CN107427514B

CN107427514B - 使用tlr7激动剂和hbv衣壳装配抑制剂的组合治疗

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Publication number: CN107427514B
Application number: CN201680016096.8A
Authority: CN
Inventors: 戴略; 高璐
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2015-03-16
Filing date: 2016-03-15
Publication date: 2021-07-13
Anticipated expiration: 2036-03-15
Also published as: KR20190085185A; CR20170424A; PE20211647A1; CA2979490A1; IL276865A; RU2718917C2; KR102139708B1; IL253493A0; RS60350B1; DK3270915T3; EP3270915B1; JP7195360B2; IL282706A; MX2017011488A; AU2021202122A1; ES2798598T3; NZ733805A; US20180000824A1; IL253493B; SG10201912847QA

Abstract

本发明涉及用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合物和方法。具体而言，本发明涉及包括施用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂用于治疗慢性乙型肝炎患者的组合疗法。

Description

使用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的组合治疗

本发明涉及用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合物和方法。具体而言，本发明涉及包括施用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂组合疗法，其用于治疗慢性乙型肝炎患者。

发明领域

乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是世界范围内严重的公共健康问题，全球有超过2.4亿人长期感染。HBV属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)。进入肝细胞后，其病毒基因组被递送到细胞核，在此通过部分双链病毒基因组cccDNA的DNA修复，形成共价闭合的环状DNA(cccDNA)，作为病毒RNA转录的模板。病毒前基因组RNA与其他两种病毒组分——衣壳蛋白和聚合酶相互作用，形成衣壳颗粒，在此发生病毒DNA复制。HBV具有二十面体核心，其包含240个衣壳(或核心)蛋白质的拷贝。衣壳蛋白的主要生物学功能是作为一种结构蛋白质来使前基因组RNA壳体化，并在细胞质中形成未成熟的衣壳颗粒。此步骤是病毒DNA复制的先决条件。当通过病毒前基因组RNA的逆转录形成近全长的松环DNA时，未成熟的衣壳变成成熟的衣壳。壳体化的基因组的大多数拷贝与细胞脂质和病毒包膜蛋白(S、M和L)有效结合，用于病毒装配和分泌。然而，也产生非感染性颗粒，其数量大大超过感染性病毒体。这些空的包膜颗粒被称为亚病毒颗粒(SVP)。S、M和L包膜蛋白由含有三个不同起始密码子的单个ORF(开放阅读框)表达。所有三种蛋白质在其C-末端共享226aa序列，S-结构域。S-结构域含有HBsAg表位(Lambert,C.&R.Prange.Virol J,2007,4,45)。

许多观察结果表明，几种HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号***和随后的干扰素(IFN)抗病毒活性来抵消初始宿主细胞反应。其中，过量分泌HBV空的亚病毒颗粒可能参与维持在慢性感染患者(CHB)中观察到的免疫耐受状态。HBsAg和其他病毒抗原的持续暴露可导致HBV特异性T细胞缺失或进行性功能障碍(Kondo等人.Journal of Immunology1993,150,4659–4671；Kondo等人.Journal of Medical Virology 2004,74,425–433；Fisicaro等人.Gastroenterology,2010,138,682-93)。此外据报道，HBsAg通过直接相互作用抑制单核细胞、树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞等免疫细胞的功能(Op den Brouw等人.Immunology,2009b,126,280-9；Woltman等人.PLoS One,2011,6,e15324；Shi等人.JViral Hepat.2012,19,e26-33；Kondo等人.ISRN Gasteroenterology,2013,Article ID935295)。

HBsAg定量是慢性乙型肝炎预后和治疗反应的生物标志物。HBsAg损失和血清转化是临床治愈的目标，但在慢性感染患者中很少观察到。目前的治疗，如抑制HBV DNA合成的核苷(酸)类似物不直接影响HBsAg水平。即使延长治疗，核苷(酸)类似物也显示出与天然观察到的那些相当的非常低的HBsAg清除率(Janssen等人.Lancet,2005,365,123-9；Marcellin等人.N.Engl.J.Med.,2004,351,1206-17；Buster等人.Hepatology,2007,46,388-94)。

Toll样受体(TLR)检测广泛的保守的病原体相关分子模式(PAMP)。它们在觉察入侵病原体和随后启动先天免疫反应方面发挥重要作用。人类中有10个已知的TLR家族成员，其是I型跨膜蛋白，其特征为细胞外的富含亮氨酸的结构域和含有保守的Toll/白细胞介素(IL)-1受体(TIR)结构域的胞质尾部。在该家族内，TLR3、TLR7、TLR8和TLR9位于核内体内。TLR7可以通过与特定的小分子配体(即TLR7激动剂)或其天然配体(即单链RNA、ssRNA)结合来活化。在ssRNA与TLR7结合后，其二聚形式的受体被认为经历结构变化，导致随后在其细胞质结构域(包含骨髓分化初级应答基因88(MyD88))发生衔接蛋白的募集。在通过MyD88途径启动受体信号级联之后，激活细胞质转录因子如干扰素调节因子7(IRF-7)和核因子κB(NF-κB)。然后这些转录因子转位到细胞核并启动各种基因例如IFN-α和其它抗病毒细胞因子基因的转录。TLR7主要在浆细胞样细胞还有B细胞上表达。免疫细胞的反应性改变可能有助于在慢性病毒感染期间降低先天免疫反应。因此，激动剂诱导的TLR7的激活可能代表治疗慢性病毒感染的新方法。(D.J Connolly和L.AJ O’Neill,Current Opinion inPharmacology 2012,12:510–518,P.A.Roethle等人,J.Med.Chem.2013,56,7324-7333)。

用口服TLR7激动剂治疗代表了一种提供具有更好的耐受性的更大功效的有希望的解决方案。聚乙二醇修饰的IFN-α(PEG-IFN-α)目前用于治疗慢性HBV，并且是用抗病毒核苷(酸)类似物进行潜在终身治疗的替代方法。在慢性HBV患者的一个亚群中，PEG-IFN-α治疗可以在有限的治疗持续时间后诱导病毒的持续免疫控制。然而，用干扰素治疗实现血清转化的HBV患者的百分比较低(HBeAg阳性患者高达27％)，且该治疗通常耐受性差。此外，功能性治愈(定义为HBsAg损失和血清转化)也很少见于使用PEG-IFN-α和核苷(酸)二者治疗。鉴于这些局限性，迫切需要改进的治疗选择以治疗和诱导慢性HBV的功能性治愈。使用口服小分子TLR7激动剂的治疗是具有提供更大功效和耐受性的潜力的有希望的途径(T.Asselah等人,Clin Liver Dis 2007,11,839–849)。

HBV衣壳蛋白在HBV复制中起重要作用。在基于组织培养的筛选中发现杂芳基二氢嘧啶或HAP，包括命名为Bay 41-4109、Bay 38-7690和Bay 39-5493的化合物(Deres K.等人Science 2003,893)。这些HAP类似物用作合成变构激活剂，并且能够诱导导致核心蛋白质降解的异常衣壳形成。HAP类似物还将核心蛋白从预装配的衣壳重新装配成非衣壳聚合物，推测是通过HAP与衣壳“呼吸”(单个亚基间键的瞬时断裂)期间释放的二聚体的相互作用。将Bay 41-4109施用于HBV感染的转基因小鼠或人源化小鼠模型，并且证明了其具有减少HBV DNA的体内功效(Deres K.等人.Science 2003,893；Brezillon N.等人.PLoS ONE2011,e25096)。还表明用作分子“楔”的双-SEA(一种小分子)干扰正常的衣壳蛋白几何形状和衣壳形成(Zlotnick A.等人.J.Virol.2002,4848-4854)。

现在，HBV感染的临床治愈标准是HBsAg的丧失和/或血清转化。尽管PEG-IFN-α和核苷(酸)可用于HBV患者，但大多数(约90％或大于90％)的治疗患者未能实现这一目标，这主要是因为目前的疗法无法在大多数慢性感染的患者中引发抗HBsAg的中和抗体(抗HBs)的出现，而这是HBV感染的解决的标志。因此，对于在诱导HBsAg丧失和/或血清转化以及促进抗HBs产生方面，具有提高的成功率的疗法，有确实的医疗需要。

发明概述

本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的药物组合物。本文中的“TLR7激动剂”是专利WO2006/066080中公开的式(I)、(II)的化合物或任何一种化合物，特别是，本文的“TLR7激动剂”是乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯；乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮或5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。本文的HBV衣壳装配抑制剂是专利WO2014/037480、WO 2014/184328和WO2015/132276中公开的式(III)的化合物或任何一种化合物，特别是，本文的HBV衣壳装配抑制剂是3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；或(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

