CN110087730B - 使用包含parp抑制剂的组合产品治疗癌症 - Google Patents

使用包含parp抑制剂的组合产品治疗癌症 Download PDF

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Abstract

本申请公开了在受试者中预防癌症、延迟癌症进展或治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用PARP抑制剂(特别是(R)‑2‑氟‑10a‑甲基‑7，8，9，10，10a，11‑六氢‑5，6，7a，11‑四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴‑4(5H)‑酮，其倍半水合物，或其药学上可接受的盐)与免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合。此外，本申请公开了包含PARP抑制剂(特别是(R)‑2‑氟‑10a‑甲基‑7，8，9，10，10a，11‑六氢‑5，6，7a，11‑四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴‑4(5H)‑酮，其倍半水合物，或其药学上可接受的盐)与免疫检查点抑制剂或化疗剂的药物组合产品及其用途。

Description

使用包含PARP抑制剂的组合产品治疗癌症
本申请要求2016年9月27日提交的国际专利申请号PCT/CN2016/100320的优先权，在此出于所有目的以其整体公开引入作为参考。
技术领域
本申请公开了在受试者中预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用PARP抑制剂(特别是(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮或其药学上可接受的盐，(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物)与免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合产品(combination)。本申请还公开了包含PARP抑制剂(特别是(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮或其药学上可接受的盐，(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物)与免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合的药物组合产品及其用途。
发明背景
癌症的标志和驱动力之一是遗传的不稳定性[Hanahan D and Weinberg R A，Hallmarks of cancer：the next generation.Cell，2011.144(5)：p.646-74.]。特别是在家族性癌症中，乳腺癌易感性中的突变体BRCA1和BRCA2肿瘤抑制基因，即同源重组(HR)中的关键角色，已经与乳腺癌或卵巢癌发展的风险增加相关联[Li X and Heyer W D，Homologous recombination in DNA repair and DNA damage tolerance.Cell Res，2008.18(1)：p.99-113.]。就在该患者群体中，聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂最近受到了关注。PARP家族成员，PARP1和PARP2，在DNA复制、转录调节和DNA损害修复中发挥重要作用[Rouleau M，Patel A，Hendzel M J，et al.，PARP inhibition：PARP1 andbeyond.Nat Rev Cancer，2010.10(4)：p.293-301.]。在2005年，两篇突破性《自然》杂志的文章表明单独给予PARP抑制剂会杀死预先存在DNA修复缺陷、特别在BRCA1/2基因中的突变的癌细胞[Bryant H E，Schultz N，Thomas H D，et al.，Specific killing of BRCA2-deficient tumors with inhibitors of poly(ADP-ribose)polymerase.Nature，2005.434(7035)：p.913-7；Farmer H，McCabe N，Lord C J，et al.，Targeting the DNArepair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy.Nature.2005.434(7035)：p.917-21]。
在临床前模型中，PARP抑制和突变体BRCA在合成上是致命的(lethal)，表明了是一种巧妙的、靶向的和毒性最小的治疗患者的方式。
WO2013/097225A1公开了一系列具有以下通式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0002008996390000021
特别地，在WO2013/097225A1中公开的(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(下文称为化合物A)具有高度的选择性和潜在的PARP1/2抑制活性。
Figure BDA0002008996390000022
PCT申请PCT/CN2016/096200还公开了化合物A的结晶形式，特别是(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物(下文称为化合物B)。
Figure BDA0002008996390000023
本申请的发明人已经发现PARP抑制剂(特别是上述化合物A或化合物B)与免疫治疗剂(例如免疫检查点抑制剂)或者化疗剂的组合治疗与单独的上述活性药剂的单一疗法相比展示出更好的抗肿瘤活性，没有严重毒性。
发明概述
在第一方面，本申请公开了在受试者中预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物与治疗有效量的免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合。
在第二方面，本申请公开了预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症的药物组合产品，其包含式(I)的PARP抑制剂、其立体异构体或其药学上可接受的盐或其溶剂化物与治疗有效量的免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合。
在第三方面，本申请公开了式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体或其药学上可接受的盐，其与治疗有效量的免疫检查点抑制剂或化疗剂组合，用于预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症。在该方面的一个实施方案中，本申请公开了免疫检查点抑制剂或化疗剂，其与式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物组合，用于预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症。
在第四方面，本申请公开了药物组合产品在制备用于预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症的药物中的用途，所述药物组合产品包含式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物及免疫检查点抑制剂或化疗剂。
在第五方面，本申请公开了制品或“试剂盒”，其包含第一容器、第二容器和药品说明书(package insert)，其中所述第一容器包含至少一个剂量的包含式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物的药物；所述第二容器包含至少一个剂量的包含免疫检查点抑制剂或化疗剂的药物，并且所述药品说明书包含使用所述药物治疗癌症的说明。
在第六方面，本申请公开了在受试者中预防癌症或延迟癌症进展或治疗癌症的方法，包括：
(i)在治疗周期中，与第一数量的式(I)的PARP抑制剂一起向有此需要的受试者施用化疗剂；和
(ii)在维持阶段中，向已经在上述治疗周期中接受治疗的受试者施用第二数量的式(I)的PARP抑制剂。
在一些实施方案中，所述PARP抑制剂为化合物A。在其它实施方案中，所述PARP抑制剂为化合物B。
在一些实施方案中，所述PARP抑制剂在治疗周期中连续或间断地施用。
在一些实施方案中，所述方法包括1至3个治疗周期，并且各治疗周期包括1至4周。
在一些实施方案中，所述化疗剂选自紫杉醇(paclitaxel)或依托泊苷(etopside)加卡铂(carboplatin)(E/C)。
在一些实施方案中，所述化疗剂以标准给药治疗方案施用。具体而言，C/E的标准给药日程表包括每周期21天，每21天的第1天顺铂75mg/m2，第1、2、3天依托泊苷100mg/m2；或，每周期21天，每21天的第1天卡铂AUC 5-6，第1、2、3天依托泊苷100mg/m2；以及紫杉醇的标准给药日程表为：每周期28天，每28天的第1、8、15天静脉内注射(iv)80mg/m2。
在一些实施方案中，治疗周期中第一数量的PARP抑制剂不同于维持阶段中第二数量的PARP抑制剂。
在一些实施方案中，治疗周期中第一数量的PARP抑制剂低于维持阶段中第二数量的PARP抑制剂。
在一些实施方案中，维持阶段中第二数量的PARP抑制剂为1-120mg(就母体化合物而言)，施用频率为每天一次至每天两次；优选地，PARP抑制剂的施用剂量为1-80mg(就母体化合物而言)，并且施用频率为每天两次(BID)。在其它实施方案中，维持阶段中第二数量的PARP抑制剂为约120-240mg，每天一次(QD)，且治疗周期中第一数量的PARP抑制剂为约60-120mg，每天一次(QD)。
本申请公开的方法和药物组合产品(pharmaceutical combination)，作为组合疗法，相比于任一单独的药剂，产生更有效的抗肿瘤响应。具体而言，抗PD-1抗体(Mab-1)和化合物B的组合被证实展现出协同效果。化合物A或化合物B与紫杉醇或依托泊苷加卡铂(E/C)的组合产品也被证实展现出协同效果。
在上述六个方面中每一个的实施方案中，化疗剂选自紫杉醇、或依托泊苷加卡铂(E/C)。在上述六个方面中每一个的实施方案中，免疫检查点抑制剂为抗体。在上述六个方面中每一个的实施方案中，免疫检查点抑制剂为单克隆抗体。在上述六个方面中每一个的实施方案中，免疫检查点抑制剂为PD-1的抑制剂。在上述六个方面中每一个的实施方案中，癌症选自结肠直肠癌、胃癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、子***、腹膜癌、***癌、去势抵抗性***癌、胆管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神经鞘癌、子宫癌、黑素瘤或淋巴瘤。在上述六个方面中每一个的实施方案中，PARP抑制剂为(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(化合物A)，或其药学上可接受的盐。在上述六个方面中每一个的实施方案中，PARP抑制剂为(R)-2-氟-10a-甲基-7，8，9，10，10a，11-六氢-5，6，7a，11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物(化合物B)。在上述六个方面中每一个的实施方案中，PARP抑制剂和免疫检查点抑制剂或化疗剂同时、顺序或间隔施用。
附图简述
图1显示了晶体化合物B的X射线衍射图。
图2显示了晶体化合物B的1H-NMR。
图3显示了晶体化合物B的13C-NMR。
图4显示了在EpCAM×CD3双特异性T细胞衔接子(engager)平台中，在用化合物B、Mab-1或者Mab-1和化合物B的组合治疗的
Figure BDA0002008996390000041
/PBMC共培养***中培养的原发性人肿瘤细胞的PBMC产生的IFN-γ的水平。
图5显示了在人原发性胃癌异种移植模型中化合物A、紫杉醇和(化合物A+紫杉醇)对肿瘤生长的作用。
图6显示了在人原发性胃癌异种移植模型中化合物A、紫杉醇和(化合物A+紫杉醇)对体重的作用。
图7显示了在原发性人SCLC(有限阶段)异种移植模型中依托泊苷和卡铂(E/C)、以及化合物B与E/C的组合对肿瘤生长的作用。
图8显示了在原发性人SCLC(有限阶段)异种移植模型中依托泊苷和卡铂(E/C)、以及化合物B与E/C的组合对体重的作用。
图9显示了在原发性人SCLC(扩展阶段)异种移植模型中化合物B、依托泊苷和卡铂(E/C)、化合物B与E/C的组合对肿瘤生长的作用。
图10显示了在原发性人SCLC(扩展阶段)异种移植模型中化合物B、依托泊苷和卡铂(E/C)和化合物B对体重的作用。
图11显示了在原发性人SCLC(扩展阶段)异种移植模型中化合物B在E/C之后作为维持疗法对肿瘤生长的作用。
图12显示了在原发性人SCLC(扩展阶段)异种移植模型中化合物B在E/C之后作为维持疗法对体重的作用。
发明详述
定义
除非在本文件中另外具体指定，否则本申请所使用的所有其它科学和技术术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。
本申请包括所附权利要求使用的单数形式的词语诸如“一”、“一种”和“所述”，包括它们对应的复数指代，除非上下文清楚地表明其它情况。
术语“或”用来表示并可与术语“和/或”互换使用，除非上下文另外清楚表示其它含义。
