CN107957495B - 一种ck-mb检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents

一种ck-mb检测试剂盒及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种CK‑MB检测试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的CK‑MB抗体，所述磁珠结合物工作液中含有CK‑MB抗体标记的磁珠。上述的CK‑MB检测试剂盒能够实现对全血样本中CK‑MB的准确测定，简化了检测步骤，提高了检测效率。试剂盒最低检测限为1ng/ml，线性范围为1～300ng/ml，检测灵敏度高，线性范围宽，检测结果准确。本发明还公开了一种上述的CK‑MB检测试剂盒的使用方法，其使用步骤简单，有效缩短了CK‑MB的检测时间，有利于实现CK‑MB的快速、灵敏检测。

Description

一种CK-MB检测试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种CK-MB检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
心血管疾病是危害我国人民健康和生命的重大致死性疾病，根据***统计，在我国城市中，每十万人中就有二百三十五人死于心脑血管疾病，占各类疾病引起的死亡的首位，且每年以2％的速度递增。急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)则是造成心血管病人死亡的主要原因。AMI是临床上一种突发性疾病，其发病时常伴有胸痛、恶心、发热、心律失常，血清标志物升高等一系列症状，如能及早确诊并介入治疗，对挽救濒死心肌、改善预后、降低急性期病死率等具有重要意义。
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)广泛存在于各种组织中，与三磷酸腺苷(ATP)的再生有关。肌酸激酶是由M和B两种亚单位组成的二聚体，在细胞质内共有三种同工酶：即CK-MM、CK-MB和CK-BB。在细胞线粒体内还有另一种同工酶，称为CK-Mt。这几种同工酶虽然相对分子质量相同，但是免疫特性不同。肌酸激酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性最高，临床上主要用于心肌梗死、病毒性心肌炎的辅助诊断。
CK-MB测定的方法有电泳法、离子交换柱层析法、ELISA法和放射免疫法等。常规应用电泳法和ELISA法较多，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，所以无法普及；ELISA法操作过程复杂、检测时间过长，不利于实现CK-MB的临床快速检测。
中国专利文献CN103926405A公开了一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，试剂盒基于胶体金免疫比浊法，使用标记了肌酸激酶同工酶抗体的金纳米颗粒的溶液，单个胶体金颗粒的大小在入射波长之内，光线可透过，当两个以上的胶体金颗粒凝集时，可阻碍光线透过，使得透射光减少，其减少程度与抗原的量成正比；当检测***或检测环境中存在CK-MB时，胶体金颗粒表面的抗体即将与之对应的抗原捕获，并形成抗原-抗体复合物，进而造成局部胶体金颗粒的聚合或堆积，使胶体金匀相试剂透光光谱迁移，达到定量检测人体内CK-MB的目的。上述的CK-MB检测试剂在一定程度上提到了CK-MB的检测速度和灵敏度，但检测试剂仅能用于检测血清或血浆中CK-MB含量，无法实现对全血中CK-MB含量的准确、快速测定。在实际的临床应用中，需要将采集到的全血样本进行离心分离，使CK-MB的检测步骤繁琐、检测成本增高；另一方面，胶体金检测法存在检测重复性差、不利于质控，易出现误读误判等现象。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的CK-MB检测无法实现对全血样本检测的缺陷。
为此，本发明提供了一种CK-MB检测试剂盒，包括：校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的CK-MB抗体，所述磁珠结合物工作液中含有CK-MB抗体标记的磁珠。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述清洗液是含有SBS、Tween-20和Proclin-300的Tris缓冲液，所述底物溶液是酶促化学发光底物溶液，所述校准品是用校准品稀释液配制的CK-MB的HEPES缓冲液。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述咪唑的浓度为0.4～1.3mM，所述酶标记的CK-MB抗体的浓度为0.5～0.8μg/ml，所述磁珠标记的CK-MB抗体的浓度为0.3～0.5mg/ml。
上述的CK-MB检测试剂盒，还包括：质控品，所述质控品是用校准品稀释液配制的CK-MB的HEPES缓冲液。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述预处理液还包括：25～100mM的Tris、150mM的NaCl、1～5％的蔗糖、1～5％的甘油、0.1％的BSA、0.05～0.2％的Tween-20和0.05～0.2％的Proclin-300，所述预处理液的pH为7.0～7.5；
所述酶结合物工作液还包括：20～50mM的MES、150～300mM的NaCl、1％的BSA、5％的蔗糖、5％的甘油、0.1％的Tween-20、0.02～5mM的ZnCl2、0.02～5mM的MgCl2和0.05～0.2％的Proclin300，所述酶结合物工作液的pH为6.0～6.5；