附图简述

图1：AAV-HBV小鼠模型中小鼠血清的HBV DNA和HBsAg水平。具有持续的HBV DNA和HBsAg水平的小鼠的结果如图1所示，所述小鼠用介质治疗的显示为菱形，以100mg/kg的化合物1单独治疗的显示为圆形，以12mg/kg的化合物2单独治疗的显示为三角形，用化合物1和化合物2的组合治疗的显示为正方形。通过在作为基线的介质组中归一化它们的水平来计算HBV DNA和HBsAg治疗后的相对减少。在使用组合疗法的小鼠中观察到了，在减少HBsAg方面的协同的抗病毒作用，更重要的是，组合疗法后2周的停止治疗期间持续存在HBV DNA和HBsAg的减少。LLQ：定量下限。

图2：化合物2A-2a的X射线晶体结构。

图3：化合物3J的X射线晶体结构。

图4：用介质、化合物1(100mg/kg)、化合物4(20mg/kg)或化合物1加化合物4的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV 4周后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图5：用介质、化合物3(30mg/kg)、化合物4(20mg/kg)或化合物3加化合物4的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV 4周后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图6：用介质、化合物1(100mg/kg)、化合物5(12mg/kg)或化合物1加化合物5的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV 4周后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图7：如图4、图5和图6所述进行单一或组合疗法的每只小鼠血清中抗HBs抗体(针对HBsAg的抗体)的水平。在停止治疗后第24天收集血清样品，并通过抗HBs CLIA测定抗HBs。LLQ：定量下限。

图8：用介质、化合物8(300mg/kg)、化合物4(20mg/kg)或化合物8加化合物4的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV至少38天后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图9：用介质、化合物8(300mg/kg)、化合物10(20mg/kg)或化合物8加化合物10的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV至少38天后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图10：用介质、化合物1(100mg/kg)、化合物10(20mg/kg)或化合物1加化合物10的组合治疗的感染AAV-HBV的小鼠中的HBV DNA和HBsAg。在小鼠感染AAV-HBV至少38天后开始治疗。给予治疗6周，并再进行6周的停止治疗期监测。分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA在指定的时间点测定小鼠血清中的HBV DNA和HBsAg。结果以平均值±SEM表示。LLQ：定量下限。

图11：按照图8、9和10所述进行单一或组合治疗的每只小鼠血清中抗HBs抗体(针对HBsAg的抗体)的水平。在停止治疗后第31天收集血清样品，并通过抗HBs CLIA测定抗HBs。LLQ：定量下限。

发明详述

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。

如本文所用，术语“C_1-6烷基”是指1至6个碳原子的一价直链或支链饱和烃基。在具体的实施方案中，C_1-6烷基具有1至6个碳原子，在更具体的实施方案中，具有1至4个碳原子。C_1-6烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。

如本文所用，术语“卤代”或“卤素”在本文中可互换使用，指氟、氯、溴或碘。

如本文所用，术语“C_1-6烷氧基”是指C_1-6烷基-O-的基团，其中“C_1-6烷基”如上所定义；例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基等。具体的“C_1-6烷氧基”是甲氧基和乙氧基，更具体是甲氧基。

如本文所用，术语“C_3-7环烷基”是指含有3至7个碳原子的饱和碳环，特别是3至6个碳原子，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。具体的“C_3-7环烷基”基团是环丙基、环戊基和环己基。

如本文所用，术语“C_2-6链烯基”是指含有2至6个碳原子的不饱和的、直链或支链的链烯基，特别是2至4个碳原子，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基等。具体的“C_2-6烯基”是烯丙基。

如本文所用，术语“C_2-6炔基”是指含有2至6个碳原子的不饱和的直链或支链炔基，特别是2至4个碳原子，例如乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、丁炔基等。具体的“C_2-6炔基”基团是乙炔基、1-丙炔基和炔丙基。

如本文所用，术语“杂环”环或“杂环基”是指含有3至10个环原子的饱和或部分不饱和的单环或双环的环，其可以包含1、2或3个选自氮，氧和/或硫的原子。包含特别是3至7个环原子的单环杂环基环的实例包括但不限于吖丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁基、哌啶基、哌嗪基、氮杂

基、二氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吗啉基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基和硫代吗啉基。双环杂环基可以是双环稠环或双环桥环。双环杂环基的实例是8-氮杂-二环[3.2.1]辛基、奎宁环基、8-氧杂-3-氮杂-二环[3.2.1]辛基、9-氮杂-二环[3.3.1]壬基、3-氧杂9-氮杂-二环[3.3.1]壬基、3-硫杂-9-氮杂-二环[3.3.1]壬基或二氟氮杂二环[3.2.1]辛基。单环和双环杂环基可进一步被卤素、C_1-6烷基、氰基、羧基、羧基C_1-6烷基取代。

术语“杂环氨基”是指具有在杂环上的氮原子的氨基，其中“杂环”环如上所定义。

如本文所用，术语“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心的立体异构体，并且其分子不是彼此的镜像。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质、活性和反应性。

本文所用的术语“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指不是生物学或其他方面不希望的盐。药学上可接受的盐包括酸和碱加成盐。

如本文所用，术语“前药”是指化合物的形式或衍生物，其在个体施用后在体内例如通过体液或酶被代谢成为化合物的药理学活性形式，以产生期望的药理作用。前药在例如Richard B.Silverman,Academic Press,San Diego的the Organic Chemistry of DrugDesign and Drug Action,2004,第8章Prodrugs and Drug Delivery Systems,第497-558页中描述。

术语“药学上可接受的酸加成盐”是指与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸和选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、碳环和磺酸类有机酸的有机酸、如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、门冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸形成的那些药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的碱加成盐”是指与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺、包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂、如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、trimethamine、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂的盐。

含有一个或几个手性中心的通式(I)的化合物可以作为外消旋体、非对映异构体混合物或光学活性的单个异构体存在。外消旋体可以根据已知方法分离成对映异构体。特别是，通过与旋光的酸如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应由外消旋混合物形成可以通过结晶法分离的非对映异构体盐。

如本文所用，“combo”或“组合”是指组合或组合产品。

如本文所用，“RT-PCR”是指逆转录聚合酶链反应。

如本文所用，“CLIA”是指化学发光免疫测定。

如本文所用，“AAV”是指腺相关病毒。

如本文所用，“AAV-HBV”是指携带1.3拷贝的包装在AAV衣壳中的HBV基因组的重组病毒。通过小鼠尾静脉注射AAV-HBV建立持续性HBV感染小鼠模型。在该小鼠模型中，活性HBV复制导致持续的HBV病毒标记(例如HBV DNA、HBsAg，HBeAg等)。

如本文所用，“HBsAg”是指乙型肝炎表面抗原。

如本文所用，“HBeAg”是指乙型肝炎e抗原。

如本文所用，“抗HBs”是指抗HBsAg的抗体。

如本文所用，“HBV特异性引物”是指用作HBV DNA区域的特异性扩增的起点和终点的一对单链核酸。

如本文所用，“TLR7”是指任何物种来源的(例如人、鼠、土拨鼠等)的Toll样受体7。

如本文所用，“TLR7激动剂”是指作为TLR7激动剂的化合物。除非另有说明，TLR7激动剂可以包括任何药学上可接受的形式的化合物、包括任何异构体(例如非对映异构体或对映异构体)、盐、溶剂化物、多晶型物等。特定化合物的TLR激动可以以任何合适的方式测定。例如，用于检测测试化合物的TLR激动作用的试验描述于例如2002年12月11日提交的美国临时专利申请系列号60/432,650，且适用于这些试验的重组细胞系描述于例如2002年12月11日提交的美国临时专利申请系列号60/432,651。

本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的药物组合物。

在本发明的一个实施方案中，“TLR7激动剂”是式(I)的化合物：

其中

R¹是羟基、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基-O-、C_1-6烷基-S-、叠氮基、氰基、C_2-6链烯基、C_1-6烷基磺酰氯-NH-、(C_1-6烷基)₂N-、C_1-6烷基羰基-NH-或杂环氨基；

R²是氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_3-7环烷基、C_2-6炔基、C_2-6链烯基、苄基和噻吩基；

R³是氢或C_1-6烷基羰基；

或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；

在本发明的另一个实施方案中，“TLR7激动剂”是式(II)的化合物:

其中

R⁴和R⁵独立地选自氢、C_2-6链烯基和C_1-6烷基；

R⁶和R⁷独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、C_3-7环烷基C_2-6炔基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基和2-噻吩基；