在本说明书和权利要求书的全文中，除非上下文有其它要求，术语″包含″及变体诸如″含有″和″包括″，将会被理解隐含包括所述活性剂(例如，mAb或Btk抑制剂)或所述氨基酸序列，但是不排除任何其它活性成份或氨基酸序列。当在本申请中使用时，术语″包含″可与术语″含有″或“包括”互换。
本申请的术语″烷基″是指选自包含1-18，诸如1-12，又诸如1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的烃基。烷基的实例可选自甲基、乙基、1-丙基或正丙基(″n-Pr″)、2-丙基或异丙基(″i-Pr″)、1-丁基或正丁基(″n-Bu″)、2-甲基-1-丙基或异丁基(″i-Bu″)、1-甲基丙基或仲丁基(″s-Bu″)和1，1-二甲基乙基或叔丁基(″t-Bu″)。烷基的其它实例可选自1-戊基(n-戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)和3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3基团。
本申请的术语″烯基″是指选自包含至少一个C＝C双键和2-18、诸如2-12、又诸如2-6个碳原子的直链烃基或支链烃基的烃基。烯基的实例可选自乙烯基(ethenyl或vinyl)(-CH＝CH2)、丙-1-烯基(-CH＝CHCH3)、丙-2-烯基(-CH2CH＝CH2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基、2-甲基丁-1，3-二烯、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1，3-二烯基。
本申请的术语″炔基″是指包含至少一个C≡C三键和2-18、诸如2-12、又诸如2-6个碳原子的直链烃基或支链烃基的烃基。炔基的实例包括乙炔基(-C≡CH)、1-丙炔基(-C≡CCH3)、2-丙炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
本申请的术语″环烷基″是指选自饱和及部分饱和的环状烃基的烃基，包括单环和多环(例如，二环和三环)基团。例如，环烷基可包括3-12、诸如3-8、又诸如3-6、3-5、3-4个碳原子。再例如，环烷基可选自3-12、诸如3-8、又诸如3-6个碳原子的单环基团。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。二环环烷基的实例包括具有7-12个环原子的排列为选自[4，4]、[4，5]、[5，5]、[5，6]和[6，6]环体系二环的那些，或排列为选自二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷的桥接二环的那些。所述环可为饱和的或者具有至少一个双键(即，部分饱和的)，但不是完全共轭的，且不是芳族的，如本申请所定义的芳族的。
本申请的术语″芳基″是指选自以下的基团：
5和6元碳环芳族环，例如，苯基；
二环体系诸如7-12元二环体系，其中至少一个环为碳环和芳族环，选自例如萘和茚满；和
三环体系诸如10-15元三环体系，其中至少一个环为碳环和芳族环，例如，芴。
例如，所述芳基选自稠合至任选含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5至7元环烷基或杂环的5和6元碳环芳族环，条件是当碳环芳族环与杂环稠合时，连接点在碳环芳族环处，且当碳环芳族环与环烷基稠合时，连接点可位于碳环芳族环处或位于环烷基处。从经取代的苯衍生物形成的且在环原子处具有自由价的二价基团命名为经取代的亚苯基。通过以自由价从碳原子除去一个氢原子而衍生自名称以″-基″结尾的单价多环碳基团的二价基团通过将“亚”添加至对应的单价基团名称中，例如，具有两个连接点的萘基称为亚萘基。然而，芳基在任何情况下不包括下文分开定义的杂芳基或者与下文分开定义的杂芳基不重叠。因此，如果一个或多个碳环芳族环与杂环芳族环稠合，所得环体系为杂芳基，而不是如本申请定义的芳基。
本申请的术语″芳基烷基″是指被如上所定义的芳基所取代的如上所定义的烷基。
本申请的术语″卤素″或″卤基″是指F、Cl、Br或I。
本申请的术语″杂芳基″是指选自以下的基团：
5-7元芳族单环，其包含至少一个杂原子，例如1-4个，在一些实施方案中1-3个，选自N、O和S的杂原子，且其余环原子为碳；
8-12元二环，其包含至少一个杂原子，例如1-4个，在一些实施方案中1-3个，在其它实施方案中1或2个，选自N、O和S的杂原子，且其余环原子为碳，且其中至少一个环为芳族的，且在芳族环中存在至少一个杂原子；和
11-14元三环，其包含至少一个杂原子，例如1-4个，或在一些实施方案中1-3个，或在其它实施方案中1或2个，选自N、O和S的杂原子，且其余环原子为碳，且其中至少一个环为芳族的，且在芳族环中存在至少一个杂原子。
例如，杂芳基包括与5-7元环烷基环稠合的5-7元杂环芳族环。就其中仅一个环包含至少一个杂原子的上述稠合二环杂芳基环系而言，连接点可位于杂芳族环或环烷基环。
当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，那些杂原子不彼此相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数不大于2。在一些实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数不大于1。
杂芳基的实例包括但不限于(由优先指定为1的连接位置开始编号)，吡啶基(诸如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2，4-嘧啶基、3，5-嘧啶基、2，4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、四唑基、噻吩基、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、***基、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(诸如1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(诸如1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-基)、苯并噁唑基(诸如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2，3-二唑基、1-氧杂-2，4-二唑基、1-氧杂-2，5-二唑基、1-氧杂-3，4-二唑基、1-硫杂-2，3-二唑基、1-硫杂-2，4-二唑基、1-硫杂-2，5-二唑基、1-硫杂-3，4-二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(诸如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(诸如1H-吲唑-5-基)和5，6，7，8-四氢异喹啉基。
本申请的术语“杂环的”、“杂环”或“杂环基”是指选自4-12元单环、二环和三环饱和及部分不饱和环的环，除至少一个杂原子、诸如1-4个杂原子又诸如1-3个或又诸如1或2个选自氧、硫和氮的杂原子外其还包含至少一个碳原子。本申请的“杂环”还指与5、6和/或7元环烷基、碳环芳环或杂芳环稠合的包含至少一个选自N、O和S的杂原子的5-7元杂环，条件是当杂环与碳环芳环或杂芳环稠合时，连接点位于杂环，而当杂环与环烷基稠合时，连接点可位于环烷基或杂环。本申请的“杂环”还指包含至少一个选自N、O和S的杂原子的脂族螺环，条件是连接点位于杂环。所述环可为饱和的或具有至少一个双键(即部分不饱和的)。杂环可取代有氧代。连接点可为杂环中的碳或杂原子。杂环不是本申请定义的杂芳基。
杂环的实例包括但不限于(由优先指定为1的连接位置开始编号)，1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、2，4-咪唑烷基、2，3-吡唑烷基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2，5-哌嗪基、吡喃基、2-吗啉基、3-吗啉基、氧杂环丙基、氮杂环丙基、硫杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、1，2-二硫杂环丁基、1，3-二硫杂环丁基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫吗啉基、氧硫杂环己基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、1，4-氧硫杂环己基、1，4-二氧杂环庚基、1，4-氧硫杂环庚基、1，4-氧氮杂环庚基、1，4-二硫杂环庚基、1，4-硫氮杂环庚基、1，4-二氮杂环庚基、1，4-二噻烷基、1，4-氮硫杂环己基、氧氮杂
Figure BDA0002008996390000081
基、二氮杂/>
Figure BDA0002008996390000082
基、硫氮杂/>
Figure BDA0002008996390000083
基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1，4-二噁烷基、1，3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫杂环戊基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、1，1-二氧代-硫吗啉基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基和氮杂二环[2.2.2]己基。经取代的杂环还包括取代有一个或多个氧代部分的环系，诸如哌啶基-N-氧化物、吗啉基-N-氧化物、1-氧代-1-硫吗啉基和1，1-二氧代-1-硫吗啉基。
本申请描述的化合物可含有不对称中心并且因此可作为对映异构体存在。若本申请描述的化合物具有两个或更多个不对称中心，它们可另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体都落入立体异构体的更广泛分类里。意在包括所有这些可能的立体异构体，如基本上纯的拆分的对映异构体，其外消旋混合物，以及非对映异构体混合物。意在包括本申请公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的所有立体异构体。除非另有说明，否则对一种异构体的引用适用于所有可能的异构体。当未指明具体的异构体组合物时，包括所有可能的异构体。
本申请使用的术语″基本上纯″表示目标立体异构体含有不超过35重量％、诸如不超过30重量％、又诸如不超过25重量％、再又诸如不超过20重量％的其它立体异构体。在一些实施方案中，术语″基本上纯″表示目标立体异构体含有不超过10重量％、诸如不超过5重量％，诸如不超过1重量％的任何其它立体异构体。
当本申请描述的化合物含有烯烃双键时，除非另有指明，否则这种双键意在包括E和Z几何异构体两者。
本申请描述的一些化合物可存在有不同的氢连接点，称为互变异构体。例如，包括羰基-CH2C(O)-基团(酮形式)的化合物可经历互变现象形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇形式)。当适用时，还意在包括酮和烯醇形式这两者，单独地以及其混合物。
可能有利的是将反应产物彼此分开和/或将产物与起始物质分开。通过本领域常规技术将每个步骤或系列步骤的期望产物分离和/或纯化(下文称为分离)至期望程度的均一性。典型地，这种分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以涉及任何数量，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高压、中压、低压液相色谱方法和设备；小规模分析；模拟移动床(″SMB″)和制备型薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快速色谱技术。本领域技术人员会应用各技术以实现所期望的分离。
非对映异构体可通过本领域技术人员已知的方法基于它们的物理化学差异分离为它们单个的非对映异构体，这些方法诸如色谱和/或分步结晶。对映异构体可通过如下方法分离：通过与合适的旋光化合物(例如，手性助剂诸如手性醇或Mosher酰氯)反应将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，将非对映异构体分离并将单独的非对映异构体转化(例如，水解)成相应的纯的对映异构体。对映异构体还可通过使用手性HPLC柱分离。
单个的立体异构体，例如基本上纯的对映异构体可通过使用诸如旋光拆分试剂的方法将外消旋混合物拆分而得到(Eliel，E.and Wilen，S.Stereochemistry of OrganicCompounds.New York：John Wiley&Sons，Inc.，1994；Lochmuller，C.H.，et al.″Chromatographic resolution of enantiomers：Selective review.″J.Chromatogr.，113(3)(1975)：pp.283-302)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法分开并分离，合适的方法包括：(1)与手性化合物形成离子性的非对映异构体盐并通过分步结晶或其它方法进行分离，(2)与手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并转化成纯的立体异构体，和(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer，Irving W.，Ed.Drug Stereochemistry：Analytical Methods andPharmacology.New York：Marcel Dekker，Inc.，1993.
