CN107709333B - 羟基酯衍生物、其制备方法以及含有它们的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

式(I)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R13、Ra、Rb、A和n如说明书中所定义。包含该化合物用于治疗癌症的药物。

Description

羟基酯衍生物、其制备方法以及含有它们的药物组合物
发明涉及新的羟基酯衍生物、其制备方法以及含有它们的药物组合 物。
本发明的化合物是新的且在细胞凋亡和癌学领域中具有非常有价值 的药理学特征。
细胞凋亡或程序性细胞死亡是胚胎发育和维持组织动态平衡的关键 的生理学过程。
细胞凋亡型细胞死亡涉及形态学变化如核固缩、DNA断裂，以及生 化现象如胱天蛋白酶活化，其导致细胞的关键结构成分损伤，从而诱导其 分解和死亡。细胞凋亡过程的调节是复杂的且牵涉多种胞内信号传导途经 的活化或阻抑(Cory S.等人,Nature ReviewCancer,2002,2,647-656)。
细胞凋亡失调牵涉一些病理学情况。细胞凋亡增加与神经变性疾病相 关，例如帕金森病、阿尔茨海默病和局部缺血。相反，细胞凋亡执行中的 缺陷在癌症及其化学抗性发生、自身免疫疾病、炎性疾病和病毒感染中起 显著作用。因此，细胞凋亡缺乏是癌症的表型标记之一(Hanahan D.等人, Cell 2000,100,57-70)。
Bcl-2家族的抗细胞凋亡蛋白与大量病理学情况相关。在大量的癌症 类型中记载了Bcl-2家族蛋白的参与，例如结肠癌、乳腺癌、小细胞肺癌、 非小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、***癌、慢性淋巴样白血病、淋巴瘤、 骨髓瘤、急性髓性白血病、***癌等。Bcl-2家族的抗细胞凋亡蛋白的 过度表达牵涉肿瘤发生、对化疗的抗性和癌症患者的临床预后。值得注意 的是，抗细胞凋亡的Bcl-2家族成员Mcl-1在多种类型的癌症中过度表达(Beroukhim R.等人,Nature 2010,899-905)。因此，对于抑制Bcl-2家族蛋 白的抗细胞凋亡活性的化合物存在治疗上的需求。
本发明的化合物除了是新的以外，还具有促细胞凋亡(pro-apoptotic) 特性，从而使得它们能够用于牵涉细胞凋亡缺陷的病理学情况，例如用于 治疗癌症以及免疫和自身免疫疾病。
本发明尤其涉及式(I)的化合物、其对映体、非对映异构体和阻转异构 体，以及其与可药用酸或碱的加成盐:
Figure RE-BDA0001517580540000021
其中:
◆A代表基团
Figure RE-BDA0001517580540000022
其中1与氧原子连接并且2与苯环连接，
◆R1代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或 支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、直链 或支链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、氰基、-NR11R11’、 -Cy6或卤原子，
◆R2、R3、R4和R5彼此独立地代表氢原子、卤原子、直链或支链(C1-C6) 烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或 支链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6) 烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O- 烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、 -C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基 (C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)， 或者当连接在两个相邻的碳原子上时，取代基对(R2,R3)、(R3,R4)、 (R4,R5)之一的取代基与携带它们的碳原子一起形成由5至7个环成 员组成的芳香族或非芳香族环，所述的环可含有1至3个选自氧、 硫和氮的杂原子，应当理解的是，所形成的环可以被选自直链或支 链(C1-C6)烷基、-NR11R11’、-烷基(C0-C6)-Cy1或氧代的基团取代， ◆R6和R7彼此独立地代表氢原子、卤原子、直链或支链(C1-C6)烷基、 直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链 (C1-C6)全卤代烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、 -O-Cy1、-烷基(C0-C6)-Cy1、-链烯基(C2-C6)-Cy1、-炔基(C2-C6)-Cy1、 -O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、 -NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、 -SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)， 或者当连接在两个相邻的碳原子上时，取代基对(R6,R7)与携带它们 的碳原子一起形成由5至7个环成员组成的芳香族或非芳香族环， 所述的环可含有1至3个选自氧、硫和氮的杂原子，应当理解的是， 所形成的环可以被选自直链或支链(C1-C6)烷基、-NR11R11’、-烷基 (C0-C6)-Cy1或氧代的基团取代，
◆R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或 支链(C2-C6)炔基、-Cy3、-烷基(C1-C6)-Cy3、-链烯基(C2-C6)-Cy3、- 炔基(C2-C6)-Cy3、-Cy3-Cy4、-炔基(C2-C6)-O-Cy3、-Cy3-烷基 (C0-C6)-O-烷基(C0-C6)-Cy4、卤原子、氰基、-C(O)-R12或 -C(O)-NR12R12’，
◆R9和R9’彼此独立地代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基、-烷基 (C0-C6)-Cy1，或者取代基对(R9,R9’)与携带它们的氮原子一起形成由5至7个环成 员组成的芳香族或非芳香族环，所述的环除氮原子外还可含有1至 3个选自氧、硫和氮的杂原子，应当理解的是，所述的氮可被代表 氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基的基团取代，并且应当理解的是， 可能的取代基的一个或多个碳原子可以被氘代，
◆R10代表-Cy1、-Cy1-烷基(C0-C6)-Cy2、-Cy1-烷基(C0-C6)-O-烷基 (C0-C6)-Cy2、-Cy1-烷基(C0-C6)-NR9-烷基(C0-C6)-Cy2、-Cy1-Cy2-O- 烷基(C0-C6)-Cy5、-C(O)-NR9R9’、-NR9R9’、-OR9、-NR9-C(O)-R9’、 -O-烷基(C1-C6)-OR9、-SO2-R9、-C(O)-OR9或-NH-C(O)-NH-R9，
◆R11、R11’、R12和R12’彼此独立地代表氢原子或任选取代的直链或支 链(C1-C6)烷基，
◆R13代表氢原子、羟基或羟基(C1-C6)烷基，
◆Ra代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆Rb代表-O-C(O)-O-Rc、-O-C(O)-NRcRc’或-O-P(O)(ORc)2基团，
◆Rc和Rc’彼此独立地代表氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、环烷基、 (C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基， 或者取代基对(Rc,Rc’)与携带它们的氮原子一起形成由5至7个环成 员组成的非芳香族环，所述的环除氮原子外还可含有1至3个选自 氧和氮的杂原子，应当理解的是，所述的氮可被代表直链或支链 (C1-C6)烷基的基团取代，
◆Cy1、Cy2、Cy3、Cy4、Cy5和Cy6相互独立地代表环烷基、杂环烷 基、芳基或杂芳基，
◆n等于0或1的整数，
应当理解的是:
-“芳基”是指苯基、萘基、联苯基、茚满基或茚基，
-“杂芳基”是指由5至10个环成员组成的任意单环或双环基团，其具 有至少1个芳香族部分并且包含1至3个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指包含3至10个环成员的任意单环或双环非芳香族碳环 基团，
-“杂环烷基”是指包含3至10个环成员且包含1至3个选自氧、硫和 氮的杂原子的任意单环或双环非芳香族碳环基团，其可包括稠环、 桥环或螺环***，
所定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷 氧基可以被1至4个选自任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的 直链或支链(C2-C6)链烯基、任选取代的直链或支链(C2-C6)炔基、任选取 代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C1-C6)烷基-S-、羟基、氧代(或 在适当情况下的N-氧化物)、硝基、氰基、-C(O)-OR’、-O-C(O)-R’、 -C(O)-NR’R”、-NR’R”、-(C＝NR’)-OR”、直链或支链(C1-C6)全卤代烷 基、三氟甲氧基或卤素的基团取代，应当理解的是，R’和R”彼此独立地 代表氢原子或任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基，并且应当理解的是，前 述可能的取代基的一个或多个碳原子可以被氘代。
在可药用酸中，可以提及但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、 三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、 马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸等。
在可药用碱中，可以提及但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔 丁基胺等。
有利地，至少一个选自R2、R3、R4和R5的基团不代表氢原子。
尤其是，优选的式(I)化合物是其中n是等于1的整数的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，一个有利的可能性包括式(I-a)的化合 物:
Figure RE-BDA0001517580540000061
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、Ra、Rb、R13和A如关于式(I)所定义。
在本发明的优选化合物中，R1代表直链或支链(C1-C6)烷基或卤原子。 更优选地，R1代表甲基、乙基、溴原子或氯原子。
阻转异构体是由于围绕单键的旋转受阻所产生的立体异构体，其中， 由于空间张力或其它因素造成的能量差异产生了足够高的旋转障碍，从而 使得单个的构象异构体能够得以分离。对于本发明的化合物，阻转异构体 如下:
Figure RE-BDA0001517580540000062
优选的阻转异构体是(5Sa)。
优选地，R13代表氢原子。
有利地，R2代表卤原子、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基。更优选 地，R2代表甲氧基、羟基、氟原子、溴原子或氯原子。仍更优选地，R2代表氯原子。
R3有利地代表氢原子、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基或-O-烷基 (C1-C6)-NR9R9’。有利地，R3代表-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’。
在某些优选的本发明的实施方案中，
Figure RE-BDA0001517580540000071
代表
Figure RE-BDA0001517580540000072
其中R1、R9和R9’如关于式(I)所定义。
在优选的本发明化合物中，
Figure RE-BDA0001517580540000073
re代pre表se
Figure RE-BDA0001517580540000074
其中R9和R9’如关于式(I)所定义。
R4和R5优选代表氢原子。
在一个有利的实施方案中，取代基对(R1,R5)相同并且取代基对(R2, R4)相同。在优选的本发明化合物中，取代基对(R1,R5)相同并且代表 (C1-C6)烷基、优选甲基，同时取代基对(R2,R4)相同并且代表卤原子、优 选氯原子，或代表氢原子。
在本发明的另一个实施方案中，R6代表任选取代的直链或支链 (C1-C6)烷氧基或-O-烷基(C1-C6)-R10基团。有利地，R6代表2,2,2-三氟乙氧 基、甲氧基、2-甲氧基乙氧基或-O-烷基(C1-C6)-R10基团。
R7优选代表氢原子。
在优选的本发明化合物中，
Figure RE-BDA0001517580540000081
代表
Figure RE-BDA0001517580540000082
其中R10如关于式(I)所定义。
在本发明的另一个实施方案中，一个有利的可能性包括式(I-b)的化合 物:
Figure RE-BDA0001517580540000083
其中R1、R6、R9、R9’、Ra、Rb、R13和A如关于式(I)所定义。
在优选的本发明化合物中，R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或 支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、芳基或杂芳基。有利地， R8代表直链或支链(C2-C6)炔基、芳基或杂芳基。更优选地，R8代表丙-1- 炔-1-基、丁-1-炔-1-基、苯基或呋喃-2-基。在一个更优选的实施方案中， R8代表4-(苄基氧基)苯基、4-(吡啶-4-基甲氧基)苯基、4-苯基丁-1-炔-1-基、 4-氟苯基或5-氟呋喃-2-基。仍更优选R8代表4-氟苯基。