R⁸是氢或C_1-6烷基羰基；

或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

更特别是，根据本发明的TLR7激动剂涉及乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯；乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；或乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯；或其药学上可接受的盐，对映异构体或非对映异构体。在另一个实施方案中，“TLR7激动剂”还涉及专利WO2006/066080中公开的任何一个化合物。在施用后，专利WO2006/066080中的式(I)或式(II)的化合物或者专利WO2006/066080中的化合物被代谢为其活性形式，其为有效的TLR7激动剂。

如本文所用，“乙型肝炎病毒”或“HBV”是指具有大约3,200个碱基对的小双链DNA基因组和肝细胞趋向性的嗜肝DNA病毒科的成员。“HBV”包括感染各种哺乳动物(例如人类，非人类灵长类动物等)和禽类(鸭等)宿主中的任何一种的乙型肝炎病毒。“HBV”包括任何已知的HBV基因型，例如血清型A、B、C、D、E、F和G；任何HBV血清型或HBV亚型；任何HBV分离株；HBV变体，例如HBeAg阴性变体、耐药性HBV变体(例如拉米夫定抗性突变型；阿德福韦抗性突变型；替诺福韦抗性突变型；恩替卡韦抗性突变型等)；等等。

如本文所用，“HBV衣壳装配抑制剂”是指抑制和/或破坏和/或加速和/或阻碍和/或延缓和/或减少和/或修饰正常的HBV衣壳装配(例如，在成熟期间)和/或正常的衣壳分解(例如，在感染期间)和/或扰乱衣壳稳定性，从而诱导异常的衣壳形态和功能。

在本发明的一个实施方案中，HBV衣壳装配抑制剂是式(III)的化合物：

其中

R⁹是C_1-6烷基；

R¹⁰是苯基，其被卤素或C_1-6烷基取代一次或两次或三次；

R¹¹是氢或C_1-6烷基；

R¹²是单环、双环稠合或双环桥联杂环基；

或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

更具体而言，根据本发明的HBV衣壳装配抑制剂涉及3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸(在专利WO2014/184328中公开)；或(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。在另一个实施方案中，“HBV衣壳装配抑制剂”更特别是专利WO2015/132276、WO 2014/184328和WO2014/037480中公开的任何化合物。

在本发明的一个实施方案中，药物组合物包含TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂，其中TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂独立地选自表1:(化合物2和4在专利WO2015/132276中公开；化合物5和6在专利WO2014/184328中公开；化合物7、8和9在专利WO2006/066080中公开；化合物10在专利WO2014/037480中公开)。

表1.TLR7激动剂和HBV衣壳抑制剂的列表

更具体而言，本发明涉及包含TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的药物组合物，其选自以下组合中的任一种：

化合物1和化合物2；化合物1和化合物4；

化合物1和化合物5；化合物1和化合物6；

化合物1和化合物10；化合物3和化合物2；

化合物3和化合物4；化合物3和化合物5；

化合物3和化合物6；化合物3和化合物10；

化合物7和化合物2；化合物7和化合物4；

化合物7和化合物5；化合物7和化合物6；

化合物7和化合物10；化合物8和化合物2；

化合物8和化合物4；化合物8和化合物5；

化合物8和化合物6；化合物8和化合物10；

化合物9和化合物2；化合物9和化合物4；

化合物9和化合物5；化合物9和化合物6；

化合物9和化合物10；化合物11和化合物2；

化合物11和化合物4；化合物11和化合物5；

化合物11和化合物6；和化合物11和化合物10。

上述组合中的化合物1至11可以被其相应的药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体代替，这是本发明的另一方面。

上述组合的化合物1可以被其相应的单、双或三前药替代，如：

及其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

在本发明的一个实施方案中，药物组合物由在药学上可接受的载体中的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂组成。更具体而言，所述组合物由在药学上可接受的载体中的以下成分组成:

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；或

5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸。

在本发明的另一个实施方案中，药物组合物由在药学上可接受的载体中的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂组成，更具体而言，所述组合物由在药学上可接受的载体中的以下成分组成:

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯和2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯和2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；或

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸。

在本发明的另一个实施方案中，其他TLR7激动剂或HBV衣壳装配抑制剂也可用于药物组合物，包括小分子或大分子。其他TLR7激动剂的实例包括但不限于咪喹莫特、瑞喹莫德、PF-4878691、SM-276001、ANA975、ANA773和GS9620。其他HBV衣壳装配抑制剂的实例包括但不限于Bay 41-4109、Bay 38-7690、Bay 39-5493、GLS4、AT-61和AT-130。

在本发明的另一个实施方案中，药物组合物可另外包含一种或多种其它抗病毒剂，其包括但不限于拉米夫定、阿德福韦、替诺福韦、替比夫定和恩替卡韦。

TLR7激动剂和/或HBV衣壳装配抑制剂的通常剂量可以在制造商推荐的的范围内，以及当在动物模型中由体外反应指示时，可以减少高达约一个数量级的浓度或量。因此，实际剂量将取决于医师的判断、患者的状况以及基于适当动物模型的体外反应性的治疗方法的有效性。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于在所述药物中使用了TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于，将TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂在相同的制剂中或以不同的制剂共同施用。

用于本发明的目的，“共同施用”是指TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂作为两种活性剂分开或一起的任何施用，其中将两种活性剂，作为旨在获得组合疗法的益处的、适合的给药方案的一部分，来施用。因此，这两种活性剂可以作为相同药物组合物的一部分或者在分开的各药物组合物中施用。此外，这两种活性剂可以同时或依次施用。

TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂可以与药学上可接受的惰性载体一起以片剂、胶囊、锭剂、***片、硬糖、散剂、喷雾剂、乳膏剂、油膏剂、栓剂、胶冻剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、酏剂、糖浆剂等形式施用。所述剂型的施用可以以单次或多次剂量进行。载体包括填充剂的固体稀释剂、无菌水性介质和各种无毒有机溶剂。所述剂型的施用可以通过但不限于口服施用、胃肠外施用、兽医施用来进行。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂旨在通过相同的途径或不同途径施用于个体。

本发明的另一个实施方案涉及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的制备方法，其特征在于TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂旨在通过胃肠外或口服施用于个体。

本发明的另一个实施方案涉及制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂向个体的施用是同时或依次的。在本发明的任何方法中，活性剂的同时施用可以通过同时分开或依次施用活性剂，或一起作为固定组合施用活性剂来进行。此外，在本发明的任何方法中，分别或依次施用活性剂可以是任何顺序。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于其TLR7激动剂是式(I)或式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。特别是，所述TLR7激动剂是乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯；乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；或乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于其HBV衣壳装配抑制剂是式(III)的化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。特别是，所述HBV衣壳装配抑制剂

3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；

2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；

或(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；

或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于所述药物还包含一种或多种其它抗病毒剂，其包括但不限于拉米夫定、阿德福韦、替诺福韦、替比夫定和恩替卡韦。

本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其中药物中使用的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂是在药学上可接受的载体中的：

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；或

5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮和(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸。

本发明的另一个实施方案涉及包含含有TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的容器的药盒，所述药盒还可包含无菌稀释剂。

本发明的另一个实施方案涉及所述药盒，其中所述药盒还可包含药品说明书，其包含指导使用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的组合治疗作为治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法的印刷说明书。

本发明的另一个实施方案涉及所述试药盒，其中TLR7激动剂是

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯；乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；或乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和/或HBV衣壳装配抑制剂是3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；或(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

本发明的另一个实施方案涉及所述药盒，其中所述容器中使用的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂是在药学上可接受的载体中的:

本发明的另一个实施方案涉及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，其包括向个体施用有效的第一个量的TLR7激动剂或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和第二个量的HBV衣壳装配抑制剂或其药学上可接受的盐，对映异构体或非对映异构体；其中所述TLR7激动剂是乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯；乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(2’-O-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；5-氨基-3-(3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H,6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；或乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和/或所述HBV衣壳装配抑制剂是3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；2-[(1R,3S,5S)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；2-[(1S,3R,5R)-8-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-6,6-二氟-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]乙酸；或(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。

本发明的另一个实施方案涉及上述药物组合物作为抗病毒药物的用途，特别是作为用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的用途。

本发明的另一个实施方案涉及TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂在制备上述作为抗病毒药物的药物组合物中的用途，特别在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

实施例

通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。

实施例1

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯(化合物1)

化合物1通过以下方案制备:

4-甲基苯磺酸[(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-羟基-乙基]酯的制备

在0℃向(1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]乙-1,2-二醇(化合物1A，100g，490mmol)在干燥的吡啶(1000mL)中的溶液中加入对甲苯磺酰氯(139g，735mmol)。在室温搅拌12小时后，将所得溶液用水(100mL)淬灭，并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:3的在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到130g4-甲基苯磺酸[(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-羟基-乙基]酯(化合物1B)，为微黄色油状物。

