CN107987031A - 一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种靶向吲哚胺‑2,3‑双加氧酶1氮芥类抑制剂及其制备方法和应用，所述抑制剂的结构如通式I所示，R的定义如权利要求书和说明书所述。药理实验表明本发明的化合物不仅表现出良好的IDO1抑制活性，而且具有广谱的体外抗肿瘤活性。体内实验表明，本发明的化合物能够有效下调体内IDO1活性，并且能够明显的延缓肿瘤生长，可以应用于制备IDO1介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的肿瘤疾病的药物。

Description

一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂及其制备方法 和应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
氮芥类药物目前仍是临床应用的一类重要的抗肿瘤药物，如苯丁酸氮芥(Chlorambucil)和美法仑(Melphalan)。
这类抗肿瘤药物的作用机制是其在体内能形成缺电子的乙撑亚胺离子，进而与生物大分子(如DNA、RNA或某些重要的酶类)中含有丰富电子的基团发生共价结合，使其丧失活性或使DNA分子发生断裂，从而达到抗肿瘤效果的。氮芥类药物具有抗瘤谱广、对肿瘤细胞杀伤力强等优点，但亦存在治疗效率低、选择性差、毒副作用大等缺点。
吲哚胺2，3-双加氧酶1(IDO)是一个含血红素的双加氧酶，IDO家族包括三种酶：色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)，以及两个相关的IDO同工酶(IDO1，IDO2)，它能够利用活性氧通过三种可能的反应机制催化氧化L-色氨酸的吡咯环成N-乙酰犬尿氨酸。这是犬尿氨酸途径(KP)的限速步骤，进一步合成一系列活性代谢产物，如N-乙酰-5-甲氧基色胺，喹啉酸，N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂犬尿喹啉酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。许多临床研究发现IDO通过消耗色氨酸阻断了T淋巴细胞的增殖，并且多种癌症患者的预后较差与肿瘤细胞的IDO表达量增加相关联。因此，在肿瘤免疫治疗中，IDO是一个可以通过小分子药物抑制其活性或者阻断其下游信号效应的关键靶点。在过去几十年中，许多有潜力的IDO抑制剂被设计，合成和评价，其中D-1-MT，INCB24360和NLG919目前已进入临床研究阶段。
虽然IDO抑制剂可以激活人体免疫***，但单独使用治疗效果有限。而与放疗，化疗或者免疫治疗联用可能在诱导侵袭性肿瘤消退治疗中，能起到更好的治疗效果。近期的临床数据显示，Epacadastat与PD-1抑制剂Keytruda进行联用后可以大大提高患者的应答率。
目前基于IDO的多靶点抑制剂的研究几乎没有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂。
本发明的第一方面，提供通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
R为取代或未取代的选自下组的基团：-芳基-、-芳基-C1-4烷基-、-杂芳基-或-杂芳基-C1-4烷基-，所述取代是指具有选自下组的一个或多个取代基：羟基、氨基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基。
在另一优选例中，所述芳基为苯基或萘基。
在另一优选例中，所述杂芳基为喹啉基、苯并咪唑基、吡啶基、嘌呤基、吲哚基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、噻吩基、异噻唑基、或咪唑基。
在另一优选例中，所述取代是指具有选自下组的一个或多个取代基：氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基。
在另一优选例中，R为：
其中n位0、1、2或3。
在另一优选例中，所述化合物为：
3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺、
2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺、
3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、
4-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺、
2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺、
3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、
4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺、
2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、或
4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺。
在另一优选例中，所述化合物为实施例1-9制备的任一化合物。
在另一优选例中，所述药学上可接受的盐为通式(I)所示的化合物与酸形成的酸加成盐，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸或琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸。
本发明的第二方面，提供第一方面所述的化合物的制备方法，包括以下步骤：
(i)式II所示的化合物与式III所示的化合物发生缩合反应获得式IV所示的化合物；
(ii)式IV所示的化合物经水解得到权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，
其中，R的定义如前所述。
在另一优选例中，步骤i)中，式II所示的化合物与式III所示的化合物在2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯HATU作为缩合剂的作用下，加入N，N-二异丙基乙胺DIPEA和二甲基甲酰胺DMF，室温反应过夜得到化合物式IV所示的化合物。