在优选的本发明化合物中，R9和R9’彼此独立地代表直链或支链 (C1-C6)烷基，或者取代基对(R9,R9’)与携带它们的氮原子一起形成由5至7 个环成员组成的非芳香族环，所述的环除氮原子外还可含有1至3个选自 氧、硫和氮的杂原子，应当理解的是，所述的氮可被代表氢原子或直链或 支链(C1-C6)烷基的基团取代。更优选地，R9和R9’代表甲基，或者取代基 对(R9,R9’)一起形成4-甲基-哌嗪基或4-乙基-哌嗪基。在一个优选的实施方 案中，取代基对(R9,R9’)一起形成4-甲基-哌嗪基。在另一个优选的实施方 案中，R9和R9’代表甲基。
有利地，R10代表-Cy1、-Cy1-烷基(C0-C6)-O-烷基(C0-C6)-Cy2或-Cy1- 烷基(C0-C6)-Cy2。更具体地，R10代表-Cy1、-Cy1-O-CH2-Cy2或-Cy1-Cy2。
Cy1优选代表杂芳基，特别是嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基或吡 啶基。更优选地，Cy1代表嘧啶-4-基、吡唑-5-基、***-5-基、吡嗪-2-基 或吡啶-4-基。在优选的本发明化合物中，Cy1代表嘧啶-4-基。
在本发明的另一个实施方案中，Cy1代表被下列基团取代的杂芳基： 任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧 基、-NR’R”基团或直链或支链(C1-C6)全卤代烷基，应当理解的是，R’和 R”彼此独立地代表氢原子或任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基。
Cy2优选代表苯基、吡啶基、吡唑基、吗啉基、呋喃基或环丙基。更 优选地，Cy2代表苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、吡唑-1-基、 吗啉-4-基、呋喃-2-基或环丙基。在优选的本发明化合物中，Cy2代表苯 基。
其它优选的本发明化合物是其中R10代表-Cy1-Cy2、其中Cy1代表嘧啶 基并且Cy2代表苯基、吡啶基、吡唑基、吗啉基、呋喃基或环丙基的化合 物。更优选地，
R10代表
Figure RE-BDA0001517580540000091
其中R14和R15彼此独立地代表氢原子、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷 基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、羟基、直链或支链(C1-C6)全 卤代烷基或卤原子。优选的R14和R15基团如下:氢；甲基；乙基；甲氧基； 乙氧基；异丙氧基；甲氧基乙氧基；氟；羟基；三氟甲基。有利地，R15代 表氢原子并且R14位于苯基的邻位。
尤其是，优选的式(I)化合物是其中Ra代表氢原子或甲基的化合物。
有利地，Rb代表-O-C(O)-O-(C1-C8)烷基；-O-C(O)-O-环烷基； -O-C(O)-NRcRc’基团，其中Rc和Rc’彼此独立地代表氢原子、直链或支链 (C1-C8)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基， 或者取代基对(Rc,Rc’)与携带它们的氮原子一起形成由5至7个环成员组成 的非芳香族环，所述的环除氮原子外还可含有1至3个选自氧和氮的杂原 子；或-O-P(O)(OH)2基团。
优选地，Ra代表甲基并且Rb代表选自下列的基团：-O-C(O)-O-CH3； -O-C(O)-O-CH2CH3；-O-C(O)-O-CH(CH3)2；-O-C(O)-O-C(CH3)3； -O-C(O)-O-环戊基；-O-C(O)-O-C8H17；-O-C(O)-N(CH3)2； -O-C(O)-N(CH2CH3)2；-O-C(O)-N-吗啉；-O-C(O)-NH-(CH2)2-OCH3； -O-C(O)-N[(CH2)2-OCH3]2；或-O-C(O)-N(CH3)(CH2-C(O)-OCH3)。更优 选地，Ra代表甲基并且Rb代表选自-O-C(O)-O-CH2CH3或 -O-C(O)-N(CH3)2的基团。
可以提到的优选的本发明化合物是:
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(甲氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(丙-2-基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(叔丁氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(环戊基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(辛基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-吗啉-4-甲酸1-{[(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2- 甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧基} 乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧 基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基-2-氧代乙基)(甲基)氨 基甲酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(膦酰氧基)甲酯；
-(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟 苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4- 基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟 苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4- 基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯 基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯。
本发明还涉及用于制备式(I)化合物的方法，该方法的特征在于将式 (II)的化合物用作原料：
Figure RE-BDA0001517580540000121
其中A如关于式(I)所定义，其中1与氯原子连接并且2与溴原子连接， 将式(II)的化合物与式(III)的化合物进行偶联:
Figure RE-BDA0001517580540000122
其中R6、R7、R13和n如关于式(I)所定义，并且Alk代表任选取代的直链 或支链(C1-C6)烷基，
以生成式(IV)的化合物:
Figure RE-BDA0001517580540000131
其中R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义并且Alk如上所定义，
将式(IV)的化合物进一步与式(V)的化合物进行偶联:
Figure RE-BDA0001517580540000132
其中R1、R2、R3、R4和R5如关于式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、 直链或支链(C1-C6)烷基，或者RB1和RB2与携带它们的氧原子形成任选甲 基化的环，
以生成式(VI)的化合物:
Figure RE-BDA0001517580540000133
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义并且 Alk如上所定义，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解生成羧酸(VII):
Figure RE-BDA0001517580540000141
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义， 将其与式(VIII)的化合物进行偶联:
Figure RE-BDA0001517580540000142
其中Ra和Rb如关于式(I)所定义，
以生成式(I)的化合物，可以根据常规的分离技术纯化式(I)的化合物，如果 需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离 技术将其分离成其异构体，
应当理解，在上述方法过程中被认为适合的任意时间，原料试剂或合成中 间体的一些基团(羟基、氨基…)可以根据合成的需要进行保护，并在随后 脱保护和功能基化。
式(II)、(III)、(V)和(VIII)的化合物可以购买到或者可以由本领域技 术人员使用文献中记载的常规化学反应制得。
本发明还涉及式(VIA)的化合物，式(VI)化合物的一个特例:
Figure RE-BDA0001517580540000143
其中:
◆R2’、R3’、R4’和R5’彼此独立地代表卤原子、直链或支链(C1-C6)烷 基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支 链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6) 烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O- 烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、 -C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基 (C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆T代表(C1-C6)烷基、(C1-C6)羰基氧基(C1-C6)烷基或二(C1-C6)烷基氨 基羰基(C1-C6)烷基，
◆R1、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义，
其对映体、非对映异构体和阻转异构体，以及其与可药用酸或碱的加成盐， 其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
本发明涉及式(VIIA)的化合物，式(VII)化合物的一个特例:
Figure RE-BDA0001517580540000151
其中:
◆R2’、R3’、R4’和R5’彼此独立地代表卤原子、直链或支链(C1-C6)烷 基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支 链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6) 烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O- 烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、 -C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基 (C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆R1、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义，
其对映体、非对映异构体和阻转异构体，以及其与可药用酸或碱的加成盐， 其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
有利地是，对于式(VIA)和(VIIA)的化合物，取代基对(R1,R5’)相同并 且取代基对(R2’,R4’)相同。
优选的式(VIIA)的化合物是(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲 基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧 基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸。
本发明还涉及式(VIB)的化合物，式(VI)化合物的一个特例:
Figure RE-BDA0001517580540000161
其中:
◆R5’代表卤原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、 直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟 基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、 硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基 (C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、 -NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、 -SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆T代表(C1-C6)烷基、(C1-C6)羰基氧基(C1-C6)烷基或二(C1-C6)烷基氨 基羰基(C1-C6)烷基，
◆R1、R3、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义， 并且其中取代基对(R1,R5’)相同，其对映体、非对映异构体和阻转异构体，以及其与可药用酸或碱的加成盐， 其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