化合物1B:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:7.82(d，J＝8.00Hz，2H)，7.38(d，J＝8.00Hz，2H)，5.78(d，J＝3.76Hz，1H)，4.75(t，J＝4.00Hz，1H)，4.20-4.12(m，2H)，4.03-3.97(m，2H)，2.48(s，3H)，2.39(d，J＝3.51Hz，1H)，2.08-2.15(m，1H)，1.75-1.80(m，1H)，1.51(s，3H)，1.33(s，3H)。

(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-5-[(2R)-环氧乙烷-2-基]-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯的制备

在N₂气氛下向在-70℃冷却的4-甲基苯磺酸[(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]-2-羟基-乙基]酯(化合物1B，100g，280mmol)在无水THF(1500mL)中的溶液中加入双(三甲基硅烷基)氨基钾(340mL，340mmol，1M，在THF中)。在-70℃下搅拌1小时后，将反应混合物倒入饱和的NH₄Cl溶液中。将有机层分离，并将水相用EtOAc萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:3在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到40.5g(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-5-[(2R)-环氧乙烷-2-基]-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯(化合物1C)，为微黄色油状物。

化合物1C:¹H NMR:(400MHz，CDCl₃)δppm:5.87(d，J＝3.76Hz，1H)，4.77(t，J＝4.00，1H)，4.20-4.28(m，1H)，3.14-3.20(m，1H)，2.83-2.88(m，1H)，2.63(dd，J＝5.00，2.80Hz，1H)，2.09(dd，J＝12.00，4.00Hz，1H)，1.69-1.79(m，1H)，1.52(s，3H)，1.34(s，3H)。

(1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇的制备

在-70℃向在N₂气氛下的CuI(19.3g，107mmol)在干燥的THF(2000mL)中的混悬液中加入溴化甲基镁(3M，在***中，537mL，1.61mol)。在相同温度下搅拌1小时后，将(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-5-[(2R)-环氧乙烷-2-基]-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯的溶液(化合物1C，100g，537mmol，溶于200mL无水THF中)滴加至该反应混合液中。在-70℃再搅拌2小时后，将该反应混合物倾入饱和的NH₄Cl溶液中。将有机层分离，并将水相用EtOAc萃取两次。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:3在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到82g(1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇(化合物1D)，为微黄色固体。

化合物1D:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:5.83(d，J＝3.76Hz，1H)，4.81-4.73(m，1H)，4.26-4.19(m，1H)，3.91-3.82(m，1H)，2.08-2.02(m，1H)，1.93-1.89(m，1H)，1.54(s，3H)，1.49-1.39(m，2H)，1.34(s，3H)，1.02(t，J＝7.53Hz，3H)。

4-硝基苯甲酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯的制备

在0℃在N₂下向(1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇(化合物1D，50g，245mmol)、三苯基膦(195g，743mmol)、4-硝基苯甲酸(124g，743mmol)在THF(1200mL)中的搅拌的溶液中滴加偶氮二甲酸二乙酯(130g，743mmol)。在18℃搅拌10小时后，通过加入饱和的NaHCO₃溶液将该混合物淬灭，并用EtOAc萃取。将有机层合并，经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:3在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到61g 4-硝基苯甲酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯(化合物1E)，为微黄色固体。

化合物1E:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:8.34-8.22(m，4H)，5.85(d，J＝3.76Hz，1H)，5.23-5.17(m，1H)，4.76(t，J＝4.27Hz，1H)，4.48-4.39(m，1H)，2.12(dd，J＝13.30，4.52Hz，1H)，1.88-1.78(m，2H)，1.71-1.62(m，1H)，1.55(s，3H)，1.34(s，3H)，1.01(t，J＝7.40Hz，3H)。

(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇的制备

向4-硝基苯甲酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯(化合物1E，100g，285mmol)在甲醇(1200mL)中的溶液中加入K₂CO₃(78.7g，570mmol)。在室温搅拌10分钟后，将得到的混合物过滤。将滤液在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:8在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到54.7g(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇(化合物1F)，为微黄色固体。

化合物1F:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:5.81(d，J＝3.64Hz，1H)，4.75(t，J＝4.20Hz，1H)，4.18-4.11(m，1H)，3.49-3.40(m，1H)，2.07-2.00(m，2H)，1.84-1.75(m，1H)，1.59-1.47(m，5H)，1.32(s，3H)，1.01(t，J＝7.40Hz，3H)。

乙酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯的制备

向(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙-1-醇(化合物1F,13.5g，67mmol)、TEA(81g，804mmol)、DMAP(1.6g，13mmol)在无水DCM(150mL)中的搅拌的溶液中加入乙酸酐(62g，603mmol)。在22℃搅拌10小时后，将该反应用饱和的NaHCO₃溶液淬灭。将有机层分离，并将水相用EtOAc萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥,，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:8在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到13g乙酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯(化合物1G)，为无色油状物。

化合物1G:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:5.83(d，J＝3.76Hz，1H)，4.92(dt，J＝7.97，5.18Hz，1H)，4.74(t，J＝4.00Hz，1H)，4.35-4.27(m，1H)，2.12(s，3H)，2.08-1.99(m，1H)，1.74-1.56(m，3H)，1.53(s，3H)，1.34(s，3H)，0.95(t，J＝7.40Hz，3H)。

乙酸[(3R,5S)-2-乙酰氧基-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]四氢呋喃-3-基]酯的制备

在0℃向乙酸[(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氢呋喃并[2,3-d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基]丙基]酯(化合物1G、4.8g，20mmol)、乙酸(12.2g，200mmol)和乙酸酐(10.2g，100mmol)在无水DCM(100mL)中的溶液中加入浓H₂SO₄(0.5mL)。在22℃搅拌3小时后，通过加入饱和的NaHCO₃溶液将该反应淬灭。将有机层分离，并将水相用EtOAc萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤,，并在真空下浓缩。将残余物将硅胶柱纯化(用1:8在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到2.3g乙酸[(3R,5S)-2-乙酰氧基-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]四氢呋喃-3-基]酯(化合物1H)，为无色油状物。

化合物1H:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:6.12(s，1H)，5.19(d，J＝4.52Hz，1H)，4.83-4.91(m，1H)，4.34-4.44(m，1H)，2.09-2.19(m，9H)，1.51-1.74(m，4H)，0.94(t，J＝7.40Hz，3H)。

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯的制备

向5-氨基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(3.5g，20.8mmol)在二甲苯(160mL)中的混悬液中加入BSA(21.2g，104mmol)。将该反应混合物在70℃在氩气下搅拌1小时，形成澄清的溶液。在一些二甲苯和多余的BSA蒸发后，在0℃依次加入乙酸[(3R,5S)-2-乙酰氧基-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]四氢呋喃-3-基]酯(化合物1H，3.0g，10.4mmol)和TMSOTf(2.6g，11.6mmol)。在65℃搅拌下加热2小时后，将该反应用水(30mL)淬灭，用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物将硅胶柱纯化(用1:10至1:1在石油醚中的EtOAc洗脱)，得到2.0g乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯(化合物1I)，为白色固体。

化合物1I:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:8.15(s，1H)，6.04(d，J＝1.51Hz，1H)，5.80(d，J＝7.03Hz，1H)，5.27(br.s.，2H)，4.98-5.04(m，1H)，4.32-4.39(m，1H)，2.63-2.77(m，1H)，2.13(s，3H)，2.09(s，3H)，2.00-2.07(m，1H)，1.61-1.75(m，2H)，0.94(t，J＝7.40Hz，3H)。

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯的制备

在室温将乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯(化合物1I，3.2g，8.0mmol)和K₂CO₃(2.2g，16.0mmol)混悬于无水乙醇(85mL)中。在N₂气氛下滴加甲醇(85mL)。添加后，将该混合物在室温搅拌10分钟(通过TLC监测)。反应后，将该混合物倾入饱和的NH₄Cl中，用EA(150mL)萃取4次。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，在真空下浓缩。将残余物将硅胶柱纯化(用1:100至1:70在DCM中的MeOH洗脱)，得到粗制的产物，将其经快速柱进一步纯化(用乙腈和水洗脱)，得到1.64g乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯(化合物1)，为白色粉末。

化合物1:¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δppm:8.19(s，1H)，6.02-6.05(m，1H)，4.94-5.00(m，2H)，4.33-4.40(m，1H)，2.58-2.68(m，1H)，2.03(s，3H)，1.86-1.96(m，1H)，1.56-1.77(m，2H)，0.93(t，J＝7.40Hz，3H)。MS实测值(ESI^-)[(M+H)⁺]:355.0。