″药学上可接受的盐″包括但不限于与无机酸形成的盐，选自，例如，盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐和硝酸盐；以及与有机酸形成的盐，选自，例如，苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、烷醇盐诸如乙酸盐，和与HOOC-(CH2)n-COOH(其中n选自0至4)形成的盐。类似地，药学上可接受的阳离子的实例包括但不限于，钠、钾、钙、铝、锂和铵。
此外，如果以酸加成盐形式获得本申请公开的化合物，游离碱可通过将酸盐的溶液碱化得到。相反，如果产物为游离碱，则加成盐诸如药学上可接受的加成盐可如下制备：根据从碱化合物制备酸加成盐的常规操作，将游离碱溶解于合适的有机溶剂中并以酸处理该溶液。本领域技术人员会认识到无需过度实验就可用于制备无毒性药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
如本申请所定义的，″其药学上可接受的盐″包括至少一种式I、II(包括II-1、II-2或II-3)或III的化合物的盐，以及至少一种式I、II(包括II-1、II-2或II-3)或III化合物的立体异构体的盐，诸如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。
″治疗″、″处理″或″处置″或″缓解″是指将本申请公开的至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐施用至被识别为有此需要的受试者，所述受试者具有例如癌症疾病或具有例如癌症疾病的症状或具有患例如癌症疾病的倾向，目的在于治愈、愈合、缓解、减轻、改变、弥补、改善、促进或影响例如癌症疾病、例如癌症疾病的症状或患例如癌症疾病的倾向。
术语″有效量″是指有效地(如上定义)″治疗″受试者中的疾病或病症的至少一种本申请所公开的化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐和其溶剂化物。在癌症的情况中，有效量会在受试者中引起可观察到的或可测量的任何变化，如在上文″治疗″、″处理″、″处置″和″缓解″的定义中所描述的。例如，有效量可以减少癌症或肿瘤细胞的数量；减少肿瘤尺寸；抑制或停止肿瘤细胞渗透进入周围器官，包括例如肿瘤扩散进入软组织和骨；抑制和停止肿瘤转移；抑制和停止肿瘤生长；在一定程度上缓解与癌症相关的一个或多个症状，减少发病率和死亡率；改善生活品质；或者这些效果的组合。有效量可为足以降低响应抑制PARP的疾病的症状的数量。对于癌症疗法，体内功效可例如通过评估以下项目来测量：存活持续时间、疾病推进的时间(TTP)、响应率(RR)、响应持续时间和/或生活品质。有效量可如本领域技术人员所认识的，根据施用途径、赋形剂使用和与其它试剂的共同使用而变化。
术语″抑制″表明在生物活性或工艺的基线活性中的降低。″抑制PARP″是指作为对本申请公开的至少一种化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐的直接或间接响应，在PARP活性中的降低，相对于不存在所述至少一种化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐情况下的PARP的活性而言。活性的降低不受理论的限制并且可以是由于本申请公开的至少一种化合物、其立体异构体和其药学上可接受的盐与PARP的直接相互作用，或者是由于本申请公开的至少一种化合物、其立体异构体和其药学上可接受的盐与一种或多种转而影响PARP活性的因素的作用。例如，本申请公开的至少一种化合物、其立体异构体和其药学上可接受的盐的存在可通过直接结合至PARP、通过(直接或间接)造成另一降低PARP活性的因素或者通过(直接或间接)降低PARP在细胞或有机体中的存在量而降低PARP活性。
术语″至少一个取代基″包括，例如，1-4个、诸如1-3个、又诸如1或2个取代基。例如，本申请中的″至少一个取代基R12″包括1-4个、诸如1-3个、又诸如1或2个选自本申请描述的R12列表的取代基
本申请中的术语“施用”、“给药”，当应用于动物、人类、实验受试者、细胞、组织、器官或生物体液时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人类、受试者、细胞、组织、器官或生物体液的接触。对细胞的处置包括试剂与细胞的接触及试剂与体液的接触，其中所述体液与细胞接触。术语“施用”也指例如试剂、诊断剂、结合化合物或另一种细胞的体外和离体处置，例如对细胞的体外和离体处置。本申请中的术语“受试者”包括任何有机体，优选动物，更优选哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、犬、猫、免)且最优选人类。
本申请中的术语“抗体”以最广义使用且具体涵盖抗体(包括全长单克隆抗体)及抗体片段，只要其识别抗原诸如靶向抗原(例如，CD20)或免疫检查点(例如，PD-1)即可。抗体分子通常为单特异性的，但也可描述为独特特异性、异种特异性或多特异性的。抗体分子借助于特异性结合位点与抗原上的特异性抗原决定簇或表位结合。
本申请中的术语“单克隆抗体”或“mAb”或“Mab”是指基本上均质的抗体群，即包含在群中的抗体分子除可少量存在的可能天然存在的突变外在氨基酸序列方面是相同的。相反地，常规(多克隆)抗体制品通常包含多种不同的抗体，所述多种不同的抗体在其可变域特别是其CDR中具有不同的氨基酸序列，所述常规(多克隆)抗体制品通常对不同的表位都具有特异性。修饰语“单克隆”表示由基本上均质的抗体群获得的抗体的特征且不应被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体(mAb)可通过本领域技术人员已知的方法获得。参见例如美国专利4,376,110。本申请公开的mAb可为任何免疫球蛋白类别，包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及其任何亚类。可对产生mAb的杂交瘤进行体外或体内培养。体内产生可获得高滴度的mAb，其中将来自各个杂交瘤的细胞腹膜内注射到小鼠(诸如原始-始发态(pristine-primed)Balb/c小鼠)中以产生含有高浓度期望mAb的腹水液。可使用本领域技术人员公知的柱色谱法由上述腹水液或培养物上清液纯化同种型IgM或IgG的mAb。
通常，基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包含两对相同的多肽链，每对具有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包含主要负责抗原识别的具有约100-110个或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基末端部分可限定主要负责效应子功能的恒定区。通常，人轻链被分类为κ和λ轻链。另外，人重链通常被分类为α、δ、ε、γ或μ且将抗体的同种型分别限定为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在轻链和重链中，可变区和恒定区通过具有约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，其中重链还包含具有约10个或更多个氨基酸的“D”区。
每个轻链/重链(Vl/Vh)对的可变区形成抗体结合位点。因此，完整抗体通常具有两个结合位点。除双功能或双特异性抗体外，两个结合位点通常是相同的。
通常，重链和轻链的可变结构域都包含位于相对保守的框架区(FR)之间的三个高变区(也称为“互补决定区(CDR)”)。CDR通常通过框架区来对齐，由此能够结合特异性表位。通常，从N末端到C末端，轻链和重链可变结构域两者均包含FR-1(或FR1)、CDR-1(或CDR1)、FR-2(或FR2)、CDR-2(或CDR2)、FR-3(或FR3)、CDR-3(或CDR3)和FR-4(或FR4)。通常，根据以下文献的定义将氨基酸指派至各个结构域：Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，Kabat等，National Institutes of Health，Bethesda，Md.，5<m>ed.，NIHPubl.No.91-3242(1991)；Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32：1-75；Kabat等(1977)J.Biol.Chem.252：6609-6616；Chothia等(1987)J Mol.Biol.196：901-917；或Chothia等(1989)Nature 342：878-883。
术语“高变区”是指抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。高变区包含来自“互补决定区”或“CDR”(即轻链可变结构域中的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3及重链可变结构域中的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)的氨基酸残基。参见Kabat等(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(通过序列定义抗体的CDR区)；另见Chothid and Lesk(1987)J.Mol.Biol.196：901-917(通过结构定义抗体的CDR区)。术语“框架”或“FR”是指除本申请定义为CDR残基的高变区残基外的那些可变结构域残基。
除非另有说明，否则“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留与由全长抗体结合的抗原特异性结合的能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗原结合片段的实例包括但不限于，Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如，单链Fv(sc-Fv)；纳米抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
与特定靶标蛋白“特异性结合”的抗体是与其它蛋白质相比优先与该靶标结合的抗体，但是该特异性不需要绝对结合特异性。若抗体的结合在例如不产生不期望的结果诸如假阳性的情况下决定样品中靶标蛋白的存在，则抗体被认为就其所预期的靶标而言是“特异性的”。可用于本发明的抗体或其结合片段将以比与非靶标蛋白的亲和力大至少2倍、优选大至少10倍、更优选大至少20倍且最优选大至少100倍的亲和力与靶标蛋白结合。据说，本申请抗体与包含给定氨基酸序列的多肽例如成熟人PD-1分子的氨基酸序列特异性结合，条件是其与包含该序列的多肽结合，但是不与不具有该序列的蛋白质结合。
本申请中的术语“人抗体”是指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。若在小鼠、小鼠细胞或衍生自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则人抗体可含有鼠型糖链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指分别仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
术语“人源化抗体”是指以下抗体形式，其含有来自非人类(例如，鼠类)抗体以及人抗体的序列。上述抗体含有衍生自非人类免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将包含基本上所有至少一个且通常为两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环与非人类免疫球蛋白的那些高变环是对应的且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的那些FR区。人源化抗体任选还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)通常为人免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。当必要时，将前缀“hum”、“hu”、“Hu”或“h”添加至抗体克隆名称以区分人源化抗体与亲本啮齿动物抗体。啮齿动物抗体的人源化形式通常将包含与亲本啮齿动物抗体相同的CDR序列，尽管可包括某些氨基酸取代以增加亲和力、增加人源化抗体的稳定性或出于其它原因。
本申请中的术语“癌症”或“肿瘤”表示或描述的是涉及具有侵入或扩散至身体其它部分的可能性的异常细胞生长的生理状况。“疾病”是指任何病、不适、恙、症状或适应症，且可用术语“病症”或“病况”替代。
在一些实施方案中，所述癌症为结肠直肠癌、胃癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、子***、腹膜癌、***癌、去势抵抗性***癌、胆管癌、胃/胃-食管接合部癌、泌尿道上皮癌、胰腺癌、外周神经鞘癌、子宫癌、黑素瘤或淋巴瘤。
术语“CDR”是指免疫球蛋白可变区中的互补性决定区，使用Kabat编码***进行限定，除非另有指明。
免疫检查点抑制剂
在一些实施方案中，PARP抑制剂与免疫检查点抑制剂共同施用，所述免疫检查点抑制剂为PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAM TIGHT、CTCNI的抑制剂或其组合。
“免疫检查点(检查点蛋白)”是免疫***中调高信号(共刺激分子)或调低信号的分子。并且它们还调节T细胞活化或功能。许多癌症通过抑制T细胞信号保护自身不受免疫***攻击。完全或部分降低、抑制、干涉或调控一个或多个检查点蛋白的“免疫检查点抑制 剂”已经越来越多地被视为癌症免疫治疗的靶标。已知多个检查点蛋白，诸如PD-1(程序性死亡分子1，CD279)及其配体PD-L1(也称为CD274或B7-H1)和PD-L2；TIM-3(T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3，也已知为HAVCR2)及其配体Gal-9；CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关的蛋白4，CD152)及其配体CD80和CD86；和A2AR(腺苷A2A受体)；B7-H3(CD276)；B7-H4(VTCN1)；BTLA(B和T淋巴细胞衰减器，CD272)及其配体HVEM(疱疹病毒侵入介体)；IDO(吲哚胺2，3-双加氧酶)；LAG3(淋巴细胞活化基因-3)；VISTA(T细胞活化的V结构域Ig抑制剂)；KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)。这些蛋白负责T细胞响应的共调解性和抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节和保持生理免疫响应的持续时间和幅度及自身耐受。免疫检查点抑制剂包括抗体或衍生自抗体。
