CN107922425B

CN107922425B - 制备parp抑制剂、结晶形式的方法及其用途

Info

Publication number: CN107922425B
Application number: CN201680048637.5A
Authority: CN
Inventors: 王鹤翔; 周昌友; 任博; 匡先照
Original assignee: Beigene Ltd
Current assignee: Baiji Shenzhou (Suzhou) Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2015-08-25
Filing date: 2016-08-22
Publication date: 2021-06-01
Anticipated expiration: 2036-08-22
Also published as: BR112018003634B1; JP2018528199A; US20190177325A1; EP3341375A1; EP3341375A4; BR112018003634A2; TW201718586A; BR112018003634A8; ZA201800765B; EA037366B1; EP3341375B1; WO2017032289A1; IL257442B2; IL257442B; CA2994895A1; JP6940039B2; EA201890547A1; MX2018002322A; KR20180041748A; TWI736550B

Abstract

本发明涉及制备Parp1/2抑制剂，即(R)‑2‑氟‑10a‑甲基‑7，8，9，10，10a，11‑六氢‑5，6，7a，11‑四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴‑4(5H)‑酮(在下文中称为化合物A)的方法，化合物A或其水合物或溶剂化物的结晶形式(多晶型物)，尤其是化合物A倍半水合物的结晶形式C，制备所述结晶形式的方法及其用途。

Description

制备PARP抑制剂、结晶形式的方法及其用途

技术领域

本发明涉及制备Parpl/2抑制剂，即(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(在下文中称为化合物A)的方法，化合物A或其水合物或溶剂化物的结晶形式(多晶型物)，尤其是化合物A倍半水合物的结晶形式C，制备所述结晶形式的方法及其用途。

背景技术

癌症的特点和驱动力之一是遗传不稳定性[Hanahan D and Weinberg R A，Hallmarks of cancer：the next generation.Cell，2011.144(5)：p.646-74.]。特别是在家族性癌症中，乳腺癌易感性BRCA1和BRCA2肿瘤抑制基因中的突变(同源重组(HR)中的关键因素)已与发展乳腺癌或卵巢癌的风险增加相关[Li X and Heyer W D，Homologousrecombination in DNA repair and DNA damage tolerance.Cell Res，2008.18(1)：p.99-113.]。正是在该患者群体中多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂最近获得关注。PARP家族成员PARP1和PARP2在DNA复制、转录调控和DNA损伤修复中发挥着重要作用[Rouleau M，Patel A，Hendzel M J，et al.，PARP inhibition：PARP1and beyond.Nat RevCancer，2010.10(4)：p.293-301.]。在2005年，两篇突破性的《自然》杂志(Nature)文章表明单独给予的PARP抑制剂可杀死癌细胞，所述癌细胞具有先前存在的DNA修复缺陷，特别是BRCA1/2基因的突变[Bryant H E，Schultz N，Thomas H D，et al.，Specific killing ofBRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose)polymerase.Nature，2005.434(7035)：p.913-7；Farmer H，McCabe N，Lord C J，et al.，Targeting the DNArepair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy.Nature，2005.434(7035)：p.917-21]。

PARP抑制和突变的BRCA在临床前模型中综合起来是致命的，表明这是一种简洁的、具有靶向性且毒性最小的治疗患者的方式。

近几年临床中对PARP抑制剂的测试以指数方式增长。这些临床试验以使用PARP抑制剂作为单一药物或与另一种DNA损伤剂的组合作为起始来治疗遗传性肿瘤，并且现已转而用于治疗多种不同类型的散发性肿瘤。当发现奥拉帕尼(olaparib)(AZD2281，KU0059436；AstraZeneca/KuDOS)在患有BRCA-缺陷性乳腺癌、卵巢癌和***癌的患者中具有活性时，再次对有关PARP抑制剂产生了最初的兴奋[Fong P C，Boss D S，Yap TA，etal.，Inhibition of poly(ADP-ribose)polymerase in tumors from BRCA mutationcarriers.N Engl J Med，2009.361(2)：p.123-34.]。在这些特定患者中具有最小的不良事件(AE)并且BRCA携带者中AE的频率相比于非携带者没有增加。随后在卵巢癌和乳腺癌患者中的概念验证性(proof-of-concept)II期试验证实了该组BRCA突变的癌症患者中奥拉帕尼的响应以及低的副作用特征[Audeh M W，Carmichael J，Penson R T，et al.，Oral poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor olaparib in patients with BRCA1 orBRCA2mutations and recurrent ovarian cancer：a proof-of-concept trial.Lancet，2010.376(9737)：p.245-51；Tutt A，Robson M，Garber JE，et al.，Oral poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor olaparib in patients with BRCA1or BRCA2mutationsand advanced breast cancer：a proof-of-concept trial.Lancet，2010.376(9737)：p.235-44.]。

令人感兴趣的是，携带BRCA1/2突变的卵巢癌患者对PARP抑制剂的响应与其对先前铂疗法的敏感性相关[Fong PC，Yap T A，Boss D S，et al.，Poly(ADP)-ribosepolymerase inhibition：frequent durable responses in BRCA carrier ovariancancer correlating with platinum-free interval.J Clin Oncol，2010.28(15)：p.2512-9.]。与铂敏感性的类似相关也见于不具有BRCA突变的高度严重性卵巢癌患者中[Gelmon K A，Tischkowitz M，Mackay H，etal.，Olaparib in patients with recurrenthigh-grade serous or poorly differentiated ovarian carcinoma or triple-negative breast cancer：a phase 2，multicentre，open-label，non-randomisedstudy.Lancet Oncol，2011.12(9)：p.852-61.]。另一项II期临床研究已表明奥拉帕尼作为维持疗法在对铂敏感的患有复发的高度严重性卵巢癌患者中是有益的[Ledermann J，Harter P，Gourley C，et al.，Olaparib maintenance therapy in platinum-sensitiverelapsed ovarian cancer.N Engl J Med，2012.366(15)：p.1382-92.]。基于这些数据，针对奥拉帕尼在乳腺癌和卵巢癌患者中的III期注册试验已经启动。

在最近的II期研究中，当在一线治疗后进展的患有复发及转移性胃癌患者中与紫杉醇(paclitaxel)联合给予时，奥拉帕尼展示了良好的临床活性[Bang Y-J，Im S-A，LeeK-W，et al.，Olaparib plus paclitaxel in patients with recurrent or metastaticgastric cancer：A randomized，double-blind phase II study.J Clin Oncol，2013.31(suppl；abstr 4013).]。符合条件的患者通过其共济失调-毛细血管扩张症突变(ATM)状态进行分组(stratify)。与紫杉醇单一药物相比，紫杉醇/奥拉帕尼组合延长了患者的总体存活期(OS)，尤其是在ATM低的亚组中。ATM是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其在DNA损伤诱导的信号传导和对DNA损伤剂诸如电离放射响应的细胞周期检查点的启动中发挥着关键作用[Stracker TH，Roig I，Knobel P A，et al.，The ATM signaling network indevelopment and disease.Front Genet，2013.4：p.37.]。

在2014年12月19日，美国食品药品监督管理局(U.S.Food and DrugAdministration)批准了奥拉帕尼胶囊(Lynparza，AstraZeneca Pharmaceuticals LP)作为用于治疗具有有害或疑似有害的种系BRCA突变的(gBRCAm)(如通过FDA批准的测试所检测)晚期卵巢癌的患者的单一疗法，所述患者已经用三种或更多种在先行列的化学疗法治疗。与该举动同时的是，FDA批准了BRACAnalysis CDx(Myriad Genetics)用于BRCA1和BRCA2基因中变异体的定量检测和分类。

临床上还有几种其它研究中的PARP抑制剂，包括维利帕尼(veliparib)(ABT-888；Abbott Laboratories)、瑞卡帕布(rucaparib)(AG014669；Clovis)、尼拉帕尼(niraparib)(MK-4827；Tesaro)、BMN-673(Biomarin)、CEP-9722(Cephalon)和E7016(Eisai)。所有这些PARP抑制剂在其效能、选择性和DNA捕获活性方面是不同的。最近的报道表明通过PARP-抑制剂复合物的DNA捕获是PARP抑制剂经其在细胞中诱导细胞毒性的主要机制之一[MuraiJ，Huang S Y，Das B B，et al.，Trapping of PARPl and PARP2by Clinical PARPInhibitors.Cancer Res，2012.72(21)：p.5588-99.]。维利帕尼是有效的PARP1/2抑制剂，但在BRCA突变细胞中具有弱的DNA捕获活性和细胞毒性。大部分其临床进展均已聚焦于与化学治疗剂的组合。最近，II期试验显示向标准新辅助化学疗法(neoadjuvantchemotherapy)中添加维利帕尼与卡铂(carboplatin)的组合改善了患有三阴性乳腺癌的妇女的结果[Rugo H，Olopade O，DeMichele A，et al.，Veliparib/carboplatin plusstandard neoadjuvant therapy for high-risk breast cancer：First efficacyresults from the I-SPY 2TRIAL.2013.Abstract S5-02.]。对于瑞卡帕布、尼拉帕尼和BMN-673，单一疗法在BRCA突变癌症患者中已展示出良好的临床活性[Shapiro G，Kristeleit R，Middleton M，et al.，Pharmacokinetics of orally administeredrucaparib in patients with advanced solid tumors.Mol Cancer Ther，2013.12(11Suppl)：Abstract nr A218；Michie C O，Sandhu S K，Schelman W R，et al.，Finalresults of the phase I trial of niraparib(MK4827)，a poly(ADP)ribosepolymerase (PARP)inhibitor incorporating proof of concept biomarker studiesand expansion cohorts involving BRCA 1/2mutation carriers，sporadic ovarian，and castration resistant prostate cancer(CRPC).J Clin Oncol，2013.31(suppl；abstr 2513)；Bono J S D，Mina LA，Gonzalez M，et al.，First-in-human trial ofnovel oral PARP inhibitor BMN 673in patients with solid tumors.J Clin Oncol，2013.31(suppl；abstr 2580)]。

目前在具有BRCA突变或铂敏感性疾病的乳腺癌和/或卵巢癌患者中进行针对这些PARP抑制剂的III期临床试验。

(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(或“化合物A”)为高选择性PARP1/2抑制剂。化合物A有效地抑制细胞内PARP活性并特异性抑制具有BRCA1/2突变或其它HR缺陷的细胞系的增殖。化合物A在比奥拉帕尼低的多的剂量下显著诱导BRCA1突变乳腺癌异种移植物模型中的肿瘤消退。化合物A具有卓越的DMPK性质和显著的脑渗透性。