本发明涉及式(VIIB)的化合物，式(VII)化合物的一个特例:
Figure RE-BDA0001517580540000171
其中:
◆R5’代表卤原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、 直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)全卤代烷基、羟基、羟 基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、 硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基 (C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、 -NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、 -SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆R1、R3、R6、R7、R13、A和n如关于式(I)所定义， 并且其中取代基对(R1,R5’)相同，其对映体、非对映异构体和阻转异构体，以及其与可药用酸或碱的加成盐， 其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
优选的式(VIIB)的化合物是(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪 -1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2- 甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸。
本发明化合物的药理学研究已经证实它们具有促细胞凋亡特性。使细 胞凋亡过程在癌细胞中再活化的能力在治疗癌症、免疫和自身免疫疾病中 具有重大的治疗意义。
更具体地，本发明的化合物可用于治疗化疗或放疗抗性的癌症。
在关注的癌症治疗中，可以提及但不限于膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子 宫癌、慢性淋巴细胞白血病、结肠癌、食道癌和肝癌、原始淋巴细胞白血 病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、 非小细胞肺癌、***癌、胰腺癌和小细胞肺癌的治疗。
本发明还涉及药物组合物，其包含至少一种式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA) 或(VIIB)化合物与一种或多种可药用赋形剂的组合。
在本发明的药物组合物中，更具体地可以提及适合于口服、胃肠外、 鼻、经皮或透皮、直肠、经舌、眼部或呼吸道施用的那些，尤其是片剂或 糖衣丸、舌下片、小药囊(sachets)、药包(paquets)、胶囊、舌下给药剂型 (glossettes)、锭剂、栓剂、霜剂、软膏剂、皮肤凝胶和可饮用或可注射安 瓿。
剂量可以根据患者的性别、年龄和体重、施用途经、治疗适应症或任 意相关治疗的性质的不同而改变，且范围在0.01mg－1g/24小时内，分一 次或多次施用。
此外，本发明还涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB)化合物与选 自基因毒物、有丝***抑制剂、抗代谢药、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂 和抗体的抗癌药的组合，并且还涉及包含该类组合的药物组合物及其在制 备用于治疗癌症的药物中的用途。
有利地是，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB)化合物与 EGFR抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB) 化合物与mTOR/PI3K抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA) 或(VIIB)化合物与MEK抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
优选地，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB)化合物与HER2 抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
有利地是，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB)化合物与 RAF抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB) 化合物与EGFR/HER2抑制剂的组合以及包含该类组合的药物组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA) 或(VIIB)化合物与紫杉烷的组合以及包含该类组合的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB) 化合物与蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂或烷化剂的组合以及包含该类组合 的药物组合物。
式(I)、(VIA)、(VIB)、(VIIA)或(VIIB)化合物与抗癌剂的组合可以同时 或顺序施用。施用途径优选口服途径，并且相应的药物组合物可以瞬间或 延迟释放活性成分。组合中的化合物可以以各自含有一种活性成分的两种 独立的药物组合物的形式施用，或者以其中的活性成分以混合物存在的单 一药物组合物的形式施用。
本发明的化合物还可以与放疗组合用于治疗癌症。
最后，本发明的化合物可以连接至单克隆抗体或其片段或连接至可以 涉及或不涉及单克隆抗体的骨架蛋白。
抗体片段必须理解为Fv、scFv、Fab、F(ab')2、F(ab')、scFv-Fc型片 段或一般具有与所来自的抗体相同的结合特异性的双体抗体。根据本发 明，本发明的抗体片段可以通过例如如下方法从抗体获得：用酶、例如胃 蛋白酶或木瓜蛋白酶消化；和/或通过化学还原裂解二硫键。按照另一种 方式，本发明中包含的抗体片段可以通过本领域技术人员已知的基因重组 技术得到，或者通过肽合成利用例如肽自动合成仪(例如由Applied Biosystems公司等提供的那些)得到。
可以涉及或不涉及单克隆抗体的骨架蛋白应当被理解为是指包含或 不含免疫球蛋白折叠且产生与单克隆抗体类似的结合能力的蛋白质。本领 域技术人员知晓如何选择蛋白质骨架。更具体地，已知所选择的这类骨架 应当展示出如下几个特征(Skerra A.,J.Mol.Recogn.,13,2000, 167-187)：种系发生(phylogenetically)的良好保守性、具有充分已知的三 维分子组成(例如晶体学或NMR)的稳健结构体系、小尺寸、无或仅低程 度的翻译后修饰、易于生产、表达和纯化。这类蛋白质骨架可以是但不限 于选自下组的结构：纤连蛋白且优选第十纤连蛋白III型结构域(FNfn10)、 脂质运载蛋白、anticalin(Skerra A.,J.Biotechnol.,2001,74(4)：257-75)、 来自葡萄球菌蛋白质A的结构域B的蛋白质Z衍生物、硫氧还蛋白A或具有 重复结构域例如“锚蛋白重复单位”(Kohl等人,PNAS,2003,第100卷,第4 期,1700-1705)、“南美犰狳(armadillo)重复单位”、“富含亮氨酸的重复单 位”或“三十四肽(tetratricopeptide)重复单位”的任意蛋白质。还可以提及 来自毒素(例如蝎、昆虫、植物或软体动物毒素)的骨架衍生物或神经元一 氧化氮合酶的蛋白质抑制剂(PIN)。
如下制备例和实施例举例说明了本发明，但不以任何方式限定本发 明。
通用方法
所有得自商品来源的试剂不经进一步纯化直接使用。无水溶剂得自商 品来源并且不经进一步干燥直接使用。
使用配备有预填充硅胶短柱(
Figure RE-BDA0001517580540000202
Rf Gold High Performance)的 ISCOCombiFlash Rf 200i进行快速色谱。
使用涂敷Merck 60F254型硅胶的5x 10cm板进行薄层色谱。
使用Anton Parr MonoWave或CEM
Figure RE-BDA0001517580540000203
SP仪器进行微波加 热。
制备型HPLC纯化用Armen Spot液相色谱***进行，使用 Gemini-
Figure RE-BDA0001517580540000201
10μM C18,250mm×50mm i.d.柱，运行流速118mL/min， UV二极管阵列检测(210–400nm)，用25mMNH4HCO3水溶液和MeCN 作为洗脱剂，除非另有指明。
分析型LC-MS:通过高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)在带有Agilent 6140四极LC/MS的Agilent HP1200上表征本发明的化合物，正或负离 子电喷雾电离模式操作。分子量扫描范围是100到1350。在210nm和254 nm进行平行UV检测。样品以1mM的ACN或THF/H2O(1:1)溶液形式 提供，5μL循环注射。LCMS分析在两种仪器上进行，其中一种采用碱 性洗脱剂，另一种采用酸性洗脱剂。
碱性LCMS:Gemini-NX,3μm,C18,50mm×3.00mm i.d.柱，柱温 23℃，流速1mL/min，使用5mM碳酸氢铵(溶剂A)和乙腈(溶剂B)，梯 度：在不同的/一定的时间内从100％溶剂A开始，以100％溶剂B结 束。
酸性LCMS:ZORBAX Eclipse XDB-C18,1.8μm,50mm×4.6mm i.d.柱，柱温40℃，流速1mL/min，使用0.02％v/v甲酸水溶液(溶剂 A)和0.02％v/v甲酸的乙腈溶液(溶剂B)，梯度：在不同的/一定的时间内 从100％溶剂A开始，以100％溶剂B结束。
1H-NMR测定用Bruker Avance III 500MHz波谱仪和Bruker Avance III 400MHz波谱仪进行，用DMSO-d6或CDCl3作为溶剂。1H NMR数据为δ值的形式，单位为ppm，采用溶剂残留峰(DMSO-d6为2.50 ppm，CDCl3为7.26ppm)作为内标。***模式被指定为:s(单峰)，d(二重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，quint(五重峰)，m(多重峰)，br s(宽单 峰)，dd(双二重峰)，td(三二重峰)，dt(双三重峰)，ddd(双双二重峰)。
组合气相色谱和低分辨质谱在Agilent 6850气相色谱和Agilent 5975C质谱仪上进行，采用带有0.25μm HP-5MS涂层的15m×0.25mm 柱并用氦气作为载气。离子源:EI+，70eV，230℃，四极:150℃，界面: 300℃。
HRMS在Shimadzu IT-TOF上测定，离子源温度200℃，ESI+/-， 电离电压:(+-)4.5kV。质量分辨力10000。
元素分析在Thermo Flash EA 1112元素分析仪上进行。
缩写列表
缩写 名称
Ac 乙酰基
AIBN 2-[(1-氰基-1-甲基-乙基)偶氮]-2-甲基-丙腈
AtaPhos 双(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯化钯(II)
DCM 二氯甲烷
DIPA 二异丙基胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
eq. 当量
Et 乙基
HMDS 六甲基二硅氮烷
iPr 异丙基
Me 甲基
MeCN,ACN 乙腈
NBS N-溴琥珀酰亚胺
NCS N-氯琥珀酰亚胺
nBu 正丁基
Ph 苯基
r.t. 室温
tBu 叔丁基
tBuXPhos 2-二(叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基联苯
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
一般程序I:
步骤A
将1当量适当的醇和1.2当量吡啶溶于DCM(1.2mL/mmol)。在-78℃ 及氮气氛下缓慢加入1.05当量氯甲酸1-氯乙酯并将反应混合物于-78℃ 下搅拌3小时。将冷却的混合物过滤并将滤液减压浓缩。粗产物不经进一 步纯化直接使用。
步骤B
将1当量制备例12、制备例13或制备例14在氮气氛下溶于DMF (20ml/mmol)。加入6.7当量Cs2CO3和8当量碳酸1-氯乙酯试剂。将反 应混合物于室温下搅拌直至不再观察到进一步的转化。将混合物用盐水稀 释并将其用DCM萃取，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物通过 制备型反相色谱纯化，用5mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱剂得到 立体异构体混合物形式的适当的碳酸酯衍生物。
一般程序II:
步骤A
将1.05当量胺试剂和1.15当量吡啶溶于1.3mL/mmol DCM，然后在 -78℃及氮气氛下加入1当量氯甲酸1-氯乙酯。将反应混合物于-78℃下搅 拌直至不再观察到进一步的转化。将冷却的混合物过滤；用30℃的水浴 将滤液减压浓缩(30毫巴)。粗产物在3小时内使用并且不进行进一步的纯 化。
步骤B
将1当量制备例12、制备例13或制备例14在氮气氛下溶于20 ml/mmol DMF。加入10当量Cs2CO3，然后加入8当量氨基甲酸酯试剂 (0.8M步骤A的粗产物的DMF溶液)。将反应混合物于室温下搅拌直至不 再发生进一步的转化。将混合物用盐水稀释并用乙酸乙酯萃取数次。将合 并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，然后通过制备型反相色谱纯 化，用5mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱剂得到氨基甲酸酯衍生物。