免疫***具有对于保持自身耐受和调控免疫响应很关键的多个抑制通路。在T细胞中，响应的幅度和质量经由通过T细胞受体的抗原识别而启动，并且由平衡共刺激性和抑制性信号的免疫检查点蛋白调节。
PD-1为免疫检查点蛋白，其限制在对感染的炎性响应时外周组织中T细胞的活性且体外限制自身免疫性PD-1阻断，在混合淋巴细胞反应中通过特定抗原靶标或同种细胞增强响应于挑战的T细胞增殖和细胞因子产生。PD-1表达和响应之间的强的联系显示为PD-1的阻断(Pardoll，Nature Reviews Cancer，12：252-264，2012)。PD-1阻断可通过包括结合PD-1或其配体的抗体的多种机制来完成。PD-1和PD-L1阻断剂的实例，也称为PD-1和PD-L1抑制剂，描述于US7488802；US7943743；US8008449；US8,168,757；US8217149及WO03042402、WO2008156712、WO2010089411、WO2010036959、WO2011066342、WO2011159877、WO2011082400、WO2011161699和WO2015035606中。在一些实施方案中，所述PD-1抑制剂包括特异性结合PD-1的抗体或其抗原结合片段。在某些其它实施方案中，所述PD-1阻断剂包括抗PD-1抗体和类似的结合蛋白，诸如描述于US8008449B2中的纳武单抗(nivolumab)(MDX1106，BMS 936558，ONO-4538，
Figure BDA0002008996390000131
)，一种通过其配体PD-L1和PD-L2结合PD-1并阻断PD-1的活化的全人IgG4抗体；公开于US8168757B2中的派姆单抗(pembrolizumab)(lambrolizumab，MK-3475或SCH 900475，/>
Figure BDA0002008996390000132
)，一种针对PD-1的人源化单克隆IgG4抗体；皮地利珠单抗(pidilizumab)(CT-011)，一种结合PD-1的人源化抗体；AMP-224，一种B7-DC的融合蛋白；一种抗体Fc部分；BMS-936559(MDX-1105-01)，用于PD-L1(B7-H1)阻断，用于PD-1阻断。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂为抗体或其抗原结合片段，或化学分子药物。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂为化学分子药物，其为PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90，CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAM TIGHT、CTCNI的抑制剂，或其组合；或抗体或其抗原结合片段，其特异性结合一种或多种选自以下的检查点蛋白：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、Gal-9、CTLA-4、CD80、CD86、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、BTLA、HVEM、IDO1、IDO2、TDO、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD90、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、ICOS、LAIR1、LIGHT、MARCO、PS、OX-40、SLAMTIGHT或CTCNI。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂为在WO 2015/035606 A1中公开的单克隆抗体或其片段。
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(V1)的抗体，其含有下列互补决定区(CDR)：
Figure BDA0002008996390000141
Figure BDA0002008996390000151
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(V1)的抗体，其含有下列CDR的任意组合：
Figure BDA0002008996390000152
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(V1)的抗体，其包含：
Figure BDA0002008996390000153
Figure BDA0002008996390000161
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为含有IgG4重链效应子或恒定域的抗体，其包含SEQ ID NO：83-88中的任一种。
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为含有F(ab)或F(ab)2的抗体，其包含上述结构域，包括重链可变区(Vh)、轻链可变区(V1)和IgG4重链效应子或恒定域。
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vk)及IgG4重链效应子或恒定域的抗体，其包含SEQ ID NO：87或88，其中所述重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vl)包含：
Figure BDA0002008996390000162
优选地，所述抗PD-1单克隆抗体为包含重链可变区(Vh)和轻链可变区(V1)(各包含SEQ ID No24和SEQ ID No26)及IgG4重链效应子或恒定域(包含SEQ ID NO 88)的抗体，下文称为Mab1，其特异性结合PD-1，特别是包括K45和I93或者I93、L95和P97的PD-1残基；并且抑制PD-1介导的细胞信号传导和免疫细胞的活性，抗体结合至一组其配体结合所要求的氨基酸残基。
所述抗PD1单克隆抗体及其抗体片段可根据WO2015/035606 A1中的公开内容制备，将其全文公开内容作为参考引入本申请。
化疗剂
在一些实施方案中，所述PARP抑制剂与化疗剂共同施用。
化疗剂是使用一种或多种抗癌药物(化疗剂)作为标准化化疗治疗方案中的部分的一类癌症治疗。在一些实施方案中，所述化疗剂选自紫杉醇或依托泊苷加卡铂(E/C)。
PARP抑制剂
“PARP抑制剂”是指式(I)化合物或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物。
如在上述六个方面中的每一个中所公开的，所述PARP抑制剂为式(I)化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，
Figure BDA0002008996390000171
其中：
RN选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
X选自C、N、O和S；
m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；
t为0、1、2或3的整数；
R1，在各自出现时，独立地选自卤素、CN、NO2、OR9、NR9R10、NR9COR10、NR9SO2R10、CONR9R10、COOR9、SO2R9、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R2选自氢、COR9、CONR9R10、CO2R9、SO2R9、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R3、R4、R5、R6、R7和R8，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR9R10、-OR9、氧代、-COR9、-CO2R9、-CONR9R10、-NR9CONR10R11、-NR9CO2R10、-NR9SO2R10、-SO2R9、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基中每一个独立地任选被至少一个取代基R12取代，
或(R3和R4)和/或(R4和R5)和/或(R5和R6)和/或(R6和R7)和/或(R7和R8)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和的、部分或全部不饱和的具有0、1或2个独立选自以下的杂原子的环：-NR13-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-，并且所述环任选被至少一个取代基R12取代，前提是：
当X为O时，R5和R6不存在，
当X为N时，R6不存在，
当X为S时，R5和R6不存在，或R5和R6中至少一个为氧代，
当R3和R4中一个为氧代时，另一个不存在，
当R7和R8中一个为氧代时，另一个不存在，且
当X为C且R5和R6中一个为氧代时，另一个不存在；
R9、R10和R11，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R12选自CN、卤素、卤代烷基、NO2、-NR′R″、-OR′、氧代、-COR′、-CO2R′、-CONR′R″、-NR′CONR″R″′、-NR′CO2R″、-NR′SO2R″、-SO2R′、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R′、R″和R″′各自独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或(R′和R″)和/或(R″和R″′)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和的、部分或全部不饱和的具有0、1或2个独立选自以下的另外杂原子的环：-NR13-、-O-、-S-、-SO-和-SO2-，
R13选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。
在一些实施方案中，所述PARP抑制剂为式(II)的化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，
Figure BDA0002008996390000181
其中：
RN选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；
t为0、1、2或3的整数；
R1，在各自出现时，独立地选自卤素、CN、NO2、OR9、NR9R10、NR9COR10、NR9SO2R10、CONR9R10、COOR9、SO2R9、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R2选自氢、COR9、CONR9R10、CO2R9、SO2R9、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R3、R4、R5、R7和R8，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR9R10、-OR9、氧代、-COR9、-CO2R9、-CONR9R10、-NR9CONR10R11、-NR9CO2R10、-NR9SO2R10、-SO2R9、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代，或(R3和R4)和/或(R4和R5)和/或(R5和R7)和/或(R7和R8)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和的、部分或全部不饱和的具有0、1或2个独立选自以下的杂原子的环：-NR13-、-O-、-S-、-SO-和-SO2-，并且所述环任选被至少一个取代基R12取代，前提是：
当R3和R4中一个为氧代时，另一个不存在，且
当R7和R8中一个为氧代时，另一个不存在；
R9、R10和R11，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每个独立地任选被至少一个取代基R12取代；
R12选自CN、卤素、卤代烷基、NO2、-NR′R″、-OR′、氧代、-COR′、-CO2R′、-CONR′R″、-NR′CONR″R″′、-NR′CO2R″、-NR′SO2R″、-SO2R′、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R′、R″和R″′各自独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或(R′和R″)和/或(R″和R″′)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和的、部分或全部不饱和的具有0、1或2个独立选自以下的另外杂原子的环：-NR13-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-；且
R13选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。
在一些实施方案中，所述PARP抑制剂选自下列化合物：
Figure BDA0002008996390000201
/>
Figure BDA0002008996390000211
/>
Figure BDA0002008996390000221
/>
Figure BDA0002008996390000231
其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物。
如在上述六个方面中每一个中所公开的，所述PARP抑制剂为式(III)化合物-即，化合物A，
Figure BDA0002008996390000232
或其药学上可接受的盐。
如在上述六个方面中每一个中所公开的，所述PARP抑制剂为式(IV)化合物-即，化合物B。