临床前生化研究、基于细胞的研究和动物研究中产生的数据表明化合物A可在抑制具有BRCA基因突变或同源性重组缺陷的肿瘤中提供显著的患者益处。化合物A具有良好脑渗透性且可在更多适应症诸如成胶质细胞瘤中显示出活性。这些独特的特征使得有必要在临床研究中进一步评价化合物A。

游离碱，即(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(或“化合物A”)已被披露为高选择性且有效的Parp1/2抑制剂，参见WO 2013/097225 A1，通过引用的方式将其并入本申请。

化合物A为具有一个季碳手性中心的多环稠合的复杂分子。呈游离碱形式的化合物A最初通过“手性池(chiral pool)”方法获得，该方法非常低效且难以放大(scale-up)，因为针对中间体和终产物的纯化需要多个色谱柱。此外，由于在制造过程中发生部分消旋化(虽然潜在的原因仍不确定)，因此以此种方式制备的化合物具有不令人满意的光学纯度。因此，非常需要一种适于大规模制备化合物A(尤其是其结晶形式)且具有用于制剂开发的重复性和良好品质的方法。

发明内容

本申请的公开内容解决了上述挑战和需要。

在第一方面，本申请提供了大规模制备呈游离碱形式的化合物A的方法，其避免了使用针对纯化中间体和终产物的多个色谱柱且因此具有成本效益和商业益处。

在第二方面，本申请提供了化合物A或其水合物或其溶剂化物的结晶形式，其具有适于药物制剂的优异的物理性质且可以高质量和良好的可再现性进行商业大规模制备。

发明人预料不到且令人惊讶地发现化合物A的游离碱可形成呈结晶形式的水合物和/或溶剂化物，特别是呈结晶形式的倍半水合物。具体地，令人惊讶地发现化合物A游离碱水合物/溶剂化物可以多种结晶形式(多晶型物)存在，其在本申请中称为结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L。化合物A游离碱及其水合物/溶剂化物的结晶形式，特别是结晶形式C，相比于所筛选的其它盐而言具有优异的性质，诸如优良的化学稳定性，特别是长期化学/物理稳定性，这使其成为制剂和临床应用的合适API候选物。结晶形式C(即化合物A倍半水合物)在水中具有低溶解度(约0.04mg/mL)。所述在水中的低溶解度简化了大规模制备API的方法，因为API的重结晶和浆化可在水/醇溶液中完成。相当令人惊讶的是，其在低pH水性介质诸如模拟胃液(SGF，例如，约4.5mg/mL，pH＝1.2)中的溶解度使得在胃中的快速溶出成为可能且可在动物和人中获得良好的药物吸收。在水中的低溶解度和高结晶稳定性还使得化合物A倍半水合物结晶形式C特别适于药品生产中的湿法制粒和包衣方法。

因此，在一个方面，本发明提供了式I的化合物，其为化合物A的水合物/溶剂化物：

其中n为约0.0至约2.0的数字；m为约0.0至约20.0的数字；且其中所述溶剂为异丙醇、乙醇、甲醇、丙酮、THF、1，4-二噁烷、乙酸、乙腈、水或它们的组合。

在另一实施方案中，本发明提供了式Ⅱ的化合物，其为化合物A的水合物：

其中n为约0.0至约2.0的数字。

在另一优选的实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式。

在另一优选的实施方案中，n为约1.5，且所述化合物为式III的(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的结晶倍半水合物：

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式A，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：6.3±0.2°、8.5±0.2°、8.6±0.2°、9.9±0.2°、10.4±0.2°、11.0±0.2°、11.1±0.2°、12.6±0.2°、12.8±0.2°、14.7±0.2°、18.0±0.2°、18.1±0.2°、20.1±0.2°、21.4±0.2°、22.2±0.2°、24.6±0.2°、25.7±0.2°和30.0±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式B，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个或更多个衍射峰：6.3±0.2°、8.7±0.2°、11.1±0.2°、12.6±0.2°、14.5±0.2°、14.8±0.2°、15.2±0.2°、18.0±0.2°、23.9±0.2°、25.3±0.2°和25.8±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式C，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：5.3±0.2°、6.3±0.2°、6.5±0.2°、6.9±0.2°、8.7±0.2°、10.6±0.2°、11.1±0.2°、11.6±0.2°、12.6±0.2°、13.1±0.2°、13.7±0.2°、14.4±0.2°、14.8±0.2°、15.1±0.2°、15.9±0.2°、16.2±0.2°、17.3±0.2°、18.0±0.2°、18.7±0.2°、19.0±0.2°、19.4±0.2°、20.2±0.2°、20.6±0.2°、21.0±0.2°、2±0.2°、21.5±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.4±0.2°、23.8±0.2°、24.3±0.2°、24.7±0.2°、25.3±0.2°、25.7±0.2°、26.1±0.2°、26.4±0.2°、27.4±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式C*，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：6.1±0.2°、6.3±0.2°、6.9±0.2°、8.5±0.2°、11.1±0.2°、11.6±0.2°、13.2±0.2°、14.5±0.2°、15.2±0.2°、16.3±0.2°、18.1±0.2°、20.3±0.2°、22.3±0.2°、24.8±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°和27.7±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式D，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：5.7±0.2°、6.4±0.2°、6.8±0.2°、9.3±0.2°、9.8±0.2°、10.3±0.2°、11.5±0.2°、12.4±0.2°、12.9±0.2°、13.4±0.2，13.9±0.2°、17.8±0.2°、18.3±0.2°、18.8±0.2°、18.9±0.2°、23.7±0.2°、25.0±0.2°、25.7±0.2°、25.9±0.2°和26.7±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式E，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：6.2±0.2°、8.6±0.2°、9.5±0.2°、11.0±0.2°、11.5±0.2°、12.0±0.2°、12.5±0.2°、13.4±0.2°、13.8±0.2°、14.4±0.2°、14.7±0.2°、15.1±0.2°、15.3±0.2°、16.2±0.2°、16.9±0.2°、17.9±0.2°、18.3±0.2°、19.0±0.2°、19.5±0.2°、20.1±0.2°、21.3±0.2°、22.2±0.2°、22.9±0.2°、23.3±0.2°、24.2±0.2°、24.6±0.2°、25.1±0.2°、25.7±0.2°、26.3±0.2°、27.0±0.2°、27.4±0.2°和30.9±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式F，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：5.2±0.2°、6.3±0.2°、7.7±0.2°、9.7±0.2°、10.4±0.2°、11.8±0.2°、13.7±0.2°、15.6±0.2°、17.5±0.2°、18.0±0.2°、19.5±0.2°、20.2±0.2°、21.7±0.2°、23.1±0.2°、24.7±0.2°、25.3±0.2°和27.3±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式G，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个或更多个衍射峰：6.3±0.2°、8.6±0.2°、9.6±0.2°、10.3±0.2°、1 1.0±0.2°、12.6±0.2°、17.5±0.2°和25.4±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式H，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：9.5±0.2°、12.0±0.2°、13.5±0.2°、15.4±0.2°、17.0±0.2°、19.0±0.2°、23.0±0.2°、24.2±0.2°、27.0±0.2°、27.4±0.2°、31.0±0.2°、34.7±0.2°和34.8±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式I，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：9.8±0.2°、10.0±0.2°、11.1±0.2°、11.7±0.2°、12.9±0.2°、13.3±0.2°、13.9±0.2°、14.4±0.2°、17.1±0.2°、17.4±0.2°、17.6±0.2°、17.9±0.2°、18.4±0.2°、18.5±0.2°、19.4±0.2°、20.8±0.2°、21.9±0.2°、23.7±0.2°、26.4±0.2°、26.9±0.2°和29.4±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式J，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：6.4±0.2°、8.7±0.2°、9.9±0.2°、10.3±0.2°、11.7±0.2°、12.8±0.2°、13.9±0.2°、18.1±0.2°、19.3±0.2°、23.0±0.2°、23.8±0.2°和25.8±0.2°。

在另一实施方案中，式Ⅱ的化合物呈结晶形式K，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个、五个、六个、七个或更多个衍射峰：6.4±0.2°、10.8±0.2°、12.6±0.2°、12.8±0.2°、19.2±0.2°、25.2±0.2°、25.8±0.2°、32.4±0.2°和34.1±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式L，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的三个、四个或更多个衍射峰：6.8±0.2°、17.8±0.2°、20.6±0.2°、23.4±0.2°和27.6±0.2°。

在另一实施方案中，式II的化合物呈结晶形式，其基本上特征在于如选自以下的粉末X射线衍射图：图5、6、7A、7B、8、9、10、11、12、13、14、15和16。

在另一方面，本发明提供了制备式III的化合物A倍半水合物的结晶形式的方法，其包括以下步骤中的任一项：

(a)使(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的游离碱溶于溶剂或溶剂混合物中以形成溶液或混悬液；并使(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物以目标结晶形式析出；

(b)使(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物溶于或混悬于溶剂或溶剂混合物中；并使(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮溶剂化物/水合物以目标结晶形式析出；

(c)储存结晶(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮水合物/溶剂化物达较长的一段时间以获得目标结晶形式；

(d)加热结晶(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮水合物/溶剂化物至某一高温，并冷却所述水合物以获得目标结晶形式；和

(e)使结晶(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮水合物/溶剂化物暴露于溶剂的蒸气以获得目标结晶形式。

在该方面的一个实施方案中，化合物A的游离碱任选地与拆分剂(诸如手性酸，例如，(±)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸)于适当溶剂(诸如，醇，进一步诸如异丙醇)中在碱(alkaline)存在下反应，然后进行步骤(a)。

在该方面的一个实施方案中，步骤(a)或(b)还包括独立选自以下的一个或多个步骤：加热、过滤除去不溶性杂质、蒸馏溶剂、添加反萃溶剂或溶剂混合物、添加晶种、添加一种或多种析晶诱导剂、冷却、析晶和过滤收集结晶产物。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(a)或(b)中，所述溶剂或溶剂混合物选自水、低级烷基醇、酮、醚、酯、低级脂族羧酸、低级脂族腈、任选卤代的芳香溶剂以及它们的组合。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(a)或(b)中，所述溶剂为异丙醇、乙醇、甲醇、丙酮、THF、1，4-二噁烷、乙酸、乙腈、水或它们的组合。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(a)中，所述溶剂为水与以下中任一种的混合物：异丙醇、乙醇、甲醇、丙酮、THF、1，4-二噁烷、乙酸或乙腈。在该方面的另一实施方案中，在步骤(a)中，所述溶剂为水与异丙醇的混合物。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(a)中，所述游离碱为经分离且纯化的游离碱、经分离但未纯化的游离碱或含有游离碱的粗反应产物。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(c)中，所述较长的一段时间为至少三天、至少一周或至少两周。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(d)中，所述高温为至少40℃、至少60℃、至少80℃或至少100℃，但低于所述倍半水合物的分解温度。