所述磁珠结合物工作液还包括：20～50mM的MOPS,150～300mM的NaCl、1％的BSA、1％的蔗糖、1％的明胶、0.1％的Tween-20、1％的PVP360和0.05～0.2％的Proclin300，所述磁珠结合物工作液的pH为7.0～8.0。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述磁珠的粒径为3μm。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述校准品稀释液包括：20～50mM的HEPES、150～300mM的NaCI、1％的牛血清、0.5～5mM的Proclin-300和1％的甘露醇，所述校准品稀释液的pH为6.5～7.5。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述酶标记的CK-MB抗体为碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体通过以下方法制备：
A.活化CK-MB抗体
①向CK-MB抗体中加入pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液，至抗体的终浓度为2～5mg/ml；
②向步骤①中的抗体溶液中加入1.376mg/ml的Traut′s溶液，混匀，室温静置反应；其中，Traut′s溶液是将Traut′s试剂溶于pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液配制而成，抗体与Traut′s试剂加入的摩尔比为1：(15～30)；
③继续加入1M的甘氨酸溶液，混匀，室温静置反应；其中，甘氨酸与Traut′s试剂加入的摩尔比为(10～20):1；
④将步骤③中得到的抗体溶液脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中；
B.活化碱性磷酸酶
⑤向碱性磷酸酶溶液中加入17.5mg/mL的Sulfo-SMCC溶液，混匀，室温下静置；其中，Sulfo-SMCC溶液是将Sulfo-SMCC试剂加入到二甲基甲酰胺中配制而成，Sulfo-SMCC试剂与碱性磷酸酶加入的摩尔比为(10～15)：1；
⑥继续加入1M的甘氨酸溶液，混匀，室温下静置反应；其中，甘氨酸与Sulfo-SMCC试剂加入量的摩尔比为(10～20)：1；
⑦将反应后的碱性磷酸酶溶液脱盐，置换到pH 8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中；
C.将步骤A中活化的CK-MB抗体溶液和步骤B中活化的碱性磷酸酶溶液混合均匀，2～8℃温度下静置反应18～24h；其中，CK-MB抗体与碱性磷酸酶加入的摩尔比为1：2；
D.向步骤C中反应后的溶液中加入12.5mg/ml的N-乙基顺丁烯二酰亚胺溶液，混匀，室温下静置反应，纯化反应后溶液，得到碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体。
上述的CK-MB检测试剂盒，所述CK-MB抗体标记的磁珠通过以下方法制备：
E.向CK-MB抗体中加入pH5.0、100mM的MES缓冲液，至抗体溶液的浓度为1～5mg/ml；
F.活化磁珠
1)将100mg/ml的磁珠溶液置于磁架上静置，磁分离弃上清液；其中，磁珠溶液与CK-MB抗体的质量比为100：1；
2)用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解步骤1)中得到的磁珠，磁分离弃上清；
3)将步骤2)中得到的磁珠溶解于100mM的MES缓冲液，继续加入0.23倍磁珠重量的10mg/ml的NHS溶液和0.1倍磁珠重量的10mg/ml的EDC溶液，室温下振荡反应；其中，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0、100mM的MES缓冲液中得到，EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0、100mM的MES缓冲液中得到；
4)将步骤3)中反应后的磁珠溶液磁分离弃上清，然后溶于100mM的MES缓冲液；
G.将步骤E中得到的CK-MB抗体溶液与步骤F中活化的磁珠溶液混合，室温下交联反应16～24h，然后磁分离弃上清，继续加入磁珠封闭液CE210，混匀后室温反应16～24小时；
H.将步骤G中得到的磁珠溶液磁分离后弃上清，然后清洗磁珠，得到CK-MB抗体标记的磁珠。
上述的CK-MB检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)向待测样本中加入预处理液，混匀后加入磁珠工作液、酶结合物工作液，混匀后在37℃～42℃的温度下进行反应；其中，所述预处理液与所述待测样本加入的体积比≤4，所述预处理液、所述磁珠工作液和所述酶结合物工作液加入的体积比为1：5：5；
(2)将步骤(1)中得到的反应液进行磁分离，收集磁珠；
(3)清洗磁珠，然后加入酶促化学发光底物溶液，混匀，检测发光值。本发明相对现有技术具有如下优点：
1、本发明提供的CK-MB检测试剂盒，包括预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有吡啶，所述酶结合物工作液中含有酶标记的CK-MB抗体，所述磁珠结合物工作液中含有CK-MB抗体标记的磁珠。
