。
(2)氨基酸组合实验
请补充两种或者以上氨基酸组合使用时相对于仅使用L-赖氨酸盐酸盐时的相对效价,以扩大保护范围。
根据以上实验结果,以氨基酸为L-赖氨酸盐酸盐0.8%为对照即不添加其他氨基酸,在对照基础上分别添加0.05%的亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、L-天冬酰胺等进行氨基酸组合实验,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。
(3)氨基酸用量考察
以L-赖氨酸盐酸盐0.8%为对照,对L-赖氨酸盐酸盐使用量进行考察,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。
用量(%) | 0.5 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 | 1.1 | 1.2 | 1.3 |
相对效价 | 0.86 | 0.89 | 1.01 | 1.00 | 1.21 | 1.04 | 1.00 | 0.99 | 0.88 |
实施例5
(1)培养基用油考察实验
以基础发酵培养基为对照,其他培养基分别以葵花油、玉米油或者棉籽油对豆油进行取代,用量均为0.6%,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的植物油,当植物油为豆油时,培养获得的发酵液效价最高。
油类型 | 豆油 | 葵花油 | 玉米油 | 棉籽油 |
相对效价 | 1 | 0.82 | 0.56 | 0.43 |
(2)根据上述实验选择豆油作为该培养基的唯一用油,进而进行油量考察实验,以0.6%豆油作为对照,其他成分和用量保持不变的情况下,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。
用量(%) | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 | 1.2 | 1.4 | 1.6 |
相对效价 | 0.64 | 1 | 1.04 | 1.06 | 1.07 | 1.01 | 0.94 |
实施例6
将实施例4中含有0.8%L-赖氨酸盐酸盐的培养基的L-赖氨酸盐酸盐用量提高至0.9%,其他成分和用量保持不变,以此培养基为对照进行无机盐的添加、替代实验以及微量元素的添加实验,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。
(1)无机盐中氯化钠的确定实验
由于去甲基金霉素中含有氯元素,氯元素的补充有助于菌体利用氯进行产物的合成,因此进行氯元素补充量的考察,将培养基中氯化钠分别采用氯化钾、氯化铵、氯化镁、氯化锌等进行全部替代,用量均为0.3%,以0.3%氯化钠进行对照,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的无机盐,采用氯化钠进行培养获得的发酵液效价最高。
无机盐种类 | 氯化钠 | 氯化钾 | 氯化铵 | 氯化镁 | 氯化锌 |
相对效价 | 1 | 0.97 | 0.83 | 0.93 | 0.90 |
(2)无机盐中硫酸铵的确定实验
以硫酸铵进行对照,采用硫酸镁、硫酸铜、硫酸亚铁、硝酸铵、氯化铵等进行全部替代,其中用量均为0.2%,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。相比于其他种类的无机盐,采用氯化钠进行培养获得的发酵液效价最高。
无机盐种类 | 硫酸铵 | 硫酸镁 | 硫酸铜 | 硫酸亚铁 | 硝酸铵 | 氯化铵 |
相对效价 | 1 | 0.71 | 0.53 | 0.44 | 0.80 | 0.69 |
(3)无机盐中碳酸钙的确定
以碳酸钙为对照,用碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠,磷酸氢二钾等对碳酸钙进行全部替代,其中用量均为1.0%,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。同等条件下,相比于其他种类起缓冲作用的无机盐,碳酸钙发酵效价高。
无机盐种类 | 碳酸钙 | 碳酸钠 | 碳酸氢钠 | 磷酸氢二钠 | 磷酸氢二钾 |
相对效价 | 1 | 0.94 | 0.96 | 0.47 | 0.55 |
(4)无机盐添加,用量均为0.05%,实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的无机盐,氯化钠、硫酸铵和碳酸钙进行组合时,培养获得的发酵液效价最高。
(5)微量元素添加,用量均为0.005%,实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的微量元素,当微量元素为乙酸锌时,培养获得的发酵液效价最高。
(6)乙酸锌用量考察,以加0.005%乙酸锌的为对照,对乙酸锌用量0.001%、0.003%、0.008%进行考察
用量(%) | 0.001 | 0.003 | 0.005 | 0.008 |
相对效价 | 0.99 | 1.08 | 1 | 0.91 |
实施例7
在培养基配方中各成分及用量确定的情况下进行水类型实验,分别以自来水、蒸馏水取代去离子水进行实验考察,其他成分和用量保持不变,摇瓶发酵8天,高效液相测发酵效价。实验测得:相同培养条件下,相比于其他种类的水,当水为去离子水时,培养获得的发酵液效价最高。
水类型 | 去离子水 | 蒸馏水 | 自来水 |
相对效价 | 1 | 0.70 | 0.75 |
实施例8
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉9.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.3%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,豆油0.6%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7705μg/mL。
实施例9
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉9.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.2%,硫酸铵0.1%,玉米浆0.3%,碳酸钙0.5%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.0%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7505μg/mL。
实施例10
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉10.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.9%,氯化钠0.3%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.1%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.0%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7521μg/mL。
实施例11
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐1.0%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.2%,碳酸钙1.5%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.0%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7601μg/mL。
实施例12
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.7%,氯化钠0.5%,硫酸铵0.4%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.005%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7868μg/mL。