制备例1:5-溴-4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A:6-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向装备有机械搅拌器、温度计和回流冷凝器的2L圆底烧瓶中加入 433mL乙酸、13mL硫酸和87mL水的溶液。向搅拌的溶液中加入69.3 g 3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.46mol)、51.9g高碘酸(0.23mol)和104g 碘(0.41mol)并加热至60℃加热1小时。将形成的悬浮液冷却至室温，过 滤，用乙酸和水(5:1)的混合物洗涤然后用***洗涤。将得到的米色结晶固 体晾干。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):12.57(br s,1H),8.09(s,1H),7.65 (s,1H)
步骤B:4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
向装备有机械搅拌器、温度计、回流冷凝器和CaCl2-管的1L圆底烧 瓶中加入113mL磷酰氯和35mL N,N-二甲基苯胺(0.29mol)。在5分钟 内向混合物中分批加入75.54g6-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.27 mol)。将反应混合物于105℃下搅拌1小时。将形成的悬浮液冷却至10 ℃，过滤并用己烷洗涤。将粗产物加入冰水中并搅拌10分钟，过滤，用冷水、***洗涤并晾干。得到米色结晶固体。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):8.89(s,1H),7.98(s,1H)
步骤C:制备例1
向装备有机械搅拌器、温度计和鼓泡器的2L圆底烧瓶中加入600mL 乙腈。加入84.9g 4-氯-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶(0.29mol)、50.9g NBS(0.29 mol)和8.5mL四氟硼酸-***络合物。将反应混合物于室温下搅拌16小 时。向混合物中继续分3次加入22.9g(0.12mol)NBS。将悬浮液冷却至 0℃并继续搅拌1小时后，将沉淀滤出，用乙腈洗涤并晾干。得到米色结 晶固体状的制备例1。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):8.88(s,1H)
制备例2:5-溴-4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将75.08g制备例1(200mmol)、53.63g 2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧硼戊环(240mmol)、130g碳酸铯(400mmol)、2.245g Pd(OAc)2 (10mmol)和8.50g tBuX-Phos(20mmol)置于2L的烧瓶内。加入600mL THF和200mL水，然后在70℃及氩气氛下搅拌过夜。蒸除THF，然后通 过过滤收集产物。将粗产物在250mL乙腈中超声处理并再次过滤。然后将制备例2用EtOH/THF(2:1)结晶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):9.02 (s,1H),7.80-7.77(m,2H),7.47-7.43(m,2H)
制备例3:(2R)-2-乙酰氧基-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
步骤A:乙酸[2-(溴甲基)苯基]酯
将60.07g乙酸2-甲基苯酯(400mmol)和106.8g NBS(600mmol)置于 1L的烧瓶中。加入500mL环己烷，然后在剧烈搅拌下在30分钟内加入 3.284g AIBN(20mmol)。将混合物在80℃下搅拌直至不再观察到进一 步的转化，然后冷却至室温。将沉淀滤出并用环己烷洗涤。将母液减压浓 缩，粗产物不经进一步纯化直接用于步骤B。
步骤B:制备例3
将23.10g无水LiCl(545mmol)和65.36g无水ZnCl2(479.6mmol) 置于2L的烧瓶中，然后在0.1mmHg下于160℃干燥1小时。在氩气 氛下冷却至室温后，加入26.49g镁屑(1090mmol)和1L干燥的预先冷却 的(0℃)THF。将形成的混合物浸入冰浴中然后搅拌30分钟。
将100g乙酸[2-(溴甲基)苯基]酯(步骤A的粗产物，～436mmol)溶于 120mL干燥的THF并将其在15分钟内加入到预先冷却的无机物中。加 入试剂后，将形成的混合物搅拌45分钟，同时保持温度在0-5℃。向混 合物中在5分钟内加入64.82mL 2-氧代乙酸乙酯(654mmol,50％的甲苯 溶液)并将形成的混合物继续搅拌15分钟。
通过过滤从混合物中除去剩余的无机物，然后向滤液中加入500mL MeOH。将混合物搅拌至乙酰基从苯酚氧向烷基氧的分子内迁移完成。向 混合物中加入30mL乙酸然后将挥发性物质减压蒸发。向残余物中加入 350mL水并将其用EtOAc萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3和盐 水洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。向残余物中加入100mL 己烷并将其在0℃下搅拌30分钟。通过过滤收集形成的白色结晶并用己 烷洗涤得到对映体，将其通过手性色谱分离。
柱:OD；洗脱剂:庚烷/EtOH；以99.8％ee收集到先洗脱的(S)-对映体， 以99.9％ee收集到后洗脱的制备例3的(R)-对映体。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),7.06(t,1H),7.04(d,1H), 6.79(d,1H),6.71(t,1H),5.10(dd,1H),4.05(q,2H),3.06(dd,1H),2.94 (dd,1H),2.00(s,3H),1.09(t,3H)
制备例4:(2R)-2-羟基-3-(2-四氢吡喃-2-基氧基苯基)丙酸乙酯
步骤A:(2R)-2-乙酰氧基-3-(2-四氢吡喃-2-基氧基苯基)丙酸乙酯
将103.3g制备例3(409mmol)溶于280mL 3,4-二氢-2H-吡喃。加入 300mg对甲苯磺酸一水合物并将混合物搅拌至不再观察到进一步的转 化。然后将其用1L乙酸乙酯稀释，用200mL饱和NaHCO3溶液洗涤， 然后用200mL水洗涤。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然 后将其用庚烷/EtOAc通过快速色谱纯化。
步骤B:制备例4
将137.57g(2R)-2-乙酰氧基-3-(2-四氢吡喃-2-基氧基苯基)丙酸乙酯(409mmol)溶于600mL乙醇，然后加入20mL乙醇钠溶液(1M的乙醇溶 液)并将其搅拌至不再观察到进一步的转化。将混合物浓缩至原体积的一 半，然后加入300mL水和300mL盐水并将其用乙酸乙酯萃取。将合并 的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。原料的对映体纯度得以保持。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,1:1非对映异构体的混合物)δ7.16(t,1H), 7.13(d,1H),7.04(d,1H),6.87(t,1H),5.51-5.47(m,1H),4.27(m,1H), 4.04-4.02(q,2H),3.73-3.56(m,2H),3.06-3.04-2.74-2.71(dd,2H),1.95-1.64 (m,2H),1.79(m,2H),1.65-1.50(m,2H),1.12-1.10(t,3H)
制备例5:(2R)-2-[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-(2-四氢 吡喃-2-基氧基苯基)丙酸乙酯
将48.45g制备例2(141mmol)、45.63g制备例4(155mmol)和137.8 g Cs2CO3(423mmol)置于2L的烧瓶中。加入1.4L叔丁醇并将混合物在 氮气氛下于70℃搅拌至不再观察到进一步的转化。减压蒸发大约1L溶 剂，然后将其用水稀释，用2M HCl将pH调至8，然后将其用DCM萃 取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化，得到非对映异构体混合物形式的 制备例5。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6):8.67-8.66(s,1H),7.75(m,2H),7.43(dm, 1H),7.41(m,2H),7.19(m,1H),7.08-7.06(dm,1H),6.89(m,1H), 5.87-5.70(dd,1H),5.60-5.55(m,1H),4.23-4.08(m,2H),3.80-3.48(m,2H), 3.52-3.49(dd,1H),3.19-3.17(dd,1H),2.09-1.49(m,6H),1.15-1.10(t,3H) C28H26BrFN2O5S的HRMS计算值:600.0730,实测值:601.0809/601.0798 (M+H)
制备例6:2-氯-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯酚 步骤A:(4-溴-2-氯-苯氧基)-三甲基硅烷
将20.8g 4-溴-2-氯-苯酚(100mmol)溶于150mL干燥的THF，然后 加入24.2g HMDS(150mmol)。将反应混合物在氩气氛下于85℃搅拌 1.5小时然后减压浓缩，所得到的产物不经进一步纯化直接使用。1H NMR (200MHz,CDCl3):7.49(d,1H),7.23(dd,1H),6.75(d,1H),0.26(s,9H) 步骤B:4-溴-2-氯-3-甲基-苯酚
将48mL nBuLi的己烷溶液(2.5M,120mmol)在-78℃及氩气氛下滴 加到12.1g干燥DIPA(120mmol)的250mL干燥THF溶液中。将混合物 在相同的温度下搅拌30分钟，然后滴加28.0g(4-溴-2-氯-苯氧基)-三甲基 硅烷(100mmol)。2.5小时后，滴加21.3g MeI(150mmol)，然后移走冷 却浴并将混合物搅拌过夜。用100mL NH4OH溶液和200mL NH4Cl溶液终止反应并用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将得到 的深色物质与纯己烷一起回流数次(150-150mL等份)并倾析，最后剩下黑 色的焦油。将合并的有机相减压浓缩得到19.0g粗产物，其不经进一步纯 化直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3):7.32(d,1H),6.76(d,1H),5.62(s, 1H),2.49(s,3H)
步骤C:(4-溴-2-氯-3-甲基-苯氧基)-三甲基硅烷
将20.8g HMDS(129mmol)加入到19.0g 4-溴-2-氯-3-甲基-苯酚 (86.0mmol)的150mL干燥THF溶液中。将混合物在氩气囊气氛下于85 ℃搅拌1.5小时然后减压浓缩。得到的产物不经进一步纯化直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3):7.30(d,1H),6.63(d,1H),2.50(s,3H),0.28(s, 9H)
步骤D:制备例6
将25.2g(4-溴-2-氯-3-甲基-苯氧基)-三甲基硅烷(86.0mmol)的250 mL干燥THF溶液在氩气氛下冷却至-78℃，然后滴加38mL nBuLi的己 烷溶液(2.5M,94.6mmol)。5分钟后，滴加19.2g 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲 基-1,3,2-二氧硼戊环(103mmol)。移走冷却浴并将混合物缓慢升温至室温。 然后将混合物加入到200mL NH4Cl溶液中并用乙酸乙酯萃取。将合并的 有机相减压浓缩并通过短的硅胶垫，用己烷和EtOAc作为洗脱剂。将粗 产物用EtOAc和己烷的混合物重结晶得到制备例6。1H NMR(500MHz, DMSO-d6):10.40(s,1H),7.42(d,1H),6.80(d,1H),2.49(s,3H),1.27(s, 12H)
制备例7:(2R)-2-[(5Sa)-5-(3-氯-4-羟基-2-甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-(2-四氢吡喃-2-基氧基苯基)丙酸乙酯
将186.6g制备例5(310.3mmol)和99.99g制备例6(372.3mmol)溶 于1.2L THF，然后加入溶于300mL水的202.2g Cs2CO3(620.6mmol)。 然后加入11.0g AtaPhos(15.51mmol)并将混合物在氮气氛下于回流温度 下搅拌直至不再观察到进一步的转化。减压蒸发大部分的挥发性物质，然 后将其用DCM和盐水稀释。振摇后，将水相的pH用2M HCl调至8。 进行相分离后将水相用DCM萃取。将有机层合并并用硫酸钠干燥，过滤 并减压浓缩。将非对映异构体通过快速色谱分离，用庚烷和乙酸乙酯作为 洗脱剂。收集的后洗脱的非对映异构体对为制备例7。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6,1:1非对映异构体的混合物):10.27(br s, 1H),8.60(s,1H),7.30(m,2H),7.22(m,2H),7.16-7.14(d,1H),7.12 (m,1H),7.00(d,1H),6.96(d,1H),6.74-6.73(t,1H),6.34-6.36(d,1H), 5.55-5.52(m,1H),5.54-5.41(dd,1H),4.06(q,2H),3.68-3.54(m,2H), 3.10-3.07(dd,1H),2.44(dd,1H),1.98-1.90(br s,1H),1.85-1.83(s,3H), 1.79(br s,2H),1.64(br s,1H),1.59(br s,1H),1.54(br s,1H),1.09-1.08(t, 3H)