在另一优选例中，步骤ii)中，式IV所示的化合物在NaOH的作用下水解。
本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含：
权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
本发明的第四方面，提供第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或者第三方面所述的药物组合物的应用，用于：(i)制备吲哚胺-2，3-双加氧酶1抑制剂；或(ii)制备***的药物。
所述肿瘤具有吲哚胺-2，3-双加氧酶1介导的色氨酸代谢途径的病理学特征。
所述治疗包括对肿瘤细胞的杀伤作用，以及在小鼠肿瘤模型中延缓肿瘤生长。
本发明的化合物，不仅表现出良好的IDO1抑制活性，而且具有广谱的体外抗肿瘤活性。体内实验表明，本发明化合物能够有效的下调体内IDO1活性，并且能够明显的延缓肿瘤生长，可以应用于IDO1介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的肿瘤疾病。该类化合物作为首次报道的基于IDO1的双功能抗肿瘤药物，具有进一步的开发和研究价值，有望成为一类能够靶向IDO1并能直接杀伤癌细胞的抗肿瘤药物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次发现一种靶向吲哚胺-2,3-双加氧酶1氮芥类抑制剂，不仅表现出良好的IDO1抑制活性，而且具有广谱的体外抗肿瘤活性。在此基础上，完成了本发明。
术语
本发明说用的术语“取代”，意指任何指定原子或环上的一个或多个氢被取代，前提是不超过指定原子的正常化学价，且取代产生稳定的化合物。在另一优选例中，所述取代是单取代、二取代、三取代或四取代。具有两个以上取代基时，各取代基团可以相同或不同。
除非另外指明，术语“烷基”在本文中单独或作为另一个基团的一部分使用时，包括直链和支链“烷基”，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基等。术语“芳基”单独或作为另一个基团的一部分时，指在环部分含有6～10个碳的单环和双环芳族基团。术语“杂芳基”表示包含1‐4个选自N、O、S的杂原子的芳环基团，非限制性地包括吡唑基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、喹唑啉基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基和嘌呤基。短语“药学上可接受的”用于本文指这样的化合物、物质、组合物和/或剂型，他们在合理的医学判断范围内适合用于人和动物体组织接触，而无过度的毒性、刺激性、过敏性反应或其他问题或并发症，并于合理的利益/风险比相称。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1：3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺的合成
A、3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺的制备
化合物3-(4-((2-氨乙基))氨基-1，2，5-恶二唑-3-甲基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-恶二唑-5(4H)-酮氢碘酸盐(0.20g，0.4mmol)与3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸(0.11g，0.4mmol)溶于DMF中，加入HATU(0.15g，0.4mmol)和DIPEA(0.18mL，1mmol),室温搅拌过夜后，反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产物，经由硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝120:1–100:1)得白色固体3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺0.13g，收率52％。
B、3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺的制备
化合物3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺(0.1g，0.16mmol)溶于甲醇(10mL)中,加入2M NaOH(0.5mL)，40℃条件下搅拌2小时后，TCL点板检测反应完全，反应液浓缩蒸干剩余甲醇，加入少量水，2M HCl调pH至7，静置后有固体析出，抽滤的到白色固体3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺0.07g，收率70％。
实施例2：2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)乙酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺0.12g，收率77％。
实施例3：3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丙酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺0.23g，收率85％。
实施例4：4-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以4-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以4-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到4-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺0.08g，收率64％。