实施例13
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,羽毛粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.9%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.4%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.001%,豆油1.1%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8134μg/mL。
实施例14
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.9%,氯化钠0.3%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.5%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.003%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8792μg/mL。
实施例15
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉12.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐1.0%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.005%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8383μg/mL。
实施例16
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉1.0%,棉籽粉1.0%,羽毛粉1.0%,L-赖氨酸盐酸盐1.1%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙1.5%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.005%,豆油1.5%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8652μg/mL。
实施例17
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉13.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐1.2%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.002%,豆油1.0%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7552μg/mL。
实施例18
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.9%,氯化钠0.2%,硫酸铵0.15%,玉米浆0.4%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.003%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8859μg/mL。
实施例19
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉12.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐1.0%,氯化钠0.2%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.003%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为8514μg/mL。
实施例20
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉12.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐1.0%,氯化钠0.2%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.001%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7701μg/mL。
实施例21
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐1.0%,氯化钠0.25%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7680μg/mL。
实施例22
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.25%,硫酸铵0.25%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7722μg/mL。
实施例23
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.2%,硫酸铵0.1%,玉米浆0.3%,碳酸钙0.5%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.001%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7222μg/mL。
实施例24
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉12.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐1.1%,氯化钠0.4%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.3%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.01%,乙酸锌0.004%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7587μg/mL。
实施例25
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉12.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.5%,硫酸铵0.15%,玉米浆0.3%,碳酸钙1.5%,α-淀粉酶0.008%,乙酸锌0.002%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7630μg/mL。
实施例26
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.7%,氯化钠0.5%,硫酸铵0.3%,玉米浆0.3%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.005%,乙酸锌0.003%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7746μg/mL。
实施例27
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉13.0%,黄豆粉3.0%,L-赖氨酸盐酸盐0.9%,氯化钠0.35%,硫酸铵0.2%,玉米浆0.3%,碳酸钙1.0%,α-淀粉酶0.005%,乙酸锌0.001%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为7454μg/mL。
对比实施例1