实施例2

3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸

化合物2通过以下流程制备：

向(4R)-6-(溴甲基)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A，0.073g，0.16mmol)和3-[(8aS)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸(化合物2B，粗品，0.25mmol)在1,2-二氯乙烷(5mL)中的搅拌的溶液中滴加DIPEA(0.078mL，0.45mmol)。将该反应混合物在室温搅拌直至化合物2A消失。然后将该混合物用EtOAc(50mL)稀释，并依次用饱和的NH₄Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层分离，并经Na₂SO₄干燥。将溶剂在真空下除去，并将粗制的产物经制备型-HPLC纯化，得到3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸(化合物2)，为淡黄色固体(12mg)。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)ppm 7.92-8.02(m，1H)，7.70-7.80(m，1H)，7.21-7.36(m，2H)，7.10-7.21(m，1H)，6.19-6.28(m，1H)，3.99-4.14(m，3H)，3.81-3.96(m，3H)，3.47-3.56(m，1H)，3.38-3.44(m，1H)，3.27-3.32(m，1H)，3.15-3.25(m，1H)，3.07-3.14(m，1H)，2.79-2.96(m，2H)，2.30-2.41(m，1H)，2.13-2.23(m，1H)，1.20(d，J＝2.76Hz，6H)，1.13(m，3H)。MS:计算值619(M+H)⁺，测量值619(M+H)⁺。

(4R)-6-(溴甲基)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A)的制备:

噻唑-2-甲脒盐酸盐(化合物2A-1)的制备:

向噻唑-2-甲腈(1.5g，14mmol)在5mL干燥MeOH中的搅拌的溶液中滴加甲醇钠(0.74g，14mmol)在10mL干燥甲醇中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌直到原料消失。然后一次加入氯化铵(1.5g，28mmol)，并将该反应混合物搅拌过夜。通过过滤除去未溶解的物质，并将滤液浓缩，得到噻唑-2-甲脒盐酸盐(化合物2A-1，2.1g)，为灰色固体，将其未经进一步纯化地直接用于下一个步骤。MS:计算值128(M+H)⁺，测量值128(M+H)⁺。

4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2)的制备:

向噻唑-2-甲脒盐酸盐(1.3g，10mmol)、乙酰乙酸乙酯(1.3g，10mmol)和2-氯-3-氟苯甲醛(1.6g，10mmol)在三氟乙醇(30mL)中的搅拌的溶液中加入乙酸钾(2.0g，20mmol)。将该反应混合物回流16小时。将其冷却至室温后，将该反应混合物浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯中，然后用盐水洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥。将溶剂在真空下除去，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚:1/4至1/2)，得到4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2，2.8g)，为黄色固体。MS:计算值(M+H)⁺380，测量值(M+H)⁺380。

(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2a)的制备:

将外消旋化合物2A-2在SFC(SFC-Multigram；IC:5×250mm，5μ)用85％超临界CO₂/15％ EtOH的混合溶剂以100mL/min的速度洗脱进行手性分离，得到两个对映异构体，(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2a，较快洗脱)和(4S)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2b，较慢洗脱)。通过X-射线衍射研究测定所需(-)-对映异构体化合物2A-2a的绝对构型([α]_D ²⁰-46.6(c 0.28，MeOH))(图2)。

向(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-6-甲基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A-2a，0.37g，1.0mmol)在CCl₄(5mL)中的搅拌的溶液中分批加入NBS(0.20g，1.1mmol)。将该反应混合物在室温搅拌1小时后，在真空下除去溶剂，并将残余物经硅胶柱色谱纯化，得到(4R)-6-(溴甲基)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A，0.35g)，为黄色固体。MS:计算值459(M+H)⁺，测量值459(M+H)⁺。

3-[(8aS)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸(化合物2B)的制备:

(2S)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-1)的制备:

在0℃向(3S)-3-(羟基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(CAS编号:314741-40-7，Bepharm；其合成请参见:Gao H.，Renslo A.R.J.Org.Chem.2007，72，8591-8592)(6g，27.8mmol)在饱和的NaHCO₃(45mL)和EtOAc(45mL)中的搅拌的溶液中滴加氯甲酸苄酯(7.1g，41.7mmol)。然后将该反应混合物在室温搅拌15小时。将该反应混合物用EtOAc(60mL)稀释。将有机层分离，并将水层用EtOAc萃取(35mL)。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥。将溶剂在真空下除去，得到粗制的产物，将其经硅胶柱色谱纯化(石油醚:EtOAc＝10:1至1:1)，得到(2S)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-1，6.7g)。MS:计算值351(M+H)⁺，测量值351(M+H)⁺。

(2S)-2-甲酰基哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-2)的制备:

在-78℃向草酰氯(3.64g，28.6mmol)在无水二氯甲烷(80mL)中的搅拌的溶液中滴加二甲基亚砜(4.47g，57.3mmol)。10分钟后，滴加(2S)-2-(羟基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-1，6.7g，19.1mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液。在-78℃将该混合物搅拌30分钟后，加入N,N-二异丙基乙胺(14.78g，114.6mmol)，并将该反应混合物搅拌30分钟。历经30分钟将该反应混合物缓慢温至0℃后，将其用二氯甲烷(80mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(10mL)、盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥。过滤后，将该混合物在真空下浓缩，得到粗制的产物(2S)-2-甲酰基哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-2，7.0g)。MS:计算值349(M+H)⁺，测量值349(M+H)⁺。

(2R)-2-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-3)的制备:

在室温向3-氨基-2,2-二甲基-丙酸乙酯盐酸盐(3.4g，18.6mmol)在无水DCM(100mL)中的搅拌的溶液中加入DIPEA(2.6g，27.3mmol)。然后在0℃加入(2S)-2-甲酰基哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-2，粗品，7.0g，20mmol)，随后加入NaBH(OAc)₃(6.3g，29.8mmol)和AcOH(1.5mL)。将该反应混合物在室温搅拌16小时。加入水(100mL)，并将该混合物用DCM萃取(100mL)。将有机层干燥，并在真空下浓缩，得到(2R)-2-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯的粗制产物(化合物2B-3，7.3g)。MS:计算值478(M+H)⁺，测量值478(M+H)⁺。

(3R)-3-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(化合物2B-4)的制备:

向(2R)-2-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1,4-二甲酸O1-苄基酯O4-叔丁基酯(化合物2B-3，粗品，3.3g，6.9mmol)在EtOH(100mL)中的溶液中加入10％钯碳(1g)。然后在氢气氛下(50Psi)将该混合物在50℃搅拌3小时。将该反应混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到(3R)-3-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(化合物2B-4，1.8g)。MS:计算值344(M+H)⁺，测量值344(M+H)⁺。

(8aR)-2-(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(化合物2B-5)的制备:

在0℃向(3R)-3-[[(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)氨基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(化合物2B-4，1.8g，5.2mmol)在无水二氯甲烷(60mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(3.4g，26.2mmol)。然后在0℃加入三光气(783mg，2.6mmol)，并将该混合物在10-15℃搅拌16小时。加入水(50mL)，并将该混合物用二氯甲烷萃取(60mL)。将有机层经Na₂SO₄干燥，并在真空下除去溶剂，得到粗制的产物。将粗制的产物经硅胶柱色谱纯化(石油醚:EtOAc＝5:1至1:1)，得到(8aR)-2-(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(化合物2B-5，1.3g)。MS:计算值370(M+H)⁺，测量值370(M+H)⁺。

在室温向(8aR)-2-(3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代-丙基)-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(化合物2B-5，94mg，0.25mmol)在THF(3mL)中的搅拌的溶液中加入LiOH·H₂O(84mg，2.0mmol)在H₂O(1mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌过夜后，在0℃用1N HCl将其酸化至PH 3～4。然后将该混合物在真空下浓缩，并用甲苯共沸干燥，得到粗制的酸，将其溶于二氯甲烷(2mL)中，并在室温用三氟乙酸(2mL)处理。将该反应混合物在室温搅拌1小时后，在真空下除去溶剂，得到3-[(8aS)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸(化合物2B)，将其直接使用。MS:计算值242(M+H)⁺，测量值242(M+H)⁺。

实施例3

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯(化合物3)

化合物3通过以下流程制备：

5-羟基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸的制备

向1,4-二噻烷-2,5-二醇(化合物3A，150g，0.98mol)甲基叔丁基醚(500mL)和环己烷(150mL)中的搅拌的溶液中加入乙醛酸(180g，1.96mol)。将得到的反应混合物在80℃在Dean-Stark条件下搅拌16小时。将得到的溶液在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:7的乙酸乙酯:石油醚至100％乙酸乙酯洗脱)，得到220g粗制的5-羟基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物3B),，将其未经进一步纯化地直接用于下一个步骤。