上述的CK-MB检测试剂盒在用于待测样本检测时，酶标记的CK-MB抗体和CK-MB抗体标记的磁珠分别通过CK-MB抗体与待测样本中CK-MB的不同表位结合，形成“三明治”结构。在外加磁场中直接沉淀，不需离心即可分离。倒去上清液，清洗沉淀的复合物，然后加入与酶促化学发光底物。底物在酶的作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，即可使用发光仪检测反应的发光强度，发光强度与待测样本中的CK-MB浓度成正比，利用对发光强度的检测，能够实现对待测样本中的CK-MB含量的准确测定。本发明提供的CK-MB检测试剂盒将化学发光免疫分析法与磁性微粒分离技术相结合，检测的灵敏度高、特异性强、检测结果准确。
本发明提供的CK-MB检测试剂盒，预处理液中含有咪唑，其可以快速消除全血中的血细胞，有效避免血细胞吞进磁珠的可能。本发明的试剂盒可直接使用手指末梢全血或抗凝静脉全血作为待检样品，无需预先对全血样本进行预处理，就可直接进行检测，大大提高了检测速度，简化了操作步骤，扩大了试剂盒的适用范围；可全自动、一键式操作，15分钟左右即可出检测结果，能很好的满足医院急诊和门诊快速诊断的需求，便于大范围推广应用。
本发明提供的包括校准品，校准品为系列浓度梯度的CK-MB标准样品，利用本发明提供的试剂盒检测不同CK-MB浓度下的化学发光强度，能够绘制得到试剂盒检测的标准曲线。后续试剂盒在用于检测待测样本中的CK-MB时，根据标准曲线即可算出样本中的CK-MB含量，实现精准的定量检测。
2、本发明提供的预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液的浓度、组分和各组分含量，能够为酶标记的CK-MB抗体和CK-MB抗体标记的磁珠提供稳定的工作环境，在样本中CK-MB浓度为1ng/ml时即能实现对CK-MB的特异性识别和检测，检测范围达.1-300ng/ml，有利于实现对CK-MB的高灵敏度和宽范围检测；同时，提高了试剂盒检测的稳定性，试剂盒检测结果的可重复性高。另外，上述的溶液体系保证了酶的高催化活性，使酶促反应底物在其作用下能够长效发光。有利于实现CK-MB检测试剂盒的高检测性能。
3、本发明提供了碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体的制备方法，利用Sulfo-SMCC活化碱性磷酸酶，Traut′s试剂修饰CK-MB抗体，使CK-MB抗体上带有能够与活化的碱性磷酸酶相结合的巯基，通过巯基和氨基的结合，实现抗体与酶的偶联。本发明使用的处理试剂盒处理条件能够实现碱性磷酸酶与CK-MB抗体的高效偶联，并提高偶联反应的选择性和偶联产物的均一性；反应体液中使用三乙醇胺缓冲液，三乙醇胺具有叔胺基，不含伯胺基，不会偶联过程产生干扰，为碱性磷酸酶与CK-MB抗体的偶联提供稳定的偶联环境。利用上述制备过程得到的碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体具有高的酶催化性能和与CK-MB的结合效率，从而使含有碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体的酶结合物工作液在用于CK-MB检测是具有灵敏度高、特异性强和检测范围宽等优势。
制备过程中加入甘氨酸溶液以终止活化反应，以及N-乙基顺丁烯二酰亚胺溶液封闭多余的巯基以终止标记反应，有效避免了非特异性反应的发生，保证了CK-MB抗体与酶的偶联物的稳定性；对标记反应中各反应物质的使用量以及温度、pH条件等进行限定，优化了标记反应的条件。
4、本发明提供了CK-MB抗体标记的磁珠的制备方法，制备过程中先采用NHS和EDC活化磁珠，提高了CK-MB抗体与磁珠的偶联效率；利用MES缓冲液溶解磁珠保证了磁珠的分散稳定性，有效防止了因磁珠的凝结而影响检测信号，保证了试剂盒检测结果的准确性；试剂盒用于全血检测时，血液中成分复杂，本发明提供的制备方法在将CK-MB抗体与磁珠偶联后加入磁珠封闭液，有效封闭磁珠上未与抗体结合的位点，避免后期检测全血样本时可能产生的非特异性的结合，进一步保证了检测结果的准确性。使用磁珠封闭液CE210同时实现对磁珠的有效封闭并保证CK-MB抗体活性，提高试剂盒的检测性能；对偶联反应中各反应物质的使用量以及温度、pH条件进行限定，优化了偶联反应的条件。
5、本发明提供的CK-MB检测试剂盒，可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现CK-MB的高通量快速化测定，且准确度和检测效率都得到极大地提高。
6、本发明提供了CK-MB检测试剂盒的使用方法，该方法是采用一步法的反应模式，反应体系均一，极大提高了反应的速率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的试剂盒与贝克曼公司试剂盒检测临床血清的相关性。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下通过具体实施例来说明本发明的实施方式，除非另外说明，本发明中所公开的实验方法均采用本技术领域常规技术，本发明使用的百分比均为质量百分比。下述实施例中的CK-MB抗体购自Roche公司；碱性磷酸酶购自Roche公司；羧基磁珠购自日本JSR株式会社；CE210购自日本JSR株式会社。
实施例1
本实施例提供一种碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体的制备方法，包括以下步骤：
1、称取适量Traut′s试剂，用pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液配制成1.376mg/mL溶液。