Figure BDA0002008996390000241
本申请公开的PARP抑制剂，诸如式(III)和(IV)化合物，可通过在WO2013/097225A1和PCT申请PCT/CN2016/096200中公开的合成路线来合成，将其全部内容引入本申请作为参考。
组合疗法
组合疗法可按同时或分开或依序方案来施用。当依序施用时，组合可按两次或更多次给药来施用。组合施用包括使用分开的制剂共同施用和以任意顺序连续施用，其中优选存在两种(或所有)活性剂同时发挥其生物活性的时段。
任何上述共同施用的药剂的合适剂量是目前使用的那些剂量且可由于PARP抑制剂和化疗剂或免疫检查点抑制剂的组合作用(协同作用)诸如增加的治疗指数或减轻的毒性或其它副作用或后果而降低。
在抗癌疗法的具体实施方案中，PARP抑制剂和化疗剂或免疫检查点抑制剂可进一步与手术疗法和放射疗法组合。
在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，本申请公开的PARP抑制剂和化疗剂或免疫检查点抑制剂的量及施用的相对时间安排通过待治疗的患者的个体需要、施用途径、疾病或病痛的严重程度、给药时间表以及指定医生所作出的评价和判断来确定。
例如，PARP抑制剂的施用剂量为1-120mg(就母体化合物而言)、优选1-80mg(就母体化合物而言)，并且施用频率为每天两次(BID)；PARP抑制剂的施用剂量为1-120-240mg(就母体化合物而言)、优选60-120mg(就母体化合物而言)，并且施用频率为每天一次(QD)。在一些情况中，更适合应用上述剂量范围的下限，而在其它情况中，可使用更高的剂量而不会导致有害的副作用。
PD-1拮抗剂以0.5-30mg/kg、诸如0.5-20mg/kg、又诸如0.5-10mg/kg的剂量每周一次(QW)、或每两周一次(Q2W)、或每三周一次(Q3W)或每四周一次(Q4W)施用。优选地，所述PD-1拮抗剂以2mg/kg的剂量每三周一次(Q3W)施用或以200mg的剂量每三周一次(Q3W)施用。
本申请公开的PARP抑制剂和化疗剂或免疫检查点抑制剂可按多种已知方式施用，诸如口服、局部、经直肠、胃肠外、通过吸入喷雾或经由植入的储库，尽管任何给定情况下最合适的途径将取决于具体的宿主及施用活性成分所针对的病症的性质和严重程度。本申请使用的术语“胃肠外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。
在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，本申请公开的PARP抑制剂和化疗剂或免疫检查点抑制剂可按不同途径施用。在优选的实施方案中，所述PARP抑制剂口服施用，而化疗剂或免疫检查点抑制剂肠胃外施用，诸如皮下、皮内、静脉内或腹膜内施用。
在上述六个方面中每一个的一个实施方案中，所述抗PD-1单克隆抗体是名称为Mab-1的抗体，其包括重链可变结构域(Vh)和轻链可变结构域(V1)(分别包括SEQ ID No 24和SEQ ID No 26)和IgG4重链效应子或恒定域(包括SEQ ID NO 88)；并且所述PARP抑制剂为本申请所公开的式(III)或(IV)的化合物。
在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，所述PD-1拮抗剂Mab-1以0.5-20mg/kg的剂量向受试者静脉内注射(i.v.)或腹膜内注射(i.p.)QW或Q2W或Q3W或Q4W施用，并且所述PARP抑制剂化合物A或化合物B以1-120mg BID的剂量向受试者施用。在一些优选的实施方案中，所述PD-1拮抗剂Mab-1以0.5-10mg/kg的剂量向受试者静脉内注射或腹膜内注射QW或Q2W或Q3W或Q4W施用，并且所述PARP抑制剂化合物A或化合物B以1-80mg BID的剂量向受试者施用。在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，所述PD-1拮抗剂Mab-1以2mg/kg每三周一次(Q3W)向受试者施用，并且所述PARP抑制剂化合物A或化合物B以1-80mg BID的剂量向受试者施用。在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，所述PD-1拮抗剂Mab-1以2mg/kg的剂量向受试者Q3W施用，并且所述PARP抑制剂化合物A或化合物B以PARP抑制剂为20mg、40mg或60mg BID的剂量向受试者施用，优选地，以40mg BID的剂量向受试者施用。在上述六个方面中每一个的一些实施方案中，所述PD-1拮抗剂Mab-1以200mg的剂量向受试者Q3W施用，并且所述PARP抑制剂化合物A或化合物B以40或60mg BID的剂量向受试者施用，优选地，以40mg BID的剂量向受试者施用。
实施例
本发明进一步由举例说明本发明的以下实施例进行示例性说明，但是并不受其限制。在本发明的实施例中，除非另有明确陈述，否则技术或方法为本领域中常规的技术或方法。
实施例1.制备化合物A和化合物B
步骤1：合成化合物-2
Figure BDA0002008996390000251
溴乙酸叔丁基酯(51.7Kg)溶解在无水乙腈(72Kg)中。将温度升高至65-75℃，然后添加甲基二氢吡咯(22Kg)。在反应完成后浓缩反应混合物，残余的乙腈通过添加THF除去且然后浓缩。GC显示完全除去乙腈后，添加更多的THF并搅拌。所得固体经过滤并经收集。得到44.1Kg的灰白色固体化合物-2。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.91(s，2H)，4.15(m，2H)，3.29(m，2H)，2.46(s，3H)，)，2.14(m，2H)，1.46(s，9H)ppm。
步骤2：合成化合物-3
Figure BDA0002008996390000261
向三甲基甲硅烷基乙炔(12.4Kg)在THF中的冷(-60℃)溶液中添加正丁基锂在己烷(43.4Kg)中的溶液。在完成添加正丁基锂溶液后，所得混合物再搅拌1-2小时且然后将全部溶液转移至化合物-2(31Kg)在THF中的悬浮液(于-60℃冷却)中。转移完成后，所得混合物温热至室温并搅拌1小时。反应以水淬灭，以石油醚萃取。有机相以盐水洗涤，以硫酸钠干燥，浓缩得到25.1Kg的化合物-3。1H NMR(400MHz，DMS0-d6)δ3.34(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.78(d，J＝16.0Hz，1H)，2.27(m，1H)，1.93(m，1H)，1.68(m，3H)，1.41(s，9H)，1.24(s，3H)，0.13(s，9H)ppm。
步骤3：合成化合物-4
Figure BDA0002008996390000262
向70.1Kg的化合物-3在THF中的冷(0-5℃)溶液添加在THF中的四丁基氟化铵(13.3Kg)。在完成脱甲硅烷基化，反应以水淬灭，以石油醚萃取(290Kg)并且有机相经浓缩并流经硅胶垫。滤液经浓缩得到48Kg的化合物-4。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.36(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.82(d，J＝16.0Hz，1H)，2.28(m，1H)，1.97(m，1H)，1.70(m，3H)，1.41(s，9H)，1.26(s，3H)ppm。
步骤4：合成化合物-5
Figure BDA0002008996390000263
将化合物-4(48Kg)在THF中的溶液温热至50-60℃，向上述溶液中添加(-)-二-对甲基苯甲酰基-L-酒石酸(69.6Kg)在THF中的溶液。所得混合物于50-60℃搅拌1-2小时且然后逐渐冷却至0-10℃。所得盐固体经过滤并且重悬于甲基叔丁基醚中并在50-60℃加热1小时。混合物逐渐冷却至0-5℃。所得固体经过滤得到13.1Kg的灰白色固体。该固体以氢氧化钠水溶液处理，以石油醚萃取，浓缩得到13.1Kg的化合物-5(ee≥96％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.36(d，J＝16.0Hz，1H)，3.15(m，1H)，2.82(d，J＝16.0Hz，1H)，2.29(m，1H)，1.97(m，1H)，1.70(m，3H)，1.41(s，9H)，1.26(s，3H)ppm。
步骤5：合成化合物-6
Figure BDA0002008996390000271
中间体B(14Kg)、双(三苯基)二氯化钯(0.7Kg)、CuI(0.42Kg)和四甲基胍(11.5Kg)溶解于DMF(48.1Kg)中。所得溶液经搅拌并脱气且然后在氮气下加热。滴加化合物-5(9.24Kg)在DMF(16Kg)中的溶液。偶联后，有机相经浓缩，残余物以水(145Kg)和甲基叔丁基醚(104Kg)搅拌，全部混合物流经硅藻土(celite)垫，分离。有机相以硫脲(14Kg)在水(165kg)和盐水(100Kg)中的溶液洗涤，浓缩。残余物溶解在正庚烷(120Kg)和乙酸乙酯(28Kg)的混合物中。溶液与木炭(1.4kg)混合，于40-50℃加热1-2小时，通过硅胶垫过滤。滤液经浓缩得到化合物-6固体(14.89Kg)和液体滤液(13Kg庚烷溶液，含有1.24Kg的化合物-6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(d，J＝9.6Hz，1H)，7.55(m，3H)，7.32(m，2H)，3.87(s，3H)，3.37(d，J＝16.0Hz，1H)，3.22(m，1H)，2.94(d，J＝16.0，Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.48(m，1H)，2.29(s，3h)，2.26(m，1H)，1.82(m，2H)，1.49(s，3H)，1.43(s，9H)ppm。
步骤6：合成化合物-7
Figure BDA0002008996390000272
将化合物-6的上述庚烷溶液添加至冷的三氟甲烷磺酸(66.1Kg)中，同时保持内部温度低于25℃。然后分批添加固体化合物-6(14.87Kg)。完成添加化合物-6后，将反应混合物温热至25-30℃并搅拌直到完成反应。全部混合物倒入乙酸钠(123.5Kg)在水(240Kg)中的溶液中。然后通过添加固体碳酸钾(46.1Kg)将溶液的pH调节至7-8。混合物以二氯甲烷(509Kg)萃取，浓缩。残余物与正庚烷(41Kg)混合，再次浓缩得到沉淀，其经过滤并以正庚烷(8Kg)洗涤并干燥。得到8.78Kg的化合物-7。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.30(s，1H)，7.35(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.08(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.68(d，J＝17.2Hz，1H)，3.21(d，J＝17.2Hz，1H)，3.06(m，1H)，2.68(m，1H)，1.96(m，1H)，1.74(m，1H)，1.49(s，3H)ppm。
步骤7：合成化合物A-粗产物1
Figure BDA0002008996390000281
粗产物1
化合物-7(8.76Kg)溶解在甲醇(69Kg)中并将内部冷却至低于25℃。添加乙酸(9.3Kg)和肼水合物(7.4Kg，85％)，同时保持内部温度低于25℃。在脱气并再次填充氮气(重复三次)后，反应混合物于55-60℃搅拌4小时。完成反应后，混合物与水(29Kg)混合。有机相经浓缩并添加在水(40Kg)中的碳酸钾(12.5Kg)。所得固体经过滤，以水(18.3Kg)洗涤。固体以水(110Kg)浆化，离心，干燥并以乙醇(9.4Kg)浆化，真空干燥得到化合物A-粗产物1(7.91Kg)。1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)δ12.0(s，1H)，10.2(s，1H)，7.31(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，7.19(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，3.77(d，1H，J＝16.4Hz)，3.34(d，1H，J＝16.4Hz)，2.97-3.02(m，1H)，2.54-2.58(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.90-1.94(m，1H)，1.73-1.75(m，1H)，1.47(s，3H)，1.43-1.45(m，1H)ppm。MS(ESI)m/e[M+1]+299。
步骤8：合成化合物A-粗产物2
Figure BDA0002008996390000282
粗产物2
在氮气保护下，化合物A(粗产物1)(7.88Kg)与异丙醇(422Kg)一起搅拌并于70-80℃加热1-2小时直到固体完全消失。添加(+)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸(10.25Kg)在异丙醇(84.4Kg)中的溶液。搅拌混合物14-16小时，过滤并以异丙醇(16Kg)洗涤，干燥。所得盐添加至碳酸钾(6.15Kg)在水(118Kg)中的搅拌溶液。沉淀经离心、过滤并以水(18Kg)洗涤。固体以水(110Kg)浆化，离心，干燥。固体溶解在THF(75Kg)中，添加活性碳(0.8Kg)。混合物经脱气并通过氮气再保护，搅拌并于40-45℃加热1-2小时，冷却，通过硅藻土过滤，浓缩得到固体，其以乙醇(6.5Kg)浆化，过滤得到5.6Kg的化合物A粗产物2。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.0(s，1H)，10.2(s，1H)，7.31(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，7.19(dd，1H，J＝9.6，2.0Hz)，3.77(d，1H，J＝16.4Hz)，3.34(d，1H，J＝16.4Hz)，2.97-3.02(m，1H)，2.54-2.58(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.90-1.94(m，1H)，1.73-1.75(m，1H)，1.47(s，3H)，1.43-1.45(m，1H)ppm。MS(ESI)m/e[M+1]+299.