反式-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸的制备

向5-羟基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物3B，220g，1.5mol)在HOAc(1.5L)中的溶液中加入浓硫酸(1mL)和乙酸酐(50g，0.5mol)。在室温搅拌16小时后，将得到的反应混合物用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层合并，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:7乙酸乙酯:石油醚洗脱)，得到粗制产物，将其从甲苯中重结晶，得到10g反式-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物3C，反式)。(对于合成，还请参阅:J.Org.Chem.1995，60，2621-2623)。

化合物3C反式:¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm:13.26(br，1H)，6.66(d，J＝4.0Hz，1H)，5.66(s，1H)，3.30-3.37(m，1H)，3.19-3.25(m，1H)，2.04(s，3H)。

(2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯的制备

在0℃将二环己基碳二亚胺(12g，57mmol)在DCM(50mL)中的溶液加入含反式-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物3C反式，10g，52mmol)、L-(-)-甲醇(8.9g，57mmol)和DMAP(0.6g，5.2mmol)在DCM(100mL)中的溶液的圆底烧瓶中。将该反应混合物在室温搅拌16小时后，加入甲醇(2mL)和冰醋酸(2mL)。将该反应混合物再搅拌10分钟，然后用己烷(250mL)稀释，通过celite过滤，并将滤液浓缩，得到粗制产物。(J.Org.Chem.1995，60，2621-2623)。将粗制的产物再溶于己烷(250mL)中，过滤，并将滤液在真空下浓缩。将残余物经超临界流体色谱(SFC)纯化，得到3.2g(2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯(化合物3D)，非对映异构体过量为85％，为无色油状物。化合物3D的非对映异构体过量值通过使用手性柱(CHIRALPAK IA-3ODH(4.6mm×250mm，5μm))的HPLC(Agilent 1260HPLC)分析获得。手性分析的流动相是在20:80的乙腈:MeOH。

化合物3D:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:6.81(d，J＝4.0Hz，1H)，5.63(s，1H)，4.76(dt，J＝10.9，4.5Hz，1H)，3.44(dd，J＝11.7，4.1Hz，1H)，3.17(d，J＝11.8Hz，1H)，2.11(s，3H)，2.00(d，J＝12.0Hz，1H)，1.85(dt，J＝6.9，2.5Hz，1H)，1.69(d，J＝11.0Hz，2H)，1.55-1.26(m，3H)，1.11-1.00(m，2H)，0.91(dd，J＝6.8，9.8Hz，6H)，0.76(d，J＝7.0Hz，3H)。

(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯的制备

将5-氨基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(6.0g，36mmol)和BSA(24.0g，118mmol)在DCE(250mL)中的混悬液在85℃加热1小时。将该反应混合物冷却至0℃，向上述混合物中(2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯(化合物3D，9.0g，27mmol)在DCE(10mL)加入中的溶液，随后滴加TMSI(14g，70mmol)。将该反应混合物在60℃搅拌5小时，通过NaHCO₃水溶液淬灭，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并浓缩，得到粗制的产物，为油状物，将其经硅胶柱色谱纯化(用1:100至1:50的甲醇:二氯甲烷洗脱)，得到7.7g的两种异构体的混合物，将其进一步通过制备型HPLC纯化并分离，得到所需的2.8gβ异构体(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯(化合物3E)，为白色固体。通过NOESY测定化合物3E的构型。

化合物3E:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:8.17(s，1H)，6.44(m，1H)，5.51(s，1H)，5.12(bs，2H)，4.78(m，1H)，4.47(m，1H)，3.16(m，1H)，2.00(m，1H)，1.79(m，1H)，1.62(m，2H)，1.38(m，2H)，0.98(m，2H)，0.9-0.72(m，10H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:439。

(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备

将(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酸[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基]酯(化合物3E，3.0g，7.5mmol)在80％TFA水溶液(20mL)中的溶液在50℃搅拌16小时，然后浓缩，得到白色固体状的粗制的酸，将其再溶于THF(40mL)中。在室温向上述混合物中加入N-甲氧基甲胺盐酸盐(2.1g，22mmol)、DIPEA(14.5g，112mmol)和HATU(8.36g，22mol)。在室温搅拌16小时后，将该反应混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并浓缩，得到粗制的产物，将其经硅胶快速色谱纯化(用1:100至1:50的甲醇:二氯甲烷洗脱)，得到2.1g(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物3F)，为白色固体。

化合物3F:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm:8.16(s，1H)，6.42(m，1H)，5.83(s，1H)，5.14(bs，2H)，4.46(t，J＝9.6Hz，1H)，3.72(s，3H)，3.23(s，3H)，3.15(m,1H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:344。

(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备

在室温向(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物3F，2.1g，6.1mmol)在DCM(30mL)中的溶液中加入可力丁(1.45g，12mmol)、AgNO₃(2.04g，12mmol)和MMTrCl(3.8g，12mmol)。在室温搅拌16小时后，将该反应混合物用DCM稀释，过滤除去固体。将滤液用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并浓缩，得到粗制的产物，将其经硅胶快速色谱纯化(用1:100至2:1的乙酸乙酯:石油醚洗脱)，得到3.6g(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物3G)，为黄色固体。(ESI⁺)[(M+H)⁺]:616。

3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备

在0℃向(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物3G，3g，5mmol)在THF(40mL)中的溶液中加入格氏试剂、环丙基溴化镁(0.5M，25mL)。将该反应混合物在0℃搅拌30min。将该反应用饱和的NH₄Cl溶液淬灭，并用EtOAc萃取。将有机层干燥，并浓缩，得到粗制的产物，将其再溶于MeOH(50mL)中。在0℃向上述混合物中加入NaBH₄(2.0g，540mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30min。将该反应用饱和的NH₄Cl溶液淬灭，并用DCM萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，并浓缩，得到粗制的产物，将其经硅胶快速色谱纯化(用1:100至1:1的乙酸乙酯:石油醚洗脱)，得到1.8g的3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物3H)，为黄色固体。(ESI⁺)[(M+H)⁺]:599。

乙酸[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]甲基]酯的制备

在0℃向3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物3H，1.2g，2mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TEA(800mg，8mmol)、DMAP(30mg，0.2mmol)和Ac₂O(400mg，4mmol)。将该反应混合物在室温搅拌48小时。该反应完成后，将该反应用水淬灭，用DCM萃取。将有机层干燥，并浓缩，得到1.3g粗制的产物乙酸[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]甲基]酯(化合物3I)，为白色固体,，将其未经进一步纯化地直接用于下一个步骤。(ESI⁺)[(M+H)⁺]:641。

乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯的制备

将乙酸[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]甲基]酯(化合物3I，1.3g，2mmol)在90％HCOOH水溶液(25mL)中的溶液在室温搅拌1小时。将该反应混合物浓缩，并将残余物进一步经制备型HPLC纯化并分离，得到114mg乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯(化合物3)，为白色固体。

化合物3:¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δppm:8.20(s，1H)，6.34(m，1H)，5.34(d，J＝6.4Hz，1H)，4.54(t，J＝6.0Hz，1H)，4.18(t，J＝8.4Hz，1H)，3.31(t，J＝6.0Hz，1H)，2.02(s，3H)，1.13(m,1H)，0.65-0.42(m，4H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+Na)⁺]:391。

5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[(S)-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备

向乙酸[(S)-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧杂硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]酯(化合物3，500mg，1.36mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入K₂CO₃(94mg，0.68mmol)。在室温搅拌4小时后，将该反应混合物用HOAc淬灭至pH 7，然后在真空下浓缩。将残余物用EtOAc稀释，并过滤。将滤液在真空下浓缩。将残余物经制备型HPLC纯化并分离，得到45mg 5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[(S)-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧杂硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物3J)，为白色粉末。

化合物3J:通过¹H NMR和单晶X射线结构分析确定绝对结构，如图3所示。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δppm:8.25(s，1H)，6.39(dd，J＝9.16，5.65Hz，1H)，5.24(d，J＝5.27Hz，1H)，4.06(dd，J＝10.29，9.29Hz，1H)，3.13-3.30(m，2H)，0.37-1.04(m，5H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:327.0。

实施例4

3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸(化合物4)

化合物4通过以下流程制备：

类似于化合物2，使用(4S)-6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物4A)代替(4R)-6-(溴甲基)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物2A)来制备标题化合物。得到化合物4，为淡黄色固体(132mg)。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δppm 7.95(d，J＝3.3Hz，1H)，7.75(d，J＝3.3Hz，1H)，7.08-7.23(m，2H)，6.95(t，J＝8.8Hz，1H)，5.99(s，1H)，4.02-4.17(m，3H)，3.79-4.00(m，3H)，3.36-3.57(m，2H)，3.26-3.33(m，1H)，3.17-3.25(m，1H)，3.11(dd，J＝9.3，4.0Hz，1H)，2.78-2.99(m，2H)，2.53(d，J＝2.0Hz，3H)，2.39(dd，J＝11.2，8.2Hz，1H)，2.14-2.26(m，1H)，1.21(d，J＝2.8Hz，6H)，1.15ppm(t，J＝7.2Hz，3H)。MS:计算值599(M+H)⁺，测量值599(M+H)⁺。