2、将CK-MB标记抗体(也即CK-MB抗体)保存于pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中，抗体浓度为2mg/mL；向上述抗体溶液中加入步骤1中配制的Traut′s溶液，Traut′s试剂与CK-MB抗体加入的摩尔比为30：1，立刻混匀，25℃温度下静置反应15分钟。
3、向步骤2活化反应结束得到的抗体溶液中加入1M的甘氨酸溶液，甘氨酸与Traut′s试剂的加入的摩尔比为20:1；立刻混匀，25℃温度下静置反应10分钟。
4、步骤3中反应结束后得到的CK-MB标记抗体溶液立即进行脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液，紫外分光光度法测定抗体溶液的浓度。
5、称取适量Sulfo-SMCC试剂，用二甲基甲酰胺DMF配成浓度为17.5mg/mL溶液。
6、向碱性磷酸酶溶液(AP溶液，浓度为20mg/ml)中加入步骤5配制的Sulfo-SMCC溶液，碱性磷酸酶与Sulfo-SMCC的摩尔比1：10，立刻混匀，25℃静置反应15分钟。
7、向步骤6得到的碱性磷酸酶溶液中加入1M的甘氨酸溶液，甘氨酸与Sulfo-SMCC试剂的摩尔比为20:1，立刻混匀，25℃静置反应10分钟。
8、将步骤7得到的碱性磷酸酶溶液立刻脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液，紫外分光光度法测得碱性磷酸酶溶液的浓度；
10、将步骤4活化好的抗体溶液与步骤9活化好的碱性磷酸酶溶液混合，活化的CK-MB标记抗体与活化的碱性磷酸酶的摩尔比为1：1，充分混匀，2℃静置反应24小时。
11、称取适量N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)试剂，用pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液配成12.5mg/mL的NEM溶液。
12、向步骤10交联反应结束的溶液中加入百分之一体积步骤11配制的NEM溶液，充分混匀，25℃静置反应30分钟以封闭多余的巯基。
13、将步骤9终止反应结束的交联物溶液通过透析、脱盐或超滤浓缩等方式纯化。
14、将纯化后碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体浓缩液测定浓度，添加等体积甘油，充分混匀，-20℃保存备用。
实施例2
本实施例提供一种碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体的制备方法，包括以下步骤：
1、称取适量Traut′s试剂，用pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液配制成1.376mg/mL溶液。
2、将CK-MB标记抗体(也即CK-MB抗体)保存于pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中，抗体浓度为5mg/mL；向上述抗体溶液中加入步骤1中配制的Traut′s溶液，Traut′s试剂与CK-MB抗体加入的摩尔比为15：1，立刻混匀，25℃温度下静置反应15分钟。
3、向步骤2活化反应结束得到的抗体溶液中加入1M的甘氨酸溶液，甘氨酸与Traut′s试剂的加入的摩尔比为10:1；立刻混匀，25℃温度下静置反应10分钟。
4、步骤3中反应结束后得到的CK-MB标记抗体溶液立即进行脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液，紫外分光光度法测定抗体溶液的浓度。
5、称取适量Sulfo-SMCC试剂，用二甲基甲酰胺DMF配成浓度为17.5mg/mL溶液。
6、向碱性磷酸酶溶液(AP溶液，浓度为20mg/ml)中加入步骤5配制的Sulfo-SMCC溶液，碱性磷酸酶与Sulfo-SMCC的摩尔比1：15，立刻混匀，25℃静置反应15分钟。
7、向步骤6得到的碱性磷酸酶溶液中加入1M的甘氨酸溶液，甘氨酸与Sulfo-SMCC试剂的摩尔比为10:1，立刻混匀，25℃静置反应10分钟。
8、将步骤7得到的碱性磷酸酶溶液立刻脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液，紫外分光光度法测得碱性磷酸酶溶液的浓度；
10、将步骤4活化好的抗体溶液与步骤9活化好的碱性磷酸酶溶液混合，活化的CK-MB标记抗体与活化的碱性磷酸酶的摩尔比为1：1，充分混匀，8℃静置反应18小时。
11、称取适量N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)试剂，用pH8.5、100mM的三乙醇胺溶液配成12.5mg/mL的NEM溶液。
12、向步骤10交联反应结束的溶液中加入百分之一体积步骤11配制的NEM溶液，充分混匀，25℃静置反应30分钟以封闭多余的巯基。
13、将步骤9终止反应结束的交联物溶液通过透析、脱盐或超滤浓缩等方式纯化。
14、将纯化后碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体浓缩液测定浓度，添加等体积甘油，充分混匀，-20℃保存备用。
实施例3
本实施例提供一种CK-MB抗体标记的磁珠的制备方法，包括以下步骤：
1、将CK-MB包被抗体(也即CK-MB抗体)保存在pH5.0、100mM的MES缓冲液，抗体浓度为1mg/mL；
2、取100倍抗体重量的羧基磁珠溶液，羧基磁珠溶液浓度为100mg/ml，羧基磁珠粒径为3μm，磁分离弃上清；
3、洗涤：用pH5.0、100mM的MES缓冲液重新溶解上述步骤得到的磁珠，磁分离弃上清。
4、重复步骤3一次。