HRMS:(M+H)＝663.1728和663.1717
制备例8:(2R)-2-[(5Sa)-5-[3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-(2-四氢吡喃-2-基氧基苯 基)丙酸乙酯
将132.3g制备例7(199.5mmol)、43.17g 2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇 (299.3mmol)和94.20g PPh3(359.1mmol)溶于1L干燥甲苯，然后加入 78.09g偶氮二甲酸二叔丁酯(339.2mmol)。将混合物在氮气氛下于50℃ 搅拌至不再观察到进一步的转化。蒸除980mL甲苯，然后加入500mL Et2O并将混合物搅拌和超声处理。将沉淀的白色晶体过滤，用Et2O洗涤得到65.9g纯的三苯基氧膦。将滤液减压浓缩并用EtOAc和MeOH作为 洗脱剂通过快速色谱纯化，得到制备例8。MS:(M+H)+＝789.2
制备例9:(2R)-2-[(5Sa)-[3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
将199.5mmol制备例8溶于1L EtOH，然后加入1L 1.25M HCl的 EtOH溶液并将混合物在室温下搅拌至不再观察到进一步的转化。蒸除大 部分EtOH，然后加入Et2O并将沉淀的HCl盐(白色固体)过滤，用Et2O 洗涤。将HCl盐小心地用饱和NaHCO3溶液处理，用DCM萃取，将合 并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到制备例9。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):9.53(br s,1H),8.60(s,1H),7.30(m,2H), 7.28(d,1H),7.21(m,2H),7.16(d,1H),6.97(t,1H),6.72(d,1H),6.53(t, 1H),6.20(d,1H),5.46(dd,1H),4.22(m,2H),4.04(m,2H),2.92(dd,1H), 2.75(m,2H),2.53(br s,4H),2.44(dd,1H),2.36(br s,4H),2.17(s,3H), 1.88(s,3H),1.06(t,3H)
C37H38ClFN4O5S的HRMS计算值:704.2235,实测值:705.2288(M+H)
制备例10:(E)-4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-丁-3-烯-2-酮
将502.1g 1,1-二甲氧基丙-2-酮(4.25mol)和506.4g 1,1-二甲氧基 -N,N-二甲基-甲胺(4.25mol)在2L的烧瓶中混合并于105℃下搅拌3小 时。通过蒸馏连续除去形成的MeOH。当MeOH形成停止时(顶部温度 65℃)，将反应混合物真空蒸馏(将压力缓慢降至30毫巴)以除去副产物和 未反应的原料。将粗产物在0.1毫巴下蒸馏。收集顶部温度107-118℃之 间的馏分(浴温160-165℃)得到黄色油。1H NMR(500MHz,DMSO-d6): 7.59(d,1H),5.17(d,1H),4.42(s,1H),3.25(s,6H),3.09(s,3H),2.78(s, 3H)
制备例11:[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲醇
步骤A:4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶
向2-甲氧基苯甲脒盐酸盐(1.2当量)和制备例10(1当量)在干燥甲醇 (0.5mL/mmol)中的混合物中分批加入甲醇钠(1.2当量)并将混合物在 75℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却并减压浓缩。向残余物中加入水 并将其用DCM萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。 将粗产物通过快速色谱纯化，用庚烷和EtOAc作为洗脱剂。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6):8.93(d,1H),7.55-7.44(m,3H),7.16(d,1H),7.06(m, 1H),5.31(s,1H),3.76(s,3H),3.37(s,6H)
步骤B:制备例11
将261mg 4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶(1.0mmol)溶于2 mL HCl的二恶烷溶液(4M溶液)，然后加入2mL水并将该混合物在50℃ 下搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃，然后分批加入320mg NaOH (8.0mmol)。用10％K2CO3溶液将pH调至8，然后加入76mg硼氢化钠(2.0 mmol)并将混合物于0℃搅拌30分钟。将反应混合物用5mL水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物用庚烷 和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到制备例11。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6):8.84(d,1H),7.50-7.42(m,3H),7.14(d,1H),7.03(m, 1H),5.66(t,1H),4.58(d,2H),3.75(s,3H)
制备例12:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸
步骤A
将1当量制备例9、2当量制备例11和2当量三苯膦溶于无水甲苯 (0.2M苯酚溶液)，然后加入2当量偶氮二甲酸二叔丁酯。将混合物在氮气 氛下于50℃搅拌至不再观察到进一步的转化。减压蒸发挥发性物质并将 粗品中间体通过快速色谱纯化，用乙酸乙酯和甲醇作为洗脱剂。
步骤B
将得到的中间体溶于二恶烷-水1:1(10mL/mmol)并加入10当量 LiOH×H2O。将混合物在室温下搅拌至不再观察到进一步的转化。然后 将其用盐水稀释，用2M HCl中和，用DCM萃取。将合并的有机相用硫 酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后通过制备型反相色谱纯化，用25mM NH4HCO3水溶液和MeCN作为洗脱剂。C47H44ClFN6O6S的HRMS计算 值:874.2716；实测值438.1415(M+2H)
制备例13:(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基] 苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基) 嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸
步骤A:4-溴-2,6-二氯-3,5-二甲基-苯酚
将30.16g 4-溴-3,5-二甲基-苯酚(150mmol)溶于75mL 1,2-二氯乙烷 和75mL乙腈的混合物，然后分批加入40.06g NCS(300mmol)并将混合 物在室温下搅拌至不再观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，将 残余物溶于DCM，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩， 然后不经进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6): 10.10(s,1H),2.46(s,6H)
步骤B:1-溴-3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯
向26.0g 4-溴-2,6-二氯-3,5-二甲基-苯酚(96.3mmol)和26.60g K2CO3(192.6mmol)的300mL MeCN溶液中加入6.6mL MeI(105.9mmol)并将 混合物在室温下搅拌至不再观察到进一步的转化。滤出固体并将滤液减压 浓缩。将粗产物溶于DCM，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并 减压浓缩，然后不经进一步纯化直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz, DMSO-d6):3.78(s,3H),2.49(s,6H)
步骤C:2-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环
将10.0g 1-溴-3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯(35.2mmol)在氮气氛 下溶于360mL干燥的THF并用干冰-丙酮冷却至-78℃。加入23.2mL nBuLi(1.6M的己烷溶液)(37.0mmol)并将混合物搅拌15分钟，然后加 入8.6mL 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环(42.24mmol)并使 混合物升温至室温。用盐水终止反应，用DCM萃取，用硫酸钠干燥，过 滤并减压浓缩。将粗产物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化， 得到2-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 戊环。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):3.81(s,3H),2.33(s,6H),1.34(s, 12H)
步骤D:4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
将3.92g 4-溴噻吩-3-甲酸乙酯(16.68mmol)和9.9g 2-(3,5-二氯-4-甲 氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环(30.0mmol)溶于 140mL二恶烷，然后加入溶于40mL水的10.87g Cs2CO3(33.36mmol)。 然后加入590mg AtaPhos(0.83mmol)并将混合物在氮气氛下于回流温度 下搅拌至不再观察到进一步的转化。然后将其用DCM和盐水稀释。进行 相分离后将水相用DCM萃取。将有机层合并并用硫酸钠干燥，过滤并减 压浓缩。将粗产物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化，得到 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.53(d,1H),7.47(d,1H),4.02(q,2H), 3.83(s,3H),1.95(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+NH4)+＝376.0538
步骤E:4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将2.65g 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯(7.38mmol)溶于75mL乙腈，然后加入2.2mL氟硼酸***络合物(16.23 mmol)和3.65g N-碘琥珀酰亚胺(16.23mmol)并将混合物在室温下搅拌至 不再观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩并将粗产物用庚烷和 EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲 基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):3.98 (q,2H),3.84(s,3H),1.92(s,6H),0.84(t,3H)
步骤F:4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将5.29g 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲 酸乙酯(8.66mmol)溶于90mL干燥的THF，然后在氩气氛下冷却至 -78℃。加入6.7mL异丙基氯化镁、氯化锂络合物(1.3M的THF溶液) (8.66mmol)并将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入饱和NH4Cl水 溶液并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到4-(3,5-二氯-4- 甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):8.71(s,1H),4.01(q,2H),3.86(s,3H),1.89(s,6H),0.99(t,3H) 步骤G:4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸 乙酯