(4S)-6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸乙酯(化合物4A)的制备:

类似于化合物2A，使用2-甲基-3-氟苯甲醛代替2-氯-3-氟苯甲醛制备化合物4A。化合物4A的旋光性:[α]_D ²⁰-21.0(c 0.10，MeOH)。

实施例5

5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物11)

化合物11根据以下流程制备。

乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯的制备

向5-氨基-3,6-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(5.37g，29.1mmol)和乙酸[(3R,5S)-2-乙酰氧基-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]四氢呋喃-3-基]酯(化合物1H，2.8g，9.7mmol)在乙腈(140mL)中的混悬液中加入BSA(21.4mL，87.3mmol)。将该反应混合物在65℃在氩气下搅拌1.5小时，形成澄清的溶液。然后向溶液中加入TMSOTf(9.8g，43.7mmol)，并将该混合物在65℃再搅拌3小时。将该反应混合物在真空下浓缩。将残余物溶于EtOAc(200mL)中，并用饱和的NaHCO₃溶液(50mL)萃取。有机层出现沉淀物。将得到的混合物过滤，并将滤液用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩，得到2.3g粗制的产物乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯(化合物11A)，为黄色固体。MS实测值(ESI^-)[(M+H)⁺]:413.1。

5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备

向乙酸[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-乙酰氧基丙基]-2-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氢呋喃-3-基]酯(化合物11A，2.3g，5.58mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中加入甲醇钠(1.5g，27.9mmol)。添加后，将该混合物在室温搅拌1.5小时(通过TLC监测)。该反应完成后，将该反应用饱和的NH₄Cl水溶液(50mL)淬灭。将得到的混合液在真空下浓缩以除去大部分的MeOH。将残余物用EtOAc萃取(100mL)10次。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱用DCM/MeOH＝20/1至10/1洗脱纯化，得到360mg白色固体状的5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物11)和550mg粗制产物。

化合物11:¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.22(br s，1H)，6.95(br s，2H)，5.72(d，J＝2.26Hz，1H)，5.42(d，J＝4.52Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.53(d，J＝6.02Hz，1H)，3.96(m，1H)，3.25-3.32(m，1H)，2.25-2.48(m，1H)，1.66-1.74(m，1H)，1.35-1.46(m，1H)，1.19-1.31(m，1H)，0.88(t，J＝7.28Hz，3H)

实施例6

HEK293-Blue-hTLR-7细胞试验：

从InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr7，圣地牙哥，加利福尼亚，美国)购买稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系。这些细胞被设计用于通过监测NF-κB的活化来研究人TLR7的激活。将SEAP(分泌型胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与5个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞激活NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，经人TLR7刺激20小时，通过NF-κB启动子调节报告基因表达。使用QUANTI-Blue^TM试剂盒(Cat.#:rep-qb1，Invivogen，圣地牙哥，加利福尼亚，美国)(一种在碱性磷酸酶的存在下变为紫色或蓝色的检测介质)在640nm的波长下测定细胞培养物上清液SEAP报告物活性。

将HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000个细胞/mL的密度、180μL的体积在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL盘尼西林、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中在96孔板中孵育24小时。然后加入最终存在1％的DMSO的系列稀释的20μL测试化合物来孵育HEK293-Blue-hTLR-7细胞，并将孵育在CO₂培养箱中在37℃进行20小时。然后将来自每孔的20ml上清液与180μL Quanti-blue底物溶液一起在37℃孵育2小时，使用分光光度计读取620～655nm处的吸光度。TLR7激活导致下游NF-κB活化的信号通路已被广泛接受，因此类似的报告基因试验也广泛用于评价TLR7激动剂(Tsuneyasu Kaisho和Takashi Tanaka，Trends inImmunology，第29卷，第7期，2008年7月，第329页.sci；Hiroaki Hemmi等人，NatureImmunology 3,196-200(2002)。

在化合物11的HEK293-hTLR-7试验中，TLR7激动活性为72μM。

实施例6

TLR7激动剂(化合物1)和HBV衣壳装配抑制剂(化合物2)的组合强效降低AAV-HBV小鼠模型中的HBV DNA和HBsAg

动物模型

4周龄雄性C57BL/6小鼠，无特异性病原体，购自中国科学院上海实验动物中心(SLAC)，并根据动物护理机构指南在受控制的温度和光照条件下，将其饲养在动物护理机构的各自通风的各笼子里。AAV/HBV病毒购自北京五加和分子医学研究所(北京，中国)。该重组病毒携带1.3拷贝的HBV基因组，其被包在AAV血清型8(AAV8)衣壳中。通过尾静脉注射向C57BL/6小鼠注射200μL稀释在盐水缓冲液中的重组病毒。注射后第7天和第14天将小鼠放血，以监测血清中的HBV表面抗原(HBsAg)、HBV e抗原(HBeAg)、HBs抗体(HBsAb)和HBV基因组DNA，然后根据这些HBV生物标志物随机分组。

HBV生物标志物的测定

根据制造商的说明书，使用CLIA试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，Ltd，郑州，中国)测定血清HBsAg和HBeAg。HBsAg和HBeAg的检测下限分别为0.1ng/mL和0.25NCU/mL(国家临床单位/mL)。使用100倍(对于HBsAg)或500倍(对于HBeAg)的血清稀释度获得在标准曲线的线性范围内的值。按照制造商的说明书，使用MagNA Pure 96DNA和Viral NA SmallVolume试剂盒(Roche)提取血清HBV DNA。使用用于从核苷酸2969至3096的128bp HBV基因组区域特异性扩增和检测的HBV特异性引物和探针，通过实时定量PCR(qPCR)分析DNA样品。引物和探针的序列显示如下：

正向引物：AAGAAAAACCCCGCCTGTAA；

反向引物：CCTGTTCTGACTACTGCCTCTCC；

HBV探针：

5'TARMA-CCTGATGTGATGTTCTCCATGTTCAGC-BHQ2-3'。

根据制造商的说明，使用抗HBs CLIA试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，Ltd，郑州，中国)在治疗结束后第24天测定血清中的抗HBs。将血清样品稀释3倍，并将50μL稀释的样品用于该试验。

实验设计和结果

将10mg/mL的化合物1和1.2mg/mL的化合物2与2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯在水中配制成包合复合物(inclusion complex)。所有的小鼠口服施用总共6周，然后是2周的停止治疗期。在一项单一治疗对照研究中，化合物1组的5只小鼠每隔一天用100mg/kg(QOD)的化合物1治疗。用等量的口服QD介质安慰剂(2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯，在水中)处理介质组。在组合疗法研究中，化合物2组的5只小鼠每天口服施用12mg/kg(QD)。组合(combo)组接受100mg/kg化合物1(QOD)加12mg/kg化合物2(QD)。用等量的口服QD介质安慰剂(2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯，在水中)处理介质组。

通过用携带可复制的HBV基因组的重组腺相关病毒(AAV)(AAV-HBV)注射C57BL/6小鼠，产生HBV DNA和HBsAg的均高水平表达的小鼠模型。在感染3周后，感染小鼠血清中检测到HBV病毒标志物，如HBV基因组DNA、HBsAg和HBeAg。将具有持续的HBV病毒血症和完全有效的免疫***的AAV-HBV模型用于研究化合物1(TLR7激动剂的前药，其转化后的活性形式诱导有效的先天免疫反应)和化合物2(一种抑制HBV衣壳装配的小分子)的单独和组合的作用。如图1所示，经过6周的治疗后，化合物1诱导HBV DNA超过2-log的减少和HBsAg超过1-log的减少。化合物2单独减少HBV DNA超过3-log，达到LLQ(定量下限)以下的水平，并温和减少HBsAg水平。化合物1和化合物2的组合导致HBV DNA和HBsAg二者可持续的降低，达到LLQ以下的水平，甚至在2周的停止治疗期的末尾也如此。这些结果为采用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的组合治疗的新型疗法的协同抗病毒作用，提供了证据。

实施例7

TLR7激动剂(化合物1和3)和HBV衣壳装配抑制剂(化合物4和5)的组合强效降低AAV-HBV小鼠模型中的HBV DNA和HBsAg

在另一项独立研究中，使用相同的AAV-HBV小鼠模型和实施例5中所述的HBV生物标志物的测定方法，测试了TLR7激动剂加衣壳抑制剂的更多组合和相应的单一化合物的治疗(总结在表2中)。