5、加入适量100mM的MES缓冲液溶解步骤4得到的磁珠。
6、称取适量NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)试剂，用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解成浓度为10mg/mL的溶液；
7、称取适量EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)试剂，用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解成浓度为10mg/mL的溶液；
8、向步骤5中得到的磁珠溶液加入0.23倍磁珠重量的步骤6的NHS溶液和0.1倍磁珠重量的步骤7的EDC溶液，在混匀仪上25℃反应30分钟。
9、反应结束后的磁珠溶液磁分离，弃上清。
10、加入适量100mM的MES缓冲液溶解步骤9得到的磁珠。
11、将步骤1的CK-MB包被抗体加入到步骤10得到的磁珠中，CK-MB包被抗体与羧基磁珠溶液质量比为1:100，在混匀仪上室温交联反应16小时。
12、交联结束后，磁分离，上清收集测交联率。重复上述步骤3次。
13、向步骤12得到的磁珠加入磁珠封闭液，混匀仪上室温反应24小时。
14、上述反应结束后的磁珠溶液磁分离，弃上清。
15、用磁珠清洗液洗涤磁珠3次。
16、洗涤后的磁珠重悬于磁珠保存液中，2℃保存备用。
实施例4
本实施例提供一种CK-MB抗体标记的磁珠的制备方法，包括以下步骤：
1、将CK-MB包被抗体(也即CK-MB抗体)保存在pH5.0、100mM的MES缓冲液，抗体浓度为1mg/mL；
2、取100倍抗体重量的羧基磁珠溶液，羧基磁珠溶液浓度为100mg/ml，羧基磁珠粒径为3μm，磁分离弃上清；
3、洗涤：用pH5.0、100mM的MES缓冲液重新溶解上述步骤得到的磁珠，磁分离弃上清。
4、重复步骤3一次。
5、加入适量100mM的MES缓冲液溶解步骤4得到的磁珠。
6、称取适量NHS试剂，用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解成浓度为10mg/mL的溶液；
7、称取适量EDC试剂，用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解成浓度为10mg/mL的溶液；
8、向步骤5中得到的磁珠溶液加入0.23倍磁珠重量的步骤6的NHS溶液和0.1倍磁珠重量的步骤7的EDC溶液，在混匀仪上25℃反应30分钟。
9、反应结束后的磁珠溶液磁分离，弃上清。
10、加入适量100mM的MES缓冲液溶解步骤9得到的磁珠。
11、将步骤1的CK-MB包被抗体加入到步骤10得到的磁珠中，CK-MB包被抗体与羧基磁珠溶液质量比为1:100，在混匀仪上室温交联反应24小时。
12、交联结束后，磁分离，上清收集测交联率。重复上述步骤3次。
13、向步骤12得到的磁珠加入磁珠封闭液，混匀仪上室温反应16小时。
14、上述反应结束后的磁珠溶液磁分离，弃上清。
15、用磁珠清洗液洗涤磁珠3次。
16、洗涤后的磁珠重悬于磁珠保存液中，8℃保存备用。
实施例5
本发明提供一种CK-MB检测试剂盒，包括：预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液、清洗液、底物溶液、校准品和质控品。CK-MB检测试剂盒中各试剂的组分如下所示：
1、校准品及质控品
将CK-MB通过溯源确定浓度，用校准品稀释液稀释配制CK-MB校准品和CK-MB质控品。例如校准品的浓度分别为：5，10，20，40，80，160ng/ml，质控品浓度为10ng/ml。
校准品稀释液的具体成分为：20mM的HEPES，300mM的NaCl、1％的牛血清、0.5mM的Proclin-300和1％的甘露醇，校准品稀释液的pH为6.5。
2、预处理液
预处理液中含有1.3mM的咪唑；另外还包括：25mM的Tris、150mM的NaCl、1％的蔗糖、5％的甘油、0.1％的BSA、0.05％的Tween-20和0.2％的Proclin-300，预处理液的pH为7.0。
3、酶结合物工作液
酶结合物工作液中含有0.5μg/ml的碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体，碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体利用实施例1所示的制备方法制得。
酶结合物工作液中还包括：50mM的MES(2-吗啉乙磺酸)、150mM的NaCl、1％的BSA、5％的蔗糖、5％的甘油、0.1％的Tween-20、5mM的ZnCl2、0.02mM的MgCl2和0.05％的Proclin300，酶结合物工作液的pH为6.0。
4、磁珠结合物工作液
磁珠结合物工作液中含有0.5mg/ml的磁珠标记的CK-MB抗体，磁珠标记的CK-MB抗体利用实施例3所示的制备方法制得。
磁珠结合物工作液还包括：20mM的MOPS(3-吗啉丙磺酸),300mM的NaCl、1％的BSA、1％的蔗糖、1％的明胶、0.1％的Tween-20、1％的PVP360和0.05％的Proclin300，磁珠结合物工作液的pH为7.0。
5、底物溶液
准确称取3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(AMPPD)0.5g、三羟甲基氨基甲烷18g、NaCl 100g、十六烷基三甲基氯化铵0.02g、水定容至1000mL，调整化学发光底物溶液pH为9.4±0.05；本化学发光底物为针对碱性磷酸酶的环二氧乙烷类底物，需要再2～8℃条件下避光保存，用时缓慢混匀。