将4.20g 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙 酯(8.66mmol)和1.82g 4-氟苯基硼酸(13.0mmol)溶于80mL二恶烷，然 后加入溶于20mL水的5.64g Cs2CO3(17.32mmol)。然后加入500mg Pd(PPh3)4(0.43mmol)并将混合物在氮气氛下于80℃搅拌至不再观察到 进一步的转化。然后将其用DCM和盐水稀释。进行相分离后将水相用 DCM萃取。将有机层合并并用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物 用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到4-(3,5-二氯-4-甲氧基 -2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.58(s,1H),7.22-7.10(m,4H),4.03(q, 2H),3.82(s,3H),1.92(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+H)+＝453.0498
步骤H:4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯
将1.97g 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3- 甲酸乙酯(4.34mmol)溶于40mL无水乙腈，然后加入576mg四氟硼酸硝 酰阳离子(4.34mmol)并将混合物在室温下搅拌至不再观察到进一步的转 化。然后将其用DCM和盐水稀释。进行相分离后将水相用DCM萃取。 将有机层合并并用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用庚烷和 EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲 基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):7.37-7.33(m,2H),7.32-7.26(m,2H),4.14(q,2H),3.82(s,3H), 2.06(s,6H),0.88(t,3H)
步骤I:2-氨基-4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3- 甲酸乙酯
将1.85g 4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基- 噻吩-3-甲酸乙酯(3.71mmol)溶于90mL乙酸和18mL水的混合物，然后 分批加入2.43g锌粉(37.1mmol)并将混合物在室温下搅拌至不再观察到 进一步的转化。将反应混合物减压浓缩并将粗产物用庚烷和EtOAc作为 洗脱剂通过快速色谱纯化得到2-氨基-4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯 基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):7.73(s,2H),7.12-7.06(m,2H),7.02-6.97 (m,2H),3.86-3.80(m,2H),3.80(s,3H),2.01(s,6H),0.72(t,3H)
HRMS(M+H)+＝456.0598
步骤J:5-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将1.10g 2-氨基-4-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基) 噻吩-3-甲酸乙酯(2.35mmol)溶于20mL甲酰胺并将其在150℃下搅拌至 不再观察到进一步的转化。然后将其倒入水中并将沉淀出的产物通过过滤 收集得到5-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并 [2,3-d]嘧啶-4-酮。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):12.53(br s,1H),8.18(s,1H),7.23-7.16(m, 4H),3.84(s,3H),1.96(s,6H)
HRMS(M+H)+＝449.0289
步骤K:4-氯-5-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将700mg 5-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻 吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.56mmol)溶于6mL磷酰氯并将其在90℃下搅拌 至不再观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，然后向粗产物中加 入冰水并将其超声处理10分钟。过滤收集沉淀的产物得到4-氯-5-(3,5-二 氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):9.02(s,1H),7.38-7.26(m,4H),3.86(s, 3H),1.99(s,6H)
HRMS(M+H)+＝466.9954
步骤L:2,6-二氯-4-[4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基- 苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯-3,5-二甲基- 苯酚
向搅拌着的700mg 4-氯-5-(3,5-二氯-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4- 氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶(1.50mmol)的15mL DCM溶液中于0℃下加 入3.0mL三溴化硼(1M的DCM溶液)(3.0mmol)并使混合物升温至室 温，然后将其搅拌至不再观察到进一步的转化。将混合物用饱和NH4Cl 水溶液终止反应并用DCM萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥并减压浓 缩。将残余物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到37:63 产物混合物形式的2,6-二氯-4-[4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5- 基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二 氯-3,5-二甲基-苯酚。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):10.14(br s,1H),9.01(s,1H),7.40-7.23(m, 4H),1.95(s,6H)和10.14(br s,1H),8.93(s,1H),7.40-7.23(m,4H),1.93(s, 6H)
HRMS(M+H)+＝452.9800和496.9287
步骤M:4-氯-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4- 甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将300mg 2,6-二氯-4-[4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5- 二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯-3,5- 二甲基-苯酚的混合物(0.62mmol)、286mg 2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(1.98 mmol)和520mg三苯膦(1.98mmol)溶于10mL干燥甲苯，然后加入460 mg偶氮二甲酸二叔丁酯(1.98mmol)。将混合物在氮气氛下于50℃下搅 拌至不再观察到进一步的转化。减压蒸发挥发性物质并将粗品中间体用 EtOAc和甲醇作为洗脱剂通过快速色谱纯化，得到35:65产物混合物形式 的4-氯-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4- 氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪 -1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):9.02(S,1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t, 2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.17(br s,3H),1.98(s,6H)和8.94(S, 1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t,2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.15 (br s,3H),1.98(s,6H)
HRMS(M+H)+＝579.0968和623.0455
步骤N:(E)-4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-丁-3-烯-2-酮
将502.1g 1,1-二甲氧基丙-2-酮(4.25mol)和506.4g 1,1-二甲氧基 -N,N-二甲基-甲胺(4.25mol)在2L的烧瓶中混合并于105℃下搅拌3小 时。通过蒸馏连续除去形成的MeOH。当MeOH形成停止时(顶部温度 65℃)，将反应混合物真空蒸馏(将压力缓慢降至30毫巴)以除去副产物和 未反应的原料。将粗产物在0.1毫巴下蒸馏。收集顶部温度107-118℃之 间的馏分(浴温160-165℃)得到黄色油。1H NMR(500MHz,DMSO-d6): 7.59(d,1H),5.17(d,1H),4.42(s,1H),3.25(s,6H),3.09(s,3H),2.78(s, 3H)
步骤O:4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶
向2-甲氧基苯甲脒盐酸盐(1.2当量)和(E)-4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧 基-丁-3-烯-2-酮(1当量)在干燥甲醇(0.5mL/mmol)中的混合物中分批加入 甲醇钠(1.2当量)并将混合物在75℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却并 减压浓缩。向残余物中加入水并将其用DCM萃取。将合并的有机层用硫 酸镁干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用庚烷和EtOAc作为洗脱剂通过 快速色谱纯化，得到4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.93(d,1H),7.55-7.44(m,3H),7.16(d,1H),7.06 (m,1H),5.31(s,1H),3.76(s,3H),3.37(s,6H)
步骤P:[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲醇
将261mg 4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶(1.0mmol)溶于2 mL HCl的二恶烷溶液(4M溶液)，然后加入2mL水并将该混合物在50℃ 下搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃，然后分批加入320mg NaOH (8.0mmol)。用10％K2CO3溶液将pH调至8，然后加入76mg硼氢化钠(2.0 mmol)并将混合物于0℃搅拌30分钟。将反应混合物用5mL水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物用庚烷 和EtOAc作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到标题产物。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6):8.84(d,1H),7.50-7.42(m,3H),7.14(d,1H),7.03(m, 1H),5.66(t,1H),4.58(d,2H),3.75(s,3H)
步骤Q:(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸
将37.84g(150mmol)制备例3、48.65g(225mmol)[2-(2-甲氧基苯基) 嘧啶-4-基]甲醇和59.01g(225mmol)三苯膦溶于160mL无水甲苯，然后加 入102.47mL(225mmol)偶氮二甲酸二乙酯。将混合物在氮气氛下于50℃ 搅拌至不再观察到进一步的转化。减压蒸发挥发性物质。然后加入400mL Et2O，将混合物超声处理并过滤(以除去PPh3)。真空除去Et2O。将残余物 溶于130mL THF，然后加入30g NaOH的130mL H2O溶液。将混合物在 室温下搅拌至不再观察到进一步的转化。然后将其用2M HCl酸化，真空 除去THF。加入300mL DCM并将沉淀过滤，用冷H2O和DCM洗涤，真 空干燥得到(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙 酸。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):8.88(d,1H),7.80(d,1H),7.55(dd,1H),7.49-7-44(m,1H),7.26(dd,1H),7.17-7.11(m,2H),7.06(t,1H),6.98 (d,1H),6.88(t,1H),5.22(s,2H),3.81(dd,1H),3.77(s,3H),3.73(dd,1H), 2.44(dd,1H)
步骤R:(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