在该方面的另一实施方案中，在步骤(e)中，所述蒸气为乙酸的蒸气。

在该方面的另一实施方案中，所述方法选自：

1)步骤(a)或(b)，其使用异丙醇-水(v/v＝20/40)作为溶剂以产生结晶形式C**；

2)步骤(a)或(b)，其使用MTBE作为溶剂以产生结晶形式B；

3)步骤(a)或(b)，其使用i-PrOH/H₂O作为溶剂以产生结晶形式C或C*；

4)步骤(c)，其将甲苯加至HOAc中作为溶剂以产生结晶形式D；

5)步骤(d)，其使结晶形式A与DMA蒸气相互作用以产生结晶形式E；

6)步骤(e)，其使结晶形式A与乙酸蒸气相互作用以产生结晶形式F；

7)步骤(d)，其使结晶形式A(De/ad)在DVS中吸附以产生结晶形式G；

8)步骤(d)，其加热结晶形式E至80℃以产生结晶形式H；

9)步骤(d)，其加热结晶形式E至150℃以产生结晶形式I；

10)步骤(d)，其加热结晶形式A至150℃以产生结晶形式J；

11)步骤(e)，其使结晶形式A与MeOH蒸气相互作用以产生结晶形式K；

12)步骤(d)，其加热结晶形式K至150℃以产生结晶形式L。

在一些实施方案中，本发明提供了制备结晶形式C(即，化合物A倍半水合物)的方法，包括在低于回流温度的温度混合，例如在约80℃使化合物A在i-PrOH和H₂O的混合溶剂中混合；或在低于回流温度的温度混合，例如在约70℃使化合物A在i-PrOH和H₂O的混合溶剂中混合；或在低于回流温度的温度混合，例如在约50℃使化合物A在i-PrOH和H₂O的混合溶剂中混合，其中按照i-PrOH和水的总体积计，i-PrOH的量大于40vo1％，优选60vol％，且更优选90vol％。在某些优选的实施方案中，用i-PrOH替代上面提及的混合溶剂。在其它实施方案中，所述方法还包括在冷却至室温后将晶种添加至所得混合物中，然后使所述混合物静置一段时间，诸如12小时、24小时、2天、3天或4天或1周、2周。

本发明的另一目的是提供用于制备式I、式Ⅱ和式III的化合物(化合物A倍半水合物-结晶形式C)的可调整的合成方法。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含根据本申请所述的任一实施方案的式I或式Ⅱ或式III的化合物和药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，所述药物组合物适于口服给药。

在另一实施方案中，所述药物组合物呈片剂或胶囊的形式。

在另一实施方案中，所述片剂或胶囊的单位剂量为1-160mg。

在另一实施方案中，药物组合物中化合物的重量百分比为1-99％。

在另一方面，本发明提供了治疗或预防患者的疾病或病症的方法，包括对所述患者给予治疗有效量的根据本申请所述的任一实施方案的式I或式Ⅱ或式III的化合物或包含式I或式II或式III的化合物的药物组合物。

在一个实施方案中，所述疾病或病症为选自以下的癌症：脑癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、子***、淋巴瘤或甲状腺肿瘤以及它们的并发症。

在另一实施方案中，所述疾病选自BRCA1和BRCA2突变的乳腺癌、卵巢癌、胃癌以及它们的并发症。

在另一实施方案中，化合物的给药剂量为5-320mg/天，且给药频率为每日一至三次。

在另一实施方案中，化合物的给药剂量为5-240mg/天，且给药频率为每日一至三次。

在另一实施方案中，化合物的给药剂量为10-200mg/天，且给药频率为每日两次。

在另一实施方案中，所述化合物为(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮游离碱或其溶剂化物或水合物，其呈选自以下的结晶形式：结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L。

在另一方面，本发明提供了根据本申请所述的任一实施方案的式I或式II或式III的化合物在制备用于治疗与BRCA1和BRCA2突变体活性和HR-缺陷相关的疾病或病症的药物中的用途。

在优选的实施方案中，所述疾病为病症。

本发明的这些和其它方面将在参照以下附图、具体实施方式和权利要求而得到更好的理解。

附图简述

图1示出化合物A的绝对结构。

图2示出呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**的晶胞。

图3图示说明呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**的氢键。

图4示出呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**的模拟性和实验性XRPD图。

图5示出化合物A的结晶形式A(通过从异丙醇/水中重结晶获得)的X射线衍射图。

图6示出化合物A的结晶形式B的X射线衍射图。

图7A和7B分别示出化合物A倍半水合物的结晶形式C和C*的X射线衍射图，其中结晶形式C如实施例1所公开通过从异丙醇/水中重结晶以大规模制备，而结晶形式C*如实施例5所公开以实验室规模制备。

图8示出化合物A的结晶形式D的X射线衍射图。

图9示出化合物A的结晶形式E的X射线衍射图。

图10示出化合物A的结晶形式F的X射线衍射图。

图11示出化合物A的结晶形式G的X射线衍射图。

图12示出化合物A的结晶形式H的X射线衍射图。

图13示出化合物A的结晶形式I的X射线衍射图。

图14示出化合物A的结晶形式J的X射线衍射图。

图15示出化合物A的结晶形式K的X射线衍射图。

图16示出化合物A的结晶形式L的X射线衍射图。

图17示出化合物A倍半水合物的结晶形式C的¹H-NMR谱。

图18示出化合物A倍半水合物的结晶形式C的¹³C-NMR谱。

图19示出化合物A倍半水合物的结晶形式C的DVS谱。

图20示出化合物A倍半水合物的结晶形式C的TGA谱。

图21示出化合物A倍半水合物的结晶形式C的DSC谱。

具体实施方式

在一个方面，本发明提供了呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**。使用由通过在室温从IPA/水中蒸气扩散而生长得到的单晶所采集的一组衍射数据，确定化合物A倍半水合物的结晶形式C**的结构为单晶。结晶数据和结构精修列于表1。

表1：化合物A倍半水合物的结晶形式C**的单晶数据和结构精修

使用一组由经在室温从IPA/水蒸气扩散生长得到的单晶所采集的衍射数据，已成功确定了化合物A倍半水合物的结晶形式C**的晶体结构。化合物A的绝对结构展示于图1中。结果显示获得倍半水合物的单晶。确定了C4(R)的构型。呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**的晶胞示于图2中。呈单晶形式的化合物A倍半水合物的结晶形式C**的氢键示于图3中。经氢键N11--H11...N5，N7--H7...O4和N15--H15...O2形成锯齿链(zigzagchain)。这些锯齿链通过(N2--H2...O6，O6--H6A...N9，O9--H9A...N1和N6--H6...O9)之间的及在(O8--H8B...O5，N10--H10...O7，N14--H14...O8，O5--H5B...O1，O7--H7A...N8，O7--H7B...O5，O8--H8A...O3和O10--H10B...O3)之内的氢键连接，这些链形成三维结构。由单晶结构计算出的理论性XRPD图和实验性XRPD图非常相似且展示于图4中。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式A。如图5所示，结晶形式A的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图5中显示为“d-值”)：

表2.化合物A的结晶形式A的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.359372	13.89889	54.67
2	8.592671	10.29083	81.24
				3	8.670472	10.19866	100.00
4	9.929488	8.90817	28.96
				5	10.381550	8.52126	18.33
6	11.042290	8.01281	28.75
				7	11.115210	7.96041	34.55
8	12.609790	7.02005	22.56
				9	12.838980	6.89525	18.79
10	14.744730	6.00806	14.19
				11	17.988780	4.93123	10.67
12	18.140240	4.89039	11.11
				13	20.155290	4.40579	10.82
14	21.451250	4.14246	11.12
				15	22.269250	3.99211	19.66
16	24.645850	3.61228	10.46
				17	25.766010	3.45772	12.87
18	29.988540	2.97978	13.80

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式B。如图6所示，结晶形式B的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图6中显示为“d-值”)：

表3.化合物A的结晶形式B的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.330541	13.96213	32.91
2	8.699873	10.16426	100.00
				3	11.156260	7.93120	16.31
4	12.659450	6.99263	13.62
				5	14.509300	6.10501	21.95
6	14.791890	5.98900	19.27
				7	15.201870	5.82840	23.03
8	18.058410	4.91237	15.82
				9	23.928100	3.71898	14.21
10	25.307050	3.51938	21.93
				11	25.864130	3.44483	31.04

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A(倍半水合物)的结晶形式C，其通过实施例1公开的方法以大规模制备。如图7所示，结晶形式C的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图7中显示为“d-值”)：

表4.化合物A倍半水合物的结晶形式C的X射线衍射图

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A(倍半水合物)的结晶形式C*，其通过实施例5中公开的方法以实验室规模制备。亦如图7B所示，结晶形式C*的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图7中显示为“d-值”)：

表4*.化合物A倍半水合物的结晶形式C*的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.100802	14.48738	17.25
2	6.285063	14.06305	100.00
				3	6.880020	12.84822	9.77
4	8.516424	10.38279	36.51
				5	11.132140	7.94834	15.13
6	11.630460	7.60887	19.60
				7	13.218540	6.69810	14.93
8	14.514800	6.10271	41.64
				9	15.216960	5.82265	94.45
10	16.343840	5.42364	99.88
				11	18.086680	4.90476	55.30
12	20.278680	4.37926	52.30
				13	22.468730	3.95712	18.78
14	24.832200	3.58559	20.66
				15	26.060310	3.41934	22.92
16	26.570800	3.35479	13.74
				17	27.679950	3.22283	75.52

化合物A倍半水合物的结晶形式C是具有大约50微米平均粒度(D90)的相当稳定的结晶形式，其可容易地配制成供临床使用的药物产品。如图7A和7B所示，化合物A倍半水合物的结晶形式C和化合物A倍半水合物的结晶形式C*具有基本上相同的峰位置，而相对强度有所变化。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式D。如图8所示，结晶形式D的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图8中显示为“d-值”)：

表5.化合物A的结晶形式D的X射线衍射图

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式E。如图9所示，结晶形式E的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图9中显示为“d-值”)：

表6.化合物A的结晶形式E的X射线衍射图

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式F。如图10所示，结晶形式F的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图10中显示为“d-值”)：

表7.化合物A的结晶形式F的X射线衍射图

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式G。如图11所示，结晶形式G的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图11中显示为“d-值”)：

表8.化合物A的结晶形式G的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.267537	14.10234	100.00
2	8.582008	10.30359	86.00
				3	9.618750	9.19524	44.68
4	10.275970	8.60857	24.39
				5	11.017290	8.03093	18.64
6	12.610230	7.01981	32.77
				7	17.527530	5.05994	10.07
8	25.417370	3.50435	12.46