步骤9：合成化合物B
Figure BDA0002008996390000291
化合物A-粗产物2(5.3Kg)与异丙醇(41.6Kg)和水(15.9Kg)的溶液混合。混合物经脱气并在氮气下再保护且然后加热至60℃并搅拌2-4小时直到固体完全溶解。将温度升高至70-80℃并添加水(143Kg)。所得混合物加热至内部温度为70-80℃且然后停止该加热但温和地搅拌16小时。沉淀经过滤，以水(19Kg)洗涤并以水(21kg)浆化2小时。所得固体经过滤，以水(20Kg)洗涤。过滤的固体在低于45℃的温度干燥24-36小时。得到化合物A倍半水合物(4.22kg)，其粒径为D90＝51.51um，D50＝18.62um，D10＝7.63um。该PSD范围对于制剂研发几乎是理想的。
粉末X射线衍射图(PXRD)用来表征晶体化合物2，参见图1。晶体化合物2的1H-NMR示于图2中。晶体化合物2的13C-NMR示于图3中。
实施例2 PARP抑制剂和抗PD-1 mAb组合的效果
材料和方法
PBMC分离和活化
签署知情同意书后，收集健康人捐赠者的血液并根据具有小的修改的制造商的方案用Ficoll(GE Healthcare，17-1440-02)分离PBMC。简而言之，以等体积的1×DPBS(
Figure BDA0002008996390000292
14190-144)稀释新鲜血液，将等体积的Ficoll添加至50mL无菌管中，并非常小心地将新鲜的血液添加至Ficoll的表面上。随后在400g室温离心40分钟。小心移除上层并将淋巴细胞层移液至干净的无菌管，添加3体积的1×DPBS并在200g室温离心10分钟。弃上清后，以10mL 1×DPBS悬浮细胞并再洗涤2次。以5mL RPMI-1640(/>
Figure BDA0002008996390000293
22400-089)完全培养基(添加有10％胎牛血清(/>
Figure BDA0002008996390000294
10099-141)悬浮细胞。
对于PBMC的活化，将具有1μg/mL抗CD3抗体(eBioscience，16-0037-85)的5mL 1×DPBS添加至T25平板(Corning，430168)，在4℃温育过夜。丢弃T25板中的液体并用5mL 1×DPBS洗涤板2次，丢弃1×DPBS并添加悬浮于5mL RPMI-1640完全培养基中的新鲜分离的6-8×106个PBMC。将板放置于37℃，5％CO2细胞温育器。2-3天后，收集细胞并计数和量。
原代人肿瘤细胞分离
具有癌症的患者签署知情同意书后，收集来自患者的肿瘤活检组织切片(biopsy)或手术肿瘤组织样品。在收集肿瘤当日，在生物安全柜中将肿瘤无菌切碎成小块。随后以10mL消化缓冲液悬浮肿瘤块，在37℃和200rpm消化0.5-1小时。通过使用70μm过滤器过滤移除未消化的肿瘤块。通过过滤器的具有肿瘤细胞的液体以300g室温离心5分钟。丢弃上清并以10mL 1×DPBS悬浮细胞并再洗涤2次。以培养基BGB重悬细胞。
所述培养基是培养基BGB，其包含如下所列的基质：
1)F12/DMEM 1∶1培养基500mL(
Figure BDA0002008996390000301
31765-035)；
2)胎牛血清50ml(
Figure BDA0002008996390000302
10099-141)；
3)B-27上清1x(
Figure BDA0002008996390000303
17504-044)；
4)B2上清1x(
Figure BDA0002008996390000304
17502-048)；
5)胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS-G)0.5x(
Figure BDA0002008996390000305
41400045)；
6)N-乙酰基-L-半胱氨酸1.25mM(
Figure BDA0002008996390000306
V900429)；
7)L-抗坏血酸25ug/ml(
Figure BDA0002008996390000307
V900134)；
8)叶酸3.5uM(
Figure BDA0002008996390000308
V900422)；
9)腐胺180uM(
Figure BDA0002008996390000309
V900377)；
10)[Leu15]-胃泌素10nM(
Figure BDA00020089963900003010
SCP0151)；
11)硒1.2uM(
Figure BDA00020089963900003011
51300-044)；
12)葡萄糖25mM(
Figure BDA00020089963900003012
V900392)；
13)β-ME 0.2mM(
Figure BDA00020089963900003013
M7522-100ML)；
14)重组人HB-EGF 10ng/ml(Peprotech，100-47)；
15)重组人R-脊椎蛋白-1 1μg/ml(Peprotech，120-38)；
16)重组人Noggin 100ng/ml(Peprotech，120-10C)；
17)HEPES 1x(
Figure BDA00020089963900003014
15630080)；
18)谷氨酰胺2mM(
Figure BDA00020089963900003015
25030081)；
19)MEM非必需氨基酸溶液1x(
Figure BDA00020089963900003016
11140050)；
20)丙酮酸钠1x(
Figure BDA00020089963900003017
11360070)；
21)青霉素-链霉素1x(Gibco，15140122)；和
22)ROCK抑制剂y-27632 10μM(
Figure BDA00020089963900003018
Y0503)。
流式细胞术分析
收集活化的PBMC并以1×DPBS洗涤。使用荧光探针缀合的抗PD-1抗体(eBioscience，12-2799-42)染色3×105个细胞。通过流式细胞术分析PBMC上表达的PD-1。
在饲养细胞上培养原代人肿瘤细胞
C3H10T1/2细胞(ATCC，
Figure BDA00020089963900003020
CCL-226TM)是小鼠胚胎细胞系并用作饲养细胞。当约90％的C3H10T1/2细胞汇合时，以10μg/mL丝裂霉素C(MCC，/>
Figure BDA00020089963900003019
M0503)在37℃处理细胞2小时。随后丢弃具有MMC的培养基并以1×DPBS洗涤3次。收集细胞并在液氮中保存。在接种分离的原代肿瘤细胞前4小时，将经MMC处理的C3H10T1/2细胞接种至6孔板中。肿瘤细胞接种后2天，更换培养基以去除未附着的细胞。根据培养基的颜色更换培养基。当约70-90％汇合时，胰蛋白酶消化原代肿瘤细胞并在以经MMC处理的C3H10T1/2预接种的96孔板继代培养。培养原代肿瘤细胞至足以使用PBMC继代培养的汇合。
在
Figure BDA0002008996390000311
中培养原代人肿瘤细胞
将在培养基中悬浮的分离的原代肿瘤细胞与2％
Figure BDA0002008996390000312
(BD，356234)混合并随后接种于48孔板中。根据培养基颜色更换培养基。在应当继代培养细胞时，收集/>
Figure BDA0002008996390000313
中的类器官并移液以将/>
Figure BDA0002008996390000314
分散成小块并继代培养至96孔板以与PBMC共培养。
人IFN-γ的ELISA
以1×PBST(添加有0.5％吐温20(
Figure BDA0002008996390000315
P1379)的PBS)洗涤板3次后，在37℃以经纯化的抗人IFN-γ(Biolegend，502402)包被96孔高结合板(Corning，9018)2小时或过夜，使用溶解于1×PBST的3％BSA(/>
Figure BDA0002008996390000316
sc-2323)封闭板。然后在室温温育共培养***的上清2小时或过夜。以1×PBST洗涤板3次后，在室温以生物素缀合的抗人IFN-γ(Biolegend，502504)温育板1小时。以1×PBST洗涤板3次后，在室温以HRP缀合的链霉亲和素(Themo Scientific，21130)温育平板30分钟。以1×PBST洗涤板5次后，将100μL 1×TMB(ebioscience，00-4201-56)添加至板的每孔，5至15分钟后，以50μL的2mM H2SO4添加每孔以终止反应。在450nm读取吸光度。
PARP抑制剂和抗PD-1 mAb组合的效果
将在
Figure BDA0002008996390000317
中培养的来自具有结直肠癌的患者的原代肿瘤细胞与未预活化的同种异体人PBMC共培养，具有50ng/ml EpCAM×CD3双特异性T细胞衔接子且伴随或不伴随称为化合物B(30nM)的PARP抑制剂或称为Mab-1(1μg/mL)的抗PD-1抗体或其组合(简称为Mab-1+化合物B)，并培养72小时。测量共培养***上清中的人IFN-γ并作为读出数(参见图4)。每种双特异T细胞衔接子浓度组的IFN-γ浓度标准化至抗体治疗组浓度除以对照组浓度的倍数变化。/>
Figure BDA0002008996390000318
中培养的原代肿瘤细胞对抗PD-1抗体响应。
使用50ng/mL双特异性T细胞衔接子，化合物B组IFN-γ的倍数变化仅几乎接近1(值为1.08)，其表明原代肿瘤细胞可能不对单独的30nM化合物B响应。尽管抗PD-1抗体和组合治疗组的倍数变化都大于1.3，组合的倍数变化大于单独的抗PD-1抗体治疗组，其表明原代肿瘤细胞不但对单独的抗PD-1抗体响应，而且抗PD-1抗体和化合物B对
Figure BDA0002008996390000319
中培养的原代肿瘤细胞还存在显著的协同效应。结果表明该癌症患者不但对测试的抗PD-1抗体响应，还对其与化合物B的组合的效果响应。Mab-1和化合物B的组合的效果显示比单独的抗PD-1抗体治疗更好的活性，表明抗PD-1抗体(Mab-1)和化合物B对/>
Figure BDA00020089963900003110
中培养的原代肿瘤细胞存在显著的协同效应。
实施例3 PARP抑制剂和紫杉醇的组合在原代人胃肿瘤异种移植模型中的作用
方法
从具有胃癌的患者手术移除肿瘤组织。患者手术后2至4小时内，将肿瘤的小碎片(3×3×3mm3)皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛区域。肿瘤生长至约300-1000mm3后，手术移除肿瘤并将碎片通过随后的植入在NOD/SCID小鼠中传代。BALB/c裸鼠中的植入在3次成功传代后在NOD/SCID小鼠中实施。肿瘤碎片接种前将每只BALB/C裸鼠中的右腋下区域使用70％乙醇清洁。经由20号套针在右侧胁腹使用胃癌碎片(约3×3×3mm3)皮下植入每只动物。
当平均肿瘤大小达到约200mm3时，使用分层随机化操作将动物分成7组，其中每组8只小鼠。随后以媒介物(0.5％甲基纤维素)、12mg/kg化合物A每日两次(BID)处理小鼠，或以15mg/kg紫杉醇(30mg/5ml，使用前即刻使用盐水稀释至1.5mg/ml)，北京协和药厂)每四日一次(Q4D)处理小鼠，或以紫杉醇(15mg/kg)和化合物A(6或12mg/kg BID)的组合处理小鼠。全部剂量以游离碱重量为基础。以10ml/kg体重的体积，对于媒介物和化合物A通过口服灌胃(p.o.)或对于紫杉醇腹膜内(i.p.)施用治疗。给药前即刻评估体重并相应地调整给药体积。
每周两次记录个体体重和肿瘤体积，其中在研究的持续过程中每日监测小鼠的毒性临床指征。一旦其肿瘤体积达到≥2,000mm3、肿瘤溃烂或体重减轻超过25％，使用二氧化碳麻醉小鼠。植入后，使用卡尺在两个维度上测量原代肿瘤体积。使用下式计算肿瘤体积：V＝0.5×(a×b2)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。使用下式计算肿瘤生长抑制(TGI)：
Figure BDA0002008996390000321
治疗t＝在时间t时经治疗的肿瘤体积
治疗t0＝在时间0时经治疗的肿瘤体积
安慰剂t＝在时间t时安慰剂的肿瘤体积
安慰剂t0＝在时间0时安慰剂的肿瘤体积
使用斯氏T检验实施统计学分析。认为P＜0.05是统计学显著的。
结果：
图5和6中显示化合物A和紫杉醇组合的体内抗肿瘤效力。单一药剂治疗、紫杉醇(15mg/kg Q4D×3)和化合物A(12mg/kg BID)对肿瘤生长具有微弱的作用或无作用，在第21天分别具有31％、-29％和30％的肿瘤生长抑制(TGI)(与媒介物组无显著差异)。全部组合治疗，紫杉醇和化合物A(6和12mg/kg BID)显示显著更好的抗肿瘤活性，在第21天分别具有80％、70％和77％的TGI(p＜0.05，与紫杉醇单一药剂治疗相比)。在整个研究中，在全部的单一药剂和组合治疗组中，相比媒介物组未观察到对体重的显著作用。在原代胃癌异种移植模型中，化合物A还在与紫杉醇的组合中展现比紫杉醇单一药剂更好的抗肿瘤活性，而无严重毒性。
实施例4 PARP抑制剂和依托泊苷/卡铂(E/C)的组合在原代人SCLC肿瘤异种移植模型中的作用
方法
从具有局限期小细胞肺癌(SCLC)的患者手术移除肿瘤组织。患者活检后2至4小时内，将肿瘤样品皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛区域。肿瘤生长至约300-1000mm3后，手术移除肿瘤并通过皮下植入将碎片在NOD/SCID小鼠中传代。在NOD/SCID中3次成功传代后实施在BALB/c裸鼠中的植入。肿瘤碎片接种前使用70％乙醇清洁每只BALB/C裸鼠的右腋下区域。经由20号套针在右侧胁腹使用肺癌碎片(约3×3×3mm3)皮下植入每只动物。
当肿瘤大小达到约230mm3时，使用分层随机化操作将动物分成4组，其中每组10只小鼠。随后使用媒介物(0.5％甲基纤维素)每日两次(BID)处理小鼠达42天，或依托泊苷(Adamas Reagent Co.，Ltd.CAS#33419-44-0)/卡铂(CAS#41575-94-4，来自Beijing FeiLong Rui Co.，Ltd.)[7天周期的12mg/kg的依托泊苷(第1-3天)+60mg/kg的卡铂(第1天)]达3个周期，随后媒介物BID达21天(第22-42天)，或1.36mg/kg BID的E/C与化合物B[7天周期的第1-7天(连续)或第1-4天(间歇)]达3个周期，随后使用5.45mg/kg BID的化合物B维持疗法达21天(第22-42天)。全部剂量以游离碱重量为基础。以10ml/kg体重的体积，对于媒介物和化合物B通过口服灌胃(p.o.)或对于依托泊苷腹膜内(ip)，或对于卡铂静脉内施用治疗。在给药前即刻评估体重并相应地调整给药体积。
从第1-31天每周两次且其后每周一次记录个体体重和肿瘤体积，其中在研究持续过程中每日监测小鼠的毒性临床指征。一旦其肿瘤体积达到≥2000mm3或肿瘤溃烂，使用二氧化碳麻醉小鼠。
植入后，使用卡尺在两个维度上测量原代肿瘤的体积。使用下式计算肿瘤体积：V＝0.5×(a×b2)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。部分消退(PR)定义为在三次连续测量中肿瘤的体积小于给药第一天初始肿瘤体积的50％且完全消退(CR)定义为在三次连续测量中肿瘤的体积小于14mm3。在具有PR肿瘤的动物中，进展性的疾病定义为在两次连续测量中肿瘤体积大于初始肿瘤体积的50％。在具有CR肿瘤的动物中，进展性疾病定义为在两次连续测量中肿瘤体积大于14mm3。无肿瘤定义为在研究结束的第72天肿瘤的体积小于14mm3。
使用下式计算肿瘤生长抑制(TGI)：
Figure BDA0002008996390000331
治疗t＝在时间t时经治疗的肿瘤体积
治疗t0＝在时间0时经治疗的肿瘤体积
安慰剂t＝在时间t时安慰剂的肿瘤体积
安慰剂t0＝在时间0时安慰剂的肿瘤体积
使用斯氏T检验实施统计学分析。认为P＜0.05是统计学显著的。
结果：
图7和8中显示化合物B和E/C的组合的体内抗肿瘤效力。与临床发现一致的是，依托泊苷/卡铂治疗后在宿主患者中观察到PR，3个周期的E/C导致经治疗的全部动物中的客观响应(6PR/4CR/10)。然而，停止E/C治疗后，这10个肿瘤中的7个具有进展性疾病且在第72天平均肿瘤体积达到246mm3。在E/C治疗周期的过程中，使用1.36mg/kg BID连续(第1-7天)或间歇(第1-4天)添加化合物B和5.45mg/kg BID作为维持疗法显著增强抗肿瘤活性，其中在治疗的过程中全部动物变得无肿瘤(100％CRR)。当动物处于化合物B维持疗法时，未发生复发，表明使用化合物B的维持疗法可提供进一步的抗肿瘤效益。完成维持治疗三十天后(第72天)，大多数的动物仍为无肿瘤。在全部组合治疗组中，相比E/C治疗组，在E/C同时施用期过程中未观察到对体重的显著作用。在维持期过程中，在全部治疗组中不存在显著的体重变化。化合物B和E/C的组合治疗展示比单独E/C治疗更好的抗肿瘤活性，而无严重的毒性。
实施例5 PARP抑制剂和E/C的组合在原代人SCLC异种移植模型中的作用
方法
从具有广泛期SCLC的患者手术移除肿瘤组织。患者活检后2至4小时内，将肿瘤样品皮下植入麻醉的NOD/SCID小鼠的肩胛区域。肿瘤生长至约300-1000mm3后，手术移除肿瘤并通过皮下植入将碎片在NOD/SCID小鼠中传代。在NOD/SCID中3次成功传代后实施在BALB/c裸鼠中的植入。肿瘤碎片接种前使用70％乙醇清洁每只BALB/C裸鼠的右腋下区域。经由20号套针在右侧胁腹使用肺癌碎片(约3×3×3mm3)皮下植入每只动物。
植入47天后，将带有肿瘤的动物分为两个组群，组群1使用较小肿瘤用于组合设置且组群2使用较大肿瘤用于维持设置。在组群1中，使用分层随机化操作将具有约150mm3的平均肿瘤大小的动物分为6组，其中每组9只小鼠。随后使用媒介物(0.5％甲基纤维素)每日两次(BID)或5.45mg/kg BID的化合物B处理小鼠达21天，或E/C[7天周期的12mg/kg的依托泊苷(第1-3天)+60mg/kg的卡铂(第1天)]达3个周期，随后媒介物BID达21天(第22-42天)，或0.68、1.36或2.73mg/kg BID的E/C与化合物B的组合(7天周期的第1-4天)达3个周期，随后5.45mg/kg BID化合物B维持疗法达21天(第22-42天)。在组群2中，首先使用E/C处理具有约400mm3的平均肿瘤大小的动物达3个周期。在第22天，使用分层随机化操作将20只动物分成2组，其中每组10只小鼠，随后使用媒介物(0.5％甲基纤维素)每日两次(BID)处理22天(第22-42天)，或5.45mg/kg BID的化合物B的维持疗法达21天(第22-42天)。全部剂量以游离碱的重量为基础。以10ml/kg体重的体积，对于媒介物和化合物B通过口服灌胃(p.o.)或对于依托泊苷腹膜内(ip)，或对于卡铂静脉内施用治疗。在给药前即刻评估体重并相应地调整给药体积。