表2.对于化合物1、3、4和5而言的AAV-HBV小鼠模型中的组合研究设计

在本研究中，每组招募8只小鼠，动物在AAV-HBV感染后第28天接受第一次剂量。测试的组合包括化合物1加化合物4，化合物3加化合物4，以及化合物1加化合物5。将所有化合物配制为与2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯在水中的包合复合物，在介质组中使用含有2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯的等体积的安慰剂。具体而言，对于化合物1+化合物4的组合，配制10mg/mL化合物1和2mg/mL化合物4。化合物1组以100mg/kg QOD口服施用，而化合物4组以20mg/kg QD口服施用。相应的组合组接受100mg/kg化合物1QOD加20mg/kg化合物4QD。对于化合物3加化合物4的组合，配制3mg/mL化合物3和2mg/mL化合物4。化合物3组以30mg/kg QOD口服施用，化合物4组以20mg/kg QD口服施用。相应的组合组接受30mg/kg化合物3QOD加20mg/kg化合物4QD。对于化合物1加化合物5的组合，配制10mg/mL化合物1和1.2mg/mL化合物5。化合物1组以100mg/kg QOD口服施用，而化合物5组以12mg/kg QD口服施用。相应的组合组接受100mg/kg化合物1QOD加12mg/kg化合物5QD。第一次施用后，每周两次对小鼠下颌下采血(75μL血液/小鼠)用于血清采集，直到研究结束。将收集的血液在37℃放置至少30分钟以凝结，然后以13,200×g在4℃离心3分钟，得到小鼠血清。对这些血清样品进行HBV生物标志物的分析。

如图4所示，在6周治疗结束时，20mg/kg化合物4的单一治疗抑制HBV DNA并使HBsAg降低2-log。化合物1(TLR7激动剂)加化合物4(HBV衣壳抑制剂)的组合明确地表现出优异的抗病毒作用，尤其是对于HBsAg的控制。在所有接受组合疗法的动物中，它们的HBsAg在4周的治疗内降至接近或LLQ以下的水平，在治疗末尾显示的超过3.5-log的HBsAg减少可在停止治疗期期间持续至少6周。在停止治疗期期间，发现8只小鼠中有6只出现可检测水平的抗HBs，如图7所示。

如图5所示，另一种TLR7激动剂化合物3也降低了HBV DNA和HBsAg。化合物3加衣壳抑制剂化合物4的组合显示HBV DNA(>4log)和HBsAg(2.7-log)的进一步降低。如图7所示，施用化合物3加化合物4的8只小鼠中有3只在6周的停止治疗期期间出现可检测水平的抗HBs。

如图6所示，化合物5是另一种减少HBV DNA和HBsAg二者的衣壳抑制剂。化合物5加TLR7激动剂化合物1的组合在治疗后4周内进一步抑制HBsAg，使之在LLQ以下，并且在整个研究期间，维持病毒减少，甚至在治疗停止后6周仍是如此。如图7所示，服用化合物1加化合物5的8只小鼠中有4只在6周的停止治疗期期间出现可检测水平的抗HBs。

实施例8

TLR7激动剂(化合物1和8)和HBV衣壳装配抑制剂(化合物4和10)的组合强效降低AAV-HBV小鼠模型中的HBV DNA和HBsAg

在另一项独立研究中，使用相同的AAV-HBV小鼠模型和实施例5中所述的HBV生物标志物的测定方法，测试TLR7激动剂加衣壳抑制剂的更多组合和相应的单一化合物的治疗(总结在表3中)。

表3.对于化合物1、4、8和10而言的AAV-HBV小鼠模型中的组合研究设计

在这项具体研究中，每组招募7只小鼠，动物在AAV-HBV感染后至少38天接受第一次剂量。测试的组合包括化合物8加化合物4，化合物8加化合物10，以及化合物1加化合物10。将所有化合物配制为与2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯在水中的包合复合物，在介质组中使用含有2％Klucel LF、0.1％聚山梨酯80和0.1％对羟苯甲酸酯的等体积的安慰剂。具体而言，对于化合物8加化合物4的组合，配制30mg/mL化合物8和2mg/mL化合物4。化合物8组以300mg/kg QOD口服施用，而化合物4组以20mg/kg QD口服施用。然后相应的组合组接受30mg/kg化合物8QOD加20mg/kg化合物4QD。对于化合物8加化合物10的组合，配制30mg/mL化合物8和2mg/mL化合物10。化合物8组以300mg/kg QOD口服施用，而化合物10组以20mg/kg QD口服施用。然后相应的组合组接受300mg/kg化合物8QOD加20mg/kg化合物10QD。对于化合物1加化合物10的组合，配制10mg/mL化合物1和2mg/mL化合物10。化合物1组以100mg/kg QOD口服施用，而化合物10以20mg/kg QD口服施用。然后相应的组合组接受100mg/kg化合物1QOD加20mg/kg化合物10QD。第一次施用后，每周两次对小鼠下颌下采血(75μL血液/小鼠)用于血清采集，直到研究结束。将收集的血液在37℃放置至少30分钟以凝结，然后以13,200×g在4℃离心3分钟，得到小鼠血清。对这些血清样品进行HBV生物标志物的分析。

图8的结果表明，单独的TLR7激动剂化合物8在治疗结束时，将HBV DNA和HBsAg分别减少约2-log和1.5-log，而化合物8加衣壳抑制剂化合物4的组合进一步将HBsAg减少至LLQ以下的水平。在6周的停止治疗期期间，组合组显示可持续的HBsAg减少、最小的HBV DNA反弹和高水平的抗HBs，这在介质和单一治疗组中是未见到的，如图11所示。如图9、10和11所示，在化合物8加化合物10和化合物1加化合物10的组合组中也一致地观察到了所述组合治疗的这些益处。

总之，上述各结果首次证明了TLR7激动剂和HBV衣壳抑制剂的组合是有效的治疗方法，大大减少或甚至消除HBV DNA和HBsAg。组合疗法后，已显示病毒抑制在未再治疗的情况下持续长达6周。在大多数慢性HBV感染患者中，由于大多数现有的治疗方法不能引发抗HBs(针对HBsAg的抗体)，所以现有的治疗方法很少能实现HBsAg血清转化。在我们的组合研究中，惊人地发现，抗HBs在6周的停止治疗期期间已经变得可检测到，并且在采用组合疗法的小鼠中最为明显，如图7和11所示。因此，TLR7激动剂和HBV衣壳抑制剂的组合疗法提供了另一个关键优势来促进抗HBs的出现。由于持续的HBsAg损失和/或抗HBs血清转化是慢性乙型肝炎的一个理想治疗终点，所以我们的组合疗法代表实现慢性HBV感染临床治愈的新方式。

Claims

1.药物组合物，其包含在药学上可接受的载体中的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂，其中所述TLR7激动剂选自

具有以下结构的乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯，或其可药用盐

和

具有以下结构的5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮，或其可药用盐

且其中所述HBV衣壳装配抑制剂选自

具有以下结构的3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸，或其可药用盐

和

具有以下结构的3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸，或其可药用盐

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物由在药学上可接受的载体中的以下化合物组成：

具有以下结构乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯，或其可药用盐

和

3.根据权利要求1的药物组合物，其中组合物由在药学上可接受的载体中的以下化合物组成：

和

4.根据权利要求1的药物组合物，其中组合物由在药学上可接受的载体中的以下化合物组成：

和

5.根据权利要求1的药物组合物，其中组合物由在药学上可接受的载体中的以下化合物组成：

和

6.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物另外包含一种或多种其它抗病毒剂。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述其它抗病毒剂选自拉米夫定、阿德福韦、替诺福韦、替比夫定和恩替卡韦。

8.药盒，其包含含有TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的容器，其中所述TLR7激动剂选自

和

且其中所述HBV衣壳装配抑制剂选自

具有以下结构3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸，或其可药用盐

和

具有以下结构3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸，或其可药用盐

9.根据权利要求8所述的药盒，其中在所述容器中使用的TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂为在药学上可接受的载体中的：

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯或其可药用盐与3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸或其可药用盐；

乙酸[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-羟基-四氢呋喃-2-基]丙基]酯或其可药用盐与3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸或其可药用盐；

5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮或其可药用盐与3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸或其可药用盐；

或

5-氨基-3-[(2R,3R,5S)-3-羟基-5-[(1S)-1-羟基丙基]四氢呋喃-2-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮或其可药用盐与3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸或其可药用盐。

10.根据权利要求9所述的药盒，其还包含无菌稀释剂。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的药盒，其还包含药品说明书，所述药品说明书包含指导使用TLR7激动剂和HBV衣壳装配抑制剂的组合治疗作为治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法的印刷说明书。

12.以下组合在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途：

或

13.以下组合在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途：