6、清洗液
依次向容器内加入Tris 1211.4mg，NaCl 9g，SBS 3g，Tween-20 1g，Proclin-3001g，水900mL，混匀至各组分溶解，用氢氧化钠溶液调节溶液pH至8.0±0.5，补加水定容至1000mL，混匀30分钟，0.22μm过滤即得到清洗液。
实施例6
本发明提供一种CK-MB检测试剂盒，包括：预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液、清洗液、底物溶液、校准品和质控品。CK-MB检测试剂盒中各试剂的组分如下所示：
1、校准品及质控品
将CK-MB通过溯源确定浓度，用校准品稀释液稀释配制CK-MB校准品和CK-MB质控品。例如校准品的浓度分别为：5，10，20，40，80，160ng/ml，质控品浓度为10ng/ml。
校准品稀释液的具体成分为：50mM的HEPES，150mM的NaCl、1％的牛血清、5mM的Proclin-300和1％的甘露醇，校准品稀释液的pH为7.5。
2、预处理液
预处理液中含有0.4mM的咪唑；另外还包括：100mM的Tris、150mM的NaCl、5％的蔗糖、1％的甘油、0.1％的BSA、0.2％的Tween-20和0.05％的Proclin-300，预处理液的pH为7.5。
3、酶结合物工作液
酶结合物工作液中含有2μg/ml的碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体，碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体利用实施例2所示的制备方法制得。
酶结合物工作液中还包括：20mM的MES、300mM的NaCl、1％的BSA、5％的蔗糖、5％的甘油、0.1％的Tween-20、0.02mM的ZnCl2、5mM的MgCl2和0.2％的Proclin300，酶结合物工作液的pH为6.5。
4、磁珠结合物工作液
磁珠结合物工作液中含有0.3mg/ml的磁珠标记的CK-MB抗体，磁珠标记的CK-MB抗体利用实施例4所示的制备方法制得。
磁珠结合物工作液还包括：50mM的MOPS,150mM的NaCl、1％的BSA、1％的蔗糖、1％的明胶、0.1％的Tween-20、1％的PVP360和0.2％的Proclin300，磁珠结合物工作液的pH为8.0。
5、底物溶液
准确称取3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(AMPPD)0.5g、三羟甲基氨基甲烷18g、NaCl 100g、十六烷基三甲基氯化铵0.02g、水定容至1000mL，调整化学发光底物溶液pH为9.4±0.05；本化学发光底物为针对碱性磷酸酶的环二氧乙烷类底物，需要再2～8℃条件下避光保存，用时缓慢混匀。
6、清洗液
依次向容器内加入Tris 1211.4mg，NaCl 9g，SBS 3g，Tween-20 1g，Proclin-3001g，水900mL，混匀至各组分溶解，用氢氧化钠溶液调节溶液pH至8.0±0.5，补加水定容至1000mL，混匀30分钟，0.22μm过滤即得到清洗液。
实施例7
本实施例提供利用实施例5中提供的CK-MB检测试剂盒测定全血中CK-MB的步骤，取手指末梢全血作为待测样本：
1、向三个反应管中分别加10μl的CK-MB校准品、CK-MB质控品和待测样本；
2、每个反应管中加入40μl的预处理液混匀；
3、每个试管中加入50μl酶结合物工作液和50μl磁珠工作液后混匀；42℃反应5min；
4、将步骤3中反应后的溶液进行磁分离，收集磁珠；每个反应管中加入300μl清洗液清洗磁珠，重复3-5次，去除清洗液；
5、每个反应管中加入100μl底物溶液，混匀后检测发光值。
6、使用标准品的浓度以及发光值绘制标注曲线；
7、将待测样本的发光值代入标准曲线得到待测样品中的CK-MB的含量。
本实施例中提供的CK-MB检测方法同样适用于抗凝静脉全血、血清或血浆的CK-MB检测。
实施例8
本实施例提供利用实施例6中提供的CK-MB检测试剂盒测定全血中CK-MB的步骤，取手指末梢全血作为待测样本：
1、向三个反应管中分别加10μl的CK-MB校准品、CK-MB质控品和待测样本；
2、每个反应管中加入25μl的预处理液混匀；
3、每个试管中加入50μl酶结合物工作液和50μl磁珠工作液后混匀；37℃反应10min；
4、将步骤3中反应后的溶液进行磁分离，收集磁珠；每个反应管中加入300μl清洗液清洗磁珠，重复3-5次，去除清洗液；
5、每个反应管中加入100μl底物溶液，混匀后检测发光值。
6、使用标准品的浓度以及发光值绘制标注曲线；
7、将待测样本的发光值代入标准曲线得到待测样品中的CK-MB的含量。
本实施例中提供的CK-MB检测方法同样适用于抗凝静脉全血、血清或血浆的CK-MB检测。
实验例1线性验证
取具有溯源性的标准品或质控品，浓度尽量高，用生理盐水对样本进行稀释，每点测定3次，取平均值，结果与预期浓度作回归直线，计算得到回归系数r＞0.99，说明本发明提供的试剂盒的稀释线性好。
实验例2精密度验证
取具有溯源性的血清高值质控品、低值质控品各一份，对每份质控品进行10次检测，将共10次检测结果计算平均值、标准值。根据变异系数CV＝(标准偏差/平均值)×100％，计算得到：CV1(10ng/mL)＝4％，CV2(50ng/mL)＝4％。由此可知，本发明提供的试剂盒具有较高的精密度。
实验例3准确度验证
取具有溯源性的血清高值质控品、低值质控品各一份，用本发明的试剂盒分别进行检测，各检测5次，计算平均值，后与质控品靶值进行对照。结果显示，本发明的试剂盒检测值与靶值接近，说明本发明提供的试剂盒具有较高的准确度。
实验例4灵敏度验证