从第1-31天每周两次且其后每周一次记录个体体重和肿瘤体积，其中在研究持续过程中每日监测小鼠的毒性临床指征。一旦其肿瘤体积达到≥2000mm3或肿瘤溃烂，使用二氧化碳麻醉小鼠。
植入后，使用卡尺在两个维度上测量原代肿瘤的体积。使用下式计算肿瘤体积：V＝0.5×(a×b2)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。部分消退(PR)定义为在三次连续测量中肿瘤的体积小于给药第一天初始肿瘤体积的50％且完全消退(CR)定义为在三次连续测量中肿瘤的体积小于14mm3。在具有PR肿瘤的动物中，进展性的疾病定义为在两次连续测量中肿瘤体积大于初始肿瘤体积的50％。在具有CR肿瘤的动物中，进展性疾病定义为在两次连续测量中肿瘤体积大于14mm3。无肿瘤定义为在研究结束的第72天肿瘤的体积小于14mm3。
使用下式计算肿瘤生长抑制(TGI)：
Figure BDA0002008996390000351
治疗t＝在时间t时经治疗的肿瘤体积
治疗t0＝在时间0时经治疗的肿瘤体积
安慰剂t＝在时间t时安慰剂的肿瘤体积
安慰剂t0＝在时间0时安慰剂的肿瘤体积
使用斯氏T检验实施统计学分析。认为P＜0.05是统计学显著的。
结果：
图9、10、11和12中显示化合物B和E/C的组合的体内抗肿瘤效力。与临床发现一致的是，依托泊苷/卡铂治疗后在宿主患者中观察到PR但迅速复发，E/C治疗导致两组群中都客观响应但停止E/C治疗后肿瘤进展。组群1中，E/C达3个周期导致治疗动物中的客观响应(3PR/0CR/9)但平均肿瘤体积在第45天反弹至1206mm3。在E/C治疗周期过程中，添加0.68、1.36或2.73mg/kg BID的化合物B，随后以5.45mg/kg BID作为维持疗法，显著增强抗肿瘤活性伴随肿瘤消退(分别为5PR/9、4PR/4CR/9和2PR/6CR/9)。在维持治疗完成时(第45天)，在化合物B 2.73mg/kg组的9只动物仍有6只为无肿瘤。在全部的组合治疗组中，相比于E/C治疗组，在E/C同时施用期和维持期观察到对体重没有显著作用。在组群2中，在3个周期的E/C治疗完成时，将动物分为2组并使用媒介物或化合物B 5.45mg/kg BID治疗21天。在媒介物组，在第45天平均肿瘤体积反弹至1353mm3。然而，使用化合物B治疗后，平均肿瘤体积仅达到571mm3，其展示比单独的E/C更持续的肿瘤生长抑制。维持期过程中，相比E/C治疗组不存在显著的体重变化。化合物B和E/C的组合治疗展示比单独的E/C治疗更好的抗肿瘤活性但无严重毒性。化合物B作为维持疗法还展示显著的抗肿瘤活性。
实施例6与Mab1组合的化合物B的临床试验
使用化合物B制备胶囊，与Mab 1组合的化合物B的Ia期临床安全性研究在施用10、20、40和60mg BID的化合物B以及2mpk(mg/kg)或200mg Q3W的43位受试者上完成。结果显示全部组合都是安全和良好耐受的。
详细的研究如下所述：6至12位患者的组群各接受5个计划剂量水平(DL)的治疗。以2mg/kg每3周(Q3W)施用Mab 1，其中在DL1、2和3中分别以20、40或60mg每日两次(BID)施用化合物B。还以200mg Q3W的固定剂量施用Mab 1，其中在DL 4和5中分别以40或60mg BID施用化合物B。
对于10位患者治疗的持续时间超过200天，且共7位患者在数据截止时仍然处于治疗状态(2017年3月31日)。安全性分析表明Mab 1和化合物B的组合在具有晚期实体瘤的患者中一般是良好耐受的，尽管在3位患者中发生了剂量限制的毒性，包括在DL4或DL5的恶心或呕吐或在DL5的自身免疫性肝炎。然而，未报导致命的不良事件且全部事件在有或没有皮质类固醇治疗都是可逆的。
Mab-1与化合物B的共施用对每种化合物的药物动力学概况不具有显著影响。在具有卵巢或输卵管癌的患者、具有乳腺癌的患者、具有胰腺癌的患者、具有子宫癌的患者中都观察到完全响应或部分响应；且那些响应是耐久的，且在具有野生型和突变体gBRCA状态的患者中观察到完全响应或部分响应。在具有***癌的患者和具有胆管癌的患者中观察到稳定的疾病。参与研究的其它肿瘤类型包括膀胱癌、***、肺癌和周围神经鞘癌。
上述某些实施方案的实例和说明应认为是阐述性的，而不应认作是限制由权利要求所限定的本发明。可容易理解的是，可利用上述特征的多种变化和组合而不脱离如权利要求所述的本发明。全部这些变化旨在包括于本发明的范围内。引用的全部参考文献通过引用以其整体并入本申请。
需要理解的是，如果在本申请引用任何现有技术出版物，这些引用不构成对出版物在任何国家形成现有技术中公知常识一部分的承认。
在本发明随后的权利要求和上述说明中，除上下文需要否则由于表述语言或必要的含义，词语“包含”或变化形式诸如“包括”或“含有”以包容性的意义使用，即以描述所述特征的存在但不排除在本发明的多个实施方案中其它特征的存在或添加。
通过标识引用在本申请引用的全部出版物、专利、专利申请和公布的专利申请的公开内容在本申请通过引用以其整体并入。
序列表
<110> 百济神州有限公司
<120> 使用包含PARP抑制剂的组合产品治疗癌症
<130> F17W0440CN-PF05549A
<150> PCT/CN2017/103660
<151> 2017-09-27
<150> PCT/CN2016/100320
<151> 2016-09-27
<160> 90
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 444
<212> DNA
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
ccaggatggt tcttagactc cccagacagg ccctggaacc cccccacctt ctccccagcc 60
ctgctcgtgg tgaccgaagg ggacaacgcc accttcacct gcagcttctc caacacatcg 120
gagagcttcg tgctaaactg gtaccgcatg agccccagca accagacgga caagctggcc 180
gccttccccg aggaccgcag ccagcccggc caggactgcc gcttccgtgt cacacaactg 240
cccaacgggc gtgacttcca catgagcgtg gtcagggccc ggcgcaatga cagcggcacc 300
tacctctgtg gggccatctc cctggccccc aaggcgcaga tcaaagagag cctgcgggca 360
gagctcaggg tgacagagag aagggcagaa gtgcccacag cccaccccag cccctcaccc 420
aggccagccg gccagttcca aacc 444
<210> 2
<211> 148
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 2
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr
145
<210> 3
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 3
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcaaagaa cctgtccatc 60
acttgcactg tctctgggtt ttcattaacc agctatggtg tacactggat tcgccagcct 120
ccaggaaagg gactggaatg gctgggagta atatgggccg gtggaagcac aaattataat 180
tcggctctca tgtccagact gagcatcagc aaagacaact ccaggagcca agttttctta 240
agaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccag agcctatggt 300
aactactggt acatcgatgt ctggggcgca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 4
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 4
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Lys
1 5 10 15
Asn Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Arg Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 5
gacattgtga tgacccagac tcccaaattc ctgcttgtat cagcaggaga cagggttacc 60
ataacctgca aggccagtca gagtgtgagt aatgatgtag cttggtacca acagaagcca 120
gggcagtctc ctaaactgct gataaactat gcatttcatc gcttcactgg agtccctgat 180
cgtttcactg gcagtggata tgggacggat ttcattttca ccatcagcac tgtgcaggct 240
gaagacctgg cagtttattt ctgtcaccag gcttatagtt ctccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaatgaa a 321
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 6
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Ile Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105
<210> 7
<211> 342
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 7
cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120
ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacaata ataatggaga gccaacatat 180
gctgaagagt tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagagatgtt 300
atggactatt ggggtcaagg aacctcagtc accgtctcct ca 342
<210> 8
<211> 114
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 8
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Asn Asn Asn Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 9
<211> 330
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 9
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atatcctgca gagccagtga aagtgttgat aattatggct atagttttat gcactggtac 120
cagcagaaac caggacagcc accccaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag gcttcaccct caccattaat 240
cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaaaga atatccgacg 300
ttcggtggag gcaccaagct ggaagtcaaa 330
<210> 10
<211> 110
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 10
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 11
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His
1 5 10
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 12
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 10 15
<210> 13
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 13
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 14
Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 15
Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 16
His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 17
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5 10
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 18
Trp Ile Asn Asn Asn Asn Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 19
Ala Arg Asp Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 20
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 20
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Tyr Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 21
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 22
Gln Gln Ser Lys Glu Tyr Pro Thr
1 5
<210> 23
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 cDNA-Vh
<400> 23
caggtgcagc tgcaggagtc gggaccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctgggtt ttcattaacc agctatggtg tacactggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gatcggggtc atatacgccg atggaagcac aaattataat 180
ccctccctca agagtcgagt gaccatatca aaagacacct ccaagaacca ggtttccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agcctatggt 300
aactactggt acatcgatgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 24
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 pro-Vh
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 cDNA-Vk
<400> 25
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcga gagtgtgagt aatgatgtag cttggtacca gcagaaacca 120
ggacagcctc ctaagctgct cattaactat gcatttcatc gcttcactgg ggtccctgac 180
cgattcagtg gcagcgggta tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcaggct 240
gaagatgtgg cagtttatta ctgtcaccag gcttatagtt ctccgtacac gtttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 pro-Vk
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A3 cDNA-Vh
<400> 27
caggtgcagc tggtgcagag cggcagcgag ctgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc aactacggca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggccagg gcctgaagtg gatgggctgg atcaacaaca acaacgccga gcccacctac 180
gcccaggact tcagaggcag attcgtgttc agcctggaca ccagcgccag caccgcctac 240
ctgcagatca gcagcctgaa gaccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacgtg 300