将51.7g(136mmol)(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基] 甲氧基]苯基]丙酸溶于520mL EtOH，然后加入20mL浓H2SO4。将混合 物在60℃下搅拌至不再观察到进一步的转化。然后将其用水稀释，用浓 NaHCO3溶液中和并用DCM萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤 并减压浓缩，用EtOAc和MeOH作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。 C23H24N2O5的HRMS计算值:408.1685,实测值:409.1757(M+H)
步骤S:制备例13
将200mg 4-氯-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基] 苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯-2,6-二甲基 -4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶的混 合物(0.33mmol)、211mg(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基] 甲氧基]苯基]丙酸乙酯(0.52mmol)和202mg Cs2CO3(0.62mmol)溶于5 mL叔丁醇并将混合物在70℃下搅拌至不再观察到进一步的转化。将其 用乙酸乙酯稀释然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，用EtOAc和甲醇作为洗脱剂通过快速色谱纯化得到(2R)-2-[5-[3,5- 二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并 [2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙 酸乙酯。
将得到的中间体溶于5mL二恶烷-水1:1(10mL/mmol)并加入145 mg LiOH×H2O(3.45mmol)。将混合物在室温下搅拌至不再观察到进一 步的转化。然后将其用盐水稀释，用2M HCl中和，用DCM萃取，用硫 酸钠干燥，过滤、减压浓缩并用5mM NH4HCO3水溶液和MeCN作为洗 脱剂通过制备型反相色谱纯化，得到制备例13。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.89(d,1H),8.60(s,1H),7.81(d,1H), 7.53(dd,1H),7.45(td,1H),7.29-7.21(m,4H),7.17-7.13(m,1H),7.14(d, 1H),7.04(td,1H),7.01(d,1H),6.76(t,1H),6.20(d,1H),5.45(dd,1H), 5.26(d,1H),5.20(d,1H),4.06-4.01(m,2H),3.76(s,3H),3.46(dd,1H), 2.79-2.74(m,2H),2.67-2.38(m,8H),2.33(s,3H),2.26(s,3H),2.22(dd, 1H),1.73(s,3H)
HRMS(M+2H)2+＝462.1310
制备例14:(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸
采用制备例13中所述的程序，直接从步骤B开始并用4-溴-3,5-二甲 基-苯酚代替4-溴-2,6-二氯-3,5-二甲基-苯酚，制得制备例14。
实施例1:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(甲氧基羰基)氧基]乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用甲醇作为适宜的醇，制得实施例1。C51H50ClFN6O9S的HRMS计算值:976.3033；实测值489.1604和489.1572 (M+2H)
实施例2:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用乙醇作为适宜的醇，制得实施例2。C52H52ClFN6O9S的HRMS计算值:990.3189；实测值496.1649和496.1685 (M+2H)
实施例3:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(丙-2-基氧基)羰基]氧基}乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用2-丙醇作为适宜的醇，制得实施 例3。C53H54ClFN6O9S的HRMS计算值:1004.3345；实测值503.1766 (M+2H)
实施例4:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(叔丁氧基羰基)氧基]乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用2-甲基-2-丙醇作为适宜的醇，制 得实施例4。C54H56ClFN6O9S的HRMS计算值:1018.3502；实测值 510.1837(M+2H)
实施例5:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(环戊基氧基)羰基]氧基}乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用环戊醇作为适宜的醇，制得实施例 5。C55H56ClFN6O9S的HRMS计算值:1030.3502；实测值516.1817(M+2H)
实施例6:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(辛基氧基)羰基]氧基}乙酯
采用一般程序I，用制备例12并用1-辛醇作为适宜的醇，制得实施 例6。C58H64ClFN6O9S的HRMS计算值:1030.3502；实测值538.2133和 538.2149(M+2H)
实施例7:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用二甲基胺盐酸盐作为胺试剂，在 步骤A中使用2.15当量的吡啶，制得实施例7。C52H53ClFN7O8S的HRMS 计算值:989.3349；实测值495.6740和495.6738(M+2H)
实施例8:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用二乙基胺作为胺试剂，制得实施 例8。C54H57ClFN7O8S的HRMS计算值:1017.3662；实测值509.6902 (M+2H)
实施例9:吗啉-4-甲酸1-{[(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2- 甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酰基]氧基}乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用吗啉作为胺试剂，制得实施例9。 C54H55ClFN7O9S的HRMS计算值:1031.3455；实测值516.6826和 516.6821(M+2H)
实施例10:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧基}乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用2-甲氧基乙胺作为胺试剂，制得
实施例10。C53H55ClFN7O9S的HRMS计算值:1019.3455；实测值510.6809 和510.6813(M+2H)
实施例11:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧基}乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)乙胺作 为胺试剂，制得实施例11。C56H61ClFN7O10S的HRMS计算值:1077.3873； 实测值539.7029和539.7017(M+2H)
实施例12:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基-2-氧代乙基)(甲基)氨基甲酰基]氧 基}乙酯
采用一般程序II，用制备例12并用2-(甲基氨基)乙酸甲酯盐酸盐作为 胺试剂，在步骤A中使用2.15当量的吡啶，制得实施例12。C54H55ClFN7O10S 的HRMS计算值:1047.3403；实测值524.6782和524.6781(M+2H)
实施例13:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(膦酰氧基)甲酯
将700mg制备例12(0.8mmol)、233mg氯甲基磷酸二-叔丁酯 (0.9mmol)、240mg碘化钠(1.6mmol)和521mg Cs2CO3(1.6mmol)溶于8 mL DMF并将反应混合物在氮气氛下于室温下搅拌至不再观察到进一步 的转化。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯除去。将有机层用水洗涤，用硫 酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化，用DCM和 MeOH洗脱得到二-叔丁酯中间体。
将160mg二-叔丁酯(0.15mmol)溶于8mL DCM并用冰水浴冷却。 向混合物中缓慢加入4mL TFA。加完TFA后，将混合物继续搅拌15分 钟，然后将其减压浓缩得到盐形式的粗产物。用甲酸溶液和ACN进行制 备型HPLC，然后冷冻干燥得到白色固体状的实施例13。C48H47ClFN6O10PS的HRMS计算值:984.2485；实测值493.1338(M+2H)
实施例14:(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯
采用一般程序I，用制备例14并用乙醇作为适宜的醇，制得实施例 14。
实施例15:(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基] 苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基) 嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯
采用一般程序I，用制备例13并用乙醇作为适宜的醇，制得实施例 15。C53H53Cl2FN6O9S的HRMS计算值:1038.2955；实测值520.1543和 520.1549(M+2H)2+
实施例16:(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯 基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧 啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯
采用一般程序II，用制备例14并用二甲基胺盐酸盐作为胺试剂，在 步骤A中使用2.15当量的吡啶，制得实施例16。
实施例17:(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基] 苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基) 嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯
采用一般程序II，用制备例13并用二甲基胺盐酸盐作为胺试剂，在 步骤A中使用2.15当量的吡啶，制得实施例17。C53H54Cl2FN7O8S的 HRMS计算值:1037.3115；实测值519.6616和519.6632(M+2H)2+
药理学研究
实施例A：用荧光偏振技术检测Mcl-1抑制
通过荧光偏振(FP)测定各化合物的相对结合力。该方法利用荧光标记 的配体(荧光素-βAla-Ahx-A-REIGAQLRRMADDLNAQY-OH；mw 2,765)，其可与Mcl-1蛋白(Mcl-1对应于
Figure RE-BDA0001517580540000451
入藏登录号:Q07820) 结合，导致利用读数器测定的以微极化(mP，milli-polarisation)为单位的 各向异性增加。加入可竞争性地与配体的相同位点相结合的化合物将导致 体系中更大比例的未结合配体，其表现为mP单位的降低。
在DMSO中制备各化合物的11点连续稀释液并将2μL转移到平底 的低结合384孔板中(DMSO终浓度5％)。然后加入38μL含有荧光素标 记的配体(终浓度为1nM)和Mcl-1蛋白(终浓度为5nM)的缓冲液(10mM 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸[HEPES],150mM NaCl,0.05％Tween 20, pH 7.4)。
将检测板在室温下孵育约2小时，然后在Biomek Synergy2读数器(Ex. 528nm,Em.640nm,截止波长510nm)上测定FP并计算mP单位。增加 剂量的试验化合物的结合表示为与在“仅含5％DMSO”和“100％抑制”对 照之间建立的窗口相比的mP降低百分比。利用XL拟合软件，用四参数 Logistic模型(S型剂量-响应模型)绘制11点的剂量响应曲线并测定引起 mP降低50％的抑制剂浓度(IC50)。结果如下表1所示。
结果表明，本发明的化合物抑制如上所述的Mcl-1蛋白和荧光肽之间 的相互作用。
实施例B：体外细胞毒性
对H929多发性骨髓瘤肿瘤品系进行细胞毒性研究。
将细胞分布在微量培养板上并暴露于测试化合物48小时。然后通过 比色测定法、即微培养四唑鎓盐测定(Cancer Res.,1987,47,939-942)对细 胞存活率进行定量。
结果以IC50(抑制细胞存活率达50％的化合物浓度)表示并且如下表 1中所示。
结果显示本发明的化合物是细胞毒性的。
表1：Mcl-1抑制(荧光偏振试验)和对H929细胞的细胞毒性的IC50
Figure RE-BDA0001517580540000471
ND:未测定