取具有溯源性的质控品稀释至检测范围下限(1ng/mL)附近进行测定，重复测定3次，计算平均值，后与质控品靶值进行对照。结果显示，本发明的试剂盒检测值与靶值接近，说明本发明提供的试剂盒具有较高的灵敏度。
实验例5检测范围验证
取具有溯源性的标准品，稀释不同的倍数后分别检测是否有发光现象，结果显示，在浓度为1-300ng/ml的范围内，均有发光现象，表明本发明的试剂盒检测范围为1-300ng/ml。
实验例6相关性验证
取200份血清样本，比较本发明的试剂盒与贝克曼公司的CK-MB检测试剂盒检测结果的相关性，结果如图1所示。其中：横坐标为贝克曼公司试剂盒的检测结果，纵坐标为本发明试剂盒的检测结果，相关系数R2＝0.9750，由图1可知，本发明样本检测结果与本行业知名公司产品检测结果相比，结果无明显差异。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种CK-MB检测试剂盒，其特征在于，包括：校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述咪唑的浓度为0.4~1.3mM，所述酶结合物工作液中含有酶标记的CK-MB抗体，所述磁珠结合物工作液中含有CK-MB抗体标记的磁珠；所述酶标记的CK-MB抗体的浓度为0.5~0.8μg/ml，所述CK-MB抗体标记的磁珠的浓度为0.3~0.5mg/ml；
所述预处理液还包括：25~100mM的Tris、150mM的NaCl、1~5%的蔗糖、1~5%的甘油、0.1%的BSA、0.05~0.2%的Tween-20和0.05~0.2% 的Proclin-300，所述预处理液的pH为7.0~7.5；
所述酶结合物工作液还包括：20~50mM的MES、150~300mM的NaCl、1%的BSA、5%的蔗糖、5%的甘油、0.1%的Tween-20、0.02~5mM的ZnCl2、0.02~5mM的MgCl2和0.05~0.2%的Proclin300，所述酶结合物工作液的pH为6.0~6.5；
所述磁珠结合物工作液还包括：20~50mM的MOPS, 150~300mM的NaCl、1%的BSA、1%的蔗糖、1%的明胶、0.1%的Tween-20、1%的PVP360和0.05~0.2%的Proclin300，所述磁珠结合物工作液的pH为7.0~8.0。
2.根据权利要求1所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述清洗液是含有SBS、Tween-20和Proclin-300的Tris缓冲液，所述底物溶液是酶促化学发光底物溶液，所述校准品是用校准品稀释液配制的CK-MB的HEPES缓冲液。
3.根据权利要求1项所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，还包括：质控品，所述质控品是用校准品稀释液配制的CK-MB的HEPES缓冲液。
4.根据权利要求1-3任一项所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为3μm。
5.根据权利要求2或3所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述校准品稀释液包括：20~50mM的HEPES、150~300mM的NaCI、1%的牛血清、0.5~5mM的Proclin-300和1%的甘露醇，所述校准品稀释液的pH为6.5~7.5。
6.根据权利要求1-3任一项所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记的CK-MB抗体为碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体。
7.根据权利要求6所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体通过以下方法制备：
A．活化CK-MB抗体
1向CK-MB抗体中加入pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液，至抗体的终浓度为2~5mg/ml；
2向步骤1中的抗体溶液中加入1.376mg/ml的Traut¢s溶液，混匀，室温静置反应；其中，Traut¢s溶液是将Traut¢s试剂溶于pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液配制而成，抗体与Traut¢s试剂加入的摩尔比为1：（15~30）；
3继续加入1M的甘氨酸溶液，混匀，室温静置反应；其中，甘氨酸与Traut¢s试剂加入的摩尔比为（10~20）:1;
4将步骤3中得到的抗体溶液脱盐，置换到pH8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中；
B. 活化碱性磷酸酶
5向碱性磷酸酶溶液中加入17.5mg/mL的Sulfo-SMCC溶液，混匀，室温下静置；其中，Sulfo-SMCC溶液是将Sulfo-SMCC试剂加入到二甲基甲酰胺中配制而成，Sulfo-SMCC试剂与碱性磷酸酶加入的摩尔比为（10~15）：1；
6继续加入1M的甘氨酸溶液，混匀，室温下静置反应；其中，甘氨酸与Sulfo-SMCC试剂加入量的摩尔比为（10~20）：1；
7将反应后的碱性磷酸酶溶液脱盐，置换到pH 8.5、100mM的三乙醇胺缓冲液中；
C．将步骤A中活化的CK-MB抗体溶液和步骤B中活化的碱性磷酸酶溶液混合均匀，2~8℃温度下静置反应18~24h；其中，CK-MB抗体与碱性磷酸酶加入的摩尔比为1：2；
D．向步骤C中反应后的溶液中加入12.5mg/ml的N-乙基顺丁烯二酰亚胺溶液，混匀，室温下静置反应，纯化反应后溶液，得到碱性磷酸酶标记的CK-MB抗体。