实施例5：2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)乙酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺0.16g，收率79％。
实施例6：3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丙酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺0.11g，收率69％。
实施例7：4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺0.04g，收率71％。
实施例8：2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丙酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺0.02g，收率54％。
实施例9：4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺的合成
按照实施例1的方法，在步骤A中以4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)丁酸代替3-(双(2-氯乙基)氨基)苯甲酸，在步骤B中以4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺代替3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(4-(3-溴-4-氟苯基)-5-羰基-4,5-二氢-1，2，4-恶二唑-3-甲基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺得到4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺0.03g，收率66％。
实施例1-9中化合物的1HNMR、13CNMR和MS数据详见表1，序号1-9为实施例1-9对应的化合物编号。
表1目标化合物1HNMR，13CNMR和MS数据
实施例10：本发明化合物对IDO1抑制活性测试(IC50)。
IDO1催化氧化裂解L-色氨酸的吲哚环生成N'-甲酰犬尿氨酸。在50mM的磷酸钾磷酸钾缓冲液(pH 6.5)中，加入20mM抗败血酸，3.5μM亚甲基蓝，0.2mg/mL过氧化氢酶，底物2mM色氨酸和不同浓度的抑制剂。
依据上述方法计算得到待测化合物不同浓度对IDO1酶的抑制率，用PrismGraphPad软件计算IC50。
实验结果：本发明化合物的IC50值(部分化合物单浓度抑制率)如表2所示，测试化合物表现出中等到优秀的抑制活性，其中化合物1表现出最佳的抑酶活性。
表2目标化合物IDO1抑制活性
实施例11：本发明化合物在细胞水平对IDO1抑制活性测试(EC50)。
细胞水平抑制活性测定采用HeLa细胞培养基为高糖DMEM，含50U/mL青霉素，50U/mL链霉素。96孔板每孔加入浓度为6×103个/mL的HeLa细胞悬液100μL,置37℃、5％CO2培养箱内。24小时后，含IFN-γ(Sangon Biotech#C600039，50ng/mL)和不同浓度化合物的培养基(200μL)加入，孵育48小时后，取140μL上清液到另一96孔板中，加入10μL 6.1N三氟乙酸，在50℃加热30分钟是生成的甲酰犬尿氨酸完全转化为犬尿氨酸，然后12000rpm离心10分钟，取100μL上清液与等体积2％(w/v)对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混合显色，最后采用酶标仪在490nM下检测吸光度值。
依据上述方法计算得到待测化合物不同浓度的有效抑制率，用Prism GraphPad软件计算EC50。
实验结果：本发明化合物的EC50值如表3所示，测试结果显示大部分化合物都表现出纳摩尔水平的细胞活性，整体优于其分子水平的活性，其中化合物4表现出最佳的细胞水平IDO抑制活性。
表3目标化合物细胞水平IDO抑制活性
实施例12：本发明化合物的体外抗肿瘤活性测试(IC50)。
对本发明的化合物进行了五种肿瘤细胞增殖抑制能力测试，测试方法采用常规的CCK8法。将对于对数生长期的肿瘤细胞(LLC，CT-26，A549，HCT116和HT-29)用胰酶消化，然后用培养基(DMEM+10％FBS或者PRMI1640+10％FBS)将细胞稀释悬浮成单细胞悬液，调整细胞密度为6-10×104个/mL，每孔加入100μL接种于96孔板中，置37℃、5％CO2培养箱内培养24小时，在分别加入不同浓度的化合物，每个浓度平行三个复孔，并设置实验组和对照组，继续孵育48小时后，向每孔加入10μL CCK8溶液，然后37℃下避光孵育1-4小时后，用用MK-2全自动酶标仪测450nm OD值。计算半数抑制浓度IC50。
实验结果：本发明化合物对肿瘤细胞半数抑制浓度IC50值如表4所示，测试结果显示这一系列氮芥衍生物表现出广谱的抗肿瘤活性，其IC50值在1～40μmol之间，而良性药INC824360基本没有细胞毒活性。
表4目标化合物细胞对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50(单位：μmol/L)
实施例13：本发明化合物对小鼠结肠癌肿瘤模型治疗效果研究
细胞系：小鼠结肠癌细胞(CT-26)。
实验动物：八周龄Babl/C雌性小鼠购置上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK-2013-0016。
小鼠肿瘤模型建立、分组及给药：CT-26细胞被注射于小鼠前肢腋下，每只注射6×105个细胞。肿瘤体积达到50mm3时开始给药，本实验小鼠共分为5组，每组6只。分别口服给予羧甲基纤维素(0.5％CMC)、INCB24360(100mg/kg)、化合物1(100mg/kg)和化合物5(100mg/kg)。每天给药两次，连续给药14天。治疗过程中每4天监测肿瘤体积变化，肿瘤体积计算公式：(宽度2×长度)/2。
实验结果：优选化合物体内肿瘤模型治疗效果如如表5所示，化合物1和5均表现出较好的体内抗肿瘤活性，其中化合物1的体内抑瘤率要优于良性药INCB24360。
表5肿瘤体积
组别 平均肿瘤体积mm3
空白组 3352.17
INCB24360组 1808.43