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉8.0%、黄豆粉3.0%、L-赖氨酸0.8%、氯化钠0.3%,硫酸铵0.2%、碳酸钙1.0%、玉米浆0.3%,豆油0.6%,α-淀粉酶0.08%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为5639μg/mL。
对比实施例2
将实施例1制得的发酵种子以10%(v/v)接种量接种于发酵培养基中,pH7.0,装量35mL/250mL,于30℃,240rpm的旋转式摇床培养。发酵培养基组成:玉米淀粉11.0%,黄豆粉2.5%,棉籽粉0.5%,L-赖氨酸盐酸盐0.8%,氯化钠0.25%,硫酸铵0.25%,碳酸钙2.0%,α-淀粉酶0.01%,豆油1.2%,去离子水100mL。摇瓶发酵8天,高效液相测得效价为6681μg/mL。
Claims (10)
1.一种用于发酵生产去甲基金霉素的培养基,包括碳源、氮源、氨基酸、无机盐、α-淀粉酶、植物油和水,其特征在于,所述碳源的含量为9-13%,所述氮源的含量为2.8-4.0%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
2.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述氮源包括黄豆粉和玉米浆,所述黄豆粉的含量为2-3%,所述玉米浆的含量为0.1-0.5%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
3.如权利要求2所述的培养基,其特征在于,所述氮源还包括选自鱼粉、棉籽粉、花生粉、羽毛粉、麸质粉和奶粉中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的培养基,其特征在于,所述氮源包括棉籽粉和/或羽毛粉,所述棉籽粉的含量为1.5%以下,所述羽毛粉的含量为1.5%以下;较佳地,所述棉籽粉的含量为0.3-1.0%,所述羽毛粉的含量为0.3-1.0%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
5.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述培养基还包括微量元素,所述微量元素为选自氯化钴、乙酸锌、硫酸镍、硫酸亚铁、硫酸铜和硫酸锰中一种或者多种;所述微量元素的含量为0.001-0.005%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
6.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述碳源选自葡萄糖、玉米淀粉、蔗糖、乳糖、糊精、麦芽糖、果糖和玉米粉中的一种或多种。
7.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述氨基酸为选自L-赖氨酸、L-赖氨酸盐酸盐,亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸和L-天冬酰胺中的一种或多种;所述氨基酸的含量为0.7-1.2%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比。
8.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,所述无机盐选自硫酸铵、硫酸镁、氯化钠、氯化钾、氯化铵,碳酸钙、柠檬酸、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠和磷酸氢二铵中的一种或多种,所述无机盐的含量为0.85-3.3%;较佳地,所述无机盐为硫酸铵、氯化钠和碳酸钙三种的组合,所述硫酸铵、氯化钠和碳酸钙组合的含量为0.8-2.8%;所述碳酸钙的含量为0.5-2.0%,所述氯化钠的含量为0.2-0.5%,所述硫酸铵的含量为0.1-0.3%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比;
和/或,所述α-淀粉酶的含量为0.001-0.01%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比;
和/或,所述的植物油选自葵花油、豆油、玉米油和棉籽油中的一种或者多种;所述植物油的含量为0.5-2.0%,较佳地,所述的植物油的含量为0.8-1.6%,所述百分比为占培养基的质量体积百分比;
和/或,所述水选自自来水、去离子水和蒸馏水中的一种。
9.一种去甲基金霉素的发酵方法,其特征在于,包括步骤:
(1)将金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养,得到发酵液,所述的培养基为权利要求1-9任一项所述的培养基;
(2)从发酵液中分离出去甲基金霉素。
10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述的金霉素链霉菌是金霉素链霉菌NRRL3203。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610954032.4A CN108018328B (zh) | 2016-11-03 | 2016-11-03 | 一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610954032.4A CN108018328B (zh) | 2016-11-03 | 2016-11-03 | 一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108018328A true CN108018328A (zh) | 2018-05-11 |
CN108018328B CN108018328B (zh) | 2021-07-23 |
Family
ID=62070118
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610954032.4A Active CN108018328B (zh) | 2016-11-03 | 2016-11-03 | 一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108018328B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109680034A (zh) * | 2019-02-26 | 2019-04-26 | 焦作健康元生物制品有限公司 | 一种高效去甲金霉素菌株培育及筛选方法 |
CN110699314A (zh) * | 2019-10-22 | 2020-01-17 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种发酵生产6-去甲基四环素的方法 |
CN111560414A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-21 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种用于生产去甲基金霉素的发酵培养基 |
CN112410395A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-02-26 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6761899B1 (en) * | 1998-10-05 | 2004-07-13 | Pennfield Oil Company | Particulate animal feed supplements and processes for the preparation thereof |
JP2005318815A (ja) * | 2004-05-07 | 2005-11-17 | Chisso Corp | 低重合度ε−ポリ−L−リジンを生産する菌株及びそれを用いた低重合度ε−ポリ−L−リジンの製造法 |
CN104404120A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-11 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种用于发酵法生产去甲基金霉素的培养基 |