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式H。如图12所示，结晶形式H的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图12中显示为“d-值”)：

表9.化合物A的结晶形式H的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	9.512062	9.29813	98.78
2	12.004320	7.37274	26.49
				3	13.541340	6.53915	20.04
4	15.365480	5.76670	95.81
				5	16.968260	5.22543	10.51
6	19.012000	4.66808	100.00
				7	22.960770	3.87342	28.45
8	24.196220	3.67838	12.53
				9	27.019090	3.30014	15.33
10	27.407580	3.25424	14.82
				11	30.987400	2.88597	54.55
12	34.747080	2.57970	37.66
				13	34.847130	2.57892	18.31

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式I。如图13所示，结晶形式I的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图13中显示为“d-值”)：

表10.化合物A的结晶形式I的X射线衍射图

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式J。如图14所示，结晶形式J的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图14中显示为“d-值”)：

表11.化合物A的结晶形式J的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.373412	13.86831	100.00
2	8.683933	10.18288	16.83
				3	9.870480	8.96129	81.21
4	10.319060	8.57272	40.38
				5	11.745780	7.53443	10.78
6	12.798320	6.91706	46.90
				7	13.897120	6.37253	11.41
8	18.084060	4.90546	22.40
				9	19.296010	4.60001	14.07
10	22.983790	3.86960	15.54
				11	23.764680	3.74418	20.79
12	25.777610	3.45619	18.26

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式K。如图15所示，结晶形式K的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图15中显示为“d-值”)：

表12.化合物A的结晶形式K的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.366743	13.88282	100.00
2	10.801500	8.19088	2.32
				3	12.610210	7.01982	1.71
4	12.776830	6.92865	1.31
				5	19.240180	4.61323	6.52
6	25.187350	3.53583	1.06
				7	25.764490	3.45792	3.92
8	32.368130	2.76595	1.14
				9	34.142730	2.62614	1.17

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的结晶形式L。如图16所示，结晶形式L的X射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图16中显示为“d-值”)：

表13.化合物A的结晶形式L的X射线衍射图

峰#	衍射角(2θ)	间距	相对强度
				1	6.782871	13.03202	100.00
2	17.785330	4.98718	11.49
				3	20.563890	4.31916	3.06
4	23.424800	3.79773	10.86
				5	27.554460	3.23722	5.78

对于如上所述的结晶形式A、B、C、C*、D、F、G、H、I、J、K和L，仅总结了主峰(即最具有特征性的、显著的、独特的和/或可重现的峰)；其它峰可经常规方法由衍射谱图获得。如上所述的主峰可在误差界限(在最后给出的小数位+或-2，或在指定值+或-0.2)内重现。

基于TGA中的重量损失(wt％)，化合物A的结晶形式A、B、C、C*、D、F、G、H、I、J、K和L被推测为无水物、水合物和溶剂化物：

表14晶型的表征总结

结晶形式	TGA中的重量损失(wt％)	推测的形式
			形式A	4.7	水合物
形式B	6.0	溶剂化物/水合物
			形式C	8.6	水合物
形式C*	8.9	水合物
			形式D	34.5	溶剂化物/水合物
形式E	38.3	溶剂化物/水合物
			形式F	34.5	溶剂化物/水合物
形式G	6.5	水合物
			形式H	24.8	溶剂化物/水合物
形式I	1.8	无水物
			形式J	1.1	无水物
形式K	12.8	溶剂化物/水合物
			形式L	1.8	无水物

在分解前未观察到任何样品的熔融吸热。

结晶形式A、B、C、C*、D、F、G、H、I、J、K和L的相互转化如表15中所示(形式A被用作多晶型物筛选工作的起始物质)：

表15.结晶形式A、B、C、C*、D、F、G、H、I、J、K和L的相互转化

在四种水合物(形式A、C、C*和G)中，发现形式C是生产作为API的化合物A过程中最实用且最稳定的结晶形式。在非常高的温度加热水合物或水合物/溶剂化物导致水或溶剂的损失并产生无水物，然而，值得注意的是，该方法用于研究各种结晶形式的相互转化且可能不适用于化合物A的制备。

在另一方面，本发明提供了基本上纯的化合物A的结晶形式A、B、C、C*、C**、C***、D、F、G、H、I、J、K和L。也就是说，每种结晶形式在一种化合物I的具体结晶形式中是基本上纯的且基本上不含有化合物I的其它结晶形式。在一个实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式A，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式B，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式C，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式D，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式F，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式G，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式H，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式I，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式J，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式K，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。在另一实施方案中，本发明提供了基本上纯的结晶形式L，诸如纯度水平为97.0％、97.5％、98.0、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％或更高。

在另一方面，本发明提供了用于制备式I、式Ⅱ和式III的化合物的方法。

在一个实施方案中，本发明提供了根据方案1中所述的操作制备或纯化的化合物A倍半水合物的结晶形式C。本申请公开的新型合成方法和结晶/重结晶方法解决了许多与先前所报道的方法相关的问题，诸如经与手性酸诸如(+)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸形成非对映异构体盐并使其重结晶而改善化合物A游离碱的光学纯度，并提供了许多相对于现有方法的优点。值得注意的是，本申请公开的方法尤其适用于以高品质和良好产率可重现地以商业规模制备化合物A倍半水合物。

方案1：化合物A的大规模合成方法

如方案1中所例示，本申请提供了用于大规模制备呈游离碱形式的化合物A的方法，包括以下步骤：

其中R₁和R₂独立选自C_1-6烷基或卤代C_1-6烷基；且LG为离去基团诸如Ts。

方案2：化合物A倍半水合物(结晶形式C)的合成方法

如方案2中所例示，本申请提供了用于大规模制备化合物A倍半水合物的结晶形式的方法，包括以下步骤：

i.使化合物A的游离碱与拆分剂(诸如手性酸，例如，(+)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸)于适当溶剂(诸如，醇，进一步诸如异丙醇)中在碱存在下反应以获得化合物A-粗品2；

ii.使化合物A-粗品2于混合溶剂诸如i-PrOH和水中在某一温度重结晶达一段时间以获得化合物A的结晶形式。

化合物A的结晶形式可通过以下通用方法制备：将化合物A倍半水合物的结晶形式C与溶剂加热直至完全溶解。过滤、冷却、结晶、过滤并干燥后，获得相应的不同结晶形式。用于制备化合物A的结晶形式A的结晶方法的实例述于实施例3中(下文)。上述结晶可在单一溶剂、有机溶剂的混合物、水与一种或多种有机溶剂的混合物中进行。用于结晶的合适有机溶剂可选自，但不限于，低级烷基醇、酮、醚、酯、卤代烃、烷烃、卤代苯、脂族腈及其它芳族溶剂。优选的溶剂包括，例如，异丙醇、乙酸乙酯、水、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、乙腈及它们的混合物。

本申请的术语“低级烷基醇”包括直链或支链C₁-C₈烷基醇，优选C₁-C₆烷基醇，更优选C₁-C₄烷基醇。具体实例包括，但不限于，甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇。

除非另外说明，否则本申请使用的术语“约”是指数字(例如，温度、pH、体积等)可在±10％，优选±5％内变化。

本申请的溶剂化物被定义为通过溶剂化形成的化合物，例如作为溶剂分子与溶质的分子或离子的组合。已知的溶剂分子包括水、醇及其它极性有机溶剂。醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。醇还包括聚合醇诸如聚亚烷基二醇(例如，聚乙二醇、聚丙二醇)。优选的溶剂通常是水。通过与水的溶剂化形成的溶剂化物化合物有时称为水合物。

本发明的结晶形式的结晶也可在含有至少一种溶剂的适当的溶剂***中通过以下方式进行：蒸发溶剂、冷却和/或添加抗溶剂(不能使化合物A倍半水合物溶解的溶剂，包括但不限于本申请所述的那些)以实现在所述溶剂***中的过饱和。

结晶可使用或不使用晶种来进行，其述于本发明中。

本申请公开的各个结晶形式在取决于结晶过程的具体热力学和平衡性质的特定条件下开发。因此，本领域技术人员将认识到形成的结晶是结晶方法的动力学和热力学性质的结果。在某些条件(例如，溶剂、温度、压力和化合物浓度)下，具体的结晶形式相比于其它结晶形式可以是更稳定的(或者事实上相比于其它结晶形式是更稳定的)。然而，具体晶体的相对低的热力学稳定性可具有有利的动力学稳定性。除了动力学之外的其它因素，诸如时间、杂质分布、搅拌和存在或不存在晶种等，也可影响结晶形式。

在另一方面，本发明提供了药物组合物，其各自含有有效量的化合物A和药学上可接受的载体，所述化合物A具体为呈上述结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L中任一种的化合物A倍半水合物。所述一种或多种活性化合物可占组合物的1-99％(按重量计)，优选1-70％(按重量计)，或更优选1-50％(按重量计)，或最优选5-40％(按重量计)。

药物组合物可以如下形式口服给药：诸如胶囊；片剂；丸剂；粉末；持续释放注射剂，诸如无菌溶液、混悬液或乳液的形式；经局部处理形式给药，诸如糊剂、乳膏剂或软膏剂；或经直肠形式给药，诸如栓剂。药物组合物可呈适于精确给药施用的单位剂型。此外，药物组合物可包含其它活性成分。

合适的药物载体包括水、各种有机溶剂和各种惰性稀释剂或填充剂。需要时，药物组合物可含有各种添加剂，诸如香料、粘合剂和赋形剂。对于口服给药，片剂和胶囊可含有各种赋形剂诸如柠檬酸；各种崩解剂诸如淀粉、海藻酸和一些硅酸盐；和各种粘合剂诸如蔗糖、明胶和***胶。此外，通常在制备片剂中使用润滑剂，包括硬脂酸镁和滑石填充剂。相同类型的固体组分也可用于配制软和硬明胶胶囊。当口服给药需要水性混悬液时，活性化合物可与各种增甜剂或矫味剂、色素或染料组合混合。需要时，可采用各种乳化剂或产生混悬液；可采用稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或它们的组合。

上述药物组合物优选口服给药。

上述药物组合物优选呈胶囊或片剂形式。

在另一方面，本发明提供了本发明的化合物(即，化合物A倍半水合物及其任一种上述结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L)在制备用于治疗对Parp1和Parp2的抑制响应的癌症的药物中的用途。

在一个实施方案中，本发明提供了本发明的化合物(即，化合物A倍半水合物及其任一种上述结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L)在制备用于治疗或预防哺乳动物胰腺炎、肾病、癌症、血管发生或血管发生相关疾病的药物中的用途。