化合物1组 1419.32
化合物5组 1792.73
实施例14：本发明化合物对于小鼠体内IDO1活性的影响
实验动物：八周龄C57BL/6雌性小鼠购置上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK-2013-0018。
体内IDO抑制活性可以通过犬尿氨酸(Kyn)含量变化来反应。本实验小鼠共5只，给药前禁食4小时，通过口服给予化合物1(100mg/kg)后，在不同时间点处死小鼠，通过眼眶穿刺采血，加入含EDTA-3K的样品管，4℃，3000rpm离心15min后，取上清液低温保存。然后将60μL血浆与240μL(含内标物50ng/mL)甲醇-1％三氟乙酸混合涡旋5分钟，5800rpm离心10min后，取上清液50μL与等体积的水混合后用于进样分析，通过LC-MS/MS(API 6500)检测kyn含量。
实验结果：化合物1对小鼠体内IDO1活性结果如表6所示，测试结果显示化合物1在给药后0.5h到8h之间，血液中Kyn浓度相对于给药前均有明显的下降，说明化合物1在体内能够抑制IDO1活性，化合物1的体内抗肿瘤活性是通过免疫介导的。
表6血液中犬尿氨酸(Kyn)含量(单位：nmol/L)
实验结果表明，本发明化合物在分子和细胞水平上均表现出较好的IDO1抑制活性，其中化合物1的IC50和EC50分别为0.13±0.02μM和0.27±0.059μM。这类化合物在抑制体外肿瘤细胞增殖试验中，表现出广谱的抗肿瘤活性，其半数抑制浓度IC50在5到30μM之间。化合物1和5在小鼠结肠癌肿瘤模型中，能够有效的抑制肿瘤的生长，化合物1的体内效果优于良性药INCB24360，并且能够有效的降低小鼠体内犬尿氨酸的含量。本发明的化合物作为一类靶向吲哚胺-2，3-双加氧酶1的氮芥类衍生物不仅具有良好的抑酶活性，而且在体外和体内均表现出较好的抗肿瘤活性，用于具有IDO介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的肿瘤疾病，其作为新型的双功能的杂交分子，有很好的抗肿瘤药物开发价值。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
R为取代或未取代的选自下组的基团：-芳基-、-芳基-C1-4烷基-、-杂芳基-或-杂芳基-C1-4烷基-，所述取代是指具有选自下组的一个或多个取代基：羟基、氨基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述芳基为苯基或萘基。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述杂芳基为喹啉基、苯并咪唑基、吡啶基、嘌呤基、吲哚基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、噻吩基、异噻唑基、或咪唑基。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述取代是指具有选自下组的一个或多个取代基：氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R为：
其中n位0、1、2或3。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为：
3-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺、
2-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺、
3-(3-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、
4-(双(2-氯乙基)氨基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)苯甲酰胺、
2-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)乙酰胺、
3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、
4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺、
2-氨基-3-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丙酰胺、或
4-(5-(双(2-氯乙基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲基)-N-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基甲脒基)-1，2，5-恶二唑-3-甲基)氨基)乙基)丁酰胺。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述药学上可接受的盐为通式(I)所示的化合物与酸形成的酸加成盐，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸或琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸。
8.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(i)式II所示的化合物与式III所示的化合物发生缩合反应获得式IV所示的化合物；
(ii)式IV所示的化合物经水解得到权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，
其中，R的定义如前所述。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：
权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
10.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的应用，其特征在于，用于：(i)制备吲哚胺-2，3-双加氧酶1抑制剂；或
(ii)制备***的药物。
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