实施例C:体内PARP的裂解形式的定量
通过检测裂解的PARP水平，在AMO-1多发性骨髓瘤细胞异种移植 模型中评价本发明化合物诱导细胞凋亡的能力。
将1.107AMO-1细胞经皮下植入免疫抑制小鼠(SCID品系)。植入后 12-14天，将动物用各种化合物通过静脉内或口服途径进行治疗。治疗后， 回收肿瘤并溶解，然后定量肿瘤溶解物中PARP的裂解形式。
定量用特异性检测PARP的裂解形式的“Meso Scale Discovery(MSD) ELISA平台”试验进行。以活化因子的形式表达，其对应于治疗小鼠中裂 解的PARP的量除以对照小鼠中裂解的PARP的量的比值。
结果表明，本发明的化合物能够在体内诱导AMO-1肿瘤细胞的细胞 凋亡。
实施例D：体内抗肿瘤活性
在AMO-1多发性骨髓瘤细胞异种移植模型中评价本发明化合物的抗 肿瘤活性。
将1x107AMO-1细胞经皮下植入免疫抑制小鼠(SCID品系)。
植入后6-8天，当肿瘤块达到约150mm3时，用各种化合物以日给药 方案治疗小鼠(治疗5天)。从治疗开始，每周2次测量肿瘤块。
得到的结果(用ΔT/C比表示，即产品活性的评定参数，定义为治疗组 的肿瘤体积/未经治疗的对照组的肿瘤体积的比值)显示本发明的化合物在 治疗期间诱导显著的肿瘤退化。
实施例E：药物组合物：片剂
包含5mg剂量的选自实施例1至17和制备例13和14的化合物的1000片 ....5g
小麦淀粉.......................................................20g
玉米淀粉.......................................................20g
乳糖...........................................................30g
硬脂酸镁.......................................................2g
二氧化硅.......................................................1g
羟丙基纤维素...................................................2g

Claims (31)

1.式(I)的化合物以及其与可药用酸或碱的加成盐:
Figure FDA0002622751310000011
其中:
◆A代表基团
Figure FDA0002622751310000012
其中1与氧原子连接并且2与苯环连接，
◆R1代表直链或支链C1-6烷基或卤原子，
◆R2、R4和R5彼此独立地代表氢原子、卤原子或直链或支链C1-6烷基，
◆R3代表-O-C1-6烷基-NR9R9’，
◆R6代表-O-C1-6烷基-R10，
◆R7代表氢原子
◆R8代表苯基，
◆R9和R9’彼此独立地代表直链或支链C1-6烷基，
或者R9和R9’与携带它们的氮原子一起形成由5至7个环成员组成的非芳香族环，所述的环除氮原子外还任选地含有1至3个选自氮的杂原子，应当理解的是，所述的氮任选地被代表氢原子或直链或支链C1-6烷基的基团取代，
◆R10代表-Cy1-Cy2，其中Cy1代表嘧啶基并且Cy2代表苯基，
◆R13代表氢原子，
◆Ra代表氢原子或直链或支链C1-6烷基，
◆Rb代表-O-C(O)-O-C1-8烷基；-O-C(O)-O-环烷基；-O-C(O)-NRcRc’基团，其中Rc和Rc’彼此独立地代表氢原子、直链或支链C1-8烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基，或者Rc和Rc’与携带它们的氮原子一起形成由5至7个环成员组成的非芳香族环，所述的环除氮原子外还任选地含有1至3个选自氧和氮的杂原子；或-O-P(O)(OH)2基团，
◆n是等于1的整数，
应当理解的是:
-“环烷基”是指包含3至10个环成员的任意单环或双环非芳香族碳环基团，
所述苯基任选地被1至4个选自直链或支链C1-6烷基、直链或支链C1-6烷氧基或卤素的基团取代。
2.根据权利要求1的式(I)化合物，其中R4和R5代表氢原子。
3.根据权利要求1的式(I)化合物，其中
Figure FDA0002622751310000021
代表
Figure FDA0002622751310000022
其中R1、R9和R9’如权利要求1中所定义。
4.根据权利要求1的式(I)化合物，其中
Figure FDA0002622751310000031
代表
Figure FDA0002622751310000032
其中R9和R9’如权利要求1中所定义。
5.根据权利要求1的式(I)化合物，其中
Figure FDA0002622751310000033
代表
Figure FDA0002622751310000034
其中R10如权利要求1中所定义。
6.根据权利要求1的式(I)化合物，其中R8代表4-氟苯基。
7.根据权利要求1的式(I)化合物，其中R9和R9’与携带它们的氮原子一起形成4-甲基-哌嗪基。
8.根据权利要求1的式(I)化合物，其中
R10代表
Figure FDA0002622751310000035
其中R14和R15彼此独立地代表氢原子或直链或支链C1-6烷氧基。
9.根据权利要求8的式(I)化合物，其中R15代表氢原子并且R14位于苯基的邻位。
10.根据权利要求1的式(I)化合物，其中Ra代表氢原子或甲基。
11.根据权利要求1的式(I)化合物，其中Ra代表甲基并且Rb代表选自下列的基团：-O-C(O)-O-CH3；-O-C(O)-O-CH2CH3；-O-C(O)-O-CH(CH3)2；-O-C(O)-O-C(CH3)3；-O-C(O)-O-环戊基；-O-C(O)-O-C8H17；-O-C(O)-N(CH3)2；-O-C(O)-N(CH2CH3)2；-O-C(O)-N-吗啉；-O-C(O)-NH-(CH2)2-OCH3；-O-C(O)-N[(CH2)2-OCH3]2；或-O-C(O)-N(CH3)(CH2-C(O)-OCH3)。
12.根据权利要求1的式(I)化合物，其中Ra代表甲基并且Rb代表选自-O-C(O)-O-CH2CH3或-O-C(O)-N(CH3)2的基团。
13.根据权利要求1的化合物，所述化合物是:
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(甲氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(丙-2-基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(叔丁氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(环戊基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(辛基氧基)羰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-吗啉-4-甲酸1-{[(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-{[(2-甲氧基-2-氧代乙基)(甲基)氨基甲酰基]氧基}乙酯；
-(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(膦酰氧基)甲酯；
-(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯；
-(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯。
14.制备根据权利要求1的式(I)化合物的方法，其特征在于将式(II)的化合物用作原料:
Figure FDA0002622751310000061
其中A如权利要求1中关于式(I)所定义并且其中1与氯原子连接并且2与溴原子连接，
将式(II)的化合物与式(III)的化合物进行偶联:
Figure FDA0002622751310000062
其中R6、R7、R13和n如权利要求1中关于式(I)所定义，并且Alk代表直链或支链C1-6烷基，
以生成式(IV)的化合物:
Figure FDA0002622751310000071
其中R6、R7、R13、A和n如权利要求1中关于式(I)所定义并且Alk是直链或支链C1-6烷基，
将式(IV)的化合物进一步与式(V)的化合物进行偶联:
Figure FDA0002622751310000072
其中R1、R2、R3、R4和R5如权利要求1中关于式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、直链或支链C1-6烷基，或者RB1和RB2与携带它们的氧原子形成任选甲基化的环，
以生成式(VI)的化合物:
Figure FDA0002622751310000073
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R13、A和n如权利要求1中关于式(I)所定义并且Alk是直链或支链C1-6烷基，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解生成式(VII)的羧酸:
Figure FDA0002622751310000081
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R13、A和n如权利要求1中关于式(I)所定义，
将其与式(VIII)的化合物进行偶联:
Figure FDA0002622751310000082
其中Ra和Rb如权利要求1中关于式(I)所定义，
以生成式(I)的化合物，任选地根据常规的分离技术纯化式(I)的化合物，如果需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离技术将其分离成其异构体。
15.式(VIIA)的化合物，根据权利要求14的式(VII)化合物的一个特例:
Figure FDA0002622751310000083
其中:
◆R2’、R4’和R5’彼此独立地代表卤原子或直链或支链C1-6烷基，
◆R3’代表-O-C1-6烷基-NR9R9’，
◆R1、R6、R7、R9、R9’、R13、A和n如权利要求1中关于式(I)所定义，以及其与可药用酸或碱的加成盐，
其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
16.根据权利要求15的式(VIIA)化合物，其中R1和R5’相同并且R2’和R4’相同。
17.根据权利要求16的式(VIIA)化合物，所述化合物是(2R)-2-{[5-{3,5-二氯-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸。
18.式(VIIB)的化合物，根据权利要求14的式(VII)化合物的一个特例:
Figure FDA0002622751310000091
其中:
◆R5’代表卤原子或直链或支链C1-6烷基，
◆R1、R3、R6、R7、R13、A和n如权利要求1中关于式(I)所定义，
并且其中R1和R5’相同，
以及其与可药用酸或碱的加成盐，
其用作合成中间体，并且也用作作为促细胞凋亡剂的化合物。
19.根据权利要求18的式(VIIB)的化合物，所述化合物是(2R)-2-{[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸。
20.药物组合物，包含根据权利要求1至13或权利要求15至19任一项的式(I)、(VIIA)或(VIIB)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐，以及一种或多种可药用的赋形剂。
21.根据权利要求20的药物组合物在制备用作促凋亡剂的药物中的用途。
22.根据权利要求20的药物组合物在制备用于治疗癌症和免疫***疾病的药物中的用途。
23.根据权利要求20的药物组合物在制备用于治疗如下疾病的药物中的用途：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、结肠癌、食道癌和肝癌、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、***癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
24.根据权利要求23的用途，其中的恶性血液病是慢性淋巴细胞白血病、原始淋巴细胞白血病或急性髓性白血病。
25.根据权利要求20的药物组合物在制备用于治疗自身免疫病的药物中的用途。
26.根据权利要求1至13或权利要求15至19任一项的式(I)、(VIIA)或(VIIB)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐在制备用于治疗如下疾病的药物中的用途：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、结肠癌、食道癌和肝癌、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、***癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
27.根据权利要求26的用途，其中的恶性血液病是慢性淋巴细胞白血病、原始淋巴细胞白血病或急性髓性白血病。
28.根据权利要求1至13或权利要求15至19任一项的式(I)、(VIIA)或(VIIB)化合物与抗癌药的组合产品，所述抗癌药选自基因毒物、有丝***抑制剂、抗代谢药、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂和抗体。
29.药物组合物，包含权利要求28的组合产品与一种或多种可药用的赋形剂。
30.根据权利要求28的组合产品在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
31.根据权利要求1至13或权利要求15至19任一项的式(I)、(VIIA)或(VIIB)化合物在制备用于治疗需要放疗的癌症的药物中的用途。
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