本发明的化合物A倍半水合物和其它游离碱结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L可用于治疗或预防选自但不限于以下的疾病：肿瘤血管发生；慢性炎性疾病，诸如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化；皮肤病，诸如银屑病和硬皮病；糖尿病诱导的皮肤病、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、年龄相关的变性色斑、血管瘤、胶质瘤、卡波西内部肿瘤、卵巢癌、乳腺癌；肺癌，包括小细胞肺癌；胰腺癌、淋巴瘤、***癌、结肠癌和皮肤肿瘤，以及它们的并发症。在本申请提及的哺乳动物中，优选人类。

待通过上述治疗方法治疗的疾病优选选自BRCA1和BRCA2突变体肿瘤，诸如BRCA1和BRCA2突变体乳腺癌、卵巢癌以及它们的并发症。

上述方法可与任何化学疗法(例如，TMZ和多西他赛(docetaxel))、生物疗法或放射疗法联合使用。

当给药时，活性成分或化合物的剂量将通过以下因素确定：待治疗患者的个体需求、给药途径、疾病或病症的严重度、给药时间表以及指定医生的评价和判断。然而，基于活性化合物，单一或分开剂量中有效剂量的优选范围可为约每日0.01-320mg/kg体重；或更优选每日0.1-10mg/kg体重。

本发明的另一方面提供用于临床应用的化合物A的结晶形式。具体地，本发明涉及使用针对癌症患者的以下治疗选择以化合物A的结晶形式进行的临床治疗：选自结晶形式A、B、C、C*、C**、D、E、F、G、H、I、J、K和L的化合物A的结晶形式的剂量可为1-320mg/天，其中给药频率为每日1-3次；优选的剂量为5-240mg/天，其中给药频率为每日1-3次；更优选的剂量为10-200mg/天，其中给药频率为每日2次。

以下合成方法、具体实施例和效能测试进一步描述了本发明的某些方面。它们不应当以任何方式限制或限定本发明的范围。

实施例

如下实施例意在示例说明且着重于确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应当考虑到在本领域技术人员认知范围内的一些实验误差和偏差。除非另作说明，否则温度以℃(摄氏度)计。试剂购自商业供应商诸如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI，且无需进一步纯化即可使用，除非另作说明。

除非另作说明，否则下文阐述的反应在氮气或氩气的正压下或使用干燥管在无水溶剂中进行；反应烧瓶配备有用于经注射器引入底物和试剂的橡胶隔膜；且将玻璃器皿烘干和/或加热干燥。

在以400MHz操作的Varian仪器上记录¹H NMR谱和¹³C NMR。

获自无色板状晶体的X射线强度数据在173(2)K使用Bruker APEX-II CCD衍射仪(Cu Kα辐射，

)测量。偏振光显微镜照片在室温捕获。

使用TA Instruments Q500TGA进行TGA。使用镍校准温度并使用TA提供的标准砝码校准重量且针对草酸钙一水合物脱水和分解进行验证。

DSC如下进行：使用TA instruments Q2000DSC，25℃至期望温度，以10℃/min的加热速率，使用N₂作为吹扫气体，使用卷边盘(pan crimped)。

在以下实施例中，可是以下缩写：

AcOH 乙酸

ACN 乙腈

Aq 水性/水溶液

Brine 饱和氯化钠水溶液

Bn 苄基

BnBr 苄基溴

CH₂Cl₂ 二氯甲烷

DMF N，N-二甲基甲酰胺

Dppf 1，1″-双(二苯基膦基)二茂铁

DBU 1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DIEA or DIPEA N，N-二异丙基乙基胺

DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

Et₂O或ether ***

g 克

h or hr 小时

HATU O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

HCl 盐酸

HPLC 高效液相色谱

IPA 2-丙醇

i-PrOH 异丙醇

mg 毫克

mL 毫升

Mmol 毫摩尔

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

Min 分钟

ms或MS 质谱

Na₂SO₄ 硫酸钠

PE 石油醚

PPA 聚磷酸

Rt 保留时间

Rt or rt 室温

TBAF 四丁基氟化铵

TBSCl 叔丁基二甲基甲硅烷基氯

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TLC 薄层色谱

TMSCl 三甲基甲硅烷基氯

μL 微升

实施例1

呈游离碱形式的化合物A和化合物A倍半水合物的结晶形式C的大规模制备

步骤1：化合物-2的合成

将溴乙酸叔丁酯(51.7Kg)溶于无水乙腈(72Kg)中。将温度升至65-75℃，然后添加甲基吡咯啉(22Kg)。反应完成后将反应混合物浓缩，通过添加THF然后浓缩除去残余的乙腈。GC显示完全除去乙腈后，添加更多THF并搅拌。过滤并收集所得固体。获得44.1Kg灰白色固体化合物-2。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.91(s，2H)，4.15(m，2H)，3.29(m，2H)，2.46(s，3H)，)，2.14(m，2H)，1.46(s，9H)ppm。

步骤2：化合物-3的合成

向三甲基甲硅烷基乙炔(12.4Kg)于THF中的冷(-60℃)溶液中添加正丁基锂(43.4Kg)于己烷中的溶液。完成添加正丁基锂溶液后，将所得混合物再搅拌1-2h，然后将全部溶液转移至在-60℃冷却的化合物-2(31Kg)于THF中的混悬液中。转移完成后，将所得混合物温热至室温并搅拌1h。将反应混合物用水淬灭，用石油醚萃取。将有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩得到25.1Kg化合物-3。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.34(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.78(d，J＝16.0Hz，1H)，2.27(m，1H)，1.93(m，1H)，1.68(m，3H)，1.41(s，9H)，1.24(s，3H)，0.13(s，9H)ppm。

步骤3：化合物-4的合成

向70.1Kg化合物-3于THF中的冷(0-5℃)溶液中添加四丁基氟化铵(13.3Kg)于THF中的溶液。脱甲硅基化完成后，用水淬灭反应混合物，用石油醚(290Kg)萃取并将有机相浓缩且通过硅胶垫。浓缩滤液得到48Kg化合物-4。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.36(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.82(d，J＝16.0Hz，1H)，2.28(m，1H)，1.97(m，1H)，1.70(m，3H)，1.41(s，9H)，1.26(s，3H)ppm。

步骤4：化合物-5的合成

将化合物-4(48Kg)于THF中的溶液温热至50-60℃。向上述溶液中添加(-)-二-对甲基苯甲酰基-L-酒石酸(69.6Kg)于THF中的溶液。将所得混合物在50-60℃搅拌1-2h，然后逐渐冷却至0-10℃。将所得盐固体过滤并重新混悬于甲基叔丁基醚中且在50-60℃加热1h。将混合物逐渐冷却至0-5℃。过滤所得固体得到13.1Kg灰白色固体。将固体用氢氧化钠水溶液处理，用石油醚萃取，浓缩得到13.1Kg化合物-5(ee≥96％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.36(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.82(d，J＝16.0Hz，1H)，2.29(m，1H)，1.97(m，1H)，1.70(m，3H)，1.41(s，9H)，1.26(s，3H)ppm。

步骤5：化合物-6的合成

将中间体B(14Kg)、双(三苯基)二氯化钯(0.7Kg)、CuI(0.42Kg)和四甲基胍(11.5Kg)溶于DMF(48.1Kg)中。搅拌所得溶液并脱气，然后在氮气下加热。滴加化合物-5(9.24Kg)于DMF(16Kg)中的溶液。冷却后，浓缩有机相，残余物与水(145Kg)和甲基叔丁基醚(104Kg)搅拌，使全部混合物通过硅藻土垫，分离。将有机相用硫脲(14Kg)于水(165kg)和盐水(100Kg)中的溶液洗涤，浓缩。将残余物溶于正庚烷(120Kg)和乙酸乙酯(28Kg)的混合物中。将溶液与炭(1.4kg)混合，在40-50℃加热1-2h，经硅胶垫过滤。浓缩滤液得到化合物-6固体(14.89Kg)和液体滤液(13Kg庚烷溶液，含1.24Kg化合物-6)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(d，J＝9.6Hz，1H)，7.55(m，3H)，7.32(m，2H)，3.87(s，3H)，3.37(d，J＝16.0Hz，1H)，3.22(m，1H)，2.94(d，J＝16.0，Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.48(m，1H)，2.29(s，3h)，2.26(m，1H)，1.82(m，2H)，1.49(s，3H)，1.43(s，9H)ppm。

步骤6：化合物-7的合成

将上述化合物-6的庚烷溶液加至冷的三氟甲磺酸(66.1Kg)中，同时保持内部温度低于25℃。然后分批添加固体化合物-6(14.87Kg)。完成添加化合物-6后，将反应混合物温热至25-30℃并搅拌直至反应完成。将全部混合物倾入乙酸钠(123.5Kg)于水(240Kg)中的溶液中。然后通过添加固体碳酸钾(46.1Kg)将溶液的调节至pH 7-8。用二氯甲烷(509Kg)萃取残余物，浓缩。将残余物与正庚烷(41Kg)混合，再浓缩，得到析出物，将析出物过滤并用正庚烷(8Kg)洗涤且干燥。获得8.78Kg化合物-7。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.30(s，1H)，7.35(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.08(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.68(d，J＝17.2Hz，1H)，3.21(d，J＝17.2Hz，1H)，3.06(m，1H)，2.68(m，1H)，1.96(m，1H)，1.74(m，1H)，1.49(s，3H)ppm。

步骤7：化合物A-粗品1的合成

将化合物-7(8.76Kg)溶于甲醇(69Kg)中并内部冷却低于25℃。添加乙酸(9.3Kg)和水合肼(7.4Kg，85％)，同时保持内部温度低于25℃。脱气并用氮气再充填(重复三次)后，将反应混合物在55-60℃搅拌4h。反应完成后，将混合物与水(29Kg)混合。将有机相浓缩并添加碳酸钾(12.5Kg)于水(40Kg)中的溶液。将所得固体过滤，用水(18.3Kg)洗涤。将固体用水(110Kg)打浆，离心，干燥并用乙醇(9.4Kg)打浆，离心，用乙醇洗涤，真空干燥，得到化合物A-粗品1(7.91Kg)。1H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ12.0(s，1H)，10.2(s，1H)，7.31(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，7.19(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，3.77(d，1H，J＝16.4Hz)，3.34(d，1H，J＝16.4Hz)，2.97-3.02(m，1H)，2.54-2.58(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.90-1.94(m，1H)，1.73-1.75(m，1H)，1.47(s，3H)，1.43-1.45(m，1H)ppm.MS(ESI)m/e[M+1]⁺299。

步骤8：化合物A-粗品2的合成

在氮气保护下，将化合物A(粗品1)(7.88Kg)与异丙醇(422Kg)搅拌并在70-80℃加热1-2h直至固体完全消失。添加(+)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸(10.25Kg)于异丙醇(84.4Kg)中的溶液。将混合物搅拌14-16h，过滤并用异丙醇(16Kg)洗涤，干燥。将所得盐加至碳酸钾(6.15Kg)于水(118Kg)中的经搅拌溶液中。将析出物离心，过滤，用水(18Kg)洗涤。将固体用水(110Kg)打浆，离心，干燥。将固体溶于THF(75Kg)中，添加活性炭(0.8Kg)。将混合物脱气，再用氮气保护，搅拌并在40-45℃加热1-2h，冷却，经硅藻土过滤，浓缩，得到固体，其进一步用乙醇(6.5Kg)打浆，过滤，得到5.6Kg化合物A粗品2。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.0(s，1H)，10.2(s，1H)，7.31(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，7.19(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，3.77(d，1H，J＝16.4Hz)，3.34(d，1H，J＝16.4Hz)，2.97-3.02(m，1H)，2.54-2.58(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.90-1.94(m，1H)，1.73-1.75(m，1H)，1.47(s，3H)，1.43-1.45(m，1H)ppm.MS(ESI)m/e[M+1]⁺299。

步骤9：化合物A倍半水合物的合成

将化合物A-粗品2(5.3Kg)与异丙醇(41.6Kg)和水(15.9Kg)的溶液混合。将混合物脱气并在氮气下再进行保护，然后加热至60℃并搅拌2-4h直至固体完全溶解。将温度升至70-80℃并添加水(143Kg)。将所得混合物加热至内部温度为70-80℃，然后停止加热，但轻微搅拌16h。将析出物过滤，用水(19Kg)洗涤并用水(21kg)打浆2h。将所得固体过滤，用水(20Kg)洗涤。将经过滤的固体在低于45℃的温度干燥24-36h。获得化合物A倍半水合物(4.22kg)，粒度为D90＝51.51um，D50＝18.62um，D10＝7.63um。该该PSD范围对于制剂开发几乎是理想的。

粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式C的结构，参见图7A。化合物A倍半水合物的结晶形式C的¹H-NMR谱示于图17中。化合物A倍半水合物的结晶形式C的¹³C-NMR谱示于图18中。化合物A倍半水合物的结晶形式C的DVS谱示于图19中。化合物A倍半水合物结晶形式C的TGA谱示于图20中，其中0.5个水分子在50℃损失且另外1.0个水分子在100℃损失，由此确定结晶形式中水的摩尔数为1.5。化合物A倍半水合物结晶形式C的DSC谱示于图21中。

化合物A倍半水合物的结晶形式C的定量元素分析示于表16中。实测的和计算的C、H、N含量的绝对差值低于0.3％并与其分子式C₁₆H₁₅FN₄O·1.5H₂O一致。分析一式两份进行。

表16：化合物A倍半水合物的结晶形式C的定量元素分析

分析	理论值(％)	实测值(％)	绝对差值(％)
				C	59.07	59.05	0.02
H	5.58	5.59	0.01
				N	17.22	17.48	0.26

在临床批次(03035-20131201)中测试在化合物A倍半水合物的结晶形式C的产生中所使用的所有溶剂的残留水平并良好地控制低于ICH标准。

表17：残留溶剂

化合物A倍半水合物的结晶形式C的水含量实测为8.6％(KF方法)，其与其分子式C₁₆H₁₅FN₄O·1.5H₂O的理论水含量(如图20中TGA图所证实的8.3％)一致。

化合物A倍半水合物的结晶形式C的水溶性非常小(约0.04mg/mL)，然而，其在胃液中的溶解度(SGF)却非常高(约4.5mg/mL)。这一显著的溶解度差异使得化合物A倍半水合物的结晶形式C作为良好药品(API)形式。化合物A API的重结晶和浆化可在水-醇溶液(用于API生产的优选溶剂***)中进行。在SGF中的高溶解度使得化合物A倍半水合物将在胃中被快速溶解和吸收。

方案3：中间体B的制备：

步骤1’：化合物-9的合成

将市售化合物-8(50Kg)溶于浓硫酸(349.5Kg)中并搅拌。添加浓硝酸(95％，24.9Kg)和浓硫酸(50.0Kg)的混合物，同时将内部温度控制在35-43℃。将反应混合物倾入冰-水中。将所得混悬液离心并收集固体且用水(245Kg)打浆，离心并在45℃用空气流干燥，得到48.5Kg化合物-9。

步骤2’：化合物-10的合成

将化合物-9(48.5Kg)溶于甲醇(121.5Kg)中并添加亚硫酰氯(49.5Kg)。酯化完成后，将反应混合物冷却至0-5℃并保持2-12h。将析出物离心并过滤，用甲醇洗涤，用水打浆，离心并再次过滤，干燥，得到26.4Kg化合物-10。¹H-NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ8.31(dd，J＝8.0，2.8Hz，1H)，7.98(dd，J＝8.0，2.8Hz，1H)，3.91(s，3H)ppm。

步骤3’：化合物-11的合成

将化合物-10溶于乙醇(106Kg)和水(132Kg)的混合物中。添加氯化铵(26.4Kg)，然后分批添加铁粉(26.4Kg)。将混合物在75-85℃搅拌3h，冷却至室温(RT)，用乙酸乙酯(236Kg)萃取。将有机相先后用NaHCO3水溶液(230Kg)和硫酸盐水溶液洗涤，浓缩，得到24Kg化合物-11。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ6.73(dd，J＝8.0，2.8Hz，1H)，6.63(dd，J＝8.0，2.8Hz，1H)，5.92(s，2H)，3.82(s，3H)ppm。

步骤4’：中间体B的合成

将化合物-11(24.6Kg)溶于二氯甲烷(240Kg)和吡啶(24.3Kg)的混合物中并搅拌30min。添加甲苯磺酰氯(18.5Kg)。将混合物搅拌并在38-45℃加热20-22h。添加水(187Kg)并搅拌且分离。将有机相用浓盐酸(49Kg)和水(49Kg)洗涤，浓缩并添加石油醚。大量析出物形成。过滤并干燥，得到粗中间体B。将粗产物溶于甲苯(32Kg)中并在60-65℃加热直至所有析出物完全溶解。将溶液搅拌20min并冷却至5-15℃且静置。将混悬液离心并分离。将所得固体用甲苯(24.6Kg)和石油醚(37Kg)的混合物打浆，过滤并用石油醚洗涤，干燥，得到品质良好的中间体B。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ10.27(s，1H)，7.69(m，2H)，7.45(m，3H)，7.18(dd，J＝9.6，3.2Hz，1H)ppm。

化合物A倍半水合物的结晶形式C的长期稳定性研究显示当在25℃/60％RH储存至多12个月(测定w/w：T0＝99.1％和T12＝99.0％)时以及在40℃/75％RH条件储存至多12个月(测定w/w：T0＝99.0％和T12＝98.9％)时没有发生明显的化学纯度变化。此外，当在25℃/60％RH储存至多12个月以及在40℃/75％RH条件储存至多12个月时没有观察到晶体形式和光学纯度变化。

溶解度研究显示化合物A倍半水合物的结晶形式C几乎不溶于水中(0.04mg/mL)，然而，其非常易溶于SGF(胃液)中且获得的溶解度为4.5mg/mL。

发现化合物A倍半水合物的结晶形式C稍有吸湿性。

实施例2

化合物A单晶形式C**的制备

单晶生长筛选在94种不同条件(通过改变溶剂、温度和重结晶方法)下进行，由此通过在室温由IPA/水缓慢扩散获得了适于结构确定的单晶。化合物A的晶体结构已使用一组由单晶采集的衍射数据成功确定。

实施例3

化合物A的结晶形式A的制备

通过使化合物A游离碱于i-PrOH/H₂O的溶液中重结晶获得化合物A的结晶形式A。

通过与实施例1中类似的操作制备结晶形式A，即，从i-PrOH/H₂O中重结晶，而真空干燥导致部分失水。

操作：将化合物A(23g，77.2mmol)混悬于i-PrOH/H₂O的溶剂(240ml/360ml)中并加热至回流(约86℃)，回流搅拌约3.0h直至全部固体溶解。伴随搅拌将混合物逐渐冷却(约1℃/min)下来至65℃，并添加晶种(约20mg，99.1％ee)，然后继续冷却下来至室温，在室温保持过夜(约16h)。然后将混合物过滤，用水(80mL×2)洗涤。将固体在40℃真空干燥2h，得到标题产物(18g)，其为结晶性晶体。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式A的结构；参见图6。结果显示结晶形式A为水合物，且TGA结果表明直至150℃重量损失为4.7wt％，如前述表14所示。DSC结果显示在285.0℃(起始温度)的熔融吸热。

实施例4

化合物A的结晶形式B的制备

经由在室温将游离碱结晶形式A于MTBE中打浆获得化合物A游离碱结晶形式B样品。

操作：将15.1mg形式A固体称入1.5-mL小瓶中，并将0.3mL MTBE添加至该小瓶中以得到混悬液。将混合物在室温以800RPM的速度磁力搅拌2天，获得结晶形式B。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式B的结构；参见图6。TGA结果表明直至150℃重量损失为6.0wt％。DSC结果显示在283.5℃(起始温度)分解之前有三个重叠的吸热。

实施例5

用于制备化合物A倍半水合物的结晶形式C＊的备选操作

经由在2-甲基四氢呋喃溶液与水之间的蒸气扩散以实验室规模获得结晶形式C*。为了与实施例1中大规模制备的结晶形式C相区别，将实施例5中以实验室规模制备的该结晶形式称作结晶形式C*(结晶形式C*有时也称作以实验室规模制备的结晶形式C，而结晶形式C有时也称作以大规模制备的结晶形式C)。

将18.9mg形式A固体称入3-mL玻璃小瓶中并添加0.4mL 2-甲基四氢呋喃以得到澄清溶液。将该3-mL小瓶密封于含3mL水的20-mL玻璃小瓶中。将***在室温保持2天，使得蒸气与溶液相互作用，从而获得结晶形式C*。粉末X射线衍射图方法用于表征所得结晶形式的结构，其与图7B一致。该实验规模的TGA结果表明直至150℃重量损失为8.9wt％。DSC结果显示在281.9℃分解之前有两个吸热和一个放热。

实施例6

化合物A的结晶形式D的制备

经由向化合物A的结晶形式A的乙酸溶液中添加甲苯的抗溶剂获得化合物A的结晶形式D样品。

操作：将16.3mg形式A固体称入20-mL玻璃小瓶中。将0.2mL乙酸添加至该小瓶中以得到澄清溶液。在室温搅拌后观察到浑浊。向溶液中分步添加2mL甲苯以诱导更多析晶，从而获得结晶形式D。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式D的结构；参见图8。TGA结果显示直至160℃重量损失为34.5。DSC结果显示在269.5℃分解之前有三个重叠的吸热。

实施例7

化合物A的结晶形式E的制备

经由在化合物A游离碱结晶形式A固体与DMA蒸气之间进行蒸气扩散制备化合物A的结晶形式E样品。

操作：将12.2mg形式A固体称入3-mL玻璃小瓶中。将该3-mL小瓶密封于含2mL DMA的20-mL玻璃小瓶中。将该***在室温保持7天，使得蒸气与固体相互作用，获得结晶形式E。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式E的结构；参见图9。TGA结果显示直至150℃重量损失为38.3wt％(含结晶水合物的分子)。DSC结果显示在277.1℃(起始温度)分解之前有两个吸热。

实施例8

化合物A的结晶形式F的制备

经由在化合物A的结晶形式A固体与乙酸蒸气之间进行蒸气扩散制备化合物A的结晶形式F样品。

操作：将11.0mg形式A固体称入3-mL玻璃小瓶中。将该3-mL小瓶密封于含有2mL乙酸的20-mL玻璃小瓶中。将该***在室温保持7天，使得蒸气与固体相互作用，获得结晶形式F。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式F的结构；参见图10。TGA结果表明直至160℃两步重量损失为34.5wt％。DSC结果显示分解之前有四个重叠的吸热。

实施例9

化合物A的结晶形式G的制备

经由在25℃在DVS(动态蒸气吸附)期间化合物A结晶形式A的湿度诱导的相变制备化合物A的结晶形式G样品。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式G的结构；参见图11。TGA结果表明直至150℃两步重量损失为6.5wt％。DSC结果显示在284.9℃(起始温度)分解之前有三个重叠的吸热。

实施例10

化合物A的结晶形式H的制备

经由在氮气保护下将化合物A的结晶形式E加热至80℃并冷却至室温，制备化合物A的结晶形式H样品。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式H的结构；参见图12。TGA结果表明直至150℃两步重量损失为24.8wt％。DSC结果显示在277.9℃(起始温度)分解之前有两个重叠的吸热。

实施例11

化合物A的结晶形式I的制备

经由在氮气保护下将化合物A的结晶形式E加热至150℃并冷却至室温，获得化合物A的结晶形式I。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式I的结构；参见图13。TGA结果显示直至150℃重量损失为1.8wt％。DSC结果显示在277.0℃(起始温度)有一个分解放热。

实施例12

化合物A的结晶形式J的制备

经由在氮气保护下将化合物A的结晶形式A加热至150℃并冷却至室温，获得化合物A的结晶形式J样品。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式J的结构；参见图14。TGA结果显示直至150℃重量损失为1.1wt％。DSC结果显示在285.1℃(起始温度)有一个分解放热。

实施例13

化合物A的结晶形式K的制备

经由在室温缓慢蒸发化合物A的结晶形式A的MeOH溶液，获得化合物A的结晶形式K样品。

操作：将18.3mg形式A固体称入3-mL玻璃小瓶中，并向该小瓶中添加1.8mL MeOH以得到澄清溶液。将该溶液在室温蒸发以诱导析晶，从而获得结晶形式K。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式K的结构；参见图15。TGA结果显示直至150℃重量损失为12.8wt％。DSC结果显示在284.2℃(起始温度)分解之前有吸热和放热。

实施例14

化合物A的结晶形式L的制备

经由在氮气保护下将化合物A的结晶形式K加热至150℃并冷却至室温，获得化合物A的结晶形式L。粉末X射线衍射图方法用于表征结晶形式L的结构；参见图16。TGA结果显示直至150℃重量损失为1.8wt％。DSC结果显示在281.7℃(起始温度)分解之前有一个吸热。

效能测试

测试1：化合物A倍半水合物(测试的结晶形式C)对多聚(ADP-核糖基)化(PAR化)酶的抑制和选择性

通过使用市售的PARP1/2化学发光测定试剂盒(Chemiluminescent Assay Kit)(BPS Bioscience Inc.)确定化合物A倍半水合物在抑制PARP1、PARP2、TNKS1和TNKS2的多聚(ADP-核糖基)化(PAR化)活性方面的生化效能，并从杆状病毒感染的Sf9细胞中表达且纯化经GST标签的酶(参见用于酶构建物的表18)。PARP1和PARP2酶来自测定试剂盒，而TNKS1和TNKS2酶是自制的(produced in-house)。根据厂商的说明书进行该测定。简言之，将H2A和H2B蛋白固定在板的表面上，然后与连续稀释的化合物和靶标酶温育0.5小时。然后，向孔中添加生物素化的NAD和DNA(对于TNKS1或TNKS2不需要DNA)以启动反应。通过添加链霉亲和素(streptavidin)-HRP和HRP底物后的化学发光，测量生物素化的PAR化产物。使用Graphpad Prism软件将剂量-响应％抑制数据拟合至四参数逻辑模型，获得化合物A倍半水合物的IC₅₀。

表18总结了化合物A倍半水合物针对PARP1、PARP2、TNKS1和TNKS2酶的IC₅₀。如表18中所示，化合物A倍半水合物有效地抑制PARP1和PARP2的催化活性，其中IC₅₀分别为1.3和0.92nM。在对TNKS1和TNKS2的抑制作用中，其比对PARP1或PARP2的抑制作用弱超过100倍。

表18：生化测定中通过化合物A倍半水合物抑制PARP

酶	化合物A倍半水合物的IC<sub>50</sub>
		全长PARP1	1.3±0.058nM(n＝3)
PARP2(aa2-583)	0.92nM
		TNKS1(aa1021-1327)	0.23μM
TNKS2(aa667-1166)	0.14μM

n：测定的次数；未指定时n＝1。

测试2：细胞内靶标抑制

HeLa细胞获赠于国家生物科学研究所(National Institute of BiologicalSciences(北京))并保存于补充有胎牛血清(10％FBS)、100单位/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素的DMEM中且在95％湿度和5％CO₂保持于37℃培养箱中。经由过氧化氢(H₂O₂)温育后，诱导细胞内PARP活性并提高内源性PAR水平。如下进行该测定：

将细胞以5000个细胞/孔(100μL)的密度接种于具有透明底和黑色壁的96孔板中。将板在37℃在5％CO₂气氛下温育4小时，然后与特定浓度(通常为0.01nM-10μM)的受试化合物温育。翌日，添加H₂O₂于PBS中的溶液(终浓度200μM)并将板在37℃保持5分钟。然后通过板翻转轻微地除去培养基，并用冰冷的MeOH在-20℃将细胞固定20分钟。除去固定液并用PBS的重复洗涤后，添加检测缓冲液(50μL/孔，含有PBS、Tween(0.1％)和BSA(1mg/mL))以及初级PAR mAb(Alexis ALX-804-220，1∶2000)、二级抗-小鼠Alexa Fluor 488抗体(MolecularProbes A11029，1∶2000)和核染料DAPI(Molecular Probes D3571，150nM)并在4℃在暗处温育过夜。除去溶液并用PBS重复洗涤后，通过ArrayScan VTI(ThermoFisher)评估PAR多聚物水平。在增加的PARP抑制剂浓度存在下基于残余酶活性确定抑制百分比。通过使用XLfit软件将剂量依赖性数据拟合至四参数逻辑模型来计算IC₅₀值。

在这些条件下，化合物A倍半水合物的结晶形式C抑制细胞内PAR形成，其中IC₅₀为0.24nM，并且比维利帕尼和奥拉帕尼(其所具有的细胞PAR形成IC₅₀分别为2.66nM和0.47nM)更有效。

表19：过氧化氢预处理的HELA细胞中对细胞PAR形成的抑制。

	PAR化测定中的ICs0(nM)
		奥拉帕尼	0.47±0.13(n＝10)
维利帕尼	2.66±0.66(n＝10)
		化合物A倍半水合物	0.24±0.10(n＝10)

测试3：癌细胞杀死的合成致死性

将非BRCA基因突变或其它同源性重组缺陷的MDA-MB-231细胞保存于补充有胎牛血清(10％FBS)、100单位/ml青霉素0.1mg/ml链霉素的DMEM中。将BRCA1-缺陷的细胞系MDA-MB-436保存于补充有10％FBS、100单位/ml青霉素和0.1mg/ml链霉素的RPMI-1640中。在95％湿度和5％CO₂将两种细胞系保持于37℃培养箱中。

针对每个细胞系使96孔板中每孔所接种的肿瘤细胞数目最优化以确保历经7天治疗期的对数生长。使细胞贴壁16小时，然后用特定浓度的受试化合物处理。使化合物暴露7天后，使用CellTiter-Glo发光细胞存活力测定(Promega)确定化合物的生长抑制活性。使用PHERAstar FS读取器(BMG Labtech)测量发光信号。细胞存活力以相对于模拟治疗对照(mock treatment control)表示。通过使用XLfit软件将剂量依赖性数据拟合至四参数逻辑模型来计算生长抑制的EC₅₀值。

在这些条件下，MDA-MB-231(其BRCA基因为野生型)对于EC50为约9μM的化合物A相对耐药。相比之下，BRCA1缺陷的肿瘤细胞系(MDA-MB-436)对化合物A极度敏感。在受试的肿瘤细胞中，化合物A显示比维利帕尼更有效且与奥拉帕尼类似。

表20：具有BRCA1或BRCA2突变的肿瘤细胞的选择性杀死

测试5：化合物A倍半水合物的结晶形式C的体内药理学

在携带皮下人MDA-MB-436(BRCAl突变体)乳腺癌的BALB/c裸鼠中评价化合物A对PARP的体内药效学(PD)活性。此外，在该异种移植物模型中探讨血浆和肿瘤组织中化合物A浓度(PK，药代动力学)与其对PAR化的作用(PD，药效学)之间的关系。在小鼠的MDA-MB-436乳腺癌异种移植物中，口服给予化合物A引起PAR化的时间依赖性和剂量依赖性抑制。肿瘤组织中PAR化的抑制与化合物A的肿瘤药物浓度相关性良好。在以0.34mg/kg或更高的单一口服剂量给予化合物A后4小时观察到对PAR化的有效抑制。在5.45mg/kg，化合物A在MDA-MB-436肿瘤组织中诱导强烈且持续的PAR化抑制。在单一口服给予0.17至10.9mg/kg化合物A后4小时，化合物A在MDA-MB-436异种移植物中诱导对PAR水平的剂量依赖性抑制。在5.45mg/kg，化合物A诱导对PAR水平的快速和有效抑制。在处理后0.5小时PAR化抑制为98％。经过前12小时抑制保持在高水平(＞80％)，但在24小时回至53％。在小鼠异种移植物模型的效能研究中，这些数据支持BID给药。剂量滴定和时间过程研究均表明肿瘤组织中的化合物A浓度需要超过0.5μmol/kg以实现至少80％PAR化抑制。