8.根据权利要求1-3任一项所述的CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述CK-MB抗体标记的磁珠通过以下方法制备：
E．向CK-MB抗体中加入pH5.0、100mM的MES缓冲液，至抗体溶液的浓度为1~5mg/ml；
F．活化磁珠
1）将100mg/ml的磁珠溶液置于磁架上静置，磁分离弃上清液；其中，磁珠溶液与CK-MB抗体的质量比为100：1；
2）用pH5.0、100mM的MES缓冲液溶解步骤1）中得到的磁珠，磁分离弃上清；
3）将步骤2）中得到的磁珠溶解于100mM的MES缓冲液，继续加入0.23倍磁珠重量的10mg/ml的NHS溶液和0.1倍磁珠重量的10mg/ml的EDC溶液，室温下振荡反应；其中，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0、100mM的MES缓冲液中得到，EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0、100mM的MES缓冲液中得到；
4）将步骤3）中反应后的磁珠溶液磁分离弃上清，然后溶于100mM 的MES缓冲液；
G．将步骤E中得到的CK-MB抗体溶液与步骤F中活化的磁珠溶液混合，室温下交联反应16~24h，然后磁分离弃上清，继续加入磁珠封闭液CE210，混匀后室温反应16~24小时；
H．将步骤G中得到的磁珠溶液磁分离后弃上清，然后清洗磁珠，得到CK-MB抗体标记的磁珠。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109444410A (zh) * 2018-10-26 2019-03-08 成都普利泰生物科技有限公司 一种兽用狂犬病毒中和抗体化学发光检测试剂盒
CN109613242A (zh) * 2018-11-01 2019-04-12 深圳天辰医疗科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法
CN110108531B (zh) * 2019-05-14 2022-02-11 深圳天深医疗器械有限公司 一种排除医学检测中血细胞干扰的方法
CN111057746B (zh) * 2020-01-03 2023-10-27 浙江夸克生物科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
CN112014555B (zh) * 2020-08-31 2023-08-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2609931Y (zh) * 2003-04-05 2004-04-07 肖长锦 一种磁性细胞分离器

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5242832A (en) * 1990-03-01 1993-09-07 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood
CN1945331B (zh) * 2006-10-20 2011-06-08 邹明强 同步检测多种小分子化合物的试剂的制备及其使用方法
CN102435738A (zh) * 2011-08-31 2012-05-02 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 肌酸激酶同工酶(ck-mb)定量测定试剂盒及其检测方法
CN102901812A (zh) * 2012-11-13 2013-01-30 江阴泽成生物技术有限公司 一种人甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
CN103048453B (zh) * 2012-12-18 2014-11-26 苏州浩欧博生物医药有限公司 一种糖类抗原ca19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法
CN103278623B (zh) * 2013-06-14 2015-09-23 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种肌酸激酶同功酶纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN104357544A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN105203748A (zh) * 2015-09-28 2015-12-30 成都博奥新景医学科技有限公司 一种全量程c反应蛋白的定量检测试剂盒
CN105403693B (zh) * 2015-10-27 2018-07-10 北京九强生物技术股份有限公司 一种磁微粒化学发光试剂的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2609931Y (zh) * 2003-04-05 2004-04-07 肖长锦 一种磁性细胞分离器

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
家兔钙调节蛋白-红细胞膜的制备;陈恩鸿 等;《生物化学杂志》;19870430;第3卷(第2期);第159-163页 *

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