-
2016
- 2016-11-03 CN CN201610954032.4A patent/CN108018328B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6761899B1 (en) * | 1998-10-05 | 2004-07-13 | Pennfield Oil Company | Particulate animal feed supplements and processes for the preparation thereof |
JP2005318815A (ja) * | 2004-05-07 | 2005-11-17 | Chisso Corp | 低重合度ε−ポリ−L−リジンを生産する菌株及びそれを用いた低重合度ε−ポリ−L−リジンの製造法 |
CN104404120A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-11 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种用于发酵法生产去甲基金霉素的培养基 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
TETSUO NAKANO ET AL.: ""Mechanism of the incidental production of a melanin-like pigment during 6-demethylchlortetracycline production in Streptomyces aureofaciens"", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 * |
党建章: "《发酵工艺教程》", 31 July 2016, 中国轻工业出版社 * |
刘建 等: "《兽药和饲料添加剂手册》", 31 August 2001, 上海科学技术文献出版社 * |
夏焕章: "《发酵工艺学》", 31 December 2015, 中国医药科技出版社 * |
李士杭 等: ""去甲金霉素发酵培养基的优化及机制分析"", 《中国医药工业杂志》 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109680034A (zh) * | 2019-02-26 | 2019-04-26 | 焦作健康元生物制品有限公司 | 一种高效去甲金霉素菌株培育及筛选方法 |
CN110699314A (zh) * | 2019-10-22 | 2020-01-17 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种发酵生产6-去甲基四环素的方法 |
CN111560414A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-21 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种用于生产去甲基金霉素的发酵培养基 |
CN111560414B (zh) * | 2020-05-28 | 2023-07-28 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种用于生产去甲基金霉素的发酵培养基 |
CN112410395A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-02-26 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用 |
CN112410395B (zh) * | 2020-10-26 | 2022-08-19 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108018328B (zh) | 2021-07-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI810163B (zh) | 芽孢桿菌屬細菌之培養方法及有用物質之製造方法 | |
US11591274B2 (en) | Defined microbial compositions | |
CN108018328A (zh) | 一种用于发酵去甲基金霉素的培养基以及发酵方法 | |
CN105886431A (zh) | 一株谷氨酸棒状杆菌及其高产异亮氨酸的方法 | |
EP3407722A1 (en) | Microbial consortia | |
HU230555B1 (hu) | Környezetbarát mikroorganizmus-készítmény és annak előállítása | |
CN104232538B (zh) | 一种解钾菌及其应用 | |
CN109721425A (zh) | 一种水稻专用叶面微生物菌肥及其制备方法 | |
CN104263679B (zh) | 一种高效解磷菌及其应用 | |
CN103614323B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用 | |
CN102925504A (zh) | 微生物发酵合成γ-氨基丁酸的方法及发酵培养基 | |
CN103387428A (zh) | 一种有机物料腐熟剂的制备方法 | |
CN105441370B (zh) | 一种微生物菌剂及其生产方法 | |
CN103396969B (zh) | 侧孢短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌混合培养的发酵培养基及其发酵方法 | |
CN105638744A (zh) | 一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法 | |
CN102219575B (zh) | 以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法 | |
CN108642041A (zh) | 一种提高重组大肠杆菌发酵生产l-丙氨酸能力的方法 | |
JP2673718B2 (ja) | 細菌による植物病害防除方法 | |
RU2413762C2 (ru) | ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ Bradyrhizobium japonicum ВКМ В-2456D ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД СОЮ | |
CN104805029B (zh) | 一种微生态肥的制备方法 | |
CN110408567A (zh) | 一株耐盐碱甲基营养型芽孢杆菌及其活菌制剂与应用 | |
Liu et al. | Approaches for the establishment of optimized co-culture system of multiple Trichoderma strains for culture metabolites highly effective in cucumber growth promotion | |
CN106834178A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌的新型培养方法 | |
RU2817304C1 (ru) | Способ применения штамма Bacillus pumilus СТ2 (EBC/22-Q1) совместно с минеральными удобрениями и мелиорантами для повышения урожайности и качества сельскохозяйственных культур | |
CN103805527A (zh) | 一种云南链霉菌大理变种及其发酵培养液和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |