KR20180041748A

KR20180041748A - Parp 억제제, 결정형의 제조방법 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20180041748A
Application number: KR1020187008548A
Authority: KR
Inventors: 헤샹 왕; 창유 조우; 보 렌; 시안자오 광
Original assignee: 베이진 엘티디
Priority date: 2015-08-25
Filing date: 2016-08-22
Publication date: 2018-04-24
Also published as: ZA201800765B; IL257442B2; JP2018528199A; BR112018003634A2; TWI736550B; CN107922425A; BR112018003634B1; US20190177325A1; IL257442B; BR112018003634A8; JP6940039B2; EP3341375A4; IL296835A; NZ739876A; IL257442A; US10457680B2; CA2994895A1; EP3341375B1; EP3341375A1; AU2016312011B2

Abstract

본 발명은 PARP 1/2 억제제의 제조방법, 즉, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 (이하, 화합물 A라 언급됨), 화합물 A 또는 이의 하이드레이트(hydrate) 또는 용매화물의 결정형 (다형체), 특히 화합물 A 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)의 결정형 C, 상기 결정형의 제조방법, 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

PARP 억제제, 결정형의 제조방법 및 이의 용도

암의 특징 및 원동력 중 하나는 유전적인 불안정이다[Hanahan D and Weinberg R A, Hallmarks of cancer: the next generation. Cell, 2011. 144(5): p. 646-74.]. 구체적으로 가족 암에서, 상동 재조합(homologous recombination, HR)에서의 주요 원인인, 유방암 민감성 BRCA1 및 BRCA2 종양 억제 유전자에서의 돌연변이는 유방 또는 난소암의 발병 위험 증가와 관련되어 있다[Li X and Heyer W D, Homologous recombination in DNA repair and DNA damage tolerance. Cell Res, 2008. 18(1): p. 99-113. ]. 이 환자 집단에서 폴리 (ADP-리보오스) 중합효소(poly (ADP-ribose) polymerase, PARP)의 억제제가 최근에 주목 받고 있다. PARP 패밀리(family)인 PARP1 및 PARP2는 DNA 복제, 전사 조절 및 DNA 손상 복구에 있어서 중요한 역할을 한다[Rouleau M, Patel A, Hendzel M J, et al., PARP inhibition: PARP1 and beyond. Nat Rev Cancer, 2010. 10(4): p. 293-301. ]. 2005년에, Nature지에 발표된 두 개의 획기적인 연구 결과는 PARP 억제제만으로 기존의 DNA 복구 결함, 구체적으로 BRCA1/2 유전자에서의 돌연변이가 있는 암세포를 죽일 수 있다는 것을 보여주었다[Bryant H E, Schultz N, Thomas H D, et al., Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase. Nature, 2005. 434(7035): p. 913-7; Farmer H, McCabe N, Lord C J, et al., Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy. Nature, 2005. 434(7035): p. 917-21].

PARP 억제 및 돌연변이 BRCA는 전임상 모델에서 합성적으로 치명적이었으며, 환자를 치료하기 위하여 명쾌하고, 타겟이 되며(targeted) 독성이 최소인 방법을 제안하였다.

임상에서 PARP 억제제의 시험은 지난 몇 년 동안 기하급수적으로 증가했다. 이런 임상 시험은 유전적인 종양을 치료하기 위하여 PARP 억제제를 단일-제제 또는 다른 DNA-손상 제제와 함께 조합하여 사용하는 것으로 시작하여, 지금은 여러 종류의 산발적인 종양을 치료하는 것으로 옮겨졌다. PARP 억제제에 대한 초기의 관심은 BRCA-결핍된 유방, 난소 및 전립선 암 환자에서 올라파립(olaparib) (AZD2281, KU0059436; AstraZeneca/KuDOS)이 활성된 것으로 발견되었을 때 나타났다[Fong P C, Boss D S, Yap T A, et al., Inhibition of poly(ADP-ribose) polymerase in tumors from BRCA mutation carriers. N Engl J Med, 2009. 361(2): p. 123-34. ]. 이런 특정 환자들에서 최소 이상 반응(minimal adverse events, AEs)이 있었고 BRCA 담체(carrier)가 아닌 경우와 비교하여 BRCA 담체에서의 AEs의 빈도는 증가하지 않았다. 난소와 유방암 환자에서의 2상 임상 시험을 통해 BRCA 돌연변이 암 환자 그룹에서 올라파립의 낮은 부작용뿐만 아니라 반응도 확인하였다[Audeh M W, Carmichael J, Penson R T, et al., Oral poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor olaparib in patients with BRCA1 or BRCA2 mutations and recurrent ovarian cancer: a proof-of-concept trial. Lancet, 2010. 376(9737): p. 245-51; Tutt A, Robson M, Garber J E, et al., Oral poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor olaparib in patients with BRCA1 or BRCA2 mutations and advanced breast cancer: a proof-of-concept trial. Lancet, 2010. 376(9737): p. 235-44. ]

흥미롭게도, BRCA1/2 돌연변이를 수반하는 난소암 환자의 PARP 억제제에 대한 반응은 이전의 백금(platinum) 치료에 대한 그들의 민감성과 관련이 있었다[Fong P C, Yap T A, Boss D S, et al., Poly(ADP)-ribose polymerase inhibition: frequent durable responses in BRCA carrier ovarian cancer correlating with platinum-free interval. J Clin Oncol, 2010. 28(15): p. 2512-9. ]. 백금-민감성과 유사한 상관관계는 또한 BRCA 돌연변이가 없는 고-등급 중증의 난소암 환자에게서도 확인되었다 [Gelmon K A, Tischkowitz M, Mackay H, et al., Olaparib in patients with recurrent high-grade serous or poorly differentiated ovarian carcinoma or triple-negative breast cancer: a phase 2, multicentre, open-label, non-randomised study. Lancet Oncol, 2011. 12(9): p. 852-61. ]. 또 다른 2상 임상 시험에서 유지 치료로서 올라파립이 백금에 민감하며, 재발된, 고-등급 중증 난소암 환자에 유용하다는 것이 확인되었다 [Ledermann J, Harter P, Gourley C, et al., Olaparib maintenance therapy in platinum-sensitive relapsed ovarian cancer. N Engl J Med, 2012. 366(15): p. 1382-92. ]. 이러한 데이터에 기초하여, 3상 등록 시험은 유방 및 난소암 환자에서 올라파립에 대하여 시작되었다.

최근의 2상 시험에서, 올라파립은 1차 치료 이후에 진행된 재발 및 전이성 위암 환자에서 파클리탁셀(paclitaxel)과 병용 투여 시에 좋은 임상 활성을 나타냈다 [Bang Y-J, Im S-A, Lee K-W, et al., Olaparib plus paclitaxel in patients with recurrent or metastatic gastric cancer: A randomized, double-blind phase II study. J Clin Oncol, 2013. 31(suppl; abstr 4013). ]. 적격인 환자는 모세혈관확장성운동실조증 돌연변이(ataxia-telangiectasia mutated, ATM) 상태에 따라 계층화되었다. 파클리탁셀/올라파립 조합은 ATM-낮은 하위 집단(sub-group)에서 파클리탁셀 단일 제제와 비교하여 환자의 전반적인 생존율을 연장시켰다. ATM은 이온화 방사선과 같은 DNA-손상 물질에 대한 반응으로 세포 주기 체크포인트의 신호 전달 및 개시를 유도하는 DNA 손상에 있어서 중요한 역할을 하는 세린/쓰레오닌(serine/threonine) 단백질 키나아제(kinase)이다 [Stracker T H, Roig I, Knobel P A, et al., The ATM signaling network in development and disease. Front Genet, 2013. 4: p. 37. ].

2014년 12월 19일, 미국 식품 의약청(FDA)은 올라파립 캡슐(Lynparza, AstraZeneca Pharmaceuticals LP)을 3회 이상의 선행된 화학요법으로 치료 받았던, 유해한 또는 유해하다고 의심되는 생식선 BRCA 돌연변이(gBRCAm) (FDA 승인 시험에서 검출됨)가 진행된 난소암 환자 치료를 위한 단일 요법으로 승인하였다. 이 작업과 동시에, FDA는 BRCA1 및 BRCA2 유전자의 변이를 정성적으로 검출하고 분류하기 위해 BRACAnalysis CDx (Myriad Genetics)를 승인하였다.

임상에서 벨리파립(veliparib, ABT-888; Abbott Laboratories), 루카파립(rucaparib, AG014669; Clovis) 니나파립(niraparib, MK-4827; Tesaro), BMN-673 (Biomarin), CEP-9722 (Cephalon), 및 E7016 (Eisai)을 포함하는, 다른 몇몇의 조사용 PARP 억제제가 있다. 이런 모든 PARP 억제제는 효능, 선택성 및 DNA 트래핑(trapping) 활성에서 상이하다. 최근의 보고서는 PARP 억제제 복합체에 의한 DNA 트랩핑은 PARP 억제제가 세포 내에서 세포독성을 유도하는 주요한 메커니즘 중에서 하나임을 시사한다[Murai J, Huang S Y, Das B B, et al., Trapping of PARP1 and PARP2 by Clinical PARP Inhibitors. Cancer Res, 2012. 72(21): p. 5588-99. ]. 벨리파립은 강한 PARP 억제제이지만 BRCA 돌연변이 세포 내에서 DNA 트래핑 활성 및 세포독성이 약하다. 임상 개발의 대부분은 화학요법과의 병용에 집중되어 있다. 최근에, 2상 시험에서 벨리파립과 카보플라틴(carboplatin)의 조합을 표준의 네오아주반트(neoadjuvant) 화학요법에 추가하면 3중-음성 유방암을 가진 여성에게서 결과가 개선된다는 것이 확인되었다 [Rugo H, Olopade O, DeMichele A, et al., Veliparib/carboplatin plus standard neoadjuvant therapy for high-risk breast cancer: First efficacy results from the I-SPY 2 TRIAL. 2013. Abstract S5-02. ]. 루카파립, 니나파립 및 BMN-673의 경우, 단독요법이 BRCA 돌연변이 암 환자에게서 좋은 임상 활성을 나타냈다[Shapiro G, Kristeleit R, Middleton M, et al., Pharmacokinetics of orally administered rucaparib in patients with advanced solid tumors. Mol Cancer Ther, 2013. 12(11 Suppl):Abstract nr A218; Michie C O, Sandhu S K, Schelman W R, et al., Final results of the phase I trial of niraparib (MK4827), a poly(ADP)ribose polymerase (PARP) inhibitor incorporating proof of concept biomarker studies and expansion cohorts involving BRCA1/2 mutation carriers, sporadic ovarian, and castration resistant prostate cancer (CRPC). J Clin Oncol, 2013. 31(suppl; abstr 2513); Bono J S D, Mina L A, Gonzalez M, et al., First-in-human trial of novel oral PARP inhibitor BMN 673 in patients with solid tumors. J Clin Oncol, 2013. 31(suppl; abstr 2580)].

PARP 억제제에 대한 3상 시험은 현재 BRCA 돌연변이 또는 백금 민감성 질환을 갖는 유방 및/또는 난소암 환자에서 진행되고 있다.

(R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 (또는, 화합물 A)는 매우 선택적인 PARP1/2 억제제이다. 화합물 A는 세포 내의 PARP 활성을 강력하게 억제하고 BRCA1/2 돌연변이 또는 다른 HR 결핍을 갖는 세포주의 증식을 특이적으로 억제한다. 화합물 A는 올라파립 보다 훨씬 적은 용량으로 BRCA1 돌연변이 유방암 이종 이식(xenograft) 모델에서 종양 퇴행을 유의하게 유도한다. 화합물 A는 우수한 DMPK 특정 및 유의한 뇌 침투성을 갖는다.

전임상 생화학적, 세포-기반 및 동물 연구에서 생성된 데이터는 화합물 A가 BRCA 유전자 돌연변이 또는 상동 재조합 결핍을 갖는 종양을 억제하는데 있어서 상당한 환자 이점을 제공할 수 있음을 시사한다. 그것은 좋은 뇌 침투성을 갖고 있으며 교모세포종(glioblastoma)과 같은 더 많은 징후로 활성을 나타낼 수 있다. 이러한 독특한 특성은 임상 시험에서 화합물 A의 추가적인 평가를 보증한다.

유리 염기(free base), 즉, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 (또는, 화합물 A)는 매우 선택적이고 강한 PARP1/2 억제제로서 공지되어있다(참조, 본 명세서에서 언급되어 있는 WO 2013/097225 A1).

화합물 A

화합물 A는 4분의 1의 카이랄 중심을 갖는 다중 고리 융합 복합체이다. 유리 염기 형태의 화합물 A는 원래 “카이랄 풀(chiral pool)” 방법을 통하여 수득되었는데, 이는 중간체 및 최종 생성물의 정제를 위해 다수의 크로마토그래피 컬럼(chromatography columns)이 요구되기 때문에 확대(scale-up)하기에 매우 비효율적이고 어려웠다. 게다가, 이러한 방법으로 제조된 화합물 A는 제조 공정 동안에 부분적인 라세미화(racemization)가 발생하기 때문에 광학적인 순도가 만족스럽지 못하다(명시한 이유는 불확실함에도 불구하고). 그러므로, 제형 개발을 위하여 재현성 및 좋은 품질을 갖는 화합물 A(특히 이의 결정형)의 대규모 제조에 적합한 공정이 대단히 요구된다.

본 발명의 목적은, 제형 개발을 위하여 재현성 및 좋은 품질을 갖는 화합물 A(특히 이의 결정형)의 대규모 제조에 적합할 뿐만 아니라 BRCA1/2 돌연변이 또는 HR-결핍성 암의 치료에 효과적인 화합물 A의 일부 형태를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은, 화합물 A의 일부 형태에 대한 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 화합물 A의 일부 형태에 대한 약제학적 용도를 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 Ⅰ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 하이드레이트(hydrate)/용매화물을 제공한다.

본 발명은 또한, 화학식 Ⅱ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 하이드레이트(hydrate)를 제공한다.

본 발명은 또한, 유리 염기(free base) 형태인 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 또한, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)의 결정형 C의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 화학식 Ⅲ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 결정형의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 화합물과 약제학적으로 허용 가능한 담체(carrier)를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 화합물 또는 상기 약제학적 조성물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자의 질병 또는 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 화합물의 BRCA1/2 돌연변이 활성 또는 다른 HR(homologous recombination) 결핍과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 약물 제조에 있어서의 용도를 제공한다.

본 발명에 따르면, 화합물 A의 하이드레이트(hydrate)/용매화물 또는 이의 결정질 형태는 PARP 패밀리(family)에 대한 강력한 억제 활성을 가지고 있는 반면, 독성이 적으며, 대규모 약제학적 제조에 적합하여 BRCA1/2 돌연변이 활성 또는 다른 HR(homologous recombination) 결핍과 관련된 질병 또는 장애의 치료 및 예방에 중요한 역할을 할 것으로 기대된다.

도 1은 화합물 A의 절대 구조를 나타낸다.
도 2는 단일 결정(single crystal)에서 화합물 A 세스퀴-하이드레이트(Sesqui-Hydrate)의 결정형 C**의 단위 세포를 나타낸다.
도 3은 단일 결정에서 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C**의 수소 결합을 도시한다.
도 4는 단일 결정에서 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C**의 모의(simulated) 및 실험적인 XRPD 패턴을 나타낸다.
도 5는 화합물 A의 결정형 A의 X-선 회절 패턴(X-ray diffraction pattern)을 나타낸다(아이소프로판올(isopropanol)/물로부터 재결정화에 의해 수득된).
도 6은 화합물 A의 결정형 B의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 7A 및 7B는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C 및 C*의 X-선 회절 패턴을 각각 나타내며, 결정형 C는 실시예 1에서 개시된 바와 같이 아이소프로판올/물로부터 재결정화에 의해 대규모로 제조되었으며, 결정형 C*는 실시예 5에서 개시된 바와 같이 실험실 규모로 제조된 것을 특징으로 한다.
도 8은 화합물 A의 결정형 D의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 9는 화합물 A의 결정형 E의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 10은 화합물 A의 결정형 F의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 11은 화합물 A의 결정형 G의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 12는 화합물 A의 결정형 H의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 13은 화합물 A의 결정형 I의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 14는 화합물 A의 결정형 J의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 15는 화합물 A의 결정형 K의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 16은 화합물 A의 결정형 L의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 17은 화합물 A의 결정형 C의 ¹H-NMR 스펙트럼(spectrum)을 나타낸다.
도 18은 화합물 A의 결정형 C의 ¹³C-NMR 스펙트럼을 (spectrum)을 나타낸다.
도 19는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 DVS(Dynamic Vapor Sorption) 스펙트럼을 나타낸다.
도 20은 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 DSC(Thermogravimetric Analyzer) 스펙트럼을 나타낸다.
도 21은 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 TGA(Differential scanning calorimetry) 스펙트럼을 나타낸다.

본 발명은 일 관점에서, 단일 결정(single crystal)에서 화합물 A 세스퀴-하이드레이트(Sesqui-Hydrate)의 결정형 C**을 제공한다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C**의 구조는 IPA/물로부터 실온에서 증기 확산을 통하여 성장된 단일 결정(single crystal)으로부터 수집된 회절 데이터 세트를 사용하여 단일 결정으로 결정되었다. 결정 데이터 및 구조 정제(refinement)는 표 1에 나열되어 있다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C**의 결정 구조는 IPA/물로부터 실온에서 증기 확산을 통하여 성장된 단일 결정으로부터 수집된 회절 데이터 세트를 사용하여 성공적으로 결정되었다. 화합물 A의 절대 구조는 도 1에 도시되었다. 결과는 세스퀴-하이드레이트의 단일 결정이 수득되었음을 나타낸다. C4 (R)의 구성이 결정되었다. 단일 결정에서 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 단위 세포는 도 2에 나타냈다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C**의 수소 결합은 도 3에 나타냈다. 지그재그 체인(zigzag chain)은 수소 결합 N11--H11……N5, N7--H7……O4 및 N15--H15……O2을 통하여 형성되었다. 이들 지그재그 체인은 (N2--H2……O6, O6--H6A……N9, O9--H9A……N1 및 N6--H6……O9) 사이 그리고 3차원 구조를 형성하는 체인 (O8--H8B …… O5, N10--H10 …… O7, N14--H14 …… O8, O5--H5B …… O1, O7--H7A …… N8, O7--H7B……O5, O8--H8A……O3 및 O10--H10B……O3) 내의 수소 결합에 의해 연결된다. 단일 결정으로부터 계산된 이론적인 XRPD 패턴 및 실험적인 XRPD 패턴은 매우 유사하며 도 4에 도시되었다.

본 발명의 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 A를 제공한다. 도 5에 나타난 바와 같이, 결정형 A의 X-선 분말 회절 스펙트럼(X-ray powder diffraction spectra)은 전형적으로 하기의 피크 회절 각(peak diffraction angles)을 갖는다(“간격(spacing)”이 도 5의 “d-값(d-value)”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 B를 제공한다. 도 6에 나타난 바와 같이, 결정형 B의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 6의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 대규모로 실시예 1에서 개시된 공정에 의해 제조된, 화합물 A (세스퀴-하이드레이트)의 결정형 C를 제공한다. 도 7A에 나타난 바와 같이, 결정형 C의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 7의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 실험실 규모로 실시예 5에서 개시된 공정에 의해 제조된, 화합물 A (세스퀴-하이드레이트)의 결정형 C*를 제공한다. 도 7B에 나타난 바와 같이, 결정형 C*는 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는 X-선 분말 회절 스펙트럼을 갖는다(“간격”이 도 7의 “d-값”으로 표시된다):

[표 4*]

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C는 약 50 미크론(microns)의 평균적인 입자 크기 (D90)을 갖는 다소 안정한 결정형이며, 임상적인 용도를 위한 약물 제품으로 용이하게 제형화 될 수 있다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C 및 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C*은 실질적으로 동일한 피크 위치를 가지며, 반면에 상대적인 강도(intensity)는 도 7A 및 7B에 나타난 바와 같이 다양하다.

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 D를 제공한다. 도 8에 나타난 바와 같이, 결정형 D의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 8의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 E를 제공한다. 도 9에 나타난 바와 같이, 결정형 F의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 9의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 F를 제공한다. 도 10에 나타난 바와 같이, 결정형 F의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 10의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 G를 제공한다. 도 11에 나타난 바와 같이, 결정형 G의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 11의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 H를 제공한다. 도 12에 나타난 바와 같이, 결정형 H의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 12의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 I를 제공한다. 도 13에 나타난 바와 같이, 결정형 I의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 13의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 J를 제공한다. 도 14에 나타난 바와 같이, 결정형 J의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 14의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 K를 제공한다. 도 15에 나타난 바와 같이, 결정형 K의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 15의 “d-값”으로 표시된다):

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 화합물 A의 결정형 L을 제공한다. 도 16에 나타난 바와 같이, 결정형 L의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 전형적으로 하기의 피크 회절 각을 갖는다(“간격”이 도 16의 “d-값”으로 표시된다):

상기 기재된 결정형 A, B, C, C*, D, F, G, H, I, J, K 및 L에 대하여, 주요 피크(즉, 가장 특징적인, 유의한, 고유의 및/또는 재현가능한 피크)가 요약되었다; 추가적인 피크는 종래의 방법에 의해 회절 스펙트럼으로부터 수득될 수 있다. 상기 기재된 주요 피크는 오차 범위 이내에서 재현될 수 있다(마지막에 주어진 소수점 자리에서 + 또는 - 2, 또는 명시된 값에서 + 또는 - 0.2).

화합물 A의 결정형 A, B, C, C*, D, F, G, H, I, J, K 및 L은 TGA에서의 중량 손실(wt%)에 기초하여 무수물, 하이드레이트 및 용매화물로서 추측된다:

분해 전의 샘플에 대하여 용융 흡열(melting endotherm)이 관찰되지 않았다.

결정형 A, B, C, C*, D, F, G, H, I, J, K 및 L의 상호 전환을 표 15에 나타냈다(형태 A는 다형체 스크리닝 작업을 위한 출발 물질로서 사용되었다):

4가지의 하이드레이트 중에서(형태 A, C, C* 및 G), 형태 C는 API로서 화합물 A의 제조 공정 동안에 가장 실용적이고 안정한 결정형인 것으로 밝혀졌다. 매우 높은 온도에서 하이드레이트 또는 하이드레이트/용매화물을 가열하는 단계는 물 또는 용매의 손실 및 무수물의 생산을 야기하지만, 이 공정이 다양한 결정형의 상호전환을 연구하기 위해 사용되며 화합물 A의 제조에 있어 실용적이지 않을 수 있다는 점은 주목할 만하다.

본 발명은 다른 측면에서, 상당한 순도의 결정형 A, B, C, C*, C**, C***, D, F, G, H, I, J, K 및 L을 제공한다. 즉, 각각의 결정형은 화합물 Ⅰ의 하나의 특정 결정형에서 실질적으로 순수하고 화합물 Ⅰ의 다른 결정형을 실질적으로 함유하지 않는다. 본 발명의 하나의 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 A를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 B를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 C를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 D를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 F를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 G를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 H를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 I를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 J를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 K를 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시예에서는, 97.0%; 97.5%; 98.0; 98.5%; 98.6%; 98.7%; 98.8%; 98.9%; 99.0%; 99.1%; 99.2%; 99.3%; 99.4%; 99.5%; 또는 그 이상의 순도 레벨과 같은, 상당한 순도의 결정형 L을 제공한다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 화학식 Ⅰ, 화학식 Ⅱ 및 화학식 Ⅲ의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명의 하나의 실시예에서는, 반응식 1에서 표현된 과정에 따라서 제조 또는 정제된 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C를 제공한다. 본 명세서에서 개시하고 있는 새로운 합성 방법과 결정화/재결정화 공정은 (+)-다이-p-메틸벤조일-D-타타르산((+)-di-p-methylbenzoyl-D-tartaric acid)과 같은 카이랄 산과의 부분 입체 이성질체 염의 형성 및 재결정화를 통한 화합물 A 유리 염기(free base)의 개선된 광학적 순도와 같이, 이전에 보고된 공정과 관련된 많은 문제점을 극복하고, 기존의 공정에 비하여 많은 장점을 제공한다. 특히, 본 명세서에 개시된 방법은 고품질 및 양호한 수율인 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 재현 가능하고, 상업적인-규모의 제조에 적합하다.

반응식 1: 화합물 A의 대규모 합성 공정

반응식 1에 도시된 바와 같이, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 대규모로 유리 염기 형태의 화합물 A를 제조하는 방법을 제공한다:

R₁ 및 R₂는 C_1-6알킬 또는 할로 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고; LG는 Ts와 같은 이탈기인 것을 특징으로 한다.

반응식 2: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 합성 공정 (결정형 C)

반응식 2에 도시된 바와 같이, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 대규모로 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형을 제조하는 공정을 제공한다:

i. 조 화합물 A-2(Compound A-crude 2)를 수득하기 위하여 알칼리의 존재 하에 적합한 용매(예를 들어, 알코올, 추가로 예를 들어, 아이소프로필 알코올)내에서 분할제(resolving agent)(예를 들어, 카이랄 산,예: (+)-다이-p-메틸벤조일-D-타타르산)와 화합물 A의 유리 염기(free base)를 반응시키는 단계;

ii. 화합물 A의 결정형을 수득하기 위하여 특정 시간 동안에 특정한 온도의 i-PrOH와 물과 같은 혼합된 용매 내에서 조 화합물 A-2(Compound A-crude 2)를 재결정화시키는 단계.

화합물 A의 결정형은 다음의 일반적인 방법에 의해 제조될 수 있다: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C는 완전히 용해될 때까지 가열된다. 여과, 냉각, 결정화, 여과 및 냉각 후에, 상응하는 상이한 결정형이 수득된다. 화합물 A의 결정형 A를 제조하기 위한 결정화 공정의 예는 실시예 3(하기)에 기재되어 있다. 상기에 기재된 결정화는 단일 용매, 유기 용매의 혼합물, 또는 물과 유기 용매의 혼합물 내에서 수행될 수 있다. 결정화를 위한 적합한 유기 용매는 저급 알킬 알코올(lower alkyl alcohols), 케톤(ketones), 에터(ethers), 에스터(esters), 할로겐화 탄화수소(halogenated hydrocarbons), 알케인(alkanes), 할로겐화 벤젠(halogenated benzene), 지방족 나이트릴(laliphatic nitriles), 및 다른 방향족(aromatic) 용매로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직한 용매는 예를 들어, 아이소프로판올(isopropanol), 에틸 아세테이트(ethyl acetate), 물, N,N-다이에틸포름아마이드(N,N-dimethylformamide), 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 아세톤(acetone), 아세토나이트릴(acetonitrile), 및 이들의 혼합물을 포함한다.

본 명세서에서 용어 “저급 알킬 알코올(lower alkyl alcohols)”은 직쇄 또는 분지쇄 C₁-C₈, 바람직하게는 C₁-C₆, 보다 바람직하게는 C₁-C₄ 알킬 알코올을 포함한다. 구체적인 예로는 메탄올, 에탄올, 아이소프로판올 및 부탄올을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

본 명세서에서 용어 “약”은 다른 언급이 없는 한, 수(예를 들어, 온도, pH, 부피 등)는 ±10% 이내, 바람직하게는 ±5% 이내로 변할 수 있음을 나타낸다.

본 명세서에서 용매화물은 예를 들어, 용질의 분자 또는 이온과 용매 분자의 조합과 같은 용매화에 의해서 형성되는 화합물로서 정의된다. 공지된 용매 분자는 물, 알코올 및 다른 극성 유기 용매를 포함한다. 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 아이소프로판올, n-부탄올, 아이소부탄올 및 t-부탄올을 포함한다. 알코올은 또한 폴리알킬렌 글리콜(polyalkylene glycols)과 같은 중합된 알코올(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜)도 포함한다. 바람직한 용매는 전형적으로 물이다. 물과의 용매화에 의해 형성된 용매화물은 하이드레이트로 종종 언급된다.

본 발명의 결정형의 결정화는 또한 용매 시스템에서 과-포화를 달성하기 위한 용매의 증발, 냉각 및/또는 반-용매(anti-solvent)(화합물 A 세스퀴-하이드레이트를 덜 용해할 수 있는 용매, 본 명세서에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지는 않음)의 첨가에 의하여 적합한 용매 시스템 내에서 수행될 수 있다.

결정화는 본 명세서에 기재된 결정 씨드(seed crystals)을 사용하거나 사용하지 않고 수행될 수 있다.

본 명세서에 기재된 각각의 결정형은 결정화 공정의 특정 열역학 및 평형 특성에 의존하는 특정 조건하에서 개발되었다. 그러므로, 당업자는 형성된 결정이 결정화 공정의 운동 및 열역학적 특성의 결과임을 알 것이다. 특정 조건 하에서(예를 들어, 용매, 온도, 압력 및 화합물의 농도), 특정 결정형은 다른 결정형 보다 더 안정할 수 있다(또는 실제로 임의의 결정형 보다 더 안정하다). 그러나, 특정 결정의 상대적으로 낮은 열역학적 안정성은 유리한 운동 안정성을 갖는다. 시간, 불순물 분포, 교반 및 결정 씨드의 존재 또는 부존재 등과 같은 운동 이외의 추가적인 요소 또한 결정형 애 영향을 미칠 수 있다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 상기-기재된 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L 중 임의의 화합물 A, 특히 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 유효량과 약제학적으로 허용 가능한 담체를 각각 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 활성 화합물은 조성물의 1-99% (중량으로), 바람직하게는 1-70%(중량으로), 또는 보다 바람직하게는 1-50%(중량으로), 또는 보다 바람직하게는 5-40%(중량으로)일 수 있다.

정제(tablet), 캡슐(capsule), 알약(pill), 분말(powder), 멸균 용액, 현탁액(suspension) 또는 에멀전(emulsion)과 같은 형태의 서방형(sustained release) 주사 형태로 경구 투여되거나; 페이스트(paste), 크림(cream), 또는 연고(ointment)와 같은 국소 치료 형태를 통하여; 또는 좌약과 같은 직장 투여 형태를 통하여 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 정확한 투약 용도에 적합한 단위 투약 형태일 수 있다. 게다가, 약제학적 조성물은 다른 활성 성분을 포함할 수 있다.

적합한 약제학적 담체는 물, 다양한 유기 용매 및 다양한 불활성 희석제 또는 충전제를 포함한다. 필요하다면, 약제학적 조성물은 향신료, 접착제(adhesive) 및 부형제(excipient)와 같은 다양한 첨가제를 함유할 수 있다. 경구 투여의 경우, 정제 및 캡슐은 시트르산, 전분, 알긴산(alginic acids), 및 몇몇 규산염(silicate)와 같은 다양한 붕해제(disintegrating agent), 및 수크로오즈(sucrose), 젤라틴 및 아라비아검(Arabic gum)과 같은 다양한 접착제와 같은 다양한 부형제를 함유할 수 있다. 또한, 마그네슘 스테아르산염(stearate)과 탈크(talc) 충전제를 포함하는 윤활제가 일반적으로 정제의 생성에 사용된다. 동일한 유형의 고체 성분이 또한 연질 및 경질의 젤라틴 캡슐을 제형화하는데 사용될 수 있다. 수성 현탁액이 경구 투여에 사용되는 경우, 활성 화합물은 다양한 감미료(sweetener) 또는 향미료(flavoring agents), 색소(pigment) 또는 염색제 조합물과 혼합 될 수 있다. 필요하다면, 다양한 유화제가 적용되거나 현탁액이 생성될 수 있다; 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 글리세린(glycerin) 또는 그들의 조합물과 같은 희석제가 활용될 수 있다.

상기 기재된 약제학적 조성물은 바람직하게는 경구 투여된다.

상기 기재된 약제학적 조성물은 바람직하게는 캡슐 또는 정제 형태이다.

본 발명은 또 다른 측면에서, Parp1 및 Parp2의 억제제에 반응하는 암의 치료에 유용한 약물 제조에 있어서의 본 발명에 따른 화합물(즉, 화합물A 세스퀴-하이드레이트 및 상기 기재된 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L)의 용도를 제공한다.

본 발명의 하나의 실시예에서는, 포유 동물의 췌장염, 신장 질환, 암, 혈관 신생(angiogenesis), 또는 혈관 신생 관련 질환의 치료 또는 예방에 유용한 약물의 제조에 있어서의 본 발명에 따른 화합물(즉, 화합물A 세스퀴-하이드레이트 및 상기 기재된 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L)의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 화합물 A 세스퀴-하이드레이트 및 다른 유리 염기 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L는 종양 혈관신생(tumor angiogenesis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 죽상동맥경화증(atherosclerosis)과 같은 만성적인 염증성 질환, 건선(psoriasis) 및 피부경화증(scleroderma)과 같은 피부병, 당뇨병 유발성 피부 질환, 당뇨 망막변증(diabetic retinopathy), 조기 망막변증(premature retinopathy), 노화 관련 변성 반점(age-related degeneration stains), 혈관종(hemangioma), 신경교종(glioma), 카포시 내부 종양(Kaposi internal tumor), 난소암, 유방암, 폐암, 췌장암, 림프종(lymphoma), 전립선(prostate), 대장(colon) 및 피부 종양, 및 그들의 합병증으로부터 선택되는, 하지만 이에 제한되는 것은 아닌, 질병의 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에서 언급되는 포유동물 중에서, 인간이 바람직하다.

상기 기재된 치료 방법에 의해서 치료되는 질병은 바람직하게는 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 유방암, 난소암 및 그들의 합병증과 같은 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 종양으로부터 선택된다.

상기 기재된 방법은 임의의 화학적 치료(예를 들어, TMZ 및 도세탁셀(docetaxel)), 생물학적 치료, 또는 방사선 치료와 병용하여 적용될 수 있다.

투여된 활성 성분 또는 화합물의 복용량은 치료할 환자의 개별적인 요구, 투여 경로, 질병 또는 질환의 중증도, 복용 요법(dosing schedule) 뿐만 아니라 지정된 의사의 평가 및 판단에 의해 결정될 것이다. 그러나, 활성 화합물에 기초하여, 유효 복용량의 바람직한 범위는 체중 1kg 당 약 0.01-320mg; 또는 보다 바람직하게는 단일 또는 개별적인 투여에서 체중의 kg 당 0.1-10 mg 일 수 있다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 임상적인 적용을 위한 화합물 A의 결정형을 제공한다. 특히, 본 발명은 암 환자에 대한 하기의 치료 옵션을 갖는 화합물 A의 결정형의 임상 치료에 관한 것이다: 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L로 구성된 군에서 선택되는 화합물 A의 결정형의 복용량은 하루에 1-3회 투여 빈도로 1-320 mg/일 일 수 있다; 바람직한 복용량은 하루에 1-3회 투여 빈도로 5-240 mg/일 이며; 보다 바람직한 복용량은 하루에 2회 투여 빈도로 10-240 mg/일이다.

하기의 합성 방법, 특정 실시예, 및 효능 시험은 본 발명의 임의의 실시예에서 추가로 기재되어 있다. 이들은 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하거나 제한하지 않는다.

실시예

하기의 실시예는 예시적인 것으로 의도되며 사용된 수(예를 들어, 양, 온도, 등)에 관한 정확성을 보장하기 위한 노력을 하였으나, 당업자의 지식 내에서 일부 실험적인 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 다른 언급이 없는 한, 온도는 섭씨 온도이다. 다른 언급이 없는 한 Sigma-Aldrich, Alfa Aesar 또는 TCI와 같은 시중에서 구입한 시약은 추가적인 정제 없이 사용하였다.

다른 언급이 없는 한, 하기의 진술된 반응은 질소 또는 아르곤의 양압(positive pressure) 하에서 또는 무수 용매 내에서 건조 튜브(tube)를 사용하여 수행하였다; 반응 플라스크(flask)는 주사기를 통해 기질 및 시약의 도입을 위해 고무 셉타(septa)가 장착되어 있다; 및 유리제품은 오븐 건조 및/또는 가열 건조 되었다.

¹H NMR 및 ¹³C NMR 스펙트럼은 400 MHz에서 작동하는 Varian 기구 상에서 기록되었다.

무색 판상 결정으로부터의 X-선 강도 데이터는 aBruker APEX-II CCD 회절계(diffractometer) (Cu Kα radiation, λ= 1.54178 Å)를 사용하여 173(2) K에서 측정되었다. 편광 현미경 사진은 실온에서 촬영되었다.

TGA는 TA Instruments Q500 TGA를 사용하여 수행되었다. 온도는 니켈과 TA가 제공한 기준용 분동(standard weights)을 사용하여 보정하였고, 칼슘 옥살레이트 모노하이드레이트(calcium oxalate monohydrate) 탈수 및 분해에 대하여 확인하였다.

DSC는 주름진 팬(pan)으로, 퍼지 가스(purge gas)로서 N₂를 사용하여 10℃/분의 가열 속도로 25℃에서 원하는 온도까지 램핑(ramping)하는 TA instruments Q2000 DSC를 사용하여 수행되었다.

하기의 실시예에서, 아래의 같은 약어가 사용될 수 있다:

AcOH 아세트산(Acetic acid)

ACN 아세토나이트릴(Acetonitrile)

Aq 물의

Brine 포화 염화 나트륨 수용액(Saturated aqueous sodium chloride solution)

Bn 벤질(Benzy)l

BnBr 벤질 브로마이드(Benzyl Bromide)

CH₂Cl₂다이클로로메테인(Dichloromethane)

DMF N,N-다이에틸포름아마이드(N,N-Dimethylformamide)

Dppf 1,1"-bis(diphenylphosphino)ferrocene

DBU 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene

DIEA or DIPEA N,N-다이아이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine)

DMAP 4-N,N-다이메틸아미노피리딘(4-N,N-dimethylaminopyridine)

DMF N,N-다이에틸포름아마이드(N,N-Dimethylformamide)

DMSO 다이메틸 설폭사이드(Dimethyl sulfoxide)

EtOAc 에틸 아세테이트(Ethyl acetate)

EtOH 에탄올(Ethanol)

Et₂O or ether 다이에틸 에터(Diethyl ether)

g 그람(grams)

h or hr 시간(hour)

HATU O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate

HCl 염산(Hydrochloric acid)

HPLC 고속 액체 크로마토그래피(High-performance liquid chromatography)

IPA 2-프로판올(2-propanol)

i-PrOH 아이소프로필 알코올(Isopropyl alcohol)

mg 밀리그람(milligrams)

mL 밀리리터(milliliters)

Mmol 밀리몰(millimole)

MeCN 아세토나이트릴(Acetonitrile)

MeOH 메탄올(Methanol)

Min 분(minutes)

ms or MS 질량 스펙트럼(Mass spectrum)

Na₂SO₄황산 나트륨(Sodium sulfate)

PE 석유 에테르(petroleum ethe)r

PPA 폴리인산(Polyphosphoric acid)

Rt 정체 시간(Retention time)

Rt or rt 실온(Room temperature)

TBAF 테트라-부틸 암모늄 플로라이드(Tetra-butyl ammonium fluoride)

TBSCl 테트라-부틸다이메틸실릴 클로라이드(tert-Butyldimethylsilyl chloride)

TFA 트리플루오르아세트산(Trifluoroacetic acid)

THF 테트라하아드로퓨란(tetrahydrofuran)

TLC 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography)

TMSCl 트리메틸실릴 클로라이드(Trimethylsilyl chloride)

μL 마이크로리터(microliters)

대규모로 유리 염기 형태의 화합물 A 및 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 제조

단계 1: 화합물-2의 합성

t-부틸 브로모아세테이트(t-Butyl bromoacetate) (51.7 Kg)를 무수의 아세토나이트릴 (72 Kg)에 용해하였다. 온도는 65-75℃로 상승시킨 후에, 메틸 피롤린(methyl pyrroline) (22 Kg)을 첨가하였다. 반응이 완료된 후에 반응 혼합물을 농축하고, 잔여 아세토나이트릴을 THF를 첨가한 후 농축함으로써 제거하였다. GC가 완전한 아세토나이트릴의 제거를 나타낸 후에, THF를 더 첨가하고 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고 수집하였다. 44.1 Kg의 황백색 고체 화합물-2를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.91 (s, 2H), 4.15 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), ), 2.14 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)ppm.

단계 2: 화합물-3의 합성

THF 중의 냉각된(-60℃) 트리메틸실릴 아세틴(trimethylsilyl acetyne) (12.4 Kg)의 용액에 헥세인(hexane) (43.4 Kg) 중의 n-부틸 리튬(n-butyl lithium) 용액을 첨가하였다. n-부틸 리튬 용액의 완전한 첨가 후에, 생성된 혼합물을 추가로 1-2 시간 동안 교반한 다음 전체 용액을 -60℃로 냉각된 THF 중의 화합물-2 (31 Kg)의 현탁액으로 옮겼다. 완전한 이동 후에, 생성된 혼합물을 실온까지 데우고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 식히고(quench), 석유로 추출하였다. 유기 상은 brine으로 세척하고, 황산 나트륨(sodium sulfate) 상에서 건조하고, 농축하여 25.1 Kg의 화합물-3을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.34 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.78 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.27 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.68 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.24 (s, 3H), 0.13 (s, 9 H) ppm.

단계 3: 화합물-4의 합성

THF 중의 냉각된 (0-5℃) 70.1kg의 화합물-3 용액에 THF 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드(tetrabutylammonium fluoride (13.3 Kg)를 첨가하였다. 탈-실릴화(de-silylation)가 완료된 후에, 반응물을 물로 식히고, 석유 (290 Kg)로 추출하고, 유기 상을 농축하고 실리카 겔 패드를 통과시켰다. 여과액을 농축하여 48 kg의 화합물-4를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.36 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.28 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.26 (s, 3H)ppm.

단계 4: 화합물-5의 합성

THF 중의 화합물-4의 용액 (48 Kg)을 50-60℃까지 데웠다. 상기 용액에 THF 중의 (-)-다이-p-메틸벤조일-L-타타르산 (69.6 Kg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1-2시간 동안 50-60℃에서 교반한 다음 0-10℃까지 서서히 냉각하였다. 생성된 염 고체를 여과하고 메틸-t-부틸 에터(methyl tert-butyl ether)에서 재-현탁하고 1시간 동안 50-60℃에서 가열하였다. 생성된 고체를 여과하여 황백색의 고체 13.1 Kg을 수득하였다. 고체를 수산화 나트룸(sodium hydroxide) 수용액으로 처리하고, 석유로 추출하고, 농축하여 13.1 Kg의 화합물-5 (ee≥96%)를 수득하였다. %). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.36 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.29 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.70 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.26 (s, 3H) ppm.

단계 5: 화합물-6의 합성

중간체 B (14 Kg), 비스(트리페닐)팔라듐 다이클로라이드 (bis(triphenyl)palladium dichloride) (0.7 Kg), CuI (0.42 Kg) 및 테트라메틸 구아니딘(tetramethyl guanidine) (11.5 Kg)을 DMF에 용해하였다. 생성된 용액을 교반하고 가스를 제거한 다음 질소 하에서 가열하였다. DMF (16 Kg) 중의 화합물-5의 용액 (9.24 Kg)을 드롭방식(dropwise)으로 첨가하였다. 결합(coupling) 후에, 유기 상을 농축하고, 잔여물을 물 (145 Kg)과 t-부틸 에터(t-butyl ether) (104 Kg)로 교반하고, 전체 혼합물을 셀라이트(celite) 패드를 통과시켜, 분리하였다. 유기 상은 물 (165 kg)과 brine (100 Kg) 중의 티오 요소(thiourea) (14 Kg) 용액으로 세척하고, 농축하였다. 잔여물을 n-헵테인 (120 Kg)과 에틸 아세테이트 (28 Kg)의 혼합물에 용해하였다. 용액은 숯 (1.4 kg)과 혼합하고, 1-2시간 동안 40-50 ℃에서 가열하고, 실리카 겔 패드를 통하여 여과하였다. 여과액을 농축하여 화합물-6 고체 (14.89 Kg)와 액체의 여과액(1.24 Kg의 화합물-6을 함유하는, 13 Kg 헵테인 용액)를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.85 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.37 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.22 (m ,1H), 2.94 (d, J = 16.0, Hz, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.29 (s, 3h), 2.26 (m,1 H), 1.82 (m, 2H), 1.49 (s, 3H), 1.43 (s, 9H) ppm.

단계 6: 화합물-7의 합성

상기 화합물-6의 헵테인 용액을 내부 온도를 25℃ 이하로 유지하면서 차가운 트리플루오르메테인 술폰산(trifluoromethane sulfonic acid) (66.1 Kg)에 첨가하였다. 그리고 나서 고체 화합물-6 (14.87 Kg)을 회분식(batchwise)으로 첨가하였다. 화합물-6을 완전히 첨가한 후에, 반응 혼합물을 25-30℃까지 데우고, 반응이 완료될 때까지 교반하였다. 전체 혼합물을 물 (240 Kg) 중의 아세트산 나트륨 (sodium acetate) (123.5 Kg)의 용액에 부었다. 그리고 나서 용액의 pH는 고체 탄산 칼륨(potassium carbonate) (46.1 Kg)을 첨가하여 7-8로 조정하였다. 혼합물은 다이클로로메테인(dichloromethane) (509 Kg)으로 추출하고, 농축하였다. 잔여물은 n-헵테인 (41 Kg)과 혼합하고, 다시 농축하여 침전물을 수득하고, 이를 여과하고 n-헵테인 (8 Kg)으로 세척하고 건조하였다. 8.78 Kg의 화합물-7을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.30 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.68 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.21 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.06 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.49 (s, 3H) ppm.

단계 7: 조 화합물 A-1(Compound A-crude 1)의 합성

화합물-7 (8.76 Kg)을 메탄올 (69 Kg)에 용해시키고 내부적으로 25℃ 이하로 냉각하였다. 내부 온도를 25℃ 이하로 유지하면서 아세트산 (9.3 Kg)과 하이드라진 하이드레이트(hydrazine hydrate) (7.4 Kg, 85%)을 첨가하였다. 가스를 제거하고 질소로 채운 후에 (3회 반복), 반응 혼합물 4시간 동안 55-60℃에서 교반하였다. 완전한 반응 후에, 혼합물을 물 (29 Kg)과 혼합하였다. 유기 상을 농축하고 물 (40 Kg) 중의 탄산 칼륨 (12.5 Kg)을 첨가하였다. 생성된 고체를 여과하고, 물 (18.3 Kg)로 세척하였다. 고체를 물 (110 Kg)으로 슬러리화(slurred)하고, 원심분리하고, 건조하고 에탄올 (9.4 Kg)으로 슬러리화하고, 원심분리하고, 여과하고, 에탄올로 세척하고 진공에서 건조하여 조 화합물 A-1(Compound A-crude 1)을 수득하였다. ¹H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 12.0 (s, 1H), 10.2 (s, 1H), 7.31 (dd, 1H, J=9.6, 2.0 Hz), 7.19 (dd, 1H, J=9.6, 2.0 Hz), 3.77 (d, 1H, J=16.4 Hz), 3.34 (d,1H, J=16.4 Hz), 2.97-3.02 (m, 1H), 2.54-2.58 (m, 1H), 2.35-2.40 (m, 1H), 1.90-1.94 (m, 1H), 1.73-1.75 (m, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.43-1.45(m, 1H) ppm. MS (ESI) m/e [M+1]+ 299.

단계 8: 조 화합물 A-2(Compound A-crude 2)의 합성

질소 보호 하에, 화합물 A (Crude 1) (7.88 Kg)을 아이소프로판올 (422 Kg)과 교반하고 고체가 완전히 사라질 때까지 1-2시간 동안 70-80℃에서 가열하였다. 아이소프로판올 (84.4 Kg) 중의 (+)-다이-p-메틸벤조일-D-타타르산 (10.25 Kg) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 14-16시간 동안 교반하고, 여과하고 아이소프로판올 (16 Kg)으로 세척하고 건조하였다. 생성된 염을 물 (118 Kg) 중의 탄산 칼륨 (6.15 Kg)의 교반된 용액에 첨가하였다. 침전물을 원심분리하고, 여과하고, 물 (18 Kg)로 세척하였다. 고체를 물 (110 Kg)으로 슬러리화(slurred)하고, 원심분리하고, 건조하였다. 고체를 THF (75 Kg)에 용해시키고, 활성 탄소 (0.8 Kg)를 첨가하였다. 혼합물은 가스를 제거하고 질소로 재-보호하고, 교반하고 1-2시간 동안 40-50℃에서 가열하고, 냉각하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축하여 추가적으로 에탄올 (6.5 Kg)로 슬러리화 된 고체를 수득하고, 여과하여 5.6 Kg의 화합물 A 미정제(crude) 2를 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.0 (s, 1H), 10.2 (s, 1H), 7.31 (dd, 1H, J=9.6, 2.0 Hz), 7.19 (dd, 1H, J=9.6, 2.0 Hz), 3.77 (d, 1H, J=16.4 Hz), 3.34 (d,1H, J=16.4 Hz), 2.97-3.02 (m, 1H), 2.54-2.58 (m, 1H), 2.35-2.40 (m, 1H), 1.90-1.94 (m, 1H), 1.73-1.75 (m, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.43-1.45(m, 1H) ppm. MS (ESI) m/e [M+1]+ 299.

단계 9: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 합성

조 화합물 A-2(Compound A-crude 2) (5.3 Kg)를 아이소프로판올 (41.6 Kg)과 물 (15.9 Kg)의 용액과 혼합하였다. 혼합물은 가스를 제거하고 질소 하에 재-보호한 후에 60℃까지 가열하고 고체가 완전히 사라질 때까지 2-4시간 동안 교반하였다. 온도는 70-80℃로 상승시키고 물 (143 Kg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70-80℃의 내부 온도로 가열하고 나서 가열 단계는 중지하지만 16시간 동안 부드럽게 교반하였다. 침전물을 여과하고, 물 (19 Kg)로 세척하고 2시간 동안 물 (21 kg)로 슬러리화 하였다. 생성된 고체는 여과하고 물 (20 Kg)로 세척하였다. 여과된 고체는 24-36시간 동안 45℃ 이하의 온도에서 건조하였다. D90=51.51um, D50=18.62 um, D10=7.63 um의 입자 크기를 갖는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트 (4.22 kg)를 수득하였다. PSD의 이 범위는 제형화 개발에 가장 이상적이다.

분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)은 결정형 C의 구조를 특성화하기 위해 사용되었다, 참조 도 7A. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C에 대한 ¹H NMR 스펙트럼은 도 17에 나타냈다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C에 대한 ¹³C-NMR스펙트럼은 도 18에 나타냈다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C에 대한 DVS 스펙트럼은 도 19에 나타냈다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C에 대한 TGA 스펙트럼은 도 20에 나타냈으며, 0.5 물 분자는 50℃에서 손실되고 또 다른 1.0 물 분자는 100℃에서 손실되어, 확인된 결정형 인 물 분자의 수는 1.5이다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트 결정형 C의 DSC 스펙트럼은 도 21에 나타냈다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 정량적인 원소 분석은 표 16에 제시되어 있다. C, H, N 함량의 절대적인 차이는 0.3% 미만이고 분자식인 C₁₆H₁₅FN₄O·1.5H₂O와 일치한다. 분석은 2회 수행하였다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 생성에서 사용된 모든 용액의 잔여 수준은 임상 배치 (03035-20131201)에서 실험하고 ICH 표준보다 이하로 잘 조절하였다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 물 함량은 8.6% (KF 방법)인 것으로 밝혀졌으며, 이는 분자식인 C₁₆H₁₅FN₄O·1.5H₂O의 이론적인 수분 함량과 일치한다(도 20의 TGA 도면에서 입증된 바와 같이 8.3%).

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 수용해도(aqueous solubility)는 매우 낮으나 (~0.04 mg/mL), 위액(stomach juice) (SGF)에서의 용해도는 매우 높다 (~4.5 mg/mL). 이 극적인 용해도 차이는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C를 좋은 형태의 약물 물질 (API)로 만든다. 화합물 A API의 재결정화 및 슬러리는 API를 위한 바람직한 용매 시스템인 물-알코올 용액 내에서 용이하게 수행될 수 있다. SGF에서의 높은 용해도는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트가 위에서 바르게 용해되고 흡수되도록 한다.

반응식 3: 중간체 B의 제조

단계 1': 화합물-9의 합성

시중에 판매중인 화합물-8 (50 Kg)을 진한 황산 (349.5 Kg)에 용해시키고 교반하였다. 진한 질산 (95%, 24.9 Kg) 및 진한 황산 (50.0 Kg)을 첨가하고 내부의 온도는 35-43℃ 사이로 조절하였다. 반응 혼합물을 얼음-물에 부었다. 생성된 현탁액을 원심분리하고 고체는 수집하여 물 (245 Kg)로 슬러리화하고, 원심분리하고 45℃에서 공기 흐름으로 건조하여 48.5 Kg의 화합물-9를 수득하였다.

단계 2': 화합물-10의 합성

화합물-9 (48.5 Kg)를 메탄올 (121.5 Kg)에 용해시키고 염화티오닐(thionyl chloride) (49.5 Kg)을 첨가하였다. 에스테르화(esterification)가 완료된 후에, 반응 혼합물을 2-12시간 동안 0-5℃까지 냉각하였다. 침전물을 원심분리하고 여과하고, 메탄올로 세척하고, 물로 슬러리화 하고, 다시 원심분리하고 여과하고, 건조하여 26.4 Kg의 화합물-10을 수득하였다. ¹H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 7.98 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H) ppm.

단계 3': 화합물-11의 합성

화합물-10을 에탄올 (106 Kg)과 물 (132 Kg)의 혼합물에 용해시켰다. 염화 암모늄(Ammonium chloride) (26.4 Kg)을 첨가하고 나서, 철분(iron powder) (26.4 Kg)을 회분식으로 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 75-85℃에서 교반하고, 실온까지 냉각하고, 에틸 아세테이트 (236 Kg)로 추출하였다. 유기 상은 NaHCO3 수용액 (230 Kg) 다음으로 설페이트 수용액으로 세척하고, 농축하여 24 Kg의 화합물-11을 수득하였다. ¹H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 6.73 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 6.63 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 1H), 5.92 (s, 2H), 3.82 (s, 3H) ppm.

단계 4': 중간체 B의 합성

화합물-11 (24.6 Kg)을 메틸렌 다이클로라이드(methylene dichlororide) (240 Kg)와 피리딘 (24.3 Kg)의 혼합물에 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 톨루엔 설포닐 클로라이드(Toluene sulfuonyl chloride) (18.5 Kg)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하고 20-22시간 동안 38-45℃에서 가열하였다. 물 (187 Kg)을 첨가하고 교반하고 분리하였다. 유기 상은 진한 염산(hydrochloric acid) (49 Kg)과 물 (49 Kg)으로 세척하고 농축하고 석유를 첨가하였다. 대량의 침전물이 형성되었다. 여과되고 건조하여 미정제(crude)의 중간체 B를 수득하였다. 미정제 생성물을 톨루엔 (32 Kg)에 용해시키고 모든 침전물이 완전히 사라질 때까지 60-65℃에서 가열하였다. 용액을 20분 동안 교반하고 5-15℃까지 냉각하고 그대로 방치하였다. 현탁액은 원심분리하고 분리하였다. 생성된 고체는 톨루엔 (24.6 Kg)과 석유 (37 Kg)의 혼합물로 슬러리화 하고, 여과하고 석유로 세척하고, 건조하여 좋은 품질의 중간체 B를 수득하였다. ¹H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 10.27 (s, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.45 (m, 3H), 7.18 (dd, J = 9.6, 3.2 Hz, 1H) ppm.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 장기간 안정성 연구는 25℃/60%RH에서 12개월(Assay w/w: T0 = 99.1% 및 T12 = 99.0%) 및 40℃/75%RH 조건에서 12개월 (Assay w/w: T0 = 99.0% 및 T12= 98.9%)까지 보관하는 경우 유의한 화학적인 순도 변화가 발생하지 않음을 확인하였다. 게다가, 25℃/60%RH에서 12개월 및 40℃/75%RH 조건에서 12개월까지 보관하는 경우에 결정형 및 광학 순도 변화가 관찰되지 않았다.

용해도 연구는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C가 물 (0.04 mg/mL)에 거의 용해되지 않았지만, SGF (위액)에서는 매우 잘 용해되었고 4.5 mg/mL의 용해도가 얻어진 것을 확인하였다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C는 약간 흡습성인 것으로 밝혀졌다.

화합물 A 단일 결정형 C**의 제조

단일 결정 성장 스크리닝(single crystal growth screening)은 용매, 온도 및 재결정화 방법을 변화시킴으로써 94가지의 상이한 조건 하에서 수행되었으며, 구조 결정에 적합한 단일 결정은 IPA/물로부터 실온에서 증기 확산에 의해 수득되었다. 화합물 A의 결정 구조는 단일 결정으로부터 수집된 분절 데이터 세트를 사용하여 성공적으로 결정되었다.

화합물 A 단일 결정형 A의 제조

화합물 A의 결정형 A는 i-PrOH/물의 용액 내에서 화합물 A 유리 염기의 재결정화에 의해 수득되었다.

결정형 A는 부분적인 탈수를 야기하는 진공 상태에서 건조하면서, 실시예 1에서와 유사한 공정, 즉, i-PrOH/물로부터 재결정화에 의해 제조하였다.

절차: 화합물 A (23 g, 77.2 mmol)는 i-PrOH/물 (240ml/360ml)의 용액 내에서 현탁하고 환류(reflux) 온도까지 가열하고(약 86℃), 전체 고체가 용해될 때까지 약 3.0시간 동안 환류 온도에서 교반하였다. 혼합물을 교반하면서 65℃까지 서서히 냉각시키고 (약 1℃/분), 결정 씨드을 첨가한 후에 (약 20 mg, 99.1% ee), 실온까지 냉각을 지속하고, 실온에서 밤새 방치하였다 (약 16시간). 그리고 나서 혼합물을 여과하고, 물(80 mL x 2)로 세척하였다. 그리고 고체는 진공 상태에서 2시간 동안 40℃에서 건조하여 표제 생성물(title product) (18 g)을 결정질 결정으로서 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 A의 구조를 특성화하였다; 도 6 참조. 결과는 결정형 A가 하이드레이트임을 확인하였고, TGA 결과는 상기 표 14에 나타낸 바와 같이 150℃까지 4.7 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 285.0℃(개시 온도(onset temperature))에서 용융 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 B의 제조

화합물 A 유리 염기 결정형 B 샘플은 실온의 MTBE(Methyl Tertiary Butyl Ether) 내에서 슬러리 유리 염기 결정형 A를 통하여 수득하였다.

절차: 1.5-mL 바이알(vial)에 형태 A의 고체 15.1 mg을 칭량하고(weigh), 0.3 mL의 MTBE를 바이알에 첨가하여 현탁액을 수득하였다. 혼합물을 실온에서 800 RPM의 속도로 2일 동안 자기적으로 교반하고 결정형 B를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 B의 구조를 특성화하였다; 도 6 참조. TGA 결과는 150℃까지 6.0 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 285.0℃(개시 온도)에서 분해 전에 3 개의 중첩된 흡열을 나타냈다.

화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C*의 제조를 위한 대안적인 공정

결정형 C*는 2-메틸테트라하이드로퓨란(2-methyltetrahydrofuran) 용액과 물 사이의 증기 확산을 통하여 실험실 규모로 수득하였다. 실시예 1에서 대규모로 제조된 결정형 C와 구별하기 위하여, 실시예 5에서 실험실 규모로 제조된 이 결정형 는 결정형 C*라고 언급된다(결정형 C* 또한 때로는 실험실 규모의 결정형 C로 언급되고, 결정형 C는 또한 때로는 대규모의 결정형 C로 언급됨).

3-mL 바이알에 형태 A의 고체 18.9 mg을 칭량하고(weigh), 0.4 mL의 2-메틸테트라하이드로퓨란을 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. 3-mL 바이알을 3 mL의 물과 함께 20-mL 유리 바이알에 봉인하였다. 이 시스템을 실온에서 2일 동안 유지하여, 증기가 용액과 상호작용하도록 하여 결정형 C*를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 도 7B와 일치하는, 생성된 결정형 의 구조를 특성화하였다. TGA 결과는 150℃까지 8.9 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 281.9℃에서 분해 전에 두 개의 흡열 및 발열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 D의 제조

화합물 A의 결정형 D 샘플은 화합물 A의 결정형 A의 아세트산 용액 안에 톨루엔의 반-용매(anti-solvent) 첨가를 통하여 수득하였다.

절차: 20-mL 유리 바이알에 형태 A의 고체 16.3 mg을 칭량하였다. 0.2 mL의 아세트산을 바이알에 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. 실온에서 교반한 후에 혼탁함(Cloud)이 관찰되었다. 용액에 2 mL의 톨루엔을 단계적으로 첨가하여 보다 많은 침전을 유도하여 결정형 D를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 D의 구조를 특성화하였다; 도 8 참조. TGA 결과는 160℃까지 34.5 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 269.5℃에서 분해 전에 세 개의 중첩된 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 E의 제조

화합물 A의 결정형 E 샘플은 화합물 A 유리 염기 결정형 A와 DMA 증기 사이의 증기 확산을 통하여 제조되었다.

절차: 3-mL 유리 바이알에 형태 A의 고체 12.2 mg을 칭량하였다. 3-mL 바이알을 2 mL의 DMA과 함께 20-mL 유리 바이알에 봉인하였다. 이 시스템을 실온에서 7일 동안 유지하여, 증기가 고체와 상호작용하도록 하여 결정형 E를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 E의 구조를 특성화하였다; 도 9 참조. TGA 결과는 150℃까지 38.3 wt%의 중량 손실을 나타냈다(결정질의 하이드레이트 분자 포함). DSC 결과는 277.1℃에서 분해 전에 2 개의 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 F의 제조

화합물 A의 결정형 F 샘플은 화합물 A의 결정형 A 고체와 아세트산 증기 사이의 증기 확산을 통하여 제조되었다.

절차: 3-mL 유리 바이알에 형태 A의 고체 11.0 mg을 칭량하였다. 3-mL 바이알을 2 mL의 아세트산과 함께 20-mL 유리 바이알에 봉인하였다. 이 시스템을 실온에서 7일 동안 유지하여, 증기가 고체와 상호작용하도록 하여 결정형 F를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 F의 구조를 특성화하였다; 도 10 참조. TGA 결과는 160℃까지 34.5 wt%의 두 단계 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 277.1℃에서 분해 전에 4 개의 중첩된 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 G의 제조

화합물 A의 결정형 G 샘플은 25℃에서 DVS (dynamic vapor sorption) 시험 동안 화합물 A 결정형 A의 습도-유도된 상전이를 통하여 제조되었다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 G의 구조를 특성화하였다; 도 11 참조. TGA 결과는 150℃까지 6.5 wt%의 두 단계 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 284.9℃(개시 온도)에서 분해 전에 3 개의 중첩된 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 H의 제조

화합물 A의 결정형 H 샘플은 화합물 A의 결정형 E를 80℃까지 가열하고 질소 보호 하에서 실온까지 냉각하는 단계를 통하여 제조되었다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 H의 구조를 특성화하였다; 도 12 참조. TGA 결과는 150℃까지 24.8 wt%의 두 단계 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 277.9℃(개시 온도)에서 분해 전에 2 개의 중첩된 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 I의 제조

화합물 A의 결정형 J 샘플은 화합물 A의 결정형 E를 150℃까지 가열하고 질소 보호 하에서 실온까지 냉각하는 단계를 통하여 제조되었다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 I의 구조를 특성화하였다; 도 13 참조. TGA 결과는 150℃까지 1.8 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 277.0℃(개시 온도)에서 분해 발열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 J의 제조

화합물 A의 결정형 J 샘플은 화합물 A의 결정형 A를 150℃까지 가열하고 질소 보호 하에서 실온까지 냉각하는 단계를 통하여 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 J의 구조를 특성화하였다; 도 14 참조. TGA 결과는 150℃까지 1.1 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 285.1℃(개시 온도)에서 분해 발열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 K의 제조

화합물 A의 결정형 K 샘플은 실온에서 화합물 A의 결정형 A MeOH 용액의 느린 증발을 통해서 수득하였다.

3-mL 바이알에 형태 A의 고체 18.3 mg을 칭량하고(weigh), 1.8 mL의 2 MeOH을 바이알에 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. 이 용액을 실온에서 증발시켜 침전을 유도하여 결정형 K를 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 K의 구조를 특성화하였다; 도 15 참조. TGA 결과는 150℃까지 12.8 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 284.2℃(개시 온도)에서 분해 전에 발열과 흡열을 나타냈다.

화합물 A 단일 결정형 L의 제조

화합물 A의 결정형 L 샘플은 화합물 A의 결정형 K를 150℃까지 가열하고 질소 보호 하에서 실온까지 냉각하는 단계를 통하여 수득하였다. 분말 X-선 회절 패턴 방법을 사용하여 결정형 L의 구조를 특성화하였다; 도 16 참조. TGA 결과는 150℃까지 1.8 wt%의 중량 손실을 나타냈다. DSC 결과는 281.7℃(개시 온도)에서 분해 전에 발열을 나타냈다.

효능 시험(Efficacy Tests)

시험 1: 화합물 A 세크퀴-하이드레이트(결정형 C)에 의한 poly(ADP-ribosyl)ation (PARylation) 효소의 억제 및 선택성

PARP1, PARP2, TNKS1 및 TNKS2의 poly(ADP-ribosyl)ation (PARylation) 활성을 억제하는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 생화학적 효능을 시판중인 PARP1/2 Chemiluminescent Assay Kits (BPS Bioscience Inc.)을 사용하여 결정하고 GST 표지된(GST-tagged) 효소를 바큐로바이러스(baculovirus) 감염된 Sf9 세포로부터 발현하고 정제하였다(효소 구조는 표 18 참조). PARP1 및 PARP2 효소는 상기 assay kits로부터 수득하고, TNKS1 및 TNKS2는 본 발명자가 생성하였다. 분석(assay)은 제조자의 지시에 따라서 수행되었다. 간단히 말해서, H2A 및 H2B 단백질은 플레이트(plate) 표면에 고정되고 나서 화합물 및 타겟 효소의 연속적인 희석액으로 0.5시간 동안 배양하였다. 그리고 나서, 바이오티닐화된(biotinylated) NAD 및 DNA (TNKS1 또는 TNKS2에 필요한 DNA가 없음)를 반응을 시작하기 위해 웰(well)에 첨가하였다. 바이오티닐화된 PARsylation 생성물은 스트렙트아비딘(streptavidin)-HRP 및 HRP 기질을 첨가한 후에 화학발광(chemiluminescence)에 의해서 측정되었다. 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 IC₅₀s는 Graphpad Prism 소프트웨어(software)를 사용하여 투여량-반응 % 억제 데이터를 4개의 파라미터 로지스틱 모델(parameter logistic model)에 맞추어 유도하였다.

표 18은 PARP1, PARP2, TNKS1 및 TNKS2 효소에 대한 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 IC₅₀s을 요약한다. 표 18에 나타난 바와 같이, 화합물 A 세스퀴-하이드레이트는 1.3 및 0.92 nM의 IC₅₀s으로 각각 PARP1 및 PARP2의 촉매 활성을 강하게 억제한다. PARP1 또는 PARP2 보다 TNKS1 및 TNKS2의 억제가 100배 이상 약하다.

시험 2: 세포내 타겟 억제

HeLa 세포는 국립 생물 과학 연구소(National Institute of Biological Sciences) (Beijing)로부터 부여받았고, 소 태아 혈청(fetal bovine serum) (10% FBS), 100 units/mL 페니실린 및 0.1 mg/mL 스트렙토마이신으로 보충한 DMEM 내에 유지하고 37℃ 배양기(incubator) 내에 95%의 습도와 5%의 CO₂로 보관하였다. 과산화수소(hydrogen peroxide) (H₂O₂)로 배양하면, 세포 내의 PARP 활성이 유도되고 내인성(endogenous) PAR 수준이 상승한다. 분석은 다음과 같이 수행되었다:

세포는 웰 (100 μL) 당 5000 세포의 밀도로 투명한 바닥 및 검은 벽을 가진 96-웰 플레이트에 평판 배양하였다. 플레이트를 5%의 CO₂대기 하에서 4시간 동안 37℃에서 배양한 후에, 특정 농도의 시험 화합물(전형적으로 0.01 nM-10 mM)과 배양하였다. 다음날 PBS 중의 H₂O₂용액(최종 농도 200 μM)을 첨가하고 플래이트를 5분 동안 37℃로 유지하였다. 그리고 나서 배지를 플레이트 반전(inversion)으로 부드럽게 제거하고, 세포는 -20℃에서 20분 동안 얼음처럼 차가운(ice-cold) MeOH로 고정하였다. 고정액을 제거하고 PBS로 반복 세척한 후에, 1차 PAR mAb (Alexis ALX-804-220, 1:2000), 2차 anti-mouse Alexa Fluor 488 antibody (Molecular Probes A11029, 1:2000)및 핵 염료 DAPI (Molecular Probes D3571, 150 nM)와 검출 완충액(buffer) (50 μL/well, PBS, Tween (0.1%), 및 BSA (1 mg/mL)를 함유하는)을 첨가하고 4℃의 어두운 곳에서 밤새 배양하였다. 용액을 제거하고 PBS로 반복 세척한 후에, PAR 중합체(polymer) 수준을 ArrayScan VTI (ThermoFisher)로 평가하였다. PARP 억제제 농도가 증가하는 경우에 잔여 효소 활성을 기준으로 하여 억제율(Percent inhibition)을 결정하였다. IC₅₀s 값은 XLfit 소프트웨어를 사용하여 투여-의존 데이터를 4개의 파라미터 로지스틱 모델(parameter logistic model)에 맞추어 계산하였다.

이러한 조건 하에서, 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C는 0.24 nM의 IC₅₀s으로 세포내 PAR 형성을 억제하고, 0.24 nM의 IC₅₀s는 각각 1.3 및 0.92 nM의 세포 PAR 형성 IC₅₀s를 갖는 벨리파립 및 올라파립 보다 강하다.

시험 3: 암 세포 사멸의 종합적 치사율(SYNTHETIC LETHALITY OF CANCER CELLS KILLING)

BRCA 유전자 돌연변이체가 아니고 또는 다른 상동 재조합 결핍이 없는 MDA-MB-231 세포는 소 태아 혈청(fetal bovine serum) (10% FBS), 100 units/mL 페니실린 및 0.1 mg/mL 스트렙토마이신으로 보충한 DMEM 내에 유지하였다. BRCA-1 결핍(deficient) 세포주 MDA-MB-436은 10% FBS, 100 units/mL 페니실린 및 0.1 mg/mL 스트렙토마이신으로 보충한 RPMI-1640 내에 유지하였다. 두 세포주 모두 37℃ 배양기 내에 95%의 습도 및 5%의 CO₂를 유지하였다.

96-웰 플레이트의 웰 당 씨딩된(seeded) 종양 세포의 수는 7일의 치료 기간 동안에 로그 성장(logarithmic growth)을 보장하기 위하여 세포주 각각에 대하여 최적화하였다. 세포는 16시간 동안 부착시키고 나서 특정 농도의 시험 화합물로 처리하였다. 화합물에 대한 7일 동안의 노출 후에, 화합물의 성장-억제 활성을 CellTiter-Glo luminescent cell viability assay (Promega)을 사용하여 결정하였다. 발광 신호는 PHERAstar FS reader (BMG Labtech)를 사용하여 분석하였다. 세포 생존능은 모의 처리 대조군(mock treatment control)과 관련하여 표현하였다. 성장 억제에 관한 EC₅₀ 값은 XLfit 소프트웨어를 사용하여 투여-의존 데이터를 4개의 파라미터 로지스틱 모델(parameter logistic model)에 맞추어 계산하였다.

이러한 조건 하에서, BRCA 유전자가 야생형인 MDA-MB-231는 약 9 mM의 EC₅₀s를 갖는 화합물 A에 비해 상대적으로 내성(resistant)이다. 대조적으로, BRCA1 결핍 (MDA-MB-436)인 종양 세포주는 화합물 A에 극도로 민감하였다. 화합물 A는 시험된 종양 세포에서 벨라파립 보다 강하고 올라파립과 유사한 것으로 확인되었다.

시험 5: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C의 생체 내( In Vivo ) 약리학

PARP에 대한 화합물 A의 생체 내 약리학적 활성(PD)는 피하의 인간 MDA-MB-436 (BRCA1 돌연변이) 유방암을 갖는 BALB/c 누드 마우스에서 평가하였다. 또한, 이종 이식 모델에서 혈장과 종양 조직에서의 화합물 A 농도 (PK, 약물 동력학(pharmacokinetics))와 PARylation (PD, 약물 역학(pharmacodynamics))에 미치는 영향 사이의 관계를 조사하였다. 화합물 A의 경구 투여는 마우수에서 MDA-MB-436 유방암 이종 이식에서 PARylation의 시간-의존적 및 투여-의존적 억제를 초래하였다. 종양 조직에서 PARylation의 억제는 화합물 A의 종양 약물 농도와 매우 연관성이 있다. PARylation의 강한 억제는 0.34 mg/kg 또는 그 이상인 화합물 A의 단일 경구 투여 후 4시간에 관찰되었다. 5.45 mg/kg에서, 화합물 A는 MDA-MB-436 종양 조직에서 강하고 지속적인 PARylation의 억제를 유도하였다. 화합물 A는 화합물 A의 0.17 내지 10.9 mg/kg의 단일 경구 투여 후 4시간에 MDA-MB-436 이종 이식에서 PAR 수준에 대한 투여-의존적 억제를 유도하였다. 5.45 mg/kg에서, 화합물 A는 PAR 수준에 대하여 빠르고 강한 억제를 유도하였다. PARylation 억제는 치료 후 0.5시간에 98%이다. 이 억제는 처음 12시간 동안 매우 높은 수준(>80%)으로 유지되었으나 24시간 에는 53%로 되돌아갔다. 이 데이터는 마우스 이종 이식 모델의 효능 연구에서 BID 투여를 지지한다. 투여 적정 및 시간 경과 연구 둘 다 종양 조직에서 화합물 A의 농도는 최소한 80%의 PARylation 억제를 달성하기 위하여 0.5 μmol/kg 이상이어야 함을 제시하였다.

화합물 A의 생체 내 효능은 화합물 A 및 DNA 알킬화제(alkylating agent)인, Temozolomide (TMZ)의 병용 효과를 평가하기 위하여 H209 SCLC 이종 이식 모델에서 실험하였다. TMZ 단일 제제는 이 모델에서 매우 효과적이었다. 하나의 사이클의 치료는 모든 동물에서 종양이 초래되지 않았다. 그러나, 두 번째 사이클 동안에 내성이 빠르게 발생하였다. 화합물 A와 TMZ의 병용은 추가적인 독성 없이 유의하게 내성을 지연시켰다. 종양은 다양한 사이클 후에 병용 치료에 민감한 것으로 나타났다. 화합물 A가 TMZ 내성을 극복할 수 있는지 여부를 조사하기 위하여, TMZ-내성 (TR) H209 종양을 H209 종양을 생체 내에서 TMZ의 다양한 사이클로 치료함으로써 생성하였다. 유도된 H209-TR 계통은 이종 이식 마우스 모델에서 화합물 A와 TMZ 병용에 민감한 것으로 나타났다. 화합물 A는 상당한 뇌 침투성을 가지고 있어서, 뇌 종양 또는 뇌 전이가 있는 종양을 치료하는데 TMZ와 병용하는 것이 적합하다. 확립된 두개 내의(intracranial) H209 이종 이식을 가진 마우스는 뇌에서 SCLC에 대한 화합물 A 및 TMZ의 병용 활성을 추가적으로 조사하기 위해 사용되었다. 화합물 A의 첨가는 두개 내의 모델에서 TMZ 단일 제제와 비교하여 동물 생존을 현저하게 연장하였다.

시험 6: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트(결정형 C)의 독성

화합물 A의 비임상적 독성 프로파일은 쥐(rat) 및 개 둘 다의 28일까지 단일 또는 반복된 투여 시험에서 특성화되었다. 부작용은 체중 감소 또는 체중 증가 및 음식 섭취; WBC, NEUT, LYMP, RBC, HGB, HCT 및 APTT에서의 감소; 및 PLT에서의 증가를 포함한다. 골수는 주요한 타겟 장기로 간주되었으며 조직병리학적 변화는 최소에서 현저한 범위로 나타났다. 독성은 투여량 의존적이며, 전신 노출과 연관성이 있으며, 28일의 회복기 후에 가역적이었다. 화합물 A는 IC₅₀=25.97 mM인 hERG에 명백한 영향을 나타내지 않았다. Ames 분석에서 돌연변이 유발성을 나타내지 않았다. 요약하면, 이용 가능한 독성 데이터는 후기 단계에서 화합물 A의 임상 개발을 뒷받침하고 1상 실험에서 진행된 암 환자들에게 적합하다. 독성은 임상학적으로 관찰되고 관리가능 할 수 있다.

시험 7: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트 결정형 C의 약물 동력학

약물 동력학 연구에 사용된 종은 쥐 및 개이다. 화합물 A는 두 종 모두에서 우수한 경구 생체이용률(oral bioavailability) (> 40%)을 나타냈다. 경구 투여 후에 쥐의 제거 반감기는 3.1 내지 5.0 시간이고, 개는 1.5 내지 2.5 시간이었다. 쥐 (8.67-15.2 mL/min/kg) 및 개 (18.3-18.5 mL/min/kg) 모두에서 제거 속도(clearance)가 적당했다. 쥐 및 개에서의 정상 상태 분포량(Steady state volume of distribution)은 각각 2.4 L/kg 및 1.9 L/kg이었다. 두 종 모두에서 여러 번의 경구 투여 후의 화합물 A의 축적은 나타나지 않았다.

시험 8: 화합물 A 세스퀴-하이드레이트 결정형 C의 ADME

화합물 A에 대한 혈장 단백질 결합(Plasma protein binding, PPB)는 인간, 원숭이, 개, 쥐, 및 마우스 혈장에서 각각 95.7%, 88.9%, 79.0%, 84.9% 및 85.0%이었다. 쥐에서 경구 투여 후에, 화합물 A는 확인한 모든 장기에서 검출되었다. 약물 농도는 투여 후 0.25 내지 1시간에 최대치에 도달하였으며 투여 후 24시간에 최대 농도의 10% 미만으로 감소하였다.

화합물 A는 인간, 개, 쥐, 및 마우스 간 마이크로솜(microsome)에서 느리게 대사 작용되는 반면에, 확인된 총 5개의 대사산물(metabolite)(M1, M2, M3, M4 및 M5)을 가지는, 원숭이 간 마이크로솜에서 빠르게 대사 작용되었다. 경구 투여 후에 쥐의 대변, 혈장, 소변 및 담즙에서 6개의 대사산물, M1, M2, M3, M5, M6 및 M7이 관찰되었다. 화합물 A는 주로 대변으로 배설되었다. 경구 투여 후에 대변에서 화합물 A의 누적 배설량은 15% 내지 20%였다(48시간까지). 화합물 A의 1% 미만은 쥐에서 소변과 담즙으로 배설되었다.

CYP3A는 화합물 A 대사 작용을 담당하는 주요한 CYP 아이소폼(isoform)이며, 반면에 CYP2C8는 화합물 A 대사 작용에 기여하는 정도가 적었다. 화합물 A는 CYP2C9(IC₅₀= 6.48 mM) 에 대한 중간 억제제이며, 다른 CYP 동종효소(isozyme)에 대한 IC₅₀은 모두 10 mM 이싱이다. 화합물 A는 인간 CYP1A2, CYP2B6 및 CYP3A의 유도제가 아니다.

시험 9: 임상 시험

캡슐(capsule)을 제조하기 위해 화합물 A 세스퀴-하이드레이트의 결정형 C를 사용하여, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 및 120 mg의 bid 투여량을 투여한 25명의 피실험자에 대하여 1상 임상 안전 시험을 완료하였다. 결과는 2.5-120 mg의 bid 투여량은 안전하고 잘 견디는 것으로 나타났다. 화합물 A 치료는 BRCA1/2 돌연변이 난소암 환자에서 부분적인 또는 완전한 반응을 발생시켰다. 이런 예비적인 데이터는 화합물 A 세스퀴-하이드레이트(결정형 C)가 BRCA1/2 돌연변이 또는 HR-결핍성 암의 치료에 효과적이라는 것을 입증하였다.

전술한 실시예 및 특정 실시예의 설명은 청구범위에 의해 한정된 바와 같이 본 발명을 제한하는 것이 아니라, 예시라는 것은 명백하다. 용이하게 이해 될 수 있는 바와 같이, 상기 전술한 특징들의 수많은 변형 및 조합이 청구범위에 기재된 바와 같이 본 발명을 벗어나지 않고 활용될 수 있다. 이러한 모든 변형은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도한다. 인용된 모든 참고 문헌은 그 전체가 참고 문헌으로 여기에 포함된다.

Claims

화학식 Ⅰ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 하이드레이트(hydrate)/용매화물:

화학식 Ⅰ
여기서, n은 약 0.0 내지 2.0의 수이고; m은 약 0.0 내지 약 20.0의 수이고; 상기 용매(solvent)는 아이소프로판올(isopropanol), 에탄올(ethanol), 메탄올(methanol), 아세톤(acetone), THF(tetrahydrofuran), 1,4-다이옥산(1,4-dioxane), 아세트산(acetic acid), 아세토나이트릴(acetonitrile), 물, 또는 이들의 조합임.
화학식 Ⅱ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 하이드레이트(hydrate):

화학식 Ⅱ
여기서, n은 약 0.0 내지 약 2.0의 수임.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, n은 약 1.5이고, 상기 화합물은 화학식 Ⅲ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온의 결정질의 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)인 것을 특징으로 하는 화합물:

.
화학식 Ⅲ
제4항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 C**이고, 도 1, 2, 3, 및/또는 4에 실질적으로 도시된 바와 같이 단일 결정(single crystal)인 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 A이며, 6.3±0.2, 8.5±0.2, 8.6±0.2, 9.9±0.2, 10.4±0.2, 11.0±0.2, 11.1±0.2, 12.6±0.2, 12.8±0.2, 14.7±0.2, 18.0±0.2, 18.1±0.2, 20.1±0.2, 21.4±0.2, 22.2±0.2, 24.6±0.2, 25.7±0.2, 및 30.0±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 B이며, 6.3±0.2, 8.7±0.2, 11.1±0.2, 12.6±0.2, 14.5±0.2, 14.8±0.2, 15.2±0.2, 18.0±0.2, 23.9±0.2, 25.3±0.2, 및 25.8±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 C이며, 5.3±±0.2, 6.3±±0.2, 6.5±±0.2, 6.9±±0.2, 8.7±±0.2, 10.6±±0.2, 11.1±±0.2, 11.6±±0.2, 12.6±±0.2, 13.1±±0.2, 13.7±±0.2, 14.4±±0.2, 14.8±±0.2, 15.1±±0.2, 15.9±±0.2, 16.2±±0.2, 17.3±±0.2, 18.0±±0.2, 18.7±±0.2, 19.0±±0.2, 19.4±±0.2, 20.2±±0.2, 20.6±±0.2, 21.0±±0.2, 2±±0.2, 21.5±±0.2, 22.3±±0.2, 22.7±±0.2, 23.4±±0.2, 23.8±±0.2, 24.3±±0.2, 24.7±±0.2, 25.3±±0.2, 25.7±±0.2, 26.1±±0.2, 26.4±±0.2, 27.4±±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 C*이며, 6.1±±0.2, 6.3±±0.2, 6.9±±0.2, 8.5±±0.2, 11.1±±0.2, 11.6±±0.2, 13.2±±0.2, 14.5±±0.2, 15.2±±0.2, 16.3±±0.2, 18.1±±0.2, 20.3±±0.2, 22.5±±0.2, 24.8±±0.2, 26.1±±0.2, 26.6±±0.2, 및 27.7±±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제8항에 있어서, 상기 결정형 C는 실질적으로 순수한 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 D이며, 5.7±0.2, 6.4±0.2, 6.8±0.2, 9.3±0.2, 9.8±0.2, 10.3±0.2, 11.5±0.2, 12.4±0.2, 12.9±0.2, 13.4±0.2,13.9±0.2, 17.8±0.2, 18.3±0.2, 18.8±0.2, 18.9±0.2, 23.7±0.2, 25.0±0.2, 25.7±0.2, 25.9±0.2, 및 26.7±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 E이며, 6.2±0.2, 8.6±0.2, 9.5±0.2, 11.0±0.2, 11.5±0.2, 12.0±0.2, 12.5±0.2, 13.4±0.2, 13.8±0.2, 14.4±0.2, 14.7±0.2, 15.1±0.2, 15.3±0.2, 16.2±0.2, 16.9±0.2, 17.9±0.2, 18.3±0.2, 19.0±0.2, 19.5±0.2, 20.1±0.2, 21.3±0.2, 22.2±0.2, 22.9±0.2, 23.3±0.2, 24.2±0.2, 24.6±0.2, 25.1±0.2, 25.7±0.2, 26.3±0.2, 27.0±0.2, 27.4±0.2, 및 30.9±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 F이며, 5.2±0.2, 6.3±0.2, 7.7±0.2, 9.7±0.2, 10.4±0.2, 11.8±0.2, 13.7±0.2, 15.6±0.2, 17.5±0.2, 18.0±0.2, 19.5±0.2, 20.2±0.2, 21.7±0.2, 23.1±0.2, 24.7±0.2, 25.3±0.2, 및 27.3±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 G이며, 6.3±0.2, 8.6±0.2, 9.6±0.2, 10.3±0.2, 11.0±0.2, 12.6±0.2, 17.5±0.2, 및 25.4±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 H이며, 9.5±0.2, 12.0±0.2, 13.5±0.2, 15.4±0.2, 17.0±0.2, 19.0±0.2, 23.0±0.2, 24.2±0.2, 27.0±0.2, 27.4±0.2, 31.0±0.2, 34.7±0.2, 및 34.8±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 I이며, 9.8±0.2, 10.0±0.2, 11.1±0.2, 11.7±0.2, 12.9±0.2, 13.3±0.2, 13.9±0.2, 14.4±0.2, 17.1±0.2, 17.4±0.2, 17.6±0.2, 17.9±0.2, 18.4±0.2, 18.5±0.2, 19.4±0.2, 20.8±0.2, 21.9±0.2, 23.7±0.2, 26.4±0.2, 26.9±0.2, 및 29.4±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 J이며, 6.4±0.2, 8.7±0.2, 9.9±0.2, 10.3±0.2, 11.7±0.2, 12.8±0.2, 13.9±0.2, 18.1±0.2, 19.3±0.2, 23.0±0.2, 23.8±0.2, 및 25.8±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 K이며, 6.4±0.2, 10.8±0.2, 12.6±0.2, 12.8±0.2, 19. 2±0.2, 25.2±0.2, 25.8±0.2, 32.4±0.2, 및 34.1±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4, 5, 6, 7개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 L이며, 6.8±0.2, 17.8±0.2, 20.6±0.2, 23.4±0.2, 및 27.6±0.2 도(degree)로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2θ 각도 값을 갖는 3, 4개 또는 그 이상의 회절 피크(peak)를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 실질적으로 도 5, 6, 7A, 7B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 및 16으로 구성된 군에서 선택되는 분말 X-선 회절 패턴(powder X-ray diffraction pattern)인 것을 특징으로 하는 화합물.
다음 단계를 포함하는, 유리 염기(free base) 형태인 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온의 제조방법:

여기서, R₁ 및 R₂는 C_1-6알킬 또는 할로 C_1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고, LG는 이탈기 Ts임.
다음 단계를 포함하는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)의 결정형 C의 제조방법:
i. 조 화합물 A-2(Compound A-crude 2)를 수득하기 위하여 알칼리의 존재 하에 적합한 용매 내에서 분할제(resolving agent)와 화합물 A의 유리 염기(free base)를 반응시키는 단계;
ii. 화합물 A의 결정형을 수득하기 위하여 특정 시간 동안에 특정한 온도의 혼합된 용매 내에서 조 화합물 A-2(Compound A-crude 2)를 재결정화시키는 단계.
다음 단계를 포함하는, 화학식 Ⅲ로 표시되는, (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 결정형의 제조방법:

화학식 Ⅲ
(a) 용액 또는 현탁액(suspension)을 형성하기 위하여 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온의 유리 염기(free base) 또는 하이드레이트(hydrate)를 용매 또는 용매 혼합물에 용해시키고; (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)를 타겟(target) 결정형으로 침전시키는 단계;
(b) (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 하이드레이트(hydrate)를 용매 또는 용매 혼합물에 용해시키거나 현탁시키고; (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 하이드레이트(hydrate)를 반-용매(anti-solvent)를 통해 타겟(target) 결정형으로 침전시키는 단계;
(c) 타겟(target) 결정형을 수득하기 위하여 결정질의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 용매화물/하이드레이트(hydrate)를 연장된 기간 동안에 저장하는 단계;
(d) 결정질 또는 비정질(amorphous)의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온을 상승된 온도까지 가열하고, 타겟(target) 결정형을 수득하기 위하여 상기 염을 냉각시키는 단계; 및
(e) 타겟(target) 결정형을 수득하기 위하여 결정질 또는 비정질(amorphous)의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온을 용매의 증기에 노출시키는 단계.
제23항에 있어서, 상기 (a) 또는 (b) 단계는 가열, 용해되지 않은 불순물을 제거하기 위한 여과, 용매 증류, 카운터 용매(counter solvent) 또는 용매 혼합물의 첨가, 결정 씨드(crystal seed)의 첨가, 침전 유도제의 첨가, 냉각, 침전, 및 결정질의 생성물을 수집하기 위한 여과 단계로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 하나 이상의 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항 또는 제24항에 있어서, 상기 (a) 또는 (b) 단계의 용매 또는 용매 혼합물은 물, 저급 알킬 알코올(lower alkyl alcohols), 케톤(ketones), 에터(ethers), 에스터(esters), 저급 지방족 카복시산(lower aliphatic carboxylic acids), 저급 지방족 나이트릴(lower aliphatic nitriles), 임의의 할로젠화 방향족(halogenated aromatic) 용매, 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항 또는 제24항에 있어서, 상기 용매는 아이소프로판올(isopropanol), 에탄올(ethanol), 메탄올(methanol), 아세톤(acetone), THF(tetrahydrofuran), 1,4-다이옥산(1,4-dioxane), 아세트산(acetic acid), 아세토나이트릴(acetonitrile), 물, 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항에 있어서, 상기 (a) 단계의 유리 염기(free base)는 분리되고 정제된 유기 염기, 분리되었으나 정제되지 않은 유리 염기, 또는 유리 염기를 함유하는 조 반응 생성물(crude reaction product)인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항에 있어서, 상기 (c) 단계의 연장된 기간은 적어도 3일, 적어도 일주일, 또는 적어도 2주인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항에 있어서, 상기 (d) 단계의 상승된 온도는 적어도 40℃, 적어도 60℃, 적어도 80℃, 또는 적어도 100℃, 그러나 세스퀴(sesqui)-말레에이트(maleate) 염의 분해 온도(decomposition temperature) 보다는 낮은 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항에 있어서, 상기 (e) 단계의 증기는 아세트산(acetic acid)의 증기인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제23항에 있어서,
1) 상기 (a) 또는 (b) 단계는 결정형 C**를 생성하기 위하여 용매로서 아이소프로판올(isopropanol)-물 (v/v = 20/40)을 사용하는 단계를 포함하며;
2) 상기 (a) 또는 (b) 단계는 결정형 B를 생성하기 위하여 용매로서 MTBE(Methyl Tertiary Butyl Ether)을 사용하는 단계를 포함하며;
3) 상기 (a) 또는 (b) 단계는 결정형 C 또는 C*를 생성하기 위하여 용매로서 아이소프로판올(isopropanol)/물을 사용하는 단계를 포함하며;
4) 상기 (c) 단계는 결정형 D를 생성하기 위하여 용매로서 아세트산(acetic acid)에 톨루엔(toluene)을 첨가하는 단계를 포함하며;
5) 상기 (d) 단계는 결정형 E를 생성하기 위하여 결정형 A를 DMA(Dynamic Mechanical Analyzer) 증기와 작용시키는 단계를 포함하며;
6) 상기 (e) 단계는 결정형 F를 생성하기 위하여 결정형 A를 아세트산(acetic acid) 증기와 작용시키는 단계를 포함하며;
7) 상기 (d) 단계는 결정형 G를 생성하기 위하여 결정형 A(De/ad)를 DVS(Dynamic Vapor Sorption) 내에 흡착시키는 단계를 포함하며;
8) 상기 (d) 단계는 결정형 H를 생성하기 위하여 결정형 E를 80 ℃까지 가열하는 단계를 포함하며;
9) 상기 (d) 단계는 결정형 I를 생성하기 위하여 결정형 E를 150 ℃까지 가열하는 단계를 포함하며;
10) 상기 (d) 단계는 결정형 J를 생성하기 위하여 결정 형A를 150 ℃까지 가열하는 단계를 포함하며;
11) 상기 (e) 단계는 결정형 K를 생성하기 위하여 결정형 A를 메탄올(methanol) 증기와 작용시키는 단계를 포함하며;
12) 상기 (d) 단계는 결정형 L을 생성하기 위하여 결정형 K를 150 ℃까지 가열하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
다음의 구조식을 포함하는 화합물:

또는 이의 염 또는 이의 용매.
치료 유효량의 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 화합물과 약제학적으로 허용 가능한 담체(carrier)를 포함하는 약제학적 조성물.
제33항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 경구 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제34항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 정제(tablet) 또는 캡슐(capsule) 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제35항에 있어서, 상기 정제(tablet) 또는 캡슐(capsule)의 단위 복용량(unit dosage)은 5-80mg인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제36항에 있어서, 상기 약제학적 조성물 중 상기 화합물의 함량은 1-99 중량%인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물의 치료 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자의 질병 또는 장애의 치료 또는 예방 방법.
제38항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 뇌암(brain cancer), 소세포폐암을 포함하는 폐암(lung cancer), 신장암(kidney cancer), 골암(bone cancer), 간암(liver cancer), 방광암(bladder cancer), 유방암(breast), 두경부암(head and neck cancer), 난소암(ovarian cancer), 흑색종(melanoma), 피부암(skin cancer), 부신암(adrenal cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 림프종(lymphoma), 또는 갑상선 종양(thyroid tumors)으로 구성된 군에서 선택되는 암 및 이들의 합병증(complications)인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
제38항에 있어서, 상기 질병은 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 유방암(breast), 난소암(ovarian cancer) 및 이들의 합병증(complications)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
제38항에 있어서, 상기 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 투여되는 복용량(dosage)은 1-320 mg/일이며, 투여 횟수는 하루에 1회 내지 3회인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
제38항에 있어서, 상기 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 투여되는 복용량(dosage)은 2.5-320 mg/일이며, 투여 횟수는 하루에 1회 내지 3회인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
제38항에 있어서, 상기 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 투여되는 복용량(dosage)은 5-240 mg/일이며, 투여 횟수는 하루에 2회인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
제38항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L로 구성된 군에서 선택되는 결정형의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방 방법.
BRCA1/2 돌연변이 활성 또는 다른 HR(homologous recombination) 결핍과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 약물 제조에 있어서 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
제45항에 있어서, 상기 질병은 암인 것을 특징으로 하는 용도.
제45항 또는 제46항에 있어서, 상기 화합물은 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L로 구성된 군에서 선택되는 결정형의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)인 것을 특징으로 하는 용도.
약 80 ℃에서 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 혼합물을 아이소프로판올(isopropanol)과 물의 혼합 용매 내에 혼합하는 단계를 포함하는, 결정질의 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 세스퀴(sesqui)-하이드레이트(hydrate)의 제조방법.
제48항에 있어서, 상기 생성된 혼합물을 실온까지 냉각시킨 후 일부 결정 씨드(crystal seed)를 첨가한 다음, 상기 혼합물을 일정 기간 동안 방치하는 단계를 추가적으로 포함하는 제조방법.
제48항에 있어서, 상기 혼합하는 단계는 교반하는 단계(stirring)와 함께 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 (R)-2-플루오르-10a-메틸-7,8,9,10,10a,11-헥사하이드로-5,6,7a,11-테트라아자사이클로헵타[def]사이클로펜타[a]플루오렌-4(5H)-온 유리 염기(free base)의 결정형은 결정형 A, B, C, C*, C**, D, E, F, G, H, I, J, K 및 L로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 제조방법.