在H209SCLC异种移植物模型中探究化合物A的体内效能以评价化合物A与替莫唑胺(TMZ，一种DNA烷化剂)的组合功效。在该模型中TMZ单药非常有效。一个治疗周期导致所有动物均无肿瘤。然而，在第二个周期迅速发生耐药。化合物A与TMZ的组合明显延迟耐药且不具有另外的毒性。在多个周期后肿瘤仍对组合治疗敏感。为了探讨化合物A是否能够克服TMZ耐药，通过在体内用多个周期的TMZ处理H209肿瘤产生TMZ-耐药性(TR)H209肿瘤。在该异种移植物小鼠模型中，衍生的H209-TR细胞系仍然对化合物A与TMZ的组合敏感。化合物A具有明显的脑渗透性，使得其在与TMZ组合用于治疗脑肿瘤或与具有脑转移的肿瘤方面具有吸引力。具有已建立的颅内H209异种移植物的小鼠用于进一步探究化合物A与TMZ对脑中SCLC的组合活性。在该颅内模型中，与TMZ单药相比，添加化合物A明显延长了动物存活。

测试6：化合物A倍半水合物(结晶形式C)的毒理学

在大鼠和犬中在单次和重复剂量研究中在多达28天表征了化合物A的非临床毒性分布。不良反应包括体重或体重增加和食物消耗量的减少；WBC、NEUT、LYMP、RBC、HGB、HCT和APTT的减少；以及PLT的增加。骨髓被认为是主要靶标器官且组织病理学变化的严重度从最小变化至明显。毒性为剂量依赖性的，与全身暴露相关且在28天恢复期后可逆。化合物A显示出对hERG电流无明显影响，其中IC₅₀＝25.97μM。在Ames测定中未记录到致突变性(mutagenicity)。总之，可获得的毒理学数据充分支持了化合物A在I期研究中对晚期和进展性癌症患者的临床进展。毒性可进行临床监测和处理。

测试7：化合物A倍半水合物结晶形式C的药代动力学

针对药代动力学研究所用的物种是大鼠和犬。在两种物种中化合物A均具有良好至优异的口服生物利用度(＞40％)。口服给药后，大鼠中的消除半衰期范围为3.1至5.0小时，而犬中的消除半衰期范围为1.5至2.5小时。在大鼠(8.67-15.2mL/min/kg)和犬(18.3-18.5mL/min/kg)中清除均是中等的。大鼠和犬中的稳态分布体积分别为2.4L/kg和1.9L/kg。在两个物种多次口服给药后没有化合物A的累积。

测试8：化合物A倍半水合物的结晶形式C的ADME

人、猴、犬、大鼠和小鼠血浆中化合物A的血浆蛋白结合(PPB)分别为95.7％、88.9％、79.0％、84.9％和85.0％。在大鼠中口服给药后，在所有检查的器官中均检测到化合物A。药物浓度在给药后0.25至1小时达到最大并在给药后24小时降至小于峰浓度的10％。

化合物A在人、犬、大鼠和小鼠肝微粒体中缓慢代谢，而在猴肝微粒体中迅速代谢，其中鉴定出共计5种代谢物(M1、M2、M3、M4和M5)。口服给药后，在大鼠的粪便、血浆、尿和胆汁中实测到六种代谢物M1、M2、M3、M5、M6和M7。化合物A主要在粪便中***。口服给药后，粪便中化合物A的累积***量为15％至20％(直至48小时)。在大鼠中低于1％的化合物A在尿和胆汁中***。

CYP3A是负责化合物A代谢的主要CYP同工型，而CYP2C8有助于化合物A代谢至较小的程度。对于CYP2C9，化合物A是中等抑制剂(IC₅₀＝6.48μM)，而其对于其它CYP同工型的IC₅₀均大于10μM。化合物A不是人CYP1A2、CYP286和CYP3A的诱导剂。

测试9：临床试验

使用化合物A倍半水合物的结晶形式C制备胶囊，对25位受试者(每日两次(bid)给药剂量为2.5、5、10、20、40、80和120mg)完成了I期临床安全性研究。结果显示2.5-120mg每日两次剂量是安全的且耐受良好。在BRCA1/2突变体卵巢癌患者中化合物A治疗引起部分或完全响应。这些初步数据证明化合物A倍半水合物(结晶形式C)在BRCA1/2突变体或HR-缺陷的癌症治疗中是有效的。

前述实施例和某些实施方案的描述应当理解为示例说明的，而不是如权利要求所限定的那样限制本发明。将容易地认识到，可采用如上阐述的特征的各种变化和组合而不偏离如在权利要求中所阐述的本发明。所有此种变化意在包括在本发明的范围内。将所有引用的参考文献的全部内容通过引用的方式并入本申请。

Claims

1.式II的化合物，其为(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮游离碱的水合物：

其中n为约1.5的数字，

该水合物呈结晶形式C，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：5.3±0.2°、6.3±0.2°、6.5±0.2°、6.9±0.2°、8.7±0.2°、10.6±0.2°、11.1±0.2°、11.6±0.2°、12.6±0.2°、13.1±0.2°、13.7±0.2°、14.4±0.2°、14.8±0.2°、15.1±0.2°、15.9±0.2°、16.2±0.2°、17.3±0.2°、18.0±0.2°、18.7±0.2°、19.0±0.2°、19.4±0.2°、20.2±0.2°、20.6±0.2°、21.0±0.2°、21.2±0.2°、21.5±0.2°、22.3±0.2°、22.7±0.2°、23.4±0.2°、23.8±0.2°、24.3±0.2°、24.7±0.2°、25.3±0.2°、25.7±0.2°、26.1±0.2°、26.4±0.2°、27.4±0.2°；或

或该水合物呈结晶形式C*，其特征在于粉末X射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的五个、六个、七个、八个、九个或更多个衍射峰：6.1±0.2°、6.3±0.2°、6.9±0.2°、8.5±0.2°、11.1±0.2°、11.6±0.2°、13.2±0.2°、14.5±0.2°、15.2±0.2°、16.3±0.2°、18.1±0.2°、20.3±0.2°、22.5±0.2°、24.8±0.2°、26.1±0.2°、26.6±0.2°和27.7±0.2°，

其中“约”是指数字在±10％内变化。

2.权利要求1的化合物，其中n为1.5，且所述化合物为式III的(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的结晶倍半水合物：

3.权利要求1的化合物，其中所述结晶形式C为基本上纯的。

4.权利要求1的化合物，其基本上特征在于如选自以下的粉末X射线衍射图：图7A或7B。

5.一种制备如权利要求1所述的结晶形式C的方法，其包括：

i.使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的游离碱与拆分剂于适当溶剂中在碱存在下反应以获得(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮-粗品2；

ii.使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮-粗品2于混合溶剂中在一段时间内且在某一温度重结晶以获得(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的结晶形式。

6.一种制备如权利要求2所述的式III的(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的结晶形式的方法，其包括以下操作中的任一项：

(a)使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮的游离碱或水合物溶于溶剂或溶剂混合物中以形成溶液或混悬液；并使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物以目标结晶形式沉淀析出；或

(b)使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮水合物溶于或混悬于溶剂或溶剂混合物中；并用抗溶剂使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮水合物以目标结晶形式沉淀析出。

7.权利要求6的方法，其中所述操作(a)或(b)还包括独立选自以下的一个或多个操作：加热、过滤除去不溶性杂质、蒸馏溶剂、添加反萃溶剂或溶剂混合物、添加晶种、添加一种或多种析晶诱导剂、冷却、析晶和过滤收集结晶产物。

8.权利要求6或7的方法，包括所述操作(a)或(b)，其中所述溶剂或溶剂混合物选自水、直链或支链C₁-C₈烷基醇、酮、醚、酯、直链或支链C₁-C₈脂族羧酸、直链或支链C₁-C₈脂族腈、任选卤代的芳香溶剂以及它们的组合。

9.权利要求6或7的方法，其中所述溶剂为异丙醇、乙醇、甲醇、丙酮、THF、1,4-二噁烷、乙酸、乙腈、水或它们的组合。

10.权利要求6的方法，包括所述操作(a)，其中所述游离碱为经分离且纯化的游离碱、经分离但未纯化的游离碱或含有游离碱的粗反应产物。

11.权利要求6的方法，其中：

1)所述步骤(a)或(b)，其使用i-PrOH/H₂O作为溶剂以产生权利要求1所述的结晶形式C或C*。

12.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至4中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。

13.权利要求12的药物组合物，其中所述药物组合物适于口服给药。

14.权利要求13的药物组合物，其中所述药物组合物呈片剂或胶囊的形式。

15.权利要求14的药物组合物，其中所述片剂或胶囊的单位剂量为5-80mg。

16.权利要求15的药物组合物，其中所述药物组合物中化合物的重量百分比为1-99％。

17.一种制备治疗或预防患者的疾病或病症的药物中的应用，其特征在于，药物为有效量的根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或根据权利要求12至16中任一项所述的药物组合物。

18.权利要求16的应用，其中所述疾病或病症为选自以下的癌症：脑癌、肺癌、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、皮肤癌、肾上腺癌、子***或淋巴瘤以及它们的并发症。

19.权利要求16的应用，其中所述疾病或病症为小细胞肺癌。

20.权利要求17的应用，其中所述疾病或病症为选自以下的癌症：黑素瘤或甲状腺肿瘤以及它们的并发症。

21.权利要求17的应用，其中所述疾病选自BRCA1和BRCA2突变的乳腺癌、卵巢癌以及它们的并发症。

22.权利要求17的应用，其中根据权利要求1至4中任一项所述的化合物的给药剂量为1-320mg/天，且给药频率为每日一至三次。

23.权利要求17的应用，其中根据权利要求1至4中任一项所述的化合物的给药剂量为2.5-320mg/天，且给药频率为每日一至三次。

24.权利要求17的应用，其中根据权利要求1至4中任一项所述的化合物的给药剂量为5-240mg/天，且给药频率为每日两次。

25.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物在制备用于治疗与BRCA1/2突变体活性或其它HR-缺陷相关的疾病或病症的药物中的用途。

26.权利要求25的用途，其中所述疾病为癌症。

27.一种制备结晶(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物的方法，其包括在80℃使(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮游离碱于i-PrOH和H₂O的混合溶剂中的混合物混合。

28.权利要求27的方法，其还包括在冷却至室温后将一些晶种添加至所得混合物中，然后使所述混合物静置一段时间。

29.权利要求27的方法，其中所述混合伴随搅拌进行。

30.权利要求27至29中任一项的方法，其中(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮游离碱的结晶形式为选自以下的任一种：如权利要求1所述的结晶形式C或C*。