atggactact ggggccaggg caccctggtg accgtgagca gc 342
<210> 28
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A3 pro-Vh
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Asn Asn Asn Ala Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Asp Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 29
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A3 cDNA-Vk
<400> 29
gacattgtgc tgacccagtc tccagcctcc ttggccgtgt ctccaggaca gagggccacc 60
atcacctgca gagccagtga aagtgttgat aattatggct atagttttat gcactggtat 120
cagcagaaac caggacaacc tcctaaactc ctgatttacc gtgcatccaa cctagaatct 180
ggggtcccag ccaggttcag cggcagtggg tctgggaccg atttcaccct cacaattaat 240
cctgtggaag ctgaggatac tgcaaattat tactgtcagc aaagtaaaga atatccgacg 300
ttcggcggag ggaccaaggt ggagatcaaa 330
<210> 30
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A3 pro-Vk
<400> 30
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 31
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His
1 5 10
<210> 32
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 H-CDR2 或 CDR-H2
<400> 32
Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 33
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val
1 5 10
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B6 L-CDR1 或 CDR-L1
<400> 34
Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp Val Ala
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 35
Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 36
His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 37
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5 10
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A3 H-CDR2 或 CDR-H2
<400> 38
Trp Ile Asn Asn Asn Asn Ala Glu Pro Thr Tyr Ala Gln Asp Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 39
Ala Arg Asp Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 40
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Tyr Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 41
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 42
Gln Gln Ser Lys Glu Tyr Pro Thr
1 5
<210> 43
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B2 pro-Vh
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B2 pro-Vk
<400> 44
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B5 pro-Vh
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-4B5 pro-Vk
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-1 cDNA-Vh
<400> 47
caggtgcagc tgcaggagtc gggaccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctgggtt ttcattaacc agctatggtg tacactggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gctgggggtc atatgggccg gtggaagcac aaattataat 180
ccctccctca agagtcgact gaccatatca aaagacaact ccaagagcca ggtttccctg 240
aagatgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agcctatggt 300
aactactggt acatcgatgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 48
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-1 pro-Vh
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Met Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 317-1 cDNA-Vk
<400> 49
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca aggccagcca gagtgtgagt aatgatgtag cttggtacca gcagaaacca 120
ggacagcctc ctaagctgct cattaactat gcatttcatc gcttcactgg ggtccctgac 180
cgattcagtg gcagcgggta tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcaggct 240
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Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
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Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
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<220>
<223> 326-3B N55D pro-Vh
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A1 pro-Vk
<400> 81
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 82
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 326-4A2 pro-Vk
<400> 82
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 83
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt1 pro
<400> 83
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 84
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt2 pro
<400> 84
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 85
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt6 pro
<400> 85
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 86
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt8 pro
<400> 86
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Thr Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 87
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt9 pro
<400> 87
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 88
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huIgG4mt10 pro
<400> 88
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 89
<211> 367
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OS8 pro
<400> 89
Met Glu Arg His Trp Ile Phe Leu Leu Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser
145 150 155 160
Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
165 170 175
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser
180 185 190
Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
195 200 205
Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
210 215 220
Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu
245 250 255
Glu Ile Asn Ser Ser Val Val Pro Val Leu Gln Lys Val Asn Ser Thr
260 265 270
Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly
275 280 285
Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val
290 295 300
Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu
325 330 335
Ile Cys Tyr His Arg Ser Arg Lys Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro
340 345 350
Leu Val Arg Gln Glu Gly Lys Pro Arg Pro Ser Glu Lys Ile Val
355 360 365
<210> 90
<211> 304
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P3Z pro
<400> 90
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Arg
180 185 190
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
195 200 205
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
210 215 220
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
225 230 235 240
Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
245 250 255
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
260 265 270
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
275 280 285
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
290 295 300

Claims (15)

1.一种式(Ⅲ)的PARP抑制剂与治疗有效量的免疫检查点抑制剂或化疗剂的组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途，
其中所述癌症选自结肠直肠癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、***癌、胆管癌、胰腺癌、外周神经鞘癌或子宫癌；
其中所述PARP抑制剂为式(Ⅲ)化合物，
Figure FDA0003783109500000011
其药学上可接受的盐或其溶剂化物，以及
其中所述化疗剂选自紫杉醇或依托泊苷加卡铂(E/C)；
其中所述免疫检查点抑制剂为抗PD-1单克隆抗体或其片段，该抗体抗原结合域包含：
包含以下三个互补决定区(CDR)之重链可变区(Vh)：
具有序列编号31之氨基酸序列之CDR-H1，
具有序列编号32之氨基酸序列之CDR-H2，和
具有序列编号33之氨基酸序列之CDR-H3；以及
包含以下三个互补决定区(CDR)之轻链可变区(Vk)：
具有序列编号34之氨基酸序列之CDR-L1，
具有序列编号35之氨基酸序列之CDR-L2，和
具有序列编号36之氨基酸序列之CDR-L3。
2.权利要求1的用途，其中所述免疫检查点抑制剂为单克隆抗体或其片段，包含SEQ IDNO 24的重链可变区(Vh)氨基酸序列、SEQ ID NO 26的轻链可变区(Vl)氨基酸序列和SEQID NO 88的IgG4恒定域氨基酸序列。
3.权利要求1的用途，其中所述PARP抑制剂为式(IV)化合物，
Figure FDA0003783109500000012
4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂和所述PARP抑制剂同时、顺序或分开施用。
5.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述PARP抑制剂以1-120mg的剂量每天两次口服施用。
6.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述PARP抑制剂以1-80mg的剂量每天两次口服施用。
7.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述PARP抑制剂以120-240mg的剂量每天一次口服施用。
8.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述PARP抑制剂以60-120mg的剂量每天一次口服施用。
9.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以0.5-10mg/kg的剂量每周一次、或每两周一次或每三周一次或每四周一次肠胃外施用。
10.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以2mg/kg的剂量每三周一次施用。
11.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以2mg/kg的剂量每三周一次(Q3W)施用，并且所述PARP抑制剂以20mg、40mg或60mg的剂量每天两次施用。
12.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以2mg/kg的剂量每三周一次(Q3W)施用，并且所述PARP抑制剂以40mg的剂量每天两次施用。
13.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以200mg的剂量每三周一次施用，并且所述PARP抑制剂以40或60mg每天两次施用。
14.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以200mg的剂量每三周一次施用，并且所述PARP抑制剂以40mg的剂量每天两次施用。
15.权利要求1的用途，其中所述癌症选自小细胞肺癌、胃/胃-食管接合部癌、去势抵抗性***癌或子***。
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